HU193291B - Process for production of biologically active heptapeptides and their acid-additional salts and medical preparatives containing thereof as active substance - Google Patents

Process for production of biologically active heptapeptides and their acid-additional salts and medical preparatives containing thereof as active substance Download PDF

Info

Publication number
HU193291B
HU193291B HU842727A HU272784A HU193291B HU 193291 B HU193291 B HU 193291B HU 842727 A HU842727 A HU 842727A HU 272784 A HU272784 A HU 272784A HU 193291 B HU193291 B HU 193291B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
pro
group
boc
trp
formula
Prior art date
Application number
HU842727A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT34765A (en
Inventor
Roberto Castiglione
Giuseppe Perseo
Mauro Gigli
Barbara Hecht
Original Assignee
Erba Farmitalia
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Erba Farmitalia filed Critical Erba Farmitalia
Publication of HUT34765A publication Critical patent/HUT34765A/hu
Publication of HU193291B publication Critical patent/HU193291B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
    • A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/30—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for swines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Fodder In General (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás biológiailag aktív új peptidek és gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóik, valamint a fenti vegyületeket hatóanyagként tartalmazó állatgyógyászati célra alkalmazható készítmények előállítására.
A leírásban a peptidkémiában szokásosan használt szimbólumokat és rövidítéseket használjuk, a [Biochemistry 14, 449 (1975)] irodalmi helyen ismertetettek szerint.
A találmány tárgya közelebbről eljárás az
X-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-Y (I) általános képletű peptidek előállítására, a képletben
X jelentése hidrogénatom, vagy terc-butoxi-karbonil-csoport, és
Y jelentése hidroxil- vagy aminocsoport, vagy 1-4 szénatomos alkoxicsoport.
Az 1-4 szénatomos alkoxicsoport metoxi-, etoxi-, n-propoxi-, izopropoxi-, η-butoxi-, szek-butoxi-, izobutoxi- vagy terc-butoxi-csoport lehet.
A találmány szerinti eljárás az (I) általános képletű peptidek savakkal képzett gyógyászatilag elfogadható sóira is vonatkozik. A savaddíciós sókat különféle szervetlen vagy szerves savakkal, például kénsavval, foszforsavval, sósavval, hidrogén-bromiddal, hidrogén-jodiddal, salétromsavval, szulfaminsavval, citromsavval, tejsavval, piroszőlősavval, oxálsavval, maleinsavval, borostyánkősavval, borkősavval, fahéjsavval, ecetsavval, trifluor-ecetsavval, benzoesavval, szalicilsavval, glükonsavval vagy aszkorbinsavval képezhetjük.
A találmány értelmében a peptideket a szokásos módon, oldatban végzett peptidszintézissel állítjuk elő. A szintézis lényegében a védett aminosavak vagy peptidek megfelelő sorrendben végrehajtott kondenzálásából áll. A kondenzációs reakciókat úgy hajtjuk végre, hogy a kapott peptidek a hét aminosav-maradékot a kívánt szekvenciában tartalmazzák. A peptidkémiában önmagában ismert módon kondenzált aminosavaknak és peptideknek azon karboxil- és aminocsoportjait, amelyek nem vesznek részt a peptidkötés kialakításában, megfelelő védőcsoportokkal védjük. A védőcsoportok savas vagy lúgos hidrolízissel, vagy hidrogenolízissel eltávolíthatók. Az aminocsoportokat például benzil-oxi-karbonil-, terc-butoxi-karbonil-, tritil-, formil-, trifluor-acetil-, ο-nitro-fenil-szulfenil-, 4-metoxi-benzil-oxi-karbonil-, 9-ftuorenil-metoxi-karbonil-, 3,5-dimetoxi-a,a'-dimetil-benzil-oxi-karbonil- vagy metil-szulfonil-etoxi-karbonil-csoporttal védhetjük. A karboxilcsoport védésére például a metil-, etil-, terc-butil-, benzil-, p-nitro-benzil- vagy fluorenil-metil-csoport alkalmazható.
Az egyik molekula aminocsoportja és egy másik molekula karboxilcsoportja közötti kondenzálást a peptidkötés kialakítása céljából valamely aktivált acil-származék — például vegyes anhidrid, azid vagy aktivált észter — 2 felhasználásával, vagy a szabad amino- és karboxilcsoport közötti közvetlen kondenzálással hajthatjuk végre, ez utóbbi esetben kondenzálószert — például diciklohexil— karbodiimidet — is használunk, önmagában, vagy egy racemizációt megakadályozó szerrel — például N-hidroxi-szukcinimiddel vagy 1-hidroxi-benzo-triazollal — együtt. A kondenzálást oldószerben — például dimetil-formamidban, pirid nben, acetonitrilben, tetrahidrofuránban vagy N-metil-2-pirrolidonban — hajthatjuk végre. A reakcióhőmérséklet —30°C és szobahőmérséklet közötti tartományban változhat. A reakcióidő általában 1 óra és 120 óra között lehet. A reakcióutat, védőcsoportokat és kondenzálószereket célszerűen úgy választjuk meg, hogy elkerüljük a racemizáció veszélyét.
