HU194318B - Process for the delta 1-dehydrogenation of steroids in the presence of materials relieving from toxic kinds of oxygen - Google Patents
Process for the delta 1-dehydrogenation of steroids in the presence of materials relieving from toxic kinds of oxygen Download PDFInfo
- Publication number
- HU194318B HU194318B HU841880A HU188084A HU194318B HU 194318 B HU194318 B HU 194318B HU 841880 A HU841880 A HU 841880A HU 188084 A HU188084 A HU 188084A HU 194318 B HU194318 B HU 194318B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- dione
- pregn
- acetoxy
- hydroxy
- methyl
- Prior art date
Links
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 13
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 title claims abstract description 13
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 12
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 title claims description 59
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 34
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 24
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 title description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 title description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 27
- 108091006149 Electron carriers Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 27
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 claims description 21
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 claims description 21
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Substances CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 17
- OSVMTWJCGUFAOD-KZQROQTASA-N formestane Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1O OSVMTWJCGUFAOD-KZQROQTASA-N 0.000 claims description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 9
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 claims description 8
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 claims description 8
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 claims description 8
- 229940123973 Oxygen scavenger Drugs 0.000 claims description 7
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 claims description 7
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 7
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N androstenedione Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- BTTWKVFKBPAFDK-UHFFFAOYSA-N (9beta,10alpha)-Androst-4-ene-3,17-dione Natural products OC1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)O)C4C3CCC2=C1 BTTWKVFKBPAFDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N androst-4-ene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N 0.000 claims description 4
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 claims description 4
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 claims description 3
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 claims description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LUJVUUWNAPIQQI-QAGGRKNESA-N androsta-1,4-diene-3,17-dione Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 LUJVUUWNAPIQQI-QAGGRKNESA-N 0.000 claims description 2
- 230000003635 deoxygenating effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 claims description 2
- -1 methyl androst-1,4,9 (11) -triene-3,17-dione Chemical compound 0.000 claims description 2
- LOTXLBRAMLYOOM-DTIMJLODSA-N (6s,8s,10r,13s,14s)-6-fluoro-10,13-dimethyl-2,6,7,8,12,14,15,16-octahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)C3=CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3C[C@H](F)C2=C1 LOTXLBRAMLYOOM-DTIMJLODSA-N 0.000 claims 1
- NFDIJBXBFYAZJI-DTIMJLODSA-N (6s,8s,10r,13s,14s)-6-fluoro-10,13-dimethyl-7,8,12,14,15,16-hexahydro-6h-cyclopenta[a]phenanthrene-3,17-dione Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)C3=CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3C[C@H](F)C2=C1 NFDIJBXBFYAZJI-DTIMJLODSA-N 0.000 claims 1
- GWNJJJBBXCRZFQ-QZHFEQFPSA-N C[C@@]12CCC[C@H]1[C@@H]1C(CC3=CC(CC[C@]3(C)C1=CC2)=O)=O Chemical compound C[C@@]12CCC[C@H]1[C@@H]1C(CC3=CC(CC[C@]3(C)C1=CC2)=O)=O GWNJJJBBXCRZFQ-QZHFEQFPSA-N 0.000 claims 1
- 238000007872 degassing Methods 0.000 claims 1
- 108010001070 3-oxosteroid delta(1) dehydrogenase Proteins 0.000 abstract description 16
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 41
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 39
- MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N Menadione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C)=CC(=O)C2=C1 MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 239000000047 product Substances 0.000 description 25
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 13
- 229940041603 vitamin k 3 Drugs 0.000 description 13
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 12
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 12
- 235000012711 vitamin K3 Nutrition 0.000 description 12
- 239000011652 vitamin K3 Substances 0.000 description 12
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 241000430521 Alyssum Species 0.000 description 8
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 241000203720 Pimelobacter simplex Species 0.000 description 7
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 7
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 7
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 7
- ITRJWOMZKQRYTA-RFZYENFJSA-N Cortisone acetate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)COC(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2=O ITRJWOMZKQRYTA-RFZYENFJSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 6
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 6
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 6
- 229960003290 cortisone acetate Drugs 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 5-methylphenazinium methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.C1=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 4
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 239000010699 lard oil Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- FRASJONUBLZVQX-UHFFFAOYSA-N 1,4-naphthoquinone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C=CC(=O)C2=C1 FRASJONUBLZVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SNMVJSSWZSJOGL-PLOWYNNNSA-N 9alpha-hydroxyandrost-4-en-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@@]3(O)CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 SNMVJSSWZSJOGL-PLOWYNNNSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 2
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 229960005471 androstenedione Drugs 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N beta-Sitostanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- 239000012351 deprotecting agent Substances 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- KZJWDPNRJALLNS-VPUBHVLGSA-N (-)-beta-Sitosterol Natural products O[C@@H]1CC=2[C@@](C)([C@@H]3[C@H]([C@H]4[C@@](C)([C@H]([C@H](CC[C@@H](C(C)C)CC)C)CC4)CC3)CC=2)CC1 KZJWDPNRJALLNS-VPUBHVLGSA-N 0.000 description 1
- CSVWWLUMXNHWSU-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-ethyl-5alpha-cholest-22-en-3beta-ol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 CSVWWLUMXNHWSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDVNGRJNGNAPSO-LTGMLJBUSA-N (6s,8s,10r,13s,14s)-6,10,13-trimethyl-7,8,12,14,15,16-hexahydro-6h-cyclopenta[a]phenanthrene-3,17-dione Chemical compound C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1C2=CC[C@]2(C)C(=O)CC[C@H]21 KDVNGRJNGNAPSO-LTGMLJBUSA-N 0.000 description 1
- FQWLSWNUHFREIQ-PJHHCJLFSA-N (6s,8s,9s,10r,11s,13s,14s,17r)-11,17-dihydroxy-17-(2-hydroxyacetyl)-6,10,13-trimethyl-2,6,7,8,9,11,12,14,15,16-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-one Chemical compound C([C@@]12C)CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)CO)CC[C@H]21 FQWLSWNUHFREIQ-PJHHCJLFSA-N 0.000 description 1
- SUPOKHOQAKXOHJ-BYZMTCBYSA-N (8s,9s,10r,13r,14s,17s)-17-ethyl-10,13-dimethyl-2,3,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene Chemical class C1CC2=CCCC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](CC)[C@@]1(C)CC2 SUPOKHOQAKXOHJ-BYZMTCBYSA-N 0.000 description 1
- MSEZLHAVPJYYIQ-VMXHOPILSA-N (8s,9s,10r,13s,14s)-10,13-dimethyl-1,2,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-one Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CCC[C@@]1(C)CC2 MSEZLHAVPJYYIQ-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- RZACPWSZIQKVDY-IRIMSJTPSA-N (8s,9s,10r,13s,14s)-10,13-dimethyl-6,7,8,9,12,14,15,16-octahydrocyclopenta[a]phenanthrene-3,11,17-trione Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 RZACPWSZIQKVDY-IRIMSJTPSA-N 0.000 description 1
- LGGAERDIVMWORD-RNQTWYFASA-N (8s,9s,10s,13s,14s)-10,13-dimethyl-2,4,5,6,7,8,9,14,15,16-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene-3,17-dione Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3C=C[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC21 LGGAERDIVMWORD-RNQTWYFASA-N 0.000 description 1
- RZRPTBIGEANTGU-UHFFFAOYSA-N -Androst-4-ene-3,11,17-trione Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 RZRPTBIGEANTGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Chemical group O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KLEXDBGYSOIREE-UHFFFAOYSA-N 24xi-n-propylcholesterol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CCC)C(C)C)C1(C)CC2 KLEXDBGYSOIREE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VDJKJPMLWJWQIH-UHFFFAOYSA-M 5-ethylphenazin-5-ium;ethyl sulfate Chemical group CCOS([O-])(=O)=O.C1=CC=C2[N+](CC)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 VDJKJPMLWJWQIH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710188971 Catalase-3 Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LPZCCMIISIBREI-MTFRKTCUSA-N Citrostadienol Natural products CC=C(CC[C@@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC[C@H]4[C@H](C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)C(C)C LPZCCMIISIBREI-MTFRKTCUSA-N 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical group O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Chemical group O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000723247 Cylindrocarpon Species 0.000 description 1
- ARVGMISWLZPBCH-UHFFFAOYSA-N Dehydro-beta-sitosterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)CCC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 ARVGMISWLZPBCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000029422 Hypernatremia Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004165 Methyl ester of fatty acids Substances 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N UNPD88870 Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)=CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Chemical group 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003470 adrenal cortex hormone Substances 0.000 description 1
- RZRPTBIGEANTGU-IRIMSJTPSA-N adrenosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 RZRPTBIGEANTGU-IRIMSJTPSA-N 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001443 androstenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000003254 anti-foaming effect Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- MJVXAPPOFPTTCA-UHFFFAOYSA-N beta-Sistosterol Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2C3CC=C4C(C)C(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(C)C MJVXAPPOFPTTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N beta-sitosterol Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2(C)C3CC=C4CC(O)CCC4C3CCC12C)C(C)C NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- RLGQACBPNDBWTB-UHFFFAOYSA-N cetyltrimethylammonium ion Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C RLGQACBPNDBWTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 229940107161 cholesterol Drugs 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- HPDFFVBPXCTEDN-UHFFFAOYSA-N copper manganese Chemical compound [Mn].[Cu] HPDFFVBPXCTEDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000017 cortisol group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- RKHQGWMMUURILY-UHRZLXHJSA-N cortivazol Chemical compound C([C@H]1[C@@H]2C[C@H]([C@]([C@@]2(C)C[C@H](O)[C@@H]1[C@@]1(C)C2)(O)C(=O)COC(C)=O)C)=C(C)C1=CC1=C2C=NN1C1=CC=CC=C1 RKHQGWMMUURILY-UHRZLXHJSA-N 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 230000001882 diuretic effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- WIXFIQKTHUVFDI-UHFFFAOYSA-N menadione sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C)(S(O)(=O)=O)CC(=O)C2=C1 WIXFIQKTHUVFDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 150000002897 organic nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Chemical group CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000867 polyelectrolyte Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000004053 quinones Chemical class 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N sitosterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N 0.000 description 1
- 235000015500 sitosterol Nutrition 0.000 description 1
- 229950005143 sitosterol Drugs 0.000 description 1
- NLQLSVXGSXCXFE-UHFFFAOYSA-N sitosterol Natural products CC=C(/CCC(C)C1CC2C3=CCC4C(C)C(O)CCC4(C)C3CCC2(C)C1)C(C)C NLQLSVXGSXCXFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N stigmasterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N 0.000 description 1
- 235000016831 stigmasterol Nutrition 0.000 description 1
- 229940032091 stigmasterol Drugs 0.000 description 1
- BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N stigmasterol Natural products CCC(C=CC(C)C1CCCC2C3CC=C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(C)C BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Chemical group 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/02—Dehydrogenating; Dehydroxylating
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
A kortikoszteroidokat az 1950-es években kezdték terápiás célra alkalmazni, mégpedig a reumatoid arthritis kortizon-acetátos kezelésére. Később kimutatták, hogyha a hidrokortizon Illetve kortizon 1,2-helyzetében kialakítanak egy telítetlen kötést, a kapott szteroldok — a prednlzolon és prednizon — hatása nagyobb, és a gyógyszer által kiváltott sóvisszatartás csökken az alapvegyülethez viszonyítva. Ezt követően a kortikoidokkal kapcsolatos rendellenességek kezelésére alkalmazott szteroldok többségén is elvégezték a fenti 1,2-kettőskötés kialakítást.
1977-ben két olyan Amerikai Egyesült Államokbeli szabadalom jutott nyilvánosságra, amelyben a kortikoszteroidok-. szterin prekurzorokból kiinduló szintézisét új oldalról közelítik meg. A 4 035 236. számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban a 9a-hidroxl-androszténdion előállítását Ismertetik szitoszterin, stigmaszterol vagy koleszterin fermentálása útján. A 4 041 055. számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás pedig a gyógyászatiig hasznosítható kortikoszteroidok 9a-hidroxi-androsztén-dionból történő előállítására vonatkozik, egy általános eljárás segítségével. A fenti eljárások köztitermékei közé tartoznak a 3-keto-A , (11) konfigurációjú származékok is.
A gyógyhatású szteroldok szintézisében fontos köztitermékként hasznosítható szteroidszármazékok A-györűjében az 1,2 telítetlen kötés kialakítására számos mikrobiológiai eljárás ismeretes a szakirodalomból. A 2 837 464. számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban ismertetett eljárás szerint a szteroidok 1-dehldrogénezésére Arthrobacter simplex fermentációs tenyészethez adják a szteroid szubsztrátot. A fenti eljárás használhatósága azonban korlátozott. A fenti baktérium, és más 1-dehidrogénező baktériumok is tovább bonthatják a szteroidmolekulákat, aminek következtében a hozam csökken és nemkívánatos melléktermékek is keletkeznek.
A 3 091 575. számú Amerikai Egyesült Államokbeli szabadalmi leírás egy javított eljárást ismertet, amelynek értelmében a szteroldok 1-dehldrogénezését úgy végzik, hogy a szteroidot elektron-hordozóval keverik, és a baktériumsejteket valamely rövidszénláncú alkanoUal vagy rövidszénlánéú alkanonnal - például acetonnal - előkezelik. A fenti előkezelés következtében az egyik nemkívánatos enzim — a 20-keto-reduktáz - aktivitása csökken a sejtekben.
A 3 047 469. számú Amerikai Egyesült Államokbeli szabadalmi leírásban más típusú eljárást ismertetnek, közelebbről, a fenti eljárásban az 1,2-helyzetben telített szteroidot egy elektron-hordozó és egy szteroid-1-dehldrogenáz tartalmú extraktum elegyével kezelik, az extraktumot egy Nocardia, Corynebacterium, Mycobaterium vagy Cylindrocarpon nemzetségbe tartozó mikroorganizmusból nyerik. A fenti módszerrel számos olyan hátrány kiküszöbölhető, amely az élő baktériumok alkalmazásából adódik, többek között csökkenthetők a szteroidok lebontásához vezető meUékreakciók.
A 3 091 575. számú Amerikai Egyesült Államokbeli szabadalmi leírásban foglalt eljárás szerint a kívánt termék lebomlását úgy kerülik el, hogy a fermentációs táptalajhoz a szteroid szubsztrát hozzáadása előtt, vagy azzal egyldőben inhibitort - például egy kinon-tipusú vegyületet - adnak.
Az exogén elektron-hordozók alkalmazását sokszor korlátozza az, hogy ezek mérgezhetik az enzim10 rendszert (J. H. Ouasiel: Methods in Enzymology, S. P. Colowick és N. O. Káplán szerkesztők, Academic Press, Inc., New York, 4. kötet, 329-336, 1957]. Yung és Studebaker [Biotechnology and Bioengineering, 20, 17-25 (1978)] Az elektron-hordozó fenazin-metoszulfát (PMS) szuperoxid- vagy peroxld-képződés miatti lehetséges toxikus hatását vizsgálva Pseudomonas testosteronl szterold-l-dehidrogenázon, megállapították, hogy a PMS jelenlétében az 1-dehidrogenáz aktivitás lényegében változatlan. Ezt a tényt azzal magyarázták, hogy a fend erősen aerob mikroorganizmus peroxld-diszmutáz és kataláz aktivitása elegendő ahhoz, hogy a képződő szuperoxidot és peroxidot elbontsa, még mielőtt azok a szteroid-1-dehidrogenáz enzimet károsítanák.
A találmány szerinti eljárás olyan elektron-hordozó jelenlétében történő új, tökéletesített 1-dehidrogénezési biokonverzióra vonatkozik, amely a technika állásának ismeretében sem kézenfekvő.
A találmány azon a felismerésen alapul, hogy ha a szteroidok 1-dehidrogenézésére használt mikrobiológiai konverziós rendszerhez valamely beadagolt elektron-hordozó jelenlétében egy vagy több peroxld-mentesítő anyagot vagy szuperoxld-dlszmutázokat és peroxld-mentesitő anyagokat adunk, az ismert eljárásoknál sokkal hatékonyabban alakíthatók át az 1,2-telitett szteroidok megfelelő 1,2-telítetlen szteroid-származékokká. A fenti anyagok hozzadása megakadályozza a sejtek és az elektron -hordozók, vagy a szteroid-1-dehidrogenáz és az elektron-hordozók kölcsönhatásából származó toxikus oxigénféleségeknek a szteroid-1-dehidrogenáz aktivitására gyakorolt káros hatását.
A találmány szerinti eljárás nagyobb hatékonysága abban nyilvánul meg, hogy
1) az 1 g száraz sejt által 1-dehidrogénezett szteroidszubsztrát mennyisége nő,
2) nagyobb szubsztrát-koncentrációt alkalmazhatunk, mint az ismert eljárások esetén,
3) a biológiai átalakító rendszerben átalakulatlanul maradó szubsztrát mennyisége csökken,
4) az átalakulás sebessége növekszik,
5) csökken a nemkívánatos melléktermékek képződése a biokonverzióban, eltekintve azoktól a termékektől, amelyek a szteroid-lebontó enzimek aktivitásának gátlása céljából az enzim-készítmény specifikus kezelésének következtében képződtek. A fenti hatások összességükben azt eredményezik, hogy a találmány szerinti eljárással a kívánt tennék jobb hozammal, ennek folytán gazdaságosabban állítható elő, mint az ismert eljárásokkal.
A találmány szerinti eljárást részleteiben az alábbiakban ismertetjük.
Mikroorganizmusok
Mikroorganizmusként bármely olyan mlkróbát használhatunk, amely önmagában ismerten alkalmas a szteroldok 1-dehldrogénezésére. A fenti mikroorganizmusok felsorolása például a [Chamey W. és Herzog, H.: Microbial Transformation of Steroids, Academic Press, Inc., New York, (1967)] irodalmi helyen található.
Az ismert 1-dehidrogénező mikroorganizmusok prokariota vagy eukariota nemzetségbe tartozó különféle fajok lehetnek, példaként az Arthrobacter, Corynebacterium, Nocardia, Mycobacterium, Streptomyces, Bacterlum, Pseudomonas, Bacillus, Sep’tomyxa, DidymeUa, és Cilindrocarpon nemzetségeket említjük.
194 318
Az 1-dehidrogénezési célra leggyakrabban használt mikroorganizmusok az Arthrobacter simplex ATCC 6946, amely a 2 837 464. számú Amerikai Egyesült Allamok-beli szabadalmi leírásból Hmert. g
A továbbiakban túlnyomóan ezt a mikroorganizmust használjuk a találmány szerinti eljárás közelebbi ismertetése céljából. Természetesen a találmány szerinti eljárás bármely, a szteroidok biológiai átalakítására használt mikrobiológiai eredetű 1-dehidrogenáz-készítménnyel lefolytatható, beadagolt elekt- 10 ron-hordozók és a képződő toxikus oxigénféleségek inaktiválására alkalmas anyagok jelenlétében.
A szteroid-dehidrogenáz biokatalizátor előállítása
A mikroorganizmusok tenyésztésére használt vizes táptalaj az alábbi összetevőket tartalmazza: 1
a) a mikroorganizmus szaporodásához szükséges nit- '0 rogén-forrásként szervetlen sókat - például nitrát-, vagy ammóniuin-sókat — vagy szerves nitrogénvegyületeket, például élesztő-kivonatot, peptont, kukoricalekvárt,
b) szén- és energiaforrásként szénhidrátokat és cu- 20 korszármazékokat, olajat, zsírsavakat és zsírsavmetil-észtereket, alkoholokat, aminosavakat és szerves savakat,
c) ionokat. és nyomelemeket — például nátrium-, kálium-, magnézium-, foszfát-, szulfát-, mangánréz-, kobalt-, molibdén-lonokat - a csapvízben 25 vagy a kevéssé tisztított táptalaj-alkotórészekben
- például kukoricalekvárban — előforduló mennyiségben.
A mikroorganizmus szaporodásához oxigént igényel. A hőmérséklet 10 és 45eC között változhat, az optimum 28 és 37ÖC között van, A. simplex esetén. 30 Az A. simplex szaporodásához optimálisan semleges pH körüli értéket biztosítunk. A sejtek szteroid-ldehidrogenáz aktivitásának indukálására legalább 0,005 vegyes%-ban egy 1,2-telített 3-keto-szteroidszármazékot - például androszta-4-én-3,17-diont « vagy kortizon-acetátot — adunk a tenyészethez. Az indukálószert a tenyésztési ciklus tetszőleges pontján hozzáadhatjuk a tenyészethez. A nutrienseken például disznózsír-olajon — tenyésztett mikroorganizmusok rendszerint gyorsan elkezdik a szteroid-1-dehidrogenáz szintetizálását, míg a glükózon te- 4Q nyésztett mikroorganizmusoknak az enzim-szintézis megindulása előtt el kell fogyasztaniuk a glükózt.
Az induktor hozzáadása után célszerűen legalább 6 órán át inkubáljuk a tenyészetet. Ezután az 1,2-dehjdrogenáz aktivitással rendelkező tenyészetet tetszőleges formában felhasználhatjuk a kívánt sztero- 45 id-szubsztrát 1-dehidrogénezésének katalizálására. A teljes sejteket tartalmazó fermentlevet közvetlenül Is felhasználhatjuk. Ugyanezeket a sejteket felhasználhatjuk úgy is, hogy először a táptalajból a szokásos módin - például centrifugálással, flokkulálással és szűréssel vagy ultraszűréssel - összegyűjtők és 50 koncentráljuk azokat. Az elválasztott sejteket vagy nedves állapotban - körülbelül 60-80% nedvességtartalmú formában - használjuk fel, vagy szárítás után. A szárítást például rövidszénláncú alkanollal vagy alkanonnal, így -acetonnal végzett kezeléssel, cc vákuum-szárítással melegítés közben, fagyasztva szá- 00 ritással, levegős szárítással melegítés közben, vagy porlasztásos szárítással végezzük, míg a nedvességtartalom 3-30%-ra csökken. A nedvességtartalom előnyösen 1-10%. A sejteket a felhasználásig előnyösen 5eC-on tároljuk. Aktív száraz sejteket úgy is θθ előállíthatunk, hogy a száraz sejteket a szokásos eljárással immobilizáljuk, például a sejteket poli(akril-amid)-gélbe vagy kollagénbe zárjuk, vagy polielektroUt-hordozóhoz kötjük kovalens kötéssel, a (Methods in Enzimology, XLIV. kötet, 11-317. oldal (1976) Academic Press, Inc., New York] irodalmi helyen leírtak szerint. A peroxid-mentesitő anyagok hozzáadásával megszüntethetjük a különböző módszerekkel koncentrált és szárított sejtek szteroid-l-dihidrogenáz aktivitásában a különféle biokonverziós eljárások során észlelhető eltéréseket. A szteroid-l-dehidrogenáz aktivitás sejtmentes formában, oldatként vagy immobillzált enzimként is hasonló eredménnyel használható a szteroidok 1-dehidrogénezésének katalizálására. Az aktív enzimet a mikroorganizmus-sejtekből a szokásos feltárási eljárásokkal - például ultrahangos kezeléssel, vagy nyomással végzett roncsolással, a [Manual of Methods fór General Bacteriology 367. oldal (1981) American Society fór Microbiology, Washington, D. C.] irodalmi helyen leírtak szerint, vagy más ismert módon — tehetjük szabaddá. A szabaddá vált enzimet nyers extraktum formájában is használhatjuk, de a szokásos biokémiai fehérietísztítási eljárásokkal tovább is tisztíthatjuk, például a [Methods in Enzymology, ΧΧΠ. kötet, (1971), Academic Press, Inc., New York] irodalmi helyen ismertetett módszerek szerint. A tisztítást például centrifugálás, ammónium-szulfátos kicsapás, gélszűrés, ioncserélő kromatográfia, izoelektromos módszerek és hasonló műveletek kombinálásával hajtjuk végre.
Biokonverzió
A biológiai átalakítás során a szteroid-l-dehidrogenáz aktivitású készítményt szteroid-szubsztráttal hozzuk össze, -hozzáadott elektron-hordozó és egy vagy több toxikus oxigénféleségektől mentesítő anyag, például peroxid-mentesitő anyag, vagy szuperoxid-diszmutáz és peroxid-mentesitő anyag jelenlétében. A biológiai átalakítást vizes rendszerben, vagy 0%-nál több, de 100%-nál kevesebb vízzel nem elegyedő szerves oldószert — például toluolt, xilolt, benzolt, heptánt, butil-acetátot, metilén-kloridot vagy más hasonló oldószert - tartalmazó vegyes rendszerben végezzük. Az elektron-hordozót azért adjuk a rendszerhez, hogy elősegítsük a szteroid-l-dehidrogénezést és/vagy gátoljuk azokban a készítményekben a szteroid-bontó aktivitást, amely készítményekben ezt az aktivitást előzőleg nem szüntettük meg.
Külső elektron-hordozóként például menadiont (2-metfl-l,4-naftokinon), menadion-biszulfltot, 1,4-naftoldnont, fenazin-metoszulfátot, fenazin-etoszulfátot, K-vitamin-csoportba tartozó anyagokat, vagy hasonló vegyületeket használunk. Az elektronhordozót előnyösen katalitikus mennyiségben - például
2,5 x 10'4 mól/1 és 5,0 x 10's mól/1 közötti koncentráció-tartományban - adjuk a rendszerhez az 1-dehidrogénezési reakció elősegítésére. A toxikus oxigén-féleségektől mentesítő anyagok hozzáadásának előnyös hatása különösen akkor tapasztalható, ha növeljük a hozzáadott elektron-hordozó mennyiségét.
A fenti hatás abban nyilvánul meg, hogy adott mennyiségű szteroid átalakításához kevesebb szteroid-1-dehldrogenázt kell alkalmaznunk, 8 reakciósé bessíg fokozódik, kevesebb az átalakuiatlan anyag, magasabb szubsztrát-koncentráció alkalmazható, stb. Ha az oxigénféleségektől mentesítő anyagot elhagyjuk, a nagyobb koncentrációban használt elektron-
194 318 hordozó hátrányosan befolyásolja a reakciót.
A toxikus oxigénféleségektol mentesítő anyagot előnyösen a reakció kezdetén adjuk a biokonverziós rendszerhez. A mentesítő anyagok vagy azáltal hatnak, hogy elintínálják a káros oxigénféleségeket, vagy úgy csökkentik a káros oxigénféleségek hatását, hogy megtámadják az oxigénféleségeket stabilizáló enzimeket. Káros oxigénféleségek alatt hldrogén-peroxJdot, szuperoxid-anlont, hldroxil-gyököt, atomos oxigént, stb. értünk.
A mentesítő anyag valamely szerves anyag, például kataláz, peroxidáz, szuperoxid-diszmutáz enzim, vagy szervetlen anyag, például platina vagy egyéb fémkatalizátor lehet. Az alkalmazandó mentesítő anyagot és annak előnyös koncentrációját gazdaságossági szempontok szerint választjuk meg. A kataŰzt kb. 100-10 000 egységig átalakítandó szteroid koncentrációban használjuk. Egy egység alatt az enzim azon mennyiségét értjük, amely percenként 1 μηιόΐ hidrogén-peroxidot bont el pH 7 értéken, 25°C-on, miközben a hiidrogén-peroxid koncentrációja a reakcióelegyben 10,3 μπιό1/ιη1-Γδ1 9,2 μιηόΐ/ΐ re csökken.
A szteroidok 1-dehidrogénezése során a reakcióelegyet 5—4S°C-on 0-7 napon át inkubáljuk. Az Inkubálás alatt a reakcióelegyben előnyösen molekuláris oxigén-felesleget biztosítunk, és az elegyet előnyösen keverjük. Az 1-dehidrogénezés sebessége az idővel jellegzetesen csökken. A biokonverzió 5-60 g/1 szubsztrát-koncentráció alkalmazása mellett 2 napon belül 90—100%-ban végbemehet. A szubsztrát/ sejt arány 2-25 g szubsztrát/g száraz sejt lehet.
Szubsztrátként 3-keto-A4 -androszténeket vagy 3-keto- Δ4 -pregnéneket használhatunk a találmány szerinti eljárásban.
A szteroid-1-dehldrogenáz enzimnek szubsztrátként azok a szteroidok felelnek meg, amelyek az Agyűrűn az 1,2-helyzetben telített kötést és az Agyűrű 3-helyzetében hidroxil- vagy ketocsoportot tartalmaznak.
Az androsztén-származékok közül az
1) androszt-4-én-3,17-diont és az
2) androszt-4,9(ll)-dién-3,17-diont, ll-hidroxl-androszt-4-én-3,17-dlont és ezek 6a-fluor-6a-metll- vagy
1ó-metil-származékalt; a 3-keto-A4-pregnén-származékok közül a
1) 17a-hidroxi-pregn-4-én-20-In-3-ont és 16-metíl-szánnazékalt,
2) 110,21-dihidroxi-pregn4,17(20)-dién-3-ont és 6a-metU-származékát,
3) 20-klór-pregn-4,9(l l),17(20>trién-21-al-2-ont,
4) a 3,20-diketo-Á-pregnének néhány csoportját, közöttük
a) 11,17,2l-trihidroxi-származékokat, például hidrokortizont és 6a-metll-származékát,
b) 90,110-epoxl-l 7,21-dihidroxi-származékokat, például 90,110-epoxl-l7,21 -dihidroxi-l60-metil-pregn-4-én-3,10-diont,
c) 3,20-dlketo-4,9(ll)-pregnadléneket, például 17 a, 21 -dihidro)d-pregn-4,9( 11 >dién-3,20-dlont és 16a-metíl-, 160-metÜ-, vagy 16a-hidroxl-származékait, illetve 17a-acetát-észterét,
d) 3,20-dlketo-4,9(l l),16-pregnatriéneket, például 21-hldroxj-pregn-4,9(l l),16-trlén-3,20-dlont és óa-fluor-származékát használhatjuk.
Szubsztrátként használhatjuk a 21-hldroxl-cso10 portot tartalmazó szteroidok (2. és 4. pontban említett vegyületek) 21-észter-származékait Is. A 21-észterek előnyösen rövidszénláncú alkll-, vagy aifl-észterek lehetnek, például a rövidszénláncú zsírsavakkal, így ecetsavval, vagy monociklusos karbonsavakkal, így benzoesawal képzett észterek.
A biokonverziós eljárás típusa, az endmkészltmény, szteroi'd-szubsztrát, elektron-akceptor és peroxid-mentesítő anyag alkalmazandó koncentrációja a dehidrogénező szteroidmolekula tulajdonságaitól függ, melynek megállapítása a szakember feladata.
A következőkben általánosságban ismertetjük az
1- dehidrogénezésre használható különféle biokonverziós eljárásokat, amelyeket elektron-hordozó és egy vagy több toxikus oxigénféleségektől mentesítő anyag jelenlétében hajtunk végre.
Fermentációs biokonverzió
A megfelelő mértékű sejtszaporodás és szteroid-1-dehldrogenáz aktivitás elérése után a fermentorba beadagoljuk a toxikus oxigénféleségektől mentesítő anyagot, az elektronhordozót, és a szteroid-szubsztrátot. Az elektron-hordozó hozzáadásának célja a szteroid-1-dehldrogenáz aktivitás fokozása, és a szteroidok bomlásának megakadályozása, vagy a szteroidok olyan nemkívánatos melléktermékekké alakulásának gátlása, amelyek nem igényelnek a szteroid-1-dehldrogenáz aktivitásához hordozót. A szteroidot és/vagy elektron-hordozót száraz, por, vizes iszap, oldat, vagy vízzel elegyedő oldószerrel — például etanollal, metanollal, dimetíl-formamiddal, dimetil-szulfoxiddal, acetonnal vagy más hasonló oldószerrel - készült sűrű szuszpenzió formájában adagolhatjuk a reakcióelegyhez. A. dmplex-szel katalizált fermentációs konverzió esetén elektron-hordozóként előnyösen naftoldnon-származékot, például
2- metil-l,4-naftokinont használunk, katalitikus mennyiségben. A szteroid-koncentráció 5 és 50 g/1 között változhat. A szubsztrát-koncentráció növelésével növekedni fog a reakció végén átalakulatlanul maradt szubsztrát mennyisége. Az optimális szintet részben a kiindulási anyag azon koncentrációja határozza meg, amely a termékben, mint a következő kémiai lépés kiindulási anyagában még tolerálható. A szterold-elegy és a fermentlé habzási tulajdonságaitól Is függ az optimális szubsztrát-koncentráció.
Habzásgátló vagy habtalanító szerek — például disznózsír-olaj, szilikonok vagy polialkflén-glikolok — hozzáadásával szabályozhatjuk a fermentációs elegy habzását és a szteroid szuszpenzióban tartását'.
Biokonverzió vizes rendszerben, izolált készítményekkel
Az 1-dehldrogenáz aktivitással rendelkező készítményt, a szteroidot, az elektron-hordozót és a mentesítő anyagot 0,01—2 mól/l-es vizes pufferoldatban (pH 6—10) szuszpendáljuk. A reakciókomponensek adagolási sorrendje tetszés szerinti.
Az aktív készítmény Izolált nedves sejt, száraz sejt, immobillzált sejt vagy sejtmentes enzimrendszer lehet. A sejtekvlvalens mennyisége 0,1 g és 50 g szárazsúly/1 között változhat. A szteroidot a sejtekhez viszonyítva kb. 0,05—15 súlyarányban (szteroid/sejt) adhatjuk. A sejt mennyisége 15—50 g/1 szteorid-koncentrádó mellett előnyösen 2,0 és 25 g között változhat. A szteroid-szubsztrátot száraz por, vizes sűrű szuszpenzió formájában, vagy vízzel elegyedő szerves oldószerben — például dlmetil-formamldban, dimetil-szulfoxidban, etanolban,
194 318 metanolban, acetonban vagy egyéb hasonló oldószerben - oldva vagy szuszpendálvg adagolhatjuk a rendszerbe, mennyisége a végtérfogatnak legfeljebb 5%-a lehet. Kis koncentrációban - például 0,5-5%-ban 5
- felületaktív szereket is adhatunk a szteroid szuszpenzióban tartásához. Az elektron-hordozót - például menadiont, 1,4-naftokinont, fenazin-metoszulfátot - por, vizes sűrű szuszpenzió formájában, vagy vízzel elegyedő szerves oldószerben oldva adagolhatjuk a reakcióelegybe. A toxikus oxigénféleségektől mentesítő anyagokat előnyösen a reakció kezdetén adagoljuk az elegybe. Az eljárással elérhető előnyök jelentős mértékben függenek az alkalmazott enzimkészítmény típusától, a szubsztrát/sejt aránytól (előnyösen 2:1, vagy annál nagyobb), és/vagy a katalizátorként használt elektron-hordozó koncentrációjától.
Biokonverzió vízzel nem elegyedő oldószer jelenlétében f A vizes szteroid-l-dehidrogenáz aktivitással rendelkező elegyhez a szteroid-szubsztrát, elektron-hordozó és a toxikus oxigénféleségektől mentesítő anyag mellett vízzel nem elegyedő oldószert is adhatunk.
Az oldószert olyan mennyiségben adjuk az elegyhez, amely-részben vagy egészen elegendő a szteroid-szubsztrát és a tennék oldásához. A fenti módosítást a fermentációs biokonverziós rendszerben alkalmazhatjuk, ahol az átalakítást izolált nedves sejttel, száraz sejttel, sejtmentes enzimmel vagy immobflizált enzimmel végezzük. A vízzel nem elegyedő oldószer jelenlétében végzett biokonverzió reakciósebessége nagy mértékben függ a keverés intenzitásától, ezért a reakcióelegyet a lehető legintenzívebben kell keverni.
Az átalakulatian szubsztrátot és a biokonverzió termékét a fenti reakcióelegyből hagyományos eszközökkel nyerhetjük ki. A szteroidokat jeÚegzetes módon szűréssel, majd a szűrőn maradt csapadék szerves oldószeres — például acetonos vagy metilén-kloridot - extrahálásával választhatjuk el a reakcióelegyből. Úgy Is eljárhatunk, hogy a teljes reakcióelegyet extraháljuk valamely vízzel nem elegyedő oldószenei, például butll-acetáttal vagy metilénkloriddal. A terméket ezután elválasztjuk a szerves oldószertől.
Az 1,2-dehidro-szteroidok felhasználási területe jól ismert. Például a 3 284 447. számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban ismertetett ú',4,9(ll).pregnatriének a 16-helyzetben helyettesített diuretikus hatású kortikoszteroidok szintézisében hasznosíthatók. A 4 041 055. számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás eljárást ismertet a kortikoszteroidok előállítására Δ1 **-androszténdionból és ismertet más jelentős köztitermékeket is a gyógyászatig alkalmazható szteroidok előállítására.
A találmány szerinti eljárást részleteiben - a korlátozás szándéka nélkül - az alábbi példák segítségével kívánjuk ismertetni.
,1. példa
Androszt-4,9(11 j-dién-3,17-dion fermentációs biokonverziója A. simplex-szel aj Biokatalizátor előállítása
Az Arthrobacter simplex (ATCC 6946) tenyésztésére 20 g/1 kukoricalekvárt és 15 g/1 disznózsír-olajat tartalmazó táptalajt (pH 7,)) használunk. A tenyészetet rotációs rázón 2 napon át 28’C-on inkubáljuk, majd hozzáadunk 0,15 g/1 kortizon-acetátot a szteroid-l-dehidrogenáz aktivitás indukálására. b) Biokonverzió
A következő napon különböző koncentrációkban androszt-4,9(1 l>dién-3,17-diont adunk a lombikba. Meghatározott lombikokba menadiont és/vagy katalázt adagolunk. A biokonverziót a metilén-kloridos extraktumok vékonyréteg-kromatográfiás elemzésével követjük. Azokban a reakcióelegyekben, amelyek 3,5 g/1 koncentrációban csak szteroidot tartalmaznak, az 1-dehidrogénezés csak kis mértékben játszódik le. Egy napos inkubálás után a szubsztrátnak kb. 10%-a alakul kívánt 1,2-dehidrogénezett 15 termékké és kb. 5%-a egyéb termékké. A negyedik napra az 1,2-dehidro-terméknek 5%-nál kisebb része marad meg, míg a szteroid 10-20%-a három vagy még több fajta nemkívánatos poláros szteroid-termékként jelenik meg. Azok a biokonverziós elegyek, amelyek
3,5 g/1 szteroid-szubsztrátot és 5 x ÍO'4 mól/1 me20 nadiont tartalmaznak, az összes jelenlévő szteroid közel 50%-át 1-dehidrogénezett termékként tartalmazzák. Azonban a reakció nem megy végbe teljesen további inkubálás hatására sem, és a szteroidok degradálódása figyelhető meg, noha kisebb mértékben. Azokban a biokonverziós elegyekben, amelyek 10 mg/1 katalázt ÍSigma termék Cl-0, 16 000 egység/ 1-rel egyenértékű), 5 x 10'4 mól/1 menadiont és 10 g/1 szubsztrátot tartalmaznak, a konverzió sikeres. A konverzió 22 órán belül 83%-ban végbemegy, és 46 óra múlva 95%-os. A reakcióelegyben vékonyré2θ teg-kromatográflás meghatározás szerint nem találunk jelentős mennyiségű bomlásterméket. A katalázt és sztetoidot tartalmazó kontroll mintában a fermentléből és szteroidból álló mintával kapott konverzióhoz hasonló átalakulás érhető el.
2 példa
Ιΐβ-hidroxl-androszténdion (ΙΙβΟΗ-AD) fermentációs biokonverziója A. simplex-szel aj Biokatalizátor előállítása
Az Arthrobacter simplex-et (ATCC 6946) rázott lombikban tenyésztjük, 6 g/1 glükózt, 6 g/1 kukorica40 lekvárt és 6 g/1 Bactopeptont (Difco) tartalmazó táptalajban, pH 7,0 értéken. A tenyészetet rotációs rázón 28eC-on inkubáljuk, míg a glükóz elfogy. Ekkor 0,1 g/1 kortizon-acetátot adunk a tenyészethez a szteroid-l-dehidrogenáz aktivitás indukálására. 45 bj Biokonverzió
Egy éjszakán át tartó inkubálás után minden egyes lombikba 10 g/1 110OH-AD-t mérünk. A kontroll lombikba nem adunk más anyagot. A kísérleti lombikba 5 x 10M mól/1 menadiont és 10 mg/1 katalázt (Sigma tennék C-10,16 000 egység/l-nek 50 felel meg) adunk. A biokonverziós elegyet rotációs rázón 28’C-on inkubáljuk. A konverzió követésére adott térfogatú mintát két térfogatnyi metilén-kloríddal extrahálunk, és az extraktumot vékonyréteg kromatografáljuk 1 : 1 arányú etfl-acetát-hep__ tán eleggyel. A konverzió előrehaladtát megfelelő szteroid-standardokkal végzett összehasonlítás alapján becsüljük meg.
Eredmények:
Lombik Biokon- Átalaku- Megjegyzés verzió latlan en ideje szubsztrát 60 (óra) (%)
| Kontroll | 24 | kb. 3 | Kevés degradádós termék |
| 48 | kb. 2. | Kimutatható szteroldveszteség | |
| 5 nap | kb. 2 | ~50% szteroidveszfeség | |
| Kísérleti menadion és kataláz | 24 | kb. 5 | |
| 48 | kb.5 | ||
| 5 nap | kb. 5 | Szteroid degradáció nem mutatható ki. | |
| 3. példa |
a) Száraz sejtek előállítása g/1 glükózt, 6 gjl peptont és 6 g/1 kukoricalekvárt tartalmazó táptalajt (pH 7,0) beoltunk Arthrobacter simplex-szel (ATCC 6946) és a tenyészetet rotációs rázón 28°C-on rázatjuk, míg a glükóz elfogy. Ezután hozzáadunk 0,5 g/1 kortizon-acetátot és a lombikokat további 16 órán át inkubáljuk. A sejteket centrifugálással összegyűjtjük, vízzel kétszer mossuk és vákuumszárítószekrényben 45°C-on szárítjuk.
bj Hidrokortúon prednizolonná alakítása biokonverzióval
A száraz sejteket 500 ml-es Erlenmeyer-lomblkban 50 mmól/l-es foszfát-pufferban 0,05 g/1 koncentrációban újraszuszpendáljuk. A szubsztrátot 100 mg/ml koncentrációjú dimetil-formamidos oldat formájában adjuk a szuszpenzióhoz, 0,5 g/1 végkoncentrációban. A menadlon 8,6 mg/ml koncentrációjú etanolos oldatából 0,5 ml/100 ml végtérfogat 30 mennyiséget adunk a reakcióelegyhez. Az egyes lombikokban lévő reakcióelegy térfogatát 50 mmól/l-es foszfát-pufferral 100 ml-re egészítjük ki. A katalázt a Sígma Chemical Company-tói szerezhetjük be, az enzimpreparátum aktivitása 2300 egység/mg.
Az (A) lombikba 2300 egység katalázt mérünk, a 35 (B) lombik nem tartalmaz enzimet, ez az egyetlen különbség a két lombikban lévő reakcióelegy bén.
Az elegyeket 28°C-on inkubáljuk, keverés közben, órás inkubálás után az (A) lombikban lévő hidrokortizonnak kb. 69%-a alakul prednizolonná. Ugyanakkor azonos idő alatt a (B) lombikban a hidrokortizoqnal csak kb. 42%-a konvertálódik prednizolonná. Az eredményekből látható, hogy a kataláz-enzim hozzáadásának hatására kb. 27%-kal növekszik a biokonverziós termék mennyisége.
A prednizolont a szokásos módon nyertük ki a reakdóelegyből. Az Arthrobacter simplex helyett Bacterium cyclooxydans ATCC 12673 törzset használva (3 065 146. számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás) hasonló eredményeket kapunk.
4,9(1 l)-dlén-3,17-dlont száraz por formájában 10 g/1 koncentrációban adjuk az elegyhez. A lombikokat rotádós rázón 28°C-on inkubáljuk. A biokonverziós elegyekből vett mintákat metflén-klorlddal éxtraháljuk. A szárított extraktumok gázkromatográfiás analízisével meghatározzuk az átalakulás fokát. Eredmények:
| Szárított sejt ekvivalens g/1 | Sejt típusa | Kataláz | Atalakulatlat szubsztrát 26 óra múlva (%) |
| 5 | Centrifugált | — | 38,9 |
| 5 | Centrifugált | ♦ | 9,8 |
| Szűrt | — | 47,4 | |
| ♦ | 83 | ||
| 7,5 | Centrifugált | — | 24,0 |
| ♦ | 93 | ||
| Szűrt | — | 393 | |
| * | 7,2. | ||
| 10,0 | Centrifugált | — | 9,8 |
| ♦ | 9,8 | ||
| Szűrt | — | 313 | |
| + | 7,0 |
5. példa
A szárított A. simplex sejteket 50 mmól/l-es 25 kálium-foszfát-pufferban (pH 7,5) 20 percen át újraszuszpendáljuk, 5 g szárított centrifugált sejt/1 mennyiségben, majd a sejtszuszpenziót 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokba 100 ml-enként szétmérjük. A menadiont és a katalázt az alábbi táblázatban feltüntetett mennyiségben adjuk a lombikba. A 160-metű-androszt4,9(ll>dién-3,17-diont mikronizált por formájában adjuk az elegyhez, 15 g/1 koncentrációban. A lombikokat rotádós rázón 31°C-on inkubáljuk. A mintákat metilén-kloriddal extraháljuk. Az extraktumok szteroid-tartalmát gáz-kromatográfiás eljárással határozzuk meg.
Eredmények:
| Kataláz koncentrádója mg/1 | Menadion koncén t- | Átalakulatlan szubsztrát % | ||
| dója mg/1 | 19 óra | 43 óra | 91 óra | |
| 2,5 (4000 egység/1) | 86 | 243 | 12,0 | 93 |
| 2,5 (4000 egység/1) | 129 | 22,1 | 15,0 | 12,7 |
| 5,0 (8000 egység/1) | 86 | 21,9 | 93 | 83 |
| 5,0 (8000 egység/1) | 129 | 14,6 | 4,6 | 43 |
4. példa
A sejteket az 1. példában leírt módon tenyésztjük. Az aktív sejteket centrifugálással vagy szűréssel összegyűjtük. A nedves sejtmasszát melegítés közben kb. 3-5% nedvességtartalomig szárítjuk. A szárított sejteket 50 mmól/l-es foszfát-pufferban (pH 73) újraszuszpendáljuk és 20 percen át keverjük, majd 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokba 100 rní-enként szét mérj ük. 5x10'* mól/1 végkoncentrádóban etanolos oldatban lévő menadiont adunk a lombikokba. A lombikok feléhez 10 mg/I katalázt mérünk, ez kb. 16 000 egység/l-nek felel meR. Az androszt50 6-péIda
A szárított A. simplex sejteket a 4. példában leírtak szerint újraszuszpendáíva két lombikba szétosztjuk. A sejtek végkoncentrációja kb. 1,5 g szárított sqt/í-nek felel meg. Mindkét lombikba 5 mg (8000 egység) katalázt és etanolos oldat formájában 8,6 mg menadiont mérünk. A 160-metfl-A’,lí-androszténdion szubsztrátot száraz por formájában adjuk az elegyhez 20 g/1 koncentrádóban. Az egyik lombikba 3 mg/1 koncentrádóban szuperoxid-dlszmutázt (Sigma termék S8254, kb. 3000 egység/mg protein aktivitású) mérünk, a másik lombikba nem teszünk gzuperoxid-diszmutázt. A lomblkokat 3l”C-on rotá-
dós rfzón inkubáljuk. Szabályos Időközökben mintát veszünk, metflén-kloridda] extraháljuk és a blokonverzió szempontjából analizáljuk.
Eredmények:
| Lombik | Szuperoxld- | Képződött tennék | |
| diszmutáz | mennyisége | ||
| (mg/lombik) | 22 óra | 70 óra | |
| 1 | 0,0 mg | 037 g 0,68 g | |
| 2 | 0,3 mg | 0.41 g | 0,81 g |
7. példa
Reakdóelegybe az alábbi anyagokat mérjük:
a) 0,681 50 minól/l-es káÚum-foszfát puffer (pH 7,5)
b) 6,4g szárított A. simplex sejt
c) 032 g menadion
d) 13 mg marhamáj-kataláz (2000 nemzetközi egység/mg)
e) 32g androszt-4,9(ll)-dién-3(17-dlon
f) 03201 toluol.
A reakcióelegyet 15 cal/1 x perc-cel keverjük. A reakdóelegybe vezetett levegővel a reaktor a légterében 3% feletti oxigénkoncentrációt biztosítunk. A hőmérsékletet 28 ± l°C-on tartjuk. A reakciót 47 órán keresztül hagyjuk végbemenni, majd a toluolos fázist elválasztjuk. Jelen esetben a toluolos fázis szteroid összetétele az alábbi:
99,9% tennék (androszt-l,4,9(ll)-trlén-3,17-dion)
0,1% átalakulatlan szubsztrát (androszt-4,9-(11 )-dién-3,17-dion).
8. példa rázólombikba az alábbi anyagokat, mérjük:
a) 23 ml 50 mmól/l-es káliurn-foszfát-puffer (pH 7,5)
b) 0,04 g száraz A. simplex sejt
c) 0,25 ml 50 mmól/1 menadion 3A-alkoholban.
Az egyes lombikokat az alábbi anyagokkal egészítjük ki:
1. lombik: semmi
2. lombik: 0,167 mg kataláz (2000 nemzetközi egység/mg)
3.lombik: 2 mg 5% fémtartalmú szénhordozós platinakatalizátor.
Minden egyes lombikba bemérünk 0,2 g androszt4,9(1 l)-dién-3,17-diont és 2 ml toluolt. A lombibikokat szobahőmérsékleten 3 napon át rázatjuk.
napos inkubálás után minden lombikba 23 ml toluolt mérünk. Az extraktumot analizáljuk.
| Eredmények: | 1. lombik kontroll | 2. lombik katalázzal | 3. lombik platinával |
| Termék (androszt- 1,4,9(11)- -trién-3,17- -djon) | 80,8%, | 99,9% | 95,9% |
| Szubsztrát (androszt- 4,9(11). -dlén-3,17- -dlon) | 19,2% | 0,1% | 4,1% |
9. példa
Az Arthrobacter simplex sejteket 20 g/1 kukoricalekvárt és 15 g/1 disznózsír-olajat tartalmazó táptala5 jón (pH 7,0) tenyésztjük. A tenyészetet 28*C-on kb. 26 Órán át Inkubáljuk, majd hozzáadunk 0,15 g/1 kortlzon-acetátot. Az inkubálást 18 órán át folytatjuk. A sejteket centrifugálással elválasztjuk a táptalajtól. A kapott sejteket a fermentlé felé térfogatának megfelelő mennyiségű 0,05 mól/l-es kálium-foszfát'υ -pufferban (pH 7,5) újraszuszpendáljuk. A lomblkokba száraz por formájában 10 g/1 androszt-4,9(ll)-dién-3,20-dlont adunk. Az (A) lombikba nem adunk más anyagot. A (B) lombikban lévő szteroidhoz
8,6 mg menadiont és 1600 egység katalázt mérünk. j5 5 órás inkubálás után az (A) lombikban közel 5%
I, 2-dehidrogénezett tennék képződik. A (B) lombikban lévő szteroid 95%-ban 1,2-dehidrogénezett termékből és kb. 5%-ban átalakulatlan szubsztrátból áll. Az inkubálást tovább folytatva az (A) lombikban kb. 10% dehldro-terméket és kimutatható mennyi20 ségű nemkívánatos bomlásterméket találunk a reakcióelegyben. A (Β) lombikban a további inkubálás hatására ugyan nem képződik több termék, de nem találunk kimutatható mennyiségű bomlásterméket sem.
2g 10. példa
A 3. példában a hldrokortizont, az 1., 7. vagy
9. példában az androszt-4,9(ll)-dién-3,l7-diont és a 6. példában a 160metíl-ú4,9(l l)-androsztén-dlont az alább felsorolt szubsztrátokkal helyettesítve az alábbi termékeket kapjuk:
Szubsztrátok:
1. androszt-4-én-3,l 7-dion
2. 6a-fluor-androszt4,9(l l)-dién-3,l 7-dion
3. 6a-metfl-androszt4,9(l l)-dién-3,l 7-dion nr 4. 16fl-metil-androszt-4,9(l l)-dién-3,l 7-dion
5. 17a-hidroxi-pregn-4-én-20-in-3-on
6. 17a-hidroxl-pregn-4,9(l 1 )-dién-20-ln-3-on
7. 17a-iiidroxi-160-metil-pregn4,9( 11 )-dién-20-in-3-on
8. 11021-dihidroxi-pregn4,17(20)-dién-3-on
4Q 9. 21-acetoxl-l 10-hidroxi-pregn4,17(2O)-dién-3·
-on
10. 6a-metil-l 1021-dihjdroxi-pregn4,17(2O)-dién-3-on
II. 20-klór-pregn-4,9(l l),17(20)-trién-21-al-3-on
12. hidrokortlzon
13. 6a-metfl-hidrokortizon
14. 21 -acetoxl-110,17 -dihidroxi-160-me til-pregn-4-én-3,20-dion
15. 21-acetoxl-9o-fiuor-l 10,17-dlhidroxl-160-metll-pregn-4-én-3,20-dion
16. 21-acetoxl-90,l 10-epoxl-17-hldroxl-160-metű50 -pregn4-én-3,20-dion
17. 21-acetoxl-l 7-hldroxl-pregn4,9(l l)-dlén-3,20-dlon
18. 21-acetoxi-16a,17-dihidroxl-pregn4,9(l l)-dién-3,20-dion Kc 19. 21-acetoxi-17-dihldroxi-16o-metfl-pregn4,900 -(ll)-dién-3,20-dion
20. 21 -benzo’l oxi-17-hidroxi-160-metfl-pregn4,9 (1 l)-dlén-3,20-dion
21. 21-acetoxl-17-hldroxl-16/J-metfl-pregn43(ll)•dién-3,20-dion
22. 21 -acetoxl-pregn4,9( 11 ),16-trién-3,20-dion
23. 21-acetoxl-6a-fluor-pregn-4,9(l l),16-trién-3,20-dion
24. 21 -acetoxl-9a-fluor-110,16α,17-trihidroXi-pregn-4-én-3,20-dion
25. 21-acetoxl-6a,9a-difluor-l 10,16a,17-trlhldroxl-pregn-4-én-3,20-dion-l 6,17 -acetonid
26. 21-acetoxi-6o-fluor-l 10-hldroxi-16a-metfl-pregn-4-én-3,20-dion
27. 21-acetoxi-6o-fluor-l 10,17-dihidroxi-pregn-4-én-3,20-dion
28. 21-acetoxi-6a-9a-difluor-l 10,17-dlhidroxi-16a-metfl-pregn-4-én,3,20-dion
29. 21-acetoxl-9a-fluor-l 10,16a,17-tríhidroxi-pregn-4-én-3,20-dion-16,17-acetonid
30. 21-acetoxi-90,l 10-epoxi-6a-fluor-16q,17-dlhldroxl-pregn-4-én,3,20-dion-l 6,17-acetonld
31. 21-acetoxi-90,l 10-epoxi-16a-hidroxl-pregn-4-én-3,20-dion
32. 21-acetoxi-90,110-epoxi-16a,17-dihidroxi-pregn-4-én-3,20-dion-l 6,17 -acetonid
Termékek:
a androszt-1,4-dién-3,17-dión 2a 6a-Quor-androszt-l,4,9(ll)-tiién-3,17-dlon 3a 6a-metfl-androszt-l,4,9(ll)-trién-3,17-dion 4a 160-metfl-androszt-l ,4,9(1 l)-trién-3,17-dion 5a 17e-hidroxi-pregn-l,4-dién-20-ion-3-on 6a 17a-hidroxi-pregn-l ,4,9(1 l)-trién-20-in-3-on 7a 17a-hidroxi-l 60-metil-pregn-l ,4,9(1 l)-tiién-20-in-3-on
8a 110,21-dihidroxi-pregn-l,4,17(2O)-trién-3-on 9a 21-acetoxi-l 10-hidroxi-pregn-l ,4,17(20)-trién·
-3-on és
110,21-dihidroxi-pregn-l,4,17(2O)-trién-3-on
10a 6a-metil-l 10,21-dihidroxi-pregn-l ,4,7(20)-trién-3-on la 20-klór-pregn-l ,4,9(1 l),17(20)-tetraén-21-al-3-on
12a prednizolon
13a 6a-metil-prednlzolon
14a 21-acetoxi-l 10,17-dihidroxi-160-metfl-pregnl,4-dién-3,20-dion és
110,17,21 -trihidroxl-160-metfl-pregn-l ,4-dlén-3,20-dion
15a 21-acetoxl-9a-fluor-l 10,17-dlhldroxl-160-metfl-pregn-1,4-dién-3,20-dion és 9o-fluor-l 10,17,21 -trihidroxi-160-metÜ-pregn-l,4-dién-3,20-dion
16a 21-acetoxl-90,l 10-epoxi-l 7-hidroxi-160-metil-pregn-1,4-dién-3,20-dion és 90,110-epoxi-17,21-dihldroxi-160-metll-pregn-l,4-dién-3,20-dion
17a 21 -acetoxl-17-hldroxl-pregn-1,4,9( 11 )-trién-3,20-dion és
17,21 -dlhldroxl-pregn-1,49( 11 )-trién-3,20-dion
18a 21 -acetoxi-16α,17-dlhldroxl-pregn-l ,4,9(11)-trlén-3,20-dion és
16α,17,21 -trihldroxi-preng-1,4,9(11 )-tirén-3,20-dlon
19a 21-acetoxl-17-hidroxi-16a-metfl-pregn-l ,4,9-(ll)-trién-3,20-dion és
17,21-dihldroxl-16a-metll-pregn-l ,4,9(11> -trién-3,20-dion
20a 21 -benzofl-oxl-17-hidroxi-160-metfl-pregn-1,4,9-(1 l>trlén-3,20-dion
21a 21 -acetoxl-17-hldroxl-l 60-metfl-pregn-l A$-(ll)-trlén-3,20-dlon és
17,21 -dihldroxl-160-metíl- -pregn- ,4,9(11 >trién-3,20-dion
22a 21-acetoxi-pregn-l ,4,9(1 l)-16-tetrán-3,20-dion és 21-hldroxi-pregn-l ,4,9(1 l),16-tetrán-3,20-dion
23a 21-acetoxi-6a-fluor-pregn-l ,4,9(1 l),16-tetraén-3,20-dion és
6a-fluor-21 -hidroxi-pregn-1,4,9( 11 ),16-tetraén-3,20-dion
24a 21-acetoxi-9a-fluor-l 10,16a,17-trihidroxi-pregn-1,4-dién-3,20-dion és 9a-fluor-l 10,16a,17,21tetrahidroxi-pregn-1,4-dién-3,20-dion
25a 2 l-acetoxi-6a,9a-difluor-l 10,16017-trihidroxl-pregn-1,4-dion-3,20-dion-16,17-acetonid és 6a-9a-fluor-110,16α, 17,21 -tetrahidioxi-pregn -1,4-dién-3,20-dion-16,17-acetonid
26a 21 -acetoxi-6a-fluor-110-hldroxi-16a-metfl-pregn-1,4-dién-3,20-dion és 6a-fluor-l 10,21-dihidroxl-16a-metíl-pregn-l ,4-dlén-3,20-dion
27a 21-acetoxi-6a-fluor-l 10,17-hldroxl-pregn-l ,4-dién-3,20-dion és őo-fluor-l 10,17,21 -trihidroxi-1,4-dlén-3,20-dion
28a 2 l-acetoxi-6a-9a-difluor-l 10,17-dihidroxl-l 6a-metfl-pregn-l ,4,-dién-3,20-dion és 6a-9a-difluor-l 10,17,21-trihidroxi-l ,4-dlén-3,20-dion
29a 21-acetoxi-9a-fluor-110,16a-17-trihidroxi-pregn-1,4-dién-3,20-dion-16,17 -acetonid
30a 21-acetoxl-90,l 10-epoxi-6a-fluor-16a,17-dlhidroxi-pregn-1,4-dién,3,20-dion-16,l 7-ácetonld
31a 21-acetoxi-90,l 10-epoxi-16a-hidroxi-pregn-l ,4-dién-3,20-dion és
90,110-epoxi-16a,21 -dihidroxi-pregn-1,4-dlén-3,20-dion
32a 21-acetoxl-90-l 10-epoxi-16a-17-dihidroxi-pregn-1,4-dién-3,20-dion-l 6,17-acetonld.
Az egyéb szubsztrátok és termékek az alábbiak:
szubsztrát
SÍ 10-hidroxj-160-metfl-androszt-4-én-3,17-dlon 110-hidroxl-l 60-metll-androszt-4-én-3,17-dlon (3) 6o-fiuor-l 10-hldroxi-androszt-4-én-3,17-dion (4) 6a-metil-110-hldroxi-androszt-4-én-3,l 7-dlon (51 11 o-hidroxi-androszt-4-én-3,17-dlon (6) androszt-4-én-3,l 1,17-trion termék
110-hldroxi-160-metil-androszt-l ,4-dién-3,l 7-dlon 110-hidroxl-l 6a-metll-androszt-1,4-dién-3,17-dlon 6a-fluor-l 10-hldroxl-androszt-l,4-dlén-3,17-dion 6a-metll-l 10-hidroxi-androszt-l ,4-dién-3,l 7-dlon 1 la-hldroxl-androszt-1,4-dién-3,17-dion androszt-1,4-dién-3,l 1,17-trion
Claims (8)
1. Eljárás 1,2-dehldro-szteróldok előállítására a megfelelő 1,2-telített 3-keto-szteroidot szteroid-dehidrogenáz aktivitással rendelkező enzim-készltménynyel reagáltatva, elektron-hordozó jelenlétében, a zz a 1 jellemezve, hogy a reakció során egy vagy több toxikus oxigénféleségektől mentesítő anyagot: nevezetesen katalázt, szuperoxld-dlszmutázt, vagy platinát, adunk a reakciókeverékhez.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal ellemezve, hogy a toxikus oxigénféleség drogén-peroxid.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy toxikus oxigénféleségektől mentesítő anyagként katalázt használunk.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy toxikus oxigénféleségektől mentesítő anyagként platinát használunk.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a toxikus oxigénféleség szuperoxid vagy peroxid.
6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy toxikus oxigénféleségektől mentesítő anyagként szuperoxid-diszmutázt és katalázt használunk.
7. Az 1. igénypont szerinti eljárás androszt-1,4-dién-3,17-dión,
6a-fluor-androszt-l ,4,9(1 l)-trién-3,17-dion, 6a-metfl-androszt-l ,4,9(1 l>trién-3,l 7-dion, 16a-metil-androszt-l ,4,9(1 l)-trién-3,17-dión, androszt-1,4,9(1 l)-trién-3,l 7-dion,
110-hldroxi-androszt-l ,4-díén-3,27-dion,
110-hidroxl-160-metil-androszt-l ,4-dlén-3,17-dion, 6a-fluor-l 10-hidroxi-androszt-l ,4-dlén-3,17-dion,
1 10-hidroxi-6 a-metil-androszt-1 ,4-dlén-3,17-dion,
1 la-hidroxi-androszt-1,4-dlén-3,l 7-dion vagy androszt-1,4-dlén-3,l 1,17-trion előállítására, azzal jellemezve, hogy 1,2-telített3-keto-ezteroidként.
androszt-4-én-3,l 7-diont,
6a-fluor-androszt-4,9( 11 )-dién-3,17-díont,
6a-metíl-androszt-4,9( 11 )-dién-3,17 -diont,
16a-metil-androszt-4,9(l l)-dién-3,l 7-diont, androszt-4,9(l l)-dién-3,l 7-diont,
110-hldroxi-androszt-4-én-3,17-diont,
110-hidroxi-160-metil-androszt-én-3,17-diont, óa-fluor-1 10-hidroxi-androszt-4-én-3,17 -dlont,
110-hidroxi-6a-metil-androszt-4-én-3,17 -dlont,
110-hidroxi-androszt-4-én-3,l 7-diont, vagy androszt-4-én-3,l 1-17-triont reagáltatunk.
8. Az 1. igénypont szerinti eljárás 17o-hldroxl-pregn-l,4-dlén-20-in-3-on, 17ahldroxl-pregn-l ,4,9(1 l)-trién-20-in-3-on, 17a-hldroxl-l 6a-metil-pregn-l ,4,9(1 l)-trién-20-in-3-on,
U0,21-dihldroxi-pregn-l,4,17(2O)-trién-3-on, 21-acetoxi-l 10-hldroxl-pregn-l ,4,17(20Vtrién-3-on, 6a-metíl-l 10,21-dihidroxi-pregn-l ,4,17(20>trién-3-on,
20- klór-pregn-l ,4,9(11 ),17(20)-tetraén-21 al-3-οη, prednizolon, óa-metll-prednizolon,
21- acetoxl-l 10,17-dihldroxl-160-metíl-pregn-l ,4•dlén-3,20-djon,
21 -acet oxi-9a-fluor-110,17 -dihídroxi-160-metfl-pregn-l,4-dlén-3,20-dion,
21 -acetoxi-90,110-epoxi-17 -hidroxi-160-metfl-pregn-1,4-dién-3,20-dion,
21 -acetoxl-l 7-hldroxl-pregn-l ,4,9(1 l>trién-3,205 -dión,
21 -acetoxi-16α,17-dlhidroxi-pregn-l ,4,9(1 l)-trién-3,20-dion,
21-acetoxl-l 7-hldroxi-16a-metil-pregn-l ,4,9(11}·
-trién-3,20-dlon,
21-benzofl-oxl-17-hidroxi-160-metil-pregn-l ,4,9(11)10 -trién-3,20-dion,
21 -acetoxi-17-hldroxi-160-metil-pregn-1,4,9( 11 >trién-3,20-dlon,
21-acetoxl-pregn-l ,4,9(1 l),16-tetraén-3,20-dion, 21-acetoxi-6a-fluor-pregn-l ,4,9(1 l),16-tetraén-3,20-dlon, 10 21-acetoxi-90,110-epoxi-6a-fluor-16a,17-dihidroxi-pregn-1,4-dién-3,20-dlon-16,17-acetonid,
21-acetoxi-90,110-epoxl-l 6a-hldroxi-pregn-l ,4-dlén-3,20-dion,
21-acetoxl-90,110-epoxi-16a,17-dihidroxi-pregn20 '1 »4*<ttén-3,20-dion-l 6,17-acetonld,
21-acetoxi-90,110-epoxi-16a-hidroxi-pregn-l ,4-dlén-3,20-dion,
21-acetoxi-90,110-epoxi-16a,l 7-dihldroxi-pregn-1,4-dién-3,20-dion-l 6,17-acetonid,
21 -acetoxi-9o-fluor-110,16α, 17 -trihldroxi-pregn25 -l,4-dlén-3,20-dlon,
21-acetoxl-6a,9a-difluor-l 10,16a,17-trihldroxi-pregn-1,4-dlén-3,20-dion-l 6,17-acetonld,
21 -acetoxi-6a-fluor-110-hidroxi-16a-metfl-pregn-1,4-dién-3,20-dlon,
21-acetoxi-l 10,17-dlhidroxl-l ,4-dlén-3,20-dion,
30 21-acetoxi-6a,9a-dlfluor-l 10,17-dihidroxi-16a-metil-pregn-1,4-dién-3,20-dlon, vagy 21-acetoxi-9a-fluor-l 10,16a,17-trihldroxl-pregn-l ,4-dién-3,20-dion-16,l 7-acetonid előállítására, azzal jellemezve, hogy 1,2-telített 3-keto-szteroidként
17a-hidroxi-pregn-4-én-20-in-3-ont,
17a-hidroxi-pregn-4,9( 11 )-dlén-2O-in-3 -önt,
17a-hidroxi-16a-metil-pregn-4,9( 11 )-dién-20-ln-3-ont,
110,21-dihidroxi-pregn-4,17(2O)-dién-3-ont,
4Q 21-acetoxi-l 10-hidroxi-pregn-4,l 7(20)-dién-3-ont, •6a-metfl-110,21 -dihidroxl-pregn-4,17(20)-dlén-3 -ont,
20-klór-pregn-4,9(l 1 ),17(20)-trién-21 -al-3-ont, hldrokortízont,
6a-metil-hldrokortlzont,
45 21-acetoxl-l 10,17-dihidroxi-160-metfl-pregn-4-én-3,20-diont,
2 l-acetoxl-9a-fluor-l 10,17-dihidroxi-160-metilpregn-4-én-3,20-diont,
21 -acetoxi-90,110-epoxl-l 7-hidroxl-l 60-metil-pregn-4-én-3,20-diont,
21 -acetoxi-17-hldroxi-pregn-4,9(11 )-doén-3 30-dlont,
21 -acetoxi-16α, 17 -dihidroxi-pregn-4 fi( 11 )-dién-3,20-diont,
55 21-acetoxi-17-hidroxi-16a-metíl-pregn-4,9(11)-dién-3,20-dlont,
21 -benzofl-oxid-l 7 -hldroxl-160-metfl-prcgn-4 fi·
-(, l>dién-3,20-diont,
21 -acetoxi-17-hldroxl- l60-metfl-pregn-4,9(11)-dlén-3,20-diont,
60 21-acetoxl-pregn-4,9(l l),16-trién-3,20-diont,
21 -acetoxi-6a-fluor-pregn-4,9( 11), 16-trién-3 30-91
-diont,
21 -acetoxi-90, 110-epoxi-6a-fluor-16α, 17-dlhldroxl-pregn4-én-3,20-dlon-l 6,17-acetonidot,
21-acetoxi-90,1 10-epaxi-16ahldroxi-pregn44n-3,20-diont,
21 -acetoxl-90,1 10-epoxi-16a-dihidroxi-pregn-4-én-3,20-dlon-l 6,17-acetonldot,
2 l-acetoxl-9a-fluor-110,16α,17-trihidroxi-pregn4-én-3^0-dlont,
21 -acetoxi-6a.9a-difluor-l 10,16α,17-trihidroxi-pregn4-én-3,20-dlon-l 6,17 -acetonldot, 21-acetoxl-6a-fluor-l 104ddroxi-16a-metll-pregn4-én-3,20-dlont,
5 21 -acetoxi·110,17-dlhldroxl-pregn4-én-3 ,?0-dlont,
21-acetoxl-6a,9a-dlfluor-l 10,17-dlhldroxl-16o-metfl-pregn4-3,20-dlont vagy 21 -acetoxl-9o-fluor-l 10,16a,17-tilhldroxl-pregn4-én-3,20-dlon-l 6,17-acetonidot reagál tatunk.
in rajz nélkül
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/494,747 US4749649A (en) | 1983-05-16 | 1983-05-16 | Microbial Δ1-dehydrogenation process using a scavenger of toxic oxygen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT34240A HUT34240A (en) | 1985-02-28 |
| HU194318B true HU194318B (en) | 1988-01-28 |
Family
ID=23965795
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU841880A HU194318B (en) | 1983-05-16 | 1984-05-15 | Process for the delta 1-dehydrogenation of steroids in the presence of materials relieving from toxic kinds of oxygen |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4749649A (hu) |
| EP (1) | EP0127294B1 (hu) |
| JP (1) | JPH06104072B2 (hu) |
| DE (1) | DE3461720D1 (hu) |
| HU (1) | HU194318B (hu) |
| IE (1) | IE57426B1 (hu) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE94212T1 (de) * | 1987-03-12 | 1993-09-15 | Upjohn Co | 1-2-dehydrierung von steroid-21-estern mit a. simplex. |
| US5888995A (en) * | 1991-02-04 | 1999-03-30 | Astra Aktiebolag | Steroid esters |
| SE9100341D0 (sv) * | 1991-02-04 | 1991-02-04 | Astra Ab | Novel steroids |
| SE9100342D0 (sv) * | 1991-02-04 | 1991-02-04 | Astra Ab | Novel steroid esters |
| AU5873300A (en) * | 1999-07-07 | 2001-01-30 | Pharmacia & Upjohn Company | Process to prepare exemestane |
| CA2448037A1 (en) * | 2001-06-18 | 2002-12-27 | Pharmacia & Upjohn Company | Process to prepare 11.beta.,17.alpha.,21-trihydroxy-6.alpha.-methylpregna-1,4-diene-3,20-dione 21-acetate |
| HU227117B1 (en) | 2002-05-10 | 2010-07-28 | Richter Gedeon Nyrt | Process for dehydrogenation of aza-androstane compounds |
| RU2447154C1 (ru) * | 2010-09-09 | 2012-04-10 | Марина Викторовна Донова | Микробиологический способ получения 1,2-дегидрированных производных δ4-3-кетостероидов ряда андростана в водно-органических средах |
| CN113105517B (zh) * | 2021-04-10 | 2022-03-01 | 台州仙琚药业有限公司 | 雄甾-1,4,9-三烯-3,17-二酮的合成方法 |
| EP4230196A1 (en) | 2022-02-21 | 2023-08-23 | Som Innovation Biotech, S.A. | Compounds for use in the treatment of dystrophinopathies |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2837464A (en) * | 1955-01-11 | 1958-06-03 | Schering Corp | Process for production of dienes by corynebacteria |
| US3047469A (en) * | 1959-07-08 | 1962-07-31 | Olin Mathieson | Dehydrogenation of steroids by dehydrogenase and hydrogen carrier |
| US3091575A (en) * | 1961-06-06 | 1963-05-28 | American Cyanamid Co | Method of preparing delta1 steroids |
| US3567586A (en) * | 1967-11-09 | 1971-03-02 | Us Navy | Chemiluminescent system for detecting living microorganisms |
| US3751340A (en) * | 1971-05-06 | 1973-08-07 | Aerojet General Co | Method for detecting the presence and concentration of heme-containing particles and heavy metal ions in fluid media |
| US4035236A (en) * | 1975-10-24 | 1977-07-12 | The Upjohn Company | Process for preparing 9α-hydroxyandrostenedione |
| US4041055A (en) * | 1975-11-17 | 1977-08-09 | The Upjohn Company | Process for the preparation of 17α-hydroxyprogesterones and corticoids from androstenes |
| GB1555004A (en) * | 1976-05-24 | 1979-11-07 | Dunhill P | Enzymic conversion of steroids |
-
1983
- 1983-05-16 US US06/494,747 patent/US4749649A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-04-09 EP EP84302421A patent/EP0127294B1/en not_active Expired
- 1984-04-09 DE DE8484302421T patent/DE3461720D1/de not_active Expired
- 1984-05-14 JP JP59094768A patent/JPH06104072B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1984-05-15 HU HU841880A patent/HU194318B/hu not_active IP Right Cessation
- 1984-05-15 IE IE1198/84A patent/IE57426B1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06104072B2 (ja) | 1994-12-21 |
| JPS59216599A (ja) | 1984-12-06 |
| HUT34240A (en) | 1985-02-28 |
| IE841198L (en) | 1984-11-16 |
| US4749649A (en) | 1988-06-07 |
| IE57426B1 (en) | 1992-09-09 |
| EP0127294A1 (en) | 1984-12-05 |
| DE3461720D1 (en) | 1987-01-29 |
| EP0127294B1 (en) | 1986-12-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mahato et al. | Current trends in microbial steroid biotransformation | |
| Sedlaczek et al. | Biotransformations of steroids | |
| Mahato et al. | Steroid transformations by microorganisms-III | |
| US3684657A (en) | Selective microbiological degradation of steroidal 17-alkyls | |
| US4179336A (en) | Microbiological degradation of sterol side chains to a 17-keto group | |
| Mahato et al. | Steroid transformations by microorganisms—II | |
| Fukui et al. | Bioconversion of lipophilic compounds in non-aqueous solvent. Effect of gel hydrophobicity on diverse conversions of testosterone by gel-entrapped Nocardia rhodocrous cells | |
| US4524134A (en) | Process for preparing 1,2-dehydro steroids | |
| HU194318B (en) | Process for the delta 1-dehydrogenation of steroids in the presence of materials relieving from toxic kinds of oxygen | |
| GB2123833A (en) | Steroid 1,2-dehydrogenation using dried microbial cells | |
| Mutafov et al. | The inducibility of 9α-steroid hydroxylating activity in resting Rhodococcus sp. cells | |
| US4397947A (en) | Microbial process for 9α-hydroxylation of steroids | |
| US4528271A (en) | Process for the intensification of microbiological conversions of steroids using cyclodextrin additives | |
| Fokina et al. | Microbial conversion of pregna-4, 9 (11)-diene-17α, 21-diol-3, 20-dione acetates by Nocardioides simplex VKM Ac-2033D | |
| US4704358A (en) | Δ1 -dehydrogenation with heat or air-dried B. cyclooxidans | |
| US4444884A (en) | Process for preparing steroids | |
| US4684610A (en) | Process for converting 1,2-saturated steroids to 1,2-dehydro steroids | |
| Tan et al. | Biological conversion of 17α-hydroperoxyprogesterone to 11α, 17α-dihydroxyprogesterone | |
| US4755463A (en) | Process for preparing steroids | |
| Breiter et al. | Microbial hydroxylation of androsta-1, 4-diene-3, 17-dione | |
| GB1560850A (en) | Immobilized microorganisms | |
| EP1504021B1 (en) | Process for dehydrogenation of azaandrostane compounds | |
| Kogan | Microbiological reactions of steroids | |
| EP2093285B1 (en) | Method for biocatalysis using filamentous fungi | |
| HU196464B (en) | New process for producing 1,2-dehydrosteroids |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |