HUT74833A - Genetically modified, miopathic and cardiomiopathic rat strain, and a method for its production - Google Patents
Genetically modified, miopathic and cardiomiopathic rat strain, and a method for its production Download PDFInfo
- Publication number
- HUT74833A HUT74833A HU9501327A HU9501327A HUT74833A HU T74833 A HUT74833 A HU T74833A HU 9501327 A HU9501327 A HU 9501327A HU 9501327 A HU9501327 A HU 9501327A HU T74833 A HUT74833 A HU T74833A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- mtdna
- mitochondrial
- cardiomyopathic
- cardiomyopathies
- azt
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 7
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims abstract description 21
- 230000001756 cardiomyopathic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 claims description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 2
- 206010051403 Mitochondrial DNA deletion Diseases 0.000 claims 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 claims 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 abstract description 18
- 230000037430 deletion Effects 0.000 abstract description 17
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract 1
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 description 25
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 15
- 238000002565 electrocardiography Methods 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 description 7
- 201000009623 Myopathy Diseases 0.000 description 7
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 5
- 206010048858 Ischaemic cardiomyopathy Diseases 0.000 description 4
- DRBBFCLWYRJSJZ-UHFFFAOYSA-N N-phosphocreatine Chemical compound OC(=O)CN(C)C(=N)NP(O)(O)=O DRBBFCLWYRJSJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 4
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 4
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 3
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 3
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229940124321 AIDS medicine Drugs 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 102000006404 Mitochondrial Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010058682 Mitochondrial Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 239000002259 anti human immunodeficiency virus agent Substances 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 208000020446 Cardiac disease Diseases 0.000 description 1
- 102100024297 Cilia- and flagella-associated protein 410 Human genes 0.000 description 1
- 206010056370 Congestive cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000002155 Cytochrome-c Oxidase Deficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 102000016903 DNA Polymerase gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010014080 DNA Polymerase gamma Proteins 0.000 description 1
- 201000010046 Dilated cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 102000015782 Electron Transport Complex III Human genes 0.000 description 1
- 108010024882 Electron Transport Complex III Proteins 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 208000032087 Hereditary Leber Optic Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 101000980066 Homo sapiens Cilia- and flagella-associated protein 410 Proteins 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 201000000639 Leber hereditary optic neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 201000009035 MERRF syndrome Diseases 0.000 description 1
- OKIBNKKYNPBDRS-UHFFFAOYSA-N Mefluidide Chemical compound CC(=O)NC1=CC(NS(=O)(=O)C(F)(F)F)=C(C)C=C1C OKIBNKKYNPBDRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000002169 Mitochondrial myopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010069825 Myoclonic epilepsy and ragged-red fibres Diseases 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- WREGKURFCTUGRC-POYBYMJQSA-N Zalcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)CC1 WREGKURFCTUGRC-POYBYMJQSA-N 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 241000902900 cellular organisms Species 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 1
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000002592 echocardiography Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 1
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000002489 impedance cardiography Methods 0.000 description 1
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 210000005241 right ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009772 tissue formation Effects 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- DYOSCPIQEYRQEO-LPHQIWJTSA-N ubiquinol-6 Chemical compound COC1=C(O)C(C)=C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)C(O)=C1OC DYOSCPIQEYRQEO-LPHQIWJTSA-N 0.000 description 1
- 229940035936 ubiquinone Drugs 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960000523 zalcitabine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
A találmány tárgya eljárás miopátiás és kardiomiopátiás patkánytörzs előállítására, melynek során normális nőstény patkányokat AZT-vel kezelnek, a sérült mtDNS-sel rendelkező egyedeket párosítják, a mitokondriális DNS-ben deléciót mutató anyákat tovább tenyésztik, és a legalább öt generáción keresztül kardiomiopátiás egyedeket kiválasztják. • -τ' i ■The present invention relates to a method for producing a myopathic and cardiomyopathic rat strain, wherein normal female rats are treated with AZT, paired with injured mtDNA, mice showing deletion in mitochondrial DNA are further cultured, and cardiomyopathic individuals are selected for at least five generations. • -τ 'i
Description
A találmány tárgya genetikusán módosított miopátiás és kardiomiopátiás patkánytörzs és eljárás annak előállítására.The present invention relates to a genetically modified rat strain of myopathy and cardiomyopathy and to a process for its production.
A fejlett országokban és Magyarországon is a kardiovaszkuláris betegségek állnak a halálozási statisztikák élén. így ezen betegségek megelőzése az egészségügy központi problémájává vált, és ennek megfelelően a kardiovaszkuláris betegségek tudományos megismerése kiemelten fontos feladat.In developed countries as well as in Hungary, cardiovascular disease is the leading cause of death statistics. Thus, the prevention of these diseases has become a central concern of health, and consequently the scientific knowledge of cardiovascular diseases is of paramount importance.
A kardiovaszkuláris betegségek közül még ma is az ischémiás szívbetegség a fő halálok, de a különböző kardiomiopátiák száma és fontossága jelentősen megnövekedett az elmúlt évtizedben, így napjainkra komoly egészségügyi problémává vált. Aethilógiájuk gyakran ismeretlen, bár ma már a genetikus faktorokon túl több toxikus ágens (isémiás állapot, alkohol, magas életkor /időskori kardiomiopátia/, gyógyszerek, esetleg vírusok, stb.) szerepe is ismertté vált. A hosszútávú kezelés kérdése még megoldatlan, s az esetek egy részében csak a szívtranszplantáció nyújthat megoldást a végstádiumú szívelégtelenség kezelésére. A dilatatív kardiomiopátia gyakran lép fel fiatal életkorban, és időnként gyors progressziót mutat, mely tovább hangsúlyozza ezen problémakör jelentőségét.Of the cardiovascular diseases, ischemic heart disease is still the leading cause of death, but the number and importance of various cardiomyopathies has increased significantly in the last decade, making it a serious health problem today. Their aetiology is often unknown, although the role of several toxic agents (ischemic condition, alcohol, advanced age / cardiomyopathy / drugs, viruses, etc.) has become known in addition to genetic factors. The issue of long-term treatment is still unresolved, and in some cases only heart transplantation can provide a solution for the treatment of end-stage heart failure. Dilated cardiomyopathy often occurs at a young age and sometimes shows rapid progression, which further emphasizes the importance of this problem.
Rendkívül fontos lenne tehát olyan állatkísérletes modell kidolgozása, amelyen a kardiomiopátiák gyakoribb típusai tanulmányozhatók, és amely lehetővé teszi az új típusú terápiás módszerek kifejlesztését.Thus, it would be extremely important to develop an animal model that studies the more common types of cardiomyopathy and enables the development of new types of therapeutic approaches.
Az utóbbi időben több esetben is kiderült, hogy számos azonosítatlan betegség oka a mitokondriális DNS /mtDNS/ mutációja vagy deléciója. így többek között számos miopátia, kardiomiopátia,Recently, several unidentified diseases have been found to be caused by mutation or deletion of mitochondrial DNA / mtDNA /. including a number of myopathies, cardiomyopathy,
degeneratív neurológiai betegség, illetve számos időskori izomés idegrendszerrel kapcsolatos zavar. A mitokondrális DNS-ben levő mutációk-deléciók direkt módon valamelyik respirációs enzim hiányát okozzák (1 - 19), és így számos esetben diagnosztizálható komplex I (NADH-ubikinon oxidorekudtáz) (2, 6, 14), komplex III (redukált ubikinon citokrom C oxidoreduktáz) (2, 7, 9) és citokrőm oxidázhiány (4, 5, 8, 10 - 15, 17, 18, 20), illetve a fenti enzimhiányok kombinációja (1 - 3, 13). Mindegyik esetben sérül a mitokondriális energiatermelés (csökkent ATP/ADP arány), növekszik a mitokondriális NADH/NAD+ arány (21) .neurodegenerative disease; and many disorders of the muscular nervous system in the elderly. Mutations and deletions in mitochondrial DNA directly cause a deficiency of one of the respiratory enzymes (1 - 19), and thus, in many cases, complex I (NADH-ubiquinone oxidorecudtase) (2, 6, 14), complex III (reduced ubiquinone cytochrome C) can be diagnosed. oxidoreductase) (2, 7, 9) and cytochrome oxidase deficiency (4, 5, 8, 10-15, 17, 18, 20) and a combination of the above enzyme deficiencies (1-3, 13). In each case, mitochondrial energy production is impaired (decreased ATP / ADP ratio) and mitochondrial NADH / NAD + ratio increased (21).
A mitokondriális enzimdefektusok további érdekessége, hogy sok esetben véletlenszerűen érintik egyes területeket, míg más területeken a sejtek teljesen normálisak. A fenti jelenség megtalálható attól függetlenül, hogy a mutációk mitokondriális vagy nukleáris eredetűek. Ez a tény azonban azt sugallja, hogy a mutációk-deléciók vagy a korai szövet-kialakulás állapotában vagy később valamilyen külső behatásra jönnek létre. Ezt támasztja alá az a megfigyelés is, hogy az esetek egy részében a betegség nem örökletes (1, 3, 7).Another interesting feature of mitochondrial enzyme defects is that in many cases, some areas are randomly affected, while in other areas the cells are completely normal. The above phenomenon is present whether the mutations are of mitochondrial or nuclear origin. However, this fact suggests that mutations or deletions are due to some form of external influence, either in the early stages of tissue formation or later. This is also supported by the observation that in some cases the disease is not hereditary (1, 3, 7).
A mDNS-ben sporadikusan megjelenő mutációk-deléciók kiváltó okai lehetnek bizonyos típusú kardiomiopátiák kialakulásának, például az infarktus után kialakult ischémiás kardiomiopátiák vagy bizonyos időskori kardiomiopátiáknak (22 - 29). Ismert, hogy az ischémiás szív újbóli oxigénellátása során nagy mennyiségben képződnek szabad gyökök a mitokondriumban, amelyek oxidálhatják a membrán-1ipideket, a mitokondriális fehérjéket és a t · mDNS-t is (30, 31). Ennek következtében egyre növekvő számban képződik mutáns mitokondriális DNS, ezért hiány léphet fel a mitokondrium által kódolt fehérjékből, és ezért a mitokondriumok egy részében respirációs defektus alakul ki. Ez a részleges sporadikus respirációs defektus könnyen vezethet kardiomiopátia kialakulásához .Mutations and deletions in the sporadic mDNA may be responsible for the development of certain types of cardiomyopathies, such as ischemic cardiomyopathies following infarction or certain elderly cardiomyopathies (22 - 29). Repeated oxygenation of the ischemic heart is known to produce large amounts of free radicals in the mitochondria, which can oxidize membrane lipids, mitochondrial proteins and t · mDNA (30, 31). As a result, an increasing number of mutant mitochondrial DNA is produced, which may lead to a deficiency of the proteins encoded by the mitochondria, leading to the development of a respiratory defect in some mitochondria. This partial sporadic respiratory defect can easily lead to the development of cardiomyopathy.
Hasonló módon alakulhatnak ki respirációsán defektes régiók a szív különböző részein idős korban (22, 28, 29, 32 - 34), amikor a spontán mutációk száma a mDNS-ben elér egy bizonyos határt, lehetetlenné téve a megfelelő mennyiségű és minőségű mitokondriálisan kódolt fehérjék szintézisét, és így respirációs defektus alakulhat ki egyes területeken. Ezzel összhangban van az a megfigyelés, hogy a mitokondriálisan kódolt respirációs enzimek aktivitása jóval alacsonyabb idős emberekből származó szövetekben, mint fiatalokéban (22), míg számos nukleárisan kódolt mitokondriális enzimaktivitás nem, vagy alig változik.Similarly, respiratory defective regions may develop in different parts of the heart in the elderly (22, 28, 29, 32 - 34) when spontaneous mutations in the mDNA reach a certain threshold, rendering it impossible to synthesize mitochondrially encoded proteins of sufficient quantity and quality , and may cause respiratory failure in some areas. Consistent with this is the finding that the activity of mitochondrially encoded respiratory enzymes is much lower in the tissues of the elderly than in the young (22), whereas many nuclear-encoded mitochondrial enzymes have little or no change.
A fenti adatok mutatják, hogy a kardiomiopátiák jelentős részének kialakulásában a mDNS deléciója és mutációja igen fontos szerepet játszik. Ezért lényeges lenne könnyen kezelhető állatkísérletes modellt kialakítani a mitokondriális genom sérülésével járó kardiomiopátiák tüzetes vizsgálatára, illetve új terápiás eljárások kialakítására.The above data show that deletion and mutation of the mDNA plays a very important role in the development of a significant proportion of cardiomyopathies. Therefore, it would be essential to develop an easy-to-use animal experimental model for the close examination of cardiomyopathies involving mitochondrial genome injury and for the development of new therapeutic approaches.
Az utóbbi időben számos örökletes miopátiát és kardiomiopátiát figyeltek meg (3, 9, 35, 37, 38). Ezekben az esetekben vagy valamely nukleárisan kódolt mitokondriális enzim génje volt sérült, vagy a mDNS mutációja illetve deléciója okozott anyai ágon öröklődő betegségeket: például Leber's optikai atrópiát, Kearns-Sayer szindrómát vagy Merrf szindrómát. Azonban olyan esetek is előfordulnak, amikor valamely nukleárisan kódolt mitokondriális fehérjének a mutációja-deléciója indukálja a mDNS delécióját (3), azaz a mitokondriális DNS deléciója csak másodlagos következmény. A fenti jelenség jól ismert élesztő sejteken, ahol bemutatták azt, hogy bizonyos nukleárisan kötött fehérjék hiánya megnöveli a petit kolóniák számát (36), azaz a nukleárisan kötött mitokondriális fehérje hiányos jelentős deléciókat indukálhat a mDNS-ben. E jelenség emlős sejtekben kevéssé ismert, de a mitokondriális miopátiák és kardiomiopátiák genetikai analízise hozzájárulhat a mDNS-t stabilizáló, de eddig ismeretlen fehérjék azonosításához. Ezen vizsgálatok hozzájárulhatnak a mDNS szegregációjának jobb megértéséhez is, és felvilágosítást adhatnak a mitokondriális genetikai rendszer, valamint a nukleáris genom között fellépő eddig ismeretlen kölcsönhatások természetéről.Recently, several hereditary myopathies and cardiomyopathies have been observed (3, 9, 35, 37, 38). In these cases, either a gene encoded by a nuclear-encoded mitochondrial enzyme was damaged or mutation or deletion of the mDNA caused maternal-inherited diseases, such as Leber's optic atrophy, Kearns-Sayer syndrome, or Merrf syndrome. However, there are also cases where mutation-deletion of a nuclear-encoded mitochondrial protein induces the deletion of mDNA (3), meaning that deletion of mitochondrial DNA is only a secondary consequence. The above phenomenon is well known in yeast cells, where it has been shown that the absence of certain nuclear-bound proteins increases the number of petitial colonies (36), that is, the nuclear-bound mitochondrial protein may induce significant deletions in the mDNA. This phenomenon is not well known in mammalian cells, but genetic analysis of mitochondrial myopathies and cardiomyopathies may contribute to the identification of mDNA-stabilizing but unknown proteins. These studies may also contribute to a better understanding of mDNA segregation and provide insight into the nature of the previously unknown interactions between the mitochondrial genetic system and the nuclear genome.
Az utóbbi időben az AIDS-vírus ellen kifejlesztett új drogok /AZT, dideoxicitidin, dideoxiinozitol, stb. (39, 40) biológiai hatásainak vizsgálata felszínre hozta azt a tényt, hogy a mitokondriális és a nukleáris DNS-polimerázok között lényeges szubsztrát-specificitásbeli különbség létezik (41 - 43). Míg az AIDS-vírus reverz transzkriptázát gátló AZT nem, vagy alig gátolja a nukleáris DNS-polimerázokat, addig az AZT jó inhibitora az emberi mitokondriális DNS-polimeráz gammának, illetve a fenti enzim beépítheti a mitokondriális DNS-be (41 - 43). Ezért az AZT « · * · 4·*»·«··, · ·»····· · « «4Recently, new drugs / AZT, dideoxycytidine, dideoxynositol, etc., have been developed against the AIDS virus. (39, 40) revealed that there is a significant difference in substrate specificity between mitochondrial and nuclear DNA polymerases (41-43). While AZT, which inhibits the reverse transcriptase of the AIDS virus, does not or hardly inhibit nuclear DNA polymerases, AZT is a good inhibitor of human mitochondrial DNA polymerase gamma and may be incorporated into mitochondrial DNA (41-43). Therefore, the AZT «· * · 4 · *» · «·· · · · · ····· ·« «4
- 6 hosszabb ideig való szedése a mDNS delécióját okozhatja, illetve jelentős számú mutációt indukálhat a mDNS-ben. így az AZT jelentős károsodásokat okozhat hosszú távon a vérképző szervekben, illetve miopátiát okozhat AIDS-es betegekben. Ugyanakkor megvan annak a lehetősége is, hogy az AZT fenti tulajdonságát felhasználjuk állatkísérletekben a mDNS depléciójára, illetve mitokondriális mutációk előidézésére.- Taking 6 for longer periods of time may result in deletion of the mDNA or induce a significant number of mutations in the mDNA. Thus, AZT may cause significant damage to the hematopoietic organs in the long term and may cause myopathy in AIDS patients. However, it is also possible to utilize the above property of AZT in animal experiments to deplete mDNA or induce mitochondrial mutations.
Ezért igen fontos lenne olyan állatmodell kialakítása, amelyen vizsgálni lehet a különböző módon kialakult kardiomiopátiák lefolyását, és amely modell lehetőséget biztosítana a kardiomiopátiákra ható gyógyszerek tesztelésére.Therefore, it would be very important to develop an animal model that can study the course of cardiomyopathies that have developed in different ways, and which would provide an opportunity to test drugs that affect cardiomyopathies.
Ezért találmányunk célkitűzése olyan patkánytörzsek létrehozása, amelyekben mutációk vagy részleges deléciók alakultak ki a mtDNS-ben. A fenti, genetikusán módosított állatok jó vizsgálati modellek a mitokondriális DNS-ben bekövetkezett depléciók és mutációk molekuláris következményeinek tanulmányozására, és a fenti állatmodellen megvizsgálható a mitokondriális és nukleáris genetikai rendszer egymásrahatása. A fenti kiválóan modellezné az AIDS-gyógyszerek által okozott miopátiákat és kardiomiopátiákat, valamint az időskori és isémiás kardiomiopátiákat, amelyek a kardiomiopátiák többségét teszik ki. Az EKG, Echocardiographia és Impedancia cardiographia jelenleg is használt eljárás különböző kardiomiopátiák vizsgálatára (44 - 53), azonban az így nyert adatok értelmezésében még jelentős problémák adódnak. Az általunk kidolgozott állatmodell lehetőség ad a humán szív diagnosztikában használt eljárások továbbfejlesztésére a • · a ♦ ♦ • · «·«·«···« * « · · ··«« a · »♦It is therefore an object of the present invention to provide rat strains that have mutations or partial deletions in the mtDNA. The above genetically modified animals are good test models for studying the molecular consequences of depletion and mutation in mitochondrial DNA, and the above animal model can be used to study the interaction of the mitochondrial and nuclear genetic systems. The above would provide an excellent model of myopathies and cardiomyopathies caused by AIDS drugs, as well as the elderly and ischemic cardiomyopathies that make up the majority of cardiomyopathies. ECG, Echocardiography and Impedance cardiography are currently used to test various cardiomyopathies (44-53), but there are still significant problems with the interpretation of the data obtained. The animal model we have developed allows us to further improve the procedures used in human heart diagnostics using the ♦ ♦ ♦ ♦ • a a · · · a
- 7 kardiomiopátiák vizsgálatában. Ez utóbbi vizsgálatok korszerűsítése hozzásegíthet bennünket a kardiomiopátiák patológiájának jobb megértéséhez, és a humán kardiomiopátiák vizsgálatára alkalmas új diagnosztikus eljárások kidolgozásához.- 7 for cardiomyopathy. The modernization of these latter studies may help us to better understand the pathology of cardiomyopathies and to develop new diagnostic procedures for the examination of human cardiomyopathies.
A bemutatott ábrák az alábbi jellemzőket mutatják:The following figures show the following characteristics:
1. ábra: karakterisztikus változás az EKG képben AZT hatá- sára és a szív anomáliák öröklődése az utódokra;Figure 1: Characteristic change in ECG image by AZT and inheritance of cardiac anomalies in offspring;
2. ábra: a mitokondrium struktúra kardiomiopátiás szív- izomban;Figure 2: Mitochondrial structure in cardiomyopathic heart muscle;
3. ábra: genetikai változások a kardiomiopátiás patkányok mtDNS-ében.Figure 3: Genetic alterations in mtDNA of cardiomyopathic rats.
Kísérleti módszerekExperimental methods
EKGECG
Az EKG-méréseket Schiller AT-6 EKG készülékkel végeztük négy végtagi elvezetéssel. Az EKG-méréseket standard eljárással értékeltük ki, mint az az irodalomban szokás (54, 55). A RR, PR és TQ távolságokat határoztuk meg, illetve a J pont depressziój át.ECG measurements were performed on a Schiller AT-6 ECG with four limb leads. ECG measurements were evaluated using a standard procedure, as is customary in the literature (54, 55). RR, PR and TQ distances and J point depression were determined.
Elektron-mikroszkópiaElectron microscopy
A szív- és vázizom mintákat az általunk már használt eljárással ágyaztuk be, és készítettük elő elektronmikroszkópiára (56). Az elektronmikroszkópos vizsgálatok JEM 1200-EX-II elektronmikroszkóppal történtek 80 kV gyorsító feszültséggel.Cardiac and skeletal muscle specimens were embedded using the procedure already used and prepared for electron microscopy (56). Electron microscopy was performed on a JEM 1200-EX-II electron microscope with an accelerating voltage of 80 kV.
• ·»· a··· t • ··*• · »· a ··· t • ·· *
Metaboli t-méghatározásokMetabolic t-determinations
A szöveteket freeze-clamp lefagyasztjuk, és a metabolitokat perklórsavval extraháljuk (57). Az extraktumokban a metabolitokat az (58)-bán leírt módon határoztuk meg.Tissues were freeze-clamp frozen and metabolites were extracted with perchloric acid (57). The metabolites in the extracts were determined as described in (58).
Southern biot analyzisSouthern biot analysis
A mtDNS-t normál patkány májából izoláltuk (59). A kapott mtDNS-t EcoRI-el emésztettük, és próbaként használtuk a Southern biot analízisben.MtDNA was isolated from normal rat liver (59). The resulting mtDNA was digested with EcoRI and used as a probe in Southern biot analysis.
A beteg és a kontroll patkányok izmából totál DNS-t preparáljuk, és a DNS-t a megfelelő restrikciós endonukleázokkal emésztjük, majd elektroforézissel elválasztjuk 1,5 %-os agaróz gélen. A DNS-t blottoljuk Hybound-N membránra (Amersham), és a peroxidáz-jelölt mDNS-sel hibridizálunk, mint azt leírják az ECL módszernél (Amersham). A kontroll és a beteg patkányoknál kapott restrikciós endonukleáz képek összehasonlításából következtetni tudunk a mtDNS mennyiségére és minőségére.Total DNA from the muscle of the patient and control rats was prepared and digested with the appropriate restriction endonucleases and separated by electrophoresis on a 1.5% agarose gel. The DNA was blotted onto a Hybound-N membrane (Amersham) and hybridized with peroxidase-labeled mDNA as described by the ECL method (Amersham). Comparison of restriction endonuclease images obtained from control and sick rats gives an indication of the amount and quality of mtDNA.
Vistar patkányokat kezelünk AZT-vel [20 - 50 mg/testsúly kg] 2-5 héten keresztül. A kezelés alatt a szívműködésüket EKG-val követjük. A kezelés hatására a kontroll csoporthoz képest az állatok:Vistar rats were treated with AZT [20-50 mg / kg body weight] for 2-5 weeks. During treatment, their heart function is monitored by ECG. As a result of the treatment, the animals:
1/ szívfrekvenciája jelentősen lecsökkent, ami látható az EKGfelvételeken;1 / heart rate significantly reduced, as seen on ECG recordings;
2/ szignifikánsan megnyúlt a PQ távolság (pitvar-kamrai átvezetési idő) ;2 / significantly prolonged PQ (atrial ventricular lead time);
3/ szignifikánsan megnőtt a QT érték;3 / QT increased significantly;
·« 9 ·· · · * ' * · • ··'»»· * · • ν ······»»· · ·4· ···· · · «·· «9 ·· · · * '* · • ··'» · * · • ν ······· »· · · 4 · ···· · · · ·
- 9 4/ a végtagi elvezetésben a bal kamra fő izomtömegét reprezentáló I és a VL elvezetésekben 0,1 mV-ot meghaladó ST, vagy J pont, depressziók alakultak ki, amelyek jelzői a kialakult miokardiális isémiának.- 9 / / ST or J points, more than 0.1 mV in the left and right ventricles, representing the major muscle mass of the left ventricle, are indicative of myocardial ischemia.
Ezek az adatok jelezhették azt, hogy a kezelés mutációkat okozott a patkány mitokondriális DNS-ében (mtDNS). Amennyiben a szív mtDNS-e sérült, akkor a többi sejttípus is károsodhat, és így a nőstény állatok esetében a petesejtek mtDNS-ei is sérülhetnek. Ezért nagyszámú nőstény patkányt kezelünk AZT-vel a fent leírt módon és kezelés befejezését követő negyedik héten egészséges hímekkel párosítottuk őket. Az utódokat, amikor elérték a 150 - 200 g-os súlyt, megoperáljuk és 50 - 100 mg izommintát veszünk tőlük. Az izommintákból DNS-t preparálunk, a DNS-mintákat EcoRI, Sáli és HindlII-al emésztjük, és elektroforézissel molekulasúly szerint szeparáljuk. A DNS-t Zeta Prob membránra viszszük át, majd az egészséges patkányokból preparált mtDNS-t használva próbának, ECL-jelölési eljárással hibridizálunk. A mtDNS restrikciós fragmentjeit így Southern biot-tál meghatározzuk, és azokat a patkányokat, amelyeknél a mitokondriális DNS-ben deléciót találunk, elektronmikroszkópos vizsgálatnak vetjük alá. Ha az elektronmikroszkópos kép is mutat abnormalitást a mitokondriumban, akkor ezt az anyát tovább tenyésztjük. Ezzel párhuzamosan a fenti patkányokon EKG-analízissel követjük a szívműködést. Ezt az 1. ábra, valamint az alábbi 1. és 2. táblázat mutat j a:These data may indicate that the treatment caused mutations in rat mitochondrial DNA (mtDNA). If the mtDNA of the heart is damaged, other cell types may be damaged and, in the case of females, the mtDNA of ova may be damaged. Therefore, a large number of female rats were treated with AZT as described above and mated with healthy males for the fourth week following completion of treatment. When the offspring have reached a weight of 150-200 g, they are operated on and 50-100 mg of muscle is taken. DNA is prepared from the muscle samples, the DNA samples are digested with EcoRI, SalI and HindIII and separated by molecular weight by electrophoresis. The DNA was transferred to the Zeta Prob membrane and hybridized to the probe using ECL labeling using mtDNA prepared from healthy rats. Restriction fragments of the mtDNA are thus determined in Southern biota and the rats which are found to have a deletion in mitochondrial DNA are subjected to electron microscopy. If the electron microscope image also shows abnormality in the mitochondria, then this mother is further cultured. In parallel, cardiac function was monitored by ECG analysis in the above rats. This is illustrated in Figure 1 and in Tables 1 and 2 below:
1. Táblázat.Table 1.
AZT indukált szívműködés zavarok és ezek öröklődése patkányon. A szívműködésben beállt anomáliákat EKG-vel követjük és a RR,PR, QT intervallumokkal valamint J pont pozíciójának megváltozásával jellemezük.AZT-induced cardiac disorders and their inheritance in rats. Cardiac abnormalities are monitored by ECG and characterized by RR, PR, QT intervals and J-position changes.
2. TáblázatTable 2
Normál és cardiomyopathiás patkány szív metabolizmusának összehasonlításaComparison of cardiac metabolism in normal and cardiomyopathic rat rats
A fenti adatok három kísérlet átlagát mutatják ± szórás.The above data represent the mean ± standard deviation of three experiments.
Ilyen módon több generáción keresztül követve a deléciót a mtDNS-ben, az abnormális mitokondrium struktúrát és az abnormális szívfunkciót, sikerült előállítanunk olyan patkánytörzseket, amelyek öt generáción keresztül kardiomiopátiásak, deletált mtDNS-sel rendelkeznek, abnormális a mitokondriumaik finomszerkezete, és EKG-val is abnormális (isémiára mutató) EKG jelei vannak (lásd az 1. táblázatot és az 1 - 3. ábrákat).In this way, following several generations of deletion in the mtDNA, abnormal mitochondrial structure and abnormal cardiac function, we were able to produce rat strains that have cardiomyopathic, deletion of mtDNA, deletion of abnormal ECG, abnormal ECG, have ECG signs (indicative of ischemia) (see Table 1 and Figures 1-3).
A 3. ábra mutatja, hogy a kardiomiopátiás patkányokban a mtDNS mennyisége jelentősen lecsökkent, illetve egyes egyedekben az alacsonyabb molekulasúly komponens (az EcoRI-es emésztésnél) jóformán teljesen hiányzik; azaz jelentős deléció van az mtDNS-ben. Ezzel összhangban, a fenti állatoknál láthatóan zavarok vannak az oxidatív energiatermelésben, mivel az ATP-szint állandósága mellett jelentős csökkenés van a kreatin-foszfát-koncentrációban . A kreatin-foszfát koncentráció csökkenése világosan mutatja az intracelluláris ATP/ADP arány csökkenését, amely számos anyagcsere- és transzportfolyamatot befolyásol.Figure 3 shows that mtDNA levels are significantly reduced in cardiomyopathic rats, and in some individuals the lower molecular weight component (at Eco RI digestion) is almost completely absent; that is, there is a significant deletion in the mtDNA. Consistent with this, the above animals apparently have a disruption in oxidative energy production as there is a significant decrease in creatine phosphate concentration with steady-state ATP levels. The decrease in creatine phosphate concentration clearly shows a decrease in the intracellular ATP / ADP ratio, which affects many metabolic and transport processes.
Az itt bemutatott állatmodell széles körben használható a mtDNS öröklődésének vizsgálatára, jól reprodukálhatóan tanulmányozhatók a mitokondriális DNS átadásának-szaporodásának jellegzetességei. Továbbá, tanulmányozhatók a mitokondriális genom sérülésének funkcionális következményei, az anyagcsere és az energiatermelés anomáliái. Vizsgálható továbbá a mitokondriális genom károsodásának hatása a különböző transzportfolyamatokra.The animal model presented herein is widely applicable to the study of mtDNA inheritance and the reproductive characteristics of mitochondrial DNA transfer and reproduction can be well reproduced. Furthermore, the functional consequences of damage to the mitochondrial genome, anomalies of metabolism and energy production can be studied. The effect of mitochondrial genome damage on different transport processes can also be investigated.
A fenti állatmodellen tanulmányozható a potenciálisan kardiomiopátiára ható gyógyszerek hatékonysága, és követni lehet azt, hogy mely anyagok játszanak jótékony szerepet a kardiomiopátia által érintett régiók rehabilitálásában. így az isémiás kardiomiopátia jól modellezhető a fenti állatokkal, és modellünk lehetőséget kínál új gyógyszerek kifejlesztésére isémiás kardiomiopátia ellen. Továbbá ezen állatmodell lehetőséget adna olyan új kardiomiopátia és miopátia tüneteit javító gyógyszerek kifejlesztésére, amelyek jelentősen enyhíthetnék az AIDS-gyógyszerek mellékhatásaként fellépő kardiomiopátiát és miopátiát.The animal model above can be used to study the efficacy of drugs that can potentially affect cardiomyopathy and to track which substances play a beneficial role in rehabilitating regions affected by cardiomyopathy. Thus, ischemic cardiomyopathy can be well modeled in the above animals, and our model offers the opportunity to develop new drugs against ischemic cardiomyopathy. Furthermore, this animal model would provide an opportunity to develop new drugs to improve the symptoms of cardiomyopathy and myopathy that could significantly alleviate cardiomyopathy and myopathy as a side effect of AIDS drugs.
irodalomjegyzékbibliography
1. Land,J.M.,Hockaday,J.M.,Hughes,J.T.& Ross,B.D. J.Neurol.Sci. 1981; 371-382.1. Land, J.M., Hockaday, J.M., Hughes, J.T. & Ross, B.D. J.Neurol.Sci. 1981; 371-382.
2. Fitzsimons,R.B. Clin.Exp.Neurol. 1981;17,185-210.2. Fitzsimons, R.B. Clin.Exp.Neurol. 1981, 17.185-210.
3. DiMauro,S.,Bonilla,E.,Zeviani,Μ.,Nakagawa,M.,Devivo,D.C. Ann.Neurol. 1985;17,521-538.3. DiMauro, S., Bonilla, E., Zeviani, Μ., Nakagawa, M., Devivo, D.C. Ann.Neurol. 1985; 17.521-538.
. Schon,E.A.,Bonilla,E.,Lombes,A.,Moraes,C.T.,Nakase,Η., Rizzuto,R.,Zeviani,M.& DiMauro,S. Ann.N.Y.Acad.Sci. 1988; 550, 348-359.. Schon, E.A., Bonilla, E., Lombes, A., Moraes, C.T., Nakase, Η., Rizzuto, R., Zeviani, M. & DiMauro, S. Ann.N.Y.Acad.Sci. 1988; 550, 348-359.
5. DiMauro,S.,Zeviani,Μ.,Rizuuto,R.Lombes,A.,Nakase,Η., Bonilla,E.,Miranda,A.F.& Schon,E.A. J.Bioenerg.Biomembr. 1988; 20,353-364.5. DiMauro, S., Zeviani, Μ., Rizuuto, R.Lombes, A., Nakase, Η., Bonilla, E., Miranda, A.F. & Schon, E.A. J.Bioenerg.Biomembr. 1988; 20.353-364.
6. Kobayashi,M., Morishita,H.,Sugiyama,N.,Yokochi,K. Nakano,M.,Wada.Y.,Hotta,Y.,Terauchi,A.,Nonaka,I.6. Kobayashi, M., Morishita, H., Sugiyama, N., Yokochi, K. Nakano, M., Wada.Y., Hotta, Y., Terauchi, A., Nonaka I.
J.Pediatr. 1987; 110, 223-227.J.Pediatr. 1987; 110, 223-227.
7. Darley-Usmar,V.M., Watanabe,M., Uchiyama,Y.,Kondo,I., Kennaway,N.G.,Gronke,L.& Hamaguchi,H. Clin.Chim.Acta. 1986; 158,253-261.7. Darley-Usmar, V.M., Watanabe, M., Uchiyama, Y., Kondo, I., Kennaway, N.G., Gronke, L. & Hamaguchi, H. Clin.Chim.Acta. 1986; 158.253-261.
. Tanaka,M.,Nishikimi,Μ.,Suzuki,H.,0zawa,T.,0kino,E., Takahashi,H. Biochem.Biophys.Rés.Commun. 1986; 137,911-916.. Tanaka, M., Nishikimi, Μ., Suzuki, H., 0zawa, T., 0kino, E., Takahashi, H. Biochem.Biophys.Rés.Commun. 1986; 137.911-916.
9. Behbehani,A.W.,Goebel,Η.,Osse,G.,Gábriel,Μ.,Langenbeck .U.,Berden,J. Berger,R.& Schutgens,R.B. Eur.J. Pediatr. 1984; 143,67-71.9. Behbehani, A.W., Goebel, Η., Osse, G., Gábriel, Μ., Langenbeck .U., Berden, J. Berger, R., & Schutgens, R.B. Eur.J. Pediatr. 1984; 143.67-71.
10. Jonhson,M.A.,Turnbull,.M.,Dick,D.J.& Sherratt,H.S.10. Jonhson, M.A., Turnbull, .M., Dick, D.J. & Sherratt, H.S.
J.Neurol. Sci. 1983; 60,31-35.J. Neurol. Sci. 1983; 60.31 to 35.
11. Bresolin,N.,Zeviani,Μ.,Bonilla,E.,Miller,R.H., Leech,R.W.,Shanske,S.,Nakagawa,M.& DiMauro. Neurology 1985; 38,802-812.11. Bresolin, N., Zeviani, Μ., Bonilla, E., Miller, R.H., Leech, R.W., Shanske, S., Nakagawa, M. & DiMauro. Neurology 1985; 38.802-812.
12. Tanaka,M.,Nishikimi,M.,0zawa,T.,Miyabayashi,S.& Tada,K. Ann.N.Y. Acad. Sci. 1986; 488,503-50412. Tanaka, M., Nishikimi, M., 0zawa, T., Miyabayashi, S. & Then, K. Ann.N.Y. Acad. Sci. 1986; 488.503-504
13. Takamiya,S.,Yanamura,W.,Capaldi,R.A.,Kennaway,N.G. Bart,R.,Sengers,R.C.A.,Trijbels,J.M.F.& Ruitenbeek,W.13. Takamiya, S., Yanamura, W., Capaldi, R.A., Kennaway, N.G. Bart, R., Sengers, R.C.A., Trijbels, J.M.F. & Ruitenbeek, W.
Ann.N.Y.Acad.Sci. 1986; 488,33-43.Ann.N.Y.Acad.Sci. 1986; 488.33-43.
14. Holt,I.J.,Harding,A.E.& Morgan-Hughes,J.A. Natúré 1988; 331,717-71914. Holt, I.J., Harding, A.E. & Morgan-Hughes, J.A. Natur 1988; 331.717-719
15. Shoubridge, E.A., Kárpáti, G.,& Hastings, K.E.M. (1990) Cell 62, 43-49.15. Shoubridge, E.A., Kárpáti, G., & Hastings, K.E.M. (1990) Cell 62, 43-49.
16. Nakamura, S. et al (1990) Acta Neuropathol 81, 1-6.16. Nakamura, S. et al. (1990) Acta Neuropathol 81, 1-6.
17. Wallace, D.C. et al (1990) Ped. Research 28, 52517. Wallace, D.C. et al. (1990) Ped. Research 28, 525
528 .528.
18. Kennaway,N.G. et al. (1990) Ped. Research 28, 529-535.18. Kennaway, N.G. et al. (1990) Ped. Research 28, 529-535.
19. Ewart, et al. (1990) Biochim. Biophys. Acta 1018, 22319. Ewart, et al. (1990) Biochim. Biophys. Acta 1018, 223
20. Muller-Hocker.J.,Walther,J.U.,Bise,K.,Pongratz, D. & Hubner, G. Virchows.Arch.1984;45,125-138.20. Muller-Hocker.J., Walther, J.U., Bise, K., Pongratz, D. & Hubner, G. Virchows.Arch.1984; 45,125-138.
21. Chance,B.,Leigh,J.S.,Smith,D.S.,Nioka,S.& Clark,B.J. Ann.N.Y.Acad.Sci. 1986; 488,140-153.21. Chance, B., Leigh, J.S., Smith, D.S., Nioka, S. & Clark, B.J. Ann.N.Y.Acad.Sci. 1986; 488.140-153.
22. Linnane, A.W. et al. (1989) Láncét i,642-64522. Linnane, A.W. et al. (1989), 642-645
23. Linnane, A. W. et al. (1990) Biochem. Int. 22, 1067-1076.23. Linnane, A. W., et al. (1990) Biochem. Int., 22, 1067-1076.
24. Cortopassi, A.C.& Arnheim, N. (1990) Nucleic. Acids Rés. 18, 6927-6933.24. Cortopassi, A.C. & Arnheim, N. (1990) Nucleic. Acids Slit. 18, 6927-6933.
25. Yen. T.C. et al.(1991) Bichem. Biophys. Rés. Commun.25. Yen. T. C. et al (1991) Bichem. Biophys. Gap. Commun.
26. Zhang C. et al. (1992) FEBS L. 297, 34-38.26. Zhang C. et al. (1992) FEBS L. 297, 34-38.
27. Shoffner, J.M. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA27. Shoffner, J.M. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA
86, 7952-7956.86, 7952-7956.
28. Ozawa, T. et al. (1990) Bichem. Biophys. Rés. Commun. 170, 830- 83628. Ozawa, T., et al. (1990) Bichem. Biophys. Gap. Commun. 170, 830-836
29. Hattori, K. et al.(1991) Am. Heart J. 121, 1735-1742.29. Hattori, K. et al (1991) Am Heart J. 121, 1735-1742.
30. Sies, H. (1993) Eur. J. Biochem. 215, 213-219.30. Sies, H. (1993) Eur J. Biochem. 215, 213-219.
37. Holt. I.J. et al. (1990) Am. J. Hűm. Génét. 46, 428-433.37. Dead. BOW. et al. (1990) Am. Genet. 46, 428-433.
38. Wallace, D.C. (1989) Trends Génét. 5, 9-13.38. Wallace, D.C. (1989) Trends Gene. 5, 9-13.
39. Huang, P. et al. (1990) J. Bioi. Chem. 265, 11914-11918.39. Huang, P. et al. (1990) J. Bioi. Chem. 265, 11914-11918.
40. Balzarini, J. et al. (1989) J. Bioi. Chem. 264, 6127-6133.40. Balzarini, J. et al. (1989) J. Bioi. Chem. 264, 6127-6133.
41. Furman, P.A. et al. (1986) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 8333-8337.41. Furman, P.A. et al. (1986) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 8333-8337.
42. Cheng, et al. (1987) J. Bioi. Chem. 262, 2187-2189.42. Cheng, et al. (1987) J. Bioi. Chem. 262, 2187-2189.
43. St. Clair, M.H. et al. (1987) Antimicrob. Agents Chemother. 31, 1972-1977.43. St. Clair, M.H. et al. (1987) Antimicrob. Agents Chemother. 31, 1972-1977.
44. Kawai, C.et al. (1975) N. Engl. J. Med. 293, 592.44. Kawai, C.et al. (1975) N. Engl. J. Med., 293, 592.
998-1011.998-1011.
56,56
Maruyama, J. et al.Maruyama, J. et al.
Nakamura, T et al.Nakamura, T et al.
(1992) Cardiovassc. Rés.(1992) Cardiovassc. Gap.
26, 765-769.26, 765-769.
Gorcsan, J. et al.Gorcsan, J. et al.
(1993) Am. Heart J. 125,(1993) Am Heart J. 125,
1316-1323 .1316-1323.
Kubicek, W.G. et al. (1993) Card. Hung. 22,Kubicek, W.G. et al. (1993) Card. Hung. 22
29-32.29-32.
Hatefi,Y. Methods Enzymol. 1978; 53,35-40.Hateful, Y. Methods Enzymol. 1978; 53.35 to 40.
KAWAI, C., TAKATSU, T. Clinical and experimental studies on cardiomyopathy. N. Engl. J. Med., 293, 592, 1975.KAWAI, C., TAKATSU, T. Clinical and experimental studies on cardiomyopathy. N. Engl. J. Med., 293, 592, 1975.
ANGELAKOS, E.T., BERNARDINI, P. Frequency components andpositional changes in electrocardiogram of the aduit rat. J.Appl. Physiol., 18, 261'263, 1963.ANGELAKOS, E.T., BERNARDINI, P. Frequency components and positional changes in the electrocardiogram of the aduit rat. J. Appl. Physiol., 18, 261'263, 1963.
Sümegi, B.Sümeg, B.
et al.et al.
(1990) Clin. Chim. Acta 192, 9-18(1990) Clin. Chim. Acta 192, 9-18
Sümegi, B et al [1994] Biochem. J. 297, 109-113.Sümeg, B et al [1994] Biochem. J. 297, 109-113.
Bergmeyer, H.U. , Academic press, ed. (1974) Methods New York....Bergmeyer, H.U. , Academic press, ed. (1974) Methods New York ....
in Enymatic Analysis,in Enymatic Analysis,
2nd2nd
Palva, T.K., Palve E.T. FEBS Lett. 192, 267-270. [1985]Palva, T.K., Palve E.T. FEBS Lett. 192, 267-270. [1985]
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9501327A HUT74833A (en) | 1995-05-05 | 1995-05-05 | Genetically modified, miopathic and cardiomiopathic rat strain, and a method for its production |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9501327A HUT74833A (en) | 1995-05-05 | 1995-05-05 | Genetically modified, miopathic and cardiomiopathic rat strain, and a method for its production |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9501327D0 HU9501327D0 (en) | 1995-06-28 |
| HUT74833A true HUT74833A (en) | 1997-02-28 |
Family
ID=10986804
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9501327A HUT74833A (en) | 1995-05-05 | 1995-05-05 | Genetically modified, miopathic and cardiomiopathic rat strain, and a method for its production |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| HU (1) | HUT74833A (en) |
-
1995
- 1995-05-05 HU HU9501327A patent/HUT74833A/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU9501327D0 (en) | 1995-06-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lavedan et al. | Myotonic dystrophy: size-and sex-dependent dynamics of CTG meiotic instability, and somatic mosaicism | |
| Jun et al. | Use of transmitochondrial cybrids to assign a complex I defect to the mitochondrial DNA-encoded NADH dehydrogenase subunit 6 gene mutation at nucleotide pair 14459 that causes Leber hereditary optic neuropathy and dystonia | |
| Pack et al. | The cells of the tracheobronchial epithelium of the mouse: a quantitative light and electron microscope study | |
| Tatuch et al. | Heteroplasmic mtDNA mutation (T----G) at 8993 can cause Leigh disease when the percentage of abnormal mtDNA is high | |
| Griffiths et al. | Demonstration of somatic mutation and colonic crypt clonality by X-linked enzyme histochemistry | |
| Budde et al. | Combined enzymatic complex I and III deficiency associated with mutations in the nuclear encoded NDUFS4 gene | |
| Swenne et al. | Effect of genetic background on the capacity for islet cell replication in mice | |
| Carelli et al. | Bioenergetics shapes cellular death pathways in Leber's hereditary optic neuropathy: a model of mitochondrial neurodegeneration | |
| Fischel-Ghodsian et al. | Temporal bone analysis of patients with presbycusis reveals high frequency of mitochondrial mutations | |
| Waymire et al. | Mice lacking tissue non–specific alkaline phosphatase die from seizures due to defective metabolism of vitamin B–6 | |
| JP3932559B2 (en) | Pharmaceutical composition comprising a hydroxymic acid derivative | |
| Nelson et al. | A new mitochondrial DNA mutation associated with progressive dementia and chorea: a clinical, pathological, and molecular genetic study | |
| Tranchant et al. | Cardiac transplantation in an incomplete Kearns-Sayre syndrome with mitochondrial DNA deletion | |
| Linnane et al. | The Universality of Bioenergetic Disease: Age‐associated Cellular Bioenergetic Degradation and Amelioration Therapy | |
| Cardinale et al. | Experimental vitamin B12 deficiency: its effect on tissue vitamin B12-coenzyme levels and on the metabolism of methylmalonyl-CoA | |
| Zhong et al. | Age-related decline of the cytochrome c oxidase subunit expression in the auditory cortex of the mimetic aging rat model associated with the common deletion | |
| Bernstein et al. | Sexual reproduction as a response to H2O2 damage in Schizosaccharomyces pombe | |
| Davis et al. | Selective impairments of mitochondrial respiratory chain activity during aging and ischemic brain damage | |
| TOwBIN | Molecular genetic aspects of cardiomyopathy | |
| Munroe et al. | Tissue-specific expression of human arylsulfatase-C isozymes and steroid sulfatase | |
| Roussel et al. | Does any yeast mitochondrial carrier have a native uncoupling protein function? | |
| Niedermüller | Age dependency of DNA repair in rats after DNA damage by carcinogens | |
| Fayon et al. | Fatal neonatal liver failure and mitochondrial cytopathy: an observation with antenatal ascites | |
| HUT74833A (en) | Genetically modified, miopathic and cardiomiopathic rat strain, and a method for its production | |
| Horton et al. | Decline in respiratory control ratio of rat liver mitochondria in old age |