HU219507B - Peptides that elicit neutralizing antibodies against genetically divergent hiv-1 strains - Google Patents
Peptides that elicit neutralizing antibodies against genetically divergent hiv-1 strains Download PDFInfo
- Publication number
- HU219507B HU219507B HU9600587A HU9600587A HU219507B HU 219507 B HU219507 B HU 219507B HU 9600587 A HU9600587 A HU 9600587A HU 9600587 A HU9600587 A HU 9600587A HU 219507 B HU219507 B HU 219507B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- virus
- hiv
- peptide
- amino acid
- peptides
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 79
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 53
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 title claims abstract description 21
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 27
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 claims abstract description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 5
- 229940033332 HIV-1 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 46
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 29
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 23
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 23
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 claims description 20
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 16
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims description 15
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims description 12
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims description 12
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims description 12
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims description 12
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims description 11
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 claims description 7
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 claims description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 claims description 5
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 13
- 206010029897 Obsessive thoughts Diseases 0.000 claims 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 claims 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 claims 1
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 abstract description 8
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 abstract description 6
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 abstract description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 15
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 15
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 10
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 7
- PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PJBVXVBTTFZPHJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 5
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 4
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 4
- QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- CNXOBMMOYZPPGS-NUTKFTJISA-N Lys-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CNXOBMMOYZPPGS-NUTKFTJISA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- ZXRQJQCXPSMNMR-XIRDDKMYSA-N Asp-Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N ZXRQJQCXPSMNMR-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 3
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)N HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 102100020999 Argininosuccinate synthase Human genes 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- XFJKRRCWLTZIQA-XIRDDKMYSA-N Asn-Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N XFJKRRCWLTZIQA-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- ICTXFVKYAGQURS-UBHSHLNASA-N Asp-Asn-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O ICTXFVKYAGQURS-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022717 Atypical chemokine receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- VMKCPNBBPGGQBJ-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N VMKCPNBBPGGQBJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282821 Hippopotamus Species 0.000 description 1
- 101000678879 Homo sapiens Atypical chemokine receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108091002531 OF-1 protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101000874347 Streptococcus agalactiae IgA FC receptor Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- AVYVKJMBNLPWRX-WFBYXXMGSA-N Trp-Ala-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 AVYVKJMBNLPWRX-WFBYXXMGSA-N 0.000 description 1
- 101000614028 Vespa velutina Phospholipase A1 verutoxin-1 Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC1=CC=CC=C1N RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 206010042772 syncope Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
A találmány tárgyát a HIV–1 vírus genetikailag eltérő törzseivel ésklinikai izolátumaival szemben neutralizáló ellenanyagok termelődésétkiváltó peptidek képezik, valamint az ezek által kiváltottellenanyagok, továbbá olyan peptid-hordozó kombinációk előállítása,amelyek a fenti peptideket hatékonyan prezentálják az immunrendszerszámára. A találmány tárgyát közelebbről egy HIV–1 vírussal szembenivakcina képezi, valamint az előállítására szolgáló eljárás. Atalálmány tárgyát képező peptidek előnyösen nyálkahártyafelszínekrőlszekretálódó szekréciós ellenanyagok termelődését kiváltó peptidek,melyek a HIV–1 különböző törzseivel és klinikai izolátumaival szembenneut- ralizálóaktivitást mutatnak, és gátolják a HIV–1 vírus általokozott sejtfúziót, és amely peptidek a HIV-BH10-- izolátum gp160-glikoprotein gp41-glikoproteinjében található szekvencia 662–668.pozíciójában (ELDKWAS) vagy 661–668. pozíciójában (LELDKWAS) találhatószekvenciának megfelelő, hét vagy nyolc aminosavból felépülőszekvenciát tartalmaznak, előnyösen idetartoznak a felsoroltszekvenciákkal rendelkező peptidek: ELDKWAS, LELDKWAS, ELDNWAS,ELNKWAS, LELDNWAS, valamint LELNKWAS és ezek homológjai. ŕThe present invention relates to peptides that elicit the production of neutralizing antibodies to genetically distinct strains of the HIV-1 virus and to clinical isolates, and to the preparation of antibodies that elicit them, as well as peptide-carrier combinations that effectively present the above peptides to the immune system. More particularly, the present invention relates to an HIV-1 vaccine and a process for its preparation. Preferably, the peptides of the invention are peptides that induce the production of secretory antibodies secreted from mucosal surfaces, which show neutralizing activity against various strains and clinical isolates of HIV-1, and inhibit HIV-1 virus-induced cell fusion, and which peptides. at position 662-668 (ELDKWAS) or 661-668 of the sequence in its gp41 glycoprotein. (LELDKWAS), preferably comprising peptides having the listed sequences: ELDKWAS, LELDKWAS, ELDNWAS, ELNKWAS, LELDNWAS, and LELNKWAS and homologues thereof. ŕ
Description
A találmány tárgyát a HÍV-1 vírus genetikailag eltérő (divergens) törzseivel és klinikai izolátumaival szemben neutralizáló ellenanyagok termelődését kiváltó peptidek képezik, valamint az ezek által kiváltott ellenanyagok, továbbá olyan peptid-hordozó kombinációk előállítása, amelyek a fenti peptideket hatékonyan prezentálják az immunrendszer számára. A találmány tárgyát közelebbről egy HÍV-1 vírussal szembeni vakcina képezi, valamint az előállítására szolgáló eljárás.FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to peptides that induce the production of neutralizing antibodies to genetically divergent strains and clinical isolates of the HIV-1 virus, and to the antibodies produced by these antibodies, as well as peptide-carrier combinations that effectively present these peptides to the immune system. More particularly, the present invention relates to a vaccine against HIV-1 and a process for its production.
A találmány szerinti megoldás előnyösen alkalmazható HÍV-1-fertőzés megelőzésére és kezelésére.The present invention is preferably used for the prevention and treatment of HIV-1 infection.
A szerzett immundeficiencia-szindróma (AIDS) 1-es típusú humán immundeficiencia-vírussal (HIV-1 vírussal) történt, hosszú ideje folyamatosan fennálló fertőződés késői klinikai megnyilvánulási formája. A folyamatosan fennálló fertőződés során a vírussal és vírussal fertőzött sejtekkel szemben irányuló immunválasznak rendszerint nem sikerül a fertőzés leküzdése. Vakcinák alkalmazásával olyan immunválasz keletkezését válthatjuk ki, amely képes megelőzni a tartós fertőződés létrejöttét vagy képes megelőzni a fertőzés AIDStünetegyüttesbe való átmenetét. A HIV-1 vírus elleni legtöbb vakcinázási stratégia a vírus gplóO elnevezésű felszíni glikoproteinjével szemben irányul, melyet a gpl20- és gp41-glikoproteinek építenek fel, és amely a vírusnak a CD4-sejtreceptorhoz történő kötődéséért és az azt követően történő fúzió kiváltásáért felelős.Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) is a late clinical manifestation of a long-standing infection with human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1 virus). During ongoing infection, the immune response to the virus and cells infected with the virus usually fails to overcome the infection. Vaccines can be used to elicit an immune response that is capable of preventing the formation of a lasting infection or of preventing the infection from entering the AID Strain. Most vaccination strategies against the HIV-1 virus are directed against the viral surface glycoprotein gploO, which is constructed by the gp120 and gp41 glycoproteins, which is responsible for binding the virus to and subsequently inducing fusion to the CD4 cell receptor.
A gpl60-glikoproteinnel kapcsolatban azonban több olyan jelenséget figyeltek meg, amely a teljes gplóO-glikoprotein vagy gpl20-glikoprotein immunogénként történő alkalmazása ellen szól. In vitro kísérletek szerint a gpl20 és gpl20-specifikus ellenanyagok közti szinergizmus gátolja a humán T-sejt-aktiválást [Mittler és munkatársai: Science 245, 1380 (1989)]. Ezenkívül a gplóO számos antigénhatású doménjéről ismeretes, hogy olyan ellenanyagok termelődését váltják ki, amelyek súlyosbítják a HIV-1-fertőzést [Jiang és munkatársai: J. Exp. Med. 174, 1557 (1991)].However, several phenomena have been observed with regard to gp160 glycoprotein, which object to the use of the whole gp1O-glycoprotein or gp120-glycoprotein as immunogen. In vitro experiments have shown that synergism between gp120 and gp120 specific antibodies inhibits human T cell activation (Mittler et al., Science 245: 1380 (1989)). In addition, several antigenic domains of gploO are known to induce the production of antibodies that exacerbate HIV-1 infection (Jiang et al., J. Exp. Med. 174, 1557 (1991)).
Immunogénként szintetikus peptidek alkalmazása számos előnnyel jár. A szintetikus peptidek által kiváltott ellenanyagok előre meghatározott specifitással rendelkeznek, és vírusok esetében a peptideket úgy választhatjuk meg, hogy azok a virionok felszínén található struktúrákat képviseljenek. A szintetikus peptidek jelentősége abban rejlik továbbá, hogy azok olyan ellenanyagválaszt képesek kiváltani, amely normális feltételek mellett nem figyelhető meg. Lehetséges például olyan neutralizáló ellenanyagok termelődésének kiváltása, amelyek szélesebb reaktivitással rendelkeznek, mint a teljes protein által kiváltott ellenanyagok [Green és munkatársai: Cell 28, 477 (1982)].The use of synthetic peptides as immunogens has several advantages. Antibodies induced by synthetic peptides have predetermined specificity, and in the case of viruses, peptides can be selected to represent structures on the surface of virions. The importance of synthetic peptides also lies in their ability to elicit an antibody response that would not be observed under normal conditions. For example, it is possible to induce the production of neutralizing antibodies that are more reactive than antibodies raised by whole protein (Green et al., Cell 28, 477 (1982)).
A HIV-1-Illb jelzésű HIV-l-izolátumból származó gpl20-glikoprotein V3-hurokrégiójának egy részét tartalmazó peptidről kimutatták továbbá, hogy olyan ellenanyagok termelődését váltja ki, amelyek csimpánzokban az azonos HIV-l-izolátummal történő kísérletes fertőzéssel szemben védettséget hoznak létre [Emini és munkatársai: Natúré 355, 728 (1992)].A peptide containing part of the V3 loop region of gp120 glycoprotein derived from HIV-1-IIIb has also been shown to induce the production of antibodies that confer protection in chimpanzees against experimental infection with the same HIV-1 isolate [ Emini et al., 1992, Nat. 355, 728].
Mivel a szintetikus peptidek önmagukban gyenge immunogenitással rendelkeznek, azokat olyan molekulákhoz kell kapcsolnunk, amelyek adjuvánshatással bírnak, mint például a tetanusz-toxoid vagy a kürtőscsigahemocianin [Bittle és munkatársai: Natúré 298, 30 (1982)]. Egy másik lehetőség szerint kisméretű peptideket fúziós proteinekként klónozhatunk Schizostoma japonicum glutation-S-transzferázzal [Fikrig és munkatársai: Science 250, 553 (1990)].Because synthetic peptides themselves have poor immunogenicity, they must be coupled to molecules that have adjuvant activity, such as tetanus toxoid or hippopotamus hemocyanin (Bittle et al., 1982, Natur. 298, 30). Alternatively, small peptides may be cloned as fusion proteins by Schizostoma japonicum glutathione S-transferase (Fikrig et al., Science 250: 553-553 (1990)).
Ezenkívül immunogén vektorokként vírusokat, például poliovírust vagy influenzavírust alkalmazhatunk. Hepatitis-B vírus felületi antigénből (HBsAg), Herpes simplex vírus glikoprotein-D-ből és influenzavírus- hemagglutíninból származó szekvenciákat tartalmazó rekombináns vacciniavírussal beoltott nyulakban mind a három idegen antigénnel szemben ellenanyagok termelődtek [Perkus és munkatársai: Science 229, 981 (1985)]. Továbbá HIV-1 vírus gp41-glikoproteinjéből származó epitópot expresszáló kiméra-poliovírus alkalmazásával sikerült nyulakban HIV-1 vírussal szemben neutralizáló ellenanyagok termelődését kiváltani [Evans és munkatársai: Natúré 339, 385 (1989)].In addition, viruses such as poliovirus or influenza virus may be used as immunogenic vectors. Hepatitis B virus surface antigen (HBsAg), Herpes simplex virus glycoprotein D, and influenza virus haemagglutinin vaccinated rabbits vaccinated with rabbits vaccinated with all three foreign antigens [Perkus et al., 1985] . Furthermore, the use of a chimeric polyovirus expressing an epitope derived from the gp41 glycoprotein of the HIV-1 virus has been shown to induce production of neutralizing antibodies against HIV-1 in rabbits (Evans et al., 1989, Natur. 339, 385).
Legújabban in vitro mutagenezises eljárással lehetségessé vált az influenzavírus genomjának megváltoztatása [Enami és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 3802 (1990)]. Ezzel a technikával sikerült stabil, attenuált influenza-A-vírust előállítani [Muster és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 5177 (1991)].Recently, in vitro mutagenesis has made it possible to modify the influenza virus genome [Enami et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 3802 (1990)]. This technique produced a stable, attenuated influenza A virus [Muster et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 5177 (1991)].
Ebben a vonatkozásban, az influenzavírus alkalmazásának egyik előnye az, hogy számos variáns áll rendelkezésre, amely ismételt vakcinázást tesz lehetővé. Ezenkívül az influenzavírus erős szekretoros és celluláris immunválaszt vált ki, ami egy anti-HIV-1-vakcinázási eljárás szempontjából előnyös lehet.In this regard, one of the advantages of using influenza virus is the availability of a number of variants that allow repeated vaccination. In addition, the influenza virus elicits a strong secretory and cellular immune response, which may be beneficial for an anti-HIV-1 vaccination procedure.
A találmány tárgyát peptidszekvenciák képezik, amelyek a teljes gplóO-glikoprotein környezetében csak minimális immunogenitással rendelkeznek, és amely peptidszekvenciák alkalmazásával emlősökben HIV-1 vírus különböző törzseivel és/vagy klinikai izolátumaival szemben neutralizáló aktivitást mutató ellenanyagok és/vagy a HIV-1 vírus által okozott sejtfúziót gátló ellenanyagok termelődése váltható ki.The present invention relates to peptide sequences which have only minimal immunogenicity in the environment of the whole gploO-glycoprotein and which, using peptide sequences, exhibit neutralizing activity against various strains and / or clinical isolates of HIV-1 virus in mammals and / or by HIV-1 virus. production of inhibitory antibodies.
A találmány tárgyát képezik továbbá nyálkahártyák felszínéről szekretálódó és HIV-1 vírussal szemben, valamint ilyen vírussal fertőzött sejtekkel szemben irányuló szekretoros ellenanyagok termelődésének kiváltására szolgáló eljárások. A találmány szerinti megoldásban abból a feltételezésből indultunk ki, hogy nyálkahártyaszövetekben anti-HIV-1 IgA-ellenanyagok termelődésének kiváltása hatásos eszköznek fog bizonyulni - különösen HIV-1-fertőzés szempontjából veszélyeztetett egyénekben - a fertőzés profilaxisában és megelőzésében, mivel számos vírusfertőzés, ezen belül a HIV-1-fertőzés, a légutak, a gyomor-bél rendszer és a genitális traktus nyálkahártyaszövetein keresztül terjed.The invention also relates to methods for inducing the production of secretory antibodies directed against mucosal surfaces and directed against HIV-1 virus and cells infected with such virus. The present invention was based on the assumption that inducing the production of anti-HIV-1 IgA antibodies in mucosal tissues would be an effective tool in the prophylaxis and prevention of infection, particularly in individuals at risk of HIV-1 infection, since many viral infections, including It spreads through mucosal tissues of HIV-1, the respiratory tract, the gastrointestinal tract, and the genital tract.
Meglepő módon azt találtuk, hogy az ismert 2F5 jelű humán monoklonális anti-HIV-1 IgG3-ellenanyag által felismert, IgA-immunválaszt kiváltani nem képes ELDKWA epitóp kismértékű módosításával olyan antigénhatású peptidek állíthatók elő, melyek képesek ki2Surprisingly, it has been found that minor modifications of the ELDKWA epitope recognized by the known human monoclonal anti-HIV-1 IgG 3 antibody, which is unable to elicit an IgA immune response, can produce antigenic peptides capable of producing 2
HU 219 507 Β váltani nyálkahártyaszövetekben az anti-HIV-1 IgA-ellenanyagok termelődését.EN 219,507 Β to switch the production of anti-HIV-1 IgA antibodies in mucosal tissues.
A találmány célkitűzéseit úgy valósítottuk meg, hogy hét-nyolc aminosavból álló, kisméretű peptideket állítottunk elő kémiai szintézissel vagy mikrobiológiai eljárások alkalmazásával - a peptidek előnyösen az alábbi aminosavszekvenciákat kódoló nukleinsav-szekvenciákból származtak: Glu Leu Asp Lys Trp Alá Ser (=ELDKWAS az egybetűs kód szerint), Leu Glu Leu Asp Lys Trp Alá Ser (LELDKWAS), Glu Leu Asn Lys Trp Alá Ser (ELNKWAS), Leu Glu Leu Asn Lys Trp Alá Ser (LELNKWAS), Glu Leu Asp Asn Trp Alá Ser (ELDNWAS) vagy Leu Glu Leu Asp Asn Trp Alá Ser (LELDNWAS).The objects of the present invention have been achieved by the production of small peptides of seven to eight amino acids by chemical synthesis or by microbiological methods, preferably derived from nucleic acid sequences encoding the following amino acid sequences: Glu Leu Asp Lys TrpKaA Ser according to), Leu Glu Leu Asp Lys Trp Al Ser (LELDKWAS), Glu Leu Asn Lys Trp Al Ser (ELNKWAS), Leu Glu Leu Asn Lys Trp Al Ser (LELNKWAS), Glu Leu Asp Asp Trp Al Ser (ELDNWAS) or Leu Glu Leu Asp Asn Trp Alá Ser (LELDNWAS).
A fenti hat aminosavszekvencia legalább egyikét, előnyösen mind a hatot (a továbbiakban „az említett hat ASS-t”) hatékonyan prezentálhatjuk az immunrendszer számára abból a célból, hogy HIV-1 törzsekkel szemben neutralizálóaktivitást mutató és/vagy az ilyen vírusok által okozott sejtfúziót gátló ellenanyagok termelődését váltsuk ki.At least one of the above six amino acid sequences, preferably all six (hereinafter referred to as "the six ASSs"), may be effectively presented to the immune system for the purpose of exhibiting neutralizing activity against HIV-1 strains and / or inhibiting cell fusion caused by such viruses. trigger the production of antibodies.
A találmány szerinti megoldás fő célját egy olyan ígéretes anti-HIV-1-vakcina előállítása képezi, amelyik a találmány szerinti peptidek legalább egyikét, előnyösen mind a hat peptid keverékét tartalmazó készítményen alapul. Az alábbiakban ismertetjük a találmány specifikus sajátságait és előnyös megvalósítási módjait.The main object of the present invention is to provide a promising anti-HIV-1 vaccine based on a composition comprising at least one of the peptides of the invention, preferably a mixture of all six. The specific features and preferred embodiments of the invention will now be described.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint a 2F5 jelzésű humán monoklonális ellenanyag (a 2F5-hibridóma-sejtvonalból származó ellenanyag, PHLS nyilvántartási szám: 90091704; letétbe helyezve: 1990/09/17) epitópszekvenciáját meghatározó Glu Leu Asp Lys Trp Alá (ELDK.WA) aminosavszekvenciát Ser, vagy Leu és Ser aminosavakkal kapcsoltuk össze - amelyek a 2F5-epitópot meghatározó gp41glikoproteinben az ELDKWA-szekvencia közvetlen szomszédságában találhatók - így kaptuk a Glu Leu Asp Lys Trp Alá Ser (ELDKWAS) és a Leu Glu Leu Asp Lys Trp Alá Ser (LELDKWAS) peptidszekvenciákat, majd azokat hordozómolekulába, nevezetesen az influenzavírus-hemagglutinin (HA) B jelzésű antigénhatású helyére inszertáltuk.In a preferred embodiment of the invention, the Glu Leu Asp Lys Trp Ala (ELDK.WA), which determines the epitope of the human monoclonal antibody 2F5 (antibody derived from the 2F5 hybridoma cell line, PHLS accession number 90091704; deposited: 17/09/1990). ) with the Ser or Leu and Ser residues located in the gp41 glycoprotein defining the 2F5 epitope in the immediate vicinity of the ELDKWA sequence to give Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser (ELDKWAS) and Leu Llu Glu Le (LELDKWAS) peptide sequences and then inserted into a carrier molecule, namely the B antigen binding site of influenza virus hemagglutinin (HA).
Az idegen, ELDKWAS vagy LELDKWAS aminosavszekvenciákat hordozó módosított HA jelű „kiméra” fúziós proteinek alkalmazásukat követően, mely előnyösen injektálással történik, igen hatékonynak bizonyultak emlős immunrendszere, elsősorban ember immunrendszere számára prezentált ELDKWAS és LELDKWAS aminosavszekvenciákkal szembeni ellenanyagok termelődésének kiváltásában. A fenti eljárással kapott ellenanyagok neutralizálóaktivitást mutatnak HIV-1 vírus különböző törzseivel és/vagy klinikai izolátumaival szemben.Following the use of modified HA "chimeric" fusion proteins carrying the foreign ELDKWAS or LELDKWAS amino acid sequences, preferably by injection, they have been shown to be very effective against the ELDKWAS and LELDKWAS amino acid residues produced by the mammalian immune system, particularly human. Antibodies obtained by the above method exhibit neutralizing activity against various strains and / or clinical isolates of HIV-1 virus.
Kiderült azonban, hogy a HIV-1 ismert polimorfizmusának következtében még a gp41 igen konzervált (L)ELDKWAS aminosavszekvenciáján belül is vírusmutációk jöhetnek létre, amely szekvencia megfelel a HIV-1 BH10-izolátum 661-668. (LELDKWAS) vagy 662-668. (ELDKWAS) aminosavpozícióinak. A leírásban használt nukleotid- és aminosavszámozás a HIV-1However, it has been found that, due to the known HIV-1 polymorphism, viral mutations can occur within the highly conserved (L) ELDKWAS amino acid sequence of gp41, which corresponds to HIV-1 BH10 isolate 661-668. (LELDKWAS) or 662-668. (ELDKWAS). The nucleotide and amino acid numbers used herein are HIV-1
BH10-izolátum gpl60-glikoproteinjének „Los Alamos”adatbázis szerinti számozásának felel meg [Humán Retrovíruses and AIDS (1992), szerkesztők: Myers G., Korber B., Berzofsky J. A., Smith R. F. és Pavlakis G. N.: „A Compilation and Analysis of Nucleic Add and Amino Add Sequences” Theoretical Biology and Biophysics Group, los Alamos National Laboratory, NM (USA)]. A mutációk különösen a fenti szekvencia közepén található Asp (D) és/vagy Lys (K) aminosavakat érintették, ezáltal csökkentették a vírus érzékenységét a 2F5-epitópot hordozó ellenanyagokkal történő neutralizációval szemben. A vírusnak ez a fajta nemkívánatos, neutralizációt elkerülő mechanizmusa sikeresen legyőzhető a találmány szerinti peptidek alkalmazásával, melyekben vagy az Asp (D), vagy a szomszédos Lys (K) aminosavakat aszparaginnal (N) helyettesítettük.Corresponds to the "Los Alamos" database numbering of the gp160 glycoprotein of BH10 isolate [Human Retroviruses and AIDS (1992), edited by G. Myers, B. Korber, B. Berzofsky, Smith RF and G. G. Pavlakis, "Compilation and Analysis of Nucleic Add and Amino Add Sequences, ”Theoretical Biology and Biophysics Group, Los Alamos National Laboratory, NM (USA)]. In particular, the mutations affected the Asp (D) and / or Lys (K) amino acids in the middle of the above sequence, thereby reducing the sensitivity of the virus to neutralization with antibodies bearing the 2F5 epitope. This undesired neutralization mechanism of the virus can be successfully overcome by using the peptides of the invention in which either Asp (D) or neighboring Lys (K) amino acids are replaced with asparagine (N).
A találmány szerinti hat peptid legalább egyikének, előnyösen mind a hat peptid keverékének alkalmazásával gyógyászati készítményt állíthatunk elő HIV-1 vírus különböző törzseivel és/vagy klinikai izolátumaival szemben neutralizálóaktivitást mutató ellenanyagok és/vagy a HIV-1 vírus által okozott sejtfúziót gátló ellenanyagok termelődésének kiváltására.By using at least one of the six peptides of the invention, preferably a mixture of all six peptides, a pharmaceutical composition can be used to induce the production of antibodies that have neutralizing activity against various strains and / or clinical isolates of HIV-1 and / or antibodies to cell fusion caused by HIV-1.
A találmány egy másik megvalósítási módja szerint ugyanezeket a peptideket alkalmazhatjuk egyenként vagy az említett peptidek legalább egy másikával alkotott elegyben gyógyászati készítmény előállítására, emlősnek történő, előnyösen intranazális (orron keresztül történő) alkalmazást követően nyálkahártyák felszínéről szekretálódó anti-HIV-1 IgA-ellenanyagok termelődésének kiváltása céljából.In another embodiment of the present invention, the same peptides may be used alone or in a mixture of at least one of said peptides for the preparation of a pharmaceutical composition for inducing the production of anti-HIV-1 IgA antibodies secreted from the mucosal surface following administration to a mammal, preferably by nasal administration. for the purpose.
A találmány egy további megvalósítási módja szerint az említett hat peptid legalább egyikét hordozóhoz kötjük. Ilyen hordozó lehet például vírus, előnyösen attenuált és/vagy rekombináns formában. Előnyösen influenzavírust, baculovírust vagy vacciniavírust alkalmazhatunk. A kisméretű peptidek hordozóhoz, például vírusproteinhez vagy teljes vírushoz történő kötése, a fenti kiméra peptid-hordozó kombinációk vagy kiméra fúziós proteinek immunrendszer számára történő prezentálását követően fokozza az ellenanyag-termelődés hatékonyságát.In another embodiment of the invention, at least one of said six peptides is linked to a carrier. Such a carrier may be, for example, a virus, preferably in attenuated and / or recombinant form. Influenza virus, baculovirus or vaccinia virus are preferably used. Binding of small peptides to a carrier, such as a viral protein or whole virus, upon presentation of the above chimeric peptide-carrier combinations or chimeric fusion proteins to the immune system enhances the efficiency of antibody production.
Különösen előnyös a fenti peptidek vírusproteinhordozóval alkotott fúziós proteinekként történő alkalmazása, amely proteinekben a találmány szerinti aminosavszekvenciák legalább egyike a vírus-hordozóprotein legalább egy részét helyettesíti, vagy a vírusprotein legalább egyik antigénhatású helyére van inszertálva. Ez a sajátság tehát fontos megvalósítási módot képvisel. A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint, az említett vírusprotein az influenzavírus-hemagglutinin (HA), az influenzavírus-neuraminidáz (NA), vagy a Hepatitis-B vírus felületi antigénje. A találmány egy további megvalósítási módja szerint az - előnyösen rekombináns - baculovírusból vagy vacciniavírusból származhat.It is particularly preferred to use the above peptides as fusion proteins with a viral protein carrier in which at least one of the amino acid sequences of the invention replaces at least a portion of the viral carrier protein or is inserted into at least one antigenic site of the viral protein. This feature therefore represents an important embodiment. In a preferred embodiment of the invention, said viral protein is influenza virus haemagglutinin (HA), influenza virus neuraminidase (NA), or surface antigen of hepatitis B virus. In another embodiment of the invention, it may be derived, preferably recombinant, from baculovirus or vaccinia virus.
A találmány tárgyát képezi továbbá a találmány szerinti, hét vagy nyolc aminosavból álló peptidek bármelyikének és/vagy peptid-hordozó kombinációk vagy fúziós proteinek alkalmazása gyógyászati készítményekThe invention further relates to the use of any of the seven or eight amino acid peptides of the invention and / or peptide-carrier combinations or fusion proteins in pharmaceutical compositions.
HU 219 507 Β előállítására HIV-1 vírus különböző törzseivel és/vagy klinikai izolátumaival szemben neutralizálóaktivitást mutató ellenanyagok és/vagy a HIV-1 vírus által okozott sejtfúziót gátló ellenanyagok termelődésének kiváltására vagy indukálására. Közelebbről, a találmány tárgyát képezi a fent említett peptidek legalább egyikén, előnyösen mind a hat elegyén és/vagy az említett hat peptid hordozóhoz kötött változatain alapuló hatékony vakcina előállítása HIV-1-fertőzés szempontjából veszélyeztetett egyének megelőző kezelésére és/vagy HÍV-1 vírussal fertőzött betegek terápiás célú kezelésére, különösen a fertőzés AIDS-szindrómába történő átmenetének megakadályozására.EN 219,507 Β to induce or induce the production of antibodies that have neutralizing activity against various strains and / or clinical isolates of the HIV-1 virus and / or antibodies that inhibit cell fusion caused by the HIV-1 virus. In particular, the invention relates to the preparation of an effective vaccine based on at least one, preferably a mixture of all six and / or carrier variants of said six peptides, for the prophylactic treatment of individuals at risk of HIV-1 infection and / or HIV infection. treatment of patients for therapeutic purposes, in particular to prevent the transmission of infection to AIDS syndrome.
A találmány további előnyös megvalósítási módja szerint a találmány szerinti hat peptidet és/vagy hordozóhoz kötött hat peptidet olyan gyógyászati készítmények előállítására és gyártására alkalmazzuk, melyek - az emlős immunrendszerének történő prezentálást követően - az állat vagy humán beteg nyálkahártyáinak felületéről anti-HIV-1 IgA-ellenanyagok szekretálódásának megindításához vezetnek. Ebben az esetben az intranazális (orron át történő) beadás előnyös.In a further preferred embodiment of the invention, the six peptides and / or the carrier peptides of the invention are used for the preparation and manufacture of pharmaceutical compositions which, upon presentation to the mammalian immune system, contain anti-HIV-1 IgA from the mucosal surface of the animal or human. lead to the secretion of antibodies. In this case, intranasal (nasal) administration is preferred.
Következésképp a találmány szerinti hat peptid és/vagy a találmány szerinti peptid-hordozó kombinációk alkalmazhatók HIV-1-fertőzés szempontjából veszélyeztetett egyének profilaktikus és megelőző kezelésére felhasználható gyógyászati készítmények előállítására is.Consequently, the six peptides of the invention and / or the peptide-carrier combinations of the invention may also be used in the preparation of pharmaceutical compositions for the prophylactic and prophylactic treatment of individuals at risk of HIV-1 infection.
Úgy tűnik, a találmánynak ez a közelebbi sajátsága azt a reményt keltheti, hogy a találmány szerinti eljárással nyálkahártyafelszíneken anti-HIV-1-specifikus, szekretoros IgA-ellenanyagok termelődésének kiváltásával olyan, orvosi gyakorlatban alkalmazható eljáráshoz jutunk, melynek alkalmazásával már az emlős szervezetébe történő bejutásuk legelső állomásnál hatékony támadás éri a betolakodó vírusokat. Feltehetően a HIV-1 vírussal fertőzött betegek kezelésére korábbiakban alkalmazott eljárások legalább részben azért nem nyújtottak védelmet a betegséggel szemben, mivel a vírust elsősorban a véráramban kellett elérni, túl késői stádiumban, azaz a vírusnak a humorális rendszerben történő nagymértékű elteijedését követően.This particular feature of the invention seems to give rise to the hope that the method of the present invention will provide a method of medical use that can be introduced into the mammalian body by inducing the production of anti-HIV-1-specific secretory IgA antibodies on mucosal surfaces. the very first station is attacked effectively by invading viruses. Presumably, the prior art methods used to treat patients infected with HIV-1 did not protect against the disease, at least in part because the virus had to be reached primarily in the bloodstream, at a late stage, i.e., after the virus had been extinct in the humoral system.
A találmány tárgyát képezik továbbá HIV-1-neutralizáló aktivitást mutató és HIV-1 vírus által kiváltott sejtfúziót gátolni képes ellenanyagok, melyek termelődése az említett hat peptidek egyikével kiváltható.The present invention also provides antibodies having HIV-1 neutralizing activity and inhibiting HIV-1 virus-induced cell fusion, the production of which can be induced by one of the six peptides.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint az említett ellenanyag szekretoros ellenanyag, előnyösen anti-HIV-1 IgA-ellenanyag, és előnyösen nyálkahártyafelszínekről szekretálódik.In a preferred embodiment of the invention, said antibody is a secretory antibody, preferably an anti-HIV-1 IgA antibody, and is preferably secreted from mucosal surfaces.
A találmány tárgyát képezi továbbá a hat peptid bármelyikének előállítására szolgáló eljárás mikrobiológiai vagy kémiai módszerek alkalmazásával.The present invention also provides a process for the preparation of any of the six peptides using microbiological or chemical methods.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint a találmány szerinti hat peptidet kémiai úton szintetizáljuk standard biokémiai eljárásokkal, előnyösen „Applied Biosystems 431A Peptide Synthesizer” készülék alkalmazásával.In a preferred embodiment of the invention, the six peptides of the invention are chemically synthesized by standard biochemical methods, preferably using an Applied Biosystems 431A Peptide Synthesizer.
A találmány egy további megvalósítási módja szerint a fenti aminosavszekvenciákat mikrobiológiai eljárásokkal kapjuk meg, mely eljárás szerint a felsoroltak közül valamelyiket tartalmazó nukleotidszekvenciát:In another embodiment of the invention, the above amino acid sequences are obtained by microbiological methods, wherein the nucleotide sequence comprises any of the following:
a) a találmány szerinti hat peptid egyikének megfelelő nukleotidszekvenciát;a) a nucleotide sequence corresponding to one of the six peptides of the invention;
b) az (a) pont szerinti nukleotidszekvenciák egyikével hibridizálódni képes nukleotidszekvenciát;b) a nucleotide sequence capable of hybridizing to one of the nucleotide sequences of (a);
c) az (a) pont szerinti nukleotidszekvenciák egyikéből a genetikai kód degenerációja alapján következtetett nukleotidszekvenciát;c) a nucleotide sequence deduced from one of the nucleotide sequences of (a) based on the degeneracy of the genetic code;
gazdaszervezet genomjába inszertáljuk, majd szokásos mikrobiológiai tenyésztési technikák alkalmazásával a genomot expresszáltatjuk, és legalább egy, előnyösen több, találmány szerinti peptidet izolálunk.inserting it into the host genome, expressing the genome using standard microbiological culture techniques and isolating at least one, preferably more, peptide of the invention.
A találmány egy megvalósítási módja szerint, kiméra fúziós proteineket vagy peptid-hordozó kombinációkat állíthatunk elő, mely eljárásban a találmány szerinti hat peptid aminosavszekvenciája közül valamelyiket kémiai vagy mikrobiológiai eljárással hordozóhoz, előnyösen vírushoz vagy vírusproteinhez kötjük.In one embodiment of the invention, chimeric fusion proteins or peptide-carrier combinations can be prepared by binding one of the amino acid sequences of the six peptides of the invention to a carrier, preferably a virus or a viral protein, by chemical or microbiological process.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint a találmány szerinti hat peptidet mikrobiológiai eljárással kapcsoljuk a hordozóhoz, előnyösen vírushoz vagy vírusproteinhez, mely eljárás szerint a felsoroltak közül valamelyik nukleotidszekvenciát:In a preferred embodiment of the invention, the six peptides of the invention are coupled to a carrier, preferably to a virus or viral protein, by a microbiological method, which method comprises one of the nucleotide sequences listed below:
a) a találmány szerinti hat peptid egyikének megfelelő nukleotidszekvenciát;a) a nucleotide sequence corresponding to one of the six peptides of the invention;
b) az (a) pont szerinti nukleotidszekvenciák egyikével hibridizálódni képes nukleotidszekvenciát;b) a nucleotide sequence capable of hybridizing to one of the nucleotide sequences of (a);
c) az (a) pont szerinti nukleotidszekvenciák egyikéből a genetikai kód degenerációja alapján következtetett nukleotidszekvenciát;c) a nucleotide sequence deduced from one of the nucleotide sequences of (a) based on the degeneracy of the genetic code;
a hordozó aminosavszekvenciájának megfelelő nukleotidszekvenciához kapcsoljuk, az összekapcsolt nukleotidszekvenciákat gazdaszervezetbe juttatjuk, az öszszekapcsolt nukleotidszekvenciákat szokásos mikrobiológiai technikákkal expresszáltatjuk, majd legalább egy, előnyösen több, hordozóhoz kötött, találmány szerinti peptidet izolálunk.coupling the linked nucleotide sequences to a host, expressing the linked nucleotide sequences by conventional microbiological techniques, and isolating at least one, preferably more, carrier-linked peptide of the invention.
A találmány egy további megvalósítási módja szerint a találmány szerinti hat peptidet olyan eljárással kapcsoljuk a hordozóhoz, előnyösen vírushoz vagy vírusproteinhez, mely eljárásban a felsorolt nukleotidszekvenciák legalább egyikét:In another embodiment of the invention, the six peptides of the invention are coupled to a carrier, preferably a virus or viral protein, by a method comprising at least one of the nucleotide sequences listed:
a) a találmány szerinti hat peptid egyikének megfelelő nukleotidszekvenciát;a) a nucleotide sequence corresponding to one of the six peptides of the invention;
b) az (a) pont szerinti nukleotidszekvenciák egyikével hibridizálódni képes nukleotidszekvenciát;b) a nucleotide sequence capable of hybridizing to one of the nucleotide sequences of (a);
c) az (a) pont szerinti nukleotidszekvenciák egyikéből a genetikai kód degenerációja alapján következtetett nukleotidszekvenciát;c) a nucleotide sequence deduced from one of the nucleotide sequences of (a) based on the degeneracy of the genetic code;
egy hordozóként szolgáló vírusprotein aminosavszekvenciájának megfelelő nukleotidszekvenciához kapcsoljuk, ezáltal az a vírusprotein aminosavszekvenciájának megfelelő nukleotidszekvencia legalább egy részét helyettesíti, vagy az említett szekvencia legalább egy olyan helyére inszertálódik, amelyik a vírusprotein antigénhatású helyének felel meg.linked to a nucleotide sequence corresponding to the amino acid sequence of a viral protein serving as a carrier, thereby replacing or inserting at least a portion of the nucleotide sequence corresponding to the amino acid sequence of the viral protein corresponding to the antigenic site of the viral protein.
A találmány egy közelebbi megvalósítási módja szerint a felsorolt vírusproteinek valamelyikét alkalmazzuk: influenzavírus-hemagglutinin, influenzavírus-neu4In a further embodiment of the invention, one of the viral proteins listed is used: influenza virus hemagglutinin, influenza virus neu4
HU 219 507 Β raminidáz és hepatitis-B vírus felületi antigén, egy másik jellemző megvalósítási mód szerint gazdaszervezetként influenzavírust, baculovírust vagy vacciniavírust alkalmazunk - valamennyit előnyösen rekombináns formában.In another embodiment, the host is a flu virus, a baculovirus, or a vaccinia virus, preferably in a recombinant form.
A találmány szerinti hat peptid szekvenciájának inszertálása az alábbi példákban elsősorban alkalmazott WSN-törzstől eltérő influenzatörzsek hemagglutininjának (HA) antigénhatású B-helyére, éppúgy neutralizáló és HIV-1 vírus által okozott sejtfúziót gátolni képes anti-HIV-1-ellenanyagok keletkezését kiváltó fúziós proteinek és/vagy kiméravírusok létrejöttéhez vezet.Insertion of the sequence of the six peptides of the invention into the antigenic B site of the haemagglutinin (HA) strains of influenza strains other than the WSN strains used in the following examples is also neutralizing and inducing anti-HIV-1 antibodies to inhibit cell fusion by HIV-1 virus. / or the development of chimeric viruses.
A fenti szekvenciák inszertálása az influenzavírus HA más helyeire vagy az influenzavírus-neuraminidázba (NA) szintén neutralizáló anti-HIV-ellenanyagok keletkezését kiváltó és HIV-vírus által okozott sejtfúziót gátolni képes peptid-hordozó fúziós proteinek és/vagy kiméravírusok keletkezéséhez vezet.Insertion of the above sequences will lead to the production of peptide-carrier fusion proteins and / or chimeric viruses that can also induce the production of anti-HIV antibodies and neutralize cell fusion caused by the HIV virus to other influenza HA sites or to influenza virus neuraminidase (NA).
A találmány szerinti megoldást a továbbiakban konkrét megvalósítási példákon keresztül kívánjuk magyarázni és szemléltetni, anélkül azonban, hogy igényünket az ismertetettekre korlátoznánk.The present invention will now be explained and illustrated by way of specific embodiments, without, however, limiting the claims to those described.
Az alábbiakban röviden ismertetjük a leírásokhoz csatolt ábrákat.The following is a brief description of the accompanying drawings.
Az 1. ábra a 2F5 humán monoklonális ellenanyag specifítását mutatja (lásd 1. példa).Figure 1 shows the specification of the human monoclonal antibody 2F5 (see Example 1).
A 2. ábra a 2F5 epitópszekvenciát hordozó kimérahemagglutininek előállítását szemlélteti (lásd 2. példa).Figure 2 illustrates the production of chimeric hemagglutinins carrying the 2F5 epitope sequence (see Example 2).
A 3. ábra a kiméra-influenzavírusokkal immunizált egerek antiszérumainak ELISA-titereit mutatja (lásd 3. példa).Figure 3 shows ELISA titers of antisera in mice immunized with chimeric influenza viruses (see Example 3).
A 4. ábra rekombináns baculovírusokkal fertőzött sejtekkel immunizált egerek antiszérumainak ELISAtitereit mutatja (lásd 5. példa).Figure 4 shows ELISA titers of antisera in mice immunized with cells infected with recombinant baculoviruses (see Example 5).
Az 5. ábrán influenza-ELDKWAS-vírussal fertőzött Balb/c egerek légúti szekrétumaiban kimutatható IgAellenanyag-koncentrációkat láthatjuk (lásd 6. példa).Figure 5 shows IgA antibody concentrations in respiratory secretions of Balb / c mice infected with ELDKWAS influenza virus (see Example 6).
A 6. ábrán influenza-ELDKWAS-vírussal fertőzött Balb/c egerek bélnyálkahártya-szekrétumaiban kimutatható IgA-ellenanyag-koncentrációkat ábrázoltuk (lásdFigure 6 depicts IgA antibody concentrations in intestinal mucosal secretions of Balb / c mice infected with ELDKWAS influenza virus (see
7. példa).Example 7).
1. példaExample 1
EpitöptérképezésEpitope mapping
A 2F5 jelzésű monoklonális ellenanyag epitópját immunblottechnikával azonosítottuk Towbin és munkatársai eljárása szerint [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, 4350 (1979)]. A HIV-1 BHlO-izolátum gp41-glikoproteinjéből átfedő fragmenseknek megfelelő peptideket klónoztunk glutation transzferázzal képzett fúziós peptidekként. A különböző fúziós peptideket gp41glikoproteinnek megfelelő oligonukleotidokkal történő hibridizáció alkalmazásával állítottuk elő, és azokat pGEX-2T-plazmid (Pharmacia) BamHI és EcoRI hasítási helyei közé klónoztuk. A rekombináns plazmidokat transzformációval E. coli DHS-törzsbe juttattuk, és a fúziós proteinek expresszálódását izopropil-tiogalaktoziddal (IPTG) indukáltuk. Az E. eo/z-kivonatot ezt követően glutation-Sepharose-4B-oszlopokon tisztítottuk, nátrium-dodecil-szulfátos poliakrilamid gélekre vittük fel, elektroforézissel szétválasztottuk, és a proteinexpresszálódást ezüstfestéssel és immunbloteljárással analizáltuk (1. ábra). Az immunbiot eredményei azt mutatták, hogy a 2F5 jelzésű, humán monoklonális ellenanyag az ELDKWA aminosavszekvenciát tartalmazza, amely megfelel a gplóO-glikoprotein 662-667. pozícióiban található aminosavaknak.The epitope of the 2F5 monoclonal antibody was identified by immunoblotting according to the procedure of Towbin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, 4350 (1979). Peptides corresponding to fragments of the gp41 glycoprotein of HIV-1 BH10 isolate were cloned as glutathione transferase fusion peptides. The various fusion peptides were prepared by hybridization with oligonucleotides corresponding to gp41 glycoprotein and were cloned between the BamHI and EcoRI sites of pGEX-2T (Pharmacia). Recombinant plasmids were transformed into E. coli strain DHS and expression of the fusion proteins was induced by isopropylthiogalactoside (IPTG). The E. coli extract was then purified on glutathione-Sepharose-4B columns, loaded onto sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gels, separated by electrophoresis, and analyzed for protein expression by silver staining and immunoblotting (Figure 1). Immunobiotic results showed that the human monoclonal antibody 2F5 contains the amino acid sequence ELDKWA, which corresponds to the gploO-glycoprotein 662-667. positions.
Az 1. ábra HIV-1 (BHlO-izolátum) gpl60-glikoprotein átfedő ffagmenseivel rendelkező fúziós peptidek immunblotjait ábrázolja. Azokkal a konstrukciókkal ellentétben, melyek az 597-677. (2. csík), 634-677. (3. csík), 648-677. (4. csík) pozíciókban található aminosavakat tartalmazták, és a 2F5-ellenanyaggal reaktivitást mutattak, a 667-677. pozícióknak megfelelő fúziós peptid nem mutatott pozitív reakciót (5. csík).Figure 1 depicts immunoblots of fusion peptides with HIV-1 (BH10 isolate) overlapping fpag-glycoprotein. Contrary to constructions such as those described in paragraphs 597-677. (Lane 2), 634-677. (Lane 3), 648-677. (Lane 4) and showed reactivity with the 2F5 antibody, 667-677. positions, no positive reaction (lane 5).
Ez volt az első utalás arra, hogy a 2F5 jelzésű monoklonális ellenanyag epitópját a gplóO-glikoprotein 648-667. pozícióinak megfelelő szekvenciában található aminosavak alkotják. Az előző eredmények alapján a fenti régióból származó, egyenként 6 aminosavból álló átfedő peptideket a glutation S-transzferázzal fúzionáltattuk.This was the first indication that the epitope of the monoclonal antibody 2F5 is gp10O-glycoprotein 648-667. of the amino acid residues. Based on the above results, overlapping peptides of 6 amino acids each from the above region were fused to glutathione S-transferase.
Amint azt az lb. ábra mutatja, a GLU LEU ASP LYS TRP ALA aminosavakat tartalmazó szekvencia (a 662-667. pozíciókban található aminosavakat tartalmazó szekvencia, 2. csík) nagymértékű reaktivitást mutatott a 2F5-ellenanyaggal, míg a LEU ASP LYS TRP ALA SER (LDKWAS, 663-668. pozíciókban található aminosavakat tartalmazó szekvencia, 3. csík) vagy a ASP LYS TRP ALA SER LEU (DKWASL, 664-669. pozíciókban található aminosavakat tartalmazó szekvencia, 4. csík) csökkent reakciót adott a monoklonális ellenanyaggal. A LEU GLU LEU ASP LYS TRP (LELDKW, 661-666. pozíciókban található aminosavakat tartalmazó szekvencia, 1. csík) nem mutatott jelentős reaktivitást. Ezek az adatok azt mutatják, hogy a monoklonális ellenanyag epitópja a GLU LEU ASP LYS TRP ALA (ELDKWA) aminosavszekvenciát tartalmazza, amely a HIV-1 BHlO-izolátum gpl60-glikoproteinjének 662-667. pozícióiban található aminosavaknak felel meg. Ebben a vonatkozásban mind a fenti epitópszekvenciának megfelelő szintetikus peptid, mind a fenti szekvenciát tartalmazó fúziós protein képes volt a 2F5-elIenanyag által közvetített neutralizáció gátlására.As shown in lb. shows that the GLU LEU ASP LYS TRP ALA amino acid sequence (SEQ ID NO: 662-667, lane 2) showed high reactivity with the 2F5 antibody, while the LEU ASP LYS TRP ALA SER (LDKWAS, 663- The amino acid sequence at position 668, lane 3) or ASP LYS TRP ALA SER LEU (DKWASL, amino acid sequence at positions 664-669, lane 4) showed a reduced reaction with the monoclonal antibody. LEU GLU LEU ASP LYS TRP (LELDKW, SEQ ID NO: 661-666, lane 1) showed no significant reactivity. These data show that the epitope of the monoclonal antibody contains the GLU LEU ASP LYS TRP ALA (ELDKWA) amino acid sequence 662-667 of the gp160 glycoprotein of HIV-1 BH10. corresponds to the amino acids in its positions. In this regard, both the synthetic peptide corresponding to the above epitope sequence and the fusion protein containing the above sequence were capable of inhibiting neutralization mediated by the 2F5 antibody.
2. példaExample 2
Plazmidok és kiméra-influenzavírusok előállításaPreparation of plasmids and chimeric influenza viruses
Valamennyi genetikai manipulációt standard eljárások szerint végeztünk [Sambrook és munkatársai: „Molecular Cloning, A Laboratory Manual”, „Cold Spring Harbour Laboratory Press”, New York (1989)]. Amint azt a 2. ábra szemlélteti, a Leu Glu Leu Asp Lys Trp Alá Ser (LELDKWAS) Glu Leu Asp Lys Trp Alá Ser (ELDKWAS) gp41-szekvenciákat WSN-influenzavírus HA antigénhatású B-helyére inszertáltuk. A pHAELDKWAS és pHA-LELDKWAS plazmidokat úgy állítottuk elő, hogy a Li és munkatársai által leírt pT3/WSN-HAml-plazmid Pstl-HindlII-fragmensét egy olyan PCR-termékkel helyettesítettük, amelyetAll genetic manipulations were performed according to standard procedures (Sambrook et al., "Molecular Cloning, A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989). As shown in Figure 2, the gp41 sequences of Leu Glu Leu Asp Lys Trp Alá Ser (LELDKWAS) were inserted into the HA antigenic site of WSN influenza virus (ELDKWAS). Plasmids pHAELDKWAS and pHA-LELDKWAS were constructed by replacing the PstI-HindIII fragment of pT3 / WSN-HAml described by Li et al. With a PCR product that was
HU 219 507 Β pT3/WSN-HAml templátként történő alkalmazásával, és influenzavírus WSN-HAml-ből származó „szensz” és „antiszensz” láncindító oligonukleotidok alkalmazásával kaptunk, ahol az „antiszensz” láncindító oligonukleotid tartalmazott továbbá egy 21 vagy 24 nukleotidból álló inszertált régiót, amely megfelelt a gplőOglikoprotein 1981-2004. vagy 1984-2004. pozícióinak. A pHA-ELNKWAS-, ρΗΑ-LELNKWAS-, pHAELDNWAS-, valamint pHA-LELDNKWAS-plazmidokat a fent ismertetettekkel azonos módon állítottuk elő.HU 219,507 using pT3 / WSN-HAml as a template, and using the sense and antisense primer oligonucleotides from the WSN-HAml influenza virus, wherein the "antisense" primer additionally contained an insert of 21 or 24 nucleotides. , which corresponded to gplOglycoprotein 1981-2004. or 1984-2004. its positions. Plasmids pHA-ELNKWAS, ρΗΑ-LELNKWAS, pHAELDNWAS, and pHA-LELDNKWAS were constructed in the same manner as described above.
A WSN HA szekvenciáját Hiti és munkatársai határozták meg [J. Virol. 41, 730 (1982)], a gplőO-glikoprotein szekvenciája a „Swissport”-adatbázisban szerepel ENV$HIV10 kód alatt. A fenti plazmidokból származó RNS MDBK-sejtekbe történő transzfekcióját, valamint kiméravírusok szelekcióját és előállítását Eriami és munkatársai szerint végeztük [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 3802 (1990)] az Enami és Palese által leírt módosítások alkalmazásával [J. Virol. 65, 2711 (1991)].The HA sequence of WSN was determined by Hiti et al. Virol. 41, 730 (1982)], the sequence of gpl0O-glycoprotein is found in the "Swissport" database under the code ENV $ HIV10. Transfection of RNA from the above plasmids into MDBK cells and selection and production of chimeric viruses were performed according to Eriami et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 3802 (1990)] using the modifications described by Enami and Palese [J. Virol. 65, 2711 (1991)].
3. példaExample 3
Kiméra-influenzavírusokkal immunizált egerek immunizációja és az egerekben létrejött ellenanyagválaszImmunization of mice immunized with chimeric influenza viruses and antibody response in mice
OF-1-egereket immunizáltunk kiméra-influenzaELDKWAS-vírussal (ΜΙ-, M2-, M3- és M4-egerek) vagy influenza-LELDKWAS-vírussal (M5-egér). Az egereket először intranazálisan (in.), 102 TCID50-vírussal immunizáltuk, majd 6 héttel később 5 χ 105 TCID50vírussal, intranazálisan emlékeztető immunizálásban részesítettük, az egereket 3 héttel később intraperitoneálisan (ip.) 20 pg, szacharózon tisztított élő vírussal immunizáltuk, végül további 3 hét múlva, inkomplett Freund-adjuvánsban 20 pg SDS-denaturált vírussal emlékeztető oltásban részesítettük. Az intranazális immunizálás alatt az egereket éterrel altattuk. A vad típusú WSN-kontrollvírus (wtl, wt2) esetében a fentivel megegyező eljárást alkalmaztunk. Az egereket az utolsó emlékeztető oltást követően 12 nappal elvéreztettük, az antiszérumot 1 órán át, 56 °C-on inaktiváltuk, majd meghatároztuk az antiszérumok ELISA-titerét és neutralizálóakti vitását.OF-1 mice were immunized with chimeric influenzaELDKWAS virus (ΜΙ, M2, M3 and M4 mice) or influenza LELDKWAS virus (M5 mouse). Mice were first immunized intranasally (in.) With 10 2 TCID50 virus, then 6 weeks later with 5 χ 10 5 TCID50 virus, intranasally resembling immunization, and 3 weeks later, with 20 µg of live virus purified with sucrose, intraperitoneally (ip.). and, after a further 3 weeks, inoculating with incomplete Freund's adjuvant with 20 pg of SDS-denatured virus. During intranasal immunization, mice were anesthetized with ether. For the WSN wild-type control virus (wt1, wt2), the same procedure was used. Mice were bled 12 days after the last booster injection, the antiserum was inactivated for 1 hour at 56 ° C, and the antisera ELISA titer and neutralizing activity were determined.
A 3a. ábra influenza-ELDKWAS-antiszérumnak Cterminális végén az ELDKWA-szekvenciát tartalmazó glutation S-transzferáz (GST) fúziós proteinhez történő kötődését ábrázolja. A szekvenciát ELISA-eljárással határoztuk meg. 96 mélyületű mikrolemezeket 4 pg/ml koncentrációban (100 pl/mélyület), 4 órán át, szobahőmérsékleten, karbonátpufferben (pH=9,6) a GSTELDKWA fúziós peptiddel fedtünk. Ezt követően a lemezeket 0,5 Tweent tartalmazó PBS-pufferrel mostuk. A mélyületekbe 1% BSA- és 0,05% Tween-tartalmú PBS-pufferben hígított antiszérumot adtunk, és a lemezeket 1 órán át, szobahőmérsékleten inkubáltuk. Mosást követően az ellenanyagokat tormaperoxidázzal konjugált, kecskében termelt antiegér IgG-g-lánc-ellenanyaggal mutattuk ki. A lemezeken a színreakciót o-fenilén-diamin-dihidroklorid- szubsztrátként történő felhasználásával hívtuk elő. A reakciót 2,5 mol/1 H2SO4-tal állítottuk le, és a lemezeket lemértük (a mérés 492 nm-es hullámhosszon történt, a referencia-hullámhossz 620 nm volt).3a. Figure 3B shows the binding of glutathione S-transferase (GST) containing the ELDKWA sequence to the fusion protein of the ELDKWAS influenza antiserum. The sequence was determined by ELISA. 96-well microplates were coated with GSTELDKWA fusion peptide at 4 pg / ml (100 µl / well) for 4 hours at room temperature in carbonate buffer (pH 9.6). The plates were then washed with PBS buffer containing 0.5 Twen. Antisera diluted in PBS buffer containing 1% BSA and 0.05% Tween was added to the wells and incubated for 1 hour at room temperature. After washing, the antibodies were detected with goat anti-mouse IgG-g chain conjugated with horseradish peroxidase. The color reaction on the plates was induced using o-Phenylenediamine dihydrochloride substrate. The reaction was stopped with 2.5 mol / 1 H 2 SO 4 isobutylchloroformate, and the plates were measured (the measurement was carried out at 492 nm wavelength, the reference wavelength 620 nm).
A 3b. ábra: A 3a. ábra szerinti eljárást követtük, azzal az eltéréssel, hogy az ellenanyagok kimutatására tormaperoxidázzal konjugált, kecskében termelt antiegér IgA-ellenanyagot alkalmaztunk. Az antiszérum neutralizálóaktivitását a szincíciumképzés gátlásának vizsgálata alapján határoztuk meg. Az 1. táblázatban annak a szérumhígításnak a reciprokait tüntettük fel, amely 50%-ban gátolta a szincíciumképződést (EC50). Az M1-M3 egerek antiszérumai különböző szérumhígítások alkalmazása mellett valamennyi vizsgált törzset neutralizálták. Az M4- és M5-antiszérumok neutralizálták az MN- és RF-HIV- 1-izolátumkat, de nem neutralizálták a IIIB-izolátumot. A vad típusú WSN-vírus által indukált antiszérum még a legalacsonyabb (1:20) szérumhígítások mellett sem neutralizálta egyik vizsgált HÍV - 1-izolátumot sem.3b. Figure 3a. The procedure used in Figures 1 to 4 was followed except that goat anti-mouse IgA antibody conjugated to horseradish peroxidase was used to detect antibodies. The antiserum neutralizing activity was determined by assaying for inhibition of syncope formation. Table 1 shows the reciprocals of the serum dilution which inhibited syncytial formation (EC 50 ) by 50%. The antisera of M1-M3 mice were neutralized with different serum dilutions using all serum dilutions. M4 and M5 antisera neutralized MN and RF-HIV-1 isolates, but did not neutralize IIIB isolate. The antiserum induced by the wild-type WSN virus did not neutralize any of the HIV-1 isolates tested even at the lowest (1:20) serum dilutions.
1. táblázatTable 1
HIV-1 törzsek neutralizációja kiméra-influenzavírusokkal szemben termelt antiszérumokkalNeutralization of HIV-1 strains with antisera produced against chimeric influenza viruses
A szincíciumképződés gátlásának vizsgálatára a Chafee és munkatársai által leírt AA-2 indikátor-sejtvonalat [Chaffee és munkatársai: J. Exp. Med. 168, 605 (1988)], vírusinokulumként az MN-, RF- és HIB-HIV-1 törzsekből származó fagyasztott törzstenyészeteket használtuk. Valamennyi vírustörzstenyészetet milliliterenként 101102>5 TCID50-töménységre hígítottunk. Az egérantiszérumokat tápfolyadékban 2-szeresére hígítottuk, és 96 mélyületü mikrotitrálólemezeken osztottuk szét (mindegyik hígításból 4 replikátumot készítettünk). 50 pl hígított antiszérumhoz 50 pl vírust adtunk, és a vírus-ellenanyag elegyet 2 órán át, 4 °C-on előinkubáltuk. A fertőzés úgy történt, hogy valamennyi mélyületbe 100 pl ΑΑ-2-sejtet adtunk (5xl06 sejt/ml); a HIV-1fertőzésre utaló bizonyítékként 5 nap múlva meghatároztuk a szincíciumok jelenlétét. Az 50%-os gátlási dózist Reed és Muench szerint határoztuk meg [Am. J. Hyg. 27, 493 (1938)]. A szincíciumképződést 50%-kal gátló szérumhígítások reciprokait (EC50) tüntettük fel.To investigate the inhibition of syncytial formation, the AA-2 indicator cell line described by Chafee et al., J. Exp. Med. 168, 605 (1988), as a viral inoculum from strains MN, RF, and HIB-HIV-1. frozen stock cultures were used. All virus stock cultures were diluted to 10110 2 x 5 TCID50 per ml. Mouse antisera were diluted 2-fold in culture medium and distributed in 96-well microtiter plates (4 replicates of each dilution were prepared). To 50 µl of diluted antiserum, 50 µl of virus was added and the virus-antibody mixture was preincubated for 2 hours at 4 ° C. Infection was done by adding 100 µL of ΑΑ-2 cells (5x10 6 cells / ml) to each well; the presence of syncytes was determined after 5 days as evidence of HIV-1 infection. The 50% inhibition dose was determined according to Reed and Muench [Am. J. Hyg. 27, 493 (1938)]. Reciprocals (EC50) of serum dilutions that inhibit syncytial formation by 50% are shown.
4. példaExample 4
A megtoldott 2F5-epitópokat hordozó kimérahemagglutininek expresszálódása rekombináns baculovírusokbanExpression of Chimeric Haemagglutinins Carrying Over 2F5 Epitopes in Recombinant Baculoviruses
A találmány szerinti hat peptidet tartalmazó kimérahemagglutinineket az 1. példában leírtak szerint állítot6Chimeric hemagglutinins containing the six peptides of the invention were prepared as described in Example 1.
HU 219 507 Β tűk elő. Az említett kimérahemagglutininek kódolószekvenciáit BamHI restrikciósenzim-hasítási helyekkel szegélyeztük, és Bluebac-III-plazmid (Invitrogen, San Diego, CA) BamHI hasítási helyére inszertáltuk. A kimérahemagglutinieket tartalmazó rekombináns baculovírusokat Groebe és munkatársai, valamint Felgner és munkatársai által leírt transzfekciós eljárásokkal kaptuk [Groebe és munkatársai: Nucleic Acids Rés. 18, 4033 (1990); Felgner és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 7413 (1987)]. A kapott rekombináns kiméra-baculovírusok alkalmazhatók HIV-1neutralizáló ellenanyagok előállítására.HU 219 507 Β needles. The coding sequences for said chimeric hemagglutinins were flanked by BamHI restriction enzyme sites and inserted into the BamHI site of Bluebac-III (Invitrogen, San Diego, CA). Recombinant baculoviruses containing chimeric hemagglutinants were obtained by transfection procedures described by Groebe et al. And Felgner et al., Nucleic Acids Sl. 18, 4033 (1990); Felgner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 7413 (1987)]. The resulting recombinant chimeric baculoviruses can be used to produce HIV-1 neutralizing antibodies.
5. példaExample 5
A rekombináns baculovirusokkal fertőzött sejtekkel immunizált egerek immunizálása és az egerekben létrejött ellenanyagválaszImmunization of mice immunized with recombinant baculovirus-infected cells and antibody response in mice
Az immunizálásra felhasznált Sf9-sejteket rekombináns baculovirusokkal fertőztük, 1-5 fertőzési multiplicitást (MOI) érték mellett, majd a sejteket a fertőzést követően három nappal összegyűjtöttük. A sejteket PBS-sel kétszer mostuk, és 5 χ 106 sejt/ml koncentrációban steril PBS-ben szuszpendáltuk. Ezek a sejtek Westem-blot eljárásban specifikus módon reagáltak a 2F5 jelzésű monoklonális ellenanyaggal, ami arra utalt, hogy ezek a sejtek tartalmazták az ELDKWAS- és LELDKWAS-szekvenciákat hordozó hemagglutinint. Balb/cA egereket immunizáltunk 2 hetes időközökben, négy intraperitoneális injekcióval, egyenként 1 χ 106 fertőzött Sf9-sejttel [Van Wyyke Coelingh és munkatársai: Virology 160, 4465 (1987)]. Az utolsó immunizálást követően hét nappal az egereket elvéreztettük, és az antiszérumok ELISA-titereit meghatároztuk. A 4. ábra a rekombináns baculovírusok által indukált antiszérumok kötődését ábrázolja a Gly Gly Gly Glu Leu Asp Lys Trp Alá (GGGELDKWA) szintetikus pepiidhez aSf9 cells used for immunization were infected with recombinant baculoviruses at 1-5 infection multiplicities (MOI) and harvested three days after infection. Cells were washed twice with PBS and resuspended in sterile PBS at 5 x 10 6 cells / ml. These cells reacted in a specific manner with the 2F5 monoclonal antibody in the Western blot, suggesting that these cells contained the hemagglutinin carrying the ELDKWAS and LELDKWAS sequences. Balb / cA mice were immunized at 2-week intervals with four intraperitoneal injections of 1x10 6 infected Sf9 cells (Van Wyyke Coelingh et al., Virology 160: 4465 (1987)). Seven days after the last immunization, the mice were bled and the antisera ELISA titers were determined. Figure 4 shows the binding of recombinant baculovirus-induced antisera to the synthetic peptide Gly Gly Gly Glu Leu Asp Lys Trp Ala (GGGELDKWA).
2. példában leírtak szerint végzett ELISA-eljárásban.ELISA procedure as described in Example 2.
Szekretoros ellenanyagok termelődésének indukálásaInduction of secretory antibody production
A találmány szerinti peptidek legalább egyikével, előnyösen a hat peptid elegyével végzett immunizálás szignifikánsan magasabb ELDKWA-specifikus IgG ELISAtitereket eredményezett. Ezenkívül az ELDKWA-szekvenciával végzett immunizálással szemben, a találmány szerinti hat peptiddel történő immunizálás szignifikáns IgA-választ is létrehozott. Meglepő módon ez az IgAimmunválasz nyálkahártyaszinten is kiváltódott.Immunization with at least one of the peptides of the invention, preferably a mixture of six peptides, resulted in significantly higher ELDKWA-specific IgG ELISA titers. In addition to immunization with the ELDKWA sequence, immunization with the six peptides of the invention produced a significant IgA response. Surprisingly, this IgAimmune response was also induced at the mucosal level.
6. példaExample 6
Influenza-ELDKWAS-virussal fertőzött Balb/c egerek légúti szekrétumaiban kimutatható IgA-ellenanyagokIgA antibodies detectable in respiratory secretions of Balb / c mice infected with influenza-ELDKWAS virus
Egereket intranazálisan 102 PFU (plakk-képzó egység) vírussal immunizáltunk, majd 4 hét elteltével az egereket a fenti módszerrel megegyező módon 105 PFU vírussal emlékeztető oltásban részesítettük. A harmadik immunizálást további négy hét elteltével, 107 PFU vírussal, intranazálisan (IN) vagy intraperitoneálisan (IP) végeztük. A harmadik immunizálást követően nyolc héttel orrmosó folyadékot gyűjtöttünk, és azokat összekevertük; a fenti minták ELDKWA-peptiddel szemben mutatott reaktivitását ELISA-eljárással határoztuk meg. Kontrollként vad típusú (VT) influenzavírussal immunizált egerektől vett orrmosó folyadékot (vad típusú, gyűjtött orrmosó folyadékot) gyűjtöttünk, és analizáltunk. Az IN-csoporttal megegyező immunizálási menetet alkalmaztunk (lásd 5. ábra). Az ellenanyagok termelődése elsősorban az ormyálkahártyában indult meg, és látható, hogy rendkívül magas ellenanyagtiterek voltak megfigyelhetőek. Az 5. ábra azt mutatja továbbá, hogy az influenza-ELDKWAS-vírus intranazális alkalmazása magasabb HIV-l-neutralizáló ellenanyag-koncentrációhoz vezetett, mint az intraperitoneális alkalmazás.Mice were immunized intranasally with 10 2 PFU (plaque forming unit) virus, and after 4 weeks, mice were vaccinated with 10 5 PFU virus in the same manner as above. The third immunization was performed after another four weeks with 10 7 PFU virus, intranasally (IN) or intraperitoneally (IP). Eight weeks after the third immunization, nasal lavage fluid was collected and mixed; the reactivity of the above samples to the ELDKWA peptide was determined by ELISA. As a control, nasal lavage fluid (wild-type collected nasal lavage fluid) from mice immunized with wild-type (VT) influenza virus was collected and analyzed. The same immunization procedure was used for the IN group (see Figure 5). Antibody production was primarily started in the oropharynx and it can be seen that extremely high titers of antibodies were observed. Figure 5 further shows that intranasal administration of influenza ELDKWAS virus resulted in higher HIV-1 neutralizing antibody concentrations than intraperitoneal administration.
7. példaExample 7
Influenza-ELDKWAS-virussal fertőzött Balb/c egerek bélnyálkahártya-szekrétumaiban kimutatható IgAellenanyagokIgA antibodies detected in the intestinal mucosal secretions of Balb / c mice infected with influenza-ELDKWAS virus
Egereket intranazálisan 102 PFU vírussal immunizáltunk, majd 4 hét elteltével az egereket a fenti módszenei megegyező módon 105 PFU vírussal emlékeztető oltásban részesítettük. A harmadik immunizálást további négy hét elteltével, 107 PFU vírussal, intranazálisan (lásd 6a. ábra) vagy intraperitoneálisan (lásd 6b. ábra) végeztük. A harmadik immunizálást követően nyolc héttel a bélnyálkahártyából felszabaduló ellenanyagokat tartalmazó fekális üledéket gyűjtöttünk, és extraháltunk; a fenti minták ELDKWA-peptiddel szemben mutatott reaktivitását ELISA-eljárással határoztuk meg. Az IN-O-, IN-R-, IN-B- és IN-S-minták olyan egerekből származtak, amelyek a harmadik immunizálást intranazálisan kapták, az IP-Ο-, IP-R-, IP-RS- és IP-S-mintákat olyan egerekből gyűjtöttük, amelyek harmadik alkalommal intraperitoneális injektálásban részesültek. A VT-1- és VT-2-minták vad típusú (VT) influenzavírussal immunizált kontroliegerekből származtak.Mice were immunized intranasally with 10 2 PFU virus, and after 4 weeks, the mice were vaccinated with 10 5 PFU virus in the same manner as above. The third immunization was performed after another four weeks with 10 7 PFU virus, intranasally (see Figure 6a) or intraperitoneally (see Figure 6b). Eight weeks after the third immunization, faecal pellets containing antibodies released from the intestinal mucosa were collected and extracted; the reactivity of the above samples to the ELDKWA peptide was determined by ELISA. Samples IN-O, IN-R, IN-B, and IN-S were derived from mice that received the third immunization intranasally, IP-Ο, IP-R, IP-RS, and IP- S-samples were collected from mice that received a third injection by intraperitoneal injection. Samples VT-1 and VT-2 were derived from control mice immunized with wild-type (VT) influenza virus.
Claims (24)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP93114631 | 1993-09-11 | ||
| PCT/EP1994/003039 WO1995007354A1 (en) | 1993-09-11 | 1994-09-12 | Peptides that elicit neutralizing antibodies against genetically divergent hiv-1 strains |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9600587D0 HU9600587D0 (en) | 1996-05-28 |
| HUT76102A HUT76102A (en) | 1997-06-30 |
| HU219507B true HU219507B (en) | 2001-04-28 |
Family
ID=8213253
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9600587A HU219507B (en) | 1993-09-11 | 1994-09-12 | Peptides that elicit neutralizing antibodies against genetically divergent hiv-1 strains |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0725825B1 (en) |
| JP (1) | JPH09502348A (en) |
| CN (1) | CN1135237A (en) |
| AT (1) | ATE199260T1 (en) |
| AU (1) | AU682893B2 (en) |
| BR (1) | BR9407531A (en) |
| CA (1) | CA2171544C (en) |
| CZ (1) | CZ287808B6 (en) |
| DE (1) | DE69426725T2 (en) |
| ES (1) | ES2156902T3 (en) |
| HU (1) | HU219507B (en) |
| PT (1) | PT725825E (en) |
| RU (1) | RU2181379C2 (en) |
| UA (1) | UA43350C2 (en) |
| WO (1) | WO1995007354A1 (en) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996033219A1 (en) * | 1995-04-19 | 1996-10-24 | Polymun Scientific Immunbiologische Forschung Gmbh | Monoclonal antibodies against hiv-1 and vaccines made thereof |
| US6319890B1 (en) | 1996-12-30 | 2001-11-20 | Manfred P. Dierich | Inhibition of binding of complement Factor H |
| CA2324348C (en) * | 1998-03-23 | 2006-03-14 | Trimeris, Inc. | Methods and compositions for peptide synthesis |
| US6482928B1 (en) | 1999-04-13 | 2002-11-19 | Aventis Pasteur Limited And University Of Toronto | Fab′-epitope complex from HIV-1 cross-neutralizing monoclonal antibody 2F5 |
| CN1172717C (en) * | 2000-08-18 | 2004-10-27 | 清华大学 | Method for treating AIDS and its preparing method |
| FR2851165A1 (en) * | 2003-02-19 | 2004-08-20 | Aventis Pasteur | Using helix C of gp41, containing several mutations of amino acids to alanine, as antigen for generating neutralizing antibodies for treatment or prevention of human immune deficiency virus infection |
| CA2604683C (en) | 2005-04-12 | 2019-04-30 | Duke University | Method of inducing neutralizing antibodies to human immunodeficiency virus |
| EP1754715A1 (en) | 2005-08-19 | 2007-02-21 | Bundesrepublik Deutschland vertreten durch das Bundesminsterium für Gesundheit, dieses vertr. durch das Robert-Koch-Institut | Vaccine on the basis of virus-neutralising antibodies |
| WO2008127651A1 (en) | 2007-04-13 | 2008-10-23 | Duke University | Method of inducing neutralizing antibodies to human immunodeficiency virus |
| MX2011007745A (en) * | 2009-02-06 | 2011-12-08 | Mymetics Corp | Splitting gp41. |
| US10076567B2 (en) | 2013-09-27 | 2018-09-18 | Duke University | MPER-liposome conjugates and uses thereof |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69311764T2 (en) * | 1992-05-14 | 1998-02-05 | Polymun Scient Immunbio Forsch | Peptides that induce antibodies that neutralize genetically divergent HIV-1 isolations |
| US5817767A (en) * | 1993-02-24 | 1998-10-06 | Progenics Pharmaceuticals, Inc. | Synergistic composition of CD4-based protein and anti-HIV-1 antibody, and methods of using same |
-
1994
- 1994-09-12 UA UA96030897A patent/UA43350C2/en unknown
- 1994-09-12 PT PT94927602T patent/PT725825E/en unknown
- 1994-09-12 AT AT94927602T patent/ATE199260T1/en not_active IP Right Cessation
- 1994-09-12 AU AU76965/94A patent/AU682893B2/en not_active Ceased
- 1994-09-12 HU HU9600587A patent/HU219507B/en not_active IP Right Cessation
- 1994-09-12 CN CN94194035A patent/CN1135237A/en active Pending
- 1994-09-12 ES ES94927602T patent/ES2156902T3/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-12 JP JP7508473A patent/JPH09502348A/en not_active Ceased
- 1994-09-12 RU RU96108781/13A patent/RU2181379C2/en not_active IP Right Cessation
- 1994-09-12 DE DE69426725T patent/DE69426725T2/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-12 CZ CZ1996741A patent/CZ287808B6/en not_active IP Right Cessation
- 1994-09-12 BR BR9407531A patent/BR9407531A/en not_active Application Discontinuation
- 1994-09-12 EP EP94927602A patent/EP0725825B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-12 CA CA002171544A patent/CA2171544C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-12 WO PCT/EP1994/003039 patent/WO1995007354A1/en active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| UA43350C2 (en) | 2001-12-17 |
| CA2171544C (en) | 2003-06-24 |
| EP0725825B1 (en) | 2001-02-21 |
| EP0725825A1 (en) | 1996-08-14 |
| PT725825E (en) | 2001-08-30 |
| JPH09502348A (en) | 1997-03-11 |
| ES2156902T3 (en) | 2001-08-01 |
| CZ287808B6 (en) | 2001-02-14 |
| CA2171544A1 (en) | 1995-03-16 |
| CZ74196A3 (en) | 1996-07-17 |
| WO1995007354A1 (en) | 1995-03-16 |
| ATE199260T1 (en) | 2001-03-15 |
| AU7696594A (en) | 1995-03-27 |
| AU682893B2 (en) | 1997-10-23 |
| DE69426725T2 (en) | 2001-09-06 |
| HU9600587D0 (en) | 1996-05-28 |
| CN1135237A (en) | 1996-11-06 |
| BR9407531A (en) | 1997-08-26 |
| RU2181379C2 (en) | 2002-04-20 |
| HUT76102A (en) | 1997-06-30 |
| DE69426725D1 (en) | 2001-03-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3369246B2 (en) | Peptides capable of inducing antibodies that neutralize genetically branched HIV-1 isolates | |
| Earl et al. | Epitope map of human immunodeficiency virus type 1 gp41 derived from 47 monoclonal antibodies produced by immunization with oligomeric envelope protein | |
| US5591823A (en) | Expression of specific immunogens using viral antigens | |
| JP2006020635A (en) | Antigenically-marked non-infectious retrovirus-like particle | |
| JPH08505769A (en) | Methods for obtaining the natural domains of viral membrane proteins, especially their use as vaccines against HIV | |
| EP0725825B1 (en) | Peptides that elicit neutralizing antibodies against genetically divergent hiv-1 strains | |
| US5667782A (en) | Multiple particulate antigen delivery system | |
| Kalyan et al. | Immunogenicity of recombinant influenza virus haemagglutinin carrying peptides from the envelope protein of human immunodeficiency virus type 1 | |
| EP0516135B1 (en) | Human immunodeficiency virus-related immune preparation | |
| LOLEIT et al. | Conjugates of synthetic lymphocyte-activating lipopeptides with segments from HIV proteins induce protein-specific antibody formation | |
| WO1998041536A1 (en) | Glycosylation deficient siv and hiv envelope glycoproteins | |
| WO1998041536A9 (en) | Glycosylation deficient siv and hiv envelope glycoproteins | |
| Weijer et al. | Induction of feline leukaemia virus-neutralizing antibodies by immunization with synthetic peptides derived from the FeLV env gene | |
| AU7619694A (en) | Multiple branch peptide constructions for use against hiv | |
| IL106362A (en) | Multiple particulate antigen delivery system | |
| Steimer et al. | HIV-1 neutralization directed to epitopes other than linear V3 determinants | |
| US10660951B2 (en) | Antibody recognizing arbitrarily designed epitope of three or more amino acid residues in a peptide and method of generating thereof | |
| WO1995007099A1 (en) | Vaccine and process for producing the same | |
| Woof et al. | Antonis Mirsaliotis, Kulpash Nurkiyanova, Daniel Lamb |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |