HU193398B

HU193398B - Process for chromatographical cleaning of rough vinblantinsulphate

Info

Publication number: HU193398B
Application number: HU271585A
Authority: HU
Inventors: Tamas Ueberhardt; Bela Szarvady; Csaba Loerincz; Lajos Kovacs; Eszter Dezseri; Geza Ivanyi
Original assignee: Richter Gedeon Vegyeszet
Priority date: 1985-07-16
Filing date: 1985-07-16
Publication date: 1987-09-28

Abstract

A találmány tárgya eljárás legalább 30% vinblasztint tartalmazó nyers vinblasztin-szulfát szilikagél-oszlopon történő kromatográfiás tisztítására, úgy, hogy a kromatográfiás etőciót 70-90 térfogatrésznyi etilacetát vagy aceton és 10-30 térfogatrésznyi pH = 3-7 értékű, 1:0,4-2,5:0,2-0,55 térfogatrésznyi piridin-ecetsav-víz rendszerek elegyeivel végzik, majd a kapott alkaloid-só(ka)t tartalmazó frakciókat 1:1-10:1, előnyösen 3:1 térfogatarányban vízzel hígítják, a kapott szerves fázist elválasztják, a tiszta vinblasztin-szulfátot ismert módon izolálják. A találmány szerinti eljárással készített VLB-szulfát 5%-nál kisebb mennyiségű össz-szennyeződést tartalmaz. -1-The present invention relates to a method for chromatographic purification on a silica gel column of crude vinblastine sulphate containing at least 30% vinblastine by chromatography at 70 to 90 parts by volume of ethyl acetate or acetone and 10 to 30 volumes of pH 3-7, 1: 0.4. -2.5: 0.2-0.55 parts by volume of pyridine acetic acid-water systems, then the fractions containing the alkaloid salt (s) obtained are diluted 1: 1 to 10: 1, preferably 3: 1, with water, separating the resulting organic phase, isolating the pure vinblastine sulfate in a known manner. The VLB sulfate prepared by the process of the present invention contains less than 5% total impurity. -1-

Description

A találmány tárgya eljárás legalább 30% vinblasztin-szulfát szilikagél-oszlopon történő kromatográfiás tisztítására.The present invention relates to a process for the purification of at least 30% vinblastine sulfate on a silica gel column.

Ismert, hogy a vincaleukoblastin, vinblasztin, (rövidítve a továbbiakban VLB) több évtizede használt citosztatikum, mely többek között akut leukémia gyógyításában hatékony. Ismert az is, hogy a rózsameténg (Catharantus roseus) nevű növényben a VLB mellett csaknem 100 egyéb alkaloidot írtak le, melyek közül számos szerkezeti analóg is megtalálható. A jelenlévő alkaloidok nagyfokú szerkezeti hasonlósága és az aránylag alacsony koncentráció miatt a drogból való tiszta VLB kinyerése nem könnyű feladat.Vincaleukoblastin, vinblastine (hereinafter VLB) has been known for decades to be a cytostatic agent, which is effective, inter alia, in the treatment of acute leukemia. Almost 100 other alkaloids have been described in addition to VLB, many of which have structural analogues, in addition to VLB. Due to the high structural similarity of the alkaloids present and the relatively low concentration, obtaining pure VLB from the drug is not an easy task.

Az utóbbi két évtizedben több eljárást dolgoztak ki a VLB eredményes elkülönítésére, amelyek mind a szárított drog savas vagy bázisos előkezelésén és szerves oldószer alkalmazásával történő kivonatolásán, a vizes oldatba vitt alkaloidok különböző pH-értékeken történő tisztításán és szerves oldószerbe átoldott alkaloid-elegy kromatográfiás frakcionálásán alapulnak.In the last two decades, several methods have been developed for the effective isolation of VLB, both by acidic or basic pretreatment of the dried drug and extraction using an organic solvent, purification of the alkaloids in aqueous solution at various pHs, .

A kromatográfiás szétválasztás során a legnagyobb nehézségeket a szerkezetileg igen hasonló vinblasztin, vinkrisztin/rövidítve a továbbiakban VCR/, N-dezmetil-VLB, dezacetoxi-VLB, leurozin és anhidro-VLB hatékony, kevés lépésben történő elválasztása jelentette.The major difficulties in chromatographic separation were the efficient, small step separation of very similar vinblastine, vincristine (hereinafter abbreviated as VCR), N-desmethyl-VLB, desacetoxy-VLB, leurosin and anhydro-VLB.

A szakirodalomban számos próbálkozást ismertettek a vinblasztin ún. „finomtisztítására, melyet oszlopkromatográfiásan végeztek. A 153 200 és a 154 715 sz. magyar szabadalmi leírások szerint az oszlopkromatográfiához különböző aktivitású alumínium-oxidtöltetet és kloroform-benzol (etanol) -oldószer-elegyet használnak. A módszer alkalmas ugyan a VLB és VCR egymástól való elválasztására, de nem használható a VLB-nak leurozintól, valamint a dezacetoxi-vinblasztintól történő hatékony eltávolítására.Many attempts have been made in the literature to develop vinblastine. For fine purification by column chromatography. Nos. 153,200 and 154,715. According to Hungarian patents, column chromatography is carried out using an alumina filler of various activity and a solvent mixture of chloroform-benzene (ethanol). Although the method is capable of separating VLB and VCR, it cannot be used to effectively remove VLB from leurosin and deacetoxyvinblastine.

További fejlesztést jelentett a 172 708 sz. magyar szabadalmi leírás szerinti előtisztítás, melynek értelmében 50-60% vinblasztin—tartalmú szulfát-sót lehet az ún. „ pufferolásos módszerrel előállítani. Ez benzolos oldatból való vizes foszfát-puífer-oldattal (pH=4±0,l értéken) való kivonatolást jelent. Az így előtisztított VLB-bázis sem alkamas a legkorszerűbb gyógyszerkönyvi előírások kielégítésére.Further improvements were reported in No. 172,708. A pre-purification according to the Hungarian patent specification, according to which the sulfate salt containing 50-60% vinblastine can be used for the so-called. “Produced by the buffering method. This means extraction from an aqueous solution of benzene in phosphate buffer (pH 4 ± 0.1). The VLB base thus pre-purified is also unsuitable for meeting the most up-to-date pharmacopoeial prescriptions.

Ugyancsak említésre érdemes a 164 958 sz. magyar szabadalmi leírás, amely szerint az alkaloidelegyben jelenlévő N-dezmetil-vinblasztin formilezéssel vinkrisztinné alakítható, így a vinblasztin elválasztás szempontjából eggyel kevesebb szennyezéssel lehet számolni. A kapott termék tisztasága még így sem megfelelő.Also noteworthy is U.S. Patent No. 164,958. U.S. Pat. The purity of the product obtained is still not satisfactory.

összefoglalva tehát megállapítható, hogy a jelenleg publikált eljárások egyike sem alkalmas a korszerű követelményeknek megfelelő — azaz összesen 5%-nál kisebb egyéb szennyezést tartalmazó — VLB-szulfát előállítására.In conclusion, none of the currently published processes are capable of producing state-of-the-art VLB sulfate containing less than 5% total impurities.

A találmány célja tehát olyan eljárás kidolgozása, mellyel a lehető legegyszerűbb módon, magasfokú VLB hasznosítással, a legszigorúbb gyógyszerkönyveknek megfelelő minőségű vinblasztin nyerhető.It is therefore an object of the present invention to provide a process for obtaining vinblastine of the highest quality, in the simplest possible way, with high VLB utilization.

A fenti cél elérése érdekében az alkaloidok kromatográfiás elválasztására végeztünk kísérleteket. Kísérleteinkben igen nagyszámú, különböző szerves és Szervetlen sókat és esetenként szerves oldószert is tartalmazó puffer-oldatokat próbáltunk ki különböző töltetű kromatográfiás oszlopokon. Törekedtünk arra, hogy a VLB-t és egyéb alkaloidokat lehetőleg sótormában tisztítsuk, elkerülve az anyag bázis formában való jelentősebb mérvű bomlását, valamint az oszlopra kristályosodást.In order to achieve this goal, experiments were performed to chromatographically separate the alkaloids. In our experiments, a large number of buffer solutions containing various organic and inorganic salts and sometimes also organic solvents were tested on various columns. Efforts have been made to purify VLB and other alkaloids preferably in brine, avoiding major degradation of the material in basic form and crystallization on the column.

Meglepő módon azt találtuk, hogy egy speciális összetételű eluáló rendszer, nevezetesen egy piridin-ecetsav-víz-etilacetát elegy különböző összetételei, valamint egy piridin-ecetsav-víz-aceton elegy különböző összetételei alkalmasak az alkaloid-elegy frakcionálására. Mivel a két rendszer alkalmazására gyakorlatilag ekvivalens, ezért a példákban csak az egyszerűbb feldolgozást biztosító etilacetátot tartalmazó rendszerrel foglalkozunk.Surprisingly, it has been found that various compositions of an elution system with a specific composition, namely a mixture of a mixture of pyridine-acetic acid-water-ethyl acetate and a mixture of pyridine-acetic acid-water-acetone, are suitable for fractionation of the alkaloid mixture. Since the application of the two systems is practically equivalent, only the system containing ethyl acetate for simpler processing is discussed in the examples.

Kísérleti munkánk során megállapítottuk, hogy az alkalmazott rendszerben — elsősorban a bázikus karakterű piridin jelenléte miatt — a VLB különösen bomlékony. Azt találtuk, hogy a bomlás kiküszöbölhető savanyú pH biztosításával. A pH az elválasztás hatékonyságát is nagymértékben befolyásolja. Legelőnyösebbnek a pH 4-5,5 közötti rendszereket találtuk, mely rendszerekben a piridin csak acetát formában fordul elő.During our experimental work it was found that VLB is particularly degradable in the applied system, mainly due to the presence of the basic pyridine. We have found that degradation can be eliminated by providing an acidic pH. The pH also greatly affects the efficiency of the separation. Most preferred are systems having a pH of 4-5.5, in which the pyridine occurs only in the form of acetate.

Találmányunk lényege tehát az, hogy piridin-acetát- (ecetsav) -víz-etilacetát-szilikagél rendszeren olyan kétfázisú folyadék-rendszert hozzunk létre /álló-mozgó fázist/, mely rendszerek pH-ja és polaritása különböző, majd a két fázis között az anyagot megoszlatva oszlopkromatográfia segítségével egy lépésben használjuk ki a komponensek elválasztására a polaritás- és bázicitás-beli különbségeket.Thus, the object of the present invention is to provide a two-phase liquid system (stationary mobile phase) with a different pH and polarity on the pyridine acetate (acetic acid) water ethyl acetate silica gel system, and then the material between the two phases. split column chromatography to utilize in a single step the differences in polarity and basicity between the components.

A fentiek alapján a találmány: eljárás legalább 30% vinblasztint tartalmazó nyers vinblasztin-szulfát szilikagél-oszlopon történő kromatográfiás tisztítására, úgy, hogy a kromatográfiás elúciót 70-90 térfogatrésznyi etilacetát vagy aceton és 10-30 térfogatrésznyi pH=4-5,5 értékű 1:0,4-2,5:0,2-0,55 térfogatarányú piridin-ecetsav-víz rendszerek elegyeivel végezzük, majd a kapott alkaloid-só(ka)t tartalmazó frakciókat 1:1-10:1, előnyösen 3:1 térfogatarányban vízzel hígítjuk, a kapott szerves fázist elválasztjuk, a tiszta vinblasztin-szulfátot ismert módon izoláljuk.Accordingly, the present invention provides a process for purifying a crude vinblastine sulfate containing at least 30% vinblastine on a silica gel column, eluting the chromatographic elution with 70-90 volumes of ethyl acetate or acetone and 10-30 volumes of pH = 4-5.5. : 0.4-2.5: 0.2-0.55 (v / v) mixtures of pyridine-acetic acid / water systems, and the fractions containing the resulting alkaloid salt (s) 1: 1-10: 1, preferably 3: 1 diluted with water (v / v), the resulting organic phase is separated and the pure vinblastine sulfate is isolated by conventional means.

Az oszlopkromatográfiához használt piridin-ecetsav-víz-rendszerként tehát 1:0,4-2,5: -.0,2-0,55 térfogatarányú, ezen belül előnyösen 1:0,715:0,55 térfogatarányú rendszert használunk. Az etilacetáttal kiegészített rendszer összetétele a megadott értékek között változ-2193398 tatható, mivel a két fázisban (álló és mozgó fázis) az említett fizikai-kémiai tulajdogságok mindig különbözőek. A puíferoldat sókoncentrációját a piridin-acetát mennyiségével állítjuk be, majd ecetsav adagolásával állítjuk be a kívánt pH-értéket. Az alkaloid-elválasztás kívánalmainak megfelelő puffér-oldat polaritását a fenti arányban etilacetát vagy aceton hozzáadásával biztosítjuk.The pyridine-acetic acid-water system used for column chromatography is thus 1: 0.4-2.5: -0.2-0.55, preferably 1: 0.715: 0.55. The composition of the system supplemented with ethyl acetate ranges from 2193398 given that the two physicochemical properties are different in the two phases (stationary and mobile). The salt concentration of the buffer solution is adjusted with the amount of pyridine acetate and then adjusted to the desired pH by addition of acetic acid. The polarity of the buffer solution required for alkaloid separation is ensured by addition of ethyl acetate or acetone in the above ratio.

Az oszlopkromatográfia hatékonysága a rendszer polaritásának változtatása mellett nagymértékben befolyásolható az oszlop terhelésével is.The efficiency of column chromatography can be greatly influenced by changing the polarity of the system by loading the column.

A találmány szerinti eljárás egy előnyös foganatosítási módja szerint homogén piridin-ecetsav-etilacetát-víz-rendszerként 80 térfogatnyi etilacetát és 20 térfogatnyi piridin-ecetsav-víz elegyét használjuk.In a preferred embodiment of the process of the invention, a homogeneous pyridine-acetic acid-ethyl acetate-water system is used in a mixture of 80 volumes of ethyl acetate and 20 volumes of pyridine-acetic acid-water.

A kromatográfiás feldolgozást követően kapott frakciók feldolgozása viszonylag egyszerűen megoldható. Az egyes frakciókat vízzel négyszeresre hígítjuk, majd a két fázisra váló elegyet elválasztjuk, a vizes részt metilén-kloriddal alkaloid-mentességig extraháljuk. Az egyesített metilénklorid-etilacetátos fázisokat szárítjuk, bepároljuk, majd ismert módon szulfátot készítünk belőle.The fractions obtained after chromatography are relatively easy to process. The individual fractions were diluted four times with water, and the two-phase mixture was separated, and the aqueous portion was extracted with methylene chloride until alkaline. The combined methylene chloride / ethyl acetate phases are dried, evaporated and then converted to the sulfate in known manner.

Az oszlop kapacitásának jobb kihasználása érdekében az anyag kromatográfiához való előkészítésénélcélszerű az ismert leurozin-mentesítést elvégezni. A kromatográíia során a VLB és N-dezmetil-VLB szelektíven elválasztható. Minthogy az N-dezmetil-VLBből is VCR készül, általában célszerű az oszlopkromatográíiás szétválasztás előtt elvégezni a formilezési reakciót, így a feldolgozandó frakciók száma csökkenthető.In order to make better use of the column capacity, it is advisable to carry out the known purification of leurosin when preparing the material for chromatography. During chromatography, VLB and N-desmethyl-VLB can be selectively separated. Since N-desmethyl-VLB is also made into VCR, it is generally desirable to carry out the formylation reaction prior to column chromatography separation to reduce the number of fractions to be processed.

A találmány szerinti eljárás legfőbb előnye tehát az, hogy kitünően és egyszerűen megoldható nyers VLB-szulfát komponenseinek szelektív szétválasztása. A módszerrel olyan komponenseket is el tudtunk választani, melyeknek elválasztására ezideig nem volt jó módszer. így a leurozin, aahidro-VLB és dezacetoxi-VLB elválasztását a rendszer tökéletesen megoldja. A kromatográfiával kapott és izolált VLB-szulfát összes szennyezése 2%, de a terhelés megfelelő állításával még 1% körüli szennyezésű VLB-t is kaphatunk.The main advantage of the process according to the invention is therefore that it is possible to selectively separate the components of crude VLB sulfate in an excellent and simple manner. The method also allowed us to isolate components that were not well isolated so far. Thus, the separation of leurosin, aahydro-VLB and desacetoxy-VLB is perfectly solved. The total contamination of the VLB sulfate obtained by chromatography and isolated is 2%, but with proper adjustment of the load, even a contamination of about 1% can be obtained.

Mint ismert, gyógyászati célokra a katarantusz alkaloidok közül a VLB és VCR használatos. A VCR túlnyomó részét a VLB oxidálásával nyerik. Figyelembe véve az oxidáció és az izolálás hatékonyságát, gyakorlati tapasztalatok szerint a VLB jelentős része oxidálásra kerül. így a további felhasználástól függően növelhető vagy csökkenthető a VLB és VCR egymás melletti elválasztásának hetékonysága. Ez utóbbi szintén igen kedvező előnye eljárásunknak.Of the catarrhal alkaloids known to be used for medical purposes, VLB and VCR are used. Most of the VCR is obtained by oxidation of VLB. Considering the efficiency of oxidation and isolation, in practice, a significant part of VLB is oxidized. Thus, the efficiency of the separation of VLB and VCR side by side may be increased or decreased, depending on further use. The latter is also a very favorable advantage of our process.

A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon mutatjuk be:The process of the present invention is illustrated by the following examples:

1. példa g nyers, 35% VLB-t tartalmazó, VLB-szulfátot íalőá 1 lítását lásd 160 967 számú magyar szabadalmi leírást) oldunk lOOml metilénklorid és 50 ml metanol elegyében. Az oldathoz 50 ml 1,6 ml tömény ammónium-hidroxidot tartalmazó vizet adunk, majd ószszerázás után a fázisokat szétválasztjuk. A vizes-metanolos fázist (pH = 7) ezután kétszer 25 ml metilénkloriddal extraháljuk. A metilénkloridos részeket vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, és legfeljebb 40°C-os fürdőn vákuumban szárazra pároljuk. A 9 g-nyi száraz maradékot 100 ml metanolban oldjuk, vákuummal' metilénklorid-mentesre szívatjuk, majd hidegen 1 napon átkristályosítjuk. A kivált leurozin-kristályokaf kiszűrjük metanollal mossuk. A leurozint a szűrőről metilénkloriddal leoldjuk, bepároljuk -és 10-szeres térfogatnyi metanolból átkristályosítjuk. Egy napos hideg kristályosítás után a leurozin-kristályokat kiszűrjük, metanollal mossuk.Example 1 Preparation of crude VLB sulfate containing 35% VLB (see U.S. Patent No. 160,967) was dissolved in 100 mL of methylene chloride and 50 mL of methanol. To the solution was added 50 ml of water containing 1.6 ml of concentrated ammonium hydroxide, and the layers were separated after peeling. The aqueous methanol layer (pH 7) was then extracted with methylene chloride (2 x 25 mL). The methylene chloride portions are dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to dryness in a vacuum bath at 40 ° C or less. The dry residue (9 g) was dissolved in methanol (100 ml), suction-free with methylene chloride and recrystallized cold for 1 day. The precipitated leurosin crystals are filtered off and washed with methanol. The leurosin was dissolved from the filter with methylene chloride, evaporated, and recrystallized from 10 volumes of methanol. After one day of cold crystallization, the leurosin crystals were filtered off and washed with methanol.

Ilyen módon 1 g leurozint kapunk.In this way, 1 g of leurosin is obtained.

Az egyesített metanolos részeket vákuumban legfeljebb 40°C-on szárazra pároljuk, 6 ml ecetsavanhidridet és 18 ml hangyasavat adunk az elegyhez, majd fél órán át 40°C-on tartjuk. A kapott vegyesanhidrid elegyét viszszahűtjük és beleoldjuk a VLB 8 g-nyi szárazmaradékát. Oldódás után fél órán át 40°C-on tartjuk az elegyet, majd keverés közben 44 g jég és 44 ml tömény ammónium-hidroxid elegyébe öntjük, majd 100 ml és kétszer 25 ml metilénkloriddal extrahálunk. Az egyesített metilénkloridos részeket szárítjuk, szárazra pároljuk 40°C-os fürdőről. A maradék 8 g szárazmaradékot oszlopkromatografáljuk. Oszlopkromatográfiás körülmények: Oszlopméret: 5 cm x 5 dm (1 1)The combined methanol portions are evaporated to dryness under vacuum at <RTI ID = 0.0> 40 C </RTI>, acetic anhydride (6 mL) and formic acid (18 mL) are added and the mixture is kept at 40 for half an hour. The resulting mixed anhydride mixture was cooled and dissolved in 8 g of dry residue of VLB. After dissolution, the mixture was heated at 40 ° C for half an hour, poured into a mixture of 44 g of ice and 44 ml of concentrated ammonium hydroxide with stirring, and then extracted with 100 ml and twice 25 ml of methylene chloride. The combined methylene chloride portions were dried and evaporated to dryness in a 40 ° C bath. The remaining 8 g of dry residue was subjected to column chromatography. Column chromatography conditions: Column size: 5 cm x 5 dm (1 1)

Töltet: Szilikagél: 0,04-0,063 mm (400 g) (kb. 800 ml)Filling: Silica gel: 0.04-0.063 mm (400 g) (about 800 ml)

Eluláló oldatok:Solution solutions:

I. (piridin-ecetsav-víz 20:14,3:11): 15-etilacetát 85I. (pyridine-acetic acid-water 20: 14.3: 11): 15-ethyl acetate 85

II. „ 20 „ 80II. "20" 80

III. „ 25 „ 75III. "25" 75

Oszlopsebe^ség: 80 ml/óraColumn speed: 80 ml / h

Anyag felvitele: 5-szörös mennyiségű 1. eluensselMaterial Application: 5x Elution 1

Frakciószedés: óránkéntFraction picking: hourly

Frkaciók ellenőrzése: VRKFraction check: TLC

A kivitelezés részletezése: Az anyag oszlopra rétegezése után az I., majd a II. eluenssel 24—24 órát eluálunk, majd a III. eluenssel a VLB elfogyásáig. A feni megadott -eluensekkel végzett elúció során a frakciók elvi sorrendje az alábbi:Implementation Details: After layering the material on a column, I, then II. eluant for 24-24 hours and then eluting with III. eluent until the VLB runs out. During elution with the given -eluents given above, the order of fractions is as follows:

különböző monomer-vegyületek leurozin és anhidro-VLB VCRvarious monomeric compounds leurosin and anhydro-VLB VCR

VLB dezmetil-VLB dezacetoxi-VLBVLB Desmethyl-VLB Desacetoxy-VLB

Jelen esetben csak a VCR-, ill. VLB-frakciót, továbbá egy közöttük lejövő frakciót gyűjtöttünk, mégpedig az alábbi időtartamokban: 40.-43. órában VCR-, 44.-48. órában vegyes-, 49.-75. órában VLB-frakció. Ezeket a frakció3In the present case, only the VCR or VCR is used. The VLB fraction and a fraction falling between them were collected over the following periods: 40-43. hour VCR, 44-48. hours mixed, 49-75. per hour VLB fraction. These are the fraction3

-3193398 kát külön-külön az alábbi módon dolgoztuk fel:-3193398 was processed separately as follows:

Egy oldószeres eluátumot vízzel négyszeres térfogatra hígítjuk, majd az etilacetátot leválasztjuk és az etilacetát térfogatára számított kétszer 1 /3 rész vízzel visszarázzuk. Az egyesített vizes oldatot háromszor 1/3 rész metiiénkloriddal (alkaloid-mentességig) extraháljuk. Az egyesített metilénkloridos oldatot 3-5-ször azonos mennyiségű vízzel extrahálva piridin-mentesítjük. Az egyesített szerves fázisokat vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és az oldatot vákuumban max. 40°Con bepároljuk, majd 10-szeres etanolban oldjuk és az egyes frakciók pH-ját 10%-os kénsavas etanollal pH=4,2-4,5 értékre állítjuk. 10-16 óra 10°C-on történő kristályosítás után a kristályokat kiszűrjük, 10°C-os etanollal mossuk, majd petroléterrel etanolmentesre mossuk. A kristályokat szobahőmérsékleten szárítjuk.The solvent eluate was diluted four times with water and the ethyl acetate was separated off and shaken twice with one-third part by volume of ethyl acetate. The combined aqueous solution was extracted three times with 1/3 parts methylene chloride (alkaloid-free). The combined methylene chloride solution is extracted three to five times with the same amount of water to decontaminate the pyridine. The combined organic phases are dried over anhydrous sodium sulfate and the solution is vacuum dried to max. After concentration at 40 ° C, it is dissolved in 10 times ethanol and the pH of each fraction is adjusted to pH 4.2-4.5 with 10% sulfuric acid ethanol. After crystallization for 10-16 hours at 10 ° C, the crystals are filtered off, washed with 10 ° C ethanol and washed with petroleum ether to ethanol free. The crystals were dried at room temperature.

A fenti módon eljárva a három frakcióból három terméket kapunk:Proceeding as above gives three products from the three fractions:

A/ Tiszta VLB-frakció kénsavas sója: 3,9-4,1 gSulfuric acid salt of A / Pure VLB fraction: 3.9-4.1 g

B/ VLB+VCR (vegyes) frakció kénsavas sója: 0,6 gSulfuric acid salt of B / VLB + VCR (mixed) fraction: 0.6 g

C/ VCR-frakció kénsavas sója: 0,3 gSulfuric acid salt of C / VCR fraction: 0.3 g

A/ A tiszta VLB frakció, kénsavas sóját ismert módon átkrístályosítva 90-92%-os hozammal gyógyszerkönyvi tisztaságú Vinblasztin-szulfátot kapunk. A végtermék az Északamerikai Egyesült Államok Gyógyszerkönyvének XXI. kiadásában részletezett, a továbbiakban az USP XXI-ben leírt módszerrel a következő tartalmú és tisztasági értékeket mutatja:The sulfuric acid salt of the pure VLB fraction A / A was recrystallized in known manner to give Vinblastine sulphate in a purity of 90-92%. The final product is the XXI. The following content and purity values are provided by the method detailed in the USP XXI, hereafter described in USP XXI:

Hatóanyagtartalom: 98,9% (szárazanyagra számolva)Active ingredient content: 98.9% (calculated on dry weight basis)

Idegen alkaloid: 1,3%Foreign alkaloid: 1.3%

Fajlagos forgatása: [oc|£°=—31° (2%-os metanolban)Specific rotation: [α] D = -31 ° (in 2% methanol)

B/ A vegyes frakciót, mely kb. 7:3 arányban tartalmaz VLB-t és VCR-t, ismert módon vinkrisztinné dolgozzuk fel.B / A mixed fraction, which is ca. It contains VLB and VCR in a ratio of 7: 3 and is processed into vincristine in a known manner.

A kapott VCRXH₂SO₄ LISP XXI minőségnek megfelel.The resulting VCRXH ₂ SO ₄ LISP is of XXI quality.

C/ A VCR frakció kénsavas sóját ismert módon átkrístályosítva szintén gyógyszerkönyvnek megfelelő minőségű végterméket kapunk.C / A recrystallization of the sulfuric acid salt of the VCR fraction in a known manner also yields a pharmacologically acceptable end product.

2. példaExample 2

4000 g nyers VLB-szulfátból (35% VLBlartalom) — melyet a 160 967 számú magyar szabadalmi leírás szerint állítottunk elő — kiindulva a bázisfelszabadítást, leurozinmentesítést, formilezést az 1. példában leírtak szerint végezzük. A műveletsor végén 3200 g kromatografálandó szárazmaradékot kapunk. Oszlopkromatográfiás körülmények: Oszlopméret: 20 cm x 2 m (62,8 1)Starting from 4000 g of crude VLB sulfate (35% VLB content), prepared according to Hungarian Patent Application No. 160,967, the base is liberated, deurosin deprotected and formylated as described in Example 1. At the end of the procedure, 3200 g of a dry residue to be chromatographed are obtained. Column chromatography conditions: Column size: 20 cm x 2 m (62.8 L)

Töltet: szilikagél: 0,04-0,063 mm 30 kg (60 1) 4Fill: silica gel: 0.04-0.063 mm 30 kg (60 L) 4

Eluláló rendszer:Bypass system:

(piridin-ecetsav-víz=20:14,3:1 1) :80-etilacetát:20(pyridine-acetic acid-water = 20: 14.3: 1 L): 80-ethyl acetate: 20

Oszlopsebesség: 5 l/óColumn speed: 5 l / h

Kivitelezés: 2db 60 1-es oszlopot feltöltünk etilacetátban szuszpendált 30-30 kg szilika géllel. Az oszlopokat 10-10 1 eluenssel előfuttatjuk.Implementation: 2 columns of 60 L were loaded with 30-30 kg silica gel suspended in ethyl acetate. The columns were run with 10-10 L of eluent.

Agyag oldása: 3200 g VLB-bázisból 3200 ml piridin-ecetsav-víz 20:14,3:11 elegyével sűrű olajos oldatot készítünk, majd kevertetés közben 12,8 1 etilacetátot adunk hozzá. Az oldatot állni hagyjuk. Az esetleg leváló vizes részt leválasztjuk, majd az oldatot megfelezve 1-1 69 1-es oszlopra visszük.Clay dissolution: From 3200 g of VLB base, 3200 ml of a mixture of pyridine-acetic acid-water 20: 14.3: 11 to form a thick oil solution, 12.8 L of ethyl acetate are added with stirring. The solution was allowed to stand. The aqueous portion which may be separated off is separated off and applied in half to a column of 1-169 l.

Frakciószedés:Picking Faction:

I. frakció: VCRFraction I: VCR

II. frakció: VCR + VLBII. fraction: VCR + VLB

III. frakció: VLBIII. fraction: VLB

A feldolgozás az 1. példában leírtak szerint történik.Processing is carried out as described in Example 1.

A kapott 3 főfrakció további feldolgozását gyógyszer könyvi minőségű végtermékké az alábbiak szerint végezzük:Further processing of the resulting 3 main fractions into a drug-grade finished product is performed as follows:

Ismert módon, például a 154 715 sz. magyar szabadalmi leírás szerint, járhatunk el, melynek értelmében alumínium-oxid-oszlopon VCR és VLB elválasztást végzünk. A megfelelő frakciók átkristályosítása után gyógyszerkönyvi minőségű VCR-szulfátot kapunk. A VLB-tartalmú frakciót a továbbiakban nyers VLB-szulfátként kezeljük és újra feldolgozáshoz használjuk.In the prior art, for example, U.S. Pat. According to the Hungarian patent specification, VCR and VLB can be separated on an alumina column. Recrystallization of the appropriate fractions affords pharma grade VCR sulfate. The VLB-containing fraction is further treated as crude VLB sulfate and used for reprocessing.

A tiszta (900 g) VLB-frakció kénsavas sóját ismert módon átkrístályosítva 800 g USP XXI-minőségű vinblasztin-szulfátot kapunk.The sulfuric acid salt of the pure VLB fraction (900 g) was recrystallized in a known manner to yield 800 g of USP XXI grade vinblastine sulfate.

A 900 g vegyes frakciót, mely a VLB mellett 7-8 % VCR-t is tartalmaz, ismert módon VCR-ré oxidáljuk. A termék izolálás és tisztítás, valamint sóképzés után USP. XXI-nek megfelel.The 900 g mixed fraction containing 7-8% VCR in addition to VLB is oxidized to VCR in known manner. After product isolation and purification and salt formation, USP. Corresponds to XXI.

Claims

PATENT CLAIMS

A process for the purification of crude vinblastine sulfate containing at least 30% vinblastine on a silica gel column, characterized in that the chromatographic elution is carried out with 70 to 90 volumes of ethyl acetate or acetone and 10 to 30 volumes of pH 4-5,5, The fractions containing the resulting alkaloid salt (s) are diluted with water in a ratio of 1: 1-10: 1, preferably 3: 1 by volume, using a mixture of pyridine-acetic acid-water systems (4-2.5: 0.2-0.55). the resulting organic phase is separated and the pure vinblastine sulfate is isolated in a known manner.

2. A process according to claim 1 wherein the pyridine-acetic acid-water system is a 1: 0.715: 0.55 volume ratio of pH 4-5.5.

-4193398

3. A process according to claims 1 and 2, wherein the chromatographic eluent is a mixture of 75 to 85 volumes of ethyl acetate and 15 to 25 volumes of 1: 0.715: 0.55 pyridine-acetic acid-water system at pH 4.9. .