A védőcsoportok eltávolítását a peptidkémiában szokásos eljárások szerint végezhetjük. Azokat a peptideket, amelyek képletében Y 1-4 szénatomos alkoxicsoportot jelent, példái! úgy állíthatjuk elő, hogy kiindulási anyagként olyan aminosavat használunk, amelynek C-terminálisa a megfelelő alkohollal észterezve van. Az Y helyén OH csoportot tartalmazó peptideket például az Y helyén 1-4 szératomos alkoxicsoportot tartalmazó peptidek hidrolízisével állíthatjuk elő. Azokat a peptideket, amelyek képletében Y -NH2 csoportot jelent, a megfelelő észterek ammonolízisével állíthatjuk elő, vagy úgy, hogy a C-terminálisán a megfelelő aminnal amidált amiiosavból indulunk ki.
A találmány szerinti eljárás végső kondenzációs lépésében előnyösen egy
X-Val-Pro-Pro-OH (II) általános képletű vegyületet, vagy annak vegyes anhidridjét, aktivált észterét vagy azidját kondénzáljuk kondenzálószer — például diciklohexil-karbodiimid — és adott esetben egy racemizációt megakadályozó szer jelenlétében egy
H-Leu-Gly-Trp-Met-Y (III) általános képletű vegyülettel - a fenti képletekben X és Y jelentése a fenti, azzal a megkötéssel, hogy X jelentése hidrogénatomtól élté ő.
A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek növekedést serkentő hatással rendelkeznek állatok esetén, amint azt a májszövetek protein-szintézisének in vivő—in vitro vizsgálatával [Kammerer K. és Dey-Hazra A.: Vet. Med. Nachr. 2, 99- :12 (1980)], illetve szubkután vagy orális kezalés esetén a kísérleti állatok súlygyarapodásának és táplálékhasznosításának dózis-fűggő növekedésével meghatároztuk.
Protein-szintézis in vivő — in vitro vizsgálata
A növekedési vizsgálatot 6 db hím patkányból (Wistar, Hagemann, Extertal) álló csoportokon végeztük, 4 héten át. Az egyes csoportokat 3 állatból álló alcsoportokra osztva
-2193291
Makrolon ketrecekben helyeztük el, alomként faforgácsot használtunk.
Az állatok tetszés szerinti mennyiségű vizet és élelmet — Altromin 1321 standard táp, 19 % nyers protein tartalommal — kaptak.
Az (I) általános képletű peptideket oldat formában, szubkután adagoltuk, naponta 10, 50 és 100 ng/kg dózisban, az oldatokat 100 ng/ml koncentrációjú alapoldatból készítettük, fiziológiás sóoldatos hígítással.
Szövetminták előkészítése g májat 9 ml TKM-puffer-szacharóz oldatban homogenizálunk, jeges hűtés közben 600 fordulat/perc sebességgel működtetett Potter-homogenizálóban, 2 percen át, majd untracentrifugában 4°C-on 10000 g-vel 20 percen át centrifugáljuk, a felülúszót — azaz a mikroszomális sejt-folyadékot — leöntjük.
Meghatározás kivitelezése
A mikroszomális sejt-folyadék protein-tartalmát biuret-módszerrel meghatározzuk, majd TKM-pufferrel 1 mg/ml-re állítjuk be a protein-koncentrációt. Ezt követően kétszer desztillált vízzel 0,25 mg protein/ml mikroszomális sejt-folyadék koncentrációra hígítjuk.
Ezután hozzáadunk 0,15 ml reakcióközeget, 0,05 ml (50 pg) piruvát-kináz-oldatot és 0,1 ml 1 pCi aktivitású 14C-aminosav-keveréket. Az inkubált elegy térfogata minden esetben 1 ml.
1. táblázat: Patkányok májszövetének protein-szintézise
Vegyület Dózis (ng/kg) CPM (beütés/ perc) %-os különbség kontrolihoz képest
kezeletlen kezelt
1. példa szerinti 10 14072 + 17,7 +36, 1
vegyület (TK7) 50 15093 +26,2 +46,0
100 16180 +35,3 +56,5
2. példa szerinti 10 13377 + 11,8 +29,4
vegyület (TK7D) 50 14280 + 19,*4 +38,2
100 16866 +41,0 +63,2
Kezeletlen - 11958 - -
kontroll
Kezelt - 10336 -13,6 -
kontroll
Az (I) általános képletű vegyületek endokrinológiai aktivitással — például prolaktin és luteinizáló hormon felszabadító hatással — is rendelkeznek. Ezenkívül központi idegrendszeri hatásuk — közelebbről szedatív-hipnotikus hatásuk — is van. Patkányokban a spontán aktivitás csökkenését és a természetes alvást indukálják.
Az (I) általános képletű vegyűleteket vagy a belőlük előállított készítményeket bármely, önmagában ismert takarmánnyal együtt alkalmazhatjuk.
A mintákat 37°C-os vízfürdőn 35 percen át nkubáljuk, majd a fehérjét 2 ml 10 %-os tril.lór-ecetsavval kicsapjuk. A csapadékot triklór-ecetsav-oldat hozzáadásával, majd azt 5 követő centrifugálással (3600 g, 5 perc) ismételten addig mossuk, míg a felülúszó radioaktivitás-mentes lesz.
A maradékot 1,0 ml Lumaso.lve:ban oldjuk, és egy éjszakán át 37°C-on állni hagyjuk, 10 ezalatt az oldat kitisztul.
A minta radioaktivitását folyadék-szcintillíciós berendezésben (PRIAS liquid scintill ition counter PL) mérjük, 1,0 ml mintához 5 ml szcintil 1 ációs folyadékot adunk.
15 Az eljárást részletesen Kammerer fentebb idézett cikkében ismertetik.
A hím patkányok májszövetének protein-szintézisére vonatkozó mérések eredményeit hetes, naponta ismételt szubkután kezelés
9Π ’ r után az 1. táblázatban közöljük.
A kezelt kontroll csoportnak szubkután fiziológiás nátrium-klorid-oldatot adtunk.
Amint az 1. táblázat eredményeiből látható, a kezelt kontroll csoportban a protein-sz ntézis aktivitása 13,6 %-kal csökkent, a kezeletlen kontroll csoporthoz viszonyítva. Ez a különbség statisztikailag is bizonyítható. A protein-szintézis mértéke az 1. és 2. példa szerint előállított (I) általános képletű vegyü30 letekkel kezelt állatok esetén lényegesen eltér' a két kontroll csoport esetén kapott értékektől. A protein-szintézis mértékének növekecése arányos volt a dózisokkal.
Takarmány alatt bármely állati élelmezésre alkalmazott eledelt értünk. Az (I) általános képletű vegyűleteket vagy az azokat taralmazó készítményeket előnyösen alaposar összekeverjük a takarmánnyal,az egyen60 letts eloszlás biztosítására. A találmány szerin’i eljárással előállított vegyűleteket bárme'y állati élelmezésre használt takarmánnyal keverhetjük, a végterméket úgy formáljuk, hogy az állati élelmezéshez szükséges alap65 vető tápanyagokat, ásványi anyagokat, vitamirokat, salakképző anyagokat, stb. tartal3
-3193291 mázzá. A fenti takarmányok összetétele az állattenyésztéssel foglalkozó szakemberek számára jól ismert.
Az (I) általános képletü vegyületeket szubkután beültetett anyagként — például tabletta formában beültetve-?, vagy szubkután injekció formájában is adagolhatjuk az állatoknak, a hatóanyagból I —100 ng/kg, előnyösen 10—50 ng/kg napi dózisú felszabadulást biztosítva. Az alkalmazás módja nem korlátozza a találmány oltalmi körét·.
A találmány szerinti eljárással előállított peptidek közül előnyösek az alább felsorolt vegyületek:
H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH;
H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-O-Me;
H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-NH2.
A találmány szerinti eljárást közelebbről — a korlátozás szándéka nélkül — az alábbi példák segítségével kívánjuk megvilágítani. Az R, értékeket szilikagél 60 F254 (Merck) réteggel bevont, 0,25 mm rétegvastagságú, 20 cm magas lemezeken határoztuk meg, a következő futtatóelegyeket használva: A-rendszer: benzol, 60-80 °C forráspontú benzin és etil-acetát 70:10:40 térfogatarányú elegye
B-rendszer: benzol, etil-acetát, ecetsav és víz 100:100:20:10 térfogatarányú elegye (felső fázis)
C-rendszer: benzol, etil-acetát, ecetsav és víz 100:100:40:15 térfogatarányú elegye (felső fázis)
D-rendszer: n-butanot, ecetsav és víz 4:1:1 térfogatarányú elegye.
A vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatokat 18 és 25 °C között hőmérséklettartományban végeztük, ezért az Rj-értékekben ±5 % eltérés lehetséges. Az olvadáspontokat nyitott kapillárisban, Tottoli-készülékben mértük, és nem korrigáltuk. Az (I) általános képletü vegyületek többsége meglágyul és bomlik az olvadás bekövetkezte előtt. A kristályosításra, kicsapásra vagy eldörzsölésre használt oldószereket a példákban adjuk meg.
A nagyfeszültségű papír-elektroforézist Pherograph-Original-Frakfurt Type 64 készülékkel végeztük, Schleicher-Schüll n. 2317 papíron, pH 1,2 értéken hangyasav, ecetsav és víz 123:100:777 térfogatarányú elegyében, 1600 V-on, 40 V/cm mellett; és pH 5,8 értéken piridin, ecetsav és víz 450:50:
4500 térfogatarányú elegyében, 1400 V-on, 32,5 V/cm mellett.
A termékeket Glu-hoz viszonyított mozgékonyságukkal jellemeztük, pH 1,2 (E, 2) és pH 5,8 (E5;8) értéken.
A példákban az alábbi rövidítéseket használtuk:
BOC: terc-butoxi-karbonil-csoport Bzl : benzil-csoport Me : metil-csoport
t. példa
H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH.HCl (XIII) előállítása
1. lépés: BOC-Trp-Met-OMe (I) előállítása
30,43 g (100 mmól) BOC-Trp-OH 200 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készült oldatához -12 °C-on 11,2 ml (100 mmól) N-metil-morfolint, majd 9,9 ml etil-klór-for.miátot adunk. Az elegyet a fenti hőmérsékleten 2 percen át keverjük, majd hozzáadjuk 19,96 g (100 mmól) HCl.H-Met-OMe [Decker C.A.. és ír unkatársai: J. Bioi. Chem. 180, 155 (1949)] és 11,2 ml (100 mmól) N-metil-morfolin 150 ml dimetil-fórmamiddal készült hideg oldatát. A reakcióelegyet -12 °C-on 45 percen át, majd 0-15 °C-on 90 percen át keverjük, a sóktíl szűréssel elválasztjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, és egymás után néhányszor nátrium-kloriddal telített 1 mól/l-es citromsavoldajdal, mól/l-es nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, illetve vízzel mossuk. A szerves fázist elvá'asztjuk és vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd az oldószert vákuumban ledesztilláljuk.
39,12 g (I) vegyületet kapunk, a hozam 87 %. Olvadáspontja izopropanol, diizopropil-éter és petroléter elegyéből végzett átkrist ílyosítás után 95-97 °C;
[a]^! = -25,1 (c=l, metanol);
Rk= 0,73; Rf«= 0,76.
2. lépés. H-Trp-Met-OMe.HCI (II) előállítása
39,00 g (86,75 mmól) BOC-Trp-Met-OMe-t (I) 390 ml hangyasavban oldunk szobahőmérsékleten. A BOC-védőcsoport teljes mértékű e távolítása után - melyet vékonyréteg-kromatográfiás eljárással ellenőrzünk—az oldószert vákuumban 30 °C-on ledesztilláljuk. A maradékot metanolban oldjuk, 0 °C-ra hűtjük rs hozzáadunk 34,7 ml (104,1 mmól) mól/1 koncentrációjú tetrahidrofurános hidrogén-klorid-oldatot. Az oldószereket vákuumban < Itávolítva 33,48 g (II) vegyületet kapunk, 100 % hozammal, olaj formájában. Rfp = 0,71; E, 2 = 0,82.
3. lépés: BOC-Gly-Trp-Met-OMe (111) előállítása
15,20 g (86,75 mmól) BOC-Gly-OH-ból és 33 48 g (86,75 mmól) HCl.H-Trp-Met-OMe-ből (II) kiindulva az 1. lépés szerinti eljárással állítjuk elő a (III) vegyületet, azzal a;: eltéréssel, hogy a termék izolálását klorofor n helyett etil-acetáttal végezzük.
26,37 g (III) vegyületet kapunk, 60 % hozammal. Olvadáspontja etil-acetát—dietik -éter—diizopropil-éter elegyből átkristályosítva 149-145 °C;
Jajp = -30° (c=l, metanol);
Rf*= 0,27; RfB= 0,56; Rfc = 0,77.
4. lépés: H-GIy-Trp-Met-OMe.HCl (IV) előállítása
20 g (51,71 mmól) BOC-Gly-Trp-Met-OMe bőt (III) kiindulva a 2. lépés szerinti eljárással 21,76 g cím szerinti (IV) vegyületet kapunk 95 % hozammal. Olvadáspontja
-4193291 izopropanol—diizopropil-éfer elegyből átkristályosítva 195° C (bomlás közben);
[a]20 = -12,9 ° (c=l, metanol);
Rfp = 0,49;
^-1,2 ~ 0,84.
5. lépés: BOC-Leu-Gly-Trp-Met-OMe (V) előáll ítása
12,16 g (48,76 mmól) BOC-Leu-OH 120 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készült oldatához -12 °C-on 5,5 ml (48,76 mmól) N -metil-morfolint, majd 4,8 ml (48,76 mmól) etil-klór-formiátot adunk. Az elegyet a fenti hőmérsékleten 2 percen át keverjük, majd hozzáadjuk 21,6 g (48,76 mmól) HCl.H-Gly-Trp -Met-OMe (IV) és 5,5 ml N-metil-morfolin 100 ml dimetil-formamiddal készült hideg oldatát. A reakcióelegyet -12 °C-oml órán át, majd 0-15 °C-on 2 órán át keverjük, ezután a sókat leszűrjük és vákuumban bepároljuk. A nyersterméket 0,040-0,063 mm szemcseméretű szilikagéllel (Merck) töltött oszlopon kromatografálva tisztítjuk, az eluálást etil-acetáttal végezzük.
Etil-acetát—dietil-éter—petroléter elegyből végzett átkristályosítás után 18,13 g cím szerinti (V) vegyületet kapunk 60% hozammal, olvadáspontja 110°C.
[a]»° = -31,6° (c=l, metanol)·
RU = 0,14; Rf. = 0,54.
6. lépés: H-Leu-Gly-Trp-Met-OMe.HCI (VI) előállítása g (29,04 mmól) BOC-Leu-Gly-Trp-Met-OMe-t (V) 290 ml jégecetes telített hidrogén-klorid-oldatban oldunk, amelyhez 18 ml anizolt és 9 ml 2-merkapto-etanolt adtunk. A BOC-védőcsoport lehasadása szobahőmérsékleten 30 perc alatt teljes mértékben végbemegy, ezután az oldószert 30 °C-on vákuumban eltávolítjuk. A nyersterméket 0,040 - 0,063 mm szemcseméretü szilikagéllel (Merck) töltött oszlopon kromatografálva tisztítjuk, az eluálást kloroform és metanol 8:2 térfogatarányú elegyével végezzük.
12,44 g cím szerinti (VI) terméket kapunk 77 % hozammal izopropanol—diizopropil-éter elegyből végzett átkristályosítással, olvadáspontja 170 °C.
[a]2° = -9,9° (c=l, metanol);
RfD = 0,62;
E, 2 = 0,71.
7. lépés: BOC-Pro-Pro-OBzl (VII) előállítása
21,52 g (100 mmól) BOC-Pro-OH 200 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készült oldatához -10 °C-on 1 Γ,2 ml N-metil-morfolint és 13,3 ml izobutil-klór-íormiátot adunk egymás után. Az elegyet a fenti hőmérsékleten 3 percen át keverjük, majd hozzáadjuk 24,17 g (100 mmól) HC1.H-Pro-OBzl [RamachandranJ.és LiC.H.: J. Org Ch'em. 28, 173 (1963)] és 11,2 ml (100 mmól) N-metil-morfolin 150 ml dimetil-formamiddal készült hideg oldatát. A reakcióelegyet -10 °C-on 1 órán át, majd 0-15 °C-on 2 órán át keverjük, a sókat szűréssel eltávolítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, máj I egymás után nátrium-kloriddal telített 1 nól/l koncentrációjú citromsavoldattal, mól/l-es nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel többször átmossuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfát felett szárítják, majd az oldószert vákuumban ledesztilláljuk. 34,21 g cím szerinti (VII) vegyületet kapunk, 85 % hozammal, olaj íormáj íban.
Rf, = 0,62.
8. lépés: HCl.H-Pro-Pro-OBzl.HCI (Vili) előí 111
54,21 g (85 mmól) BOC-Pro-Pro-OBzl-t (VII) 342 ml telített ecetsavas hidrogén-klorid-oldatban oldunk szobahőmérsékleten. A BOC-védőcsoport lehasadása szobahőmérsékleten· 30 perc alatt teljes mértékben végbemegy, ezután az oldószert vákuumban eltávolíljuk. Izopropanol—etil-acetát elegyből végzett átkristályosítás után 21,60 g cím szerinti (VIII) vegyületet kapunk 75 % hozammal.
Rfj> = 0,32;
E, 2 = 1,12.
9. ’ lépés: BOC-Val-Pro-Pro-OBzl (IX) elő011 ítása
13,79 g (63,45 mmól) BOC-Val-OH-ból és 21,5 g (63,45 mmól) HCl.H-Pro-Pro-OBzl-ből (VIII) kiindulva a 7. lépésben leírtak szer nt eljárva, a nyersterméket 0,040— —0,063 mm szemcseméretű szilikagéllel töltött oszlopon kromatográfiás eljárással tisztítva és etil-acetát és metanol 98:2 térfogataráryú elegyével eluálva 22,28 g cím szerinti (IX) terméket kapunk 70 % hozammal, olaj formájában.
10. lépés: BOC-Val-Pro-Pro-OH (X) előállítása
22,28 g (44,42 mmól) BOC-Val-Pro-Pro -OB;:l-t (IX) 150 ml metanolban oldva szobahőmérsékleten atmoszférikus nyomáson 4,46 g 10 % fémtartalmú szénhordozós palládium-katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk és az oldatot vákuumban koncentráljuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, majd vákuumban koncentráljuk. Diet'il-éteres hígítás után 10,98 g cím szerinti (X) vegyületet kapunk 60 % hozammal, olvadáspontja 184-190 °C.
[a]23 = -149,9 ° (c=l, metanol);
Rfc = 0,53;
E5,8= 0,51.
11. lépés: BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OMe (XI) előállítása
9,10 g (22,12 mmól) BOC-Val-Pro-Pro-OH ból (X) és 12,30 g (22,12 mmól) HC1.H-Leu Gly-Trp-Met-OMe-ből (VI) kiindulva az
5. lépés szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy a kromatográfiás tisztítási lépésben az eluáást 5-30 % növekvő koncentrációban metanol tartalmazó etil-acetáttal végezzük.
Izopropanol — diizopropil-éter elegyből átkristályositva 16,16 g cím szerinti (XI) vegyületet kapunk, a hozam 80 %, olvadáspont, a 184-190 °C.
-5193291 [“J®0--θ8,9 ° (c=l, metanol);
Rfe = 0,13; Rí, = 0,58.
12. lépés: BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH (X.1I) előállítása
5,00 g (5,48 mmól) BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OMe-t (XI) 20^ml metanolban oldunk és 10 ml 1 mól/1 koncentrációjú nátrium-hidroxiddal szobahőmérsékleten 2 órán át kezelve elszappanosítjuk. Az oldatot vízzel hígítjuk, vákuumban részlegesen koncentráljuk, 0°C-ra hütjük, 5 mól/l-es sósavoldattal pH 2-re savanyítjuk, majd etil-acetáttal néhányszor extraháljuk. A szerves fázist telített vizes nátríum-klorid-oldattal semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószer eltávolítása után 3,99 g (XII) vegyületet kapunk, a hozam 81 %, olvadáspontja 194-200 °C (bomlás közben). [aU° = -102,9 ° (c=I, metanol);
Rfc = 0,34;
E5)8 = 0,18 Glu.
13. lépés. IGVal-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp -Met-OH.HC1 (XIII) előállítása
3,85 g (4,28 mmól) BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-M.et-OH-ból (XLI) kiindulva, a 6. lépés szerinti eljárással 3,05 g nyersterméket kapunk izopropanol—diizopropil-éter elegyből. A nyersterméket DEAE-Sephadex A-25 (márkanév) töltetű oszlopon kromatografálva tisztítjuk, az eluálásra 0,02 mól/l-es ammónium-acetát-oldatot (pH 6,7) használunk. A terméket az ecetsavból liofilizáljuk, majd ecetsavban újraoldjuk és 6 ml ecetsavas telített hidrogén-klorid-oldattal kezeljük. Az oldatot dietil-éterbe öntjük. 2,57 g (XIII) kívánt vegyületet kapunk 72 % hozammal, olvadáspontja 150 °C.
[a]» = -90,5 ° (c=l, metanol);
Rf» = 0,30;
El>2 = 0,58 Glu.
’ 2. példa .
H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OMe.HCl (XIV) előállítása
5,00 g (4,28 mmól) BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OMe-t (XI) — melyet az 1. példa 11. lépésében állítottunk elő — az 1. példa
6. lépése szerint kezelünk, azzal az eltéréssel, hogy a kromatográfiás tisztítási műveletben eluensként diklór-metán—metanol—víz 86:14:1 térfogatarányú elegyet használunk. 2,73 g cím szerinti (XIV) vegyületet kapunk etil-acetátból végzett átkristályosítás után, olvadáspontja 154 °C.
[<x]2z = -92,4 ° (c=l, metanol);
Rfo = 0,34;
Β,,2 = 0,58 Glu.
3. péTda
H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-.NHj.HCl (XVI) előállítása
1. lépés: BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-NH2 (XV) előállítása £,00 g (4,28 mmól) BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OMe-t (XI) — melyet az 1. pél5 da '1. lépésében állítottunk elő — 100 ml metanol és 2 ml etilénglikol elegyében oldunk, és 0°C-on ammóniával telítjük. A reakcinelegyet 3 napon át hűtőszekrényben tartjuk, majd az ammónia feleslegét és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A nyersterméket 0,040-0,063 mm szemcseméretű eljárással részlegesen tisztítjuk, az eluálást etil -acetát és metanol 87:13 térfogatarányú elegyével végezzük, a kapott terméket a következő lépésben további tisztítás nélkül használjuk fel. Izopropanol -diizopropil-éter elegy, bői 2,58 g (XV) vegyületet kapunk, Rfc=0,31.
9n 2. lépés: H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-NHj.HCI (XVI) előállítása
2,45 g (2,73 mmól) BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly Trp-Met-NH2-ből (XV) kiindulva az 1. példa 6. lépésében leírtak szerint eljár25 va állítjuk elő a cím szerinti vegyületet, azzal az eltéréssel, hogy a kromatográfiás tisztítási műveletben eluensként diklór-metán, metano' és víz 85:15:1, illetve 80:20:1 térfogatarányú elegyeit használjuk. 1,55 g cím szerinti (XVI) vegyületet kapunk, 68 % hozam30 mai metanol—izopropanol—diizopropil-éter eleg\ bői végzett átkristályosítássa 1, Sephadex G-lÖ-zel (márkanév) végzett sótalanítás után, olvadáspontja 150-158 °C.
laU = '74,8 ° (c=l, metanol);
Rf, = 0,36;
E,, 2 = 0,55 Glu.
4. példa
Növekedési vizsgálat sertéseken
A növekedési vizsgálatot 4 hetes időszakban zégeztük, csoportonként 7 db kasztrált hím sertésen (hibrid), melyeket alcsoportokra osztva válaszfalakkal Felosztott ketrecekben tartottunk.
A sertések a kísérlet időtartama alatt 1 kg/nap adag eledelt kaptak (Höveler, normál típus, adalékok nélkül). A vizet az állatok zd libitum kapták. A súlyokat hetente mértí k.
A kísérlet eredményeit a következő táblázatban adjuk meg.
Anint a táblázat eredményeiből látható, a fiziclógiás sóoldattal kezelt állatok súlygya55 rapodása kisebb, mint a kezeletlen kontroll csopoté. Az injekció által kiváltott stressz miatti súlygyarapodás-csökkenés ellenére a TK-7 vegyülettel naponta kezelt állatok határozott mértékű súlygyarapodás-növekedést mutattak. A táplálékhasznosítás tükrözi a súlygyarapodás eredményeit.
-6193291
2. táblázat
Csoport Állatok száma Kezelés Dózis Vizsgált paraméterek
1. 2 - - testsúly
2. 2 fiziológiás NaCl 0,1 ml/kg táplálék- felvétel
3. 3 TK-7 (1. példa szerinti vegyület) 50 ng/kg táplálékhasznosítás (ng táp/kg súlynövekedés)
Eredmények
Csoport 1 . 2. 3.
Kezelés - íiz. NaCl TK-7 (1. pd.)
Dó z tg _ (ng/kg)______ — _ — -____ ______5_P_„___,_____
Kezdeti súly (kg) 12,5 14,8 11,7
Súly 1 hét után 14,0 16,3 15,2
2 hét után 16,0 18,5 17,8
3 hét után 19,3 20,5 20,7
Súlygyarapodás (kg) ' ' 6,8 5,7 9,0
Súlygyarapodás (^) 54,4 38,5 76,9
Δ % kontrolihoz
viszonyítva -16,2 +32,4
Táplálékfelvétel (kg) 21 21 21
Táplálékhasznosítás 3,09 3,68 2,33
Δ % kontrolihoz viszonyítva

Claims (3)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás az
    X-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-Y (I) (I) általános képletü peptidek — a képletben X jelentése hidrogénatom vagy terc-butoxi-karbonil-csoport, és
    Y jelentése hidroxil-, amino- vagy 1-4 szénatomos alkoxicsoport és gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő aminosavakat vagy aminosav-származékokat, illetve peptid-frakciókat az (I) általános képletnek megfelelő sorrendben kondenzáljuk, mimellett a láncvégi karboxilcsoportot vagy láncvégi aminocsoportot peptidkötés kialakításához aktiváljuk, miközben a többi funkciós csoportot átmenetileg védjük, egy Y helyén (1-4 szénatomos) alkoxi-csoportot tartalmazó kapott peptid alkoxicsoportját kívánt esetben hidroxilcsoporttá hidrolizáljuk vagy aminocsoporttá ammonotizáljuk, és/vagy egy kapott pepiidről kívánt és/vagy adott esetben a védőcsoportokat lehasítjuk és/vagy gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóvá alakítjuk.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás az X helyén hidrogénatomot, és Y helyén hidroxil-, +19,1 -24,6 arrino- vagy metoxicsoportot tartalmazó (1) általános képletü vegyületek hidrogén-klorid-sci előállítására, azzal jellemezve, hogy egy (II) általános képletü vegyületet
    BOC-Val-Pro-Pro-OH (IP) — a képletben BOC jelentése terc-butoxi-kar45 bo ül-csoport — egy (III) általános képletü vegyülettel
    H-Leu-Gly-Trp-Met-OMe.HCl (III') kondenzálunk, tetrahidrofuránban, etil-klór-fcrmiát aktiválószerrel, N-metil-morfolin je50 ler létében, -30 °C és szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten, 1—120 órán át, és kívánt esetbei egy kapott vegyület észtercsoportját metanolos nátrium-hidroxid-oldattal hidroxilcsoporttá hidrolizáljuk, vagy etilén-glikolban ammóniával aminocsoporttá ammonolizáljuk, és egy kapott
    BÓC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-Y (P) (P) általános képletü vegyület — a képletben θθ BOC és Y jelentése a fent megadott—BOC-védőcsoportját ecetsavas közegben hidrogén -kloriddal lehasítjuk.
  3. 3. Eljárás állatgyógyászati· célra alkalθ m;s gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy egy, az 1. igénypont
    -7193291 szerinti eljárással előállított (I) általános képletü vegyületet — a képletben X és Y jelentése az 1. igénypontban megadott — vagy annak valamely gyógyászatilag elfogadható savacidíciós sóját az állatgyógyászatban szokásosan használt hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal összekeverve állatgyógyászati készítménnyé alakítjuk.
HU842727A 1983-07-15 1984-07-12 Process for production of biologically active heptapeptides and their acid-additional salts and medical preparatives containing thereof as active substance HU193291B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB838319174A GB8319174D0 (en) 1983-07-15 1983-07-15 Biologically active heptapeptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT34765A HUT34765A (en) 1985-04-28
HU193291B true HU193291B (en) 1987-09-28

Family

ID=10545772

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU842727A HU193291B (en) 1983-07-15 1984-07-12 Process for production of biologically active heptapeptides and their acid-additional salts and medical preparatives containing thereof as active substance

Country Status (16)

Country Link
US (1) US4567162A (hu)
EP (1) EP0134986B1 (hu)
JP (1) JPS6038400A (hu)
AT (1) ATE49004T1 (hu)
AU (1) AU561132B2 (hu)
CA (1) CA1254700A (hu)
DE (1) DE3480841D1 (hu)
DK (1) DK342984A (hu)
ES (1) ES8607991A1 (hu)
FI (1) FI83526C (hu)
GB (1) GB8319174D0 (hu)
GR (1) GR81501B (hu)
HU (1) HU193291B (hu)
IL (1) IL72347A (hu)
NZ (1) NZ208836A (hu)
ZA (1) ZA845400B (hu)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8430255D0 (en) * 1984-11-30 1985-01-09 Erba Farmitalia Biologically active oligopeptides
DE3569482D1 (en) * 1984-12-21 1989-05-24 Catalysts & Chem Ind Co Hydrocarbon catalytic cracking catalyst compositions and method therefor
DE3601398A1 (de) * 1986-01-18 1987-07-23 Fresenius Ag Verwendung von oligopeptiden zur behandlung von cerebralen stoerungen
US5079366A (en) * 1987-04-07 1992-01-07 University Of Florida Quarternary pyridinium salts
US4888427A (en) * 1987-04-07 1989-12-19 University Of Florida Amino acids containing dihydropyridine ring systems for site-specific delivery of peptides to the brain
NZ233071A (en) * 1989-03-30 1993-02-25 Sumitomo Pharma Neurotrophic peptides, extraction from mammalian hippocampal tissue and pharmaceutical compositions thereof
AU2007238186B2 (en) * 2006-04-10 2014-01-09 Genentech, Inc. Disheveled PDZ modulators

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4474765A (en) * 1982-04-13 1984-10-02 Farmitalia Carlo Erba S.P.A. Biologically active peptides
GB2130590B (en) * 1982-11-10 1986-01-08 Erba Farmitalia Peptides

Also Published As

Publication number Publication date
GB8319174D0 (en) 1983-08-17
IL72347A0 (en) 1984-11-30
HUT34765A (en) 1985-04-28
IL72347A (en) 1987-12-31
ZA845400B (en) 1985-02-27
ES534111A0 (es) 1986-06-01
EP0134986A2 (de) 1985-03-27
EP0134986A3 (en) 1987-04-15
US4567162A (en) 1986-01-28
ATE49004T1 (de) 1990-01-15
AU561132B2 (en) 1987-04-30
GR81501B (hu) 1984-12-11
FI83526B (fi) 1991-04-15
DK342984A (da) 1985-01-14
NZ208836A (en) 1988-10-28
DK342984D0 (da) 1984-07-12
DE3480841D1 (de) 1990-02-01
FI842739A (fi) 1985-01-14
EP0134986B1 (de) 1989-12-27
AU3041784A (en) 1985-01-17
FI842739A0 (fi) 1984-07-09
ES8607991A1 (es) 1986-06-01
JPS6038400A (ja) 1985-02-27
CA1254700A (en) 1989-05-23
FI83526C (fi) 1991-07-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4024248A (en) Peptides having LH-RH/FSH-RH activity
CA1246548A (en) Insulin derivatives, processes for their preparation and their use, and pharmaceutical agents for the treatment of diabetes mellitus
US4118483A (en) Peptides having gonadoliberin activity and process for their manufacture
US4659693A (en) N,N&#39;-dialkyl substituted guanidino amino acyl residue substituted GRF-analog peptides
KR20050012224A (ko) 그렐린 함유 의약 조성물
IE873383L (en) Phosphinic acid derivatives
IE40257L (en) Nona and decapeptide amides
HU184612B (en) Process for preparing new cyclopeptides of somatostatine type
JPS6227079B2 (hu)
KR960014104B1 (ko) 테이코플라닌 화합물의 치환 알킬아미드
HU193291B (en) Process for production of biologically active heptapeptides and their acid-additional salts and medical preparatives containing thereof as active substance
EP1073447B1 (en) N1-modified glycopeptides
SE461042B (sv) Peptider med tillvaextbefraemjande aktivitet jaemte veterinaera kompositioner innehaallande naemnda peptider
HU196609B (en) Process for producing new peptides and pharmaceutics comprising them
US3801561A (en) Derivatives of salmon thyrocalcitonin
AU721261B2 (en) Peptide inhibitors of hematopoietic cell proliferation
JPS61143398A (ja) 動物成長促進剤
US4657892A (en) Pharmacologically active peptides
EP0004394B1 (en) Psychopharmacological peptides, process for their preparation and their pharmaceutical formulations
JPS63233999A (ja) 新規シスチン化合物、その製造法およびその用途
GB2109796A (en) Anorexigenic tripeptides, process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them
CZ553289A3 (en) Peptide exhibiting immunomodulating activity, process of its preparation and pharmaceutical preparation in which it is comprised
Andruszkiewicz et al. Antimicrobial properties of N3-(iodoacetyl)-L-2, 3-diaminopropanoic acid-peptide conjugates
CA1247084A (en) Peptide process for preparation thereof and use thereof
EP0053388B1 (en) New peptide, process for preparation thereof and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee