HU191105B

HU191105B - Method for detecting malignant proliferation

Info

Publication number: HU191105B
Application number: HU8478A
Authority: HU
Inventors: Adam Kovacs
Original assignee: Adam Kovacs
Priority date: 1984-01-12
Filing date: 1984-01-12
Publication date: 1987-01-28
Also published as: ZA85273B; JPS61501109A; HUT38443A

Abstract

A találmány tárgya eljárás malignus proliferáció - rákos megbetegedések, beleértve a leukémiát is kimutatására. Az eljárás során beszárítot vérszérum- vagy testnedv-pereparátumot, illetve célszerűen fiziológiás körülmények között beszár'tott sejtagglomerátumvagy szövetpreparátumot optikai vizsgálatnak vetünk alá, és a terminál effektus legalább részleges hiányából állapítjuk meg a kóros állapot >t. -1-The present invention relates to a method for detecting malignant proliferation, including cancer, including leukemia. The process involves drying the blood serum or body fluid paraffin, or, preferably, physiologically dried cell agglomerate or tissue preparation, and detecting the condition at least partial lack of the terminal effect. -1-

Description

A találmány tárgya diagnosztikai eljárás, mely lehetővé teszi vérszérumból, testnedvekből, sejtagglomerátumokból és szövetekből malignus proliferáció — rákos megbetegedések, beleértve a leukémiát is — kimutatását.BACKGROUND OF THE INVENTION The present invention relates to a diagnostic method for detecting malignant proliferation, including cancer, including leukemia, in blood serum, body fluids, cellular agglomerates and tissues.

Ismeretes, liogv a különféle rosszindulatú daganatos betegségek sikeres kezelésének alapvető feltétele annak igen korai stádiumban történő felismerése. Az utóbbi időben kiterjedt kutatások történtek ilyen módszerek kidolgozására. Ezen eljárások általában valamely, a vérben található speciális fehérje — például enzim — koncentrációját, illetve annak koncentráció-változását mérik. Ezek alkalmazási területe azonban korlátozott, a mérések bonyolultak, költségesek és általában hosszú ideig tartanak. Az irodalomban ez ideig nem található olyan eljárás, amellyel általában véve a daganatos betegségek diagnosztizálhatok lennének. A találmány célkitűzése ezért olyan eljárás kidolgozása, mely egyszerű és gyors módszert biztosít tumoros megbetegedések kimutatására, lehetőleg azok minél korábbi stádiumában.It is well-known, the basic condition for successful treatment of various cancers is to recognize it at a very early stage. Recently, extensive research has been done to develop such methods. These methods generally measure the concentration of a specific protein in the blood, such as an enzyme, or its change in concentration. However, their scope is limited, measurements are complicated, costly and generally take a long time. To date, there is no literature available to diagnose cancer in general. It is therefore an object of the present invention to provide a method that provides a simple and rapid method for detecting tumors, preferably at an early stage.

A találmány tárgya az a felismerés, hogy beszárított vérszérumban, illetve célszerűen fiziológiás körülmények között beszárított sejtagglomerátum-, testnedv-, és szövet-preparátumokban optikai módszerrel jellegzetes feliéijefonalak figyelhetők meg. Ezen fonalakra az ún. „terminál effektus” jellemző, melyek végpontjai a mikroszkópi képben minden esetben elérik, illetve a lehető legrövidebb úton megközelítik egy másik fonal valamelyik pontját, amennyiben a minta egészséges szervezetből származik. Abban az esetben, ha a mintát tumoros szervezetből vettük, a „terminál effektus” nem volt jellemző, azaz az egészséges állapotra jellemző fonalrendszer meg sem jelent, vagy csak részben találkoztak a fonalak.It is an object of the present invention to recognize that, in dried blood serum, and preferably in physiologically dried cellular agglomerates, body fluids, and tissues, a characteristic supernatant can be observed by optical means. For these yarns, the so-called. It is a "terminal effect" whose endpoints in the microscopic image always reach, or approach as quickly as possible, another point of another yarn if the sample is from a healthy organism. In the case where the sample was taken from a tumorous organism, the "terminal effect" was not characteristic, i.e. the healthy system yarns did not appear or only partially met the yarns.

A terminál effektus jellegzetességét és kialakulását az alábbiakban vérszérum esetében ismertetjük. Természetes azonban, hogy amennyiben egyéb testnedvekből, sejtagglomerátumokból vagy szövetekből készítünk preparátumot, a kép hasonló lesz.The nature and development of the terminal effect is described below for blood serum. However, when prepared from other body fluids, cellular agglomerates, or tissues, the image will be similar.

A találmányt a csatolt rajzok részletesen ismertetik.The invention is described in detail in the accompanying drawings.

Az 1. ábra beszárított vérszérum elektronmikroszkóppal készített képe.Figure 1 is an electron microscope image of dried blood serum.

A 2. ábra egészséges emberi vérszérum-preparáturnának pásztázó elektronmikroszkópos felvétele.Figure 2 is a scanning electron microscope image of a healthy human blood serum preparation.

A 3. ábra tumoros beteg beszáradt vérszérum-preparátumának pásztázó elektronmikroszkópos képe.Figure 3 is a scanning electron microscope image of a dried blood serum preparation of a tumor patient.

A 4. ábra egészséges ember vérszérum-preparátumának fonalszerkezeti képe.Figure 4 is a structure view of the blood serum preparation of a healthy human.

Az 5. ábra tumoros beteg vérszérum-preparátumának fonalszerkezeti képe.Figure 5 is a structure view of a blood serum preparation of a tumor patient.

A 6. ábra egészséges ember vérszéruni-képéből kiemelt terminál-effektust mutatja.Figure 6 shows a terminal effect highlighted from a blood serum image of a healthy human.

A 7. ábra egészséges ember Ascytes folyadék-preparátumának képe.Figure 7 is an image of a liquid preparation of Ascytes from a healthy human.

A 8. ábra tumoros szervezetből származó Ascytes folyadék preparátumának felvétele.Figure 8 is an uptake of Ascytes fluid preparation from a tumorous body.

Amennyiben vénásan levett natív vért állni hagyunk, és ülepedés utáii a szérumot üveglemezre cseppentjük, kíméletes beszárítás után jellegzetes képet kapunk. Az 1. ábra szerinti megrepedezett prepaiálumban érdekes képződményeket, fonalakat észlelhetünk.Leaving the venous blood collected on the vein to stand and dropping the serum on a glass slide after settling gives a characteristic image after gentle drying. In the cracked preparation of Fig. 1, interesting formations, yarns can be observed.

Megállapítottuk, hogy az egészséges, illetve tumoros szervezetből vett vérszérum beszáradási képe alapvetően különbözik. A 2. ábra egészséges ember, a 3. ábra pedig lOSsziiidtilalú daganatban szenvedő beteg beszaladt vél szérum-preparátumát mutatja, pásztázó elektronmikroszkópos felvételen. Az ábrákon látható repedések mindig a fonalak mentén jönnek létre; amennyiben a preparátum felső rétegét eltávolítjuk, a 4. és 5. ábra szerinti fonalszerkezetet kapjuk. A 4. ábrán jól látható, hov a fonalak egymással szoros kapcsolatban vaunak, azaz a tcrminál-effeklus, melyet a 6. ábra részletesen is szemléltet, létrejött. Az 5. ábra szerint terminál effektus nincs, a fonalak ki sem alakultak, ez egyértelműen a malignus folyamatok jelenlétére utal.It was found that the drying pattern of blood serum taken from healthy and tumorous body is fundamentally different. Figure 2 is a scanned electron microscopy image of a healthy human and Figure 3 of a run-down blood serum preparation of a patient with lOSidideal malignancy. The cracks in the figures always occur along the yarns; if the upper layer of the preparation is removed, the yarn structure of Figures 4 and 5 is obtained. Figure 4 clearly shows where the yarns are in close contact with each other, i.e. the tcrminal effect, illustrated in detail in Figure 6, has been established. As shown in Figure 5, there is no terminal effect, no threads have developed, which clearly indicates the presence of malignant processes.

Hasonló képekhez juthatunk, ha nem beszárított vérszéruin-preparál irmot, hanem egészséges, illetve tumoros szervezetből származó Ascytes-folvadék preparátumát vizsgáljuk, melyet a 7., illetve 8. ábra szemléltet. E képeken jól látható, hogy az egészséges sejtek esetén azok között a fonalak révén kapcsolat jön létre, melynek mentén kialakulnak a jellemző repedések (7. ábra). A 8. ábra egyértelműen mutatja, hogy a tcrminál-cITcklus hiányzik, azaz a szervezetben malignus folyamat játszódik le.Similar images can be obtained by examining an ascytes fluid from a healthy or tumorous body, as shown in Figures 7 and 8, rather than a dried blood serum preparation. These images clearly show that, in healthy cells, they are bonded by the filaments along which the characteristic cracks develop (Figure 7). Figure 8 clearly shows that the tcrminal cITcklus is absent, meaning that a malignant process occurs in the body.

Fenti tapasztalataink alapján dolgoztuk ki a találmány szerinti eljárást (MTA módszer), melynek lényege, hogy beszárított vérszérum vagy testnedvpreparátumot, illetve célszerűen fiziológiás körülmények között bcszáiított sejtagglomerátum- vagy szövet-preparátumot optikai vizsgálatnak vetünk alá, és a terminál-effektus legalább részleges hiányából állapítjuk meg a kóros állapotot.Based on our experience above, the method according to the invention (MTA method) has been developed, which involves the optical examination of dried blood serum or bodily fluid or, preferably, physiologically prepared cell agglomerate or tissue preparation, and at least partial lack of terminal effect. the pathological condition.

A preparátumokat általában önmagában ismert módszerekkel előállíthatjuk. Célszerű azonban a preparátumokat kontrollált körülmények között készíteni, inért így az eljárás standardizálható és a különböző minták egyszerűbben összehasonlíthatók.The preparations can generally be prepared by methods known per se. However, it is desirable to prepare the preparations under controlled conditions so that the procedure can be standardized and the different samples more easily compared.

Vérminták vizsgálata esetén célszerűen úgy járunk el, hogy natív vért veszünk, a vérszérumot célszerűen ülepítéssel, illetve centrifugálással állítjuk elő, majd nedvesítő-, illetőleg nem-iicdvcsítő hordozóra cseppentjük. Jó preparátumot kapunk, ha célszerűen 1—20 pl cseppet viszünk fel, illetve körülbelül hasonló mennyiséget tárgylemezen elfolyatunk.When testing blood samples, it is desirable to collect native blood, preferably to prepare the blood serum by sedimentation or centrifugation and then drop it onto a humidifying or non-leaching support. A good preparation is achieved by applying a drop of 1 to 20 µl or by flushing approximately the same amount on a slide.

A folyadék szárítását általában kontrollált hőmérsékleten, célszerűen 20-50 °C-on végezzük, állandó páratartalom és nyomás biztosítása mellett. A beszárítás történhet vákuum alkalmazásával, célszerű azonban atmoszférikus nyomáson dolgozni. Végezhetjük a szárítást a kritikus pontra lörlcnő hűtéssel, melynek során a mintában levő víz mikrokristályos formában válik ki, és a repedések szintén a fonalak mentén jönnek létre.The liquid is generally dried at a controlled temperature, preferably 20-50 ° C, with constant humidity and pressure. The drying may be carried out under vacuum, but it is preferable to work at atmospheric pressure. Drying can be performed by cooling to a critical point, whereby the water in the sample is microcrystalline and the cracks are also formed along the yarns.

A preparátumok értékelése a terminál-effektus alapján történik. Egészségesnek akkor tekinthető a szervezet, ha a terminál-effektusa minta teljes egészében megtalálható. Amennyiben a terminál-effektus csak részben is hiányzik, az kóros jelenségre utal.Preparations are evaluated based on the terminal effect. A healthy body can be considered healthy if its terminal effect pattern is completely present. If the terminal effect is only partially missing, it indicates an abnormal condition.

Az értékelés legegyszerűbb módon vizuális úton történik, lehetséges azonban speciális berendezések,The simplest way to evaluate is by visual means, but special equipment is possible,

-2191 105 illetve módszerek alkalmazása is, melyek megkönnyítik az azonosítást. Néhány ilyen módszer az Urbancsek-algoritinus, Faurier-transzformációs algoritmus módszer, zárt gráfok módszere, fekete/fehér/fekete, illetőleg fordított átmenetek számlálása, illetve ezek közül bármelyek kombinációja.-2191 105 and methods that facilitate identification. Some of these methods are Urbans algorithm, Faurier transformation algorithm method, closed graph method, black / white / black or inverse transitions counting, or any combination of these.

A találmány szerinti diagnosztikai módszert 1000-nél több főből álló csoport vizsgálatán ellenőriztük, és az igen jó találati aránnyal hatékonynak bizonyult a legkülönbözőbb típusú tumoros esetek meghatározására. Nagy előnye, hogy igen gyors, és így igen alkalmas szűrővizsgálatok lefolytatására, terápia nyomonkövetésére, illetve tumorellenes vegyületek kutatásánál, az anyagok hatékonyságának in vitro gyors ellenőrzésére.The diagnostic method of the present invention has been tested in a population of more than 1000 individuals and has been found to be effective in detecting a variety of tumor types with a very good hit rate. It has the great advantage of being very fast and thus well suited for screening tests, monitoring of therapy, and in the research of antitumor compounds for rapid verification of the efficacy of substances in vitro.

A találmány szerinti eljárással 1164 főből álló csoportot vizsgáltunk. Ennek során a vérszérum beszáradási kép mintázatát hasonlítottuk össze klinikai szövettani diagnózissal. Az eredmények értékelésénél az eseteket három csoportba osztottuk (I. táblázat).A group of 1,164 persons was studied using the method of the invention. In this study, the pattern of serum desiccation was compared with a clinical histological diagnosis. In evaluating the results, the cases were divided into three groups (Table I).

/, táblázat/, spreadsheet

Csoportok Teljes MTA létszám + Groups Complete MTA headcount + MTA MTA MTA teljes létsz MTA full existence szövettanilag igazolt rákos betegek histologically confirmed cancer patients 383 383 358 358 . 25 . 25 94% 94% egészséges kontroll csoport (25 év alattiak) healthy control group (under 25) 242 242 12 12 230 230 95% 95% vegyes csoport (klinikailag még nincs diagnosztizált rák, de nem kizárt ennek lehetősége) mixed group (not yet clinically diagnosed with cancer) 539 539 163 163 376 376 70% 70%

Az első csoportba azok a betegek kerültek, akiknek a szövettani vizsgálat alapján rosszindulatú daganatuk van. Az MTA vizsgálat a 383 esetből 358 esetben jelezte a malignitást (94 %). A II. táblázat mu5 tatja a különböző rosszindulatú daganatos betegségek számszerű megoszlását:The first group included patients with malignant tumors. MTA showed 358 out of 383 cases (94%). II. Table 5 shows the numerical distribution of the various malignancies:

A második, ún. kontroll csoportba egészséges, fiatal 25 év alatti emlxrclt kerüllek. A beszáradt vérsavó cseppek mintázata alapján a csoport 242 páclcn10 séből 230-at találtunk mi is egészségesnek (95 %). A harmadik, ún. vegyes csoportba különböző életkorú emberek kerültek (25 és és 85 év között), akiknek más, nem rákos betegségük volt (májgyulladás, tüdőgyulladás, magas vérnyomás, cukorbcteg15 ség, jóindulatú daganatos betegek stb.). Az 539 esetből az MTA vizsgálat 376 esetet mondott negatívnak (70 %). Ennél a csoportnál a klinikai diagnózis még nem mutatott ki rosszindulatú daganatos betegséget; de nem kizárt annak lehetősége. Az első két csoportnál kapott eredmények alapján úgy véljük, hogy az MTA módszer nagyon korai stádiumban jelzi a nialignus folyamatot, akkor, amikor még nincsenek komolyabb tünetek, és más klinikai módszerekkel még nem, illetve csak bizonyos esetekben detektálható a resszindulatú daganat. A csoport tagjai közül, a beszáradási kép alapján pozitívnak mondott esetek közül 7 cselben az utólag elvégzed klinikai vizsgálatok igazolták a rosszindulatú daganatot, míg a többiek további megfigyelés alatt állnak.The second, the so-called. in the control group, I included healthy young less than 25 years of age. Based on the pattern of dried serum droplets, 230 of the 242 marrow specimens in the group were found to be healthy (95%). The third, the so-called. a mixed group of people of different ages (25 to 85 years) with other non-cancerous diseases (hepatitis, pneumonia, hypertension, diabetes, benign cancer patients, etc.). Out of 539 cases, the MTA test reported 376 cases (70%) as negative. Clinical diagnosis in this group has not yet revealed malignancy; but the possibility is not excluded. Based on the results obtained in the first two groups, we believe that the MTA method is a very early indicator of the nialignal process, when no more serious symptoms are present, and in some cases no resurgent cancer can be detected. Of the group members, 7 of the cases reported positive for dehydration were retrospectively confirmed by clinical trials, while the others were undergoing follow-up.

II. táblázatII. spreadsheet

Rosszindulatú daganatos betegségek Malignant neoplasms Esetek száma Number of cases leukémia leukemia 74 74 Malignus lymphomák Malignant lymphomas 93 93 Fej és nyak rák Head and neck cancer 9 9 Tüdő rák Lung cancer 17 17 Emlő rák Breast cancer 41 41 Emésztőrendszer daganatai Tumors of the digestive system 48 48 Női nemi szervek daganatai Female genital tumors 12 12 Férfi nemi szervek daganatai Male genital tumors 56 56 Agydaganat Brain Tumor 7 7 Vizelct-elválasztó rendszer daganatai Tumors of the urinary tract system 20 20 Bőr rák Skin cancer 6 6

Szabadalmi igénypontokClaims

Claims

1. A method for the detection of malignant malignancies, including the detection of cancers, including leukemia, by drying a blood serum or bodily fluid preparation, or a physiologically dried cell agglomerate or

45 tissue samples were subjected to optical examination and the condition was evaluated for at least partial lack of terminal effect. (Priority: March 21, 1984)

2. The method of claim 1, wherein dried blood serum is used.

(Priority: January 12, 1984)

The process of claim 1, wherein the Ascylcs slurry is used.

₅₅ (Priority: March 21, 1984)

8 pieces of figure