HU226993B1 - Novel active carrier and process for immobilization of combinatorial compounds and compound libraries - Google Patents
Novel active carrier and process for immobilization of combinatorial compounds and compound libraries Download PDFInfo
- Publication number
- HU226993B1 HU226993B1 HU0201091A HUP0201091A HU226993B1 HU 226993 B1 HU226993 B1 HU 226993B1 HU 0201091 A HU0201091 A HU 0201091A HU P0201091 A HUP0201091 A HU P0201091A HU 226993 B1 HU226993 B1 HU 226993B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- solid support
- protein
- drug
- group
- complexes
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 62
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 26
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 18
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 51
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 32
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 28
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 24
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 238000002493 microarray Methods 0.000 claims abstract description 22
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 claims abstract description 7
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 6
- NHBRUUFBSBSTHM-UHFFFAOYSA-N n'-[2-(3-trimethoxysilylpropylamino)ethyl]ethane-1,2-diamine Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCNCCNCCN NHBRUUFBSBSTHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- JHWGFJBTMHEZME-UHFFFAOYSA-N 4-prop-2-enoyloxybutyl prop-2-enoate Chemical compound C=CC(=O)OCCCCOC(=O)C=C JHWGFJBTMHEZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 125000003107 substituted aryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 29
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 28
- 238000003491 array Methods 0.000 claims description 11
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 10
- -1 polypropylene Polymers 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 7
- HFBMWMNUJJDEQZ-UHFFFAOYSA-N acryloyl chloride Chemical compound ClC(=O)C=C HFBMWMNUJJDEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 5
- SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(oxiran-2-ylmethoxy)butoxymethyl]oxirane Chemical compound C1OC1COCCCCOCC1CO1 SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 claims description 4
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 claims description 4
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 claims description 4
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 3
- 238000005530 etching Methods 0.000 claims description 3
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 3
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 3
- 101710100170 Unknown protein Proteins 0.000 claims description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 claims 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 claims 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 claims 1
- 150000002924 oxiranes Chemical class 0.000 claims 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 abstract description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 5
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 abstract description 5
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 abstract description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 2
- WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N butane-1,4-diol Chemical compound OCCCCO WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 abstract 1
- 125000003647 acryloyl group Chemical group O=C([*])C([H])=C([H])[H] 0.000 abstract 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 abstract 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 abstract 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 abstract 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 150000002118 epoxides Chemical group 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000005660 hydrophilic surface Effects 0.000 description 4
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005441 aurora Substances 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 3
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 2
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- FRTGEIHSCHXMTI-UHFFFAOYSA-N dimethyl octanediimidate Chemical compound COC(=N)CCCCCCC(=N)OC FRTGEIHSCHXMTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 description 2
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- WPANETAWYGDRLL-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzenecarboximidamide Chemical compound NC(=N)C1=CC=C(N)C=C1 WPANETAWYGDRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000009141 biological interaction Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 238000003340 combinatorial analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- GYZLOYUZLJXAJU-UHFFFAOYSA-N diglycidyl ether Chemical compound C1OC1COCC1CO1 GYZLOYUZLJXAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 238000005246 galvanizing Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012775 microarray technology Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 1
- 230000008380 pattern binding Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 238000000575 proteomic method Methods 0.000 description 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- TXDNPSYEJHXKMK-UHFFFAOYSA-N sulfanylsilane Chemical compound S[SiH3] TXDNPSYEJHXKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000000539 two dimensional gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
A találmány tárgya egyrészt új szintetikus eljárás gyógyszer, illetve gyógyszerjelölt és általában biológiailag aktív vegyületek felületi immobilizálására olyan módon, hogy azok a biológiai aktivitásukat és a kötőhely-szelektivitásukat megtartsák.
Találmányunk révén a fenti célkitűzést úgy oldjuk meg, hogy egy olyan új szilárd hordozó, illetve hordozócsoport szintézisét ismertetjük, amely alkalmas gyógyszer és gyógyszerjelölt kismolekulák megkötésére - szakszóval immobilizációjára vagy kikötésére (angolul: immobilization) vagy kihorgonyzására (angolul: anchoring) - mégpedig olyan reaktív csoportokon keresztül, amelyek elágazó szerkezetű összekötő molekulákon (linkereken) helyezkednek el.
A találmány szerinti új hordozók képesek kovalensen kikötni a linkerrel nem rendelkező kismolekulákat és/vagy olyan vegyületeket, amelyek különböző hosszúságú, különböző reagálandó csoportokat hordozó linkereket tartalmaznak. Az így elkészített szilárd hordozók felhasználhatóak különböző kismolekula-síkmátrixok készítésére, és azok molekuláris agrokémiai, biológiai, biotechnológiai, farmakológiai alkalmazásaira.
Ismert, hogy a humán genom feltérképezése eredményeként több ezer új fehérje vár azonosításra. A fehérjék potenciális gyógyszertargetként való azonosítása az elkövetkező évek legfontosabb gyógyszerkutatási kihívása. Számos módszert dolgoztak ki, amelyek a genom által azonosított új fehérjék egy-egy betegségállapottal való kapcsolatát állapítják meg. Ilyenek például az összehasonlító 2D elektroforézis (A. Görg, Proteomics, 2000, July, 3), illetve az izotópos jelölés tömegspektrometriával kombinált módszerei. (S. P. Gygi etal, Proteomics, 2000, July, 31).
A fenti módszerek számos esetben nem vezetnek eredményre, például kis koncentrációban jelen lévő fehérjék esetén, valamint a nagyszámú fehérje együttes elválasztása, detektálása és felbontóképessége is nehezen megoldható. Ismert továbbá az is, hogy nem elegendő a betegségállapottal kapcsolatba hozható fehérjét azonosítani, hanem annak funkcióját befolyásolni képes kis molekulák felfedezése a gyógyszerkutatás valódi célja.
A kismolekulák kötődése egy adott fehérjéhez, egyben annak gyógyszer-célmolekulává válását (druggability) is validálja azáltal, hogy kismolekula egyáltalán képes kötődni hozzá, továbbá kiegészítő expressziós vizsgálatokkal bizonyítani lehet, vajon a kötődés útján a betegségállapot befolyásolható-e, ami a fehérje funkcióját is igazolja (G. Dormán, et al. Current Drug Discovery, 2001, 1,21-24).
A kombinatorikus kémia kifejlődésével, ahol az építőköveket azok minden lehetséges kombinációjában csatlakoztatjuk egy központi szerkezeti elemhez, lehetőség nyílt nagyszámú új kismolekula, illetve a korábban ismert hatásos gyógyszermolekulák nagyszámú analógjainak előállítására.
A fenti felismerések eredményeképpen új, illetve már ismert fehérjék hatékony azonosítása, osztályokba sorolása - a nagyszámú kismolekulával való affinitásalapú kölcsönhatásán keresztül - a kutatások előterébe került. Mivel a módszer elsősorban az újonnan felfedezett gének által kódolt fehérjék azonosítását, illetve funkcionális validálását többnyire szintetikusan előállított szerves kismolekulák alkalmazásával végzik, ezt az új megközelítést kémiai genomikának, illetve proteomikának nevezték.
Az affinitásalapú módszerek - melyek fehérjék izolálására és azonosítására alkalmasak - már korábban alkalmazást nyertek kismolekulák cellulózhoz, illetve különböző polimerekhez való kikötése által. Az így nyert affinitásoszlopokon keresztül áramoltatva, a fehérjekeveréket tartalmazó kismolekulák - kötődési erősségüktől függően - különböző sebességgel elkülönülve távoztak az oszlopról, elkülönítve a nem vagy alig kötődő vegyületektől.
A módszer tömegesítésére, párhuzamosítására számos kísérlet történt, mégis ezek a módszerek csak kismértékű fejlődést engedtek meg; az összefoglaló néven affinitáskromatográfiának nevezett technika hosszadalmas, a kismolekulák anyagigénye jelentős és párhuzamos alkalmazásuk nehezen megvalósítható.
Forradalmi változást a kismolekulák mikroméretű lapocskákhoz nagy sűrűségű kikötése jelentett, amelyeken a molekulák egy síkmátrix formájában helyezkednek el a célnak megfelelő molekulaelrendezésben. Az angol nevezéktan szerint ezeket a mikroméretű síkmátrixhordozókat „microarray”-nek nevezik; találmányunk ismertetésében a „mikroarray” elnevezést alkalmazzuk, míg a kismolekulák síkmátrixszerű elrendezését, az angol nevezéktant követve és megfelelően szemléletes magyar szó hiányában, „array”-nek nevezzük a leírás további részében. A mikroarray előnyös tulajdonsága a klasszikus nagykapacitású biológiai szűréssel szemben az, hogy mivel a hordozófelületén a kikötött vegyületek egymás mellett helyezkednek el, így a nagyszámú mérés teljesen azonos körülmények közt történik, így az összehasonlíthatóság sokkal pontosabb. A mikroarray további előnye, hogy alkalmazásával nagy kapacitású robotizált technológia különösen előnyösen alkalmazható.
Cellulózra, illetve üvegre való kikötés technológiáját először DNS-csipek előállítására fejlesztették ki és elterjedten alkalmazták hibridizációs vizsgálatokban. A DNS-molekulák, illetve oligonukleotidok kikötésére számos kémiai eljárást dolgoztak ki (S. L. Beaucage, Current Med. Chem., 2001, 8, 10, 1210). A fenti technológia nagyban hozzájárult a humán génállomány meghatározásának a tervezettnél gyorsabb befejezéséhez. Későbbiekben a fehérje-fehérje interakciók, illetve expressziós szintek meghatározására fehérjemikroarrayk kifejlesztése is megkezdődött (Β. B. Haab, Curr. Op. Drug Disc. Dev., 2001,116-123).
Beier M. és Hoheisel J. D. [Nucleic Acids Rés. 27(9) 1970-1977 (1999)] szilárd hordozók derivatizálását ismertetik kovalens kötés létrehozásához DNS-arrayn vagy DNS-mikrocsipen, melynek során egy elágazó szerkezetű kapcsolómolekulával megnövelik a hordozó felszínét. Ennek a linkernek a megszerkesztése egy négylépéses reakciót igényel. További feladat, hogy a linkért tartalmazó, funkcionalizált felszínt az im2
HU 226 993 Β1 mobilizálás előtt még egy aktiváló reagenssel, mint például PDITC-vel (fenil-diizotiocianáttal), DSC-vel (diszukcinimidil-karbonáttal) vagy DMS-sel (dimetilszuberimidáttal) aktiválni kell. Bár különböző DNS-molekulák hatékonyan kapcsolhatók az így kialakított felülethez, a kötések stabilitása nagyon eltérő, és a különbségekből arra lehetett következtetni, hogy csak gyenge kovalens kapcsolat jön létre egy DNS-molekula belső aminocsoportjának valamelyike útján. Ezért az adott felszín valószínűleg csak kis hatásfokkal tudna kismolekulákat megkötni.
A kismolekulák kikötésére csak a legutóbbi időkben tettek kísérletet. Ezek a megoldások eltérő kémiai mechanizmusokon, kikötési stratégiákon alapulnak. A mintamolekulák kikötése különböző erősségű, stabilitású lehet. A legáltalánosabban, üvegből készült mikroszkóplemezeket használnak kémia molekulakönyvtárak kihorgonyzására, a DNS-mikroarrayk analógiájára kémiai arrayk létrehozására. Az egyik ilyen kikötési eljárást a német Graffinity cég kutatói valósították meg, akik aranyfelszínre tiolcsoportokon át kötötték ki a szerves molekulákat (lásd: DE 100 27 397 számú német szabadalmi közzétételi irat).
A kutatók többféle kémiai reagenst dolgoztak ki, melyek képesek kismolekulák kikötésére (lásd például a JP 3 032 740 számú japán szabadalmi leírást vagy a WO-01/01143 nemzetközi publikációs számú, USAból származó találmányi bejelentést). Jelenleg főként kémiailag módosított mikroszkóplemezeket használnak kémiai arrayk hibridizációjához. Ahhoz, hogy lehetővé tegyék a kismolekulák hordozóhoz való kötését, a vegyületeket általában funkciós csoporttal látják el. így módosíthatók a kikötendő molekulák egy terminális tiol-, amino-, vagy karboxilcsoporttal egy linker molekulán keresztül. Pontosabban egy tiol-, amino-, vagy karboxilcsoport hozzáadása a kikötendő molekulához lehetővé teszi például, hogy a kismolekula egy diszulfid, maleimid-, amino-, karboxi-, észter-, epoxi-, bróm-ciánvagy aldehidfunkciós csoportokat tartalmazó hordozóra kötődjön. A kötődés a kismolekula és a hordozó között tioéter-, észter-, amid- vagy aminkötések kialakulásával jön létre. így például az USA-beli 5 919 523 számú szabadalmi leírásban peptidek, oligonukleotidok vagy kis molekulasúlyú szerves molekulák, valamint ligand arrayk szilárd fázisú szintézisben felhasználható polimerrel vagy glikánnal bevont szilárd hordozó előállítását ismertetik, ahol a polimer amin-, karboxilés/vagy hidroxilfunkciós csoportokat tartalmaz.
A legtöbb olyan eljárás - amely merkapto-szilánnal vagy epoxi-szilánnal bevont szilanizált szilárd hordozót használ (lásd például: az USA-beli 5 919 626 számú szabadalmi leírást) - hátránya az, hogy az ezzel a módszerrel kikötött molekulák a szilárd hordozó felszínéhez közel helyezkednek el, így a tesztelni kívánt, kölcsönható próbák számára nehezen hozzáférhetők és ennek következtében a specifikus kötések száma lecsökkenhet.
Emellett meg kell említeni azt a módszert, ahol a kombinatorikus molekulatár szintézisét eleve egy polipropilénfelület felszínen végezték el olyan módon, hogy a molekulák térbeli elhelyezkedése ismert volt. (D. Scharn et al., J. Comb. Chem., 2000, 2, 361), majd ezt követően alkalmazták biológiai szűrésben.
A kombinatorikus kémia osztásos-keveréses módszerével (A. Furka et al., Int. J. Pept. Protein Rés, 1991, 37, 478) igen nagyszámú vegyület állítható elő keverékben, majd ezeket egy „mikroprinting”-nek nevezett technikával hatékonyan lehet üvegfelületre kikötni tiolreaktív horganyzó csoportok (maleimid) felhasználásával (G. MacBeath, és munkatársai, J. Am. Chem. Soc., 1999, 121,7967). A módszer alkalmas ugyan nagyszámú molekula fehérjével való interakciójának meghatározására, de a vegyületek kikötése véletlenszerűen történik, így az adott pozícióban lévő molekulák szerkezete csak bonyolult módon határozható meg.
A kombinatorikus kémiai mikroarrayk kialakítása olyan szilárd hordozók alkalmazásán alapszik, amelyek képesek különböző kismolekulák kihorgonyzására. A kihorgonyzott szintetikus vegyületeket számos előnyös módon lehet alkalmazni és a kombinatorikus kémiai mikroarrayk különösen fontos eszközei lehetnek a különböző molekuláris biológiai és gyógyszerfejlesztési kutatásoknak.
Ezek alkalmazási területe kiterjedhet ismert gyógyszermolekulák újonnan felfedezett fehérjékkel való kölcsönhatásának meghatározására, és ezáltal az új fehérjék osztályba sorolására. Ez esetben a biológiailag kötődő fehérjéket a nem kötődőktől való elválasztása után eltávolítjuk a lapról, és megfelelő módszerrel azonosítjuk (MS-MS; lásd: M. J. Dutt and K. H. Lee. Proteomic analysis, Current Opinion in Biotechnology, 2000, 11, 176-179).
A módszer alkalmas nagy kapacitású biológiai szűrésre is, olyan módon, hogy a hatásos vegyületek fluoreszcens emissziót mutatnak az adott pozícióban, és mivel a mikroarray pozíciós térképe rendelkezésre áll, az aktív vegyület szerkezete azonnal meghatározható.
Az eddig ismertetett eljárások számos speciális módszereivel és korlátozó tényezőivel ellentétben olyan előnyös megoldás vált szükségessé, amely technikailag egyszerű és az alkalmazott felületre való kikötés kémiai megoldása a legszélesebb körben kompatibilis a biológiailag aktív szerves vegyületek (például gyógyszer, illetve gyógyszer jellegű vegyületek) tulajdonságaival, ezért a különböző biológiai kölcsönhatásokon alapuló technikákban, így fehérjedetektálásban, potenciálisan biológiai aktivitást mutató (például gyógyszerjelölt) molekulák azonosításában használható mikroarray előállítását teszi lehetővé. Az alkalmazás szempontjából kívánatos, hogy az adott kémiai horganyzócsoport közvetlenül is alkalmas legyen a szerves molekulák kikötésére, nemcsak speciális oldalláncok terminális funkciós csoportján keresztül.
A fentiek alapján a találmány tárgya eljárás gyógyszermolekulák kovalens kötéssel való megkötésére alkalmas aktív szilárd hordozó előállítására, olyan módon, hogy
a) egy, előnyösen erősen lúgos vagy savas közegben végzett maratással előkészített szilárd hordozót egy poliamin-funkcionalizált alkoxi-szilán-származék3
HU 226 993 Β1 kai, előnyösen 3-[2-(2-amino-etil-amino)-etil-aminojpropil-trimetoxi-szilánnal reagáltatunk, majd a kapott terméket mossuk és szárítjuk és b1) az a) pont szerinti eljárással készített hordozót egy (I) általános képletű
- ahol a képletben
Z jelentése: = kötés vagy -CO vagy -CNR1 csoport és R1 csoport alkil-, aralkil- vagy árucsoportot jelent;
B jelentése: = kötés vagy -(CH2)n- vagy —(CH2)n—0—(CH2)n— vagy O-(CH2)n- vagy -NH-(CH2)n- csoport;
A jelentése: = elágazó vagy el nem ágazó 1-5 szénatomszámú alkil- vagy helyettesített aril- vagy aralkilcsoport;
D jelentése: halogén vagy -O-A csoport és n jelentése 0, 1, 2,... egész szám - bifunkcionális reagenssel, előnyösen akriloil-kloriddal vagy 1,4butándiol-diakriláttal szervetlen vagy szerves savmegkötő jelenlétében reagáltatjuk, vagy b2) az a) pontban leírt eljárással előkészített hordozót egy olyan bifunkcionális reagenssel, előnyösen 1,4butándiol-diglicidil-éterrel vagy epiklór-hidrinnel reagáltatjuk szervetlen vagy szerves savmegkötő jelenlétében, amely epoxid terminális csoportot, valamint egy aminocsoport reaktív molekularészt tartalmaz.
A találmány szerinti eljárás egy előnyös változatában szilárd hordozóként üveg- vagy polisztirol- vagy polipropilénlemezeket, előnyösen üveg mikroszkóplemezeket alkalmazunk.
A találmány továbbá az aktív szilárd hordozó, melyet a fenti eljárásváltozatok valamelyikével állítjuk elő.
A találmány tárgyát képezi továbbá a fenti aktív szilárd hordozó alkalmazása kémiai arrayk, kombinatorikus kémiai mikroarrayk előállítására.
A találmány tárgya továbbá eljárás 1500 Da alatti, előnyösen 250-750 Da méretű, úgynevezett kis molekulatömegű szerves vegyületek immobilizálására, amely abban áll, hogy a fentiekben definiált aktív szilárd hordozóra egy módosítatlan gyógyszer vagy gyógyszerjelölt molekulát, előnyösen mikroméretű robotizált kapcsolási technikával, a gyógyszer vagy gyógyszerjelölt molekula megfelelő funkciós csoportjai addicionálásával rögzítünk.
A találmány egy előnyös változatában a fenti aktív szilárd hordozó felhasználásával és a fenti eljárással előállított mikroarrayt agrokémiai, biotechnológiai, biológiai vagy gyógyszerkémiai vizsgálat gyors elvégzésére, előnyösen kismolekula-fehérje kölcsönhatások tanulmányozására alkalmazzuk.
A találmány tárgya továbbá a fenti aktív szilárd hordozó felhasználásával és a fenti eljárással előállított mikroarray alkalmazása új fehérjék azonosítására vagy fehérjék „gyógyszer-szerelhetőségének’’ (angolul druggability, azaz ligandum- vagy szubsztrátkötő képességének) gyors analízisére vagy másodlagos kötőhelyek meghatározására vagy kis molekulájú ligandumot kötő tulajdonsággal rendelkező nukleinsavak (RNS, DNS) azonosítására vagy fehérje-fehérje komplexek azonosítására vagy fehérje-DNS komplexek azonosítására vagyfehérje-lipid komplexek azonosítására vagy fehérje-nukleotid komplexek azonosítására vagy fehérjeszénhidrát komplexek azonosítására vagy fehérje-vitamin komplexek azonosítására vagy fehérje-fémion komplexek azonosítására vagy ligandumok és/vagy fémionok azonosítására.
A találmány tárgya továbbá a fenti aktív szilárd hordozó felhasználásával és a fenti eljárással előállított mikroarray alkalmazása nagy kapacitású biológiai szűrésre, amelyben különböző immobilizált ligandumokat tartalmazó mikroarrayt és ismert fehérjét vagy ismeretlen fehérjét, vagy azok biomolekulákkal képzett komplexeit, jelöletlen vagy jelölt (például fluoreszcens formában) alkalmazzuk, vagy ismert vagy ismeretlen nukleinsavak jelöletlen vagy jelölt komplexeit alkalmazzuk, vagy ionokat vagy azok komplexeit alkalmazzuk, vagy eukarióta és prokarióta sejteket alkalmazunk, majd alkalmas analitikai technológiákkal a kötött fehérjék, nukleinsavak, ionok vagy sejtek mennyiségét és minőségét meghatározzuk.
A találmány tárgya továbbá a fenti aktív szilárd hordozó felhasználásával és a fenti eljárással előállított mikroarray alkalmazása kötődési kinetikák, egyensúlyok és kinetikai állandók, valamint egyensúlyi állandók meghatározására.
Részletezve, a találmányunk szerinti eljárás alkalmas elágazó szerkezetű összekötő molekulákkal (linkerekkel) ellátott és linkerrel nem rendelkező gyógyszer és gyógyszerjelölt kismolekulák szilárd hordozóhoz való gyors, olcsó kikötésére - szakszóval immobilizálására (angolul immobilization), kihorgonyzására (angolul anchoring).
A találmány szerinti új szilárd hordozó és a kikötésre szánt molekulák között kovalens kötés jön létre, amely nagy stabilitást eredményez, valamint a felületen lévő próbakoncentráció állandó. A felületen kikötött molekulák mindig a mintamolekulákat jelzik, míg a felületen levő molekulákkal reagáló vegyületeket próbának nevezzük.
Az olyan hagyományos eljárások, melyek kovalens kötéssel horgonyozzák ki a próbákat, a szilárd hordozó felületére különböző kémiai módosításokat tartalmazó molekulákat (nukleinsavak esetében amino-, karboxivagy tiolmódosításokat/származékokat, kismolekulák esetében karboxi-, amino- vagy tiolcsoportot tartalmazó linkereket) használnak, míg a felületen aktív aldehid- vagy tiolcsoportok helyezkednek el.
A találmány szerinti eljárás során nincs szükség a kikötendő próbák kémiai módosítására, ami a módszert sokkal olcsóbbá teszi nagy mennyiségű minta előállításakor. A kikötés során nincs szükség további kémiai reakcióra, mint amilyen az előzőekben említett eljárások során például a redukció. Ennek az az előnye, hogy a redukcióra érzékeny csoportokat tartalmazó minták bármilyen károsodása és módosulása nélkül kiköthetők a szilárd hordozóra.
HU 226 993 Β1
A találmány egy előnyös változatában reaktív akrilcsoportot tartalmazó szilárd felülethez olyan szintetikus vegyületeket kötünk, amelyek amino-, imino-, tiolcsoportot vagy heterociklusos nitrogént tartalmaznak.
A találmány egy másik előnyös változatában reaktív epoxidcsoportot tartalmazó szilárd felületekhez olyan szintetikus vegyületeket kötünk, amelyek amino- vagy tiolcsoportot tartalmaznak. A reaktív csoportok nagy sűrűségben, elágazó, rugalmatlan vagy konformációsán flexibilis összekötő molekulákon (linkereken) keresztül vannak kihorgonyozva a szilárd hordozóhoz, ami nagy sűrűségű kikötött próbakoncentráció kialakulását tesz lehetővé. További előnye találmányunknak, hogy a távtartó linker molekulák a kismolekulák jobb hozzáférhetőségét biztosítják a mintához, és lehetőség van az aktív felszín és a gyógyszer, illetve gyógyszerjelölt molekulák között stabil kovalens kötések létrehozására.
További előny, hogy a találmány szerinti eljárással a szilárd hordozó felszínének hidrofobicitását is befolyásolni tudjuk, amellyel közvetlenül a létrehozandó arrayk sűrűségét lehet befolyásolni. Hidrofil felület esetén a próba robottal történő felvitelekor nagyobb pontok képződnek, ami viszonylag kisebb sűrűséget eredményez (100-2000 pont/cm2), azonban ez előnyös lehet egy ezt követő kölcsönhatás-vizsgálatban, ahol a kölcsönható molekula (tesztelni kívánt próba) nem mutat aspecifikus kötődést az ilyen típusú kialakított felszínnel. Hidrofób felület esetén a próba kisebb pontokban, de nagyobb sűrűséggel vihető fel a hordozóra (2000-6000 pont/cm2), de ez a kölcsönhatás-vizsgálat egyes eseteiben kevésbé előnyös lehet.
A találmány szerinti eljárásban szilárd hordozóként megfelelően előkészített szilárd hordozót: üveglemezeket, polisztirol- vagy polipropilénlemezeket, előnyösen üveg mikroszkóplemezeket használunk. Összehasonlító kísérleteinkben szilárd hordozóként kereskedelmi forgalomban kapható, reaktív aldehidcsoportokat tartalmazó lemezeket (SuperAldehyde Cat. No. SMA-25, Arrayit, USA) alkalmaztunk. A lemezek előkészítése nátrium-hidroxiddal történő maratást, majd egyszerűen vízzel való lemosást jelent.
A találmány egy előnyös megvalósítása szerint a szilárd hordozót két lépésben kezeljük úgy, hogy az első lépésben előnyösen 3-[2-(2-amino-etil-amino)-etilaminoj-propil-trimetoxi-szilánnal reagáltatjuk. A reakció során a szilárd hordozó felületén szabad aminocsoportok alakulnak ki. A második lépésben a triamino-szilanizált felületet akrilsav-kloriddal reagáltatjuk, és ezáltal egy olyan elágazó szénláncú és amidkötéseket tartalmazó molekula alakul ki, melyen az aminocsoportok helyén reaktív akrilcsoportok helyezkednek el. A második lépésben úgy is eljárhatunk, hogy az első lépésben kapott hordozón aktív epoxicsoportokat tartalmazó hidrofil vagy hidrofób felszínt hozunk létre. A reaktív hidrofil felszín kialakításához az első lépésben kapott hordozót 1,4-alkándiol-diglicidil-éterrel, vagya hidrofób reaktív felszín létrehozásához epiklór-hidrinnel reagáltatjuk. Ezáltal olyan elágazó szénláncú molekula alakul ki, melyen az aminocsoportok helyén reaktív epoxicsoportok találhatók.
A találmány szerinti eljárás első lépésében előnyösen tehát úgy járunk el, hogy a nátrium-hidroxiddal, majd vízzel mosott üveglemezeket 3-[2-(2-amino-etilamino)-etil-amino]-propil-trimetoxi-szilán egy rövid szénláncú alkoholos-vizes oldatával, így metanol vagy etanol 95%-os vizes oldatával reagáltatjuk, majd a lemezeket a felhasznált alkohollal és vízzel mossuk, majd 100-110 °C-on szárítjuk.
Az eljárás második lépésében az amidkötések kialakítására a kapott lemezeket akrilsav-kloriddal ekvivalanes mennyiségű savmegkötő bázis, így például diizopropil-etil-amin, piridin és hasonlók jelenlétében egy apoláros oldószerben, előnyösen diklór-metánban, diklóretánban és hasonlókban reagáltatjuk. Végül a lemezeket az alkalmazott oldószerrel mossuk és szárítjuk.
Az aktív epoxidcsoportokat tartalmazó felszín kialakítására az első lépésben kapott lemezeket 1,4-butándiol-diglicidil-éterrel reagáltatjuk egy bázist tartalmazó rövid szénláncú alkoholban, előnyösen nátrium-hidroxidot tartalmazó etanolban, majd az alkalmazott alkohollal mossuk és így hidrofil, epoxidcsoportokat tartalmazó felszínt kapunk. Alternatív módon a lemezeket reagáltathatjuk epiklór-hidrinnel egy bázist tartalmazó apoláros oldószerben, előnyösen piridintartalmú kloroformban és így hidrofób felszínhez jutunk.
A találmány szerinti eljárásban alkalmazott reagensek a kereskedelmi forgalomban beszerezhetők.
A találmány szerinti eljárással derivatizált mikroszkóplemezek tulajdonságai lehetővé teszik egyedi szintetikus vegyületek nagy sűrűségű, rendezett mintázatú kikötését nagy stabilitással, és azok kémiai mikroarray technológiában történő alkalmazását.
A találmány szerinti eljárással előállított szilárd hordozók különösen jól alkalmazhatók kémiai arrayk létrehozására kis molekulasúlyú szerves molekulák kikötése által. Az így kihorgonyzott vegyületek különböző kismolekula-fehérje, kismolekula-nukleinsav, kismolekulakis molekulasúlyú vegyületek között kialakult kölcsönhatások tanulmányozására vagy biokémiai kölcsönhatásokon alapuló fehérjekimutatásra, potenciálisan biológiailag aktív (például gyógyszermolekulák) nagy kapacitású vizsgálatára (high-throughput screening), proteomikai vizsgálatra, és különböző nukleinsavak, fehérjék és kis molekulasúlyú molekulák kölcsönhatásainak kombinatorikus analíziseire egyaránt felhasználhatók, így különböző kémiai, molekuláris biológiai, biotechnológiai, agrokémiai, proteomikai és gyógyszerkutatások technikáiban használhatók fel.
A legáltalánosabban alkalmazott fehérjedetektálási módszer a fluoreszcens festékkel való megfestés, illetve nagy kapacitású biológiai szűrés esetén eleve fluoreszcens fehérjék alkalmazása. A találmány szerinti kikötési eljárás alkalmas mind fluoreszcens, mind pedig az újonnan kifejlesztett detektálási módszerek alkalmazására is. Ez utóbbiak esetén a felületi tulajdonságok biológiai kötődés által kiváltott kismértékű megváltozását detektálják. Ilyen módszer a felületi plazmon rezonanciatechnika (surface plasmone resonance) (lásd: DE 100 27 397 számú német szabadalmi közzétételi iratot), illetve a fluoreszcens jelzéssel kombinált sík
HU 226 993 Β1 hullámvezető (planar waveguide) technológia (lásd: WO-0155691 számú PCT-szabadalmi leírást).
A találmány szerint a kémiai arrayk létrehozásához a fent leírt módon aktivált hordozóhoz kapcsoljuk a módosítatlan biológiailag aktív vagy várhatóan biológiailag aktív molekulákat vagy a linkerrel rendelkező kis szerves molekulákat olyan módon, hogy azokat feloldjuk erősen poláros oldószerben (előnyösen dimetilformamidban, dimetil-szulfoxidban vagy vízben) és a 1-3 órán át inkubáljuk szilárd hordozóval, majd szárítjuk.
A találmány szerinti hordozót, annak elkészítését és alkalmazását az alábbi ábrákon és példákon mutatjuk be:
1. ábra: Manuálisan készített kémiai array a három kifejlesztett felületen (a.: akril, b.: hidrofil epoxid, c.: hidrofób epoxid felület). Az ábrákon a felső két pont pH-puffer nélkül, az alsó kettő pH-puffer jelenlétében volt a felületre kötve.
2. ábra: Robot segítségével készített kémiai array a három kifejlesztett felületen (a.: akril, b.: hidrofil epoxid, c.: hidrofób epoxid felület). 1-5.: A felvitt biotinoldatok koncentrációja.
3. ábra: Robot segítségével készített kémiai array a három kifejlesztett felületen (a.: akril, b.: hidrofil epoxid, c.: hidrofób epoxid felület). 1-5.: A felvitt 4-amino-benzamidin-oldatok koncentrációja látható.
1. példa
Reaktív akrilcsoportokat tartalmazó szilárd hordozó előállítása
A lemezek előkészítése
A kereskedelemben beszerezhető mikroszkópüveglemezeket 24 órán át 10%-os vizes NaOH- (Molar Chemicals Kft., Magyarország, tisztaság >98,5%) oldatban állni hagyjuk, majd vízzel, 1%-os vizes HCI-oldattal (Molar Chemicals Kft., Magyarország), majd újra vízzel addig mossuk, amíg a mosóoldat semleges kémhatású lesz. Ezt követően a lemezeket szobahőmérsékleten szárítjuk.
a) lépés: triamino-szilanizált felszín kialakítása
A fentiek szerint előkészített, maratott üveglemezeket 95%-os vizes metanolban készített 3%-os 3-[2-(2-amino-etil-amino)-etil-amino]-propil-trimetoxiszilán-oldattal (ICN Biomedicals Inc., Aurora, Ohio) reagáltatjuk 2 órán keresztül. A lemezeket ezután metanollal, majd vízzel mossuk, szárítjuk és 105 °C-on 15 percig hőkezeljük.
b) lépés: reaktív akrilcsoportokat tartalmazó felszín kialakítása:
Az a) lépésben kapott lemezeket 62,5 ml diklóretánban (Merck, Németország) oldott 30 mmol akrilsav-kloriddal (ICN Biomedicals Inc., Aurora, Ohio) és 30 mmol diizopropil-etil-aminnal (ICN Biomedicals Inc., Aurora, Ohio) inkubáljuk 2 órán keresztül, majd diklóretánnal mossuk és szárítjuk szobahőmérsékleten.
2. példa
Aktív epoxicsoportokat tartalmazó hidrofób szilárd hordozó előállítása
Az 1. példában leírtak alapján előkészített, majd az a) lépésben kapott lemezeket 66,7 ml kloroformban (Molar Chemicals Kft., Magyarország, >99%) oldott 30 mmol epiklór-hidrinnel (Fluka, Németország) reagáltatjuk 12 mmol (1 ml) piridin (Fluka, Németország) jelenlétében 2 órán át, majd mossuk kloroformmal és szobahőmérsékleten szárítjuk.
3. példa
Aktív epoxicsoportokat tartalmazó hidrofil szilárd hordozó előállítása
Az 1. példában leírtak alapján előkészített, majd az a) lépésben kapott lemezeket 63 ml etanolban (Molar Chemicals Kft., Magyarország, >99,7%) oldott 30 mmol 1,4-butándiol-diglicidil-éterrel (Fluka, Németország) reagáltatjuk 5 mmol NaOH jelenlétében 2 órán át, majd mossuk etanollal, és szobahőmérsékleten szárítjuk.
4. példa
Nagy sűrűségű kémiai arrayk elkészítése
Az egyik kísérletben az aminolinkerrel ellátott biotinoldat felvitelét kézzel, pipetta segítségével hajtjuk végre (1. ábra).
A másik kísérletben az amino-linkerrel ellátott biotinoldat nagy sűrűségű felvitele MicroGrid Totál Array System (BioRobotics, Anglia) robot segítségével történt (2. ábra). Mindkét kísérletben három különböző oldószert alkalmazunk (dimetil-formamid, dimetilszulfoxid, víz). A biotinoldatokat többféle koncentrációban, állandó mennyiségű (0,1 M, pH=10; foszfát) puffer jelenlétében és puffer nélkül visszük fel. A lemezeket 2 órán át szobahőmérsékleten inkubáljuk, a felvitt cseppek beszáradását megakadályozó páradús környezetben. A robot által felvitt folyadékmennyiség körülbelül 100 ni, míg a pipettával felvitt mennyiség 0,4-1,0 μΙ volt. Próbafelvitel után a lemezeket 1*SSC (0,1 M NaCI, 15 mM trinátrium-citrát), 1% BSA (borjúszérumalbumin), 0,2 w/w% SDS (nátrium-dodecil-szulfát) vizes oldatával, majd vízzel mossuk, és szobahőmérsékleten szárítjuk. Az elkészült lemezeket sötétben szobahőmérsékleten tároljuk.
5. példa
Fehérjekölcsönhatás-vizsgálatok
A 4. példában előállított arrayket egyenként 10 μΙ Cy3 sztreptavidin 10 mg/l-es oldatával reagáltatjuk 1 órán át fedőlemez alatt, majd a lemezeket három lépésben mossuk. Mosási lépések: 1. PBS (foszfátpuffer, pH=7,0), 2. 0,2*SSC, 3. 2*SSC. Szárítás után a lemezek konfokális lézerszkennerrel (GSI Lumonics, Scannaray Lite) szkenneljük. Az eredmények az 1. és
2. ábrán láthatóak. Mindhárom felület esetén a magasabb pH-értéken hatékonyabb a kikötődés (1. ábra), és az alkalmazott oldószerek nem befolyásolták a kikötődést.
HU 226 993 Β1
6. példa
A 4. példához hasonlóan 4’-(6-amino-hexil-amino)benzamidint 10-es pH-jú foszfátpufferben kézzel (pipettával) és robot (MicroGrid Totál Array System, BioRobotics, Anglia) segítségével visszük fel a hordozó felületére. Oldószerként vizet alkalmazunk. A molekulák hatféle hígításban kerültek a hordozóra. A lemezeket 2 órán át szobahőmérsékleten inkubáljuk, a felvitt cseppek beszáradását megakadályozó páradús környezetben. Próbafelvitel után a lemezeket vízzel, majd 1*SSC (0,1 M NaCI, 15 mM tri-nátrium-citrát), 1% BSA (borjú-szérumalbumin), 0,2 w/w% SDS (nátrium-dodecil-szulfát) vizes oldatával, majd újra vízzel mossuk és szobahőmérsékleten szárítjuk. Az elkészült lemezeket sötétben szobahőmérsékleten tároljuk.
Kifogómolekulaként tripszint alkalmaztunk, melyet előzetesen Alexa 647 fluoreszcens festékkel jelöltünk. A jelöléshez reagensként az aminoreaktív Alexa 647szukcinimidil-észtert használtunk (Molecular Probes, USA).
Az elkészített arrayeket fedőlemez alatt 10 μΙ Alexa 647-tripszin oldatával (4 pmol) 1 órán át szobahőmérsékleten inkubáljuk, ezután a lemezeket PBS-oldattal (foszfátpuffer, pH=7,0) majd vízzel mossuk. Szárítás után a lemezek konfokális lézerszkennerrel (GSI Lumonics, Scannaray Lite) szkenneljük. Az eredményeket a 3. ábrán mutatjuk be.
Claims (9)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás biológiailag aktív vagy potenciálisan aktív szerves vegyületek kovalens kötéssel való megkötésére alkalmas aktív szilárd hordozó előállítására, azzal jellemezve, hogya) egy, előnyösen erősen lúgos vagy savas közegben végzett maratással előkészített szilárd hordozót egy poliaminfunkcionalizált alkoxi-szilán-származékkal, előnyösen 3-[2-(2-amino-etil-amino)-etil-amino]-propiltrimetoxi-szilánnal reagáltatunk, majd a kapott terméket mossuk és szárítjuk és b1) az a) pont szerinti eljárással készített hordozót egy (I) általános képletű- ahol a képletbenZ jelentése: = kötés vagy -CO vagy -CNR1 csoport és R1 csoport alkil-, aralkil- vagy árucsoportot jelent;B jelentése: = kötés vagy -(CH2)n- vagy -(CH2)n-O-(CH2)n- vagy O-(CH2)n- vagy -NH-(CH2)n- csoport;A jelentése: = elágazó vagy el nem ágazó 1-5 szénatomszámú alkil- vagy helyettesített aril- vagy aralkilcsoport;D jelentése: halogén vagy -O-A csoport és n jelentése 0, 1, 2,... egész szám - bifunkcionális reagenssel, előnyösen akriloil-kloriddal vagy 1,4butándiol-diakriláttal szervetlen vagy szerves savmegkötő jelenlétében reagáltatjuk, vagy b2) az a) pontban leírt eljárással előkészített hordozót egy olyan bifunkcionális reagenssel, előnyösen 1,4-butándiol-diglicidil-éterrel vagy epiklór-hidrinnel reagáltatjuk szervetlen vagy szerves savmegkötő jelenlétében, amely epoxid terminális csoportot, valamint egy aminocsoport reaktív molekularészt tartalmaz.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szilárd hordozóként üveg- vagy polisztirol- vagy polipropilénlemezeket, előnyösen üveg mikroszkóplemezeket alkalmazunk.
- 3. Aktív szilárd hordozó, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárásváltozatok valamelyikével állítottuk elő.
- 4. A 3. igénypont szerinti aktív szilárd hordozó alkalmazása kémiai arrayk, kombinatorikus kémiai mikroarrayk előállítására.
- 5. Eljárás 1500 Da alatti, előnyösen 250-750 Da méretű, úgynevezett kis molekulatömegű szerves vegyületek immobilizálására, azzal jellemezve, hogy a3. igénypont szerinti aktív szilárd hordozóra egy módosítatlan gyógyszer vagy gyógyszerjelölt molekulát, előnyösen mikroméretű robotizált kapcsolási technikával, a gyógyszer vagy gyógyszerjelölt molekula megfelelő funkciós csoportjai addicionálásával rögzítünk.
- 6. A 3. igénypont szerinti aktív szilárd hordozó felhasználásával az 5. igénypont szerinti eljárással előállított mikroarray alkalmazása agrokémiai, biotechnológiai, biológiai vagy gyógyszerkémiai vizsgálat gyors elvégzésére, előnyösen kismolekula-fehérje kölcsönhatások tanulmányozására.
- 7. A 3. igénypont szerinti aktív szilárd hordozó felhasználásával az 5. igénypont szerinti eljárással előállított mikroarray alkalmazása új fehérjék azonosítására vagy fehérjék gyógyszer-szerelhetőségének gyors analízisére vagy másodlagos kötőhelyek meghatározására vagy kis molekulájú ligandumot kötő tulajdonsággal rendelkező nukleinsavak (RNS, DNS) azonosítására vagy fehérje-fehérje komplexek azonosítására vagy fehérje-DNS komplexek azonosítására vagy fehérje-lipid komplexek azonosítására vagy fehérje-nukleotid komplexek azonosítására vagy fehérje-szénhidrát komplexek azonosítására vagy fehérje-vitamin komplexek azonosítására vagy fehérje-fémion komplexek azonosítására vagy ligandumok és/vagy fémionok azonosítására.
- 8. A 3. igénypont szerinti eljárással előállított reaktív szilárd hordozó felhasználásával az 5. igénypont szerinti eljárással előállított mikroarray alkalmazása nagy kapacitású biológiai szűrésre, amelyben különböző immobilizált ligandumokat tartalmazó mikroarrayt és ismert fehérjét vagy ismeretlen fehérjét, vagy azok biomolekulákkal képzett komplexeit, jelöletlen vagy jelölt, alkalmazzuk, vagy ismert vagy ismeretlen nukleinsavak jelöletlen vagy jelölt komplexeit alkalmazzuk, vagyHU 226 993 Β1 ionokat vagy azok komplexeit alkalmazzuk, vagy eukarióta és prokarióta sejteket alkalmazunk, majd alkalmas analitikai technológiákkal a kötött fehérjék, nukleinsavak, ionok vagy sejtek mennyiségét és minőségét meghatározzuk.
- 9. A 3. igénypont szerinti aktív szilárd hordozó felhasználásával az 5. igénypont szerinti eljárással előállított mikroarray alkalmazása kötődési kinetikák, egyensúlyok és kinetikai állandók, valamint egyensúlyi5 állandók meghatározására.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU0201091A HU226993B1 (en) | 2002-03-29 | 2002-03-29 | Novel active carrier and process for immobilization of combinatorial compounds and compound libraries |
| AU2003226574A AU2003226574A1 (en) | 2002-03-29 | 2003-03-28 | Active solid support and method for surface immobilization of combinatorial compounds or libraries |
| EP03745343A EP1493031A2 (en) | 2002-03-29 | 2003-03-28 | Active solid support and method for surface immobilization of combinatorial compounds or libraries |
| PCT/HU2003/000025 WO2003083477A2 (en) | 2002-03-29 | 2003-03-28 | Active solid support and method for surface immobilization of combinatorial compounds or libraries |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU0201091A HU226993B1 (en) | 2002-03-29 | 2002-03-29 | Novel active carrier and process for immobilization of combinatorial compounds and compound libraries |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU0201091D0 HU0201091D0 (hu) | 2002-06-29 |
| HUP0201091A2 HUP0201091A2 (hu) | 2003-12-29 |
| HUP0201091A3 HUP0201091A3 (en) | 2007-08-28 |
| HU226993B1 true HU226993B1 (en) | 2010-04-28 |
Family
ID=89980305
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0201091A HU226993B1 (en) | 2002-03-29 | 2002-03-29 | Novel active carrier and process for immobilization of combinatorial compounds and compound libraries |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1493031A2 (hu) |
| AU (1) | AU2003226574A1 (hu) |
| HU (1) | HU226993B1 (hu) |
| WO (1) | WO2003083477A2 (hu) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7217512B2 (en) | 2002-05-09 | 2007-05-15 | Corning Incorporated | Reagent and method for attaching target molecules to a surface |
| US7723126B2 (en) * | 2004-03-24 | 2010-05-25 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Plasma-enhanced functionalization of inorganic oxide surfaces |
| US20060147943A1 (en) * | 2004-12-30 | 2006-07-06 | Lewis Mark A | Substrates having pendant epoxide groups for binding biomolecules and methods of making and using thereof |
| US7396676B2 (en) | 2005-05-31 | 2008-07-08 | Agilent Technologies, Inc. | Evanescent wave sensor with attached ligand |
| US20070099180A1 (en) * | 2005-10-31 | 2007-05-03 | Robotti Karla M | Evanescent wave sensor with attached ligand |
| HUP0600668A2 (en) | 2006-08-22 | 2008-02-28 | Avicor Kft | Active carrier, process for producing thereof and the use of thereof |
| US8029902B2 (en) | 2006-12-11 | 2011-10-04 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Plasma-enhanced functionalization of substrate surfaces with quaternary ammonium and quaternary phosphonium groups |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5624711A (en) * | 1995-04-27 | 1997-04-29 | Affymax Technologies, N.V. | Derivatization of solid supports and methods for oligomer synthesis |
| US5919626A (en) * | 1997-06-06 | 1999-07-06 | Orchid Bio Computer, Inc. | Attachment of unmodified nucleic acids to silanized solid phase surfaces |
| US6372813B1 (en) * | 1999-06-25 | 2002-04-16 | Motorola | Methods and compositions for attachment of biomolecules to solid supports, hydrogels, and hydrogel arrays |
-
2002
- 2002-03-29 HU HU0201091A patent/HU226993B1/hu not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-03-28 WO PCT/HU2003/000025 patent/WO2003083477A2/en not_active Application Discontinuation
- 2003-03-28 EP EP03745343A patent/EP1493031A2/en not_active Withdrawn
- 2003-03-28 AU AU2003226574A patent/AU2003226574A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUP0201091A3 (en) | 2007-08-28 |
| HUP0201091A2 (hu) | 2003-12-29 |
| WO2003083477A2 (en) | 2003-10-09 |
| WO2003083477A3 (en) | 2004-05-06 |
| HU0201091D0 (hu) | 2002-06-29 |
| AU2003226574A8 (en) | 2003-10-13 |
| AU2003226574A1 (en) | 2003-10-13 |
| EP1493031A2 (en) | 2005-01-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1297338B1 (en) | Microarrays for performing proteomic analyses | |
| US7153682B2 (en) | Microarrays on mirrored substrates for performing proteomic analyses | |
| Weinberger et al. | Recent trends in protein biochip technology | |
| Talapatra et al. | Protein microarrays: challenges and promises | |
| Tonkinson et al. | Nitrocellulose: a tried and true polymer finds utility as a post-genomic substrate | |
| US20020034827A1 (en) | Methods for solid phase nanoextraction and desorption | |
| US7985874B2 (en) | Polymer particle | |
| US20130123134A1 (en) | Small molecule printing | |
| US20120021933A1 (en) | Small molecule printing | |
| JP2010501845A (ja) | 活性担体、その製造及びその使用 | |
| HU226993B1 (en) | Novel active carrier and process for immobilization of combinatorial compounds and compound libraries | |
| Xu et al. | A novel approach to chemical microarray using ketone-modified macromolecular scaffolds: application in micro cell-adhesion assay | |
| WO2002083951A1 (en) | Multiplexed ligand/protein binding assays with pna labels | |
| US20030207249A1 (en) | Connection of cells to substrates using association pairs | |
| US20030013138A1 (en) | Systems and methods for the analysis of proteins | |
| US20040137608A1 (en) | Chemical microarrays and method for constructing same | |
| EP3180465B1 (en) | Libraries of non-natural, dihydroisoquinolinone-based polymers for high-throughput drug screening through fiber-optic array scanning technology | |
| Lueking et al. | Protein microarrays-a tool for the post-genomic era | |
| US20030003512A1 (en) | Directed enzymatic modification of analytes for affinity capture and analysis | |
| Jenkins et al. | Protein Chip Technology in Proteomics Analysis | |
| Song et al. | 7 Glycan-Based Arrays for Determining Specificity of Carbohydrate-Binding Proteins | |
| Rouse et al. | Protein microarrays: challenges and promises |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: MTA SZEGEDI BIOLOGIAI KOEZPONT, HU Free format text: FORMER OWNER(S): COMGENEX RT., HU; AMRI HUNGARY ZRT, HU; MTA SZEGEDI BIOLOGIAI KOEZPONT, HU; COMGENEX RT., HU |
|
| HC9A | Change of name, address |
Owner name: MTA SZEGEDI BIOLOGIAI KOEZPONT, HU Free format text: FORMER OWNER(S): COMGENEX RT., HU; AMRI HUNGARY ZRT, HU; MTA SZEGEDI BIOLOGIAI KOEZPONT, HU; COMGENEX RT., HU |
|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |