HU230797B1 - Integrated microdevice for cell membrane models - Google Patents
Integrated microdevice for cell membrane models Download PDFInfo
- Publication number
- HU230797B1 HU230797B1 HU1400517A HUP1400517A HU230797B1 HU 230797 B1 HU230797 B1 HU 230797B1 HU 1400517 A HU1400517 A HU 1400517A HU P1400517 A HUP1400517 A HU P1400517A HU 230797 B1 HU230797 B1 HU 230797B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- cells
- micro
- layer
- electrodes
- inlet
- Prior art date
Links
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 title 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 claims abstract description 41
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 36
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 88
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 20
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 13
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 11
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 9
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 7
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims description 6
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 claims description 5
- 238000012800 visualization Methods 0.000 claims description 5
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 4
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 claims description 2
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 claims description 2
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 claims description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 claims 1
- 229920006328 Styrofoam Polymers 0.000 claims 1
- 201000010251 cutis laxa Diseases 0.000 claims 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 claims 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 claims 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 claims 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 claims 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 claims 1
- 239000008261 styrofoam Substances 0.000 claims 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 abstract description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 6
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 abstract description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000007723 transport mechanism Effects 0.000 abstract 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 42
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 28
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 20
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 19
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 16
- CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N octamethyltrisiloxane Chemical compound C[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)C CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 12
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- 238000004987 plasma desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 12
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 10
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 9
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 6
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 6
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 6
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 5
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 210000003668 pericyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002457 barrier cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004082 barrier epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 230000008497 endothelial barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 2
- 230000004890 epithelial barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 2
- 238000002135 phase contrast microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N serine Chemical compound OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 1
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O Chemical compound CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N 0.000 description 1
- RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-O CDP-choline(1+) Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC[N+](C)(C)C)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-O 0.000 description 1
- 241000668997 Carulaspis minima Species 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 1
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- -1 Dimethylsiloxane Chemical class 0.000 description 1
- 108700038720 Ebip Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 235000014966 Eragrostis abyssinica Nutrition 0.000 description 1
- 241000289659 Erinaceidae Species 0.000 description 1
- 241001670157 Gymnura Species 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 238000003619 Marshal aromatic alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 241001522306 Serinus serinus Species 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008501 brain endothelial barrier function Effects 0.000 description 1
- 229940124630 bronchodilator Drugs 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010061592 cardiac fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- YQGOWXYZDLJBFL-UHFFFAOYSA-N dimethoxysilane Chemical compound CO[SiH2]OC YQGOWXYZDLJBFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002367 endolytic effect Effects 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 229960003699 evans blue Drugs 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000004880 explosion Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 1
- 239000012526 feed medium Substances 0.000 description 1
- 230000004992 fission Effects 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 150000002433 hydrophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000002032 lab-on-a-chip Methods 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004893 lung epithelial barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005360 mashing Methods 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001706 olfactory mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 239000000565 sealant Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 239000004590 silicone sealant Substances 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000010408 sweeping Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 210000001103 thalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001755 vocal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004916 vomit Anatomy 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 1
- VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N yttrium atom Chemical compound [Y] VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/403—Cells and electrode assemblies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/40—Semi-permeable membranes or partitions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
A találmány tárgya előnyösen folyadékáram alatt, ahol a mikroeszköz tartalmaz: - első mikrocsatornát, amely egy első szerkezeti rétegben van kialakítva, - második mikrocsatornát, amely egy második szerkezeti rétegben van kialakítva, - porózus membránt az első mikrocsatorna és a második mikrocsatorna között, sejtek réteges tenyészetének hordozására, - legalább két pár átlátszó elektródot transzcelluláris elektromos ellenállás monitorozására és a sejtek réteges tenyészete ezzel egyidejű vizuális megfigyelésének lehetővé tételére, és - legalább egy bevezető nyílást és - legalább egy kivezető nyílást. A biológiai gátak találmány szerinti modelljei alkalmasak fiziológiás funkciók, transzportmechanizmusok, hatóanyag-bejuttatás és patológiás állapotok vizsgálatára. Különösen alkalmas biológiai gátak modelljeiben hatóanyagok bejutásának szkrínelésére.The present invention preferably relates to a liquid stream, where the micro device includes: a first microchannel formed in a first structural layer; a second microchannel formed in a second structural layer; - a porous membrane between the first microchannel and the second microchannel for cellular culture of cells carrying, - at least two pairs of transparent electrodes for monitoring transcellular electrical resistance and cellular culture of cells to allow simultaneous visual observation of it, and at least one inlet opening and - at least one outlet. The models of biological barriers according to the invention are suitable for physiological functions, transport mechanisms, \ t drug delivery and pathological conditions. Particularly suitable for biological barrier models of active substances screening for access.
Description
INTEGRÁLT MBKROESZKÖZSEJTMKM'BRÁN-A3O»ELLEK»fEZINTEGRATED MBCROSS-CELLTMKM'BRÁN-A3O »ELBES» fEZ
A. TALÁLMÁNY TÁRGYKÖREA. SUBJECT OF THE INVENTION
A biológiai gátak, taiálmát3y szerinti modelljei alkalmasak fiziológiás funkciók, traaszporitnechaatasnu5 sok, hatóanyag-bejuttatás és patológiás állapotok vizsgálatára. Különösen alkalmas biológiai gátak tnodeíljeíben hatóanyagok bejutásának szkrmelésóre.Models of biological barriers, according to the thalamus, are suitable for studying physiological functions, traasporitechnatasa, many drug delivery and pathological conditions. Particularly suitable for use in biological barrier transducers is to provide a barrier to drug delivery.
A TECHNIKA ÁLLÁSATECHNICAL STATE
A test külső, epitél- és belső, endotél-gátja fontos védöreudszett alkotva tartja fenn a test homeosztázísál ló és: játszik kritikus szerepet a gyógyszerek abszorbeálásában és továbbításában [Deli (2009)1. A biológiai gátak, tenyésztéssel előállított nsotklljeinek fontos szerepe van az élettani folyamatok, mmszportmeehanízmusok, gyógyszerszállítás és patológiás folyatnátok tanulmányozásában (Deli és mtsai. (2.00.5)], Az epitél és enáotéi gátak alapvető tulajdonsága a sejtek között itt vivő fennálló szoros kapcsolat, ami a hidrofil vegyűleíekkel szembeni magas elektromos ellenállásban és alacsony passzív permeábíbtás’bao mutatkozik meg [Lóéit (20ö9}[ E paraméterek /n vúw modellekben történő mérésére, porózus membránon létesített sejtienyészel-inxeríeket. vezettek be az ;9Sö-as években. Tenyész-mzertuínokon összefolyásig tenyésztett. kiiapadó epitél- vagy etidotélseltek egyetlen sejtrétegből álló tenyészetett széteskörben alkalmazták bélrendszeri-, tüdő- és vér-agygátak (B8B) statikus modelljeként. A belgát egyik jól jellemzett modellje, a gyógyszerjelölíek szűrésére alkalmazott embert C&co-2 epitélsejtvonai [(ilelhttger és mtsai. (2012)]. Számos vizsgálat ismerteti a tíidöeredetilThe body's outer, epithelial and internal endothelial barrier maintain an important protective cavity and play a critical role in the absorption and delivery of drugs [Deli (2009) 1. The biological barriers and their cultures produced by cultures play an important role in the study of physiological processes, sports mechanisms, drug delivery and pathological sequences (Deli et al. (2.00.5)), The essential property of the epithelial and anenotic barriers high electrical resistance and low passive permeability to hydrophilic compounds [Lóéit (20? 9} [E parameters / n in vow models, cellular inoculum in porous membrane. introduced in the 9th to 10th centuries). Lymphatic epithelial or etidothelialized cultures were used as a static model of the intestinal, lung and blood brain (B8B) cultures in a single cell layer. leading cell lines [(ilelhttger et al. (2012)).
2Ö Á$49 epitélsejtvonalat, mint s túdögát modelljét (Bakattd és mtsai (2űf.ló)]. A BBB modelleken alapuló tenyészet komplexitásában nagymértékben különbözik.. Agyi endotélsejtek halhatatlanná tett sejtvonalai és monokultúrái alkalmazhatók egyszerűsített BBB modellként, viszont a printer sejteken alapuló együtt· tenyésztési modellek gáttelajdonságai jobbak [Deli és mtsai. (2Ő05g Tóth és mtsai. (201 l)j. Olyan, primer agyé enáoíélse-jtek, pertelták és gliasejíek egyiítt-tenyésztésétt alapuló, szingénikus, patkányeredetn BBB modellt létesítettünk, amely utánozza a sejtek irt vivő anatómiai elhelyezkedését. Ez a háromszoros egyűtt-teuycsztéses BEB modell gáttulajdonságokat mutat és gyógyszerpermeábiiáási vizsgálatban ín vivő BBB permeabditásí adatokkal jó korrelációt jelez [Nakagawa és mtsai. (2009)].2o A $ 49 epitélsejtvonalat than s túdögát model (Bakattd et al (2U f .ló)]. Differs greatly from the culture based on the BBB model on the complexity of cell lines and monocultures immortalized .. brain endothelial cells can be used simplified BBB model, however, based on with the printer cells · cultivation models have improved barrier properties [Deli et al. This three-fold, co-textual BEB model shows barrier properties and shows good correlation with BBB permeability data in the drug permeability assay [Nakagawa et al. (2009)].
A mikroteebnoíögta és az. integrált funkciókkal ellátott lab-on-ohíp eszközök lehetőséget kínálnak a gátak valósidejű és a fiziológiai állapotot jobban megközelítő körülmények közötti vizsgálatához [Booth és mtsai.The microteebnomen and the. lab-on-the-fly devices with integrated functions provide an opportunity to investigate barriers in real-time and more closely approximating physiological conditions [Booth et al.
5ö (2012); Prabhakarpandían és mtsai. (2012)], A statikus tenyésztő inzertekkel szemben, a sejteket ki lehet tettn; az erekendotélimnára nézve különösen fontos folysdékáramnak és nyújtási stressznek (Booth és mtsai. (2.014)]. Bár a szakirodalomban már ismertettek folyamatos tápoldat-tlrttmlásos, 3-dimenziós csöszerkezeten alapuló dinamikus EBE modellt, ám az üreges-szálas rendszerrel a sejtek valósidejű láthatóvá tétele nem lehetséges ÍCuceito és mtsai. (201 j i I.5 (2012); Prabhakarpandian et al. (2012)], Unlike static culture inserts, cells may be exposed; Flow current and stretching stress are particularly important for coronary artery drainage (Booth et al. (2.014)]. Although there is a literature description of a continuous 3-dimensional tube-based dynamic EBE model, the hollow-fiber system can be seen possible ÍCuceito et al. (201 ji I.
rá. jelen kutatás célja olyan, verzatilis, egyszerű és köllséghatékorty Integrált rnikroeszköz tervezése és gyártása volt, amely lehetővé teszi 2 vagy 3 sejttípus együttes tenyésztését, tápoldat átatnohatását, a sejtek láthatóvá tételét mikroszkopiává.!, sejtek közötti elektromos ellenállás nyornonköveíését és sejtek alkotta egysejtes réteg permeáhilításánuk mérését, lotegtálí lab-on-a-chip mérökamrát építettünk és azt négy különböző gáfmodell uyomonkövetésére és jellemzésére alkalmaztuk. A. chip alkahrtas volt ellenállás mérésére, permeábtlításr tesztekre és embert bélből származó Cseo-2 sejtvonai és embert tüdőből származó A549 epttélsejtvonal, emberi iTfeTS-34Ö5(SGit. The aim of the present research was to design and produce a versatile, simple, and cost effective wound, which allows the co-cultivation of 2 or 3 cell types, the transfer of culture medium, the visualization of the cells by microscopy. , a lottery lab-on-a-chip measuring chamber was constructed and used to track and characterize four different graph models. A. chip alkahrtas was used for resistance measurement, permeation tests and human intestinal Cseo-2 cell line and human lung A549 epithelial cell line, human iTfeTS-34Ö5 (SG
P14ÖÖ5L?P14ÖÖ5L?
agyból származó hCMBC/D 3 epítélseitvortal és patkány agyból szárntaaő prrtner endeté iseitek együtt-tenyész·' tésére primer asztfücitákk&i és agyi peneitákkal. Ez volt az első ese·, hogy a háromszoros primer együtt· tenyészeten alapuló vér-agy gát modelljét fötyádékátsóíi alatt vizsgálta vsíaki,brain hCMBC / D 3 epithelial epithelium and rat brain derived progenitor endothelium for co-culture with primary asthmatics and cerebral peniculates. This was the first case · that the triple primer co-cultured blood-brain barrier model was tested under its cuvette salts,
A TALÁLMÁNY RÖVID ÖSSZEFOGLALÁSABRIEF SUMMARY OF THE INVENTION
A találmány tárgya integrált nsikroeszköz biológiai gát modelljének íbiöíórösigát-rocxleíl) vizsgálatára, ahol a rmkroeszkóz tartalmaz:FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to a biological barrier model of an integrated nicro-device (Libro-rigatrix), wherein rmcroescose comprises:
- első míkrocsatoraát, amely egy első szerkezeti rétegben van kialakítva,- a first microcircle formed in a first structural layer,
- második rolkroe sátornál, amely egy második szerkezeti rétegben van kialakítva, t'O a 't>\ekbeχ annk s utnu K o-S , tη. Imán dev i m íhfttx ' *χη μη uex x nA»flik?dx \- for a second rolkroe tent formed in a second structural layer, t'O a 't> \ ekbeχ annk s utnu K o-S, tη. Iman dev i m íhfttx '* χη μη uex x nA »fllik? Dx \
- porózus membránt az elsó roikrcscsmoma és a második fnikrecsatörna ikózótt (azokat elválasztva), amely alkalmas sejtek réteges tenyészel ettek hordozására, • legalább két pár átlátszó elektródot traaszecilniáris etektröirros'«liettáltós memtörozására és a sejtek réteges tenyészete ezzel egyidejű vizuális megögyelésónek lehetővé teleiére, ahol- a porous membrane for separating the first germline and the second fission gland (which separates them), which is capable of carrying cells by layered culture;
- egy első elektródpár első elektródja érintkezik az első roikzöcsaióníávai és az első elskiródpár második eleidíödja étrotkeztk a második mikroesatomávai, és- the first electrode of a first pair of electrodes is in contact with the first elongate and the second element of the first pair of electrodes is fed to the second micro-atom, and
- egy második eiekrródpár első elektródja érintkezik az első mifcroesatornával és a második: elekiródpár második elektródja érintkezik a második mikmcsatornávai, és- a first electrode of a second pair of electrodes contacting the first microwave channel and a second electrode of the second pair of electrodes contacting the second microchannel, and
- legalább egy bevezető nyílást ás- digging at least one inlet
- legalább egy 'kivezető nyílást, ami lehetővé teszi közeg áramlását: a mikroesaíornákben- at least one outlet opening which allows the flow of fluid: in the micro-pressures
- és égy első hordezoréteget év égy második: hordözdféisgóé stnslyek lemez iormájésk és rendre az első szerkezeti réteghez:-ós. s m*»<\«k szerkezeti réteghez vaunak erősítve, ahol az elektródok réteg: formájában kialakították, rendíts érintkeznek az eXo szerkezed réteggel és e níásöálk szerkezeti réteggel, és a hordozó rétegen vannak kialakítva, \ ,t. mars S i a't nítm 11 tr ktx^x x.tieto^.jvt m»\<11 sí χ·1í tt A találmány rárgya továbbá olyan mikroeszköz, ahol a mikfeeszkez htríaismiz:- and the first layer of carrier year and the second layer of second layer: porcelain stnslyek plate with lime liver and for the first structural layer: -oh. sm * »<\« k bonded to a structural layer, where the electrodes are in the form of a layer, align with the structure layer eXo and the structural layer e, and are formed on the support layer, \, t. S i mars a't anhydrous cupric KTX 11 tr ^ x ^ x.tieto .jvt m »\ <ski 11 χ · t 1 tt rárgya The invention furthermore a micro device, wherein the mikfeeszkez htríaismiz:
- legalább egy bevezető nyílást és legalább egy kivezető:nyílást az első írtíkroesatornáltoz, és- at least one inlet and at least one outlet to the first duct micro-channel, and
- legalább egy bevezető nyílást és legalább egy kivezető nyilast a második nsikroesatornához, ami lehetővé teszi közeg kezelését és vizsgálatát az első és a második mikroosafornában (0(1100-01-100),- at least one inlet opening and at least one outlet arrow for the second niche channel allowing treatment and testing of the medium in the first and second microspheres (0 (1100-01-100),
A talanmo tJ>»t,ttov,K't ’ nxtOxxAxO ron χ lan a míkroesatotnák dimeazióí a következők:Dimensions of the microsatellites of talanmo tJ> »t, ttov, K't 'nxtOxxAxO r χ lan are:
v eLx> ext'to’nt- <<e s-xxéce eedatb '0 >tn- PC ,tn, 20» , m, PA mm, ο χ mm, P S nm, 0 t mt, P t'< rm mv eLx> ext'to'nt- << e s-xxéce eedatb '0> tn- PC, tn, 20 », m, PA mm, ο χ mm, P S nm, 0 t mt, P t' <rm m
0,2 cm, és legfeljebb 280 ptn, bÖO gin. 0,4 mm, 0,5 mm, 8,3 tnm, 1 tntn, .2 mm, 4 mm. or S: mm,0.2 cm, and not more than 280 ptn, b0 gin. 0.4mm, 0.5mm, 8.3nm, 1nm, .2mm, 4mm. or S: mm,
- az első csatorna .mélysége legalább 50 pm, i00 pm, 200 pro, 0,4 mm, 0,5 mm, 0,8 mm, 0,1 cm, 0,15 cm or (1,2 ettt, és Icgíéljehb 200 pro, 500 pro, 0.4 mm, 0 5 mm, 0,8 mm, 1 mm, 2 roro 4 mm or 5 tntn,the first channel has a depth of at least 50 µm, 100 µm, 200 pro, 0.4 mm, 0.5 mm, 0.8 mm, 0.1 cm, 0.15 cm or (1.2 and, pro, 500 pro, 0.4 mm, 0 5 mm, 0.8 mm, 1 mm, 2 roro 4 mm or 5 tntn,
- az első esatórna hossza. legalább 400 pro, 8,5 mm, 0,3 meg 0,1 etn. 0,2 em, 0,5 em, l em, 2 cm or A em;- length of the first rain gutter. at least 400 pro, 8.5 mm, 0.3 and 0.1 ethn. 0.2 em, 0.5 em, l em, 2 cm or A em;
- ,t második exxitermt szélessége bgaktbb rom ?o<) unt, 200 itta, 0,- atat, 0,5 tntn, P,S mm, 0,1 stn, 0, 15 cm or-, t second exxitermt width bgaktbb rom? o <) unt, 200 itta, 0, - atat, 0.5 tntn, P, S mm, 0.1 stn, 0, 15 cm or
8,2 etn, és legfeljebb 200 pro, 5.00 pro, 0,4 m;n,.0)5 tntn, 0,8 rom, 1 rom, 2 roro, 4 roro or .5 tnm,8.2 ethn, and up to 200 pro, 5.00 pro, 0.4 m; n, .0) 5 tntn, 0.8 rom, 1 rom, 2 roro, 4 roro, or .5 tnm,
- s tnásndik.x.satígna mólt χνμν L g.tl,.bc So uro, 100 pro, 200 ptn, 0,4 mm, 0,S mm, Ö,k mm, 0,1 cm, 53,15 én; ót- s tnásndik.x.satigna mole χνμν L g.tl, .bc So uro, 100 pro, 200 ptn, 0.4 mm, 0, S mm, δ, k mm, 0.1 cm, 53.15 me; him
0,2 cin, és legfeljebb 280 pro, SPö pro, 8,4 mm, ö,S tntn, 0,S rom, 1 rom, 2, roro, 4 roro or 5 roro,0.2 cin and up to 280 pro, SP0 pro, 8.4 mm, δ, S tntn, 0, S rom, 1 rom, 2, roro, 4 roro or 5 roro,
- & második csatorna hossza legalább 480 pro, 0,5 tntn, 0,8 tntn, 0,1 cet, 0:2 cm, 0,5 em, l em, 2 ero or 3 cm, ahol előnyösen ..a, csatornák szélessége azonos.& second channel length is at least 480 pro, 0.5 tntn, 0.8 tntn, 0.1 cet, 0 : 2 cm, 0.5 em, l em, 2 power or 3 cm, preferably channels width is the same.
Előnyösebben g csatéra ák mélysé ge szórtokMore preferably, g strands are deeply dispersed
115418-3405/SÖ115418-3405 / SO
Pl 400517 'Előnyösen» mikrocsstornák dinteitziói legfeljebb * esn \ nfe em \ 0 - eny -'· en' -, vfe νΠ ' 4 w <»’’ \ !' 3 cm \ 0,' -i n ' »i 1 nt v o,' < mPl 400517 'Preferably »microprojectile dynamics up to * esn \ nfe em \ 0 - eny -' · en '-, vfe νΠ' 4 w <» '' \ ! '3 cm \ 0,' -in '»i 1 nt vo,'<m
Előnyösen a porózis membrán máenyag membrán, pl. EET-vnernbrá».Preferably, the porous membrane is a nuclear membrane, e.g. EET-vnernbrá ».
Előnyösen a membrán vasíagsága IÖ - <00 μ« vagy $ - 50 ptn vagy 2 - 4Ö μηι vagy 10 - .50 μ;» vagy 15Preferably, the membrane has a thickness of I0 - <00 μ «or $ - 50 ptn or 2 - 4 μ μηι or 10 - .50 μ;» or 15
- 30 t»n.- 30 t »n.
Előnyőseit sntembsh? ikífíismétete 0,1 - 2 pt.n vagy 0,2 -1 psn vagy 0,3 - 0,2 gtu vagy 0,3 - 0,6 gr». Előnyöseit a membrán pőtmssőrusége eshVenkéni ••.(öőgyzeiegaíbHóWeakéní} ö,í -· 20 millió -vagy 0,4 - 50 mithő v&g\ 0,5 - 5 mhhö \<tgv 0,3 3 müt-o \<jg\ t - milhő pórusBenefits of sntembsh? it has a repeat of 0.1 to 2 pt.n or 0.2 to 1 psn or 0.3 to 0.2 gtu or 0.3 to 0.6 gr ». The advantages of membrane superfamily are: • • • • • • • 20 million –or 0.4–50 mithions of v & g \ 0.5 - 5 mhhö <tgv 0.3 3 myt-o \ <jg \ t - milho heat pore
Előnyösen a pórusos membrán az. első és a rnásíxllk szerkezeti réteg közé Illesztve helyezkedik el.Preferably, the porous membrane is. Between the first and the structural layers, it is fitted.
Az eleferötlék úgy vímnak ktáliikkve, hogy etienáíiástttereÁ tegyenek lehetővé.The foreground extract vomit in such a way as to allow its ethanolation space.
Vlnnynsí.» ,i.· emkonde’·, temsetee fwnatábsn sannak kiafekiU n elóusóxa! e/.xí , pint-ns- wg\ .rsre,séxg vmwj c\mVlnnynsí. », I. · Emkonde '·, temsetee fwnatábsn sannak kiafekiU n elóusóxa! e / .xí, pint-ns- wg \ .rsre, séxg vmwj c \ m
Áz díékteódők átlátszóiig. nnh lehetővé ieszi a vizuális megfigyelést egyéb mérésekkel egyszerre (párhnza-nnsan).Ace to the transparency of the deeds. nnh enables visual observation with other measurements simultaneously (pahnza-nnsan).
Előnyösen az elektród maszklrozással készölt. előnyösen íSmimzalos masz&lrozással. Előnyösen az elektróclréteg vastagságá lö ·· 100 táti vágy 5 -50 ms vagy 2 - 40 n.tn vagy lö - SO mn vagy í 5 - 3ö táti.Preferably, the electrode is prepared by masking. preferably by simminal mashing. Preferably, the electroplate thickness · 100 ágy longing is 5 -50 ms or 2 40 40 n.tn or - - SO mn or - 5 - 3 tá.
Előnyőse»: a höiGözőréteg-temexek átlátszó lapok, pl. ithkmszkópdázgyíemszek. Előnyösen a höróezörátég Üvegből van,Advantage »: Thermal layer temples are transparent sheets, eg. ithkmszkópdázgyíemszek. Preferably, the bronchodilator is made of Glass,
Előnvört'r: eleknvdok femréieget nörí;«,ztá,·»';, be\''na-.».tí („spurim· uxnmg'h \annak kiai.tkbvn m!nd20 egyik hőrdszörétegemForeword: eleknvdok femréieget nörí; «, ztá, ·» ';, be \' 'na -. ».T (" spurim · uxnmg'h \ its kiai.tkbvn m! Nd20 is one of my thermal layers
Előnyősén az elektródok átlátszó aranyréfeg-elektródnk, amelyek porlasztáséit bevonással vannak kkdaihejb’Uj'yre i.i v ' ti in · ' t » v x ngsaguak.Preferably, the electrodes are a transparent gold-plated electrode coated with a sputter-coated coating which is i.i v 'ti in ·' t x v x ngsagu.
Ιλρ,Μα vkmn·. >k < tís. -> v nas t 5 ,, n. mstivtd vaunal \!ii<xÍM hot' un a x i sejtrétegek átlátszóságának és vksoáKs megEgyélésének lehetőségét. Előnyösen az elektródok izolált köndnkiiy ívezetőképes} szigetek, amelyek 3 hordozórétegek felszínén vanntsk kialakítva. Előnyösen az elektródokhoz vezetékek vannak csatlakozta} va, igen előnyösen az atanyelektródokhoz vékony rézvezetékek vannak csatlakozlatsa '.e/ctokepe. epostewppekhciΙλρ, Μα vkmn ·. > k <ti s. -> v nas t 5 ,, n. mstivtd vaunal \! ii <xÍM Opportunity for transparency and understanding of vksoo's cell layers. Preferably, the electrodes are isolated islands which are formed on the surface of carrier layers. Preferably wires are connected to the electrodes, very preferably thin copper wires are connected to the pin electrodes. epostewppekhci
Előnyösen az elektródok a szerkezei! rétegekkel vannak érlntkeztetve, és előnyösen az elektródok a bordozórétegeken adhéziós anyaggal vannak rögzítve, igen előnyösen az elektródok szdíkonos tötnítő adhéziós anyaggal vannak rögzítve.Preferably, the electrodes are structural! and preferably the electrodes are secured to the ribbed layers by adhesive material, most preferably the electrodes are secured by a syllabic sealant adhesive.
ElŐnyösun a szerkezeti rétegek törebrétegeh (blőkkrétegek).Preferably, the structural layers are multilayer (blacks).
Yuo'<*í» a n»h'mv.ívnuk felsőm» r s,,k>. éji ütegekben ’ocicf.'ek, mudtaí eíeseg.rO. a Inne.dék kezelését, előnyőseit a seltteeyésztő közeg kezelését.Yuo '<* í »a n» h'mv.ívnuk upperm »r s ,, k>. at night, 'ocicf.', mudtaíeseg.rO. treatment of Inne.dek, its advantages being the treatment of the broth culture medium.
Előnyösen a szerkezeti rétegek polldimetlUzilosánból ÍPOMS) készültek. Igen előnyösen a nnkrocsatornák felszína oxigénplazmával kezel·, and a természetes módon hídrofób PI3MS-felszíni hldroOllá x'ip a nu » am * - s. ne \ - k'\j -te 1 , oPreferably, the structural layers are made of pollyldimethylsilosan (IPSOMS). Very preferably, the channel channels treat the surface with oxygen plasma, and the naturally hydrophobic PI3MS surface hldrool x'ip a nu »am *. at \ - k '\ j -te 1, o
Előnyősén a bevezéiő nyílásfök} és a kivezető nyííás(tík| ibisiíeiói feiéSórélhét&k.Preferably, the inlet port} and the outlet port (tlie |
Egy előnyös megvalósítási mód szerén az első mikroesaiomáboz bevezető nyílás és kivezető nyílás vezet és a xuásöíhk msktnessínmáhez bevezető nyílás és kivezető nyílás vezet, tsshi lehetővé teszi a tblvisdék elkéső lőntteti kezeléséi az első és s második mi fcreosstomábaa.In a preferred embodiment, the inlet and outlet openings to the first micro-mesh section and the inlet and outlet openings to the x-ray tube are provided, which allows for delayed treatment of the first and second blots.
ii54Ík-34tWSÖii54Ík-34tWSÖ
El 400517E 400517
Előnyőse;· a bevezető és a kivezető nyílások lyukak, amelyek a hordozőrétegsm keresztül vezetnek, különösen előnyösen ugyanabban a hordozórétegben készített lyukak.Advantageously, the inlet and outlet openings are holes which pass through the carrier layer, particularly preferably holes made in the same carrier layer.
Előnyöse;', a bevezető és a kivezető nyílások az eszköz ugyanazon oísíalát; 'vannak.Advantageously, the inlet and outlet openings are on the same side of the device; 'are.
Előnyösen az eszköznek azt az oldalát, amelyben a bevezető és a kivezető nyílások vannak, ágy deftniál5 jók, mint a felső oldalt, és a mások oldatát, mint az alsó oldalt.Preferably, the side of the device having the inlet and outlet openings defines a bed as the upper side and a solution of the others as the lower side.
Igen előnyösen a felső üveglemezen keresztül négy lyuk van fúrva, amelyeken a közeg átjuthat.Very preferably, four holes are drilled through the upper glass plate through which the medium can pass.
Előnyösen «tömbök bevezető és kivezető tartályokat hordoznak, amelyek szintén plaztnakezeléssel vannak a felső üvegfeíülethez rögzítve. Ezek & részek szolgálnak a közeg számára tartályként az. áramlás nélküli tenyésztési periódusban. Előnyöset; vezetékek csatlakoznak a tartályokhoz, és ezáltal a folyadék mozgatásáraPreferably, the blocks carry inlet and outlet containers which are also secured to the upper glass surface by plaque treatment. These & parts serve as a container for the medium. in a flow-free culture period. Preferably; wires connect to the tanks and thereby move the liquid
Itt - .szolgáló bevezető és kivezető nyílásokhoz,Here - .server for inlet and outlet,
Igen előnyösért a tarmlyok PDMS-tömböfcbe Itleszteít műanyag csövekkel., pl. PCI?-csövekkel vaunak kialakítva, amelyek tartályként ás be- és kivezető csövekként szolgáinak.For very advantageous use, the packing is fitted with plastic pipes in a PDMS block, e.g. Contained with PCI? Tubes, which serve as reservoirs and inlet and outlet pipes.
A folyadék előnyösen vizes oldat, előnyösen sejttenyésztő közeg és/vagy vizsgáló közeg.The liquid is preferably an aqueous solution, preferably a cell culture medium and / or assay medium.
Ígért előnyöseit az. áramlás létrehozásához perisztaltikus pampát és szíbkonesőveket alkalmazunk. A 13 rendszer bevezető és kivezető csöveit a tartáiyedényhez vezetjük, előnyőseit sapkát; keresztül. Igen előnyősön a bevezető csövet a ehip bevezető nyilasához csatlakoztatjuk, mig a kivezető csövet a tartályhoz perisztaltikus pampáit keresztül csatlakoztatjuk,Its promised benefits are. flow is performed using peristaltic pampas and anthrax bristles. The inlet and outlet pipes of the system 13 are led to the container vessel, preferably a cap; across. Very preferably, the inlet tube is connected to the ehip inlet arrow while the outlet tube is connected to the vessel via its peristaltic pampas,
Előnyösen az eszköz a következőkben történő alkalmazásra szolgákPreferably, the device is for use in the following
- áramlási körülmények között endotbelialrs vagy epitbelialis gstiunkeiók vizsgálatára, tanulmányozására vagy 20 mérésére;- for examination, study or measurement of endothelial or epithelial gstunctions under flow conditions;
bíológiaigát-jnodellekben hatóanyag be·· vagy átjuiásának szkrinelésére.in biology digest models for screening for active substance ··· or migration.
Az eszköz elrendezése lehetővé teszi:The device layout allows you to:
- 2: vagy 3 sejbpns egyutt-tenyészíéséi.- Co-culture of 2 or 3 cell pns.
- tenyésztő közeg áramlását,- flow of culture medium,
2$ Ige·; előnyösen a modellben gátfunkesők vizsgálatára, ünmlmányoztisóra vagy tnéréséte használt sejtek tartalmaznak humán intesztinális epitbelialis, tüdő aiveolaris epirheltalis és/vagy agyi ettdothelialis sejtvonalakat. Igen előnyöse;; az eszköz; hárma együtt-íeoyésztéses véragygát-modell [..blooo-brain barrier (BBB)j tesztelésére tdk elutazzuk.2 $ Ige ·; Preferably, the cells used in the model for screening, publication, or maturation of barrier genes contain human intestinal epithelial, lung alveolar epirheltal and / or cerebral ettdothelial cell lines. Yes Advantage ;; the tool; To test the three co-cultured hematopoietic model [..blooo-brain barrier (BBB) j], tdk was traveled.
Előnyöset;, az eszközt egyszerre alkalmazzukPreferably, the device is used simultaneously
3ü · sejtek vizualizálására mikroszkópiával,3ü · visualization of cells by microscopy,
- trtmszcellüiaris elektromos eliesáilás monitorozására, ésmonitoring of truncated cell electrical discharge, and
- monoréteg-pertnenbibíás mérésére.- monolayer perturbation measurement.
Ezek az alkalmazások szintén a találmány tárgyát képezik.These applications also form part of the invention.
igét; előnyöset; a ehip részekhez, (ehípet alkotó részekhez) ímeiáior és alapanyag (szilikon elasztomer)verb; Preferably; for the ehip components, (for the constituent parts), the base material (silicone elastomer)
1:10 arányé keverékét használtuk: a PÖMb-feisztneket oxtgénpiazmával kellett kezelni; a kezeit leiso és alsó1:10 mixture was used: PÖMb feist had to be treated with oxtogen plasmas; hands on leiso and bottom
PDMS-részek adhezivek és készen állnak a model összeállttására.The PDMS parts are adhesive and ready for the model assembly.
Igen előnyöset; a porózt;s membránt a felső és alsó PDMS-részek közé illesztjük, hogy erős kötést hozzunk létre. Igen előnyösen ezt az összeillesztett szerkezete; 35-áö ’C-ort tartjuk, előnyösen 40 °C-on adott ideig, hogy jő adhéziét ériünk el, pl. legalább 2, 5, 8 vagy 10 órán keresztül,Very advantageous; the porous membrane is inserted between the upper and lower PDMS portions to form a strong bond. Very preferably this is due to its assembled structure; 35 ° C, preferably 40 ° C for a period of time to achieve good adhesion, e.g. for at least 2, 5, 8 or 10 hours,
Egy igen előnyős megvalósítási mód szerint a megtöltött öntőformákon PD.MS-t polimerizálunk, hogyIn a very preferred embodiment, the filled molds are polymerized with PD.MS to
1Í541S-54050SG1Í541S-54050SG
P1400517 elértük ;r szerkezet merevségét.P1400517 achieved r stiffness of structure.
Egy előnyös megvalósítási mód szériái a modellt mikroszkóp alatt készüjök el, A porózus membránt a felső és az alsó PDMS-részek közé illesztlók be.In a preferred embodiment, the model is made under a microscope. The porous membrane is inserted between the upper and lower PDMS portions.
A szerkezeiét az öt réteg. így a felső és sz alsó üveglap, a felső és az alsó, PDMS-fcöí készüli csatornák, 5 ess porózus membrán kötésével állítjok össze,The structure of the five layers. so I assemble the top and bottom glass panes, the top and bottom, PDMS-made channels, with 5 porous porous membranes,
DEEINÍCÍÓK.DEEINÍCÍÓK.
A csatorna leieusése három-dimenziós karma vagy üreg folyadék tárolására, abol a csatorna három méretének egyike, azaz a hossza jelentősen nagyobb (hosszabb), mint a másik két mérete (szélessége és mélységek és igy lehetővé teszi a folyadék áramoltatását a csatornában. annak hosszában vagy hossza mentőn.The channel is slid down to hold a three-dimensional karma or cavity for storing fluid, one of three dimensions of the channel, i.e., its length is significantly larger (longer) than the other two dimensions (width and depth) and thus allows fluid to flow through the channel. length of ambulance.
Egy “csatorna” a leírás szerinti értelemben a csatornát körülvevő anyagban van kialakítva, és ezáltal az a csatorna számára falakai biztosit. A csatorna falat határolják a csatornát, és a folyadék számára felszínt biztosítanak. amikor a csatorna a folyadékot tartalmazsü. vagy azztd töltött.A "channel", as used herein, is formed in the material surrounding the channel and thereby provides walls for the channel. The canal wall delimits the canal and provides a surface for the fluid. when the channel contains the liquid. or azztd spent.
Előnyösen a csatornának a leírás szerinti értelemben van olyan tála, amelyet porózus membrán alkot, és 15 olyan fala, amelyet hcrdozöréteg alkot vagy elektród, vagy a hordozóréteggcl érintkező elektród, és további falait azon réteg alkotja, amelyben a csatorna ki van alakítva.Preferably, the channel, as described herein, has a bowl formed by a porous membrane and a wall formed by a layer of electrode or electrode contacting the substrate and further walls formed by the layer in which the channel is formed.
Eszerint a megvalósítási mód szerint a csatornának párhuzamos síkok áltál alkotott falai vonnak, előnyösen lényegében derékszögű keresztmetszetű,According to this embodiment, the channel has walls formed by parallel planes, preferably of substantially rectangular cross-section,
Ebben a megvalósítási módban a csatorna „szélessége” párhuzamos azzal a réteggel, amelyben a csatom 2ü na ki van alakítva, és merőleges a csatorna tengelyére.In this embodiment, the "width" of the channel is parallel to the layer in which the channel is formed and perpendicular to the axis of the channel.
Ebben a megvalósítási módban a csatorna „mélysége” merőleges arra a rétegre, amelyben a csatorna ki van alakítva. és párhuzanms a porózus membránnal.In this embodiment, the "depth" of the channel is perpendicular to the layer in which the channel is formed. and parallels with the porous membrane.
A leírás szerinti értelemben a ..mikrocsatorna'' olyan csatornára vonatkozik, amelyet chipen vagy Isb-on-a-chip technológiában vagy mikrofhndikában alkalmaznak. Előnyösen a mikrocsatornának a maximális szélesítő sége és/vagy mélysége legfeljebb 5 mm, 4 rom, 2 mm, 1 mm, 0,S mm, 0.5 mm. 0,4 mm vagy ö,3 mm, vagy kevesebb, a leírás szerinti értelemben felső ériekként megadva.As used herein, "microchannel" refers to a channel used in chip or Isb-on-a-chip technology or microfiche. Preferably, the microchannel has a maximum width and / or depth of not more than 5 mm, 4 mm, 2 mm, 1 mm, 0, S mm, 0.5 mm. 0.4 mm or δ, 3 mm or less, as defined herein as upper males.
Bizonyos terminológiát csak a kényelem kedvéért használunk itt, és nem kívánjuk azzal korlátozni a találmány szerinti megoldást.Certain terminology is used herein for convenience only and is not intended to limit the scope of the present invention.
Például olyan szavak, mint „felső”, „alsó”, „horizontális”, „vertikális”, „szélesség” és „mélység” csupán 30 a találmány szerinti megvalósítási módokban ismertetett relatív konfigurációt írja le. Valójában az összetevők bármilyen irányban orientálódhatnak, amennyiben a folyadék tárolása, kezelése és áramoltatása biztosított. Az ilyen terminológiát ezért úgy keli tekinteni, mint ami magában foglalja a specifikus és korlátozó változatokat, hacsak ezt másképp «es» jelezzük.For example, words such as "top", "bottom", "horizontal", "vertical", "width" and "depth" describe only the relative configurations described in the embodiments of the invention. In fact, the components can be oriented in any direction as long as the fluid is stored, handled and flowed. Such terminology should therefore be construed as including specific and limiting variants, unless otherwise indicated.
A leírásban és az igénypontokban a szavak egyes számú formája, valamint a határozatlan névelő „egy”, 35 valamint amennyiben a szövegkörnyezet lehetővé teszi, a határozott névelő „a”, magukban foglalták a többes számú formákat is, hacsak a szövegkörnyezet egyértelműen irtást nem diktál.In the specification and claims, the singular form of words and the indefinite article "one", and where the context permits, the singular word "a", include the plural form unless the context clearly dictates.
A „magukban foglal” vagy a „magában foglal kifejezések jelentése „-ártalmas:” vagy „tartalmaznak”."Include" or "include" means "-harmful:" or "contain".
A „tartalmaz” kifejezést áltálában a fojtás szerint úgy keli érteni, mint ami egy nyitott listára vonatkozik, amely tartalmazhat egyéb tagokat vagy összetevőket ís, és helyettesíthető a ..magában foglal” kifejezéssel,The term "contains" is usually construed as referring to an open list that may include other members or components and may be replaced by "includes",
4;5 amennyiben az adott nyelvi változat az; megköveteli, vagy korlátozható a „lényegében tartalmaz” kifejezésre, tlMlOdŐOG4; 5 if the language version is; requires, or may be limited to, the term "substantially contains," tlMlOdOG
Pl 400,517 όPl 400,517 ό
ha az emllte-t egyéb tagok vagy komponensek lényegi fontosságúak a találmány meghatározásáltoz, vagy a találntány gyakorlatba vételéhez,if such other members or components are essential to the practice of the invention as defined or to the invention,
A „csatlakozó” vagy „kapcsolódó” általába» fizikailag és/vagy elektromosan, mechanikusan vagy kémiailag kapcsolódót vagy összekötötte! jelent., és nem zárja ki köztes elemek jelenlétét a csatlakoztatott vagy összo5 kapcsok elemek között, hacsak konkrétan a leírás másként nem fogalmaz."Connected" or "connected" in general »physically and / or electrically, mechanically or chemically bonded or connected! and does not exclude the presence of intermediate elements between connected or connected terminals, unless otherwise specifically stated in the description.
Az „érmtkezseteti'' kifejezés fizikailag és/vagy elektromosan, mechanikailag vagy kémiáikig „érintkeztetett’foei jelent és nem zárja ki a. köztes elemek jelenlétét az érialkeztetett elesnek között, hacsak a leírás kifejezetten másképpen nem fogalmaz.The term "coin-forming" refers to "physically" and / or electrically, mechanically or chemically "contacted" and does not exclude. the presence of intermediate elements between the vessel-initiated lenses, unless otherwise expressly stated in the description.
Mlkroeszköz alatt olyan eszközt értünk, amely míkrocsatontát foglal magában, tft „integrált mikroeszköz alatt olyan rnikroeszkőzt értőnk, amelynek több funkciója van.By "micro device" is meant a device that includes a microcrackon, "micro device" means a micro device that has multiple functions.
Anyag „rétege alatt három-dimenziós formában elrendezett anyagot értünk, amelynek két dimenziója (szélessége és hossza) nagyobb, példán! szigrúfikánstm nagyobb, mmt a harmadik dimenziója (mélysége). A réteg hossza és szélessége egy síkot határoznak meg, ami viszont a síkhoz képest egy irány orientációját is meghatározza (például párhuzamos vagy merőleges), „Membrán” alatt anyag olyan rétegét értjük, ami két egyéb típusú anyagot különít el, előnyösen folyadékokat. Előnyösen a membrán egyes anyagok számára permeábllis, míg mások szántára nem pertneáfeihs.By "layer of material" is meant a material arranged in a three-dimensional form with two dimensions (width and length) larger, for example! sigraphy is larger, mmt is the third dimension (depth). Layer length and width define a plane, which in turn defines a directional orientation (e.g., parallel or perpendicular) to the plane, "Membrane" being a layer of material that separates two other types of material, preferably liquids. Preferably, the membrane is permeable to some materials while others are not permeable.
Porózus membrán alatt olyan membránt, értőnk, amely egyes anyagok számára, például folyadékok szarnám permeábllis, az abban található pórusok következtében. előnyöset} a membrán síkjára lényegében merőleges pórusoknak köszönhetően. Előnyösen tt taláhnány szerinti membrán hidrofób.A porous membrane is a membrane which is understood to be a porous membrane for certain materials, such as liquids, due to its pores. advantageously due to pores which are substantially perpendicular to the plane of the membrane. Preferably, the membrane is hydrophobic.
Előnyösen a találmány szerinti membrán alkalmas sejtek rögzítésére és tenyésztésére,Preferably, the membrane of the invention is capable of fixing and growing cells,
AZ ÁB KÁR RÖVID ISMERTETÉSEBRIEF DESCRIPTION OF THE CA DAMAGE
1. Ábra (As A chlp 3-dhnenziós szerkezeti ábrája. Az elektródok és a csatlakozó vezetékek nincsenek bemutatva. (B) A berendezés keresztmetszete. A chlp tetején vao a bevezető és kivezető csöveket íattó PDMS blokk (szürke). A porózus membrán (pontozott vont:!) a PDMS-hői készült felső- és alsó csatornák között van, Ezt tt magot két, arany-elektródokkal ellátott (sárga) üveglemez (világoskék; köze helyeztük,Figure 1. (3-Dennement diagram of As A chlp. Electrodes and connecting wires are not shown. (B) Cross-section of the apparatus. The PDMS block (gray) is located on top of the chlp. The porous membrane (dotted) drawn:!) between the upper and lower channels made of PDMS heat. This core is placed in two (yellow) glass plates with light electrodes (light blue;
2. Ábra A fotyatlékkőr vázlatos rajza, A sojttcnyósztő-közegcl mozgató perisztaltikus pumpát a chlp után helyeztük.Figure 2 Schematic drawing of the photorecal cortex, The peristaltic pump moving the pulmonary suppository medium after the chlp.
3. Ábra A bélgá- modelljének jellemzése a chip-en. Caco-2 sejtek íáziskontraszi mikroszkópiás képe a 3ö tenyésztés 1-10. napján, illetve elektromos ellenállási és permeábihtásl adatok (10. nap}. Sejtínoriblögiát bkatenlnncl végzett immunfestéssel jellemeztük és konfokális mikroszkóppal tettük láthatóvá, Lépték ~ lÖÖpm ífáziskoníraszt kép), lépték 25 ptn (konfokális kép),Figure 3. Characterization of the gut model on the chip. Phase contrast microscopy of Caco-2 cells is shown in Figures 1-10 of culture 30. and electrical resistance and permeability data (day 10). Immunostaining for cellular orbital staining was performed by bkatenlnncl and visualized by a confocal microscope;
4. Ábra A tüdő epitélgát modelljének jellemzése a chip-en. A.549 sejtek, .fáziskontraszt mikroszkópiás képe a tenyésztés 1-5. napján, illetve elektromos ellenállás! és pertneáhllitásl adatok (5, nap). Sejtraorfológiát β35 katenmmd végzett: immtmíestéssel jellemeztük és konfokális mikroszkóppal tettük láthatóvá. Lépték == löö gm tfszískontmszí kép), lépték 25 nos (koníbkáhs kép).Figure 4. Characterization of the lung epithelial barrier model on the chip. A.549 cells, phase contrast microscopic image of cultures 1-5. day, or electrical resistance! and pertussis data (5, days). Cell traumatology was performed by β35 catenmmd: it was characterized by imaging and visualized by confocal microscopy. Scaled == beat gm tfhkontontszszí image), scaled to 25 nos (koníkháh image).
5. Ábra Az egyszerűsített vér-agy gát modelljének jellemzése a chtp-en. Agyból származó hCM.EC/D3 epiíélsejívooal fáziskonttaszt mikroszkópiás képe a tenyésztés 1-5. napján. Illetve elektromos ellenállási és penseáhilitási adatok (5. nap). A tenyésztés utolsó 48 órájában a hCMEC D? sejteket dinamikus körülmények (0,15 dyo) között tartottuk, Sejtmorfoíógiát B-kstonlnoel végzett immunfestéssel jellemeztük és konfokális m.i.k1154I8-34Ö5/SGFigure 5. Characterization of a simplified blood-brain barrier model on chtp. Microscopic image of the brain contour hCM.EC/D3 epilepsy phase contour from cultures 1-5. day. Also, electrical resistance and penetraic data (day 5). During the last 48 hours of breeding, hCMEC D? cells were maintained under dynamic conditions (0.15 dyo), cell morphology was characterized by B-staining immunostaining and confocal m.i.k1154I8-3450 / SG
P1400517 roszkőppal tettük láthatóvá, Jeleztük a síatisznkailag szignifikáns eltéréseket, r?<0.01 (**) és /»<0.001 {***>.P1400517 was visualized with a rumor, We noted ski-statistically significant differences, r? <0.01 (**) and / explan<0.001 {***>.
Lépték - EX? μ® (fáziskon traszt képi,, lépték - 25 um (konfokális kép),Staged - EX? μ® (phase-wise, scaled to 25 µm (confocal image),
6. Ábra A háromszoros együtt-tenyésztése» vér-agy gát modelljének jellemzése a thtp-en. Patkány-agyból származó primer pericíták és gliasejtek (1. nap) és patkányagyból származó primer endotélsejtek fázisknotS oasxt wlkroszkópjás képe a tenyésztés 1-6. napján, illetve elektromos ellenállási és petmeábi litssí adatok lő. nap). A tenyésztés utolsó 48 érájában az endotelsejteket dinamikus körülmények (0,15 dvtí) között tartottuk, Sejtmotíolögiáí β-kaíermmel {ende-téisejtek}, «.-simaizomból származó akrinnal íperíeita) és gliasejtskből származó ribriháris savasfehérjével (asznogliaj végzett imrnunfestésttel jeUmneztük és konfokális mikroszkóppal tettük láthatóvá, jeleztük a statisztikailag szignifikáns különbséget, p<ö.001 (***j. Lépték -- 100 pm (íáziskont10 : raszt kép), lépték-= 25 um (kortfókális kép),Figure 6. Characterization of a triple co-cultivation »blood brain barrier model on thtp. The phase excision of rat brain brain primary pericytes and glial cells (Day 1) and rat brain primary endothelial cells is shown in Figures 1-6. day, as well as electrical resistance and petite litsi shoot data. day). For the last 48 rounds of culture, endothelial cells were maintained under dynamic conditions (0.15 dvt) by cellular motifolysis with β-calendula (endothelial cells), transfected with glial cells, and by glial cell-derived RNA. visible, we indicated a statistically significant difference, p <δ.001 (*** j. Scale - 100 µm (IasiCont: 10 raster image), scale = 25 µm (cortical image),
A TALÁLMÁNY ELŐNYÖS MEGVALÓSÍTÁSI MÓDJAINAK RÉSZLETES LEÍRÁSA A biológiai gátak modelljeinek fontos szerepe van az élettani folyamatok, tranxzpcrimeehaniznmsok, gyógyszerszállítás és patológiai folyamatok tanulmányozásában. Csak néhány olyan, integrált biocbip létezik,DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS OF THE INVENTION Biological barrier models play an important role in the study of physiological processes, tranxcrime mechanics, drug delivery and pathological processes. There are only a few integrated biochips that
1.5 amely képes nyomonkövötnr a gátak sejitenyészeten alapuló míxielljehsek összes fontos pamméietét, A vizsgálat célja olyan, költséghasékony eszköz tervezése és gyártása volt, amely még áramló tápoitlísthan is lehetővé teszi 2 vagy 3 sejttípus együtt-tenyésztéséb a sejtek láthatóvá tételéi mikroszkópiával, sejtek közötti elektromos ellenállás valós időben történő uyomonkövetését és a permeábiiilás mérését. Olyat·, integrált amnyelektrödokkai felszerelt, p5>lí(dirnetísziloxán)-on alapuló biochip-et építettünk, amelyhez perisztaltikus pompát lobot csatlakozni? tárni. Az eszköz, szerkezete lehetővé tette a sejtszaporodás folyamatos vizuális megerősítését. Az ellesbtllás mérése négyes&l&más áramerősség-feszültséatnérési rendszeren alapult. A chipot tt bél- illetve tödöeredetö epitélgátak és vér-agy gát modelljeinek nyomonkövetésére és jellemzésére alkalmaztuk, A találmány előnyős megvalósítási módjában modelleket készítettünk etrtberi bélből származó Caco-2 sejtvonai és embert tüdőből származó A549 epitélaejtvoaal, emberi agyból származó hCMEC/D3 ephéísepvoaal, illetve primer asztrocsfákkal és agyi pencitákkal együtt-tenyésztett patkanyagybó! szátmazó primer endoléísejtek alkalmazásával Ez a háromszoros primer egyűtt-tenyészeten alapuló vér-agy gát modell volt az, amit először vizsgáltak folyadékáram alatt. Az integrált labon-s-ehíp mérőkanma minden tesztelt modell esetében alkaknasnak bizonyult ellenállás mérésére, permeábihtási tesztekre és sejtek láthatóvá tételére. Ez a verzaiilis eszköz segítheti a különféle biológiai gátak kinetikai vizsgálatát.1.5, which is capable of tracking all important pseudomeasures of barrier cell cultures based on cell culture. The aim of the study was to design and manufacture a cost-effective device that allows even 2 or 3 cell types to be co-cultured by cell-to-cell microscopy and timely monitoring of permeability. Are we building a biochip with integrated electrodes, based on p5> li (Dimethylsiloxane), to which peristaltic splendor is to be attached? explored. The device and its structure allowed continuous visual enhancement of cell proliferation. The resistance measurement was based on a quadruple & l & amp current measurement system. The chip was used to monitor and characterize models of the intestinal and peritoneum epithelial barriers and the blood-brain barrier. horsehair bucks bred with astral trees and brain pencils! using primary primary endolytic cells This triple primary co-culture based blood brain barrier model was the first to be investigated under fluid flow. The integrated labon-s-hipp measuring probe proved to be capable of measuring resistance, permeability tests, and visualization of cells in all tested models. This verbal device may assist in the kinetic study of various biological barriers.
A találmány előnyős megvaló&iíásl módjaiban, sz elektród alkalmazásakor keringetjük a tápközogeí, előnyösen egy csövezettel (például. szóik öncső vekkel) ellátott perisztaltikus pumpával.In preferred embodiments of the invention, when using an electrode, it is circulated with a peristaltic pump provided with a feed medium, preferably a tubular (e.g., so-called self-tubing).
Előnyös elrendezés tt következő; a bemeneti csövet a tárolóban lévő sejttenyésztö közegbe merítjük, és a cső bevezető csatlakozójához csatlakoztatjuk, a kimenő csövet pedig a perisztaltikus pumpán kérésztől csatlakoztatjuk s tárolóhoz. Az elrendezés előnyeit az alábbiakban Ismertetjük,Preferred arrangement tt follows; the inlet tube is submerged in a cell culture medium in the reservoir and connected to the inlet connector of the tube, and the outlet tube in the peristaltic pump is connected to the reservoir by a scavenger. The benefits of the layout are described below,
A találmány előnyös megvalósítási módjában, a rendszer elektromos ellenállását a sejttesyészet rétegére határozzuk meg, és négyelektrödos eljárással utérjük. Szokásos fészöltség-ellettáilásmérők alkalmazhatok, Példánk négyszög-impulzusokat adunk & mintára és egy elektródpárral szabályozzuk, míg egy másik elektrodpsr biztosítja az áramerősséget (például, egy visszacsatoló-hurkoít keresztül), hogy minden lel periódus alatt a transzntembrán feszüitség állandó tegyemIn a preferred embodiment of the invention, the electrical resistance of the system is determined on the cell culture layer and quadrature-controlled. Conventional inclinometry countermeasures may be used. In our example, rectangular pulses are & sampled and controlled by a pair of electrodes, while another electrodepsr provides current (e.g., through a feedback loop) so that the transmembrane voltage is constant throughout each period.
A találmány előnyös megvalósítási módjában, a tenyésztett sejtek között vannak olyanok, amelyek bio·In a preferred embodiment of the invention, the cultured cells include those that are bioavailable.
L.ÍSTI8-3405..-NGNG ..- L.ÍSTI8-3405
Pl400517 lógja! szövésben - például, állati szövetben vagy növény·' szövetben, előnyösen ííiíati szövetben, előnyösen emlöseredetö szövetben - gátakat vagy rétegeket. képeznek, Igen előnyösen, a ituktoeszközben bélből származó epltóisejtekel. tüdő alveohisokból származó epnélsejtek és/vagy agyból származó endotélsejíeket alkalmazunk,Pl400517 hangs! dams or layers in tissue, such as animal tissue or plant tissue, preferably tissue tissue, preferably mammalian tissue. They form, very preferably, gut mast cells in the itukto device. use of epithelial cells and / or brain endothelial cells from alveohis lungs,
A. nuknxtszköz alkalmas különféle sejttípusok keverékének porózus snembráaon való tenyésztésére, Így alkalmazható biológiai gámmdeltek létesítésére és folyadékára® aktit: vizsgálatéra. .Így ez egy új eszköz entfefel gatiuttkciok áramlási körülmények közötti vizsgálatára és gyógyszerek behatolásának szűrésére biológiai gátmodellekben.A. The nucleotide device is suitable for culturing a mixture of different cell types on a porous membrane. It can thus be used for the production of biological gamma melts and fluid®. Thus, it is a novel tool for testing entfefel gatiuttic functions under flow conditions and screening for drug intrusion in biological barrier models.
A kővetkező példák esak példaként szolgálnak, de a találmányt semmibet; sem korlátozzák.The following examples are provided by way of example, but the invention is not to be construed; nor limit it.
1, Anyagok és eljárások ; 7 Ezfeír m-ííóífewi1, Materials and Methods; 7 Ezfeir m-lííífewi
Az állatokkal végzett kísértetek az állatvédelemről és -jólétről szóló 1998. XXVH.1. törvény szerint folytak, Az állatkísérletekhez szükséges engedélyt a magyar állategészségügyi hatóságoktól szereztük be (engedélyszám: Χνϊ./834,·ΏίΗ2)>Animal Ghosts in Animal Protection and Welfare Act XXVH.1. Approval for animal experiments was obtained from the Hungarian veterinary authorities (permit number: Χνϊ. / 834, · ΏίΗ2)>
.(.2. .irn'ögoft. (. 2. .Irn'ögoft
Hacsak másként nem jeleztük, minőéit reagens; a Sigsna-.Aldríeh Lid,, Magyarország, cégtől szereztünk be.Unless otherwise indicated, the grade is reagent; from Sigsna-.Aldríeh Lid ,, Hungary,.
2, fefeogyáf-fÁri mfeisöí2, mfeisöí fefeogyáf-fari
A gátchip eszközt - ami kétrétegű, porózus membránon alapuló modell - polí(dimctiloxisziián) (PDNfS, Syigard 184, Dow Corning GmbH, Németország) felhasználásával készítettük. A felső panel mérete 3,7 om x 0,2 «η x 0,2 cm volt, mig az alsó 4,2 cks4,2 e.m hosszú, de a felsőével azonos átmérőjű és mélységű volt. A eihpei alkotó részekhez az imciátort és az alapanyagot (szilikon elasztomer) 1:10 arányban összekevertük és vákuumban légtelenítettük, E lépés után, az anyagot a mikroesatomák alakját meghatározó, rézből készült öntőformába öntöttük. A szerkezeti .szilárdság elérésébe??, a P.DMS-e! töltött öntőformákat fűtőlapon 75 “C-oa tartottuk 3G percig. .A modell összetételéhez a PDMS felszíneket oxigénplazmávai kellett kezelni. .A piszmatísztítót (PDC-002, Hartiek Flssnia, USA) és annak kamráját 1 Sö mtorr-al légtelet;hettük, majd az oxigén bevezetésekor tiltandó 400 nnonr nyomásra állitoítuií be. Mintán a kamrában stabilizálódott az oxigén nyomása, Ka escháeiőval (13.56 MHz, 29.6 W) 30 mp-tg oxigénplazmát indukáltunk. Az kezeit felső és alsó PDMS részek ragadósak voltak és készen álltak a modell összeszerelésére. A. felső és alsó csatornát porózus membránnal (Ít4ip, Belgium; ΡΕΪ, vastagság.· 23 ptn, pórusmérst 0.45 pút, pórussmuség 2 millió / cm) választottuk el. A modellt sztereomikroszkóp alatt készítettük, A porózus membránt óvatosan beillesztettük a felső és alsó PDMS közé, és erős kötés létesítése céljából ezt az összeállított szerkezetet 10 órán át 4ö c€-on tartotmk. A rákövetkező napon a modellhez, szilikor, tömítőanyag alkalmazásával csatlakoztattuk az elektródokat, Ellenállás méréséhez üveglapokon katódporlasztás (katodportasztö: K.975X, EMfTEC. Franciaország) alkalmazásával. 25 nm vastag, átlátszó aranyelektródokat készítettünk, övegfeiüleíen az elektródok izolált vezetöképes szigetekként történő kialakításához a katódpot lasztáshoz maszkot alkaltnazítmk. .Az aranyétekírődokhoz vezetöképes epoxicseppek (CW2400. 1TW Chemszonics, USA) alkalmazásával vékony rézhaznioktn csatlakoztattunk a 4csatotztás bement meghajtásához a volt-ohm mérőhöz. (EVŐM, World Precision Instryzncnts, USA), A be- és kivezető csöveket (PC8 csövek, Eppendorf, Németország) tartó PDMS blokkokat is phtzmakezeíéssel rögzítettük a felső üvegfolszúthcz. Ezek a részek a tápoldut tárolójaként szolgállak az. áramlásmeníes tenyésztési időszakhoz, A tápközeg szállítása céljából négy·· lyukat fúrtunk felső üveglapon keresztül. Az áramlás létesítésére perisztaltikus pumpát (Maslerflex, Cole-Eanxter) és szilikoné,söveket (1 mm belső, 3 mm külső átmérő. CáriThe barrier chip device, which is a two-layer model based on a porous membrane, was made using poly (dimethyl oxysilane) (PDNfS, Syigard 184, Dow Corning GmbH, Germany). The top panel was 3.7 um x 0.2 x 0.2 cm, while the lower panel was 4.2 cks4.2 inches long but had the same diameter and depth as the top panel. For the pre-formed components, the impregnator and the base material (silicone elastomer) were mixed in a 1:10 ratio and vented in vacuo. After step E, the material was poured into a copper mold to determine the shape of the micro-atoms. To achieve structural .stability?, P.DMS! filled molds were heated on a hot plate at 75 ° C for 3G minutes. .The PDMS surfaces had to be treated with oxygen plasma to form the model. The smear remover (PDC-002, Hartiek Flssnia, USA) and its chamber were ventilated with 1 Mtorr and then adjusted to a pressure of 400 nnr when oxygen was introduced. In the sample, the oxygen pressure in the chamber stabilized by inducing 30 sec-tg of oxygen plasma with Ka-eschelator (13.56 MHz, 29.6 W). The hand-held PDMS upper and lower parts were sticky and ready for assembly of the model. A. The upper and lower channels were separated by a porous membrane (Ít4ip, Belgium; ΡΕΪ, thickness. · 23 ptn, pore size 0.45 pore, pore size 2 million / cm). The model was made under dissecting microscope, and carefully inserted into the porous membrane between the upper and lower PDMS, and in order to establish this bond strength of the assembled structure 10 hours at 4o C. c € tartotmk. The following day, the electrodes were attached to the model using silicone sealant to measure resistance on glass sheets using cathode atomization (Cathode Port: K.975X, EMfTEC. France). Transparent gold electrodes, 25 nm thick, were made, and a mask was used to form the electrodes as isolated conductive islands on the surface of the web. Using thin conductive epoxy drops (CW2400. 1TW Chemsonics, USA), a gold-plated wire was connected to a volt-ohm meter to drive a 4-pin input. (EVÕM, World Precision Instryzncnts, USA), PDMS blocks holding inlet and outlet tubes (PC8 tubes, Eppendorf, Germany) were also fixed with phthmic treatment on the upper glass funnel. These parts serve as a storage medium for the nutrient. For flowless culture, Four ·· wells were drilled through the top glass to transport the medium. To create flow, a peristaltic pump (Maslerflex, Cole-Eanxter) and silicone tubes (1 mm internal, 3 mm external diameter. Cári
115418-34 05; SG115418-34 05; SG
P1400517P1400517
Rótt·, Németország) alkalmaztunk. A rendszer be- és kivezető csöveit a táróiópalack .kupakján át csatlakoztattuk. A bemeneti csövet a chip bevezető csatlakozójához, a kimenő csövei pedig a perisztaltikus pumpát) keresstói a tárolóhoz csatlakoztattuk. Az áramlási kísérletekhez alacsony nylrófeszültsóget (0,15 dvn) alkalmaztunk.Rótt ·, Germany). The inlet and outlet pipes of the system are connected through the .cap of the storage bottle. The input tube is connected to the inlet connector of the chip and the outlet tubes to the peristaltic pump) are connected to the reservoir. For the flow experiments, low N1 (0.15 dvn) salt was used.
Az alkalmazásra kész eszközt 70 %-os etanellal 2 órán át sterilizáltuk, steril desztillál; vízzel tízszer mostuk és a modellt ismét kezeltük oxigénplazmával, hogy a sejttenyésztö közeg kezelésének megkönnyítése cellából a természetes körülmények közölt hidrofoh PrtMS felszínt hidrofillé alakítsuk.The ready-to-use device was sterilized with 70% ethanol for 2 hours, sterile distilled; was washed ten times with water and the model was again treated with oxygen plasma to render the hydrophobic PrtMS surface, which is a natural medium, into a hydrophilic cell from the cell to facilitate the treatment of the cell culture medium.
7.4. SijaeeyCzéed:7.4. SijaeeyCzéed:
A gátchjp verzatilitásának tesztelésére, epitel- és endotélsejteket egyetlen sejtrétegben tenyésztettünk és statikus illetve áramlási körülmények között egyaránt teszteltük (az előirányzottak szerint). Mindkét kísérleti lö beállításhoz sejsekct tenyésztettünk párásítóit 3 4C-os inkubátorban 5 % COj-tartakun biztosításával.To test the viability of ghpjp, epithelial and endothelial cells were cultured in a single cell layer and tested under both static and flow conditions (as intended). For both experimental setups, cell secs were cultured in a humidifier at 4 ° C with 5% CO 2 tartrate.
./.<?./, íkpííé/.téjrek./.<?./, characters /
Két, emberi eredetű, halhatatlanná tét- seítvonalat - a béísrederü Caco-2 epi-éísej-eket és Π-es típusú emberi aiveolári» sejtekhez hasonló A549 -üdöepítél-sej teket (mindkettő az A'FCC-töí, USA, beszerezve) tenyésztettünk statikus körülmények köző-t abból a célból, hogy epitélgáíafcat .modellezünk a chip-eu. A.S49 (Oá pssszázsszúm: 25) és vinblasztuma! szelektált Caco-2 sejteket (<passzázsszűm 75; Hellinger és mtsai., 2010) tenyésztettünk patkány-farokból származó kollagénnel bevont Pctri-esészéken. 5(1% horjáeredeíü szérumaiba·· mínnái (FSS, k;ut Biotech, Németország) és 5ö pg/tnl gent&miemnel kiegészített, Dulbeceo által módosítótEagíe tápközegen (DMLM, öiochron), Németországi. Λ chip porózus membránját patkáayfarokhól származó kollagénnel vontuk be 4eC-ou, 12 órán át végzett írtkubálássai. Miután a csészékben a seittertyészeí elérte aTwo human origin, immortalizing tet seítvonalat - béísrederü like Caco-2 epi-éísej and Π-type human aiveolári »-üdöepítél cells A549 cells were cultured (both A'FCC xylitol, USA, obtained) static conditions for the purpose of modeling epithelial block in the chip-eu. A.S49 (O: Hs: 25) and its vinblast! Selected Caco-2 cells (<passage 75; Hellinger et al., 2010) were cultured on collagen-coated Pctri diets from rat tail. 5 (1% horjáeredeíü sera ·· Minna (FSS, k; supplemented ut Biotech, Germany) and 5O g / TNL gent & miemnel, extracted collagen from patkáayfarokhól módosítótEagíe medium (DMLM, öiochron), Germany Λ chip porous membrane by Dulbecco into 4 e. C-ou by incubation for 12 hours. After the spinnerets in the cups reached
21; 80%-os összefolyást, VB-Caco sejtekből (7 x lö4 sejt: chip) és AS49 sejtekből (S x iü'’ sejt / chip) szubkultúrát hoztunk létre <t chip-en Ö,ö5%-os tripszín-EDTA oldat (Fan Biotech, Németország) segítségével, Permeábiíitáss méréshez és monunjelzóshez maximális ellenállású, összefolyt rétegeket alkalmaztunk.21; 80% confluency was subcultured from VB-Caco cells (7 x 10 4 cells: chip) and AS49 cells (S x 10 'cells / chip) on <t chip, ö5% trypsin-EDTA solution (Fan Biotech, Germany), composite layers with maximum resistance were used for permeability measurement and mono-signaling.
7. <2. Thateéém/íak7. <2. Thateéém / ans
Agy; mikroerek endotéliumábói származó hCMECl).? seítvonalat [Weksler és mtsai. (2005)1 és pat25 kányagvhól származó primer endotélsejtekes I Vészeiké és mtsai, (2007, 2012); llülper mtsai. ¢2013)] alkalmaztunk a chip-en a vér-agy gát modelljeiként, HCMEOD3 sebek tenyészetét (.<. passzázsszám: 25) tenyésztettük 5 % FBS-áh Gin tahi AX (100 x, Life Technologies, USA), ilpidk tegészirövel (löőx, Life Technologies, USA), lOpg/ml aszkorbmsavval, 550 nM hidrokorttzonnal, löö pg-'ml hepazmnal, 1 rtg.ntl bázíkus íforoblaszlnövekedesi faktorral (Roche, USA), inzulinnal (2,5 gg-ml), transzferrinnel (2,5 pg-?ml.t, nátrinTUSzelenitteí (2,5 «górd), és 5öug-mi gentamícinnel kiegészített MC.DB 121 tápközegben (Htm Bse-tech). Az agyi eredetű hCMEOD.2 epitélsejteke- (6 x 10 sejt / chip) az- epitélsejtekhsz hasonlóan oíto-tuk át tt mskroeszközökre, -A petmeábillíási vizsgálatok előtt a statikus tenyészeteket 5 napig tartottuk. Áramlási vizsgálatokhoz sejteket szaporítottunk stat-kus körülmények között a 2. napig, maid a permeábiíitási vizsgálatok elölt 44 órán dinamikus körülmények között hagytuk. A tenyésztés első napjának eltelte után mindkét modellhez 10 ruM lítíumkloridot (Merck, USA) adtunk a gáttulaidonságok indukálása véged fWeksler és mtsai, (2013)j.Brain; hCMEC1) from endothelial cells of microvessels. Sequence lines [Weksler et al. (2005) 1 and pat25 Primary endothelial cell derived from kite gnaws I, Vester et al., (2007, 2012); llülper et al. ¢ 2013)] was used in the chip via the blood-brain barrier as models, HCMEOD3 wounds cultures (<of passages.. 25) were cultured in 5% FBS-AH Gln Tahi AX (100 x, Life Technologies, USA) ilpidk tegészirövel (Loox , Life Technologies, USA) lOpg / ml aszkorbmsavval 550 nM hidrokorttzonnal, Loo directory'ml hepazmnal, one feature are basic rtg.ntl íforoblaszlnövekedesi factor (Roche, USA), insulin (2.5 gg ml), transferrin (2, 5 pg ·? supplemented ml.t, nátrinTUSzelenitteí (2,5 'GORDON) and 5öug MC.DB ml of gentamicin-121 medium (.htm Bse tech.) The brain derived hCMEOD.2 epitélsejteke- (6 x 10 cells / chip ) -the epithelial cells were similarly passaged through the mice instruments, -Plastic cultures were maintained for 5 days prior to the puncture assays, and for the flow assays, cells were propagated under static conditions for 2 days, today for the permeability assay for 44 hours. The first day of breeding after the addition of 10 µM lithium chloride (Merck, USA) to the end of induction of barrier properties fWeksler et al., (2013) j.
Oarkányagyből származó primer eudotélsejteket, perícitákat és asztrogliasejtekeí izoláltunk és tenyésztettünk a korábbi vizsgálatainkban leírt eljárás szerint (Veszelka és mtsai, (20ö7, 2013)j. A háromszoros modell létesítéséhez a gátchtp felső kompaftutentumát az esöosélsejíek esetében patkányíatc-kból származó kollagénnel, a psaicítákhoz és a gliasejtekhez pedig IV. típusú kollagénnel vontuk be 4sC-on 12 órán át. Megfelelő passzázs40 számnál (2) pencitákat (1,5 x 10* sejt / chip) oltottusik a porózus membrán alsó oldalára a Nakagasva es mísat.Primary eudothelial cells, pericytes, and astroglial cells derived from oocytes were isolated and cultured according to the procedure described in our previous studies (Veszelka et al., 20-7, 2013) j. and glial cells were coated with type IV collagen for 12 hours at 4 sec C. With appropriate passage number 40 (2), pencils (1.5 x 10 * cells / chip) were inoculated on the underside of the porous membrane in Nakagasva and Misa.
115415-5405 SC115415-5405 SC
1U-4OOSI7 (2007, 2.009) által leír! eljárás szerbit. Primer glíasejleket (10' sejt / ehip) oltotíonk az alsó kamrába. közvetlenül a bevont üvegfelülefre. fatkáayagybói származó primer cadotélsejíeket {? x 10* sejt / ehip) passzázsoltouk & bevont membrán telső oldalára endotél íenyészköxeg segítségével IVeszelka és mtsai. (2007. .201.5); Nakag&wa és mtsai. (2009ij. A perrneábilírási vizsgálatok elő;t a statikus együttes tenyészeteket 6 napig tartottuk. Áramlási mérésekhez, tenyészeteket szaporítottunk statikus kőtülutények között a 4. napig, majd a permeábilitási vizsgálatok előtt 4S órás? dinamikus körülmények közős tarrmtnk. Á tenyésztés második napja után mindkét modellhez 550 nM hidrokortizont adtunk. Egy nappal a statikus permeábilitási teszt, vagy az ámmlásos vizsgálatok kezdete előtt sejtekel kezeltünk kió:Teniltioadőnoz.Ín-3’,5’-ciklikus monofoszfáttal (250 g..M, CET-cAM?) és RO |7Τ:2|ί(724-ό1 (17,§ pAis Róche) á csatiákozásők rögzítésére: és áz éllesáiás növelése céljából (Pérriére és nttsal. tóIIΐ (2005): Deli és íutsái. (2005)).1U-4OOSI7 (2007, 2009) procedure Serbian. Primary glial cells (10 'cells / ehip) were inoculated into the lower chamber. directly onto the coated glass top. primary cadothelial cells from fatkáayba {? x 10 * cells / ehip) were passaged to the outside of the coated membrane using an endothelial bundle of IVeszelka et al. (2007-201.5); Nakag & wa et al. (2009ij. Pre-permeability studies; static co-cultures were maintained for 6 days. For flow measurements, cultures were propagated between static stone grafts for up to 4 days, followed by 4S-hour dynamic conditions before permeability studies. One day prior to the start of the static permeability test or the sputum assay, cells were treated with clone: Tenylthioadone.Nin-3 ', 5'-cyclic monophosphate (250 g..M, CET-cAM?) and RO | 7Τ: 2 | ί (724-ό1 (17, § pAi s Róche)) to record battlefields: and to increase sharpening (Pérriére and nttsal. TóIIΐ (2005): Deli et al. (2005)).
7,5. Arívry árav /rPs-railre .A gátchip-en szaporított sejteknek minden nap friss tenyészközeget adtunk. Transzetidoíél (vagy -epitél) elektromos ellenállási (TEER) méréseket mindig a tápkőzeg cseréje előtt és 24 óránként minimum egyszer végeztünk. Dinamikus áramlási körülmények között nem volt szükség, tápkőzegcserére, mivel a sejtte-nyésztő tápkőzeget folyamatosan mozgattuk a a körben a ehip mögé helyezett perisztaltikus pumpával. A réteginíegrltási tesztként végzett permeábilitási mérésekre és a morfológiai jellemzéshez szükséges immunbisztokéauai jelzéssekre s vizsgálatok végén került sor.7.5. Arívry Flood / rPs-rail. Cells grown on the barrier chip were given fresh culture medium daily. Transientide (or epithelial) electrical resistance (TEER) measurements were always performed prior to media replacement and at least once every 24 hours. Under dynamic flow conditions, no nutrient exchange was required, as the cell culture nutrient was continuously moved by a peristaltic pump placed behind the ehip in the circle. The permeability measurements and the immunobistochemical markings required for morphological characterization were performed as well as at the end of the studies.
A hidrofil üátriumfluorescein (SÍ·', MW: 376 Da) és a fhtoreseeín-ízotioeiaoátíal jelzett dextrásr (ED, 4.4 k.Da) traeerek, paracelltíkiris permeábilitási jelző áramlását mértük. Az Evaus-kékkel jelzett aibunuo (F.B.A,Flow rates of hydrophilic yttrium fluorescein (Si · 1, MW: 376 Da) and dextraser (ED, 4.4 k.Da) labeled with phthoreesein-isothiooleate, were measured using a paracellular transmittance marker. The Evaus blue-labeled aibunuo (F.B.A,
MW: 67 kDa) egysoros sejtrétegen át történő permeábslitásáí is teszteltük a korábban leírtak szerint [Veszel.kn és mtsííi. (2013)1. .A vizsgálathoz, a chip alsó kompartmentnmában lévő sejöertyésztő közeget 500 pl RingerHepes oldatra (118 mM NaCl, 4.8 mM KO, 2.5 mM CaCij, 1.2 rnM SdgSCh, 5,5 mM d-glükőz, It) mM líepes, pH 7.4) változtattak. A felső komparimentumban tévő tenyészközeget 10 pg/rol SE-et vagy 100 pg/rol FD-t és 1Ó5 ng/ml Evans-kékkel jelzett 1 % boriúszérum-albundtit (BSA) szimultán tartalmazó .250 pl Ringet-I-Iepes oldatra cseréltük. A gátchip-ekeí a CO? inkubátorba (100 rpm; Biosan, Lettország) helyezed vizszintes tázőgépe:n inkubálmk (37 Ά.\ 1 h). A permeábilitási vizsgálat 20, 40 és 60. percében, az alsó krsmparíuiendnrihan lévő Rínger-Hepss oldatot 50(1 ul, friss puíferre cseréltük. A lummális és ahlummálss kompartmetitumokbói mintákat vettünk. A minták EBA-tartalmát 584 nm excstációs és 680 nm emissziós hullámhosszon mértük (Fluostar öphms, BMC Labtecfcaologies. Németország). SE és FD koncentrációkat ugyanazzal a berendezéssel mértünk (435 mn excitációs és 530 nm emissziós buHáuihosszort). Valódi permeábilitási együtthatót (PSf5.) a korábban leírtak szerint számítottunk [Hellínger és mtsai. (2012)j.MW: 67 kDa) was also tested for permeation permeability as described previously by Veszel.kn et al. (2013) first For the assay, the cell culture medium in the lower compartment of the chip was changed to 500 µl of RingerHepes solution (118 mM NaCl, 4.8 mM KO, 2.5 mM CaCl 2, 1.2 rnM SdgSCh, 5.5 mM d-glucose, It) in mM broth, pH 7.4. The supernatant medium was replaced with a .250 µl Ringet-I-Iepes solution containing 10 pg / rol SE or 100 pg / rol FD and 1 55 ng / ml Evans blue in 1% boron serum albundit (BSA). The barrier chips are CO? incubator (100 rpm; Biosan, Latvia): horizontal incubator (37 Ά. \ 1h). At 20, 40 and 60 minutes of the permeability assay, the Ringer-Hepss solution in the lower bundle was replaced with 50 (1 µl of fresh buffer). Samples were taken from luminal and ahummal compartments. The EBA content of the samples was excised at 584 nm and emitted at 680 nm. (Fluostar öphms, BMC Labtecfcaologies, Germany) SE and FD concentrations were measured using the same apparatus (435 nm excitation and 530 nm emission buf length) .The true permeability coefficient (P Sf5 .) Was calculated as described previously (Hellínger et al., 2012). j.
A gátcbip-en szaporodó épnél- és eadotéi-sejtveaalak morfológiai jellemzését [l-ksteníu - tapadó csatlakozó eitoplazmatikus hnkerichétje · irtmmrdtisziokémisi festésével végeztük. A háromszoros együtt-reayésztési modellben endotéisejteket β-kateninnel, perícaákat az o.-sima;zomból származó aktinra (ö-SM), míg az asztfoglisejteket. giiaeredetű fibrítláris savasfehérjére (OFAP) lesiettünk. A permeábilitási tesztek után, acetonmeránoí oldattal (1:1) sejteket fixáltunk (10 min), foszfáttal püffedi sóoidattal (PB$) mostunk és nem spéciitkus kötőhelyeket blokkoltunk 3 % BS.A-PBS oldattal (1 b, szobahőmérséklet). A β-katenirt elleni nyüleredetü, egér eredete anti-a-SM (Dako, USA) és egér-eredete anís-GF.AP primer .antitestekkel végzett inkubáció 12 órán át történt (4QC). Sejtmagok festéséhez sebeket •.ekebálmek C¥'3-al jelzett, eyéleredetü másodlagos antitesttel vagy Alexa Fluor 488-al (Life Technologies, USA) és 1Ϊ33343 festékkel jelzett egérelleni másodlagos antitesttelMorphological characterization of intact and adoateothelial cell veins growing on the barrier bip was done by irtmmrddischiochemical staining of the lithium-adhesive junction eitoplasmic hnkerichete. In the triple co-culture model, endothelial cells with β-catenin, pericytes to o-smooth zombie actin (δ-SM) and asthmatic cells. glial-derived fibrillar acidic protein (OFAP). Following permeability tests, cells were fixed (1 min) with acetone / saline (10: 1), washed with phosphate buffered saline (PB $), and non-specific binding sites blocked with 3% BS.A-PBS (1b, room temperature). The rabbit anti-β-katenirt murine origin in the incubation with anti-SM (Dako, USA) and mouse origin anis-GF.AP primary .antitestekkel 12 hours (4 Q C). Wounds for staining of cell nuclei • pancreas with C ¥ 3-labeled eyelid secondary antibody or Alexa Fluor 488 (Life Technologies, USA) and 1Ϊ33343-labeled mouse anti-mouse secondary antibody
115418-34Ö5/SG115418-34Ö5 / SG
F140051?F140051?
ιι (I h, szobabőntérsékle:>, Az inkubációk között a sejteket PBS-se; háromszoc mostok. SojtiertyésztŐ-menmtánokaí vágtunk ki a ebip-ből és Kluoromount-G-be {Southern Bioteoh, USA) ágyaztunk, az asztroglia.ιι (1h, room skin temperature:>, Between incubations, cells in PBS; three-fold). Bubble cultures were excised from ebip and embedded in Kluoromount-G (Southern Bioteoh, USA), the astroglia.
kivételével, ami; in sün fényképeztünk se PBS-bsn. Fesíódéseket i.,eíca TUS SPS koufokális pásztázó nsikro* : szkőppal (Eeica Miörosystetsá, Némétországl tépünk: láthatóvá,except for which; in hedgehogs we photographed on PBS-bsn. Tus SPS coufocal sweeping nsikro *: with rifle (Eeica Miörosystetsa, We ripped from Germany: visible,
AS A: A Ám tiszt.vtm zmuKsisAS A: But the cleaner is zmuKsis
Az adatokat átlag a Sí) tormájában adtunk tneg. A kezelés) csoportok közötti statisztikát szigmfikanefát kétuías ANÖVA, majd azt követően Bonfetroní- tele többszörös összehasonlítási pest hoc teszt (GrapbPad Pnsat 5.0; GrsphPad Software, USA) alkalmazásával határoztuk meg, Változások/? <0.01 (**) és p -<0.001 (***} értékeknél tekintettünk statisztikailag szignifikánsnak. Minden kísértet legalább hárem ismétlésben tőrtó :,.....ránt. A pádmzaníos minták szánra .3 volt.The data were averaged in the horseradish Ski. Treatment) group statistics were determined using sigmphinephenate binary ANOVA followed by Bonfetroniele multiple comparison pest hoc test (GrapbPad Pnsat 5.0; GrsphPad Software, USA), Changes /? Values of <0.01 (**) and p - <0.001 (***} were considered statistically significant. All ghosts replicated at least in harem repeats:, ..... The cadaveric samples were .3.
2; Eredmények es megvitatás ,? ,f .4 cáyj .szts-éKzete é.$ d.*wd$&áM2; Results and discussion,? , f .4 cell.smddddd $ d. * wd $ & ÁM
A gátelup szetkezelét öt réteg - az alsó és felső üveglemez, a PDMS-höl készüli felső és alsó csatornák, és a porózus membrán - összekötésével készítettük (í. Ábra). A szímalhto megfigyelés tehetővé tétele céljából,The barrier disassembly was performed by joining five layers, the lower and upper glass plates, the upper and lower channels for PDMS, and the porous membrane (Figure). To make heartwarming observation possible,
IS mindkét mikroszkópos tárgylemezen vékony, átlátszó aranyrétegekhöl álló eiekfródpárolcat képeztünk katódporlasztás alkalmazásával. A cbip tetején a PDMS blokkok 350 pt-es. műanyag EUR-csöveket foglaltak magukban, amelyek tárolóként szolgáltak és a be- és kivezető csövekhez voltak csatlakoztatva, A tenyésztés tnegkönynytteee végett, kereskedelmi forgalomban beszerezhető, sejttenyésztésre alkalmas, mikroporózus membránt alkalmaztunk, Alkalmazás előtt, a chsp-et metanollal mostuk és omgérmktxmával ismét kezeltük sterilizálás és &IS on both microscope slides was formed with a thin, transparent gold layer of electrophoresis using cathode spraying. At the top of the cbip, the PDMS blocks are 350 pt. included plastic EUR tubes that served as storage and were connected to the inlet and outlet tubes, commercially available microporous membrane suitable for cell culture was used for cultivation, chsp was resuspended with methanol, and &
természetes körülmények között hidrofób PDMS felszínek hidrofillé tétele céljából és a chíp-bco alkalmazott ; χ vizes közeg rázatásának -elősegítésére.natural hydrophobic PDMS to render surfaces hydrophilic and chip-bco used; χto facilitate shaking of aqueous media.
A kísérletek során, a közeget szilkoncsövekkel ellátott perisztaltikus pumpával keringettük (2, .Ábra). A bemeneti csövet a tárolóban lévő sejttenyészto közegbe merítettük, és a cső bevezető csatlakozójához csatlakoztabuk, a kimenő csövet pedig a perisztaltikus pumpán keresztül csatlakoztattuk a tárolóhoz. Ezen elrendezésnek kót előnye van, Először, a folyadék nyomása mindig alacsonyabb, mint a külső légnyomás, ezért nem volt hugyogásí vagy préselési hiba (nincs „robbanás”). Másfélöl, ez boborékcsapdaként ís működik, mivel minden buborék (például, a szivárgásokból származó buborékok) kipukkadnak ahogy a folyadék kiesepeg a kimeneti esőből, és egyik sem tudja elém; a chip-nek a tároló alján levő bevezető csövét.During the experiments, the medium was circulated with a peristaltic pump equipped with silicon tubes (Fig. 2). The inlet tube was submerged in the cell culture medium in the reservoir and connected to the inlet of the tube, and the outlet tube was connected to the reservoir via a peristaltic pump. This arrangement has the advantage of having, Firstly, the fluid pressure is always lower than the outside air pressure, so there was no bubbling or pressing error (no "explosion"). On the other hand, it also works as a bubble trap, since every bubble (for example, bubbles from leaks) bursts as the liquid drops out of the outlet rain, and none knows it to me; the lead tube of the chip at the bottom of the container.
A rendszernek a sejtréteg által meghatározott elektromos ellenállását a négy elektróddal mérjük standardThe electrical resistance of the system as determined by the cell layer is measured with four electrodes as standard
3Ö volt-ohm mérő alkalmazásával, Négj'szög-imptrízusokaí (ρρ 1SV és 12.5 Bz) adunk a mintára és egy elektrődpárral szabályozzuk, ;m'g egy másik elekttődpár egy visszaesatoló-hurkort keresztül biztosítja az áramerősséget, hogy mindet; fél periódus alatt a transztnetnbrán feszültség állandó legyen, Ezett eljárás előnye az, hogy így elkerüljük az elektródpoíarizáció miatt az ellenállásmérésben keletkező műtermékeket.Using a 3 volt volt ohm meter, rectangular impulses (ρρ 1SV and 12.5 Bz) are added to the sample and controlled by an electrode pair, while another electrode pair provides a current through a feedback loop to provide all of them; The advantage of this procedure is that it avoids artifacts generated by electrode polarization in resistance measurement.
Á<p)íé«yÁ?:ííhA <p) ie 'ya? IIH
As integrált eszközt 4 különböző biológiai gát sejftettyészeSekkel történő modellezésére alkalmaztuk.The integrated tool was used to model 4 different biological barriers with cell culture.
Emberi bél epitéliumáböl, tüdöaiveolusok epitélünnából és agyi endoféiinmből származó sejtvonalakat tesztel·· ;?őnk gát ftuíkcíóra nézve a ehip-en,Testing cell lines derived from human intestinal epithelium, pulmonary olfactory epithelium, and cerebral endophyllene · ·; We are looking at barrier function in the ehip,
A 4 modell közül a bélepíiéiiumbóí származó Caco-2 sejívonal .képezte a iegtömöttebb sejtréteget a mikmeszközben UÍEER: 578.3 -t-, 29.6 f) cnős (3. .Ábra). A tömött paraceiluláris gátat jelzett a valódiOf the 4 models, the Caco-2 cell line from intestinal epithelium formed the more solid cell layer in the microvilli: 578.3 -t, 29.6 f) (FIG. 3). The solid paracellular barrier indicated the true one
4Ő pépíteábfhítkd kttefiídíens alacsony érteké (SE; S, 55 te jífo ettVá; Fö: Ö. 3-6 x Xv em/s: EB A; ti, 1Ö χ i sféétb/s), A4Å pulp rates low for low value (SE; S, 55 teffs; Main:. 3-6 x X v / s: EB A; ti, 1Ö χ ips), A
115458-340.5/56115458-340.5 / 56
P1400517 sejtek, kocka alakúak, egyrétegűm szaporodnak és β-katenime jól festhetek. Az új eszközben a Caeo-2 sejtek morfológiája, jó ellenáilás-j és permeábilitási tulajdonságai hasonlóak a Traxtsweíi tenyésztő inzerteken kapóitP1400517 cells are cubic, monolayer multiplied and stained with β-catenime. In the new device, the morphology, good resistance, and permeability properties of Caeo-2 cells are similar to those obtained by Traxtsweil breeding inserts.
E:.2;'-á<|á£ö^tóz{Íiéllíngérés-n'iísiö, (2012); Kiss ésíútssri, (2414)].E: .2; '- á <| á £ ö ^ toz {Lílinlérés-n'iísiö, (2012); Kiss uníúsri, (2414)].
Tődőepitéltusnból származó A459 sejtvonal jói szaporodott a ehip-eo és könnyen képzett egyetlen sejtS sorból álló rétegeket (4. Ábra). Szakirodalmi adatok szerin· fNalayanila és mtsai. (2039)] ezek az egyetlen sejtsorból álló rétegek gyengébb epitélgátat biztosítottak A ctóp-lx:·? a tüdöseji-rétegek maximum 46.4 ± 17.Ö £2 cnrTEER értékei értek el, ami a Trsnswell inzertekben az .4459 monokultúrákra jellemző. SÍ7 markelre az ásla·· /6//6.4gsÁ' ifep éiték 1.45.x 1 Ö'& cm?'s, FD-te 1,34 x 10'* fetsris, míg EBA-ra ö,17x!0'í! etxtÁ volt, A gyöngébb ssncteel.laiárss csatlakozásoknak megfelelően a p-kaset-ít; festödése nem volt olyast Intenzív éppen úgy, mint ti :: í; Caeo-2 sejteknélA459 cell line from pulmonary epithelium showed good proliferation of ehipo-eo and readily formed single cell lines (Figure 4). Literature data serin · fNalayanila et al. (2039)] these single cell layers provided a weaker epithelial barrier A ctóp-lx: ·? lung cell layers reached a maximum of 46.4 ± 17.6 £ 2 cnrTEER, which is typical for .4459 monocultures in Trsnswell inserts. Ski 7 marks for ala ·· /6//6.4gsÁ 'ifep games 1.45.x 1 ′ & cm?' S, FD te 1.34 x 10 '* fetsris, and for EBA ö 17x! 0' í! etxtÁ was, in line with the weaker ssncteel.laiárss connections, p-cassette; his staining was not as intense as you :: í; Caeo-2 cells
Az emberi agyból származó hCMBC/D3 epitéísejtvonai a BBB jói jellemzett, egyszerűsített in vitás modellje [Weksler és rotsa;.. (2013)]. A miniatürizált snodellben D.3 sejtek összefolyásig szaporodtak (5. Ábra). Háromnapos statikus tenyésztési körülmények és 2 usspos dinamikus tenyésztési körülmények. kombinálása utász a TEER értékek 28.5 ± 7.2 D etsÁ-re növekedtek. Az ötnapos statikus tenyészet T.EER érseke 19,ö a 2,8 £5 cm‘ S rsek adódott, süni a dinassikus tenyészetre kapod adattal Összehasonlítva nem jelent statisztikailag szignifikáns küíörsbséaeí. As: eszközzel srsért elsersállási értékek s szakirodalosnba.n leírt tartományba esnek [Weksier és mtsai, (2013)1 Előzetes adatokat is összebasoniftottnnk a statikus és dinamikus tenyészetek között. A statikus hCMEC/D3 gátchip modellre kapott persneábilstási adatok asz SE-re 1,61 x IG^cm/s, PD-ro 1,55 x 10° csn/s. míg EBA-ra ö,51 x lö^cm/s voltuk. A dnsarsükus tenyésztésnél az SE-re ES? x lO^em/s, I'D-re 1,33 χ KP* cm/s, míg EBA-ra 0,15 x 10<; ;;r;s/» értékeket mértünk. Dinamikus tenyészetekben az ED- és EBA markerek permeábiiitása szigrsí fikátsssu: alacsonyabb volt, srsitst ugyanabban az eszközben az agyi endotélgát statikus modelljének esetében, .A jelen vizsgáié; ugyan nem India reprodukálni a Isúzósiressznek kitett hCM.EC/D3 esetében az ellenállásban bekövetkezett intenzív növekedés; [Caeuílo és mtsai. {20(?b): felen és snisas, (2012;·], de boszszabfe markertnolekuiáknál ts tracer szignifikánsan esőkként persneábsiítása volt megfigyelhető, ásni a gát szűkü25 lő itatását jelzi. Dinamikus és statlktss tenyészetekben a sejtek j;Si iestódtek β-katenínre. A sejtek snegnyűitak és az emeletéi snotsoiayerekre jellemző szoros érintkezéseket képeztek. Az; is megfigyeltük, isogy dinasrokus tesiyésztési körülmények között a sejtek az áramlás irányába orientálódtak.Human brain derived hCMBC / D3 epithelial cell lines are a well-characterized, simplified in vivo model of BBB (Weksler et al., 2013). In the miniaturized snodel, D.3 cells proliferated to confluence (Figure 5). Three days static breeding conditions and 2 usspos dynamic breeding conditions. Combined, TEER values increased to 28.5 ± 7.2 DSA. The 5-day static culture, Archbishop T.EER, yielded 19 pounds of 2.8 pounds per cm cm 2, which is not statistically significant by comparison with the data obtained for the dynamic culture. Initial values for the As: instrument-derived initialization values fall within the range described in s.sirodalosn.n. [Weksier et al., (2013) 1 Preliminary data have been combined between static and dynamic cultures. Persistence data obtained for the static hCMEC / D3 barrier chip model as SE 1.61 x 10 4 cm -1 / s, PD-ro 1.55 x 10 ° csn / s. while for EBA, δ, 51 x 10 cm / s. For dnsarsukus breeding to SE ES? x lO ^ em / s, I'D for 1.33 χ KP * cm / s, and for EBA 0.15 x 10 <; r; s / »values were measured. In dynamic cultures, the permeability of ED and EBA markers was very high, with lower permeability in the same device in the static model of the brain endothelial barrier; although India does not reproduce the intense increase in resistance in hCM.EC/D3 exposed to Stingray; [Caeullo et al. {20 (? B): half and snisas, (2012; ·], but in basophilic marker molecules, ts tracer was significantly rain-permeable, indicating digestion of the barrier. In dynamic and static cultures, the cells became silent. The cells were submerged and the floors formed close contacts typical of the snotsoyers, and it was also observed that, under dinasrotic growth conditions, the cells were oriented in the direction of flow.
Ez az első olyast vizsgálat, amely háromszoros együt;-fenyé.sztéses BBB modellen alapúiéi primer sejtek jellemzésére irányul egy miniatürizált áramlásos chip eszközben. ,A háromszoros BBB srsodellbet; a sejtszaporo30 dúst fáziskontraszt mskroszkópisivsd követtük nyomon. As: immunjelzés jellemző sejtalakot mutatott mind a háromféle sejtre. Az estdofé.l sestek elnyújtott alakúak voltak és szoros intercelluláris kapcsolatokat képeztek, A perielták és giiasejtek is fesiödtek sejtes markerfehérjétkkel (α-SM akiín és Gf AP, megfelelően). A patksínyeredeíű háromszoros együtí-senyésztéses BBB modell a chip-en gátat képzett (TEEK érték: 114,2 a 55,7 Q csr;'’). Statikus körülmények között, SP markerre 0,80 x lO'^em/s, PD-ro 0,24 x 10'* cm/s, mig EBA-ra 0,12 x ItD'cmó:This is the first study to characterize primary cells in a miniaturized flow chip device based on a triple-co-BBB model. , The triple BBB srsodellbet; cell proliferation was monitored by phase contrast microscopy. As: The immune signal showed a characteristic cell shape for all three types of cells. The estofoils were elongated and formed close intercellular connections. The peri-cells and glial cells were also infused with your cellular marker protein (α-SM yacin and Gf AP, respectively). The rat-based triple co-cultured BBB model provided a barrier on the chip (TEEK value: 114.2 at 55.7 Q csr; ''). Under static conditions, for the SP marker, 0.80 x 10 'cm / s, for PD-ro 0.24 x 10' * cm / s, and for EBA 0.12 x ItD'cm:
persnesibilitsisi értékeket kaptunk a BBB modellen. Dinasnikus tenyészetekéi tartottunk folyamatos áramlási körülnsények közöd 48 órán át, snajd permeábüítási méréseket végeztünk az egysoros sejtrétegeken. A dinamikus modell Papo értékei az SF-re 1,15 x lö°cm/s, FD-re Ö,2Ö x lö^cm/s, mig EBA-ra 03)4 x lO^cm/s értékeknek adódlak. Modellünkben az alacsony nyírási stressznek v&ló kitettség non: járt a primer endctélsejtek ellenállásának emelkedésével, a statikus és dinasnikus körülményeknél mért ’FEER értékek közök nesn volt szigntfi40 láss különbség. Áramlási körülményeket kővetően nem volt csökkenés a permeábliiíási marserek. áramlásában.we obtained persnesibilitsis values on the BBB model. Dynamic cultures were maintained under continuous flow conditions for 48 hours, and then spray permeation measurements were performed on single-row cell layers. The dynamic model Papo values for SF are 1.15 x cm -1 cm / s, for FD λ, 2 x x cm cm / s, and for EBA 03) 4 x 10 cm cm / s. In our model, exposure to low shear stress was not associated with increased resistance of primary endothelial cells, and there was no significant difference between FEER values measured under static and dynamic conditions. Following flow conditions, there was no decrease in permeability marshals. It flows.
115418-3405 SG115418-3405 SG
ΡΜ005ΠΡΜ005Π
Lényeges. hogy a pertneábáiitást koefficiens érékei alacsonyak voltak és a Transweil inzerteken a BBB modellekre korábban leírt 'tartományba estek {Ifellir-ger és tntsnt. 12012)1,Essential. that the perturbation coefficient values were low and fell within the range previously described for the BBB models in the Transweil inserts {Ifellirger et al. 12012) 1,
3, Következtetésük3, Their Conclusion
A miniatürizált chip-et sikeresen alkalmaztuk négy különböző, sejitenyészeten alapuló biológiai gát rao· 5 dellezésére. Emberi bél epitéimmábóí, tüdőalveoiusok eprtéiiumáfcól és agys eodotélintnbó! származó sejtvonalak lói szaporc-dfak az ól mikrosszkőzfccn és tcuyész inzert köníítnényethes hasonló sejtmorfoiógtát és gátfúnkeiót mutattak. A tnikroeszköz három különböző sejttípusra, illetve egy háromszoros együtt-íenyósztéses BBB n-xlell létrehozására és tesztelésére is alkalmas volt. A készülék új eszköz lehet az: endotél gátfunkcíók áramlási körülmények közötti vizsgálatára es gyógyszerek behatolásának szűrésére biológia; gáimcdellekben.The miniaturized chip was successfully used for the rao · 5 deletion of four different cell-based biological barriers. Human intestinal epithelium, lung alveoli from epithelium and brain eodothelium! cells from the derived cell lines showed proliferation of lead microspecies and insertion of similar cell morpholytes and barrier mutations. The tnikro device was also suitable for the generation and testing of three different cell types and a triple co-fibrillation BBB n-xlell. The device may be a novel device for: testing endothelial barrier functions under flow conditions and screening for drug intrusion biology; gáimcdellekben.
1Ö1o
IPARI ALKALMAZHATÓSÁGINDUSTRIAL APPLICABILITY
A biológiai gátak jelen modelljei alkalmasak az élettani folyamaiok, iranszportmeclimsizmnsok, gyógyszerszállítás és patológiai folyamatok tanulmányozására. Ez különösen alkalmas gyógyszerek behatolásának szűrésére biológiai gátmodeilekben. Az új. integrált biochip képes nyotnon követni a gátak sejttenyészeien aitt15 puíó .ntíxlelliemek összes fontos paraméterét. A tervezés és gyártás olyan, költségkateiíony eszközt eredményezett, amely lehetővé teszi az alábbi funkciókat vagy méréseket: többféle sejttípus egyűd-tetivésztését; a tenyészközeg áramlását; a sejtek: láthatóvá tételét mikroszkópiával; sejtek közötti elektromos ellenállás valós időben történő nyomonfcövetését; pernteáhthtá-si mérésekéi.The present models of biological barriers are suitable for studying physiological processes, transport meclimsisms, drug delivery, and pathological processes. This is particularly suitable for screening for drug intrusion in biological barrier models. The new. integrated biochip is able to track all important parameters of the barrier cell cultures of 15 poison. Design and production have resulted in a cost-cutting tool that enables the following functions or measurements: co-cultivation of multiple cell types; flow of culture medium; visualization of cells by microscopy; real-time monitoring of cell-to-cell electrical resistance; Pneumatic cooling measurements.
7:0 írodítimí hivatkozások;7: 0 writing references;
- Bafcand, S,. Winder. C, Khaki, C.. Hayes. A., 2000. An experírnentai. in viíro model fór dytramie direet ex* posure of humán cél Is to aírborne contatninants. Toxicol. Lett. 1.05(1), 110,- Bafcand, S,. Winder. C, Khaki, C .. Hayes. A., 2000. An experirnentai. in viíro model fór dytramie direet ex * posure of human target Is to aírborne contatninants. Toxicol. Became. 1.05 (1), 110,
- Booöt, Is., Kim, H„ 2012. Characterization of a rnicrolluidic in vltto model of the biood-braío barrier (uBBBj. Láb. Chip. 12(10},. 1784-1792.- Booöt, Is., Kim, H. "2012. Characterization of a Racial Rolling Model in the Bio-Braid Barrier (uBBBj. Foot. Chip. 12 (10}, 1784-1792).
- Bottöt, R,, Noh, S., Kim, H,, 2014. A mulöple-chaaoel, multlple-assay platform fór eharaeterizítbon of fullrangc shear stress efíects en vaseular endoiheltal ceils. Láb, Chip. 14 t i I}, 1810-1890.- Bottöt, R ,, Noh, S., Kim, H ,, 2014. The multifold-chaaoel, multlple-assay platform for the development of full-rank shear stress effects on the vascular endoiheltal ceils. Feet, Chip. 14 t i I}, 1810-1890.
- Cncnllo, L., Couraad, F.O., Weksler, 3., Romero, LA.. Hossain, M., Rapp, E., Ila.td.gre, I)., 2002. Immortal· ized humán hsain endethehal ceils and tlesv-based vaseular tnodeling: a marriage of ctmveniertee fór tátiénál ttettrovascular studies. .1. Cereb, Biood Elew Meíab. 28 (2), 312.-32.8.- Cncnllo, L., Couraad, FO, Weksler, 3., Romero, L.A. Hossain, M., Rapp, E., Ila.td.gre, I.), 2002. Immortal · ized human hsain endethehal ceils and tlesv-based vaseular tnodeling: marriage of ctmveniertee for tori ttettrovascular studies. .1. Cereb, Biodie Elew Meíab. 28 (2), 312.-32.8.
- Cwcullo. 1... Hossaln, M„ Tíemey, \V., Janigro, 15., 2013. A nw dyoatnic in vitro modular eapíllariesvenuies modular sysietn: cerebrovaaculsr physiology m abox. BMC Neurosci. 14. 18,- Cwcullo. 1 ... Hossaln, M „Tíemey, \ V., Janigro, 15, 2013. A nw dyoatnic in vitro modular eapíllariesvenuies modular sysietn: cerebrovaaculsr physiology m abox. BMC Neurosci. 14.18,
- Deli, MA., Ábrahám, C.S., Kataeka, Y., Ntwa, M . 2005. Peaneability stnthes mt in viíro biood-hram barrier utixleís: physiology, pathelngy, artd pharmacology. Cel.1. Mól. Neurebtol, 25 (I), 59*127.- Deli, MA., Abraham, C.S., Kataeka, Y., Ntwa, M. 2005. Peaneability stnthes mt in viral bio-hram barrier utixleís: physiology, pathelngy, artd pharmacology. Cel.1. Mole. Neurebtol, 25 (I), 59 * 127.
- Lköi, MA., 2009. Posenöal use ef iight jmtetion tnodalaters to reversibly npen metnbmnonx barriets atxl improve dmg deiivery, Biochim. Biephys. Aeta. 1788 (4j, 892-910,- Lköi, MA., 2009. Posenöal use ef iight jmtetion tnodalaters to reversibly npen metnbmnonx barriets atxl improve dmg deiivery, Biochim. Biephys. Aeta. 1788 (4j, 892-910,
--- Griep, L.M., Wolbers, is, de Wagen&ats B.. tér Braak, F.M.. Weksler, B.B., Romero, I.A., Couraud, F.O., Vermes, L, van dér Meer, A.D., van áen Béig, A., 2012. BBB on chip; n5.icrollnid.ic platform to mechautcally and blochetniealiy modulate blood-bram barrier tünetien. .Bsomed. Micrtxlevices, 15 (1), 145-150.--- Griep, LM, Wolbers, also, de Wagen & ats B .. square Braak, FM, Weksler, BB, Romero, IA, Couraud, FO, Vermes, L, van der Meer, AD, van en Béig, A., 2012. BBB on chip; n5.icrollnid.ic platform to mechautcally and blochetniealiy modulate blood-bram barrier symptoms. .Bsomed. Micrtxlevices, 15 (1), 145-150.
- Hcllinger. E., Bakk, M.L., Fócza, P., Tihanyt. Vttsíag, M., 2010. Drng petretrattotr model of vitrhlastme40 treated Caeis·.'?, culturcs. Kor. I. Fharm. Sok 4) t i ), 9A-löö.- Hcllinger. E., Bakk, M.L., Fócza, P., Tihany. Vttsíag, M., 2010. Drng petretrattotr model of vitrhlastme40 treated Caeis ·. '?, culturcs. Disease. I. Fharm. Sok 4) t i), 9A-hit.
115418-3405/SÖ ?Í4(K)5i?115418-3405 / SÖ? Í4 (K) 5i?
- Heüinger, E, Veszelka, S„ Tóik, A.E., Wdtór, F., Kittel, A., Bakk, M.L., Tihanyi, K., Hada, V., Nakagawa, S., Dny. T.D., Niwa, M.. Deli, M.A., Vastag, M.. 2012. Comparíson ofbraiu eapiilary endotbeiíal eell-based and epdheliai (MDCK-MDE1, Caco-2, and VB-Cacc-2) celi-based sttrrogate blood-bram barrier peneíraticn ntodels. Ear. J. Pfaartrt. Bíopbaon. 82 (2), 340-351,Heüinger, E, Veszelka, S. Tóik, A.E., Wdtór, F., Kittel, A., Bakk, M.L., Tihanyi, K., Hada, V., Nakagawa, S., Dny. TD, Niwa, M .. Deli, MA, Vastag, M .. 2012. Comparíson ofbraiu eapiilary endothelial precursor-based and epdhelis (MDCK-MDE1, Caco-2, and VB-Cacc-2) cell-based sttrrogate blood-bram barrier peneíraticn ntodels. Ear. J. Pfaartrt. Bíopbaon. 82 (2), 340-351,
- HÖlper, P., Veszslka, S„ Waher, F.R., Woiborg. H., Fallier-Beeker, P„ Piontek. 3,, Blasig, LE., Rákötnek,- Hölper, P., Veszslka, S. Waher, F.R., Woiborg. H., Fallier-Beeker, P „Piontek. 3 ,, Blasig, LE., Cancer,
M., Kugler, W„ Deli, M.A., 2013, Acute effects of sbott-ehain alkylglycerols on hlood-braín barrief properties cfcultured brain endodieliaí cella. Br. .1 Phatmacoi. 169 (7), 1.561 -73,M., Kugler, W.Deli, M.A., 2013, Acute effects of sbott-ehain alkylglycerols on hlood-brain barrief properties of a cultured brain endothelial cell. Br .1 Phatmacoi. 169 (7), 1.561 -73,
- Kiss, '..., Hellitjger, E,, Piibat, Á.M., Kittel, A., Török, Z,, Füredi, A., Szakács, G.,Veszeíka, S., Sípos, P.. Ozsvári, 3., Puskás, L.G,, Vastag, M,, Szabó-Révész, P., Deli. M.A., 2014. Sucrose esíers inere&se drug penetration, bút do nőt inhibi; p-glycoptotein in caco-2 intestinal t-.ptflte.iiai cells. .1. Pharm. Sej. ÍQ3 (10). 3fO7-3.LIU- Kiss, '..., Hellitjger, E ,, Piibat, Á.M., Kittel, A., Turkish, Z ,, Füredi, A., Cook, G., Veszeíka, S., Sípos, P. Ozsvár, 3rd, Puskás, LG ,, Thick, M ,, Szabó-Révész, P., Deli. M.A., 2014. Sucrose esíers inere & se drug penetration, but do not inhibit; p-glycoptotein in caco-2 intestinal t-.ptflte.iiai cells. .1. Pharm. Cell. Q3 (10). 3fO7-3.LIU
- Nakagawa, Deli, M.A.. Nakao, S,, Honda, M„ Hayasnt, K., Nakaoke, R„ Kataoka, Y., N'twa, M.„ 2007. Pericyíes írom brain microvessels strengtben the barrier integrity ín primary cuiíures of ra; brain esdoöseliai cells. Cell. Mól. Neurobtoí. 27 (ót, 687-94.- Nakagawa, Deli, MA. Nakao, S. ,, Honda, M. "Hayasnt, K., Nakaoke, R." Kataoka, Y., N'twa, M. "2007. Pericytes write brain microvessels in strenght of barrier integrity in primary cuiíures. of ra; brain esdoöseles cells. Cell. Mole. Neurobtoí. 27 (op., 687-94.
- Nakagawa, S., Deli, M.A., Kawagucln, EL, Sbiuűzudani, T., Shunono, T., Kittel. A., Tanaka, K., Niwa, M.,- Nakagawa, S., Deli, M.A., Kawagucln, EL, Sbiuûzudani, T., Shunono, T., Kittel. A., Tanaka, K., Niwa, M.,
2009. A new blood-brain barrier tnodel ttsmg primary· raí hsain endoíhelía; oells, perieyíes and astrocytes. Keuröchem Int. 54 (3-4), 253-.263.2009. A new blood-brain barrier tnodel ttsmg primary · raí hsain endoíhelía; oells, perieyíes and astrocytes. Keuröchem Int 54 (3-4), 253-.263.
- Naiayaada, D.D., Paieo, C,, Pulton, W.B., Sharpé, L.M., Wang, TTL, Abduílah, P., 2009. .An opes-access tnlcrofinidic módéi fór Itsng-specifsc ínuctiona! síudies at an ait-liqusd ínterface Biemed. Microtlevices, 11 (5), 1081-1089.- Naiayaada, D.D., Paieo, C ,, Pulton, W.B., Sharpé, L.M., Wang, TTL, Abduílah, P., 2009.An tnlcrofinidic modes of opes-access for itsng -specific insertion! skiing at an ait-liqusd interface Biemed. Microtlevices, 11 (5), 1081-1089.
- Perriére, N., Demeuse, P., Gtucia, E,, Regina, A., Debray, M., Andreux, 3.P., Couvreur, P.. Scherrmanu, LM., Temsstnani, .1,, Cotuaud, P.O., Deli, M.A., Roux, E., 2005. Puromycm-based purifleadon ofrat brain eapiilary endothelía: cél; cuiíures. Fííeci on tne expression of blood-brain barrier-speciík properíses. .1, Nenrochem. 93 (2), 279-89,- Perriére, N., Demeuse, P., Gtucia, E ,, Regina, A., Debray, M., Andreux, 3.P., Couvreur, P. .. Scherrmanu, L.M., Temsstnani, .1 ,, Cotuaud , PO, Deli, MA, Roux, E., 2005. Puromycm-based purifleadon ofrat brain eapiilary endothelium: target; cuiíures. The expression is a proper expression of the blood-brain barrier specification. .1, Nenrochem. 93 (2), 279-89,
- Prabbakarp&udsan, B., Shert, M.C., Ntcfaols, LEL, Mills, LR„ Sidoryk-Wegrzynowicz, AL, Áschner, M.,- Prabbakarp & udsan, B., Shert, M.C., Ntcfaols, LEL, Mills, LR Sidoryk-Wegrzynowicz, AL, Aschner, M.,
Pánt, K., 2013. SyM-BBB: a ancFofiusdsc Blood Brata Barrier módéi. Láb. Chtp. 13 (6), 1Ö93-I1.0LPan, K., 2013. SyM-BBB: Blood Brata Barrier Methods of AncFofiusdsc. Foot. CHTP. 13 (6), 1093-101.0L
- Tóth, A.. Veszeíka, S,. Nakagawa S, Niwa M, Deli MA. 2011. Patentod in vh.ro blood-brain barrier models in CMS drug diseovery. Recent Pat DNS Dm» Diseov. May 1:6(2): 107-18- Tóth, A .. Veszeíka, S ,. Nakagawa S, Niwa M, Deli MA. 2011. Patents in vh.ro blood-brain barrier models in CMS drug diseovery. Recent Pat DNS Dm »Diseov. May 1: 6 (2): 107-18
- Veszelka, S,, Pásztói, M., Farkas, Á.E., Krizbai, J.Á., Ngo, T.K., Niwa, M,, Abrahám, C.S.. Deli, M.A.,- Veszelka, S ,, Pásztói, M., Farkas, Á.E., Krizbai, J.A., Ngo, T.K., Niwa, M ,, Abraham, C.S .. Deli, M.A.,
2007. Pontosan polysui faié proíects brain endolhelial cells againsi baoterial iipopofysacoharide-indueed dsmages, Neuroebent, lat 50 (,i), 219-28.2007. Exactly polysui faii protects brain endolhelial cells againsi baoterial lipopofysacoharide-induced dsmages, Neuroebent, lat 50 (, i), 219-28.
- Veszdka, $., Tóth, A.E., Walter, F.R., Datki, Z„ Mózes, E., Fűiöp, L.. Bozsó, Z, lieíltnger, E.. Vastag, M„ Orsc-lhs, Fi, Környei, Z.> Penke, B.. Deli, M.A., 2013. Docosanexaenoic aeid reáuces amyloíd-β indueed loxieity in cella cf the seprővascular tipli. í. A1zheimers.: Dís, 36 (3), 4S 7-50 L- Veszdka, $., Tóth, AE, Walter, FR, Datki, Z „Moses, E., Füiöp, L .. Bozsó, Z, lieíltnger, E .. Thick, M„ Orsc-lhs, Fi, Környei, Z .> Penke, B .. Deli, MA, 2013. Docosanexaenoic aeid reáuces amyloid-β induced loxieity in cell cf the seprővascular duct. f. A1zheimers. : Dís, 36 (3), 4S 7-50 L
Weksler. B.B., Subileatt, E. A., Petriere, N., Charneau, E,, HoIIov'ay, K., Leveque, M.. l'ricoíre-Leignel, H.,Weksler. B.B., Subileatt, E.A., Petriere, N., Charneau, E ,, HoIIov'ay, K., Leveque, M .. l'ricoir-Leignel, H.,
Mjcotra, A., Bourdouloas, S„ i'urorvskí, P., Male, D.K.,, Roux, F., Gíeenweod, J., Rontoro. LA., Coutaad, P.O., 2ÖÖ5. Blood-brain barrier-speclfte properties el: a humán aduit brain endoíhelisi cell Itne. FASEB L 19 (13), 1S72-I874.Mjcotra, A., Bourdouloas, S.I.urorvski, P., Male, D.K., Roux, F., Geeneenod, J., Rontoro. LA., Coutaad, P.O., 2ÖÖ5. Blood-brain barrier-speclfte properties el: the human aduit brain endoichel cell Itne. FASEB L 19 (13), 1S72-I874.
- Weksler, B.? Romero, LA., Couraud, P.Ö.. 2013. The hCM.ELZD3 cell hn.e as a tnodel of tire hunra» blood hfut» barrier. Fiuids, Barriers. CMS. Lö (1),16:- Weksler, B. ? Romero, LA., Couraud, P.Ö .. 2013. The hCM.ELZD3 cell hn.e as a tnodel of tire hunra »blood hfut» barrier. Fiuids, Barriers. CMS. Lö (1), 16:
1154 lh-3405/SG1154 lh-3405 / SG
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU1400517A HU230797B1 (en) | 2014-10-31 | 2014-10-31 | Integrated microdevice for cell membrane models |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU1400517A HU230797B1 (en) | 2014-10-31 | 2014-10-31 | Integrated microdevice for cell membrane models |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP1400517A2 HUP1400517A2 (en) | 2016-05-30 |
| HU230797B1 true HU230797B1 (en) | 2018-05-28 |
Family
ID=89991632
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU1400517A HU230797B1 (en) | 2014-10-31 | 2014-10-31 | Integrated microdevice for cell membrane models |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| HU (1) | HU230797B1 (en) |
-
2014
- 2014-10-31 HU HU1400517A patent/HU230797B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUP1400517A2 (en) | 2016-05-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Musah et al. | Mature induced-pluripotent-stem-cell-derived human podocytes reconstitute kidney glomerular-capillary-wall function on a chip | |
| Zheng et al. | Organ‐on‐a‐Chip Systems: microengineering to biomimic living systems | |
| Kang et al. | All‐inkjet‐printed 3D alveolar barrier model with physiologically relevant microarchitecture | |
| US20240076595A1 (en) | Devices for simulating a function of a tissue and methods of use and manufacturing thereof | |
| CN110997900B (en) | Microfluidic platform for rapid generation of organoids/spheroids for compound screening | |
| Zakharova et al. | Multiplexed blood–brain barrier organ-on-chip | |
| Stucki et al. | A lung-on-a-chip array with an integrated bio-inspired respiration mechanism | |
| Sellgren et al. | A biomimetic multicellular model of the airways using primary human cells | |
| JP2019213562A5 (en) | ||
| Falanga et al. | Shuttle‐mediated nanoparticle transport across an in vitro brain endothelium under flow conditions | |
| GB2609854A (en) | Stem Cell-Based Lung-On-Chip Models | |
| EP2639293A1 (en) | Cell culture chamber, method for producing same, tissue model using cell culture chamber, and method for producing same | |
| KR20110003526A (en) | Three-dimensional microfluidic platforms and methods of use thereof | |
| US11066630B2 (en) | Device and method for analysis of tissue constructs | |
| CA3066616C (en) | Blood vessel model | |
| WO2018102201A1 (en) | In vitro epithelial models comprising lamina propria-derived cells | |
| Lee et al. | Cellular hydrogel biopaper for patterned 3D cell culture and modular tissue reconstruction | |
| CN104703698A (en) | Cell culture | |
| Rahimi et al. | A paper-based in vitro model for on-chip investigation of the human respiratory system | |
| Messina et al. | Self‐assembly of tissue spheroids on polymeric membranes | |
| US9644177B2 (en) | Extracellular matrix films and methods of making and using same | |
| US20220228108A1 (en) | Cell culture base material and cell culture base material with cells | |
| Bol et al. | A microdevice for parallelized pulmonary permeability studies | |
| US20200190456A1 (en) | Native Extracellular Matrix-Derived Membrane Inserts for Organs-On-Chips, Multilayer Microfluidics Microdevices, Bioreactors, Tissue Culture Inserts, and Two-dimensional and Three-dimensional Cell Culture Systems | |
| HU230797B1 (en) | Integrated microdevice for cell membrane models |