HU196511B - Method for separating and detecting antigen-specific cells - Google Patents
Method for separating and detecting antigen-specific cells Download PDFInfo
- Publication number
- HU196511B HU196511B HU268984A HU268984A HU196511B HU 196511 B HU196511 B HU 196511B HU 268984 A HU268984 A HU 268984A HU 268984 A HU268984 A HU 268984A HU 196511 B HU196511 B HU 196511B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- cells
- antigen
- antibody
- producing
- cell
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
A találmány tárgya antigénspecifikus sejtadherencián alapuló sejtszeparációs és diagnosztikai eljárás.The present invention relates to a cell separation and diagnostic method based on antigen-specific cell adherence.
Több mint 10 éve ismeretes Engwall és Perlman [J. Xmmunology, 109, 129-135 (1972)) munkája nyomán, hogy antigén molekulák köthetők műanyag felületekhez, és ezen a felületen az antigén-antitest reakció lejátszódik. Ismeretes, hogy sejtfelszíni antigének elleni ellenanyagok alkalmazásával az illető antigén markert hordozó sejtek műanyag felületre előzőleg felvitt, a markerrel szembeni antitestekhez kiköthetőek. [Magé, M. G., McHugh, LL. és Rothstein, T. L. (1977), 3. Immunoi. Meth., 15, 47].Engwall and Perlman [J. Xmmunology, 109, 129-135 (1972), that antigen molecules can be bonded to plastic surfaces, and the antigen-antibody reaction occurs on that surface. It is known that by using antibodies against cell surface antigens, cells carrying said antigen marker can be bound to antibodies previously applied to a plastic surface. [Magé, M.G., McHugh, LL. and Rothstein, T. L. (1977) 3, Immunol. Meth., 15, 47].
Az eddigi eljárások sorén, ahol monoklonális ellenanyagok készítése volt a cél, immunizált állatokból a .hasznos' ellenanyag termelő sejteket nem szeparálták, hanem az összes lép- vagy nyirokcsomósejttel együtt .vakon' fuzionálták a tumorsejtekkel.In the prior art, where monoclonal antibodies have been made, the useful antibody producing cells from immunized animals have not been separated but fused with the tumor cells together with all spleen or lymph node cells.
Ezáltal a fúziós és szeparációs technika igen körülményessé vált. Nem volt ismeretes olyan megfelelő technika, mellyel a specifikus ellenanyagot termelő sejtek megfelelően, in vivő dúsíthatok illetve elválaszthatók lettek volna.Thus, the fusion and separation technique became very cumbersome. There is no known technique for properly, in vivo enriching or separating specific antibody producing cells.
A találmány szerinti eljárás a fenti eljárások hátrányait kiküszöböli, lehetővé tesz célzott sejtfúziót a specifikus ellenanyagot termelő és a felhasználandó tumorsejtek között.The method of the invention overcomes the drawbacks of the above methods, allowing targeted cell fusion between the tumor cells producing the specific antibody and the cells to be used.
A találmány lényege az antigén-antitest immunreakcióján alapuló sejtszeparálás. Az irodalomban a specifikus antitestet termelő sejtek in vivő körülmények közötti kimutatására illetve elválasztására alkalmas hasonló jellegű eljárás még nem került ismertetésre. Az általunk kidolgozott antigén-specifikus sejtadherencián alapuló technika (ASCAA) alkalmas ellenanyag-termelő sejtek kimutatására a sejteknek specifikus antigénjükhöz történő adherenciája alapján. A módszer lehetővé teszi ellenanyag-termelő sejtek kimutatását, így alkalmazható mint celluláris immunreaktivitást mérő módszer, felhasználható továbbá sejtszeperációs módszerként, mely alkalmas a rendelkezésre álló sejtszuszpenzióból specifikus ellenanyag-termelő sejtek izolálására. A módszer egyaránt alkalmazható immunológiai, diagnosztikai és biotechnológiai sejtszeparációs eljárásként.SUMMARY OF THE INVENTION The invention relates to cell separation based on the immune response of an antigen antibody. A similar method for detecting or isolating specific antibody-producing cells in vivo has not yet been described in the literature. The antigen-specific cell-adherence technique (ASCAA) we have developed is capable of detecting antibody-producing cells by the adherence of cells to their specific antigen. The method allows the detection of antibody-producing cells, thus being used as a method for measuring cellular immunoreactivity, and also as a cell separation method for isolating specific antibody-producing cells from the available cell suspension. The method can be used as an immunological, diagnostic and biotechnological cell separation procedure.
A módszerrel megoldható autoimmun betegségekben szenvedő betegek testnedveiből a specifikus ellenanyag-termelő sejtek kimutatása és azonosítása.The method can be used to detect and identify specific antibody-producing cells in the body fluids of patients with autoimmune diseases.
Mint már említettük, monoklonális antitestek készítésénél módszerünk segítségével az immunizált állat lépéböl vagy nyirokcsomóiból a specifikus ellenanyag-termelő sejtek izolálhatok, és a szeparált sejtek ezután szelektíven fuzionálhatok tetszőleges tumorsejt-vonallal.As noted, specific antibody-producing cells can be isolated from the spleen or lymph nodes of the immunized animal by the method of making monoclonal antibodies, and the separated cells can then be selectively fused to any tumor cell line.
A találmány szerint úgy járunk el, hogy a szeparálandó, specifikus ellenanyagot termelő sejteket tartalmazó elegyet műanyag lemezre felvitt megfelelő antigénnel hozzuk érintkezésbe.According to the invention, the mixture of cells producing the specific antibody to be separated is contacted with a suitable antigen on a plastic plate.
Az általunk kidolgozott ASCAA-módszer teljes folyamatát az 1. számú ébrén tüntetjük fel.The complete process of the ASCAA method we have developed is depicted in Wake # 1.
Első lépésként műanyag lemez felületére antigén molekulákat viszünk fel. Ezt a lépést érzékenyitésnek nevezzük. A műanyag lemez minősége nem kritikus, célszerűen mikrotitráló lemezt alkalmazhatunk. Előnyös a PVC vagy polisztirol alapanyagú lemez alkalmazása. Vizsgálataink során elsősorban Periplate (propilén Gmk, Pécs) vagy Dynatech Μ 129A mikrotitráló lemezeket használtunk. A lemezek érzékenyitését célszerűen PBS-coating pufferban végeztük, melynek összetétele a kővetkező:As a first step, antigenic molecules are applied to the surface of a plastic plate. This step is called sensitization. The quality of the plastic plate is not critical, and a microtiter plate is preferred. It is preferred to use a sheet of PVC or polystyrene material. In our experiments we used mainly Periplate (propylene Gmk, Pécs) or Dynatech Μ 129A microtiter plates. The sensitization of the plates was conveniently carried out in PBS-coating buffer consisting of the following:
NaHzPOt x HzO 0,345 g/l=2,5 mmólNa 2 PO 4 x H 2 O 0.345 g / L = 2.5 mmol
Na2HP0< x 12 H2O 2,68 g/l=7,5 mmólNa 2 HPO 2 x 12 H 2 O 2.68 g / L = 7.5 mmol
NaCl 8,474 g/l=145 mmól.NaCl 8.474 g / L = 145 mmol.
Az érzékenyités során célszerű, hogy a fehérje-antigén töltése minél nagyobb legyen. Ezért azt célszerűen 7 és 9 közötti pH-értéken végezzük. Az antigén-oldat célszerűen desztillált vízzel készíthető és pH-ja 7,2 ± 0,2. Alkalmazható azonban természtesen más összetételű és pH-értékű oldat is. Az antigént célszerűen a coating pufferban oldjuk fel úgy, hogy az érzékenyítéshez megkívánt mennyiséget 100 μΐ coating pufferban oldva visszük fel a lemezre, illetve a mikrotitráló lemez mélyületeire. Az így felvitt oldattal a lemezeket rövid ideig állni hagyjuk; igy például 1 órán át 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk.During sensitization, it is desirable to charge the protein antigen as much as possible. Therefore, it is preferably carried out at a pH of 7 to 9. The antigen solution is conveniently prepared in distilled water and has a pH of 7.2 ± 0.2. However, a solution of a different composition and pH can of course be used. Preferably, the antigen is reconstituted in coating buffer by plating the volume required for sensitization in 100 μΐ coating buffer or in the wells of the microtiter plate. The solution thus applied allowed the plates to stand for a short time; for example, incubate for 1 hour at 37 ° C.
Második lépésként célszerűen a nem kötődött antigént lemossuk a műanyag lemez, illetve a mélyületek felületéről. A mosáshoz használt egy lehetséges mosópuffer összetétele a következő:As a second step, it is expedient to wash the unbound antigen from the surface of the plastic sheet or the wells. The composition of a possible wash buffer used for washing is as follows:
liter PBS-coating pufferliter PBS-coating buffer
0,5 ml Tween 20 detergens0.5 ml Tween 20 detergent
20,2 g NaCl.20.2 g NaCl.
A találmányunk célszerű megvalósítása esetén 3x3 percig tartó mosást végzünk, és mikrotitráló lemezek alkalmazása esetén a lemez minden egyes mélyületébe 250 pl mosópuff ért viszünk fel.In a preferred embodiment of the invention, washing is performed for 3 x 3 minutes and 250 µl of wash buffer is applied to each well of the plate using microtiter plates.
A harmadik lépés a műanyag felület szabad kötőhelyeinek telítése a sejtekre nem káros, az antigénnel immunológiai rokonságban nem álló fehérje (például marha szérum albumin, BSA) oldatával. Egy ilyen alkalmazható BSA telitó oldat 0,5% BSA-t (Fraction 5, Sigma) tartalmaz, a PBS-Tween 20 mosóoldatban oldva. A lemezeket célszerűen 30 percig 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk, mikrotitráló alkalmazása esetén a mélyületekbe 100-100 ul telitőoldatot adagolunk.The third step is to saturate the free binding sites of the plastic surface with a solution of non-immunogenic protein (e.g. bovine serum albumin, BSA) that is not harmful to the cells. Such a usable BSA saturation solution contains 0.5% BSA (Fraction 5, Sigma) dissolved in PBS-Tween 20 Wash Solution. The plates are preferably incubated for 30 minutes at 37 ° C and 100-100 µl of saturated solution is added to the wells using microtiter.
Ezen lépés célja, hogy megakadályozzuk a sejtszuszpenzióból különböző, nem-antigénspecifikus sejteknek a műanyag lemezhez való közvetlen kötődését. Ezt a lépést azonban nem feltétlenül szükséges elvégezni, az eljárás végrehajtható ezen lépés elhagyáséval is.The purpose of this step is to prevent the direct binding of non-antigen-specific cells different from the cell suspension to the plastic plate. However, this step may not be necessary, and the procedure may be performed by omitting this step.
A negyedik lépésben - amennyiben az szükséges és a harmadik lépést elvégeztük az érzékenyitett és már telített felületet a második lépésben leírtakhoz hasonló módon mossuk.In the fourth step, if necessary and after the third step, the sensitized and already saturated surface is washed as described in the second step.
Az ötödik lépés lényegében a sejtek specifikus kötése az antigénhez. Ennek során az érzékenyitett és adott estben telített felületre felvísszük a vizsgálandó, illetve szeparálandó sejtek szuszpenzióját. Amennyiben mikrotitráló lemezt alkalmazunk, a mélyületekre célszerűen a vizsgálandó sejtszuszpenzió 100 pl-ét visszük fel. A sejtszuszpenzió sejtszáma nem kritikus; célszerű azonban néhányszor 10* - IO® mi-i koncentrációjú szuszpenzió alkalmazása. Célszerűen a sejtszuszpenziót úgy választjuk meg, hogy a kötődő sejtek megfelelő számban legyenek köthetők az antigénhez, azonban nagy sejtveszteség ne álljon fenn. A találmány szerinti eljárás egyik előnyös megvalósítása szerint a szuszpenzió készítésére 10% újszülött borjúsavót (Hmán Oltóanyagtermelö Vállalat, Budapest) tartalmazó RPMI-1640 (Gibco-Europe) tápfolyadékot alkalmazunk.The fifth step is essentially the specific binding of the cells to the antigen. This involves applying a suspension of cells to be tested or separated on the sensitized and, where appropriate, saturated surface. If a microtiter plate is used, 100 µl of the cell suspension to be tested is preferably applied to the wells. The cell number of the cell suspension is not critical; but it is preferably several times 10 * - m IO® ii concentrations suspension application. Preferably, the cell suspension is selected such that a sufficient number of binding cells can be bound to the antigen, but without significant cell loss. In a preferred embodiment of the process of the invention, the suspension is prepared using RPMI-1640 (Gibco-Europe) medium containing 10% newborn calf serum (Human Vaccine Production Company, Budapest).
Az antigén és sejtszuszpenzió inkubálását célszerűen 37 °C hőmérsékleten és általában 10 perc és félóra közötti ideig, célszerűen 15-20 percig végezzük. Az inkubálás ideje azonban természetesen függ a hőmérséklettől, az antigén és a sejtek minőségétől és a szuszpenzió sejtkoncentrációjától.The incubation of the antigen and the cell suspension is preferably carried out at 37 ° C and generally for 10 minutes to half an hour, preferably 15-20 minutes. However, the time of incubation will, of course, depend on the temperature, the quality of the antigen and cells, and the cell concentration of the suspension.
A hatodik lépésben az antigént és antigénhez kötött sejteket tartalmazó lemezt óvatosan úgy fordítjuk, hogy az antigént és kötött sejteket, továbbá a szuszpenziót tartalmazó oldala lefelé álljon. Amennyiben míkrotitráló lemezt alkalmazunk, a tápfolyadék felületi feszültsége a folyadék kicsurgását megakadályozza a mélyületekből.In the sixth step, the plate containing the antigen and the antigen-bound cells is gently inverted so that the side containing the antigen and the bound cells and the suspension is facing down. If a microtiter plate is used, the surface tension of the medium will prevent the liquid from leaking out of the wells.
A hetedik lépésben a kísérletet kiértékeljük. Amennyiben mikrotitráló lemezt alkalmaztunk, a megfordítás után rövid ideig, például 5 percig állni hagyott lemezen, célszerűen mikrotitráló lemezen mikroszkóp alatt, például 160-szoros nagyításnál az egy látótérben látható sejteket megszámoljuk, majd ezt a lemez minden egyes mélyületének 10 különböző látóterében megismételjük, és az így kapott sejtszámot mélyületenként átlagoljuk. Ha az egy látótérre vonatkozó átlagos sejtszámot megszorozzuk azon látóterek számával, amennyivel egy mélyület teljes felülete lefedhető (például 160-szoros nagyításnál ez 16), megkapjuk a kitapadó sejtek számát:In the seventh step, the experiment is evaluated. If a microtiter plate is used, the cells in a single field of view are counted under a microscope for a short period of time, such as 5 minutes after inversion, preferably on a microtiter plate, for example at 160x magnification, The cell number thus obtained is averaged per well. Multiplying the average number of cells per field of view by the number of fields of view that can cover the entire surface of a well (for example, 16 at a magnification of 160) gives the number of adherent cells:
- ε x i=l- ε x i = l
A = - N ahol X az egy látótérben számlálható sejtek száma, melyet i = 1-10-ig átlagolunk és szorozzuk N-nel, a mélyület területét lefedő lá4 tóterek száméval, amely A-t, a kitapadö sejtek számát adja.A = - N where X is the number of cells that can be counted in a single field of vision, which is averaged to i = 1-10 and multiplied by N, the number of wells covering the area of the depression, giving A, the number of adherent cells.
Ugyancsak a találmány tárgya javított eljárás monoklonális antitestet termelő sejtek előállításéra, melynek során az immunizált állat lépéból vagy nyirokcsomóiból nyert sejtekből a fenti eljárással izoláljuk a specifikus ellenanyag-termelő sejteket, majd ezeket szelektíven fuzionáljuk tetszőleges tumorsejt-vonal lal.The present invention also relates to an improved method for producing monoclonal antibody-producing cells, which comprises isolating specific antibody-producing cells from the spleen or lymph node cells of an immunized animal and selectively fusing them with any tumor cell line.
Amennyiben a cél az antigén-specifikus sejtek szeparálása, a nem kitapadt sejteket és a táptalajt célszerűen úgy távolitjuk el, hogy a lemezt, célszerűen mikrotitráló lemezt annak lefelé fordított felületén műanyag mikropipetta véggel megérintjük a sejtszuszpenzió nívóját, amely igy a pipettán végigfolyva kicsordul.If the aim is to separate antigen-specific cells, the non-adherent cells and the medium are preferably removed by touching the level of the cell suspension with the tip of a plastic micropipette on the downwardly facing surface of the plate, which flows through the pipette.
A kitapadt ellenanyag-termelő sejtek ezután szükség szerint a lemezen továbbtenyészthetők vagy a lemezről eltávolíthatók valamely tápfolyadékban történő szuszpendálással.The adherent antibody-producing cells can then be further grown on the plate or removed from the plate by suspending in medium.
Mint azt már említettük, a műanyag lemez kialakítása és minősége nem döntő tényező az eljárás során. Célszerű azonban diagnosztikai eljárás esetén mikrotitráló lemezt alkalmazni.As mentioned above, the design and quality of the plastic sheet are not critical to the process. However, it is advisable to use a microtiter plate for the diagnostic procedure.
A találmány szerinti eljárás alkalmazása során nyert összefüggéseket az I. és II. táblázat, valamint a 2. és 3. számú ábra mutatja.The relationships obtained with the process of the invention are shown in Figures I and II. Table 2 and Figures 2 and 3.
Az I. táblázat három, különböző ellenanyag-termelő sejtvonallal nyert adherenciaértéket tüntet fel. A mielin-bázikus proteinnel (MBP) szemben IgG ellenanyagot termelő sejtek 1 pg antigénnel érzékenyitett lemezhez szignifikánsan magasabb számban tapadtak, mint az 1 pg nem antigén fehérjével érzékenyitett lemezhez. A lemezek telítettek voltak, a telítés tojásalbuminnal történt (Ovalbumin, 0VA, Sigma). Hasonló jelenséget tapasztaltunk valamennyi, általunk vizsgált ellenanyag-termelő sejtvonal esetében is, amelyek közül további két példát tüntetünk fel, az ÓVA ellen IgE ellenanyagot termelő sejtek kitapadását, illetve a szuperoxid dizmutéz (SÓD) enzimmel szemben IgG ellenanyagot termelő sejtek adherenciéját. A vizsgálatok során 105 sejt/ml koncentrációjú sejtszuszpenziók 100 pl-ét vittük fel az érzékenyitett felületekre. A táblázatban az egy mólyülethez adheréló sejtek számának átlagát és a középérték középhibáját tüntetjük fel.Table I shows the adherence values obtained with three different antibody-producing cell lines. Cells producing IgG antibody to myelin basic protein (MBP) adhered to 1 pg antigen-sensitized plate in significantly higher numbers than 1 pg non-antigen protein sensitized plate. Plates were saturated, saturated with egg albumin (Ovalbumin, 0VA, Sigma). A similar phenomenon was observed in all of the antibody-producing cell lines we investigated, two of which are examples of adherence of cells producing IgE antibody against ÓVA and adherence of cells producing IgG antibody to superoxide dismutase (SOD). During the assays, 100 µl of cell suspensions of 10 5 cells / ml were applied to the sensitized surfaces. The table shows the mean number of cells adhering to one bullet and the mean error of the mean.
A II. táblázaton ellenanyag-termelő sejtek és ellenanyagot nem termelő sejtek adherencia-értékeit tüntetjük fel.II. Table 2 shows the adherence values for antibody-producing cells and non-antibody-producing cells.
Az első oszlop MBP elleni IgG-t termelő sejtvonal adatait tartalmazza. Ezt a sejtvonalat a MBP ellen ellenanyagot termelő plazmasejt és egy ellenanyagot nem termelő Sp-2-0-Agl4 jelű egérmielóma sejt fúziójával hoztuk létre. A 2. oszlop adatai egyértelműen mutatják, hogy a nem szekretéló Sp-2-0-Agl4 jelű fúziós partner önmagában specifikus adherencia-jelenséget nem mutat. A BHK elne-36 vezésű sejtvonal, amely kínai hörcsög embrionális vesesejtjeinek tenyészete, valamint a HeLa, amely egy emberi porció epithelból származó sejtvonal, adherencia-jelenséget nem mutat a találmány szerinti módszerben.The first column contains data on the IgG cell line producing anti-MBP. This cell line was created by fusion of an MBP antibody producing plasma cell to a non-antibody producing Sp-2-0-Agl4 mouse myeloma cell. Column 2 data clearly show that the non-secretory fusion partner Sp-2-0-Agl4 does not exhibit specific adherence in itself. The BHK lineage cell line, which is a culture of Chinese hamster embryonic kidney cells, and HeLa, a cell line derived from a human portion of the epithelium, do not show adherence in the method of the invention.
A 2. ábra az adheráló sejtek számának és az inkubálási idő hosszának összefüggését szemlélteti. Az ábrán az MBP-vei szemben ellenanyagot termelő sejtvonal adherencia-értékeit ábrázoljuk antigénjével (sötét körök), és BSA-val érzékenyitett (üres körök) míkrotitráló lemezekhez az inkubálási idő függvényében. Megállapítható, hogy az antigén-specifikus sejtadherencia időbeli kialakulása az adott körülmények között 20 perc eltelte után maximumot mutat, míg ezt a nem specifikus adherencia nem mutatja. Az ábrán feltüntettük az adatok szórását is. A vizsgálat paraméterei megegyeznek az I. táblázatnál megadottakkal.Figure 2 illustrates the relationship between the number of adherent cells and the incubation time. The figure shows the adherence values of the cell line producing antibody to MBP for microtiter plates with antigen (dark circles) and BSA-sensitized (blank circles) as a function of incubation time. It can be stated that the development of antigen-specific cell adhesion over time is maximal under the given conditions after 20 minutes, whereas non-specific adherence is not. The standard deviation of the data is also shown. The test parameters are the same as those given in Table I.
Az 3. ábra az antigénhez kitapadó sejtek számét szemlélteti, az érzékenyitéshez használt antigén mennyiségének függvényében. Az inkubélást 10 percig végeztük. A kísérlethez MBP-t és vele szemben ellenanyagot termelő sejtvonalat használtunk.Figure 3 shows the number of antigen-adherent cells as a function of the amount of antigen used for sensitization. The incubation was carried out for 10 minutes. MBP and an antibody producing cell line were used for the experiment.
A függőleges tengelyen az adheráló sejtek számát, a vízszintes tengelyen az egy mélyületre az érzékenyités során felvitt antigén mennyiségét ábrázoljuk. A kísérlet többi paramétere megegyezik az X. táblázatnál leírtakkal. Látható, hogy a kitapadó sejtek száma arányos a felületre felvitt antigén menynyisé gével.The vertical axis represents the number of adherent cells and the horizontal axis shows the amount of antigen applied to one well during sensitization. The other parameters of the experiment are the same as those described in Table X. It can be seen that the number of adherent cells is proportional to the amount of antigen applied to the surface.
A fentiekből megállapítható, hogy a találmány szerinti antigén-specifikus adherencián alapuló módszer ellenanyag-termelő sej5 tek esetén alkalmazható, specifikus antigénjük jelenlétében, igy a módszer alkalmas a specifikus ellenanyag-termelő sejtek kimutatására és a specifikus ellenanyagot termelő sejtek elválasztáséra, a specifikus ellenanya10 got egyáltalán nem termelő, vagy a nem specifikus ellenanyagot termelő sejtektől.From the above, it can be seen that the antigen-specific adherence method of the present invention is applicable to antibody-producing cells in the presence of their specific antigen, and is thus capable of detecting specific antibody-producing cells and separating specific antibody-producing cells. from non-producing or non-specific antibody producing cells.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU268984A HU196511B (en) | 1984-07-10 | 1984-07-10 | Method for separating and detecting antigen-specific cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU268984A HU196511B (en) | 1984-07-10 | 1984-07-10 | Method for separating and detecting antigen-specific cells |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT41128A HUT41128A (en) | 1987-03-30 |
| HU196511B true HU196511B (en) | 1988-11-28 |
Family
ID=10960650
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU268984A HU196511B (en) | 1984-07-10 | 1984-07-10 | Method for separating and detecting antigen-specific cells |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| HU (1) | HU196511B (en) |
-
1984
- 1984-07-10 HU HU268984A patent/HU196511B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUT41128A (en) | 1987-03-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4608246A (en) | Testing for a blood group immunological reaction | |
| US4241176A (en) | Magnetic gel suitable to immunoenzymatic determinations | |
| US5770457A (en) | Rapid oneside single targeting (ROST) immunoassay method | |
| AU2005224973B2 (en) | Device and method for detecting analytes by visualization and separation of agglutination | |
| JP3330604B2 (en) | Solid-phase immunoassay | |
| US4420558A (en) | Bright field light microscopic method of enumerating and characterizing subtypes of white blood cells and their precursors | |
| US4322495A (en) | Immunoassay | |
| EP0158746A2 (en) | Visualization method for the direct or indirect detection of the reaction between a specific binding agent and the corresponding acceptor substance in blot overlay assays | |
| Bradshaw et al. | Concurrent detection of secreted products from human lymphocytes by microengraving: Cytokines and antigen-reactive antibodies | |
| US4297104A (en) | Method of detecting or identifying virus antigens, erythrocyte or cell antigens or antibodies in a biological medium | |
| Springer et al. | Cell adhesion molecules: detection with univalent second antibody. | |
| EP0345277B1 (en) | Analyte detection in particulate-containing samples | |
| EP0018357A1 (en) | Method for the determination of biological substances by diffusion in a porous matrix or by electrophoresis | |
| EP0350233B1 (en) | An article for performing immunological assays utilizing organic dyes and methods for producing and utilizing same | |
| AU2006236403B2 (en) | Solid phase immobilization of phospholipids and cofactor proteins via covalent attachment | |
| JP4658034B2 (en) | Surface layer affinity chromatography | |
| US4816413A (en) | Solid phase indicator red blood cells and method | |
| US4668637A (en) | Method for detecting and dosing by erythroadsorption a biological substance | |
| US4925786A (en) | Method of determining blood groups by the solid-phase procedure with blood-group specific antibodies of the immunoglobulin M. type and support and kit for carrying out the method | |
| HU196511B (en) | Method for separating and detecting antigen-specific cells | |
| CA1231047A (en) | Diagnostic test for rheumatological diseases | |
| JPH02165052A (en) | Immunological measurement | |
| FI843562A0 (en) | FOERFARANDE FOER IMMUNOKEMISK BESTAEMNING AV HEPATITIS B KAERNANTIGENER. | |
| JPH01123150A (en) | Reaction container and immunoassay | |
| KR930000951A (en) | Diagnostic method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 |