HU202595B - Process for producing mouse monoclonal antibody connected with human alpha-1-foetoprotein - Google Patents
Process for producing mouse monoclonal antibody connected with human alpha-1-foetoprotein Download PDFInfo
- Publication number
- HU202595B HU202595B HU141686A HU141686A HU202595B HU 202595 B HU202595 B HU 202595B HU 141686 A HU141686 A HU 141686A HU 141686 A HU141686 A HU 141686A HU 202595 B HU202595 B HU 202595B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- antibody
- afp
- human alpha
- antibodies
- monoclonal antibody
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
A találmány tárgya eljárás emberi alfa-l-foetoproteinnel kapcsolódó egér monoklonális ellenanyag vagy ellenanyagpár előállítására. Az eljárás során az immunizálási eljárást AxDBAz Fj hibrid egértörzsön, öt ciklusban, 10-12 héten keresztül ciklikusan váltakozó antigénbeviteli móddal végzik. A találmány tárgya még emberi alfa-l-foetoprotein enzim-immunteszthez alkalmas monoklonális ellenanyagpár előállítása is. HU 202 595 A A leírás terjedelme: 4 oldal rajz nélkül -1-The present invention relates to a method for producing a mouse monoclonal antibody or antibody pair associated with human alpha-1-fetoprotein. The method involves immunizing the AxDBAz Fj hybrid mouse strain with cyclic alternating antigen intake for five cycles over 10 to 12 weeks. The invention also relates to the preparation of a monoclonal antibody pair suitable for human alpha-1-fetoprotein enzyme immunoassay. EN 202 595 A Scope of the description: 4 pages without drawing -1-
Description
A találmány tárgya eljárás emberi alfa-l-foetoproteinnel (AFP) kapcsolódó egér monoklonális ellenanyag előállítására.This invention relates to a human monoclonal antibody to human alpha-1-foetoprotein (AFP).
A monoklonális ellenanyagok magas specifitású, nagy tisztaságú szerológiai reagensek, melyeknek előállítási módszerét elsőként Kohlerés Milstein ismertette (1975, Natwe, 256,495).Monoclonal antibodies are highly specific, high purity serological reagents, the method of preparation of which was first described by Kohler and Milstein (1975, Natwe, 256,495).
A monoklonális ellenanyagok előállításának lényeges újdonsága a hagyományos, ún. poliklonális ellenanyagtermeléssel szemben, hogy nem élő állat szervezetében lezajló folyamat; e célra előállított hibrid sejtek termelik az ellenanyagot. A poliklonális ellenanyagtermelés során az ellenanyagképződést kiváltó anyag (fehérjemolekula, mikroorganizmus, vérsejt stb.), azaz az antigén több - esetenként több száz jellemző helyével reagáló ellenanyag keverék képződik. A monoklonális eljárások a lehetséges ellenanyagok egyenkénti termelését oldják meg.An important novelty in the production of monoclonal antibodies is the use of conventional, so-called. against polyclonal antibody production, it is a non-living animal process; hybrid cells produced for this purpose produce the antibody. In polyclonal antibody production, the antibody-inducing substance (protein molecule, microorganism, blood cell, etc.), that is, the antibody mixture, is formed which reacts with several, sometimes hundreds, specific sites in the antigen. Monoclonal procedures solve the individual production of potential antibodies.
Az alfa-foetoprotein (AFP) a magzati élet során a szérum fő fehérje komponense, úgy mint felnőttkorban az albumin. Szerepe nem tisztázott, esetleg az anyai szervezetben zajló, a magzat elleni immunválaszt szuppresszáló folyamatokban lehet szerepe [Peck, A. B. és munkatársai, J. Immunoi., 128,1134 (1982) és Littmann Β. M. és munkatársai, Cell. Immunoi., 30, 35 (1977)]. Az AFP az alfa-globulinok közé tartozó 7072 000 móllömegű glikoprotein. Megjelenését és koncentráció-változását a magzati szérumban a magzatvíz és az anyai szérum AFP szintjének arányos változása kíséri.Fetal alpha (AFP) is a major component of serum in fetal life, such as albumin in adulthood. Its role is unclear and may play a role in suppressing the maternal immune response to the fetus (Peck, A.B., et al., J. Immunol., 128, 1134 (1982) and Littmann Β. M. et al., Cell. Immunol., 30, 35 (1977)]. AFP is a 7072,000 molecular weight glycoprotein of the alpha globulins. Its appearance and concentration change in the fetal serum is accompanied by a proportional change in the AFP levels of the amniotic fluid and maternal serum.
A központi idegrendszer egy veleszületett rendellenessége a velőcső záródási rendellenesség, melyet az AFP értékek rendellenes szintje kísér, így ilyen kóros magzatot hordozó anya vérszérumában az AFP szint a normálishoz képest emelkedett. Az eltérés a terhesség 16-18. hete között már szignifikáns és jellemző a magzat kóros állapotára.A congenital malformation of the central nervous system is a neural tube closure disorder, accompanied by abnormal levels of AFP, so that the blood serum of AFP in a mother with such an abnormal fetus is elevated relative to normal. The difference in pregnancy is 16-18. between weeks of age and significant and characteristic of the fetal pathology.
Az ilyen magzatok nagy része életképtelenül születik, vagy az enyhébb esetben 5 éven belül meghal, súlyosan szellemi fogyatékos és mozgássérült Lényeges tehát a korai diagnózis és az orvosi beavatkozás.Most of these fetuses are stillborn or, in less severe cases, die within 5 years, severely mentally handicapped and physically challenged. Early diagnosis and medical intervention are therefore essential.
Az AFP meghatározására poliklonális és monoklonális ellenanyag egyaránt alkalmazható. Természetéből adódóan a poliklonális ellenanyag keresztreakciói lényegesen gyakoribbak, elsősorban albumin zavarhatja a vizsgálatot, amikoris ez a hatás csak bonyolult és költséges tisztítási lépésekkel eliminálható.Polyclonal and monoclonal antibodies can be used to determine AFP. By their nature, cross-reactions of polyclonal antibodies are significantly more frequent, and albumin in particular may interfere with the assay, which can only be eliminated by complicated and costly purification steps.
Az AFP - ellenanyag kapcsolódás a meghatározási módszer specificitásának alapja. Szükség van ezen kívül - sorozatban alkalmazható, gyors módszereknél - arra, hogy az antigén-antitest kötődést jól mérhetően detektáljuk. Az általánosan alkalmazott két módszer radioaktív anyaggal végzett immunreakció vagy az immunreakció enzimes reakcióval való kapcsolása. Utóbbi célszerűbb olyan esetekben, ahol decentralizált a meghatározási módszer használata, és nem számíthatunk valamennyi esetben az izotóp technika körülményeire és műszereire.AFP antibody binding is the basis for the specificity of the assay method. In addition, it is necessary, in a series of rapid methods, to detect antigen-antibody binding in a measurable manner. The two methods commonly used are immunoreactions with radioactive material or coupling the immune reaction with an enzymatic reaction. The latter is more appropriate in cases where the use of the determination method is decentralized and the conditions and instruments of the isotope technique cannot be expected in all cases.
Az immunreakció enzimes reakcióval történő kapcsolásának modem módja az ún. sandwich enzim-immun teszt Ennek lényege, hogy a keresett anyaggal reagáló két specifikus, de egymástól eltérő ellenanyagra van szükség, melyek részben a keresett anyag különböző antigéndetermináns helyeivel reagálnak, másrészt egyenként más-más mellékfeladatnak felelnek meg. Az egyik ellenanyag jól kötődik plasztikfelületekhez és kötött állapotban is megtartja immunaffinitását, a másikhoz a detektáló rendszer enzime jól kapcsolható, és az ellenanyag-enzim komplexben nem vész el az ellenanyag megfelelő hatékonyságú antigénkötő képessége. A tesztben plasztiklaphoz kötik az első ellenanyagot, ez reagál az antigén egyik determinánsával, majd a megkötött antigént kimutatják a másik ellenanyaggal, mely az antigén másik determinánsával reagálva a rendszerbe viszi a vele kötésben lévő detektáló enzimet. Az enzimhez szubsztrátot adva az enzimes reakció lezajlik és a keletkező színes termék nagy pontossággal fotometriás úton meghatározható.The modem mode for linking the immune response to an enzymatic reaction is the so-called modem. sandwich enzyme immunoassay The essence of this is that two specific but different antibodies reacting with the target substance are required, which react in part with different antigenic determinants of the target substance and each have different side-functions. One antibody binds well to plastic surfaces and retains its immunoaffinity when attached, the other is well coupled to the detection system enzyme and does not lose the antigen binding ability of the antibody in the antibody-enzyme complex. In the assay, the first antibody is bound to a plastic sheet, which reacts with one of the determinants of the antigen, and then detects the bound antigen with the other antibody, which, in response to the other determinant of the antigen, enters the system. By adding a substrate to the enzyme, the enzymatic reaction takes place and the resulting colored product can be accurately determined photometrically.
Az AFP bizonyítottan több (hét vagy hat) antigéndetermináns hellyel rendelkezik, ennek megfelelően a monoklonális technikával több különböző független specifitású ellenanyag állítható elő, ezek bármelyike az AFP kimutatására, mennyiségi meghatározására biztonsággal alkalmas. Ezek közül alkalmasan megválasztott, egymástól eltérő specifitású ellenanyagpár a specifikus reakció érzékeny és gyors detektálását szolgálhatja.AFP has been shown to have multiple sites (seven or six) of antigenic determinants, and accordingly, monoclonal techniques can produce multiple antibodies of different specificity, any of which is capable of detecting and quantifying AFP with certainty. A suitably selected pair of antibodies of different specificity may serve for the sensitive and rapid detection of a specific reaction.
AFP-vei kapcsolódó monoklonális ellenanyagot írt le Stenman [J. Immun. Meth., 46, 33 (1981)] és Uotila [Mól. Immunoi., 77,791 (1980)]. Az ellenanyagtermelő hibrid sejteket BALB/C egerek AFP-vel történő hiperimmunizálása után nyerték, az állatokból származó lépsejtek mielóma sejtekkel (SP2/0-Agl4) történő fúziója útján. A keletkező - szaporodóképes - hibridsejtek közül a kívánt specifitású ellenanyagot termelő (ún. pozitív) sejtek gyakorisága felhasznált lépenként legfeljebb 1-2 sejt volt, ezen antigén esetében gyakori a teljesen eredménytelen kísérlet.AFP-associated monoclonal antibody is described by Stenman [J. Immun. Meth., 46, 33 (1981)] and Uotila (Mol. Immunol., 77, 791 (1980)]. Antibody-producing hybrid cells were obtained after hyperimmunization of BALB / C mice with AFP by fusing animal spleen cells with myeloma cells (SP2 / 0-Agl4). Of the resulting hybridoma cells, the so-called positive cells producing the desired specificity were up to 1-2 cells per increment, with a completely unsuccessful experiment with this antigen.
Az ellenanyagtermelés több kívánalma miatt - mely szerint az ellenanyag legyen nagy affinitású, legyen olyan változat, mely plasztikfelülethez kötve és másik, mely enzimmel képzett komplexében tartja meg immunaktivitását - a hibridizáció után nyert pozitív hibridek között is tulajdonságuk szerinti válogatás szükséges a termelésre alkalmas sejtvonalpár előállítására. Amennyiben egy előkészítő lépés találatszáma alacsony, ez arányosan rontja a megfelelő sejtvonalpárhoz vezető szelektálás lehetőségét, így végeredményben az előállítható sejtvonalpár minőségét.Due to several requirements for antibody production, such as high affinity antibody, a variant that binds to the plastic surface and another that retains its immunoreactivity in its complex with the enzyme, even positive hybrids obtained after hybridization need to be sorted to produce a cell line pair suitable for production. If the number of hits in a preparatory step is low, it disproportionately diminishes the possibility of selection to the appropriate cell line pair, and thus ultimately the quality of the cell line pair that can be produced.
Kísérleteink során meglepő módon azt találtuk, hogy két egértörzs keresztezése után kapott FI generáció immunizálás után - magas specifitású és magas affinitású ellenanyagot termel. Nem várt módon az ilyen állatok lépsejtjeiböl nyert hibrid (hibridóma) sejtvonalak megtartják azt a tulajdonságukat, hogy nagy mennyiségben termelik a magas specifitású és magas affinitású anyagotSurprisingly, we have found that the FI generation obtained after crossing two mouse strains produces high specificity and high affinity antibody upon immunization. Unexpectedly, hybridoma cell lines derived from the spleen cells of such animals retain the ability to produce high levels of highly specific and high affinity material.
Tovább fokozható az ellenanyagtermelés eredményessége, ha a lépsejtek kivételét megelőző immunizálás során megváltoztatjuk az antigén adagolásának programját és a szokásos ismételt immunizálás helyett a folyamatot immunizálási ciklusokból építjük fel.The efficiency of antibody production can be further enhanced by changing the antigen dosing regimen during immunization prior to spleen cell extraction and building the process from immunization cycles instead of the usual repeat immunization.
A találmány tárgya eljárás AFP enzim-immunteszthez alkalmas ellenanyag vagy ellenanyagpár előállítására. A találmány szerint az ellenanyag(ok) előállításánál AxDB A2 Fi hibrid egértörzset alkalmazunk. Ugyancsak a találmány tárgya új immunizálási eljárás; az F, hibrid egértörzset ciklikusan váltakozó AFP antigénbeviteli móddal immunizáljuk.The present invention relates to a process for the production of an antibody or pair of antibodies suitable for the AFP enzyme immunoassay. In accordance with the present invention, AxDB A 2 Fi hybrid mouse strain is used to produce the antibody (s). The present invention also relates to a novel immunization process; immunizing the F, hybrid mouse strain by cyclically alternating AFP antigen delivery route.
A tumorsejtekkel hibridizált lépsejtek klonjai közül kiválasztjuk a specifikus ellenanyagtermelőket. Azegyes kiónokkal nyert monoklonális ellenanyagokatSpecific antibody producers are selected from clones of spleen cells hybridized with tumor cells. Monoclonal antibodies were obtained with single clones
HU 202 595 A mátrix rendszerű kompetíciós vizsgálatban jellemezzük. A kívánt ellenanyagpár kombinációt az eltérő antigéndeterminánshoz kötődő ellenanyagpárok közül úgy választjuk ki, hogy az egyik plasztikfelülethez kötődve, a másik detektáló enzimhez kötve ne veszítse el immunaffinitását.EN 202 595 Characterized in a matrix-based competition study. The desired antibody pair combination is selected from antibody pairs that bind to different antigenic determinants so that they do not lose their immunaffinity when bound to one plastic surface and bound to the other detection enzyme.
A találmány szerinti eljárás alkalmazása során a hibrid sejtek kolóniái közül nagyobb számú mutat pozitivitást, a specifikus ellenanyagot termelő kolóniák száma lépenként elérheti a 20-at. Mérsékelt számú kísérletből a termelést legjobban szolgáló sejtvonal szelekcióval kiemelhető. Mérsékelt számú kísérletből kiemelhető olyan ellenanyagpár is, melynél egyik a felülethez való kötődés, a másik az enzimes detektálás szempontjai szerint előnyös.Using the method of the invention, a greater number of colonies of hybrid cells show positivity, and the number of colonies producing the specific antibody may be as high as 20 increments. From a limited number of experiments, the cell line that best serves production can be selected by selection. From a limited number of experiments, a pair of antibodies can be highlighted, one for surface binding and one for enzymatic detection.
A találmány szerint eljárva a felülethez, illetve az enzimhez immunaffinitás-vesztés nélkül kötődő ellenanyagok kiválasztása előtt kompetíciós vizsgálatban megkeressük azokat az ellenanyagpárokat, melyek biztonságosan más-más antigén determinánshoz kötődnek, így egymás reakcióját legkevésbé zavaiják.In accordance with the present invention, prior to selecting antibodies that bind to the surface or enzyme without loss of immunoaffinity, a competition assay will search for pairs of antibodies that bind safely to different antigenic determinants, thereby minimizing interference between each other.
A leírt módon nyert pozitív sejtvonalakkal ellenanyagokat állítunk elő, és ezeket mátrix rendszerben páronként egymás után reagáltatjuk az antigén AFP-vel. Ahol a két vizsgált ellenanyag más-más antigéndetermináns helyhez kötődik, a második reakció alacsony kompetencia %-ot mutat, kis mértékű a gátlás. Ahol a két ellenanyag kötőhelye azonos vagy közeli, az első reakció kompetál a másodikkal, a gátlás %-a magas.Positive cell lines obtained as described generate antibodies and react in pairs in a matrix system with AFP antigen. Where the two antibodies bind to different antigenic determinants, the second reaction shows a low level of competence with little inhibition. Where the binding sites of the two antibodies are identical or close, the first reaction is competent with the second, with a high percentage of inhibition.
A találmány szerinti eljárással előállított ellenanyagok általános jellemzői:General characteristics of the antibodies produced by the method of the invention are:
lg izotípus IgG 1 ill. IgG 2alg isotype IgG 1 and 1, respectively. IgG 2a
Titer 10-3-10-5 Titer of 10 3 -10 5
HSA-val adott keresztreakció 0-10%.Cross reaction with HSA 0-10%.
A találmány szerinti eljárást az alábbi példában részletesen ismertetjük.The process of the invention is described in detail in the following example.
PéldaExample
AxDBA2 keresztezéssel nyert F! egereket esetenként 10 gg antigénnel immunizálunk, az első két ciklusban az antigénhez komplett Freund adjuvánst adunk, a 3., 4.,AxDBA 2 won by F! mice are occasionally immunized with 10 gg of antigen, complete with Freund's adjuvant for the first two cycles, 3, 4,
5. ciklusban az antigént inkomplet Freund adjuvánssal visszük be. Az antigén utolsó oltása vizes oldatban történik. Az oltások módja és időpontja az alábbi ciklusos program szerinti:In cycle 5, the antigen is introduced with incomplete Freund's adjuvant. The last inoculation of the antigen takes place in aqueous solution. Methods and dates of vaccination according to the following cyclic schedule:
/. táblázat/. spreadsheet
táblázat folytatásaContinue Table
CFA = complet Freund adjuvánsCFA = Compl Freund Adjuvant
IFA = inkomplet Freund adjuváns.IFA = incomplete Freund adjuvant.
A lépsejteket Sp2/oAg-14 jelű egér mielóma sejtekkel ismert módon fuzionáljuk. [1. Andó és munatársai (1984); Tissue Culture and Rés., P. Röhlich és E. Bácsi szerkesztők, Academic Press Hungary, Elsevier Press, Holland 241. old.] A hibrid sejteket ismert módon szelektáljuk [Köhler G., Milstein C.: Eur. J. Immunoi., 6, 511 (1976) és Hengartner H., Luzzati A. L., Schreier M.: Curr. Topies in Microbiol. and Immunoi., 81, 92 (1978)], majd ezek közül az antigéntermelőket az alábbi módon meghatározzuk:Spleen cells are fused with mouse myeloma cells Sp2 / oAg-14 in a known manner. [1st Andó et al. (1984); Tissue Culture and Rés., P. Röhlich and E. Bácsi editors, Academic Press Hungary, Elsevier Press, Holland, p. 241] Hybrid cells are selected in a known manner (Köhler, G., Milstein, C., Eur. J. Immunol. 6, 511 (1976) and Hengartner H., Luzzati AL, Schreier M. Curr. Topies in Microbiol. and Immunol., 81, 92 (1978)], and the antigen producers thereof are determined as follows:
Mikrotiter lemez lyukaiba 100-100 gl mennyiségű, 3 gg/ml koncentrációjú AFP oldatot pipettázunk és 16 órán át 4 ’C-on inkubáljuk a lemezeket Az antigént 15 mM Na2CO3,35 mM NaHCO3 (pH = 9,6) pufferban hígítottuk.Microtiter plate wells 100 to 100 gl amount of 3 gg / ml AFP solution was pipetted to 16 hours at 4 ° C the plates are incubated in antigen 15 mM Na 2 CO 3, 35 mM NaHCO 3 (pH 9.6) buffer diluted.
A lemezeket háromszor PBS-Tween» oldattal mossuk, melynek összetétele: 137 mM NaCl, 1,47 mM KHjPa, 8 mM Na2HPO4,2H20,0,05% Tween», pH = = 7,2. Ezután a tesztelésre kerülő hibridóma felülúszók 100-100 gl-ét 2 órán át 37 ‘C-on inkubáljuk a lyukakban.The plates were washed three times with PBS-Tween solution containing 137 mM NaCl, 1.47 mM KHjPa, 8 mM Na 2 HPO 4 , 2H 2 0.0.05% Tween, pH 7.2. 100-100 g of the hybridoma supernatants to be tested are then incubated in the wells for 2 hours at 37 ° C.
A fenti mosást háromszor ismételjük, majd 100100 μΐ hígított nyúl-anti-egér Ig-HRPO-t inkubálunk a lemezeken 37 ’C-on, 1 órán át (HRPO = tormagyökér peroxidáz).The above wash was repeated three times and 100100 μΐ of diluted rabbit anti-mouse Ig-HRPO was incubated on the plates at 37 ° C for 1 hour (HRPO = horseradish root peroxidase).
A lemezeket ismét mossuk, végül 200 μΐ szubsztrát oldatot mérünk a lemez lyukaiba. (A szubsztrát-oldat összetétele: 333 gg/ml o-fenilén-diamin, 0,005% H/)2, 63 mM Na2HPO4.2H20,26,2 mM citromsav, pH=6,0). Az inkubálást 37 ’C hőmérsékleten 30 percen át végezzük. A reakció leállítására 50 μΐ/iyuk 4 n H2SO4-et mérünk be, az eredményt spektrofotometriával 492 nm en értékeljük.The plates are washed again and finally 200 μΐ of substrate solution is added to the wells of the plate. (Composition of the substrate solution: 333 µg / ml o-Phenylenediamine, 0.005% H /) 2 , 63 mM Na 2 HPO 4 .2H 2 0.26.2 mM citric acid, pH 6.0). Incubation was carried out at 37 ° C for 30 minutes. The reaction was terminated μΐ weighed into 50 / well of 4N H 2 SO 4 on the results evaluated by spectrophotometry at 492 nm.
Az antitest termelő hibridómasejteketklónozzuk, egy egér lépsejtjeinek feldolgozása során például 24 ellenanyagtermelő kiónt emelünk ki.Antibody-producing hybridoma cells are cloned and, for example, 24 antibody-producing clones are raised during processing of spleen cells from a mouse.
A sejtek ellenanyagtermelésének minősítése: A specifikus ellenanyagot termelő sejteket 10® sejt/ml koncentrációban egér hasüregébe oltjuk (1 ml/egér).Qualification of Cell Antibody Production: Cells producing specific antibody are inoculated at 10x cells / ml into the mouse abdominal cavity (1 ml / mouse).
A tumoros sejtek hatására magas immunglobulin-tartalmú ascites folyadék képződik (5-10 mg specifikus lg egerenként). Az ascites folyadékok munkahígításaként azt a hígítást adjuk meg, ahol enzim-immun tesztben ELISA tesztben - az illető hígítás mellett az enzimes reakció színes termékének mérőszáma E = 1,0.Tumor cells produce ascites fluid with a high immunoglobulin content (5-10 mg specific Ig per mouse). The working dilution of ascites fluids is defined as the dilution whereby the color product of the enzymatic reaction is EL = 1.0 in the enzyme-linked immunoassay.
A tesztben antigénként 3 gg/ml AFP-t alkalmazunk, ehhez adjuk a vizsgált ellenanyagot hígítást sorban, majd egy enzimkötött, detektáló, peroxidázzal jelzett anti-AFP ellenanyagot.In the assay, 3 µg / ml AFP was used as antigen by dilution of the test antibody in series followed by an enzyme-linked, detection peroxidase-labeled anti-AFP antibody.
HU 202 595 AHU 202 595 A
A leírt módon előállítón ellenanyagok munkahígítása: 5 x 104,1 χ 103 illetve 1 χ 104.The working dilutions of the antibodies prepared as described are 5 x 10 4 , 1 χ 10 3 and 1 χ 10 4 respectively .
(AFP/1, AFP/14, AFP/33 sorrendjében).(In the order of AFP / 1, AFP / 14, AFP / 33).
Humán szérumalbuminnal megvizsgáljuk, hogy az előállított ellenanyagok nemspecifikus, ún. keresztréak- 5 ciót mutatnak-e. A peroxiddal detektált tesztben egymás mellett 3 gg/ml AFP-vei és gg/ml HSA-val végezzük el a mérést. Az AFP mellett kapott értéket 100%-nak véve, ehhez viszonyítva fejezzük ki a HSA-val kapott - nem kívánatos - keresztreakció mértékét. 10Human serum albumin was tested for non-specific, so-called antibodies. cross-activity. In the peroxide-detected assay, 3gg / ml AFP and gg / ml HSA are measured side by side. Taking the value for AFP at 100%, express the extent of the undesirable cross-reaction with HSA. 10
A választott három ellenanyagnál ez az érték 0%, megengedhetőnek tartjuk a max. 10%-os hatástFor the three antibodies selected, this value is 0%; 10% effect
A ellenanyagok egymás közötti kompetíciós vizsgálatát úgy végezzük, hogy a kísérletbe beállított ellenanyagokból peroxidáz-jelzett ellenanyag-enzim komp- 15 lexeket készítünk.The competition assay between the antibodies is performed by preparing peroxidase-labeled antibody-enzyme complexes from the test antibodies.
[Wilson, Μ. B. és Nakane, P. K. (1978) Immunofluorescens and Related Technignes, Knapp W., Holubar K. és Wiek, G. szerkesztésében Elsevier North Holland, Amsterdam, 215. old.], másrészről a jelöletlen ellen- 20 anyagokból 100 gg/ml-es oldatokat készítünk elő.[Wilson, Μ. B. and Nakane, PK (1978), Immunofluorescens and Related Technignes, Knapp W., Holubar K. and Wiek G. edited by Elsevier North Holland, Amsterdam, p. 215], on the other hand, 100 µg / ml of unlabeled antibodies. solutions.
gg/ml AFP jelenlétében mátrix rendszerben valamennyi jelöletlen ellenanyagot összehozunk valamennyijelölt ellenanyaggal. A színképződés leolvasása után a kompetíció mértékének kiszámítása: 25In the presence of gPg / ml AFP, all unlabeled antibodies in the matrix system are contacted with each of the labeled antibodies. After reading the color formation, calculate the degree of competition: 25
E492 kompetitor nélkülE 492 without competitor
- x 100 = leszorítás %.- x 100 =% reduction.
E492 kompetitor jelenlétében 30In the presence of E 492 competitors
Eltérő determinánshoz kötődő ellenanyagnak ítélhető az az ellenanyagpár, ahol a leszorítás mértéke kisebb, mint 25%.Antibody binding to a different determinant is considered to be a pair of antibodies where the degree of suppression is less than 25%.
első reagáló ellenanyag második AFP/1 AFP/14 AFP/33 reagáló ellenanyag Kompetíció %first reactive antibody second AFP / 1 AFP / 14 AFP / 33 reactive antibody Competency%
AFP/1AFP / 1
AFP/14AFP / 14
AFP/33AFP / 33
78,0 ±4,4 69,7 ±6,0 1,8 ±3,678.0 ± 4.4 69.7 ± 6.0 1.8 ± 3.6
78,5 ±9,4 78,6 ±9,6 20,6 ±13,278.5 ± 9.4 78.6 ± 9.6 20.6 ± 13.2
9,7 ±8,2 11,7 ±10,6 63,1 ±7,59.7 ± 8.2 11.7 ± 10.6 63.1 ± 7.5
A teszthez alkalmas ellenanyagpár lehet AFP/1 és AFP/33 vagy AFP/14 és AFP/33.Suitable antibody pairs for the test may be AFP / 1 and AFP / 33 or AFP / 14 and AFP / 33.
Claims (3)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
HU141686A HU202595B (en) | 1986-04-03 | 1986-04-03 | Process for producing mouse monoclonal antibody connected with human alpha-1-foetoprotein |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
HU141686A HU202595B (en) | 1986-04-03 | 1986-04-03 | Process for producing mouse monoclonal antibody connected with human alpha-1-foetoprotein |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU202595B true HU202595B (en) | 1991-03-28 |
Family
ID=10954404
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU141686A HU202595B (en) | 1986-04-03 | 1986-04-03 | Process for producing mouse monoclonal antibody connected with human alpha-1-foetoprotein |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
HU (1) | HU202595B (en) |
-
1986
- 1986-04-03 HU HU141686A patent/HU202595B/en not_active IP Right Cessation
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5223392A (en) | Monoclonal antibodies against glycated albumin, hybrid cell lines producing these antibodies, and use therefore | |
JP4646985B2 (en) | Mycoplasma pneumoniae glyceroglycolipid antigen | |
US8263356B2 (en) | Antibodies and methods for predicting dental caries | |
US5641638A (en) | Monoclonal antibodies against Mycoplasma pneumoniae, hybridomas producing these, methods for the preparation thereof, and the use thereof | |
US5248593A (en) | Process and reagent for the determination of the luteinizing hormone and monoclonal antibodies suitable thereof | |
DE100955T1 (en) | MONOCLONAL IMMUNOGLOBULIN M ANTIBODIES AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF. | |
US6010903A (en) | Anti-human ceruloplasmin monoclonal antibody | |
DE3881344T2 (en) | IN BETA POSITION N-ACETYLNEURAMINE ACID IDENTIFYABLE MONOCLONAL ANTIBODIES. | |
Chen et al. | The use of monoclonal antibodies to detect Bacteroides gingivalis in biological samples | |
HU202595B (en) | Process for producing mouse monoclonal antibody connected with human alpha-1-foetoprotein | |
US5064755A (en) | Two-site confirmatory assay | |
US6790625B1 (en) | Antibodies to placental protein 13 | |
US5183739A (en) | Monoclonal antibodies specific for non-a1c glycated hemoglobin and immunoassay methods | |
CA2254151A1 (en) | Method for immunological assay | |
FI91975B (en) | Method and reagent for the determination of luteinising hormone and monoclonal antibodies suitable for that purpose | |
JPH1175839A (en) | Monoclonal antibody, cell strain and measurement of n1,n12-diacetylspermine | |
JP2821850B2 (en) | Reagent and method for detecting Wilson's disease | |
KR20230110263A (en) | Myocardial troponin I detection methods and kits | |
JPH05268987A (en) | Human anti-ceruloplasmin monoclonal antibody, detection of human ceruloplasmin with the same and hybridoma producing the same | |
Sjögren et al. | Demonstration of cross-reactions between pneumococci and α-Streptococci using gold-labelled mono-and polyclonal antibodies and electron microscopy | |
JPS59122951A (en) | Monochronal antibody which can react with common idiotype oninnateness-resisting dna antobody of human being | |
JPH02136745A (en) | Monoclonal antibody specific to oral germ | |
CZ288878B6 (en) | Murine lymphocyte hybridoma Rota G6/D4 | |
DD293265B5 (en) | Process for the preparation of monoclonal antibodies against Roetelnvirusantigen | |
JP2006238747A (en) | Cell line for producing monoclonal antibody against salivarius, method for producing the same, the monoclonal antibody produced by the same, kit containing the monoclonal antibody produced by the same |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |