HU225332B1 - Chromatographic cleaner system - Google Patents
Chromatographic cleaner system Download PDFInfo
- Publication number
- HU225332B1 HU225332B1 HU0401336A HUP0401336A HU225332B1 HU 225332 B1 HU225332 B1 HU 225332B1 HU 0401336 A HU0401336 A HU 0401336A HU P0401336 A HUP0401336 A HU P0401336A HU 225332 B1 HU225332 B1 HU 225332B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- sample
- fraction
- valve
- component
- chromatographic
- Prior art date
Links
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000007599 discharging Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 13
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 19
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 18
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- RSJCLODJSVZNQA-BQYQJAHWSA-N 4-[2-[4-[(e)-3-ethoxyprop-1-enyl]phenyl]-4-[4-(propan-2-ylamino)phenyl]-1h-imidazol-5-yl]-n-propan-2-ylaniline Chemical compound C1=CC(/C=C/COCC)=CC=C1C1=NC(C=2C=CC(NC(C)C)=CC=2)=C(C=2C=CC(NC(C)C)=CC=2)N1 RSJCLODJSVZNQA-BQYQJAHWSA-N 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000000275 quality assurance Methods 0.000 description 1
- 238000002407 reforming Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/80—Fraction collectors
- G01N30/82—Automatic means therefor
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
Description
A találmány tárgya kromatográfiás tisztítórendszer, amely a megtisztítandó mintában lévő különböző komponensek kromatográfiával történő automatikus szétválasztására és legalább egy célkomponens frakciójának begyűjtésére szolgál.BACKGROUND OF THE INVENTION The present invention relates to a chromatographic purification system for the automatic separation of various components of a sample to be purified by chromatography and the collection of a fraction of at least one target component.
A robotizált módszerekkel előállított nagy mintaszámú vegyülettárak tisztítását napjainkban már automatizáltan, gyors tisztítási módszerek alkalmazásával végzik. A tisztítás hatékonysága, illetve automatizálhatósága következtében a nagynyomású folyadékkromatográfia (High-Pressure Liquid Cromatography, HPLC) alkalmazása egyre nagyobb teret hódít ezen a területen. A kromatográfiás tisztítási folyamat általában az alábbi alapműveletekből áll:Large sample pools of robotic methods are now being cleaned automatically using rapid purification methods. Due to the efficiency and automation of the purification, the use of High-Pressure Liquid Chromatography (HPLC) is gaining ground in this field. The chromatographic purification process generally consists of the following basic operations:
1. a minta egyes komponenseik kromatográfiás szétválasztása, a különböző komponensek detektálása, például UV-detektorral vagy tömegspektrométerrel;1. separating the individual components of the sample by chromatography, detecting the various components, for example by UV detector or mass spectrometer;
2. az elválasztott komponensek frakcióinak begyűjtése;2. collecting fractions of the separated components;
3. a begyűjtött frakciók utólagos vizsgálata, tisztaság-, illetve molekulatömeg-meghatározási módszerekkel a keresett komponens, vagyis az úgynevezett célkomponens azonosítása céljából;3. follow-up of the collected fractions by purity or molecular weight determination methods to identify the desired component, the so-called target component;
4. a célkomponens frakcióinak utólagos kiválogatása, feldolgozása, ideértve a beszárítást, a reformatálást, a végső minőség-ellenőrzést stb.4. the subsequent selection and processing of fractions of the target component, including drying, reforming, final quality control, etc.
A frakciógyűjtés területén alapvető probléma, hogy a tisztítási folyamat elindításakor előre nem ismert az egy mintából legyűjtésre kerülő frakciók száma. Ismeretlen minták esetén az általánosan használt frakciógyűjtési paraméterek, nevezetesen a detektálási időablak és a detektálási intenzitásküszöb előzetes beállítása nem mindig elegendő az egy mintából keletkező frakciók számának pontos becslésére, emiatt a frakciógyűjtő berendezés kapacitását rendszerint jelentősen túl kell méretezni. Ez különösen akkor problematikus, ha egyidejűleg több minta automatikus tisztítását kell elvégezni emberi beavatkozás nélkül. Ezenkívül a legyűjtött frakciók közül a célkomponens kiválasztása jelentős számú utólagos analitikai mérést igényel, és csak a mérési eredmények alapján lehet végrehajtani a keresett frakciók utólagos kiválogatását. Mindezen lépések rendkívül időigényesek és költségesek.A fundamental problem in fraction collection is that the number of fractions to be collected from a sample is not known in advance when starting the purification process. For unknown samples, the pre-setting of commonly used fraction collection parameters, namely the detection time window and the detection intensity threshold, is not always sufficient to accurately estimate the number of fractions from a sample, and therefore the capacity of the fraction collection equipment will usually need to be significantly oversized. This is especially problematic when several samples need to be automatically cleaned at the same time without human intervention. In addition, the selection of the target component from the collected fractions requires a significant number of subsequent analytical measurements, and only the results of the measurements can be used to select the desired fractions. All these steps are extremely time consuming and costly.
A fent említett problémák megoldására alapvetően kétféle módszert dolgoztak ki. A viszonylagos alacsony költségek miatt az egyik legelterjedtebb módszer a frakciószám minimalizálása előzetes HPLC-mérések figyelembevételével. Ilyen eljárást ismertet többek között a Jounal of Combinatorial Chemistry, 2004, Vol. 6, pp. 255-261 (Bing Yan et al.). Az analitikai mérések során tapasztalt retenciós idő figyelembevételével a preparatív kromatográfiás körülményeket egy segédprogram segítségével úgy optimálják, hogy a tisztítandó komponens a szennyezőktől jól elkülönülten a kromatogram egy előre meghatározott tartományában, az úgynevezett retenciósidő-ablakban eluálódjanak. A frakciógyűjtés egy UV-detektor jele alapján az adott retenciósidő-ablakban történik előre meghatározott értékű intenzitásküszöb figyelembevételével. Minél rövidebb a retenciósidő-ablak, annál valószínűbb, hogy azon belül csak egy kromatográfiás csúcs detektálható, azaz ebben az esetben csak egy frakció kerül legyűjtésre. A módszer egyik hátránya, hogy a tisztítás előtti analitikai mérés csak akkor alkalmas a preparatív kromatográfiás körülmények meghatározására, ha a kritikus kromatográfiás paraméterek közötti összefüggések előzetes kalibrációs mérések alapján előre ismertek. Még a mintánként, egyedileg optimált kromatográfiás körülmények alkalmazása mellett sem garantálható azonban, hogy csak egy frakció kerül legyűjtésre. A módszer további hátránya, hogy minél keskenyebb az előre meghatározott retenciósidő-ablak, annál nagyobb a valószínűsége annak, hogy az optimálóalgoritmus halmozódó időhibái miatt a tisztítandó komponens kicsúszik a retenciósidő-ablakból.There are basically two ways to solve the problems mentioned above. Due to the relatively low cost, one of the most common methods is to minimize the fraction number by taking into account preliminary HPLC measurements. Such a procedure is described, inter alia, in Jounal of Combinatorial Chemistry, 2004, Vol. 255-261 (Bing Yan et al.). Taking into account the retention time of the analytical measurements, the preparative chromatographic conditions are optimized by means of a utility so that the component to be purified is eluted in a so-called retention time window well separated from the impurities in a predetermined region of the chromatogram. Fraction collection is performed on the basis of a UV detector signal in a given retention time window with a predetermined intensity threshold. The shorter the retention time window, the more likely it is that only one chromatographic peak can be detected, i.e. in this case only one fraction is collected. A disadvantage of the method is that analytical measurement prior to purification is only suitable for the determination of preparative chromatographic conditions if the relationships between the critical chromatographic parameters are known in advance from preliminary calibration measurements. However, even when using individually optimized chromatographic conditions per sample, it is not guaranteed that only one fraction will be collected. A further disadvantage of the method is that the narrower the predetermined retention time window, the greater the probability that the component to be cleaned slips out of the retention time window due to the cumulative time errors of the optimization algorithm.
Egy másik, szintén gyakran alkalmazott megoldás, amikor a frakciószámot szerkezetazonosító detektálási módszerrel vezérelt frakciógyűjtés alkalmazásával minimalizálják. Ilyen módszert ismertet többek között a Rapid Communications on Mass Spectrometry, 1998, Vol. 12, p. 658 (J. P. Kiplinger et al.). Ebben az esetben a detektálási módszer szelektív üzemmódban a tisztítandó vegyület molekulatömegének előfordulását vizsgálja az egyes kromatográfiásan elválasztott komponensek csúcsaiban. A frakciószedés abban az esetben történik, ha az adott molekulatömeg megjelenik a tömegspektrumban. Ezzel a módszerrel az esetek nagy részében elérhető, hogy egy minta tisztítása során egyetlen frakció keletkezzen. A módszer egyik komoly hátránya, hogy megvalósításához rendkívül költséges tömegspektrométer szükséges. További hátrányt jelent, hogy a tisztítandó vegyülettel azonos molekulatömegű komponens jelenléte esetén egy mintából több frakció is legyűjtésre kerül, és utólagos analitikai mérések szükségesek a legyűjtött, azonos molekulatömegű komponensek közül a ténylegesen keresett célkomponens kiválasztásához.Another commonly used solution is to minimize the fraction number by using fractional collection controlled by the structure identification method. Such a method is described, inter alia, in Rapid Communications on Mass Spectrometry, 1998, Vol. 12, p. 658 (J.P. Kiplinger et al.). In this case, the detection method selects, in a selective mode, the occurrence of the molecular weight of the compound to be purified at the peaks of the individual chromatographically separated components. Fraction picking occurs when a given molecular weight appears in the mass spectrum. In most cases, this method allows a single fraction to be formed during sample purification. One of the major drawbacks of the method is that it requires an extremely expensive mass spectrometer. A further disadvantage is that, in the presence of a component of the same molecular weight as the compound to be purified, multiple fractions are collected from a sample and subsequent analytical measurements are required to select the desired target component from the collected components of the same molecular weight.
UV-detektorral ellátott, automatikus kromatográfiás tisztítórendszert ismertet többek között az US 6,652,746 számú (Biotage Inc.) szabadalmi leírás. A bemutatott kromatográfiás rendszerben az UV-detektor minden kromatográfiás csúcs esetén jelez, így a minta összes komponense legyűjtésre kerül, és azokat a frakciógyűjtő berendezés különböző frakciócsészékbe tölti ki. Ezzel a rendszerrel tehát a legyűjtött frakciók száma előre nem tervezhető, a frakciók csoportosítása (például a kromatográfiás csúcs magassága alapján) csak utólagos műveletek bevonásával lehetséges.An automatic chromatographic purification system with a UV detector is described, inter alia, in U.S. Patent No. 6,652,746 (Biotage Inc.). In the chromatographic system shown, the UV detector detects each chromatographic peak, so that all components of the sample are collected and filled into different fraction cups by the fraction collector. Thus, with this system, the number of fractions collected cannot be predicted, and fractionation of fractions (for example, based on the height of the chromatographic peak) is only possible with subsequent operations.
Az US 6,309,541 számú (Ontogen Corp.) szabadalmi leírás olyan többcsatornás, automatikus kromatográfiás tisztítórendszert ismertet, amely az UV-detektor által detektált kromatográfiás csúcsokhoz tartozó komponenst elemző tömegspektometriás analizátort tartalmaz. A frakciógyűjtő berendezés az analizátor által elfogadott komponens frakcióját egy első típusú frakciócsészébe, míg a minta összes többi komponensének frakcióját egy második típusú frakciócsészébe tölti. A többi komponens kigyűjtésére azért van szükség,U.S. Patent No. 6,309,541 (Ontogen Corp.) discloses a multichannel automatic chromatographic purification system comprising a mass spectrometric analyzer for analyzing a component belonging to the chromatographic peaks detected by a UV detector. The fraction collector pours the fraction of the component accepted by the analyzer into a first type of fraction cup, while the fractions of all other components of the sample are filled into a second type of fraction cup. The other components need to be collected
HU 225 332 Β1 mert - mint korábban említettük - az analizátorként használt tömegspektrométer döntése alapján bizonyos esetekben nem a célkomponens, hanem egy másik, a célkomponenssel azonos molekulatömegű komponens frakciója kerül az első típusú csészébe, és ilyenkor a második típusú csészében lévő komponensek közül szükség esetén utólagos mérésekkel még mindig kiválasztható a célkomponens frakciója. Ezzel a berendezéssel tehát a legyűjtött frakciók száma csökkenthető, de a célkomponenssel azonos molekulatömegű komponensek előfordulása esetén továbbra is fennáll annak a lehetősége, hogy egy minta esetén több frakció gyűjtése válhat szükségessé. Ennélfogva a mérés indításának időpontjában a frakciók száma továbbra sem becsülhető biztonságosan.Because, as mentioned earlier, the mass spectrometer used as the analyzer decides, in some cases, to fractionate the target component, but not the target component, into the first type of cup, and then, if necessary, add the latter in a second type of cup. measurements can still be used to select the fraction of the target component. Thus, with this apparatus, the number of fractions collected can be reduced, but with the presence of components of the same molecular weight as the target component, it is still possible that multiple fractions may need to be collected per sample. Therefore, the number of fractions at the time the measurement is started cannot be safely estimated.
A találmánnyal célunk olyan automatizált kromatográfiás tisztítórendszer megvalósítása, amely lehetővé teszi előre meghatározott számú és tulajdonságú komponens frakciójának legyűjtését.It is an object of the present invention to provide an automated chromatographic purification system that allows the collection of a fraction of a predetermined number and properties of components.
A találmánnyal további célunk olyan automatizált kromatográfiás tisztítórendszer megvalósítása, amely egy mintából kisszámú, például pontosan egy frakciót gyűjt le az eddigieknél lényegesen kisebb költséggel.It is a further object of the present invention to provide an automated chromatographic purification system that collects a small number of samples, for example exactly one fraction, at a significantly lower cost.
A kitűzött célokat olyan kromatográfiás tisztítórendszer megvalósításával érjük el, amely a mintában lévő különböző komponensek kromatográfiával történő automatikus szétválasztására és legalább egy célkomponens frakciójának begyűjtésére szolgál. A kromatográfiás tisztítórendszer folyadéktovábbító egységet, mintát fogadó és a mintában lévő különböző komponenseket szétválasztó kromatográfiás oszlopot, a kromatográfiás oszlopba a mintát befecskendező mintabeviteli szelepet, a kromatográfiás oszlophoz a mintát fogadóan kapcsolódó, az áthaladó mintában a legalább egy komponens jelenlétét jelző jelet előállító detektort, hulladékgyűjtő edényt, a legyűjtött frakciókat frakciótároló csészékbe töltő frakciógyűjtő berendezést, a folyadéktovábbító egység és a frakciógyűjtő berendezés működését vezérlő rendszervezérlő eszközt, valamint a detektorhoz a mintát fogadóan kapcsolódó, a mintában lévő legalább egy komponens közül előre meghatározott számú és tulajdonságú célkomponenst kiválasztó, a legalább egy kiválasztott célkomponens frakcióját a frakciógyűjtő berendezésnek továbbító és a minta többi részét a hulladékgyűjtő edénybe kiürítő szelektálóeszközt tartalmaz.The objects are achieved by providing a chromatographic purification system for the automatic separation of various components of the sample by chromatography and the collection of at least one fraction of the target component. The chromatographic purification system comprises a liquid transfer unit, a receiving column separating the various components in the sample and separating the sample into the chromatographic column, a sample collecting vessel to receive the sample in the passing sample, selecting at least one target component each of a predetermined number of target components having a predetermined number and characteristics of at least one of the components in the sample to control the operation of the fluid transfer unit and the fraction collector into the fraction storage cups; of the fraction to the fraction collector and the remainder of the sample to the refuse collector Contains a means for selectively discharging into a container.
A szelektálóeszköz célszerűen legalább egy frakció eltárolására alkalmas folyadékpufferrel rendelkező eszközt, továbbá és a mintában lévő komponensek közül az előre meghatározott számú célkomponens kiválasztására szolgáló döntési algoritmust tartalmazó és a folyadékpufferrel rendelkező eszközt a detektortól kapott jel, valamint a döntési algoritmus döntése alapján vezérlő eszközt tartalmaz.Preferably, the selection means comprises means for storing at least one fraction with a fluid buffer, and means for controlling a predetermined number of target components from the components in the sample and controlling the fluid buffer based on the signal received from the detector and the decision algorithm.
A folyadékpufferrel rendelkező eszköz célszerűen legalább egy, gyüjtöhurokkal ellátott, kétállású, hatportos frakciószedő szelepből áll, ahol mindegyik frakciószedő szelep egyetlen célkomponens frakciójának a gyűjtőhurokban történő eltárolására alkalmasan van kiképezve. Ez esetben a szelektálóeszköz vezérlőeszköze a legalább egy frakciószedő szelepet a detektortól kapott jel, valamint a döntési algoritmus döntése alapján alaphelyzetbe vagy gyűjtőállásba állító eszköz.Preferably, the fluid-buffered device comprises at least one two-way, six-port fractional valve with a collecting loop, adapted to store a fraction of a single target component of each fractional valve in the collecting loop. In this case, the control means of the selection means is a means for resetting the at least one fractional valve according to the signal received from the detector and the decision algorithm to reset or collect.
A találmány szerinti kromatográfiás tisztítórendszer egyik előnyös változatánál a folyadékpufferrel rendelkező eszköz legalább két frakciószedő szelepből áll, melyek kaszkádba vannak kötve oly módon, hogy az utolsó frakciószedő szelep kivételével mindegyik frakciószedő szelep hulladékürítő portja a következő frakciószedő szelep mintabeviteli portjához, az utolsó frakciószedő szelep hulladékürítő portja a hulladékgyűjtő edényhez csatlakozik, illetve az első frakciószedő szelep mintabeviteli portja a detektorhoz csatlakozik.In a preferred embodiment of the chromatographic purification system of the present invention, the fluid-buffered device comprises at least two fractionation valves that are cascaded such that the waste port of each fractional valve except the last fractional valve is the port of the next fractional valve, connected to a waste bin and the sample input port of the first fractionator valve to the detector.
A szelektálóeszköz célszerűen tartalmaz egy, az előre meghatározott tulajdonság meglétét vizsgáló analizátort is.Preferably, the selection device also includes an analyzer for determining the presence of a predetermined property.
A szelektálóeszköz a mintában lévő komponensek közül célszerűen a legnagyobb kromatográfiás csúcshoz tartozó komponens frakcióját választja le. Lehetséges megoldás azonban az is, ahol a szelektálóeszköz a mintában lévő komponensek közül a legnagyobb kromatográfiás csúcsokhoz tartozó két vagy több komponens frakcióját választja le.Preferably, the selection means separates the fraction of the component belonging to the largest chromatographic peak from the components present in the sample. However, it is also possible that the selection means separates fractions of two or more components belonging to the largest chromatographic peaks from the components present in the sample.
A találmány szerinti kromatográfiás tisztítórendszerben a tisztítási folyamat eredményeként az egy mintából keletkező frakciók száma előre megtervezhető, ezáltal a frakciógyűjtő berendezés kapacitása pontosan méretezhető. Mivel a tisztítási folyamat végén csak a keresett komponens vagy komponensek frakciója van legyűjtve, ezért szükségtelenné válik a frakciók utólagos elemzése és válogatása, ami mind költség, mind idő szempontjából jelentős megtakarítást eredményez.In the chromatographic purification system of the present invention, the number of fractions from a sample as a result of the purification process can be predicted in advance so that the capacity of the fraction collector can be precisely scaled. Because at the end of the purification process, only the component or fraction of components sought is collected, it eliminates the need for subsequent analysis and sorting of the fractions, resulting in significant cost and time savings.
A találmányt a továbbiakban a rajz alapján ismertetjük részletesen. A rajzon:The invention will now be described in more detail with reference to the drawing. In the drawing:
az 1. ábra a találmány szerinti kromatográfiás tisztítórendszer blokkvázlata;Figure 1 is a block diagram of a chromatographic purification system according to the invention;
a 2. ábra a találmány szerinti rendszer szelektálóeszközében alkalmazott kétállású, hatportos frakciószedő szelep felépítését szemlélteti vázlatosan a szelep két lehetséges állapotában; és a 3a-d. ábrák mintánként három frakció legyűjtésére alkalmas szelektálóeszköz három kaszkádkapcsolású frakciószedő szelepét szemléltetik egy minta három legnagyobb csúcshoz tartozó komponenseinek leválasztásakor.Figure 2 illustrates schematically the construction of a two-position, six-port fractional valve used in the system selection device of the present invention in two possible states of the valve; and 3a-d. FIGS. 6A to 5B illustrate three cascade-controlled fractionator valves for selecting three fractions per sample when separating the components of the three largest peaks of a sample.
Az 1. ábra a találmány szerinti 10 kromatográfiás tisztítórendszer blokkvázlatát szemlélteti. Amint azFigure 1 is a block diagram of a chromatographic purification system 10 according to the invention. As it is
1. ábrán látható, a 10 kromatográfiás tisztítórendszer 11 folyadéktovábbító egységet (pumpa), 18 mintabeviteli szelepet (injektor), 12 kromatográfiás oszlopot, 14 detektort, 16 frakciógyűjtő berendezést, 17 hulladékgyűjtő edényt, 20 rendszervezérlő eszközt és 22 szelektálóeszközt tartalmaz. A 22 szelektálóeszköz 24 vezérlőeszközt és legalább egy 30 frakciószedő szelepet tartalmaz. Az 1. ábrán vastag nyilakkal az oldat (minta) áramlási útját, vékony nyilakkal pedig az egyes eszközök közötti kommunikációt jelöltük.In Figure 1, the chromatographic purification system 10 comprises a fluid transfer unit (pump), a sample injection valve (injector) 18, a chromatographic column 12, a detector 14, a fraction collector 16, a waste bin 17, a system control means 22 and a selection means 22. The selection means 22 comprises a control means 24 and at least one fractionation valve 30. In Figure 1, thick arrows indicate the flow of solution (sample) and thin arrows indicate communication between devices.
HU 225 332 Β1HU 225 332 Β1
A 12 kromatográfiás oszlop a 18 mintabeviteli szelepen keresztül bejuttatott tisztítandó mintát fogadja és a mintában lévő különböző komponensek szétválasztását végzi. Ilyen oszlop például Merck cég Purospher STAR RP-18e típusú kromatográfiás oszlopa. A 12 kromatográfiás oszlopból kiáramló oldószer (kromatográfiás eluens) áthalad a 14 detektoron, amely a 22 szelektálóeszköznek olyan jelet küld, amelynek változásából arra lehet következtetni, hogy a 12 kromatográfiás oszlopról a minta valamelyik komponense ürül. A 14 detektor célszerűen UV-detektor, de lehet más alkalmas detektor is, például tömegspektrométer. A 14 detektor jele alapján a 22 szelektálóeszköz felismeri a 12 kromatográfiás oszlopról távozó komponensek által előidézett kromatográfiás csúcsokat, és egy döntési algoritmus eredménye alapján eltárolja vagy kiüríti az észlelt komponenshez tartozó kromatográfiás frakciót. A 22 szelektálóeszköz célszerűen tartalmaz egy vagy több frakció átmeneti tárolására alkalmas folyadékpuffert. Ez a folyadékpuffer célszerűen egy megfelelően méretezett csővezeték vagy edény. Amennyiben a tisztítás célja egyetlen célkomponens frakciójának legyűjtése, akkor a 22 szelektálóeszközben elegendő egyetlen folyadékpuffer alkalmazása. A tisztítási folyamat végén a 20 rendszervezérlő eszköz utasítására a 22 szelektálóeszközből a 16 frakciógyűjtő berendezésbe továbbítjuk a legyűjtött egy vagy több frakciót, és a robotizált 16 frakciógyűjtő berendezés a megfelelő frakciócsészékbe tölti az egyes frakciókat.The chromatographic column 12 receives the sample to be cleaned through the sample inlet valve 18 and separates the various components in the sample. An example of such a column is Merck's Purospher STAR RP-18e chromatography column. The solvent (chromatographic eluent) that flows out of the chromatographic column 12 passes through the detector 14, which sends a signal to the selection means 22, which changes suggest that one of the components of the sample is discharged from the chromatographic column. The detector 14 is preferably a UV detector but may also be other suitable detector such as a mass spectrometer. Based on the detector signal 14, the selection means 22 recognizes the chromatographic peaks generated by the components leaving the chromatographic column 12 and, based on the result of a decision algorithm, stores or empties the chromatographic fraction belonging to the detected component. The selection means 22 preferably comprises a liquid buffer suitable for temporarily storing one or more fractions. This liquid buffer is preferably a suitably sized tubing or vessel. If purification is to collect a fraction of a single target component, a single liquid buffer in the selection means 22 is sufficient. At the end of the purification process, at the instruction of the system control device 20, the collected one or more fractions are transferred from the selection means 22 to the fraction collector 16 and the robotic fraction collector 16 fills each fraction into the appropriate fraction cups.
A találmányt a továbbiakban konkrét példákon keresztül ismertetjük részletesebben, azonban a bemutatásra kerülő példák semmilyen körülmények között nem jelentik a találmány korlátozását.The invention will now be described in more detail by way of specific examples, but the present invention is not to be construed as limiting the invention in any circumstances.
Először az 1. és 2. ábra segítségével olyan kromatográfiás tisztítórendszert mutatunk be, amely minden megtisztítandó mintából a maximális kromatográfiás csúcshoz tartózó komponens - mint célkomponens frakcióját gyűjti le. Szükségesnek tartjuk megjegyezni, hogy ilyen tisztítási folyamat csak akkor végezhető, ha a tisztítandó mintában a célkomponens az összes komponens közül a legnagyobb arányban van jelen. Ez a feltétel azonban a kromatográfiás tisztítás céljából eredően általában teljesül.First, Figures 1 and 2 illustrate a chromatographic purification system that extracts, from each sample to be purified, the fraction of the component remaining at the maximum chromatographic peak as a target component. It will be appreciated that such a purification process can only be performed if the target component in the sample to be purified is present in the highest proportion of all components. However, this condition is generally met for purification by chromatography.
A csúcsokat az UV- 14 detektor jele alapján a 22 szelektálóeszköz figyeli, és csúcs észlelése esetén megvizsgálja, hogy az aktuális csúcs nagyobb-e, mint a 22 szelektálóeszköz folyadékpufferében eltárolt komponenshez tartozó kromatográfiás csúcs. Az összehasonlítást a 22 szelektálóeszköz 24 vezérlőeszköze végzi el. Ha az új komponenshez tartozó csúcs nagyobb, mint a folyadékpufferben lévő kompenenshez tartozó csúcs, akkor a 22 szelektálóeszköz a folyadékpufferből kiüríti az abban eltárolt frakciót a 17 hulladékgyűjtő edénybe, és helyére betölti az új komponens frakcióját. Ha az új komponenshez tartozó kromatográfiás csúcs nem nagyobb a folyadékpufferben eltárolt komponensénél, akkor az új frakció kerül kiürítésre, a folyadékpufferben pedig marad a korábbi frakció. Nyilvánvaló, hogy mivel az első csúcs detektálásakor a folyadékpuffer üres, az első komponens frakciója automatikusan bekerül a folyadékpufferbe.The peaks are monitored by the selection device 22 based on the UV-14 detector signal, and if detected, the current peak is larger than the chromatographic peak belonging to the component stored in the liquid buffer of the selection device 22. The comparison is made by the control means 24 of the selection means 22. If the peak of the new component is larger than the peak of the component in the liquid buffer, the selection means 22 empties the fraction stored therein into the waste bin 17 and fills in place the fraction of the new component. If the chromatographic peak for the new component is not larger than the component stored in the liquid buffer, the new fraction is emptied and the former fraction remains in the liquid buffer. It will be appreciated that since the first peak is detected, the liquid buffer is empty, and the fraction of the first component is automatically included in the liquid buffer.
A frakciószedés során az alábbi paraméterek beállítása szükséges:The following parameters must be set during fraction collection:
1. detektálási küszöbérték, amely alatt a kromatográfiás csúcs magasságát nem vizsgáljuk, vagyis a detektálási küszöbértéknél kisebb csúcsokat automatikusan a 17 hulladékgyűjtő edénybe ürítjük;1. a detection threshold below which the height of the chromatographic peak is not examined, i.e., peaks below the detection threshold are automatically emptied into the waste bin 17;
2. késleltetőhurok késleltetésideje, amely legalább a 20 rendszervezérlő eszköz feldolgozási időtartamának, a 22 szelektálóeszköz processzora által végrehajtott döntési folyamat időtartamának, valamint a folyadékpuffert kezelő eszköz megfelelő pozícióba történő beállítási időtartamának összege;2. a delay loop delay time, which is the sum of at least the processing time of the system control device 20, the decision process of the selection device processor 22, and the adjustment time of the fluid buffer handling device to the appropriate position;
3. folyadékpuffer térfogata, amelyet a célkomponens várható térfogata határoz meg.3. volume of the liquid buffer, which is determined by the expected volume of the target component.
A késleltetőhurok késleltetésideje és a folyadékpuffer térfogata a minta áramlási sebessége és térfogata ismeretében számítható.The latency of the delay loop and the volume of the fluid buffer can be calculated based on the sample flow rate and volume.
A frakciószedést, vagyis az egyes komponensek frakcióinak leválasztását egy, a minta kromatográfiás bevitelére használt, széles körben elterjedt, kétállású, hatportos 30 frakciószedő szelep segítségével végezzük, amelynek felépítése a 2. ábrán látható vázlatos keresztmetszeti nézetben. A 2. ábrán látható 30 frakciószedő szelepnek két állása van; egy hulladékürítő A alaphelyzete és egy frakciószedésre szolgáló B gyűjtőállása.Fraction collection, i.e. separation of the fractions of each component, is performed using a widely used two-position six-port fractional collection valve 30 for chromatographic introduction of the sample, the structure of which is schematically shown in Figure 2. The fractionation valve 30 shown in Figure 2 has two positions; the position A of a dumpster and the collection point B of a fraction collector.
A 30 frakciószedő szelepnek hat 1-6 portja és 34 gyűjtőhurokja van. A 30 frakciószedő szelep megfelelő állásba történő forgatását a 22 szelektálóeszköz 24 vezérlőeszköze vezérli a találmány szerinti működést megvalósító, speciális program alapján. A 14 detektortól érkező mintát a mintabeviteli 4 porton keresztül vezetjük be a 30 frakciószedő szelepbe, a hulladékot pedig a hulladékürítő 5 porton keresztül ürítjük ki a 17 hulladékgyűjtő edénybe. A 34 gyűjtőhurok a 3 és 6 portok között helyezkedik el. A frakciószedés végén a célkomponens frakcióját a 30 frakciószedő szelep 2 portján keresztül továbbítjuk a 16 frakciógyűjtő berendezéshez oly módon, hogy az 1 porthoz csatlakoztatott fecskendőpumpával elegendő térfogatú oldószert töltünk a 34 gyűjtőhurokba, ezáltal a 34 gyűjtőhurokból kitoljuk az abban előzőleg eltárolt frakciót.The fractionation valve 30 has six ports 1-6 and a collection loop 34. Rotation of the fraction collector valve 30 to the correct position is controlled by the control means 24 of the selection means 22 according to a special program for carrying out the operation according to the invention. The sample arriving from the detector 14 is introduced through the sample inlet port 4 into the fractionation valve 30 and the waste is discharged through the waste discharge port 5 into the bin 17. The collecting loop 34 is located between ports 3 and 6. At the end of fraction collection, the fraction of the target component is transferred through port 2 of fractionator valve 30 to fraction collection device 16 by filling a sufficient volume of solvent into collection loop 34 with a syringe pump connected to port 1, thereby expelling the fraction previously stored therein.
A frakciószedés az alábbi módon történik. A 14 detektor jelét a HPLC-módszerben tetszőlegesen időzíthető reléakciók (EVENT jelek) által meghatározott időablakban folyamatosan figyeli a 22 szelektálóeszköz. A 22 szelektálóeszköz 24 vezérlőeszköze minden egyes csúcs detektálásakor összehasonlítja a 34 gyűjtőhurokban lévő komponenshez tartozó csúcsnak a 24 vezérlőeszköz által előzőleg eltárolt magasságát és az újonnan kapott értéket, és ha az új komponenshez tartozó kromatográfiás csúcsot nagyobbnak találja, akkor a 30 frakciószedő szelepet A alaphelyzetből B gyűjtőállásba forgatja, továbbá a korábbi magasságérték helyett az új értéket tárolja el. Miközben a nagyobb csúccsal rendelkező új komponenst B gyűjtőállásban aFraction collection is performed as follows. The signal of the detector 14 is continuously monitored by the selection means 22 in a time window defined by arbitrary timing relay operations (EVENT signals) in the HPLC method. The control means 24 of the selection means 22 compares each peak with the height of the component belonging to the acquisition loop 34 previously stored by the control means 24 and the newly obtained value, and if the chromatographic peak of the new component is found larger, the collection valve B rotates and stores the new value instead of the previous height value. While the new component with the larger vertex in the B collecting position is a
HU 225 332 Β1 porton keresztül betöltjük a 34 gyűjtőhurokba, az abban lévő komponenst az 5 porton keresztül kiürítjük a 17 hulladékgyűjtő edénybe. A 30 frakciószedő szelep a B gyűjtőállásból a korábban említett idő elteltével automatikusan visszatér A alaphelyzetbe. A leválasztott frakció ezt követően a 34 gyűjtőhurokban marad mindaddig, amíg egy nagyobb csúcshoz tartozó komponenst nem detektálunk. Nyilvánvaló, hogy ez esetben a 30 frakciószedő szelep 34 gyűjtőhurokja szolgál folyadékpufferként. A fix hosszúságú 34 gyűjtőhurok miatt a találmány szerinti rendszernek ez a változata csak azonos térfogatú frakciók gyűjtésére alkalmas, amit a kromatográfiás módszerfejlesztésnél figyelembe kell venni.Through port 225 332 Β1, it is loaded into the collecting loop 34 and the component contained therein is discharged through port 5 into the waste collection vessel 17. The fraction collector valve 30 automatically returns from the collection position B to the reset A after the aforementioned time. The separated fraction then remains in the collection loop 34 until a component belonging to a larger peak is detected. Obviously, in this case, the collection loop 34 of the fractionator valve 30 serves as a fluid buffer. Because of the fixed length collecting loop 34, this version of the system of the invention is only suitable for collecting fractions of equal volume, which should be considered when developing chromatographic methods.
Ha az új komponenshez tartozó csúcs nem nagyobb, mint a 34 gyűjtőhurokban lévő komponenshez tartozó csúcs, akkor a 30 frakciószedő szelepet továbbra is alaphelyzetben tartjuk, és a 4 porton keresztül bevezetett, új komponenst tartalmazó oldatot ürítjük az 5 porton keresztül a 17 hulladékgyűjtő edénybe.If the peak for the new component is not larger than the peak for the component in the collection loop 34, the fractionator valve 30 is maintained at its original position and the solution containing the new component introduced through port 4 is discharged through port 5 into the waste bin 17.
A 22 szelektálóeszköz 24 vezérlőeszköze által végzett csúcsmagasságmérés és döntési folyamat időtartama alatt az adott komponenshez tartozó kromatográfiás frakció egy késleltetőhurokban halad, amely úgy van méretezve, hogy a vizsgált komponens akkor érjen a 30 frakciószedő szelep 4 portjához, amikor a döntési folyamat eredménye alapján a 30 frakciószedő szelep már bizonyosan a megfelelő állásban van.During the peak height measurement and decision process performed by the control means 24 of the selection device 22, the chromatographic fraction for that component passes through a delay loop, dimensioned so that the test component reaches port 4 of the fractionator valve 30 when the fraction processor 30 the valve is already in the correct position.
Az imént bemutatott frakciószedésnek köszönhetően a tisztítási folyamat végén a 34 gyűjtőhurokban a kromatogram legnagyobb csúcsához tartozó főkomponens (mint célkomponens) található, melyet a tisztítási folyamat végén a 20 rendszervezérlő eszköz utasítására a 16 frakciógyűjtő berendezésnek továbbítunk a megfelelő frakciótároló csészébe történő ürítés céljából.At the end of the purification process, at the end of the purification process, the main component (as a target component) of the largest peak in the chromatogram is located in the collecting loop and is sent to the fraction collector 16 to discharge to the appropriate fraction storage cup.
Az első példában szereplő berendezés minden mintából egyetlen frakciót gyűjt le, nevezetesen a legnagyobb kromatográfiás csúccsal rendelkező frakciót.The apparatus in the first example collects a single fraction from each sample, namely the fraction having the largest chromatographic peak.
A példában szereplő berendezés azonban kiterjeszthe5 tő úgy, hogy tetszőleges számú legnagyobb csúcshoz tartozó komponens frakcióját gyűjtse le.However, the apparatus in the example can be expanded to collect a fraction of any number of components belonging to the largest peak.
A következő példában röviden bemutatunk egy olyan szelektálóeszközt, amely a három legnagyobb kromatográfiás csúcshoz tartozó frakciót gyűjti le. A há10 rom csúcsot legyűjtő szelektálóeszköz annyiban tér el az egy csúcsot legyűjtő szelektálóeszköztől, hogy egyetlen frakciószedő szelep helyett három kaszkádkapcsolású 41, 42, 43 frakciószedő szelepet tartalmaz. A 41-43 frakciószedő szelepek csatlakoztatási módját a 3a-d. ábrák szemléltetik vázlatosan.The following example briefly illustrates a selection device that collects the fractions belonging to the three largest chromatographic peaks. The three peak pickup means differs from the single peak pickup device in that it contains three cascade-operated fractionator valves 41, 42, 43 instead of a single fractionator. The connection of the 41-43 fractional valves is illustrated in Fig. 3a-d. Figures are schematically illustrated.
Amint a 3a-d. ábrákon látható, az utolsó 43 frakciószedő szelep kivételével mindegyik 41, 42 frakciószedő szelep 5 portja a következő 42, illetve 43 frakciószedő szelep 4 portjához, az utolsó 43 frakciószedő szelepAs shown in Figures 3a-d. 5a, ports 5 of each fractionator valve 41, 42 except port 4 for the next fractionator valve 43 and 43, respectively, except for the last fractionator 43,
5 portja pedig a 17 hulladékgyűjtő edényhez csatlakozik. A továbbiakban a 3a-d. ábrák segítségével egy konkrét példán keresztül mutatjuk be, hogyan kell vezérelni az egyes 41-43 frakciószedő szelepeket a három legnagyobb kromatográfiás csúcshoz tartozó frak25 ció leválasztásához. Az alábbi példában azt az esetet vizsgáljuk, amikor a kromatográfiás oszlopból elsőként a legnagyobb csúcshoz tartozó komponens eluálódik, majd a harmadik legnagyobb csúcshoz tartozó komponens és végül a második legnagyobb csúcshoz tartozó komponens távozik. A példaként tárgyalt esetben a 41-43 frakciószedő szelepek állását az alábbi táblázatban adjuk meg, ahol a fentieknek megfelelően „A” az új vagy egy korábban eltárolt komponenst a 17 hulladékgyűjtő edénybe ürítő alaphelyzetet, „B” pedig a gyűjtő35 állást jelöli.Its 5 ports connect to the 17 waste bins. 3a-d. Figures 3 to 5 show, through a specific example, how to control each fractional valve 41-43 to separate the fractions belonging to the three largest chromatographic peaks. In the following example, the case where the component with the highest peak eluted first, then the component belonging to the third largest peak and finally the component belonging to the second largest peak was eluted from the chromatographic column. In the exemplary case, the position of the fractional valves 41-43 is given in the table below, whereby, as indicated above, "A" represents the initial position for discharging the new or previously stored component into the waste bin 17 and "B" represents the collecting position.
Amint a 3b. ábrán látható, az első kromatográfiás csúcshoz, vagyis esetünkben a legnagyobb csúcshoz 50 tartozó komponens frakcióját a 41 frakciógyűjtő szelep gyűjtőhurokjában tároljuk el. A második csúcshoz, vagyis a 41 frakciószedő szelep gyűjtőhurokjában eltárolt komponens csúcsánál kisebb csúcshoz tartozó komponens frakcióját a 3c. ábrán látható módon elő- 55 szőr a 42 frakciószedő szelep gyűjtőhurokjában tároljuk el. Mivel a harmadik csúcs az elsőként észlelt csúcsnál kisebb, viszont a másodikként észlelt csúcsnál nagyobb, ezért a harmadik csúcshoz tartozó komponens frakcióját a 41-43 frakciószedő szelepek 60As shown in Fig. 3b. The fraction of the component belonging to the first chromatographic peak, i.e., in this case the largest peak, is stored in the collecting loop of the fraction collection valve 41. The fraction of the component belonging to the second peak, that is, to the smaller peak of the component stored in the collection loop of the fractionator valve 41, is shown in Fig. 3c. As shown in FIG. 4A, the first step is to store the hair in the collecting loop of the fractionator valve 42. Since the third peak is smaller than the first peak but larger than the second peak, the fraction of the component belonging to the third peak is measured by fractional valves 41-43.
3d. ábrán látható állása mellett a 42 frakciószedő szelep gyűjtőhurokjába vezetjük be, miközben az eddig ott tárolt frakciót áttöltjük a 43 frakciószedő szelep gyűjtőhurokjába. A folyamat végén a legyűjtött frakciók nagyság szerinti sorrendben lesznek eltárolva az egymást követő 41-43 frakciószedő szelepek gyűjtőhurokjaiban. Szükségesnek tartjuk megjegyezni, hogy több frakciószedő szelep alkalmazása esetén az egyes frakciószedő szelepek eltérő térfogatú gyűjtőhurokkal is rendelkezhetnek, ezáltal lehetővé válik egy adott mintából különböző mennyiségű frakciók leválasztása.3d. 5A, the fraction stored therein is transferred to the collection loop of the fractionator valve 43. At the end of the process, the collected fractions will be stored in order of size in the collecting loops of the consecutive 41-43 fractional valves. It will be appreciated that when multiple fractionation valves are used, each fractionation valve may have a different volume collection loop, thereby allowing the separation of different amounts of fractions from a given sample.
HU 225 332 Β1HU 225 332 Β1
Az adott minta tisztítási folyamatának végén a gyűjtőhurkokban tárolt frakciókat a 41-43 frakciószedő szelepek A alapállása mellett a 16 frakciógyűjtő berendezésbe továbbítjuk. A 3a-d. ábrákon látható elrendezésnél az egymást követő 41-43 frakciószedő szelepek 1, 2 portjai megfelelő módon szintén össze vannak kötve és az egyes frakciókat egymás után továbbítjuk a 16 frakciógyűjtő berendezésbe. Lehetséges azonban olyan elrendezés is, ahol a frakciószedő szelepek 1, 2 portjai nincsenek összekötve és a frakciószedő szelepek gyűjtőhurokjaiban lévő frakciókat egyszerre továbbítjuk a 16 frakciógyűjtő berendezésbe.At the end of the purification process for a given sample, the fractions stored in the collecting loops are transferred to the fraction collection device 16 at the initial position A of the fraction collection valves 41-43. 3a-d. 1 to 2, ports 1, 2 of successive fraction collection valves 41-43 are also connected in an appropriate manner and each fraction is successively fed to fraction collection device 16. However, it is also possible to have an arrangement where the ports 1, 2 of the fractionator valves are not connected and the fractions in the collection loops of the fractionator valves are simultaneously conveyed to the fraction collector 16.
A 22 szelektálóeszköz 24 vezérlőeszközének programozása - a fent bemutatott működés ismeretében rutinfeladat a szakmában jártas szakemberek számára, ezért annak részleteivel a jelen leírásban nem foglalkozunk.Programming the control means 24 of the selection means 22 is a routine task for those of ordinary skill in the art in view of the operation described above, and details thereof are not discussed herein.
A második példában a három legnagyobb csúccsal rendelkező komponens frakcióját legyűjtő szelektálóeszközt mutattunk be. A szakmában jártas szakemberek számára nyilvánvaló, hogy további frakciószedő szelepek beiktatásával hogyan terjeszthető ki a szelektálóeszköz és annak vezérlése tetszőleges számú frakció legyűjtésére. Nyilvánvaló továbbá, hogy a találmány szerinti rendszer nemcsak maximális csúccsal rendelkező komponensek legyűjtésére, hanem például a detektálási küszöbértéket meghaladó legkisebb csúccsal vagy csúcsokkal rendelkező komponensek vagy akár tetszőleges más, előre meghatározott tulajdonságú komponensek legyűjtésére is alkalmas. A találmány szerinti 10 kromatográfiás tisztítórendszer egyik lehetséges kiviteli alakjánál a 22 szelektálóeszköz analizátort is tartalmaz, ezáltal az előre meghatározott tulajdonságok köre tovább szélesíthető, ami a találmány szerinti rendszernek még szélesebb felhasználási kört biztosít a kromatográfiás tisztítás területén.In the second example, a selection means is used to collect a fraction of the components with the three largest peaks. It will be apparent to those skilled in the art how to extend the screening device and its control to include any fraction by adding additional fractionation valves. It will further be appreciated that the system of the invention is capable of harvesting not only components having a maximum peak, but also components having, for example, the smallest peak or peaks above the detection threshold or even any other component having predetermined properties. In one embodiment of the chromatographic purification system 10 of the present invention, the selection means 22 also includes an analyzer, thereby further extending the range of predetermined properties, which provides the system of the present invention with an even wider range of uses in the chromatographic purification system.
A találmány szerinti 10 kromatográfiás tisztítórendszer az eddigieknél ésszerűbb, tervezhető frakciószedést tesz lehetővé, ezáltal támogatja hatékonyabb alkalmazások kidolgozását. Használatával elérhető, hogy a tisztítandó mintából előre meghatározott számú és tulajdonságú komponens, például a maximális kromatográfiás csúccsal rendelkező komponens kerüljön legyűjtésre. Ez különösen a nagy áteresztőképességű, robotizált tisztítási eljárások esetén hasznos, amikor is például 96 mintából 96 tisztított frakció keletkezik. Ennélfogva a frakciók azonosítása a pozíciójuk alapján egyértelműen megoldható, és a tisztítást követően nincs szükség utólagos analitikai mérésekre, valamint a keresett frakciók kiválogatására. További előny, hogy a folyadékgyűjtő berendezés befogadóképességét nem terheli a hagyományos eljárások során legyűjtött minor frakciók tárolásához szükséges göngyöleg.The chromatographic purification system 10 of the present invention allows for more rational, predictable fraction collection, thus supporting the development of more efficient applications. It can be used to collect from the sample to be purified a number of components having a predetermined number and properties, such as a component having a maximum chromatographic peak. This is particularly useful for high throughput robotic purification processes where, for example, 96 purified fractions are generated from 96 samples. Therefore, the identification of fractions based on their position can be clearly resolved and no subsequent analytical measurements or sorting of the desired fractions are required after purification. A further advantage is that the capacity of the liquid collection device is not burdened by the packaging required to store minor fractions collected during conventional processes.
A találmány szerinti rendszer további előnye, hogy a nagy áteresztőképességű minőség-ellenőrzés területén alkalmas a költségesebb on-line HPLC/MS technika kiváltására, ahol a legnagyobb kromatográfiás csúcsot adó vegyület molekulatömege a legyűjtött kromatográfiás főkomponensek utólagos tömegspektroszkópiás (MS) vizsgálatával határozható meg. A két mérés eredménye, vagyis a HPLC-kromatogram és a tömegspektrum jól jellemzi a mintát annak tisztasága és a főkomponens molekulatömege szempontjából, azaz választási lehetőséget teremt a minőségbiztosítás két alapvető kérdése, a tisztaság és szerkezetazonosság között. Ezzel a módszerrel - a szokásos mérési ciklusidők figyelembevételével - egyetlen tömegspektrométerrel több HPLC-rendszer offline tömegspektrometriás detektálása is lényegesen rövidebb idő alatt elvégezhető.A further advantage of the system of the invention is that it is capable of replacing the more expensive on-line HPLC / MS technique in high-throughput quality control, whereby the molecular weight of the compound giving the highest chromatographic peak can be determined by mass spectroscopy (MS) of collected chromatographic principal components. The results of the two measurements, the HPLC chromatogram and the mass spectrum, characterize the sample well in terms of purity and molecular weight of the principal component, ie it provides a choice between the two fundamental issues of quality assurance, purity and structural identity. With this method, offline mass spectrometric detection of several HPLC systems can be performed in a significantly shorter time, taking into account standard measurement cycle times.
Összefoglalva elmondhatjuk, hogy a találmány szerinti 10 kromatográfiás tisztítórendszer révén egy mintából előre meghatározott számú és tulajdonságú frakció gyűjthető le, vagyis a tisztítási folyamat végén keletkező frakciók száma tervezhető, a frakcióknak a komponensekhez való hozzárendelése átlátható és egyértelmű. A találmány szerinti rendszerben nincs szükség előzetes analitikai mérésekre az alkalmazott preparatív kromatográfiás módszer optimalizálásához, vagyis a minták tisztítása előzetes analitikai eredmények felhasználása nélkül is elvégezhető.In summary, the chromatographic purification system 10 of the present invention allows the collection of a predetermined number and fraction of fractions from a sample, i.e., the number of fractions generated at the end of the purification process, the assignment of fractions to the components is transparent and unambiguous. In the system of the invention, no preliminary analytical measurements are required to optimize the preparative chromatographic method used, i.e., purification of the samples can be performed without the use of preliminary analytical results.
Claims (7)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU0401336A HU225332B1 (en) | 2004-06-28 | 2004-06-28 | Chromatographic cleaner system |
| PCT/HU2005/000068 WO2006000840A1 (en) | 2004-06-28 | 2005-06-27 | Chromatography purification system |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU0401336A HU225332B1 (en) | 2004-06-28 | 2004-06-28 | Chromatographic cleaner system |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU0401336D0 HU0401336D0 (en) | 2004-09-28 |
| HUP0401336A2 HUP0401336A2 (en) | 2006-02-28 |
| HU225332B1 true HU225332B1 (en) | 2006-09-28 |
Family
ID=89985332
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0401336A HU225332B1 (en) | 2004-06-28 | 2004-06-28 | Chromatographic cleaner system |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| HU (1) | HU225332B1 (en) |
| WO (1) | WO2006000840A1 (en) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10175209B2 (en) | 2014-11-06 | 2019-01-08 | Waters Technologies Corporation | Liquid flow rate measurement device |
| GB201816610D0 (en) * | 2018-10-11 | 2018-11-28 | Ge Healthcare Bio Sciences Ab | A fraction collection system and method |
| CN115531921B (en) * | 2022-08-26 | 2024-07-16 | 大连依利特分析仪器有限公司 | Device and method for collecting preparative liquid chromatographic fraction |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6685828B2 (en) * | 1999-09-16 | 2004-02-03 | Berger Instruments, Inc. | Automated sample collection in supercritical fluid chromatography |
| WO2002021099A2 (en) * | 2000-09-08 | 2002-03-14 | Waters Investments Limited | Method and apparatus for determining the boundaries of a detector response profile and for controlling processes |
| US6904784B2 (en) * | 2001-02-27 | 2005-06-14 | Teledyne Isco, Inc. | Liquid chromatographic method and system |
-
2004
- 2004-06-28 HU HU0401336A patent/HU225332B1/en not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-06-27 WO PCT/HU2005/000068 patent/WO2006000840A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2006000840A1 (en) | 2006-01-05 |
| HU0401336D0 (en) | 2004-09-28 |
| HUP0401336A2 (en) | 2006-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110832299B (en) | Automated clinical diagnostic system and method | |
| US8775098B2 (en) | Preparative liquid chromatograph system | |
| US6066848A (en) | Parallel fluid electrospray mass spectrometer | |
| CN101871856B (en) | Solid phase extraction and concentration system | |
| US4861488A (en) | Automatic chromatography process | |
| US11959895B2 (en) | Analysis apparatus provided with a plurality of chromatographic apparatuses | |
| US7267796B2 (en) | Preparative liquid chromatograph using plural detectors | |
| US9638677B2 (en) | Chromatograph mass spectrometer | |
| EP1144068A1 (en) | Automated on-line evaporating light scattering detection to quantify isolated fluid sample compounds in microtiter plate format | |
| US20180231510A1 (en) | Separation/purification apparatus | |
| CN106053616B (en) | Preparative separation chromatograph | |
| JP2002202316A (en) | Analyzing system and analyzing method | |
| JP2021521429A (en) | A system for collecting and transporting liquid samples over distances while maintaining the liquid sample segment. | |
| EP3995832A1 (en) | Automatic analysis device | |
| HU225332B1 (en) | Chromatographic cleaner system | |
| US11531038B2 (en) | System for prioritization of collecting and analyzing liquid samples | |
| JP2017181404A (en) | Analysis sample preparation method, maldi-ms sample plate, and analysis method | |
| CN107727875B (en) | Rapid sample introduction method for flow type analytical instrument | |
| US11982655B2 (en) | Analysis apparatus having a plurality of liquid chromatographs and its analysis method | |
| EP3236256A1 (en) | Liquid chromatograph | |
| EP4261536A1 (en) | Method for controlling automated analysis device | |
| US10746709B2 (en) | Chromatograph device | |
| GB2215232A (en) | Automatic chromatography apparatus | |
| JPH08122227A (en) | Rainfall sampling device | |
| WO2004111632A1 (en) | Chromatography separation methods and apparatus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |