HK40112910A

HK40112910A - 用於治疗神经肌肉病症的抗musk抗体

Info

Publication number: HK40112910A
Application number: HK62024100884.1A
Authority: HK
Inventors: 鲁兰·瓦努瓦特; 卡伦·西伦斯; 理查德·罗比泰尔; 丹妮尔·阿布尔; 劳伦斯·雷诺; 史蒂文·J·布尔登
Original assignee: 阿根思有限公司; 蒙特利尔大学; 纽约大学
Priority date: 2022-01-28
Filing date: 2023-01-27
Publication date: 2025-01-28

Description

用于治疗神经肌肉病症的抗MuSK抗体

相关申请

本申请要求2022年5月13日提交的美国临时专利申请序列No.63/364,685和2022年1月28日提交的EP申请No.22154118.8的优先权，其全部公开内容在此通过引用并入本文。

序列表的引用

本申请包含以ST.26格式以电子方式提交并且在此通过引用整体并入的序列表(所述ST.26副本创建于2023年1月27日，命名为“196198_SL.XML”并且大小为364,704字节)。

技术领域

本发明涉及抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其用于在人对象中治疗神经肌肉病症，例如ALS(amyotrophic lateral sclerosis)(肌萎缩侧索硬化)。在一个实施方案中，将该抗体或其抗原结合片段与抗胆碱能化合物组合。

背景技术

ALS是成年发作的非细胞自主性神经肌肉/神经退行性病症，其导致上和下运动神经元(motor neuron，MN)的进行性丧失，导致2至5年内逐渐瘫痪和死亡。神经肌肉接头(Neuromuscular junction，NMJ)去神经是ALS的标志[1]，并且存在于ALS的数种疾病模型[2-6]中，甚至在MN死亡之前[1,3]。

目前批准的ALS治疗(利鲁唑(Riluzole))通过将寿命延长约三个月仅使20％的ALS患者受益。利鲁唑对肌肉功能的作用非常有限。此外，ALS被认为是遗传异质性疾病，可能代表具有不同潜在病理状态的数个亚组。由于潜在的疾病机制不同，目前没有可用的治疗，患者定制的治疗也不可能帮助所有ALS患者。

因此，仍然需要用于ALS和其他类似ALS的疾病(“ALS样疾病”)的新的治疗。

附图说明

图1组合处理在SOD1G37R小鼠中改善运动功能。ARGX-119处理在P400(疾病发作前或无症状)开始，并且达非那新处理在约P425(疾病发作)开始，并持续至处死(约P520)。A)描绘转轮加速之后用于评估运动功能、协调和平衡的转棒仪装置的图。B)约400日龄至520日龄的经ARGX-119抗体(大灰色圆圈)、经ARGX-119+达非那新组合处理来处理的小鼠(黑色三角形)、经达非那新处理的小鼠(小灰色圆圈)与经双安慰剂处理的小鼠(灰色方块)落在旋转棒上的等待时间(秒)。C)用于监测小鼠前肢和后肢的整体力量的握力计。D)处理过程期间握力测量值的演变，各组从约P400至P520。E)处理过程期间体重测量值的演变，各组从约P400至P520。*p<0.05，***p<0.001，****p<0.0001。单因素ANOVA和多重t检验。

图2处理改善EDL肌肉的收缩特性。A)用于引起肌肉收缩的神经和肌肉刺激电极和肌力传感器设置(set up)的图。原始数据的实例示出了由神经或肌肉刺激引发的肌肉收缩，用于计算收缩能力比率。B至C)由来自经ARGX-119抗体(灰色圆圈)和经ARGX-119+达非那新组合处理来处理的小鼠(黑色三角形)与经双安慰剂处理的小鼠(灰色正方形)在不同频率(5Hz至300Hz)的神经刺激(B)或肌肉刺激(C)产生的EDL肌肉的峰值抽搐力(twitchforce)。D)示出以百分比表示的EDL肌肉收缩能力比率的平均值±SEM的柱状图，表示神经刺激与肌肉刺激(刺激频率为5Hz至100Hz)产生的峰值力的比例。E)示出来自经ARGX-119抗体、经组合处理和经安慰剂处理小鼠的EDL肌肉重量的平均值±SEM的直方图。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。重复单因素ANOVA和多重t检验。

图3组合处理改善比目鱼肌的收缩特性。A至B)由经ARGX-119抗体(灰色圆圈)和经ARGX-119+达非那新组合处理来处理的小鼠(黑色三角形)与经双安慰剂处理的小鼠(灰色正方形)在不同频率(5Hz至300Hz)的神经刺激(A)或肌肉刺激(B)产生的比目鱼(Soleus，SOL)肌的峰值抽搐力。C)示出以百分比表示的SOL肌肉收缩能力比率的平均值±SEM的柱状图，表示神经刺激与肌肉刺激(刺激频率为5Hz至100Hz)产生的峰值力的比例。D)示出来自经ARGX-119抗体、经组合处理和经安慰剂处理小鼠的EDL肌肉重量的平均值±SEM的直方图。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。重复单因素ANOVA和多重t检验。

图4组合处理保持了肌肉疲劳特性。A)示出EDL疲劳方案的图，该方案由在120Hz下引发300ms(每秒1轮)的10个刺激的18次训练(train)组成。10回中有9回使用单独的神经刺激，并且每10次刺激将肌肉刺激叠加到神经刺激上。疲劳方案之后是30分钟的恢复期。B至C)对于EDL肌肉的神经刺激(B)和神经+肌肉(C)，疲劳方案和恢复期期间的峰值收缩力表示为疲劳方案之前产生的初始基线力的百分比。注意，与经双处理ARGX-119+达非那新的动物(黑色三角形)和经ARGX-119抗体处理(灰色圆圈)相比，经安慰剂处理(灰色正方形)的对疲劳的抗性更高。这说明了正常快速颤搐肌肉特性的显著改变，该特性通常是高度易疲劳的。D至E)对于SOL肌肉的神经刺激(D)和神经+肌肉(E)，疲劳方案和恢复期期间的峰值收缩力表示为疲劳方案之前产生的初始基线力的百分比。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。重复单因素ANOVA和多重t检验。

具体实施方式

一般定义

仅提供以下术语或定义来帮助理解本发明。除非本文中明确定义，否则本文中使用的所有术语具有与其对于本发明领域的技术人员来说相同的含义。对于本领域的定义和术语，实践者特别地参考Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第二版,Cold Spring Harbor Press,Plainsview,New York(1989)；和Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology(Supplement 47),John Wiley&Sons,NewYork(1999)。本文中提供的定义不应被解释为具有小于本领域普通技术人员所理解的范围。

除非另外指明，否则对技术人员将明显的是，可以以本身已知的方式进行并且已经进行了未具体详细描述的所有方法、步骤、技术和操作。例如，再次参考标准手册、上面提及的一般背景技术以及其中引用的另一些参考文献。

除非上下文另外明确指出，否则本文中使用的没有数量词修饰的名词表示一个/种和更多个/种。

本文中使用的术语“包含”与“包括”或“含有”同义，并且是包括性的或开放式的，而不排除另外的非记载成员、化合物、产品、要素或方法步骤。在产品或组合物(“基本上由......组成的产品”或“基本上由......组成的组合物”)的上下文中使用的表述“基本上由......组成”意指可存在另外的分子，但这样的分子不改变所述产品或组合物的特征/活性/功能。例如，如果组合物本身将表现出与抗体之一或抗体片段之一相似的特征/活性/功能，则组合物可基本上由抗体或抗体片段组成。

通过端点对数值范围的列举包括在相应范围内纳入的所有数字和分数，以及所列举的端点。

本文中涉及例如参数、量、时距(temporal duration)等可测量值时使用的术语“约/大约”意在涵盖指定值的或者相对于指定值的+/-10％或更小、优选+/-5％或更小、更优选+/-1％或更小、并且还更优选+/-0.1％或更小的变化，在此范围内这样的变化适合于在所公开的发明中实施。应理解，修饰语“约”所指的值本身也被具体地且优选地公开。

术语‘病症’和‘疾病’在本文中可互换使用。

本文中使用的氨基酸残基将通过它们的全名或根据标准的三字母或单字母氨基酸代码来表示。

本文中使用的术语“多肽”或“蛋白质”可互换使用，并且是指任何长度的氨基酸(其可包括编码和非编码氨基酸、经化学或生物化学修饰或衍生的氨基酸)的聚合物形式和具有经修饰肽骨架的多肽。“肽”也是氨基酸的聚合物，其长度通常多至50个氨基酸。多肽或肽由氨基酸序列表示。

本文中使用的术语“核酸分子”、“多核苷酸”、“多核酸”、“核酸”可互换使用，并且是指任何长度的核苷酸(脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物)的聚合物形式。核酸分子由核酸序列表示，其主要特征在于其碱基序列。多核苷酸可具有任何三维结构，并且可以进行任何已知或未知的功能。多核苷酸的非限制性实例包括基因、基因片段、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA、核糖体RNA、核酶、cDNA、重组多核苷酸、分支多核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离的DNA、控制区、任何序列的分离RNA、核酸探针和引物。核酸分子可以是线性的或环状的。

本文中使用的术语“同源性”表示来自相同或不同分类单元的两个大分子之间，特别是两个多肽或多核苷酸之间的至少二级结构同一性或相似性，其中所述相似性归因于共同祖先。因此，术语“同源物”表示具有所述二级和任选三级结构相似性的如此相关的大分子。为了比较两个或更多个核苷酸序列，第一核苷酸序列与第二核苷酸序列之间的“序列同一性(百分比)”可以使用本领域技术人员已知的方法来计算，例如通过将第一核苷酸序列中与第二核苷酸序列中对应位置处的核苷酸相同的核苷酸数量除以第一核苷酸序列中核苷酸的总数并乘以100％，或者通过使用用于序列比对的已知的计算机算法，例如NCBIBlast。在确定两个氨基酸序列之间的序列相似性的程度时，本领域技术人员可以考虑所谓的“保守”氨基酸替换，其通常可以描述为其中一个氨基酸残基被具有相似化学结构的另一氨基酸残基替换并且对多肽的功能、活性或其他生物学特性影响很小或基本没有影响的的氨基酸替换。可能的保守氨基酸替换已在本文中例示。如果氨基酸序列和核酸序列在其整个长度上具有100％序列同一性，则称它们为“完全相同”。

在本申请通篇，每次提到特定的氨基酸序列SEQ ID NO(以SEQ ID NO:Y为例)，可以将其替换为：包含与氨基酸序列SEQ ID NO:Y具有至少80％序列同一性或相似性的氨基酸序列的多肽。在本申请通篇，措辞“与另一序列至少X％相同的序列”可以替换为“与另一序列具有至少X％序列同一性的序列”。

在另一些优选的实施方案中，本文中所述的每个氨基酸序列凭借其分别与给定氨基酸序列的同一性百分比(至少80％)而分别与该给定的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的同一性或更高的同一性。在一个优选的实施方案中，序列同一性通过比较本文中所标识的序列的全长来确定。在另一些优选的实施方案中，本文中所述的每个氨基酸序列凭借其分别与给定氨基酸序列的相似性百分比(至少80％)而分别与该给定的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的相似性或更高的相似性。在一个优选的实施方案中，序列相似性通过比较本文中所标识的序列的全长来确定。除非本文中另有说明，否则与给定SEQ ID NO的同一性或相似性意指基于所述序列的全长(即在其全长上或作为整体)的同一性或相似性。

“序列同一性”在本文中定义为两个或更多个氨基酸(多肽或蛋白质)序列或者两个或更多个核酸(多核苷酸)序列之间的关系，如通过比较序列所确定的。两个氨基酸序列之间的同一性优选地通过评估它们在如本文中所标识的整个SEQ ID NO或其部分内的同一性来确定。其部分可以意指SEQ ID NO长度的至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％。

在本领域中，“同一性”还意指氨基酸序列之间的序列关联性程度，这视情况而定，如由这样的序列的串之间的匹配所确定。两个氨基酸序列之间的“相似性”通过比较一个多肽的氨基酸序列及其保守氨基酸代替物与第二多肽的序列来确定。“同一性”和“相似性”可以很容易地通过已知方法计算，包括但不限于以下中所描述的那些：

ComputationalMolecular Biology，Lesk,A.M.，ed.，Oxford University Press，New York，1988；Biocomputing：lnfo rmatics and Genome Projects，Smith，D.W.，ed，Academic Press，New York，1993；Computer Analysis of Sequence Data，Part l，Griffin，A.M.，and Griffin,H.G.，eds，Humana Press，New Jersey，1994；SequenceAnalysis in Molecular Biology，von Heine，G.，Academic Press，1987；和SequenceAnalysis Primer，Gribskov,M.and Devereux，J.，eds，M Stockton Press，New York，1991；和Carillo，H.，and Lipman，D.，SIAM J.Applied Math.，48：1073(1988).

确定同一性的优选方法被设计为在测试的序列之间给出最大匹配。确定同一性和相似性的方法被编入公开可用的计算机程序中。确定两个序列之间的同一性和相似性的优选计算机程序方法包括例如GCG程序包(Devereux，J.，et al.，Nucleic Acids Research12(1)：387(1984))、BestFit、FASTA、BLASTN和BLASTP(Altschul，S.F.et al.，J.Mol.Biol.215：403-410(1990))、EMBOSS Needle(Madeira，F.，et al.，NucleicAcidsResearch 47(W1)：W636-W641(2019))。BLAST程序可从NCBI和其他来源公开获得(BLASTManual，Altschul，S.，et al.，NCBINLM NIH Bethesda，MD 20894；Altschul，S.，et al.，J.Mol.Biol.215：403-410(1990))。EMBOSS程序可从EMBL-EBI公开获得。公知的SmithWaterman算法也可用于确定同一性。EMBOSS Needle程序是优选使用的程序。

用于多肽序列比较的优选参数包括以下：算法：Needleman and Wunsch，J.Mol.Biol.48(3)：443-453(1970)；比较矩阵：BLOSUM62，其来自Henikoff and Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89：10915-10919(1992)；空位开放罚分：10，和空位延伸罚分：0.5。可用于这些参数的程序作为来自EMBL-EBI的EMBOSS Needle程序可公开获得。前述参数是蛋白质全局配对序列比对的默认参数(以及对末端空位没有罚分)。

用于核酸比较的优选参数包括以下：算法：Needleman and Wunsch,J.Mol.Biol.48:443-453(1970)；比较矩阵：DNAfull；空位开放罚分：10；空位延伸罚分：0.5。可用于这些参数的程序作为来自EMBL-EBI的EMBOSS Needle程序可公开获得。前述参数是核苷酸序列的全局配对序列比对的默认参数(以及对末端空位没有罚分)。

本文中使用的术语‘病症’和‘疾病’可互换使用。

本文中还提供了这样的一些实施方案，其中本文中所述的任何实施方案可以与任何一个或更多个另外的实施方案组合，只要该组合不是相互排斥的。

抗MuSK抗体及其抗原结合片段

本文中限定的所有抗体或其抗原结合片段均就其本身而言涵盖在本发明中。抗体或其抗原结合片段也用于在人对象中治疗神经肌肉病症。

本发明涉及基于抗MuSK抗体的分子，包括抗MuSK抗体、其表位结合结构域、其抗原结合片段和抗体衍生物(用于治疗神经肌肉疾病或病症)。在一个实施方案中，措辞“基于抗体的分子”可以由词语“抗体”或由表述“抗体或其功能片段”或由表述“抗体或抗原结合片段”替代。

术语“抗MuSK抗体”可由术语“MuSK抗体”替换。

任何基于抗MuSK抗体的分子，包括抗MuSK抗体、其表位结合结构域、其抗原结合片段和能够结合肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)的抗体衍生物，均涵盖在本发明内。在一个实施方案中，这样的抗MuSK抗体也能够激活MuSK的信号传导和/或磷酸化。本发明提供了这样的见解：这样的基于抗体的分子可用于治疗其中对象需要提高的MuSK信号传导或MuSK磷酸化的病症，例如神经肌肉疾病或病症。因此，在第一方面中，提供了用于在人对象中治疗神经肌肉病症的抗MuSK抗体或其抗原结合片段。

MuSK是受体酪氨酸激酶，其在骨骼肌中表达，并在形成和维持神经肌肉突触中具有关键的主要作用(Burden et al.,“The Role of MuSK in Synapse Formation andNeuromuscular Disease,”Cold Spring Harb.Perspect.Biol.5:a009167(2013)，其在此通过引用整体并入)。MuSK是单通道、120kDa跨膜蛋白，由包含三个Ig样结构域和一个卷曲(Fz)样结构域的胞外区域和包含近膜区域、激酶结构域和短胞质尾区的胞内区域构成(Jennings et al.,“Muscle-Specific trk-Related Receptor with a Kringle DomainDefines a Distinct Class of Receptor Tyrosine Kinases,”Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:2895-2899(1993)和Valenzuela et al.,“Receptor Tyrosine Kinase Specific forthe Skeletal Muscle Lineage:Expression in Embryonicmuscle,at theNeuromuscular Junction,and After Injury,”Neuron15:573-584(1995)，其在此通过引用整体并入)。MuSK磷酸化受到突触蛋白聚糖的刺激，突触蛋白聚糖是运动神经元提供的信号。一旦被激活，MuSK会刺激以下途径：(1)聚集和锚定AChR和对突触传递至关重要的另外的肌肉蛋白，(2)增强编码突触蛋白的基因在肌肉“突触核”中的转录，以及(3)促进逆行信号的产生，所逆行信号促进突触前分化和运动神经末梢与肌肉的附着。在不存在MuSK的情况下，神经肌肉突触无法形成(Burden et al.,“The Role ofMuSK in Synapse Formationand Neuromuscular Disease,”Cold Spring Harb.Perspect.Biol.5:a009167(2013)，其在此通过引用整体并入)。除了其在突触形成期间发挥的作用之外，还需要MuSK来维持成体突触(adult synapse)，因为成体肌肉中MuSK表达的抑制导致突触前和突触后分化的严重缺陷(Kong et al.,“Inhibition of Synapse Assembly in Mammalian Muscle in vivoby RNA Interference,”EMBO Rep 5:183-188(2004)和Hesser et al.,“SynapseDisassembly and Formation of New Synapses in Postnatal Muscle UponConditional Inactivation of MuSK,”Mol.Cell.Neurosci.31:470-480(2006)，其在此通过引用整体并入)。与小鼠中的这些发现一致，损害MuSK激酶活性或抑制MuSK下游信号传导步骤的突变会导致肌无力(CM)，其特征在于突触结构和功能缺陷，导致肌无力和疲劳(Beeson et al.,“Dok-7 Mutations Underlie a Neuromuscular JunctionSynaptopathy,”Science 313:1975-1978(2006)；Muller et al.,“PhenotypicalSpectrum of DOK7 Mutations in Congenital Myasthenic Syndromes,”Brain 130:1497-1506(2007)；和Selcen et al.,“A Compensatory Subpopulation of MotorNeurons in a Mouse Model of Amyotrophic Lateral Sclerosis,”J.Comp.Neurol.490:209-219(2008)，其在此通过引用整体并入)。

人MuSK的氨基酸序列具有以下SEQ ID NO:129的氨基酸序列。

MRELVNIPLVHI LTLVAFSGTEKLPKAPVITTPLETVDALVEEVATFMCAVESYPQPEISWTRNKILIKLFDTR

YSI RENGQLLTILSVEDSDDGIYCCTANNGVGGAVESCGALQVKMKPKITRPPINVKIIEGLKAVLPCTTMG

NPKPSVSWIKGDSPLRENSRIAVLESGSLRIH NVQKEDAGQYRCVAKNSLGTAYSKVVKLEVEVFARILRA

PESH NVTFGSFVTLHCTATGIPVPTITWI ENGNAVSSGSIQESVKDRVIDSRLQLFITKPGLYTCIATN KHGE

KFSTAKAAATISIAEWSKPQKDNKGYCAQYRGEVC NAVLAKDALVFLNTSYADPEEAQELLVHTAWNELK

VVSPVCRPAAEALLCNHIFQECSPGVVPTPIPICREYCLAVKELFCAKEWLVMEEKTHRGLYRSEMHLLS

VPECSKLPSM HWD PTACARLPH LDYN KEN LKTFPPMTSSKPSVDIPN LPSSSSSSFSVSPTYSMTVI ISIM

SSFAIFVLLTITTLYCCRRRKQWKNKKRESAAVTLTTLPSELLLDRLHPN PMYQRMPLLLNPKLLSLEYPR

NNIEYVRDIGEGAFGRVFQARAPGLLPYEPFTMVAVKMLKEEASADMQADFQREAALMAEFDNPNIVKLL

GVCAVGKPMCLLFEYMAYGDLN EFLRSMSPHTVCSLSHSDLSMRAQVSSPGPPPLSCAEQLCIARQVAA

GMAYLSERKFVHRDLATRNCLVGENMVVKIADFGLSRNIYSADYYKANENDAIPIRWMPPESIFYNRYTTE

SDVWAYGVVLWEIFSYGLQPYYGMAHEEVIYYVRDGNILSCPENCPVELYNLMRLCWS

KLPADRPSFTSIHRILERMCERAEGTVSV(SEQ ID NO:129)

根据本发明，本文中所述的基于MuSK抗体的分子与MuSK蛋白的卷曲(Fz)样结构域内的表位结合。MuSK的Fz样结构域具有如下所示的SEQ ID NO：130的氨基酸序列。

DNKGYCAQYRGEVCNAVLAKDALVFLNTSYADPEEAQELLVHTAWNELKVVSPVCRPAAEALLCNHIFQ

ECSPGVVPTPIPICREYCLAVKELFCAKEWLVMEEKTHRGLYRSEMHLLSVPECSKLPSMHWDPTACARL(SEQ ID NO：130)

本文中使用的术语“表位”是指能够与抗体结合的抗原决定簇。表位通常包含分子的表面基团例如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特征，以及特定的电荷特征。构象和非构象表位的区别在于与前者(而非后者)的结合在变性溶剂的存在下会丢失。表位可包含直接参与结合的氨基酸残基(也称为表位的免疫显性组分)和不直接参与结合的其他氨基酸残基，例如被特定抗原结合肽有效阻断的氨基酸残基(换句话说，氨基酸残基在特定抗原结合肽的“覆盖区(footprint)”内)。表位通常包含至少3个，并且更通常是至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个或更多个空间构象独特的氨基酸。

在一个实施方案中，根据本发明应用的MuSK抗体或抗原结合片段结合MuSK卷曲(Fz)样结构域。在一个实施方案中，相比于替代表位，MuSK抗体或抗原结合片段更频繁、更快速、更持久和/或以更强的亲和力或亲合力免疫特异性地结合SEQ ID NO：130的MuSK Fz样结构域序列中的表位。在一个实施方案中，本文中所述的基于MuSK抗体的分子与SEQ IDNO：130的任何2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个氨基酸残基免疫特异性地结合。本文中使用的术语“亲和力”、“特异性结合”、“结合”、“免疫特异性结合”、“结合活性”或“特异性结合活性”是指本文中所定义的抗体或抗体片段与SEQ ID NO:130的MuSK-Fz样结构域序列内的表位结合的程度。

在一个实施方案中，本文中公开的基于MuSK抗体的分子以对应于约10-7M或更小的KD的亲和力与MuSK Fz样结构域结合。例如，本文中公开的基于MuSK抗体的分子以对应于以下KD的亲和力与MuSK Fz样结构域结合，所述K_D为约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M、约10-12M或更低，当通过例如表面等离子体共振(surface plasmon resonance，SPR)技术在Biacore 3000仪器中(优选使用抗体作为配体和MuSK作为分析物)所确定的。本文中所公开的基于MuSK抗体的分子以对应于以下K_D的亲和力与MuSK Fz样结构域结合，所述K_D是所述基于MuSK抗体的分子与非特异性抗原(例如，牛血清白蛋白、酪蛋白等)结合的亲和力至少10倍低，例如至少100倍低、例如至少1,000倍低、例如至少10,000倍低，例如至少100,000倍低。亲和力降低的量取决于抗体的KD，所以当抗体的KD非常低时(即抗体是高度特异性的)，那么对抗原的亲和力的量比对非特异性抗原的亲和力低，其可以是至少10,000倍低。本文中使用的术语“kd”(秒^-1或1/秒)是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率常数。该值也称为koff值。本文中使用的术语“ka”(M-1×秒-1或1/M)是指特定抗体-抗原相互作用的结合速率常数。本文中使用的术语“KD”(M)是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数并且通过将kd除以ka获得。本文中使用的术语“K_A”(M-1或1/M)是指特定抗体-抗原相互作用的缔合平衡常数并且通过将ka除以kd获得。

在一个实施方案中，本文中所述的基于MuSK抗体的分子对MuSK具有pH依赖性结合亲和力，这允许抗体再循环以增强抗原结合。例如，在一个实施方案中，缔合速率常数或解离速率常数在酸性与中性与碱性pH条件下可以不同。在一个实施方案中，与中性pH条件(例如约7.0至7.9的pH)相比，本文中所述的基于MuSK抗体的分子在酸性pH条件(例如<7.0的pH)下具有更高的解离速率常数。在一些实施方案中，与中性pH(约7.4的pH)相比，本文中所述的基于MuSK抗体的分子在酸性pH(例如，约5.5的pH)下具有2倍至3倍高的解离速率常数(即，降低的结合亲和力)。在一个实施方案中，基于MuSK抗体的分子与MuSK Fz样结构域结合，其亲和力在中性pH条件下比在酸性pH条件下更高。换言之，在一个实施方案中，基于MuSK抗体的分子与MuSK Fz样结构域结合，其解离速率在酸性pH条件下比在中性pH条件下更高。中性pH条件可以定义为包含7.0到7.9的pH。酸性pH条件可定义为小于7.0的pH。更高可意味着至少高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、250％、300％。具有这种pH依赖性解离特征的抗体在结合和激活之后但在溶酶体降解之前与抗原解离。一旦解离，抗体就会通过新生Fc受体被转运回循环并被释放以结合更多抗原。

在一些实施方案中，本发明的MuSK抗体与Fz样结构域内它们各自的表位的结合激活了MuSK信号传导。特别地，当本发明的MuSK抗体结合MuSK Fz样结构域中它们各自的表位时，这种结合诱导了MuSK磷酸化和激活。相对于突触蛋白聚糖激活诱导的MuSK磷酸化，本发明的MuSK抗体诱导约50％至约100％的MuSK磷酸化(如在例如C2C12磷酸化测定中测量的)。在一个实施方案中，本发明的MuSK抗体诱导约55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％95％的MuSK磷酸化(相对于突触蛋白聚糖激活诱导的MuSK磷酸化)。在一个实施方案中，本发明的基于MuSK抗体的分子在MuSK结合时诱导约90％至约100％的MuSK磷酸化(相对于由突触蛋白聚糖激活诱导的MuSK磷酸化)。MuSK的磷酸化可以使用技术人员已知的技术例如western印迹或C2C12肌管磷酸化测定来评估。这样的激活MuSK信号传导(即诱导MuSK的二聚化，诱导MuSK酪氨酸磷酸化)的抗体是激动剂抗体。

在一些实施方案中，本发明的MuSK抗体，即与MuSK的Fz-结构域结合的MuSK抗体，不干扰(即，不阻断、阻碍、抑制或减少)天然配体结合和MuSK的刺激。在一些实施方案中，MuSK抗体与其天然配体(即突触蛋白聚糖)共刺激MuSK激活，以产生累加的激活效应，例如MuSK磷酸化。因此，在一些实施方案中，本发明的MuSK抗体增强由天然配体结合诱导的天然MuSK激活，即磷酸化。这样的MuSK抗体是激动剂抗体。在一些实施方案中，本发明的抗体与天然配体组合，将MuSK激活(即MuSK磷酸化)至>100％的内源性激活水平，例如至少110％、130％、150％、200％的内源性激活水平。

因此，在一个实施方案中，本发明的基于MuSK抗体的分子的活性包括：(i)与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)的表位结合，所述表位存在于SEQ ID NO:130的MuSK卷曲(Fz)样结构域序列中，其中所述基于抗体的分子在与其表位结合之后诱导MuSK磷酸化，和/或(ii)与MuSK Fz样结构域的结合不阻断、阻碍或抑制天然或内源性MuSK配体诱导的磷酸化，并且可以增强所述天然或内源性MuSK配体诱导的磷酸化，以及(iii)与MuSK Fz样结构域的结合以在中性pH条件下比在酸性pH条件下更高的亲和力发生。所有这些特征已在本文中进一步定义。

基于抗体的分子包括但不限于抗体、完整抗体、完整抗体的表位结合片段、完整抗体的抗原结合片段和抗体衍生物。抗体的表位结合片段可以通过亲本抗体的实际片段化获得(例如，Fab或(Fab)2片段)。或者，表位结合片段是包含这样的亲本抗体的氨基酸序列的一部分的氨基酸序列。如本文中使用的，如果分子通过亲本抗体或其部分的实际化学修饰获得，或者如果其包含的氨基酸序列为与这样的亲本抗体或其相关部分的氨基酸序列基本相似(例如，与这样的亲本分子或这样的其相关部分的差异小于30％、小于20％、小于10％或小于5％，或与这样的亲本分子或其相关部分的差异在于10个氨基酸残基或少于10、9、8、7、6、5、4、3或2个氨基酸残基)，则称该分子为抗体(或其相关部分)的“衍生物”。

在一些实施方案中，本发明的基于抗体的分子是完整的免疫球蛋白或在重组细胞中具有编码这样的片段的表位结合333个酸的分子(参见例如，Evans et al.“RapidExpression Of An Anti-Human C5 Chimeric Fab Utilizing AVector That ReplicatesIn COS And 293Cells,”J.Immunol.Meth.184:123-38(1995)，其在此通过引用整体并入)。例如，编码F(ab')2片段的一部分的嵌合基因可以包括编码CH1结构域和重链铰链区的DNA序列，随后是翻译终止密码子以产生这样的截短的抗体片段分子。可以以与完整抗体相同的方式容易地筛选能够与所期望表位结合的合适片段以供使用。

抗体衍生物包括含有抗体的至少一个表位结合结构域的那些分子，并且通常使用重组技术形成。一种示例性抗体衍生物包括单链Fv(scFv)。scFv由Fv片段的两个结构域VL和VH形成，它们可以由不同的基因编码。使用重组方法，通过灵活的接头(通常具有约10、12、15或更多个氨基酸残基)将这样的基因序列或其编码cDNA连接起来，这使得它们能够制成单个蛋白质链，其中VL和VH缔合以形成单价表位结合分子(参见例如，Bird et al.“Single-Chain Antigen-Binding Proteins,”Science242:423-426(1988)；和Huston etal.“Protein Engineering Of Antibody Binding Sites:Recovery Of SpecificActivity In An Anti-Digoxin Single-Chain Fv Analogue Produced In Escherichiacoli,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85:5879-5883(1988)，其在此通过引用整体并入)。或者，通过使用不太短(例如，不少于约9个残基)的柔性接头以使不同单条多肽链的VL和VH能够缔合在一起，其可以形成对两个不同的表位具有结合特异性的双特异性抗体。

在另一个实施方案中，抗体衍生物是二价(divalent)或二价(bivalent)单链可变片段，其通过将两个scFv串联(即串联scFv)连接在一起或使它们二聚化形成双抗体来改造(Holliger et al.“‘Diabodies’:Small Bivalent And Bispecific AntibodyFragments,”Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)90(14),6444-8(1993)，其在此通过引用整体并入)。在又一个实施方案中，抗体是三抗体，即三价单链可变片段，其通过将三个scFv串联或以三聚体形式连接在一起以形成三抗体来改造。在另一个实施方案中，抗体是四个单链可变片段的四抗体。在另一个实施方案中，抗体是“线性抗体”，其是包含形成抗原结合区对的串联Fd区段对(VH-CH1-VH-CH1)的抗体(参见Zapata et al.Protein Eng.8(10):1057-1062(1995)，其在此通过引用整体并入)。在另一个实施方案中，抗体衍生物是微抗体，其由与CH3区偶联的单链Fv区(即，scFv-CH3)组成。

本文中还讨论了这些和本发明背景下的另一些有用抗体片段和衍生物。还应理解，除非另有说明，否则术语基于抗体的分子还包括抗体样多肽，例如嵌合抗体和人源化抗体，抗原结合片段以及保留与抗原特异性结合能力的抗体片段(表位结合片段、抗原结合片段或功能片段)，其由任何已知技术，例如酶促切割、肽合成和重组技术提供。

如本文中产生的抗体可以是任何同种型。本文中使用的“同种型”是指由重链恒定区基因编码的免疫球蛋白类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE或IgM)。同种型的选择通常由所期望的效应物功能指导，例如抗体依赖性细胞毒性(antibody-dependentcellular cytotoxicity，ADCC)诱导。示例性同种型是IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。本文中公开的MuSK抗体的特别有用的同种型包括IgG1和IgG2。

可以使用人轻链恒定区κ或λ。如果期望的话，可以通过已知方法转换本发明的MuSK抗体的类别。例如，原本是IgM的本发明的抗体可以被类别转换为本发明的IgG抗体。此外，类别转换技术可用于将一种IgG亚类转化为另一种，例如从IgG1转化为IgG2。因此，本发明的抗体的效应物功能可以通过同种型转换而改变为，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE或IgM抗体以用于多种治疗用途。

在一个实施方案中，将一个、两个或更多个氨基酸替换引入到IgG恒定区Fc区中以改变基于抗体的分子的效应物功能。例如，可将选自根据EU编号系统(https：// www.imgt.org/IMGTScientificChart/Hu IGHGnber.html#notes和Edelman,G.M.et al.,Proc.Natl.Acad.USA,63,78-85(1969).PMID:5257969)编号的氨基酸残基234、235、236、237、238、239、243、265、267、268、292、297、300、318、320、322、327、328、329、330、331、332和396的一个或更多个氨基酸替换为不同的氨基酸残基，使得基于抗体的分子对效应物配体具有改变的亲和力但保留抗原结合能力。在一个实施方案中，氨基酸234或235已经被替换。在另一个实施方案中，氨基酸234和235已经被替换。在本上下文中，人IgG恒定Fc区的优选氨基酸序列包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267。在本上下文中，例如，根据EU编号系统编号的氨基酸234和235对应于SEQ ID NO:266和267中的氨基酸7和8(即本文中公开的基于抗体的分子的人IgG恒定Fc区)，或者根据EU编号系统编号的氨基酸234和235对应于SEQ IDNO:268和270中的氨基酸238和239(即本文中公开的基于抗体的分子的人全长重链)。位置通常不同，因为可变区的长度不同，其在编号中引入了“δ”。在上面描述的情况下，该δ是4。因此，当鉴定SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267或SEQ ID NO:268或SEQ ID NO:270中的相应位置时，以上鉴定的根据EU编号系统编号的其他氨基酸位置(即236、237、238、239、243、265、267、268、292、297、300、318、320、322、327、328、329、330、331、332和396)也是如此。在所提交的申请中，可使用EU编号系统或使用给定Fc区(例如SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267)中或全长重链(例如SEQ ID NO:268或270)中的实际位置来指代氨基酸的位置。

因此，在一个实施方案中，将1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17个氨基酸替换引入到SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267中。在一个实施方案中，将1、2、3、4个氨基酸替换引入到SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267中。在一个实施方案中，将1或2个氨基酸替换引入到SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267中。因此，在一个实施方案中，将1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17个氨基酸替换引入到SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267中，并且所述替换在选自所述序列的根据EU编号系统编号的氨基酸残基234、235、236、237、239、243、267、292、297、300、318、320、322、328、330、332和396的氨基酸位置处引入。在一个实施方案中，将1或2个氨基酸替换引入到SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267中。在一个实施方案中，SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267的根据EU编号系统编号的氨基酸234或235已被替换。在另一个实施方案中，SEQ ID NO:266和267的根据EU编号系统编号的氨基酸234或235已被替换。

与之亲和力改变的效应配体可以是例如Fc受体或补体的C1组分。该方法在以下中进行了更详细的描述：美国专利No.5,624,821和5,648,260，其各自通过引用整体并入本文。在一个实施方案中，可将一个或更多个氨基酸替换引入到本文中所述基于抗体的分子的Fc区中以去除Fc区上潜在的糖基化位点，其可降低Fc受体结合(参见例如，Shields RLet al.,(2001)J Biol Chem 276:6591-604，其通过引用整体并入本文)。在一个实施方案中，与在其人IgG恒定Fc区中不具有任何氨基酸替换的抗体与效应物配体的结合相比，与相同配体的结合降低至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％，或不再可检测。

在第一实施方案中，以下突变中的一个或更多个已被引入到本文中所述的基于抗体的分子的恒定区中(均根据EU编号系统编号)：N297A替换；N297Q替换；L234A替换；L234D替换；L234E替换；L234G替换；L234H替换；L234F替换；L234K替换；L234Q替换；L234R替换；L234S替换；L234T替换；L235A替换；L235D替换；L235E替换；L235F替换；L235G替换；L235V替换；L235H替换；L235I替换；L235K替换；L235R替换；L235S替换；L235T替换；L235Q替换；L237A替换；S239D替换；E233P替换；L234V替换；C236缺失；G236E替换；G236R替换；G236K替换；G237A替换；P238A替换；F243L替换；D265A替换；S267E替换；H268A替换；R292P替换；Y300L替换；K322A替换；K322Q替换；A327Q替换；L328F替换；L328R替换；P329A替换；P329G替换；A330L替换；A330S替换；P331S替换；I332E替换或P396L替换。

在第二实施方案中，以下突变中的一个或更多个已被引入到本文中所述的基于抗体的分子的恒定区中(均根据EU编号系统编号)：L234A和/或L235A替换；L234A和L235A替换；L234A、L235A和P329G替换；L234A、L235A和G236K替换；L234A、L235A和G236E替换；L234A、L235A和G236R替换；L234A和G236R替换；L234A、L235S和G236R替换；L234A、L235T和G236R替换；L234D、L235H和G236R替换；L234D、L235K和G236R替换；L234D和G236R替换；L234D、L235Q和G236R替换；L234D、L235S和G236R替换；L234E、L235D和G236R替换；L234E、L235H和G236R替换；L234E、L235I和G236R替换；L234G、L235H和G236R替换；L234G、L235Q和G236R替换；L234G、L235S和G236R替换；L234H、L235I和G236R替换；L234H、L235S和G236R替换；L234K、L235Q和G236R替换；L234K、L235R和G236R替换；L234K、L235S和G236R替换；L234K、L235T和G236R替换；L234K、L235V和G236R替换；L234Q、L235A和G236R替换；L234Q、L235D和G236R替换；L234Q、L235H和G236R替换；L234Q和G236R替换；L234Q、L235Q和G236R替换；L234Q、L235R和G236R替换；L234Q、L235S和G236R替换；L234Q、L235T和G236R替换；L234Q、L235V和G236R替换；L234R、L235D和G236R替换；L234R、L235E和G236R替换；L234R、L235H和G236R替换；L234R、L235I和G236R替换；L234R、L235K和G236R替换；L234R和G236R替换；L234R、L235Q和G236R替换；L234R、L235R和G236R替换；L234R、L235T和G236R替换；L234S、L235E和G236R替换；L234S、L235G和G236R替换；L234S、L235H和G236R替换；L234S、L235I和G236R替换；L234S和G236R替换；L234S、L235R和G236R替换；L234S、L235T和G236R替换；L234S、L235V和G236R替换；L234T、L235A和G236R替换；L234T、L235D和G236R、L234T、L235H和G236R替换；L234T、L235I和G236R替换；L234T、L235K和G236R替换；L234T、L235Q和G236R替换；L234T、L235R和G236R替换；L234T、L235S和G236R替换；L234T、L235T和G236R替换；L234T、L235V和G236R替换；G236R和L328R替换；L234A、L235A、G237A、P238S、H268A、A330S和P331S替换；E233P、L234V、L235A、G326缺失、A327G、A330S和P331S替换；L235A和G236R替换；L235S和G236R替换。

在第三实施方案中，以下突变中的一个或更多个已被引入到本文中所述的基于抗体的分子的Fc区SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267中(均根据EU编号系统编号)：N297A替换；N297Q替换；L234A替换；L234D替换；L234E替换；L234G替换；L234H替换；L234F替换；L234K替换；L234Q替换；L234R替换；L234S替换；L234T替换；L235A替换；L235D替换；L235E替换；L235F替换；L235G替换；L235V替换；L235H替换；L235I替换；L235K替换；L235R替换；L235S替换；L235T替换；L235Q替换；L237A替换；S239D替换；E233P替换；L234V替换；C236缺失；G236E替换；G236R替换；G236K替换；G237A替换；P238A替换；F243L替换；D265A替换；S267E替换；H268A替换；R292P替换；Y300L替换；K322A替换；K322Q替换；A327Q替换；L328F替换；L328R替换；P329A替换；P329G替换；A330L替换；A330S替换；P331S替换；I332E替换或P396L替换。

在第四实施方案中，以下突变中的一个或更多个已被引入到本文中所述的基于抗体的分子的Fc区SEQ ID NO:266或者SEQ ID NO:267中(均根据EU编号系统编号)：L234A和/或L235A替换；L234A和L235A替换；L234A、L235A和P329G替换；L234A、L235A和G236K替换；L234A、L235A和G236E替换；L234A、L235A和G236R替换；L234A和G236R替换；L234A、L235S和G236R替换；L234A、L235T和G236R替换；L234D、L235H和G236R替换；L234D、L235K和G236R替换；L234D和G236R替换；L234D、L235Q和G236R替换；L234D、L235S和G236R替换；L234E、L235D和G236R替换；L234E、L235H和G236R替换；L234E、L235I和G236R替换；L234G、L235H和G236R替换；L234G、L235Q和G236R替换；L234G、L235S和G236R替换；L234H、L235I和G236R替换；L234H、L235S和G236R替换；L234K、L235Q和G236R替换；L234K、L235R和G236R替换；L234K、L235S和G236R替换；L234K、L235T和G236R替换；L234K、L235V和G236R替换；L234Q、L235A和G236R替换；L234Q、L235D和G236R替换；L234Q、L235H和G236R替换；L234Q和G236R替换；L234Q、L235Q和G236R替换；L234Q、L235R和G236R替换；L234Q、L235S和G236R替换；L234Q、L235T和G236R替换；L234Q、L235V和G236R替换；L234R、L235D和G236R替换；L234R、L235E和G236R替换；L234R、L235H和G236R替换；L234R、L235I和G236R替换；L234R、L235K和G236R替换；L234R和G236R替换；L234R、L235Q和G236R替换；L234R、L235R和G236R替换；L234R、L235T和G236R替换；L234S、L235E和G236R替换；L234S、L235G和G236R替换；L234S、L235H和G236R替换；L234S、L235I和G236R替换；L234S和G236R替换；L234S、L235R和G236R替换；L234S、L235T和G236R替换；L234S、L235V和G236R替换；L234T、L235A和G236R替换；L234T、L235D和G236R、L234T、L235H和G236R替换；L234T、L235I和G236R替换；L234T、L235K和G236R替换；L234T、L235Q和G236R替换；L234T、L235R和G236R替换；L234T、L235S和G236R替换；L234T、L235T和G236R替换；L234T、L235V和G236R替换；G236R和L328R替换；L234A、L235A、G237A、P238S、H268A、A330S和P331S替换；E233P、L234V、L235A、G326缺失、A327G、A330S和P331S替换；L235A和G236R替换；L235S和G236R替换。

在一个实施方案中，以下突变中的一个或更多个被引入到本文中所述的基于抗体的分子的Fc区SEQ ID NO:266或者SEQ ID NO:267中：L234A和/或L235A替换(均根据EU编号系统编号)。在一个实施方案中，以下突变被引入到本文中所述的基于抗体的分子的Fc区SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267中：均根据EU编号系统编号的L234A和L235A替换。该实施方案产生具有由SEQ ID NO:268或SEQ ID NO:270表示的重链的基于抗体的分子。

在本发明的背景下，这样的具有改变的、减弱的甚至消除的效应物功能的抗体是具有吸引力的。

在一个实施方案中，提供了抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其：-为激动剂MuSK抗体并且/或者

-效应物功能已被降低或消除。

该抗体或其抗原结合片段优选地用于在人对象中治疗神经肌肉病症。

在一个实施方案中，提供了抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其：-结合SEQ ID NO:129的MuSK卷曲(Fz)样结构域序列，

-为激动剂MuSK抗体并且/或者

-效应物功能已被降低或消除。

如本文中先前所述，通过将突变引入人IgG恒定Fc区中可获得降低或消除的效应物功能。优选地，将至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17个氨基酸替换引入到所述Fc区中。优选地，将至少1、2、3、4个氨基酸替换引入到所述Fc区中。

所述Fc区可包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267并且所述替换在选自所述序列的根据EU编号系统编号的氨基酸残基234、235、236、237、238、239、243、265、267、268、292、297、300、318、320、322、327、328、329、330、331、332和396的氨基酸位置被引入。

在一个实施方案中，所述Fc区可包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267并且所述替换在选自所述序列的根据EU编号系统编号的氨基酸残基234或235的氨基酸位置被引入。

在一个实施方案中，所述Fc区可包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267并且所述替换在选自所述序列的根据EU编号系统编号的氨基酸残基234和235的氨基酸位置被引入。

在一个实施方案中，以下突变(均根据EU编号系统编号)中的一个或更多个已被引入到本文中所述的基于抗体的分子的人IgG恒定Fc区SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267中：N297A替换；N297Q替换；L234A替换；L234D替换；L234E替换；L234G替换；L234H替换；L234F替换；L234K替换；L234Q替换；L234R替换；L234S替换；L234T替换；L235A替换；L235D替换；L235E替换；L235F替换；L235G替换；L235V替换；L235H替换；L235I替换；L235K替换；L235R替换；L235S替换；L235T替换；L235Q替换；L237A替换；S239D替换；E233P替换；L234V替换；C236缺失；G236E替换；G236R替换；G236K替换；G237A替换；P238A替换；F243L替换；D265A替换；S267E替换；H268A替换；R292P替换；Y300L替换；K322A替换；K322Q替换；A327Q替换；L328F替换；L328R替换；P329A替换；P329G替换；A330L替换；A330S替换；P331S替换；I332E替换或P396L替换。

在一个实施方案中，可制备本文中所述的基于抗体的分子的人IgG恒定Fc区中的在本申请的第四实施方案中前面描述的突变的组合的每一者。

在一个优选的实施方案中，L234A或L235A替换被引入到本文中所述的基于抗体的分子的人IgG恒定Fc区中。在一个更优选的实施方案中，L234A和L235A替换被引入到本文中所述的基于抗体的分子的人IgG恒定Fc区中。该实施方案产生具有由SEQ ID NO:268或SEQID NO:270表示的重链的基于抗体的分子。

在一个甚至更优选的实施方案中，所述抗MuSK抗体或其抗原结合片段，包含：

a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列和

b)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列。

在该上下文中，同一性或相似性为至少81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。

优选的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，包含：

a)全长重链，其包含SEQ ID NO：268和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO：269。

优选的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，包含：

a)全长重链，其包含SEQ ID NO：270和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO：271。

在一个实施方案中，本发明的基于抗体的分子是“人源化的”，特别是如果它们要用于治疗目的时。术语“人源化”是指通常使用重组技术制备的嵌合分子，其具有来源于来自非人物种的免疫球蛋白的抗原结合位点和基于人免疫球蛋白的结构和/或序列的剩余免疫球蛋白结构。抗原结合位点可以包含与人恒定结构域融合的完整非人抗体可变结构域，或者包含接枝到人可变结构域的适当人框架区的这样的可变结构域的仅互补决定区(complementarity determining region，CDR)。这样的人源化分子的框架残基可以是野生型的(例如，完全人的)，或者它们可以经修饰以包含人抗体(人抗体的序列已作为人源化的基础)中不存在的一个或更多个氨基酸替换。人源化减少了或消除了分子的恒定区将在人个体中充当免疫原的可能性，但对外源可变区的免疫应答的可能性保持不变(LoBuglio，A.F.et al.“Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man：Kinetics AndImmune Response，”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：4220-4224(1989)，其在此通过引用整体并入)。另一种方法不仅侧重于提供人来源的恒定区，而且修饰可变区以重构它们使其尽可能接近人形式。重链和轻链的可变区都包含三个互补决定区(CDR)，它们响应于所讨论的抗原而变化并决定结合能力。CDR侧接四个框架区(FR)，它们在给定的物种中相对保守，并且假定为CDR提供了支架。当针对特定抗原制备非人抗体时，可通过将来源于非人抗体的CDR接枝到待修饰的人抗体中存在的FR上来“重构”或“人源化”可变区。用于人源化本文中所述的非人抗体的合适方法是本领域已知的，参见例如

Sato，K.et al.，Cancer Res 53；851-856(1993)；Riechmann，L et al.，“Reshaping Human Antibodies for Therapy,”Nature 332：323-327(1988)；Verhoeyen,M.et al.，“Reshaping Human Antibodies：Grafting An Antilysozyme Activity，”Science 239：1534-1536(1988)；Kettleborough，C.A.et al.，“Humanization OfA MouseMonoclonal Antibody By CDR-Grafting：The Importance Of Framework Residues OnLoop Conformation，”Protein Engineering 4：773-3783(1991)；Maeda，H.et al.，“Construction Of Reshaped Human Antibodies With HIV-Neutralizing Activity,”Human Antibodies Hybridoma 2：124-134(1991)；Gorman，S.D.et al.，“Reshaping ATherapeutic CD4 Antibody，”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：4181-4185(1991)；Tempest，P.R.et al.，“Reshaping A Human Monoclonal Antibody To Inhibit HumanRespiratory Syncytial Virus Infection In Vivo,"Bio/Technology 9：266-271(1991)；Co，M.S.et al.，“Humanized Antibodies For Antiviral Therapy，”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：2869-2873(1991)；Ca rter，P.et al.，“Humanization OfAnAnti-p185her2Antibody For Human CancerTherapy,”Proc Natl.Acad.Sci.USA 89：4285-4289(1992)；和Co，M.S.et al.，“Chimeric And Humanized Antibodies WithSpecificity For The CD33Antigen，”J.Immunol.148：1149-1154(1992)

，其在此通过引用整体并入。在一些实施方案中，本发明的人源化MuSK抗体保留所有CDR序列(例如，包含来自美洲驼或小鼠抗体的所有六个CDR的人源化抗体)。在另一些实施方案中，本发明的人源化MuSK抗体具有相对于原始抗体改变的一个或更多个CDR(一、二、三、四、五、六个)。将抗体人源化的方法是本领域公知的并且适合于将本文中公开的抗体人源化(参见，例如，Winter的美国专利号5,225,539；Queen和Selick的美国专利号5,530,101和5,585,089；Robert等的美国专利号5,859,205；Carter的美国专利号6,407,213；以及Foote的美国专利号6,881,557，其在此通过引用整体并入)。

在一些抗体中，仅需要CDR的一部分，即结合所需的称为“特异性决定残基”(“specificity determining residue，SDR”)的CDR残基的子集来保持抗体的结合。不接触抗原且不在SDR中的CDR残基可以基于先前对位于Chothia高变环之外的Kabat CDR区域的研究(参见Kabat et al.，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest.National Institutes of Health Publication No.91-3242(1992)；Chothia，C.et al.，“Canonical Structures For The Hypervariable Regions OfImmunoglobulins，”J.Mol.Biol.196：901-917(1987)，其在此通过引用整体并入)通过分子建模和/或以经验为主地或如Gonzales，N.R.et al.，“SDR Grafting Of A MurineAntibody Using Multiple Human Germline Templates To Minimize ItsImmunogenicity，”M0l.Immunol.41：863-872(2004)(其在此通过引用整体并入)中所述进行鉴定。在这样的人源化抗体中，在其中一个或更多个供体CDR残基不存在或其中整个供体CDR被省略的位置处，占据所述位置的氨基酸残基可以是占据接受体抗体序列中相应位置的氨基酸残基(通过Kabat编号)。所包括的CDR中供体氨基酸的接受体的这样的替换的数量反映了竞争考虑的平衡。这样的替换可有利于减少人源化抗体中非人氨基酸的数量，并从而降低潜在的免疫原性。然而，替换也可引起亲和力的变化，并且优选避免亲和力的显著降低。替换也可导致活性变化。还优选避免这样的导致活性显著降低的替换。在这种情况下，抗体或抗体片段仍应表现出如本文中早先定义的抗体的可检测活性或至少在一定程度上表现出抗体的活性。也可以凭经验选择CDR内的替换位置和要替换的氨基酸。

噬菌体展示技术可替代地用于提高(或降低)本发明的基于抗体的分子的CDR亲和力。该技术(称为亲和力成熟)采用诱变或“CDR步移(CDR walking)”和使用靶抗原或其抗原片段进行重新选择，以鉴定当与初始或亲本抗体比较时具有以更高(或更低)亲和力与抗原结合的CDR的抗体(参见例如Glaser et al.,“Antibody Engineering By Codon-BasedMutagenesis In AFilamentous Phage Vector System,”J.Immunology149:3903-3913(1992)，其在此通过引用整体并入)。诱变整个密码子而不是单个核苷酸导致氨基酸突变的半随机库。文库可以由变体克隆库组成构成，每个变体克隆与这样的文库的另一个成员的不同之处在于单个CDR中的单个氨基酸改变，并且其包含可能代表每个CDR残基的每个可能氨基酸替换的变体。可以通过将固定化的突变体与经标记的抗原接触来筛选对抗原具有提高(或降低)的结合亲和力的突变体。本领域已知的任何筛选方法可用于鉴定对抗原具有提高或降低的亲和力的基于变体抗体的结合分子(例如，ELISA)(参见Wu,H.et al.,“Stepwise In Vitro Affinity Maturation Of Vitaxin,An Alphav Beta3-SpecificHumanized mAb,”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95:6037-6042(1998)；Yelton et al.,“Affinity Maturation Of The BR96 Anti-Carcinoma Antibody By Codon-BasedMutagenesis,”J.Immunology 155:1994(1995)，其在此通过引用整体并入)。可以使用使轻链随机化的“CDR步移”(参见Schier,R.et al.,“Isolation OfPicomolar Affinity Anti-c-erbB-2Single-Chain Fv By Molecular Evolution Of The ComplementarityDetermining Regions In The Center Of The Antibody Binding Site,”J.Mol.Biol.263:551-567(1996)，其在此通过引用整体并入)。

用于MuSK抗体分子亲和力成熟的方法在本文中描述并公开于例如

Krause，J.C.et al.，“An Insertion Mutation T hat Distorts AntibodyBinding Site Arcnitecture Enhances Function of a Human Antibody,”MBio.2(1)：e00345-10(2011)；Kuan，C.T.et al.，“Affinity-Matured Anti-Glycoprotein NMBRecombinant Immunotoxins Targeting Malignant Gliomas And Melanomas,”Int.J.Cancer 10.1002/ijc.25645(2010)；Hackel，B.J.et al.，“Stability And CDRComposition Biases Enrich Binder Functionality Landscapes,”J.Mol.Biol.401(1)：84-96(2010)；Montgomery，D.L.et al.，“Affinity Maturation And CharacterizationOf A Human Monoclonal Antibody Against HlV-1gp41.”MAbs1(5)：462-474(2009)；Gustchina，E.et al.，“Affinity Maturation By Targeted Diversification Of TheCDR-H2Loop Of A Monoclonal Fab Derived From A SyntheticHuman AntibodyLibrary And Directed Against The Internal Trimeric Coiled-Coil Of Gp41 YieldsA Set Of Fabs With Improved HIV-1Neutralization Potency And Breadth,”Virology393(1)：112-119(2009)；Finlay，WJ.et al.，“Affinity Maturation Of A Humanized RatAntibody For Anti-RAGE Therapy：Comprehensive Mutagenesis Reveals A High LevelOf Mutational Plasticity Both Inside And Outside The Complementarity-Determining Regions,”J.Mol.Biol.388(3)：541-558(2009)；Bostrom，J.et al.，“Improving Antibody Binding Affinity And Specificity For TherapeuticDevelopment,”Methods Mol.Biol.525：353-376(2009)；Steidl，S.et al.，“ln VitroAffinity Maturation Of Human GM-CSF Antibodies By Targeted CDR-Diversification,”Mol.Immunol.46(1)：135-144(2008)；和Barderas，R.et al.，“Affinity Maturation Of Antibodies Assisted By ln Silico Modeling,”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 105(26)：9029-9034(2008)，

其在此通过引用整体并入。

在本申请的上下文中，氨基酸改变(变化或修饰)可以是氨基酸替换、添加、缺失或化学修饰。

在一个实施方案中，如本文中所述的基于MuSK抗体的分子包含任意一个、任意两个、任意三个、任意四个、任意五个或任意六个如本文中表1和表2中提供的CDR的氨基酸序列。

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含重链可变结构域，其中重链可变结构域包含：

(i)互补决定区1(CDR-H1)，其包含SEQ ID NO：1至16、135、136、147至149中任一个的氨基酸序列，或者SEQ ID NO：1至16、135、136、147至149中任一个的经修饰氨基酸序列，所述经修饰序列相对于SEQ ID NO：1至16、135、136、147至149具有1、2、3、4或5个氨基酸改变；(ii)互补决定区2(CDR-H2)，其包含SEQ ID NO：17至32、137、138、150至155中任一个的氨基酸序列，或者SEQ ID NO：17至32、137、138、150至155中任一个的经修饰氨基酸序列，所述经修饰序列相对于SEQ ID NO：17至32、137、138、150至155具有1、2、3、4或5个氨基酸改变；和

(iii)互补决定区3(CDR-H3)，其包含SEQ ID NO：33至48、139、140、156至158、240至251中任一个的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:33至48、139、140、156至158、或240至251中任一个的经修饰氨基酸序列，所述经修饰序列相对于SEQ ID NO:33至48、139、140、156至158、或240至251具有1、2、3、4或5个氨基酸改变。

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含：(i)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:1的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:1具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:17的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:17具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:33的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:33具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(ii)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:2的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:2具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:18的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:18具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:34的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:34具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(iii)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:3的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:3具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:19的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:19具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:35的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:35具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(iv)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:4的CDR-H1或者相对于SEQ IDNO:4具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:20的CDR-H2或者相对于SEQ IDNO:20具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:36的CDR-H3或者相对于SEQID NO:36具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(v)重链可变结构域，其包含：SEQ IDNO:5的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:5具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ IDNO:21的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:21具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQID NO:37的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:37具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(vi)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:6的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:6具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:22的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:22具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:38的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:38具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(vii)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:7的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:7具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:23的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:23具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:39的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:39具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(viii)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:8的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:8具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:24的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:24具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:40的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:40具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(ix)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:9的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:9具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:25的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:25具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:41的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:41具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(x)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:10的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:10具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:26的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:26具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:42的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:42具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xi)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:11的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:11具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:27的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:27具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:43的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:43具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xii)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:12的CDR-H1或者相对于SEQID NO:12具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:28的CDR-H2或者相对于SEQID NO:28具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:44的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:44具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xiii)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:13的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:13具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:29的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:29具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:45的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:45具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xiv)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:14的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:14具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:30的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:30具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:46的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:46具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xv)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:15的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:15具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:31的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:31具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:47的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:47具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xvi)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:16的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:16具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:32的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:32具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:48的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:48具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xvii)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:135的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:135具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:137的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:137具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:139的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:139具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；和(xviii)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:136的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:136具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:138的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:138具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:140的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:140具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3。重链CDR的序列在表1中提供。

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含：(ii.a)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:2的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:2具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:18的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:18具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:240的CDR-H3(X2m1)或者相对于SEQID NO:240具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(ii.b)重链可变结构域，其包含：SEQID NO:2的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:2具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ IDNO:18的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:18具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQID NO:241的CDR-H3(X2m2)或者相对于SEQ ID NO:241具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(ii.c)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:2的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:2具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:18的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:18具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:242的CDR-H3(X2m3)或者相对于SEQID NO:242具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(ii.d)重链可变结构域，其包含：SEQID NO:2的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:2具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ IDNO:18的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:18具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQID NO:243的CDR-H3(X2m4)或者相对于SEQ ID NO:243具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(ii.e)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:2的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:2具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:18的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:18具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:244的CDR-H3(X2m5)或者相对于SEQID NO:244具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(ii.f)重链可变结构域，其包含：SEQID NO:2的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:2具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ IDNO:18的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:18具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQID NO:245的CDR-H3(X2m6)或者相对于SEQ ID NO:245具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(ii.g)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:2的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:2具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:18的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:18具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:246的CDR-H3(X2m7)或者相对于SEQID NO:246具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(ii.h)重链可变结构域，其包含：SEQID NO:2的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:2具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ IDNO:18的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:18具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQID NO:247的CDR-H3(X2m8)或者相对于SEQ ID NO:247具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3。

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含：(xvii.a)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:135的CDR-H1或者相对于SEQ IDNO:135具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:137的CDR-H2或者相对于SEQID NO:137具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:248的CDR-H3(X17m1)或者相对于SEQ ID NO:248具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xvii.b)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:135的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:135具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:137的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:137具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:249的CDR-H3(X17m2)或者相对于SEQ ID NO:249具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xvii.c)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:135的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:135具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:137的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:137具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:250的CDR-H3(X17m3)或者相对于SEQ ID NO:250具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xvii.d)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:135的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:135具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:137的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:137具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:251的CDR-H3(X17m6)或者相对于SEQ ID NO:251具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3。

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含重链可变结构域，其中重链可变结构域包含：(xix)重链可变结构域，其包含：SEQ IDNO:147的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:147具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQID NO:150的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:150具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:156的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:156具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xx)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:148的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:148具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:151的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:151具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:157的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:157具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xxi)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:149的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:149具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ IDNO:152的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:152具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQID NO:158的CDR-H3或者相对于SEQ ID NO:158具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3。

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含重链可变结构域，其中重链可变结构域包含(xxii)重链可变结构域，其包含：SEQ IDNO:147的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:147具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQID NO:153的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:153具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:156的CDR-H3(3B2g1m1/3B2g2m1)或者相对于SEQ ID NO:156具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xxiii)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:147的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:147具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:154的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:154具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:156的CDR-H3(3B2g1m2/3B2g2m2)或者相对于SEQ ID NO:156具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3；(xxi)重链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:147的CDR-H1或者相对于SEQ ID NO:147具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1，SEQ ID NO:155的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:155具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2，和SEQ ID NO:156的CDR-H3(3B2g1m4/3B2g2m4)或者相对于SEQ ID NO:156具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3。重链CDR的序列在表1中提供。

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含：(i)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:1的CDR-H1、SEQ ID NO:17的CDR-H2和SEQID NO:33的CDR-H3；(ii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:34的CDR-H3；(iii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:3的CDR-H1、SEQ ID NO:19的CDR-H2和SEQ ID NO:35的CDR-H3；(iv)重链可变结构域，其包含SEQ IDNO:4的CDR-H1、SEQ ID NO:20的CDR-H2和SEQ ID NO:36的CDR-H3；(v)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:5的CDR-H1、SEQ ID NO:21的CDR-H2和SEQ ID NO:37的CDR-H3；(vi)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:6的CDR-H1、SEQ ID NO:22的CDR-H2和SEQ ID NO:38的CDR-H3；(vii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:7的CDR-H1、SEQ ID NO:23的CDR-H2和SEQ IDNO:39的CDR-H3；(viii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:8的CDR-H1、SEQ ID NO:24的CDR-H2和SEQ ID NO:40的CDR-H3；(ix)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:9的CDR-H1、SEQID NO:25的CDR-H2和SEQ ID NO:41的CDR-H3；(x)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:10的CDR-H1、SEQ ID NO:26的CDR-H2和SEQ ID NO:42的CDR-H3；(xi)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:11的CDR-H1、SEQ ID NO:27的CDR-H2和SEQ ID NO:43的CDR-H3；(xii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:12的CDR-H1、SEQ ID NO:28的CDR-H2和SEQ ID NO:44的CDR-H3；(xiii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:13的CDR-H1、SEQ ID NO:29的CDR-H2和SEQ IDNO:45的CDR-H3；(xiv)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:14的CDR-H1、SEQ ID NO:30的CDR-H2和SEQ ID NO:46的CDR-H3；(xv)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:15的CDR-H1、SEQ ID NO:31的CDR-H2和SEQ ID NO:47的CDR-H3；(xvi)重链可变结构域，其包含SEQ IDNO:16的CDR-H1、SEQ ID NO:32的CDR-H2和SEQ ID NO:48的CDR-H3；(xvii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:139的CDR-H3；和(xviii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:136的CDR-H1、SEQ ID NO:138的CDR-H2和SEQ ID NO:140的CDR-H3。重链CDR序列的序列在下表1中提供。

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含：(ii.a)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:240的CDR-H3(X2m1)；(ii.b)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:241的CDR-H3(X2m2)；(ii.c)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:242的CDR-H3(X2m3)；(ii.d)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:243的CDR-H3(X2m4)；(ii.e)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:244的CDR-H3(X2m5)；(ii.f)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:245的CDR-H3(X2m6)；(ii.g)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:246的CDR-H3(X2m7)；(ii.h)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:247的CDR-H3(X2m8)。

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含：(xvii.a)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:248的CDR-H3(X17m1)；(xvii.b)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:249的CDR-H3(X17m2)；(xvii.c)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:250的CDR-H3(X17m3)；(xvii.d)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:251的CDR-H3(X17m6)。

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含重链可变结构域，其中重链可变结构域包含：(xix)重链可变结构域，其包含SEQ IDNO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:150的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3；(xx)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:148的CDR-H1、SEQ ID NO:151的CDR-H2和SEQ ID NO:157的CDR-H3；(xxi)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:149的CDR-H1、SEQ ID NO:152的CDR-H2和SEQ IDNO:158的CDR-H3；

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含重链可变结构域，其中重链可变结构域包含：(xxii)重链可变结构域，其包含SEQ IDNO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:153的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3(3B2g1m1/3B2g2m1)；(xxiii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:154的CDR-H2和SEQID NO:156的CDR-H3(3B2g1m2/3B2g2m2)；(xxiv)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:155的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3(3B2g1m4/3B2g2m4)。重链CDR序列的序列在下表1中提供。

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含重链可变结构域，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:153的CDR-H2或者相对于SEQ ID NO:153具有至少0、1、2、3、4或5个改变的CDR-H2氨基酸序列，以及SEQ ID NO:156的CDR-H3(3B2g2m1)。在一个实施方案中，CDR-H2氨基酸序列相对于SEQ ID NO:153具有至少0、1、2、3、4或5个改变。根据该实施方案，CDR-H2氨基酸序列相对于SEQ ID NO:153具有至少0、1、2、3、4或5个改变，其中所述改变存在于残基1、2、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或其任意组合处。

-包含SEQ ID NO:147或者相对于SEQ ID NO:147具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或者相对于SEQ ID NO:153具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2氨基酸序列，以及

-包含SEQ ID NO:156或者相对于SEQ ID NO:156具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3氨基酸序列(3B2g2m1)。

在一个实施方案中，抗体的CDR-H2在第3位包含脯氨酸(P)、在第4位包含色氨酸(W)以及在第5位包含丝氨酸(S)或天冬酰胺(N)。

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，以及

-包含SEQ ID NO:156或由SEQ ID NO:156组成的CDR-H3氨基酸序列(3B2g2m1)。

下表1中提供了重链CDR序列的序列。

在一些实施方案中，本文中公开的基于MuSK抗体的分子还包含轻链可变结构域。轻链可变结构域包含：

(i)互补决定区1(CDR-L1)，其具有SEQ ID NO:49至64、141、142、159至169中任一个的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:49至64、141、142或159至169中任一个的经修饰氨基酸序列，所述经修饰序列与SEQ ID NO:49至64、141、142或159至169中的任一个具有至少80％序列同一性；

(ii)互补决定区2(CDR-L2)，其具有SEQ ID NO:65至80、143、144、170至179中任一个的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:65至80、143、144或170至179中任一个的经修饰氨基酸序列，所述经修饰序列与SEQ ID NO:65至80、143、144或170至179中任一个具有至少80％序列同一性；和

(iii)互补决定区3(CDR-L3)，其具有SEQ ID NO:81至96、145、146、180至195中任一个的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:81至96、145、146或180至195中任一个的经修饰氨基酸序列，所述经修饰序列与SEQ ID NO:81至96、145、146或180至195中的任一个具有至少80％序列同一性。

(iv)互补决定区1(CDR-L1)，其具有SEQ ID NO:49至64、141、142、159至169中任一个的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:49至64、141、142或159至169中任一个的经修饰氨基酸序列，所述经修饰序列相对于SEQ ID NO:49至64、141、142或159至169中的任一个具有1、2、3、4或5个氨基酸改变；

(v)互补决定区2(CDR-L2)，其具有SEQ ID NO:65至80、143、144、170至179中任一个的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:65至80、143、144或170至179中任一个的经修饰氨基酸序列，所述经修饰序列相对于SEQ ID NO:65至80、143、144或170至179中任一个具有1、2、3、4或5个氨基酸改变；和

(vi)互补决定区3(CDR-L3)，其具有SEQ ID NO:81至96、145、146、180至195中任一个的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:81至96、145、146或180至195中任一个的经修饰氨基酸序列，所述经修饰序列相对于SEQ ID NO:81至96、145、146或180至195中的任一个具有1、2、3、4或5个氨基酸改变。

在一个实施方案中，本文中公开的基于MuSK抗体的分子的轻链可变结构域包含(i)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:49的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:49具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:65的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:65具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:81的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:81具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(ii)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:50的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:50具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:66的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:66具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:82的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:82具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(iii)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:51的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:51具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:67的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:67具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:83的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:83具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(iv)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:52的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:52具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:68的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:68具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:84的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:84具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(v)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:53的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:53具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:69的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:69具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:85的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:85具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(vi)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:54的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:54具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:70的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:70具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:86的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:86具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(vii)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:55的CDR-L1或者相对于SEQID NO:55具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:71的CDR-L2或者相对于SEQID NO:71具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:87的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:87具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(viii)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:56的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:56具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:72的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:72具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:88的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:88具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(ix)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:57的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:57具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:73的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:73具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:89的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:89具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(x)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:58的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:58具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:74的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:74具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:90的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:90具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xi)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:59的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:59具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:75的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:75具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:91的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:91具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xii)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:60的CDR-L1或者相对于SEQ IDNO:60具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:76的CDR-L2或者相对于SEQ IDNO:76具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:92的CDR-L3或者相对于SEQID NO:92具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xiii)轻链可变结构域，其包含：SEQ IDNO:61的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:61具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ IDNO:77的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:77具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQID NO:93的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:93具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xiv)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:62的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:62具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:78的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:78具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:94的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:94具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xv)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:63的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:63具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:79的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:79具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:95的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:95具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xvi)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:64的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:64具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:80的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:80具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:96的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:96具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xvii)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:141的CDR-L1或者相对于SEQ IDNO:141具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:143的CDR-L2或者相对于SEQID NO:143具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:145的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:145具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xviii)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:142的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:142具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:144的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:144具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:146的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:146具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3。轻链CDR的序列在下表2中提供。

在一个实施方案中，本文中公开的基于MuSK抗体的分子的轻链可变结构域包含(xix)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:159的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:159具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:170的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:170具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:180的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:180具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xx)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:159的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:159具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:171的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:171具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ IDNO:181的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:181具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxi)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:160的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:160具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:172的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:172具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:182的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:182具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxii)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:159的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:159具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:172的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:172具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ IDNO:183的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:183具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxiii)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:159的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:159具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:171的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:171具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:184的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:184具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxiv)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:159的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:159具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ IDNO:173的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:173具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQID NO:185的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:185具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxv)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:159的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:159具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:173的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:173具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:186的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:186具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxvi)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:161的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:161具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:174的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:174具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ IDNO:187的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:187具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxvii)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:162的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:162具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:174的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:174具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:188的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:188具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxviii)轻链可变结构域，其包含：SEQ IDNO:163的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:163具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQID NO:174的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:174具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:188的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:188具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxix)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:164的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:164具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:174的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:174具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:189的CDR-L3或者相对于SEQ IDNO:189具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxx)轻链可变结构域，其包含：SEQ IDNO:165的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:165具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQID NO:175的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:175具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:190的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:190具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxxi)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:166的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:166具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:176的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:176具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:191的CDR-L3或者相对于SEQ IDNO:191具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxxi)轻链可变结构域，其包含：SEQ IDNO:167的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:167具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQID NO:177的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:177具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:192的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:192具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxxii)轻链可变结构域，其包含：SEQ ID NO:168的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:168具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQ ID NO:178的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:178具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:193的CDR-L3或者相对于SEQ IDNO:193具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3；(xxxiii)轻链可变结构域，其包含：SEQ IDNO:169的CDR-L1或者相对于SEQ ID NO:169具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1，SEQID NO:179的CDR-L2或者相对于SEQ ID NO:179具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2，和SEQ ID NO:194的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:194具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3。

在一个实施方案中，本文中公开的基于MuSK抗体的分子的轻链可变结构域包含：(i)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:49的CDR-L1、SEQ ID NO:65的CDR-L2和SEQ ID NO:81的CDR-L3；(ii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:50的CDR-L1、SEQ ID NO:66的CDR-L2和SEQ ID NO:82的CDR-L3；(iii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:51的CDR-L1、SEQ IDNO:67的CDR-L2和SEQ ID NO:83的CDR-L3；(iv)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:52的CDR-L1、SEQ ID NO:68的CDR-L2和SEQ ID NO:84的CDR-L3；(v)轻链可变结构域，其包含SEQID NO:53的CDR-L1、SEQ ID NO:69的CDR-L2和SEQ ID NO:85的CDR-L3；(vi)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:54的CDR-L1、SEQ ID NO:70的CDR-L2和SEQ ID NO:86的CDR-L3；(vii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:55的CDR-L1、SEQ ID NO:71的CDR-L2和SEQ IDNO:87的CDR-L3；(viii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:56的CDR-L1、SEQ ID NO:72的CDR-L2和SEQ ID NO:88的CDR-L3；(ix)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:57的CDR-L1、SEQ ID NO:73的CDR-L2和SEQ ID NO:89的CDR-L3；(x)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:58的CDR-L1、SEQ ID NO:74的CDR-L2和SEQ ID NO:90的CDR-L3；(xi)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:59的CDR-L1、SEQ ID NO:75的CDR-L2和SEQ ID NO:91的CDR-L3；(xii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:60的CDR-L1、SEQ ID NO:76的CDR-L2和SEQ ID NO:92的CDR-L3；(xiii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:61的CDR-L1、SEQ ID NO:77的CDR-L2和SEQID NO:93的CDR-L3；(xiv)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:62的CDR-L1、SEQ ID NO:78的CDR-L2和SEQ ID NO:94的CDR-L3；(xv)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:63的CDR-L1、SEQ ID NO:79的CDR-L2和SEQ ID NO:95的CDR-L3；(xvi)轻链可变结构域，其包含SEQ IDNO:64的CDR-L1、SEQ ID NO:80的CDR-L2和SEQ ID NO:96的CDR-L3；(xvii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:141的CDR-L1、SEQ ID NO:143的CDR-L2和SEQ ID NO:145的CDR-L3；(xviii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:142的CDR-L1、SEQ ID NO:144的CDR-L2和SEQID NO:146的CDR-L3。轻链CDR的序列在下表2中提供。

在一个实施方案中，本文中公开的基于MuSK抗体的分子的轻链可变结构域包含(xix)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:170的CDR-L2和SEQ IDNO:180的CDR-L3；(xx)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:171的CDR-L2和SEQ ID NO:181的CDR-L3；(xxi)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:160的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:182的CDR-L3；(xxii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:183的CDR-L3；(xxiii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:171的CDR-L2和SEQ ID NO:184的CDR-L3；(xxiv)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:173的CDR-L2和SEQ ID NO:185的CDR-L3；(xxv)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQID NO:173的CDR-L2和SEQ ID NO:186的CDR-L3；(xxvi)轻链可变结构域，其包含SEQ IDNO:161的CDR-L1、SEQ ID NO:174的CDR-L2和SEQ ID NO:187的CDR-L3；(xxvii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:162的CDR-L1、SEQ ID NO:174的CDR-L2和SEQ ID NO:188的CDR-L3；(xxviii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:163的CDR-L1、SEQ ID NO:174的CDR-L2和SEQ ID NO:188的CDR-L3；(xxix)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:164的CDR-L1、SEQ IDNO:174的CDR-L2和SEQ ID NO:189的CDR-L3；(xxx)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:165的CDR-L1、SEQ ID NO:175的CDR-L2和SEQ ID NO:190的CDR-L3；(xxxi)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:166的CDR-L1、SEQ ID NO:176的CDR-L2和SEQ ID NO:191的CDR-L3；(xxxi)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:167的CDR-L1、SEQ ID NO:177的CDR-L2和SEQ ID NO:192的CDR-L3；(xxxii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:168的CDR-L1、SEQ ID NO:178的CDR-L2和SEQ ID NO:193的CDR-L3；(xxxiii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:169的CDR-L1、SEQ ID NO:179的CDR-L2和SEQ ID NO:194的CDR-L3。

在一个实施方案中，本文中公开的基于MuSK抗体的分子的轻链可变结构域包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:195的CDR-L3或者相对于SEQ ID NO:195的氨基酸序列具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3，其中所述改变存在于残基1、2、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或其任意组合处。

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含轻链可变结构域，其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或者相对于SEQ ID NO:159具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或者相对于SEQ ID NO:172具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2氨基酸序列，以及

-包含SEQ ID NO:195或者相对于SEQ ID NO:195具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3氨基酸序列(3B2g2m1)。

在一个实施方案中，CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3氨基酸序列相对于SEQ ID NO:159、172或195(分别)具有至少0、1、2、3、4或5个氨基酸改变。

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，以及

包含SEQ ID NO:195或由SEQ ID NO:195组成的CDR-L3氨基酸序列(3B2g2m1)。

下表2中提供了轻链CDR序列的序列。

对本文中公开的基于MuSK抗体的分子的重链CDR序列和/或轻链CDR序列的合适的氨基酸修饰包括，例如导致变体CDR序列具有与上述的本文中公开的CDR序列的结合特征相似或增强的结合特征的保守替换或功能等同的氨基酸残基替换。本发明涵盖表1和表2的CDR，其包含维持或增强抗体的MuSK结合的1、2、3、4、5个或更多个氨基酸改变(取决于CDR的长度)。对表1的重链CDR序列和/或表1和表2的轻链CDR序列合适的氨基酸修饰包括，例如导致变体CDR序列具有与表1和表2中CDR序列的结合特征相似或增强的结合特征的保守替换或功能等同的氨基酸残基替换。保守替换是在其侧链相关的氨基酸家族中发生的那些。遗传编码的氨基酸可分为四个家族：(1)酸性(天冬氨酸、谷氨酸)；(2)碱性(赖氨酸、精氨酸、组氨酸)；(3)非极性(丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)；和(4)不带电荷的极性(甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)。苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸有时共同归类为芳香族氨基酸。或者，氨基酸库可分为(1)酸性(天冬氨酸、谷氨酸)；(2)碱性(赖氨酸、精氨酸组氨酸)，(3)脂肪族(甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸)，其中丝氨酸和苏氨酸任选地单独分为脂肪族-羟基；(4)芳香族(苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸)；(5)酰胺(天冬酰胺、谷氨酰胺)；和(6)含硫(半胱氨酸和甲硫氨酸)(Stryer(ed.),Biochemistry,2nd ed,WH Freeman and Co.,1981，其在此通过引用整体并入)。还可以对表1的重链CDR序列和表2的轻链CDR序列进行非保守替换。非保守替换涉及用来自不同类别的氨基酸的一个或更多个氨基酸残基替换CDR的一个或更多个氨基酸残基以改善或增强CDR的结合特性。表1的重链CDR和/或表2的轻链CDR的氨基酸序列还可以包含维持或增强MuSK结合的一个或更多个内部中性氨基酸插入或缺失。

在一个实施方案中，基于MuSK抗体的分子含有：

(i)包含SEQ ID NO:1的CDR-H1、SEQ ID NO:17的CDR-H2和SEQ ID NO:33的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:49的CDR-L1、SEQ ID NO:65的CDR-L2和SEQ IDNO:81的CDR-L3的轻链可变结构域；

(ii)包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:34的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:50的CDR-L1、SEQ ID NO:66的CDR-L2和SEQ IDNO:82的CDR-L3的轻链可变结构域；

(iii)包含SEQ ID NO:3的CDR-H1、SEQ ID NO:19的CDR-H2和SEQ ID NO:35的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:51的CDR-L1、SEQ ID NO:67的CDR-L2和SEQ IDNO:83的CDR-L3的轻链可变结构域；

(iv)包含SEQ ID NO:4的CDR-H1、SEQ ID NO:20的CDR-H2和SEQ ID NO:36的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:52的CDR-L1、SEQ ID NO:68的CDR-L2和SEQ IDNO:84的CDR-L3的轻链可变结构域；

(v)包含SEQ ID NO:5的CDR-H1、SEQ ID NO:21的CDR-H2和SEQ ID NO:37的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:53的CDR-L1、SEQ ID NO:69的CDR-L2和SEQ IDNO:85的CDR-L3的轻链可变结构域；

(vi)包含SEQ ID NO:6的CDR-H1、SEQ ID NO:22的CDR-H2和SEQ ID NO:38的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:54的CDR-L1、SEQ ID NO:70的CDR-L2和SEQ IDNO:86的CDR-L3的轻链可变结构域；

(vii)包含SEQ ID NO:7的CDR-H1、SEQ ID NO:23的CDR-H2和SEQ ID NO:39的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:55的CDR-L1、SEQ ID NO:71的CDR-L2和SEQ IDNO:87的CDR-L3的轻链可变结构域；

(viii)包含SEQ ID NO:8的CDR-H1、SEQ ID NO:24的CDR-H2和SEQ ID NO:40的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:56的CDR-L1、SEQ ID NO:72的CDR-L2和SEQID NO:88的CDR-L3的轻链可变结构域；

(ix)包含SEQ ID NO:9的CDR-H1、SEQ ID NO:25的CDR-H2和SEQ ID NO:41的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:57的CDR-L1、SEQ ID NO:73的CDR-L2和SEQ IDNO:89的CDR-L3的轻链可变结构域；

(x)包含SEQ ID NO:10的CDR-H1、SEQ ID NO:26的CDR-H2和SEQ ID NO:42的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:58的CDR-L1、SEQ ID NO:74的CDR-L2和SEQ IDNO:90的CDR-L3的轻链可变结构域；

(xi)包含SEQ ID NO:11的CDR-H1、SEQ ID NO:27的CDR-H2和SEQ ID NO:43的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:59的CDR-L1、SEQ ID NO:75的CDR-L2和SEQ IDNO:91的CDR-L3的轻链可变结构域；

(xii)包含SEQ ID NO:12的CDR-H1、SEQ ID NO:28的CDR-H2和SEQ ID NO:44的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:60的CDR-L1、SEQ ID NO:76的CDR-L2和SEQID NO:92的CDR-L3的轻链可变结构域；

(xiii)包含SEQ ID NO:13的CDR-H1、SEQ ID NO:29的CDR-H2和SEQ ID NO:45的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:61的CDR-L1、SEQ ID NO:77的CDR-L2和SEQID NO:93的CDR-L3的轻链可变结构域；

(xiv)包含SEQ ID NO:14的CDR-H1、SEQ ID NO:30的CDR-H2和SEQ ID NO:46的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:62的CDR-L1、SEQ ID NO:78的CDR-L2和SEQID NO:94的CDR-L3的轻链可变结构域；

(xv)包含SEQ ID NO:15的CDR-H1、SEQ ID NO:31的CDR-H2和SEQ ID NO:47的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:63的CDR-L1、SEQ ID NO:79的CDR-L2和SEQ IDNO:95的CDR-L3的轻链可变结构域；

(xvi)包含SEQ ID NO:16的CDR-H1、SEQ ID NO:32的CDR-H2和SEQ ID NO:48的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:64的CDR-L1、SEQ ID NO:80的CDR-L2和SEQID NO:96的CDR-L3的轻链可变结构域；

(xvii)包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:139的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:141的CDR-L1、SEQ ID NO:143的CDR-L2和SEQ ID NO:145的CDR-L3的轻链可变结构域；以及

(xviii)包含SEQ ID NO:136的CDR-H1、SEQ ID NO:138的CDR-H2和SEQ ID NO:140的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:142的CDR-L1、SEQ ID NO:144的CDR-L2和SEQ ID NO:146的CDR-L3的轻链可变结构域。

在一个实施方案中，基于MuSK抗体的分子含有：

(ii.a)包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:240的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:50的CDR-L1、SEQ ID NO:66的CDR-L2和SEQID NO:82的CDR-L3的轻链可变结构域(X2m1)；

(ii.b)包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:241的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:50的CDR-L1、SEQ ID NO:66的CDR-L2和SEQID NO:82的CDR-L3的轻链可变结构域(X2m2)；

(ii.c)包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:242的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:50的CDR-L1、SEQ ID NO:66的CDR-L2和SEQID NO:82的CDR-L3的轻链可变结构域(X2m3)；

(ii.d)包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:243的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:50的CDR-L1、SEQ ID NO:66的CDR-L2和SEQID NO:82的CDR-L3的轻链可变结构域(X2m4)；

(ii.e)包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:244的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:50的CDR-L1、SEQ ID NO:66的CDR-L2和SEQID NO:82的CDR-L3的轻链可变结构域(X2m5)；

(ii.f)包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:245的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:50的CDR-L1、SEQ ID NO:66的CDR-L2和SEQID NO:82的CDR-L3的轻链可变结构域(X2m6)；

(ii.g)包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:246的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:50的CDR-L1、SEQ ID NO:66的CDR-L2和SEQID NO:82的CDR-L3的轻链可变结构域(X2m7)；

(ii.f)包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:247的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:50的CDR-L1、SEQ ID NO:66的CDR-L2和SEQID NO:82的CDR-L3的轻链可变结构域(X2m8)。

在一个实施方案中，基于MuSK抗体的分子含有：

(xvii.a)包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:248的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:141的CDR-L1、SEQ ID NO:143的CDR-L2和SEQ ID NO:145的CDR-L3的轻链可变结构域(X17m1)；

(xvii.b)包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:249的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:141的CDR-L1、SEQ ID NO:143的CDR-L2和SEQ ID NO:145的CDR-L3的轻链可变结构域(X17m2)；

(xvii.c)包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:250的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:141的CDR-L1、SEQ ID NO:143的CDR-L2和SEQ ID NO:145的CDR-L3的轻链可变结构域(X17m3)；

(xvii.d)包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:251的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:141的CDR-L1、SEQ ID NO:143的CDR-L2和SEQ ID NO:145的CDR-L3的轻链可变结构域(X17m6)。

在一个实施方案中，基于MuSK抗体的分子含有：

(i)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:150的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:170的CDR-L2和SEQ ID NO:180的CDR-L3的轻链可变结构域(14D10)；

(ii)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:150的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:171的CDR-L2和SEQ ID NO:181的CDR-L3的轻链可变结构域(7G4)；

(iii)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:150的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:160的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:182的CDR-L3的轻链可变结构域(3C4)；

(iv)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:150的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:183的CDR-L3的轻链可变结构域(3B2)；

(v)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:150的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:171的CDR-L2和SEQ ID NO:184的CDR-L3的轻链可变结构域(3G3)；

(vi)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:150的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:173的CDR-L2和SEQ ID NO:185的CDR-L3的轻链可变结构域(31G2)；

(vii)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:150的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:173的CDR-L2和SEQ ID NO:186的CDR-L3的轻链可变结构域(31B7)；

(viii)包含SEQ ID NO:148的CDR-H1、SEQ ID NO:151的CDR-H2和SEQ ID NO:157的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:161的CDR-L1、SEQ ID NO:174的CDR-L2和SEQ ID NO:187的CDR-L3的轻链可变结构域(17H10)；

(ix)包含SEQ ID NO:148的CDR-H1、SEQ ID NO:151的CDR-H2和SEQ ID NO:157的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:162的CDR-L1、SEQ ID NO:174的CDR-L2和SEQ ID NO:188的CDR-L3的轻链可变结构域(23B6)；

(x)包含SEQ ID NO:148的CDR-H1、SEQ ID NO:151的CDR-H2和SEQ ID NO:157的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:163的CDR-L1、SEQ ID NO:174的CDR-L2和SEQ ID NO:188的CDR-L3的轻链可变结构域(30E1)；

(xi)包含SEQ ID NO:148的CDR-H1、SEQ ID NO:151的CDR-H2和SEQ ID NO:157的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:164的CDR-L1、SEQ ID NO:174的CDR-L2和SEQ ID NO:189的CDR-L3的轻链可变结构域(30A11)；

(xii)包含SEQ ID NO:149的CDR-H1、SEQ ID NO:152的CDR-H2和SEQ ID NO:158的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:165的CDR-L1、SEQ ID NO:175的CDR-L2和SEQ ID NO:190的CDR-L3的轻链可变结构域(16F11)；

(xiii)包含SEQ ID NO:149的CDR-H1、SEQ ID NO:152的CDR-H2和SEQ ID NO:158的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:166的CDR-L1、SEQ ID NO:176的CDR-L2和SEQ ID NO:191的CDR-L3的轻链可变结构域(4C11)；

(xiv)包含SEQ ID NO:149的CDR-H1、SEQ ID NO:152的CDR-H2和SEQ ID NO:158的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:167的CDR-L1、SEQ ID NO:177的CDR-L2和SEQ ID NO:192的CDR-L3的轻链可变结构域(7A12)；

(xv)包含SEQ ID NO:149的CDR-H1、SEQ ID NO:152的CDR-H2和SEQ ID NO:158的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:168的CDR-L1、SEQ ID NO:178的CDR-L2和SEQ ID NO:193的CDR-L3的轻链可变结构域(7G12)；

(xvi)包含SEQ ID NO:149的CDR-H1、SEQ ID NO:152的CDR-H2和SEQ ID NO:158的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:169的CDR-L1、SEQ ID NO:179的CDR-L2和SEQ ID NO:194的CDR-L3的轻链可变结构域(7B8)；

(xvii)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:153的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:183的CDR-L3的轻链可变结构域(3B2g1m1)；

(xviii)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:154的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:183的CDR-L3的轻链可变结构域(3B2g1m2)；

(xvix)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:155的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:183的CDR-L3的轻链可变结构域(3B2g1m4)；

(xx)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:153的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:195的CDR-L3的轻链可变结构域(3B2g2m1)；

(xxi)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:154的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:195的CDR-L3的轻链可变结构域(3B2g2m2)；以及

(xxii)包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:155的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，以及包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:195的CDR-L3的轻链可变结构域(3B2g2m4)。

在一个优选的实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:153或者相对于SEQ ID NO:153具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2氨基酸序列，和

-包含SEQ ID NO:156或者相对于SEQ ID NO:156具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3氨基酸序列(3B2g2m1)并且

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:172或者相对于SEQ ID NO:172的1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2氨基酸序列，和

在一个更优选的实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

-包含SEQ ID NO:156或由SEQ ID NO:156组成的CDR-H3氨基酸序列(3B2g2m1)并且

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

-包含SEQ ID NO:195或由SEQ ID NO:195组成的CDR-L3氨基酸序列(3B2g2m1)。

本文中所述的基于MuSK抗体的分子可包含可变轻(VL)链、可变重(VH)链或VL和VH链的组合。在一些实施方案中，基于MuSK抗体的分子的VH链包含下表3中提供的VH氨基酸序列中的任一者，或包含与表3中列出的VH氨基酸序列中的任一者具有至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性或相似性的氨基酸序列。在一些实施方案中，基于MuSK抗体的分子的VL链包含下表3中提供的VL氨基酸序列中的任一者，或包含与表3中列出的VL氨基酸序列中的任一者具有至少60％同一性或相似性的氨基酸序列。在一些实施方案中，同一性或相似性为至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％。

在一个实施方案中，本文中公开的基于MuSK抗体的分子含有：包含与SEQ ID NO:97具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:98具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(ii)包含与SEQ ID NO:99和252至259中任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:100具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(iii)包含与SEQ ID NO:101具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:102具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(iv)包含与SEQ ID NO:103具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:104具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(v)包含与SEQ ID NO:105具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:106具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(vi)包含与SEQ ID NO:107具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:108具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；或(vii)包含与SEQ ID NO:109具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:110具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(viii)包含与SEQ ID NO:111具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:112具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(ix)包含与SEQ ID NO:113具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:114具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(x)包含与SEQ ID NO:115具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:116具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xi)包含与SEQ ID NO:117具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ IDNO:118具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xii)包含与SEQ ID NO:119具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:120具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xiii)包含与SEQ ID NO:121具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:122具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xiv)包含与SEQ ID NO:123具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:124具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xv)包含与SEQ ID NO:125具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:126具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xvi)包含与SEQ ID NO:127具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ IDNO:128具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xvii)包含与SEQ ID NO:131和260至263中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域，和包含与SEQ ID NO:132具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；以及(xviii)包含与SEQ ID NO:133具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ IDNO:134具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域。

在一些实施方案中，本文中公开的基于MuSK抗体的分子含有：(i)包含与SEQ IDNO:196具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:197具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(ii)包含与SEQ ID NO:198具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:199具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(iii)包含与SEQ ID NO:200具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:201具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(iv)包含与SEQ ID NO:202具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:203具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(v)包含与SEQ ID NO:204具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQID NO:205具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(vi)包含与SEQ ID NO:206具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:207具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(vii)包含与SEQ ID NO:208具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:209具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(viii)包含与SEQ ID NO:210具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:211具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(vix)包含与SEQ ID NO:212具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:213具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(x)包含与SEQ ID NO:214具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ IDNO:215具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xi)包含与SEQ ID NO:216具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:217具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xii)包含与SEQ ID NO:218具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:219具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xiii)包含与SEQ ID NO:220具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:221具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xiv)包含与SEQ ID NO:222具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:223具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xv)包含与SEQ ID NO:224具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ IDNO:225具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xvi)包含与SEQ ID NO:226具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:227具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域(xvii)包含与SEQ ID NO:228具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:229具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xviii)包含与SEQ ID NO:230具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:231具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xix)包含与SEQ ID NO:232具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:233具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xx)包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ IDNO:235具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xxi)包含与SEQ ID NO:236具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:237具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域；(xxii)包含与SEQ ID NO:238具有至少80％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域和包含与SEQ ID NO:239具有至少80％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域。

在一个优选的实施方案中，本文中所公开的基于MuSK抗体的分子(或抗MuSK抗体或其抗原结合片段)包含含有与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列的重链可变结构域(VH)以及含有与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列的轻链可变结构域(VL)。

在一个实施方案中，同一性或相似性为至少81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％。

在一个优选的实施方案中，本文中所公开的基于MuSK抗体的分子包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:234的重链可变结构域和含有氨基酸序列SEQ ID NO:235的轻链可变结构域。

在一个优选的实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

在一个更优选的实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ IDNO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ IDNO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含野生型人IgG恒定Fc区、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中野生型人IgG恒定Fc区与SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267包含至少80％序列同一性，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:172或者相对于SEQ ID NO:172具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2氨基酸序列，和

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含野生型人IgG恒定Fc区、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中野生型人IgG恒定Fc区包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含野生型人IgG恒定Fc区、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中野生型人IgG恒定Fc区包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO:234并且轻链可变结构域包含SEQ ID NO:235，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域包含：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含野生型人IgG恒定Fc区、重链可变结构域和轻链可变结构域，

其中野生型人IgG恒定Fc区与SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267包含至少80％序列同一性，其中a)，其中以下突变(均根据EU编号系统编号)的一个或更多个已被引入全长重链：N297A替换；N297Q替换；L234A替换；L234D替换；L234E替换；L234G替换；L234H替换；L234F替换；L234K替换；L234Q替换；L234R替换；L234S替换；L234T替换；L235A替换；L235D替换；L235E替换；L235F替换；L235G替换；L235V替换；L235H替换；L235I替换；L235K替换；L235R替换；L235S替换；L235T替换；L235Q替换；L237A替换；S239D替换；E233P替换；L234V替换；C236缺失；G236E替换；G236R替换；G236K替换；G237A替换；P238A替换；F243L替换；D265A替换；S267E替换；H268A替换；R292P替换；Y300L替换；K322A替换；K322Q替换；A327Q替换；L328F替换；L328R替换；P329A替换；P329G替换；A330L替换；A330S替换；P331S替换；I332E替换；P396L替换；或者在本申请的第四实施方案中前面描述的突变的组合的每一者，优选地突变是L234A或L235A，更优选地突变是L234A和L235A，并且其中重链可变结构域包含与SEQID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ IDNO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

其中野生型人IgG恒定Fc区包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267，其中根据EU编号系统编号的L234A和/或L235A替换引入到所述Fc区，并且

其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

在一个实施方案中，与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子包含野生型人IgG恒定Fc区、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中野生型人IgG恒定Fc区包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267，其中根据EU编号系统编号的L234A和/或L235A被引入到所述Fc区，并且其中重链可变结构域包含SEQ ID NO:234并且轻链可变结构域包含SEQ ID NO:235，以及

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

在一个实施方案中，抗MuSK抗体或其抗原结合片段，包含：

a)全长重链，其包含与SEQ ID NO:268具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，和

b)全长轻链，其包含与SEQ ID NO:269具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

c)其中以下突变(均根据EU编号系统编号)的一个或更多个已被引入全长重链：N297A替换；N297Q替换；L234A替换；L234D替换；L234E替换；L234G替换；L234H替换；L234F替换；L234K替换；L234Q替换；L234R替换；L234S替换；L234T替换；L235A替换；L235D替换；L235E替换；L235F替换；L235G替换；L235V替换；L235H替换；L235I替换；L235K替换；L235R替换；L235S替换；L235T替换；L235Q替换；L237A替换；S239D替换；E233P替换；L234V替换；C236缺失；G236E替换；G236R替换；G236K替换；G237A替换；P238A替换；F243L替换；D265A替换；S267E替换；H268A替换；R292P替换；Y300L替换；K322A替换；K322Q替换；A327Q替换；L328F替换；L328R替换；P329A替换；P329G替换；A330L替换；A330S替换；P331S替换；I332E替换；P396L替换；或者在本申请的第四实施方案中前面描述的突变的组合的每一者，优选地突变是L234A或L235A，更优选地突变是L234A和L235A。

在一个实施方案中，抗MuSK抗体或其抗原结合片段，包含：

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:268和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:269，并且

c)其中所述全长重链包含根据EU编号系统编号的L234A和L235A突变。

在一个实施方案中，抗MuSK抗体或其抗原结合片段，包含：

a)全长重链，其包含与SEQ ID NO:270具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列和

b)全长轻链，其包含与SEQ ID NO:271具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

c)其中以下突变(均根据EU编号系统编号)中的一个或更多个已被引入全长重链：N297A替换；N297Q替换；L234A替换；L234D替换；L234E替换；L234G替换；L234H替换；L234F替换；L234K替换；L234Q替换；L234R替换；L234S替换；L234T替换；L235A替换；L235D替换；L235E替换；L235F替换；L235G替换；L235V替换；L235H替换；L235I替换；L235K替换；L235R替换；L235S替换；L235T替换；L235Q替换；L237A替换；S239D替换；E233P替换；L234V替换；C236缺失；G236E替换；G236R替换；G236K替换；G237A替换；P238A替换；F243L替换；D265A替换；S267E替换；H268A替换；R292P替换；Y300L替换；K322A替换；K322Q替换；A327Q替换；L328F替换；L328R替换；P329A替换；P329G替换；A330L替换；A330S替换；P331S替换；I332E替换；P396L替换；或者在本申请的第四实施方案中前面描述的突变的组合的每一者，优选地突变是L234A或L235A，更优选地突变是L234A和L235A。

在一个实施方案中，抗MuSK抗体或其抗原结合片段，包含：

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:270和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:271，并且

多核苷酸

本发明的另一方面涉及编码本文中所述的基于MuSK抗体的分子的分离的多核苷酸。在一个实施方案中，编码本发明的MuSK抗体的多核苷酸包含编码上述CDR中的任意一种、任意两种、任意三种、任意四种、任意五种或任意六种的核苷酸序列，包括SEQ ID NO:1至48、135至140、147至158、240至251的重链CDR和SEQ ID NO:49至96、141至146和159至195的轻链CDR。

因此，本发明提供了用于在人对象中治疗神经肌肉疾病的多核苷酸，该多核苷酸包含编码抗MuSK抗体或抗原结合片段或其VH、VL或CDR结构域的核苷酸序列。

在一个实施方案中，多核苷酸包含编码VH结构域的核苷酸序列，其中所述VH结构域包含：(i)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:1的CDR-H1、SEQ ID NO:17的CDR-H2和SEQID NO:33的CDR-H3；(ii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:34的CDR-H3；(iii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:3的CDR-H1、SEQ ID NO:19的CDR-H2和SEQ ID NO:35的CDR-H3；(iv)重链可变结构域，其包含SEQ IDNO:4的CDR-H1、SEQ ID NO:20的CDR-H2和SEQ ID NO:36的CDR-H3；(v)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:5的CDR-H1、SEQ ID NO:21的CDR-H2和SEQ ID NO:37的CDR-H3；(vi)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:6的CDR-H1、SEQ ID NO:22的CDR-H2和SEQ ID NO:38的CDR-H3；(vii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:7的CDR-H1、SEQ ID NO:23的CDR-H2和SEQ IDNO:39的CDR-H3；(viii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:8的CDR-H1、SEQ ID NO:24的CDR-H2和SEQ ID NO:40的CDR-H3；(ix)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:9的CDR-H1、SEQID NO:25的CDR-H2和SEQ ID NO:41的CDR-H3；(x)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:10的CDR-H1、SEQ ID NO:26的CDR-H2和SEQ ID NO:42的CDR-H3；(xi)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:11的CDR-H1、SEQ ID NO:27的CDR-H2和SEQ ID NO:43的CDR-H3；(xii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:12的CDR-H1、SEQ ID NO:28的CDR-H2和SEQ ID NO:44的CDR-H3；(xiii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:13的CDR-H1、SEQ ID NO:29的CDR-H2和SEQ IDNO:45的CDR-H3；(xiv)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:14的CDR-H1、SEQ ID NO:30的CDR-H2和SEQ ID NO:46的CDR-H3；(xv)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:15的CDR-H1、SEQ ID NO:31的CDR-H2和SEQ ID NO:47的CDR-H3；(xvi)重链可变结构域，其包含SEQ IDNO:16的CDR-H1、SEQ ID NO:32的CDR-H2和SEQ ID NO:48的CDR-H3；(xvii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:139的CDR-H3；和(xviii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:136的CDR-H1、SEQ ID NO:138的CDR-H2和SEQ ID NO:140的CDR-H3。

在一些实施方案中，多核苷酸包含编码VH结构域的核苷酸序列，其中所述VH结构域包含：(ii.a)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:240的CDR-H3(X2m1)；(ii.b)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:241的CDR-H3(X2m2)；(ii.c)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:242的CDR-H3(X2m3)；(ii.d)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:243的CDR-H3(X2m4)；(ii.e)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:244的CDR-H3(X2m5)；(ii.f)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:245的CDR-H3(X2m6)；(ii.g)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:246的CDR-H3(X2m7)；(ii.h)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:2的CDR-H1、SEQ ID NO:18的CDR-H2和SEQ ID NO:247的CDR-H3(X2m8)。

在一些实施方案中，多核苷酸包含编码VH结构域的核苷酸序列，其中所述VH结构域包含：(xvii.a)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:135的CDR-Hl、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:248的CDR-H3(X17m1)；(xvii.b)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:249的CDR-H3(X17m2)；(xvii.c)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:250的CDR-H3(X17m3)；(xvii.d)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:135的CDR-H1、SEQ ID NO:137的CDR-H2和SEQ ID NO:251的CDR-H3(X17m6)。

在一个实施方案中，多核苷酸包含编码VH结构域的核苷酸序列，其中所述VH结构域包含：(xix)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:150的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3；(xx)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:148的CDR-H1、SEQ IDNO:151的CDR-H2和SEQ ID NO:157的CDR-H3；(xxi)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:149的CDR-H1、SEQ ID NO:152的CDR-H2和SEQ ID NO:158的CDR-H3。

在一个实施方案中，多核苷酸包含编码VH结构域的核苷酸序列，其中所述VH结构域包含：(xxii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:153的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3；(xxiii)重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQID NO:154的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3；(xxiv)重链可变结构域，其包含SEQ IDNO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:155的CDR-H2和SEQ ID NO:156的CDR-H3。

在一个实施方案中，多核苷酸包含编码VL结构域的核苷酸序列，其中所述VL结构域包含：(i)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:49的CDR-L1、SEQ ID NO:65的CDR-L2和SEQID NO:81的CDR-L3；(ii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:50的CDR-L1、SEQ ID NO:66的CDR-L2和SEQ ID NO:82的CDR-L3；(iii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:51的CDR-L1、SEQ ID NO:67的CDR-L2和SEQ ID NO:83的CDR-L3；(iv)轻链可变结构域，其包含SEQ IDNO:52的CDR-L1、SEQ ID NO:68的CDR-L2和SEQ ID NO:84的CDR-L3；(v)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:53的CDR-L1、SEQ ID NO:69的CDR-L2和SEQ ID NO:85的CDR-L3；(vi)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:54的CDR-L1、SEQ ID NO:70的CDR-L2和SEQ ID NO:86的CDR-L3；(vii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:55的CDR-L1、SEQ ID NO:71的CDR-L2和SEQ ID NO:87的CDR-L3；(viii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:56的CDR-L1、SEQ IDNO:72的CDR-L2和SEQ ID NO:88的CDR-L3；(ix)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:57的CDR-L1、SEQ ID NO:73的CDR-L2和SEQ ID NO:89的CDR-L3；(x)轻链可变结构域，其包含SEQID NO:58的CDR-L1、SEQ ID NO:74的CDR-L2和SEQ ID NO:90的CDR-L3；(xi)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:59的CDR-L1、SEQ ID NO:75的CDR-L2和SEQ ID NO:91的CDR-L3；(xii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:60的CDR-L1、SEQ ID NO:76的CDR-L2和SEQ IDNO:92的CDR-L3；(xiii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:61的CDR-L1、SEQ ID NO:77的CDR-L2和SEQ ID NO:93的CDR-L3；(xiv)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:62的CDR-L1、SEQ ID NO:78的CDR-L2和SEQ ID NO:94的CDR-L3；(xv)轻链可变结构域，其包含SEQ IDNO:63的CDR-L1、SEQ ID NO:79的CDR-L2和SEQ ID NO:95的CDR-L3；(xvi)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:64的CDR-L1、SEQ ID NO:80的CDR-L2和SEQ ID NO:96的CDR-L3；(xvii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:141的CDR-L1、SEQ ID NO:143的CDR-L2和SEQ ID NO:145的CDR-L3；和(xviii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:142的CDR-L1、SEQ ID NO:144的CDR-L2和SEQ ID NO:146的CDR-L3。

在一个实施方案中，多核苷酸包含编码VL结构域的核苷酸序列，其中所述VL结构域包含：(xix)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:170的CDR-L2和SEQ ID NO:180的CDR-L3；(xx)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ IDNO:171的CDR-L2和SEQ ID NO:181的CDR-L3；(xxi)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:160的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:182的CDR-L3；(xxii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:183的CDR-L3；(xxiii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:171的CDR-L2和SEQID NO:184的CDR-L3；(xxiv)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:173的CDR-L2和SEQ ID NO:185的CDR-L3；(xxv)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:173的CDR-L2和SEQ ID NO:186的CDR-L3；(xxvi)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:161的CDR-L1、SEQ ID NO:174的CDR-L2和SEQ ID NO:187的CDR-L3；(xxvii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:162的CDR-L1、SEQ ID NO:174的CDR-L2和SEQ ID NO:188的CDR-L3；(xxviii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:163的CDR-L1、SEQ ID NO:174的CDR-L2和SEQ ID NO:188的CDR-L3；(xxix)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:164的CDR-L1、SEQ ID NO:174的CDR-L2和SEQ ID NO:189的CDR-L3；(xxx)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:165的CDR-L1、SEQ ID NO:175的CDR-L2和SEQ ID NO:190的CDR-L3；(xxxi)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:166的CDR-L1、SEQ ID NO:176的CDR-L2和SEQ ID NO:191的CDR-L3；(xxxi)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:167的CDR-L1、SEQ ID NO:177的CDR-L2和SEQ ID NO:192的CDR-L3；(xxxii)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:168的CDR-L1、SEQ ID NO:178的CDR-L2和SEQ ID NO:193的CDR-L3；(xxxiii)轻链可变结构域，其包含SEQID NO:169的CDR-L1、SEQ ID NO:179的CDR-L2和SEQ ID NO:194的CDR-L3。

在一个实施方案中，多核苷酸包含编码VL结构域的核苷酸序列，其中所述VL结构域包含：(xxxiv)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2、和SEQ ID NO:183的CDR-L3；(xxxv)轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:195的CDR-L3。

在一个实施方案中，编码基于MuSK抗体的分子的分离的多核苷酸编码如下表3中提供的VH和/或VL结构域序列中的任一者。本文中所述的核酸分子包括分离的多核苷酸、表达载体的部分或线性DNA序列的部分，包括用于体外转录/翻译的线性DNA序列、以及与本文中所述的抗体或其结合片段的原核、真核或丝状噬菌体表达、分泌和/或展示相容的载体。

在一个优选的实施方案中，多核苷酸包含这样的核苷酸序列，其编码包含与SEQID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列的VH。在另一个更优选的实施方案中，多核苷酸包含这样的核苷酸序列，其编码包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列的VL。

在一个优选的实施方案中，多核苷酸包含编码与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子的核苷酸序列，所述分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

在一个更优选的实施方案中，多核苷酸包含编码与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子的核苷酸序列，其包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

在一个更优选的实施方案中，多核苷酸包含SEQ ID NO:264具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的核苷酸序列或由其组成。在一个甚至更优选的实施方案中，多核苷酸包含SEQ ID NO:264或由SEQ ID NO:264组成。

在另一个更优选的实施方案中，多核苷酸包含与SEQ ID NO:265具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的核苷酸序列或由其组成。在一个甚至更优选的实施方案中，多核苷酸包含SEQ ID NO:265或由SEQ ID NO:265组成。

在一个更优选的实施方案中，多核苷酸包含编码与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子的核苷酸序列，其包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域由与SEQ ID NO:264具有至少80％同一性的核苷酸序列编码并且轻链可变结构域由与SEQ ID NO:265具有至少80％同一性的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，同一性为至少81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％。

在一个实施方案中，多核苷酸包含：

a)与编码全长重链的SEQ ID NO:276具有至少80％同一性的核苷酸序列，以及

b)与编码全长轻链的SEQ ID NO:278具有至少80％同一性的核苷酸序列。

在一个实施方案中，同一性为至少81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％。

在一个实施方案中，多核苷酸包含：

a)与编码重链可变结构域的SEQ ID NO:277具有至少80％同一性的核苷酸序列，以及

b)与编码轻链可变结构域的SEQ ID NO:279具有至少80％同一性的核苷酸序列。

在一个实施方案中，多核苷酸包含：

a)与编码全长重链的SEQ ID NO:276具有至少80％同一性的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含与编码重链可变结构域的SEQ ID NO:277具有至少80％同一性的核苷酸序列，以及

b)与编码全长轻链的SEQ ID NO:278具有至少80％同一性的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含与编码轻链可变结构域的SEQ ID NO:279具有至少80％同一性的核苷酸序列。

在一个实施方案中，多核苷酸包含：

a)核苷酸序列SEQ ID NO:276，和

b)核苷酸序列SEQ ID NO:278。

本发明的多核苷酸可以通过化学合成例如在自动化多核苷酸合成仪上的固相多核苷酸合成来产生并且组装成完整的单链或双链分子。或者，多核苷酸可以通过其他技术例如PCR，随后是常规克隆来产生。用于产生或获得给定序列的多核苷酸的技术是本领域公知的。

多核苷酸可以包含至少一种非编码序列，例如启动子或增强子序列、内含子、多腺苷酸化信号、促进RepA结合的顺式序列等。多核苷酸序列还可以包含另外的序列，其编码例如接头序列、标志物或标签序列(例如组氨酸标签或HA标签)以促进纯化或检测蛋白质、信号序列、融合蛋白配偶体(例如RepA、Fc部分)或噬菌体外壳蛋白(例如pIX或pIII)。

载体

在另一个方面中，提供了用于在人对象中治疗神经肌肉病症的载体(优选表达载体)，其包含编码本文中所述的基于MuSK抗体的分子(或抗MuSK抗体或其抗原结合片段)的多核苷酸。

这样的载体包括但不限于质粒载体、病毒载体，包括但不限于牛痘载体、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、用于杆状病毒表达的载体、基于转座子的载体或这样的任何其他载体，所述其他载体适用于将本文中所述的多核苷酸通过任何方式引入到给定生物体或遗传背景以促进编码的抗体多肽的表达。在一个实施方案中，编码重链可变结构域的多核苷酸，单独或与编码如本文中所述的轻链可变结构域的多核苷酸一起，与启动子、翻译起始区段(例如，核糖体结合序列和起始密码子)、3'非翻译区、多聚腺苷酸化信号、终止密码子和转录终止的序列组合以形成一个或更多个表达载体构建体。

在一个实施方案中，载体是腺病毒相关病毒(adenoviral-associated viral，AAV)载体。许多适合于将编码本文中所述抗体的多核苷酸递送至中枢神经系统的治疗性AAV载体是本领域已知的。参见例如，Deverman et al.,“Gene Therapy for NeurologicalDisorders:Progress and Prospects,”Nature Rev.17:641-659(2018),Nature Rev.17:641-659(2018)，其在此通过引用整体并入。合适的AAV载体包括以天然形式或针对增强的趋向性而改造的血清型AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、或AAV11。特别适合于本文中所述MuSK抗体的治疗性表达的已知对CNS具有趋向性的AAV载体包括以天然形式或针对增强的趋向性而改造的AAV1、AAV2、AAV4、AAV5、AAV8和AAV9。在一个实施方案中，AAV载体是AAV2载体。在另一个实施方案中，AAV载体是AAV5载体(Vitale etal.,“Anti-tau Conformational scFv MC1 Antibody Efficiently ReducesPathological Tau Species in Adult JNPL3 Mice,”Acta Neuropathol.Commun.6:82(2018)，其在此通过引用整体并入)。在另一个实施方案中，AAV载体是AAV9载体(Haiyan etal.,“Targeting Root Cause by Systemic scAAV9-hIDS Gene Delivery:FunctionalCorrection and Reversal of Severe MPSII in Mice,”Mol.Ther.MethodsClin.Dev.10:327-340(2018)，其在此通过引用整体并入)。在另一个实施方案中，AAV载体是AAVrh10载体(Liu et al.,“Vectored Intracerebral Immunizations with the Anti-Tau Monoclonal Antibody PHF1 Markedly Reduces Tau Pathology in MutantTransgenic Mice,”J.Neurosci.36(49):12425-35(2016)，其在此通过引用整体并入)。

在另一个实施方案中，AAV载体是杂合载体，其包含一种血清型(例如AAV2)的基因组和另一种血清型(例如AAV1或AAV3至9)的衣壳蛋白以控制趋向性。参见例如，Broekmanet al.,“Adeno-associated Virus Vectors Serotyped with AAV8 Capsid are MoreEfficient than AAV-1or-2Serotypes for Widespread Gene Delivery to theNeonatal Mouse Brain,”Neuroscience 138:501-510(2006)，其在此通过引用整体并入。在一个实施方案中，AAV载体是AAV2/8杂合载体(Ising et al.,“AAV-mediatedExpression of Anti-Tau ScFv Decreases Tau Accumulation in a Mouse Model ofTauopathy,”J.Exp.Med.214(5):1227(2017)，其在此通过引用整体并入)。在另一个实施方案中，AAV载体是AAV2/9杂合载体(Simon et al.,“A Rapid Gene Delivery-Based MouseModel for Early-Stage Alzheimer Disease-Type Tauopathy,”J.Neuropath.Exp.Neurol.72(11):1062-71(2013)，其在此通过引用整体并入)。

在另一个实施方案中，AAV载体是由于其以下而经改造或经选择的AAV载体：在实质内施用之后增强的CNS转导，例如AAV-DJ(Grimm et al.,J.Viol.82:5887-5911(2008)，其在此通过引用整体并入)；对神经干细胞和祖细胞的转导提高，例如SCH9和AAV4.18(Murlidharan et al.,J.Virol.89:3976-3987(2015)和Ojala et al.,Mol.Ther.26:304-319(2018)，其在此通过引用整体并入)；增强的逆行转导，例如rAAV2-retro(Muller etal.,Nat.Biotechnol.21:1040-1046(2003)，其在此通过引用整体并入)；选择性转导至脑内皮细胞中，例如AAV-BRI(Korbelin et al.,EMBO Mol.Med.8:609-625(2016)，其在此通过引用整体并入)；或者在IV施用之后增强的成体CNS的转导，例如AAV-PHP.B和AAVPHP.eB(Deverman et al.,Nat.Biotechnol.34:204-209(2016)和Chan et al.,Nat.Neurosci.20:1172-1179(2017)，其在此通过引用整体并入。

根据该实施方案，编码基于MuSK抗体的分子的表达载体构建体包含编码重链多肽、其功能片段、其变体、或其组合的多核苷酸。表达构建体可替代地包含编码轻链多肽、其功能片段、其变体、或其组合的核酸序列。在一个实施方案中，表达载体构建体包含编码重链多肽、其功能片段或其变体和轻链多肽、其功能片段或其变体的核酸序列。

在一个实施方案中，表达构建体还包含适合于驱动基于MuSK抗体的分子的表达的启动子序列。合适的启动子序列包括但不限于延伸因子1-α启动子(EF1a)启动子、磷酸甘油酸激酶-1启动子(PGK)启动子、巨细胞病毒即早基因启动子(CMV)、嵌合肝特异性启动子(liver-specific promoter，LSP)、巨细胞病毒增强子/鸡β-肌动蛋白启动子(CAG)、四环素响应性启动子(TRE)、甲状腺素转运蛋白启动子(TTR)、猿病毒40启动子(SV40)和CK6启动子。本领域已知的适合于驱动哺乳动物细胞中基因表达的其他启动子也适合于并入到本文中公开的表达构建体中。

在一个实施方案中，表达构建体(或表达载体)还编码接头序列。接头序列可以编码在空间上分离和/或连接表达构建体的一个或更多个组件(所编码抗体的重链和轻链组件)的氨基酸序列。

在一个优选的实施方案中，表达载体包含：编码与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合并且含有重链可变结构域和轻链可变结构域的基于抗体的分子的多核苷酸，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

在一个更优选的实施方案中，表达载体包含编码与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合并且含有重链可变结构域和轻链可变结构域的基于抗体的分子的核苷酸，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

在一个实施方案中，表达载体包含编码与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子的多核苷酸并且包含：

在一个更优选的实施方案中，表达载体包含编码与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子的多核苷酸并且包含：

c)与编码全长重链的SEQ ID NO:276具有至少80％同一性的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含与编码重链可变结构域的SEQ ID NO:277具有至少80％同一性的核苷酸序列，以及

d)与编码全长轻链的SEQ ID NO:278具有至少80％同一性的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包含与编码轻链可变结构域的SEQ ID NO:279具有至少80％同一性的核苷酸序列。

a)核苷酸序列SEQ ID NO:276，和

b)核苷酸序列SEQ ID NO:278。

宿主细胞

本发明的另一个方面是用于在人对象中治疗神经肌肉疾病的宿主细胞或无细胞表达系统，其中细胞含有编码MuSK抗体(或其抗原结合片段)的表达载体并任选地产生本文中描述的所述MuSK抗体。

本文中所述的基于MuSK抗体的分子可以任选地由细胞系、混合细胞系、永生化细胞或永生化细胞的克隆群体产生，如本领域公知的(参见例如，

Ausubel et al.，ed.，Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons，Inc.，NY，N.Y.(1987-2001)；Sambrook et al.，Molecular Cloning：A LaboratoryManual，2nd Edition，Cold Spring Harbor，N.Y.(1989)；Harlow and Lane,Antibodies，aLaboratory Manual,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)；Colligan et al.，eds.，CurrentProtocols in lmmunology，John Wiley&Sons，lnc.，NY(1994-2001)；Colligan et al.，Current Protocols in Protein Science，John Wiley&Sons，NY，N.Y.，(1997-2001)，

其在此通过引用整体并入)。

在一些实施方案中，选择用于表达的宿主细胞可以是哺乳动物来源的。合适的哺乳动物宿主细胞包括但不限于COS-1细胞、COS-7细胞、HEK293细胞、BHK21细胞、CHO细胞、BSC-1细胞、HeG2细胞、SP2/0细胞、HeLa细胞、哺乳动物骨髓瘤细胞、哺乳动物淋巴瘤细胞或其任何衍生的、永生化的或转化的细胞。其他合适的宿主细胞包括但不限于酵母细胞、昆虫细胞和植物细胞。或者，宿主细胞可以选白不能使多肽糖基化的物种或生物体，例如原核细胞或生物体，例如BL21、BL21(DE3)、BL21-GOLD(DE3)、XL1-Blue、JM109、HMS174、HMS174(DE3)，以及任何天然的或经改造的大肠杆菌属(E.coli spp)、克雷伯菌属(Klebsiellaspp)或假单胞菌属(Pseudomonas spp)菌株。

本文中所述的基于MuSK抗体的分子可以通过多种技术中的任一种使用上文所述的分离的多核苷酸、载体和宿主细胞来制备。一般而言，抗体可以通过细胞培养技术产生，包括通过常规技术产生单克隆抗体，或者通过将抗体基因、重链和/或轻链转染到合适的细菌或哺乳动物细胞宿主中，以允许产生抗体，其中抗体可以是重组的。在一个实施方案中，本文中所述的基于MuSK抗体的分子是单克隆抗体或其功能结合片段。标准分子生物学技术用于制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞并从培养基中回收抗体。可以使用通常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞的多种技术进行对宿主细胞的转染，例如通过电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。尽管可以在原核或真核宿主细胞中表达本文中所述的抗体，但有时优选在真核细胞，特别是在哺乳动物细胞中表达抗体，因为这样的真核细胞(并且特别是哺乳动物细胞)比原核细胞更有可能组装和分泌适当折叠且具有免疫活性的抗体。

如上所述，用于表达本发明的重组抗体的示例性哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括dhfr-CHO细胞，描述于Urlaub and Chasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216-4220(1980)，其在此通过引用整体并入)。另一些合适的哺乳动物宿主细胞包括但不限于NS0骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。当将编码抗体基因的重组表达载体引入到哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养足以使抗体在宿主细胞中表达或者更优选使抗体分泌到其中培养宿主细胞的培养基中的一段时间来产生抗体。

宿主细胞也可用于产生功能性抗体片段，例如Fab片段或scFv分子。可以理解，上述操作的变化也在本发明的范围内。例如，可期望用编码本文中所述抗体的轻链和/或重链的功能片段的DNA来转染宿主细胞。重组DNA技术也可用于去除编码轻链和重链中的任一者或两者的DNA中的对于与目的抗原结合不是必需的一些或全部。从这样的截短的DNA分子表达的分子也涵盖在本文中所述的抗体中。

抗体和抗体结合片段通过已知方法从重组细胞培养物中回收和纯化，所述方法包括但不限于蛋白A纯化、硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换色谱、磷酸纤维素色谱、疏水相互作用色谱、亲和色谱、羟基磷灰石色谱和凝集素色谱。高效液相色谱(“HPLC”)也可用于纯化。

在一个优选的实施方案中，宿主细胞表达与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子，其包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

在一个更优选的实施方案中，宿主细胞表达与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子，其包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，以及

在一个实施方案中，宿主细胞表达与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的基于抗体的分子，其包含：

a)核苷酸序列SEQ ID NO:276，和

b)核苷酸序列SEQ ID NO:278。

包含基于MuSK抗体的分子的组合物

可将本发明的基于MuSK抗体的分子或编码基于MuSK抗体的分子的多核苷酸有利地作为组合物施用。

因此，在另一个方面中，提供了用于在人对象中治疗神经肌肉病症的组合物，所述组合物包含本文中所定义的抗体或抗原结合片段、多核苷酸、表达载体或宿主细胞或无细胞表达系统。

在一个实施方案中，所述组合物是药物组合物。在一个实施方案中，所述药物组合物包含至少一种可药用载体或赋形剂。

在一个实施方案中，这样的组合物是包含活性治疗剂(即，MuSK抗体)和多种其他可药用组分中的一种或更多种的药物组合物。参见Remington:The Science and PracticeofPharmacy(21^st Edition)(2005)(Troy,D.B.et al.(Eds.)Lippincott Williams&Wilkins(Publs.),Baltimore MD)，其在此通过引用整体并入。优选的形式取决于预期的施用方式和治疗应用。取决于所期望的制剂，组合物还可以包含可药用无毒载体、赋形剂、稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、洗涤剂(例如，非离子型洗涤剂，例如吐温-20或吐温-80)、稳定剂(例如，糖或不含蛋白质的氨基酸)、防腐剂、组织固定剂、增溶剂和/或适合于包含在药物组合物中的其他物质，并且它们是通常用于配制用于动物或人施用的药物组合物的载剂。选择稀释剂以不影响组合的生物活性。这样的稀释剂的一些实例是蒸馏水、生理磷酸缓冲盐水、林格溶液(Ringer’s solution)、右旋糖溶液和Hank溶液。另外，药物组合物或制剂还可以包含其他载体，或无毒、非治疗性、非免疫原性稳定剂等。可用于本发明药物组合物的合适的水性和非水性载体的实例包括水、盐水、磷酸缓冲盐水、乙醇、右旋糖、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(例如橄榄油、玉米油、花生油、棉籽油和芝麻油)、羧甲基纤维素胶体溶液、黄蓍胶和可注射的有机酯(例如油酸乙酯)，和/或多种缓冲液。其他载体在制药领域是公知的。

可药用载体包括无菌水溶液或分散体以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。这样的介质和试剂用于药物活性物质的用途在本领域中是已知的。除非任何常规介质或试剂与活性化合物不相容，否则考虑其在本发明的药物组合物中的用途。

组合物还可以包含大的、缓慢代谢的大分子，例如蛋白质、多糖(如壳聚糖)、聚乳酸、聚乙醇酸和共聚物(例如，胶乳官能化琼脂糖、琼脂糖、纤维素等)、聚合物氨基酸、氨基酸共聚物和脂质聚集体(例如油滴或脂质体)。基于对本发明的基于活性抗体的分子的所期望生物学特性没有显著负面影响(例如，对抗原结合小于显著影响(例如，10％或更少的相对抑制、5％或更少的相对抑制等))来确定药物组合物的载体和其他组分的适用性。

本发明的药物组合物还可以包含可药用抗氧化剂，例如(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；以及(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。

本发明的药物组合物还可以在组合物中包含等张剂，例如糖、多元醇，例如甘露糖醇、山梨糖醇、甘油或氯化钠。

本发明的药物组合物还可以包含适合于所选施用途径的一种或更多种辅料，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂、分散剂、防腐剂或缓冲剂，它们可以提高药物组合物的保质期或有效性。本发明的抗体可以与将保护抗体免于快速释放的载体一起制备，所述载体例如控制释放制剂，包括植入物、经皮贴剂和微囊化递送系统。这样的载体可以包括明胶，单硬脂酸甘油酯，二硬脂酸甘油酯，生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸，其单独地或与蜡一起，或本领域公知的其他物质。用于制备这样的制剂的方法通常是本领域技术人员已知的。参见例如，SUSTAINED ANDCONTROLLED RELEASE DRUG DELIVERY SYSTEMS,J.R.Robinson,ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。

在一个实施方案中，本发明的抗体可配制成确保在体内适当分布。用于肠胃外施用的可药用载体包括无菌水溶液或分散体以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。这样的介质和试剂用于药物活性物质的用途在本领域中是已知的。

注射用药物组合物通常必须是无菌的并且在制备和储存条件下是稳定的。组合物可以配制成溶液剂、微乳剂、脂质体或适合实现高药物浓度的其他有序结构。载体可以是水性或非水性溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(例如橄榄油)和可注射的有机酯，例如油酸乙酯。恰当的流动性可以例如通过使用包衣(例如卵磷脂)来维持，在分散体的情况下通过维持所需的颗粒尺寸来维持，以及通过使用表面活性剂来维持。在许多情况下，将优选在所述组合物中包含等张剂，例如糖、多元醇(例如甘油、甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化钠。通过在组合物中包含延迟吸收的药剂，例如单硬脂酸盐和明胶，可实现可注射组合物的延长吸收。无菌可注射溶液可通过将所需量的活性化合物与例如上文列举的成分之一或组合(根据需要)一起并入合适的溶剂中，随后灭菌微滤来制备。通常，分散体通过将活性化合物并入到含有基本分散介质和所需其他成分的无菌载剂中来制备。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法的实例是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，其产生活性成分加上来自其先前无菌过滤溶液的任何另外的所期望成分的粉末。

对于肠胃外施用，本发明的药剂通常与药用载体一起配制成物质在生理上可接受的稀释剂中的可注射剂量的溶液剂或混悬剂，所述药用载体可以是无菌液体，例如水、油、盐水、甘油、或乙醇。另外，组合物中可以存在辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、表面活性剂、pH缓冲物质等。药物组合物的另一些组分是石油、动物、植物或合成来源的组分。花生油、大豆油和矿物油都是可用物质的实例。一般而言，二醇类(例如丙二醇或聚乙二醇)是优选的液体载体，特别是对于可注射溶液。本发明的药剂可以以储库注射剂或植入制剂的形式施用，其可以以允许活性成分持续释放的这样的方式配制。

通常，组合物制备为可注射剂，作为液体溶液剂或混悬剂；也可以制备适合于在注射之前溶解在或悬浮在液体载剂中的固体形式。制剂也可以乳化或包封在脂质体或微粒中，例如聚丙交酯、聚乙交酯或共聚物，以增强辅料效果(Langer,et al.,Science 249:1527(1990)；Hanes,et al.,Advanced Drug Delivery Reviews 28:97-119(1997)，其在此通过引用整体并入)。适合于另一些施用方式的另外制剂包括经口、鼻内和肺部制剂、栓剂和经皮应用。

在一个实施方案中，组合物包含含有以下的抗MuSK抗体(或抗原结合片段)：包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:153的CDR-H2、和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，和包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:195的CDR-L3的轻链可变结构域(3B2g2m1)。

在一个实施方案中，组合物包含含有以下的抗MuSK抗体(或抗原结合片段)：包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:153的CDR-H2、和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，和包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:183的CDR-L3的轻链可变结构域(3B2g1m1)。

在一个实施方案中，抗MuSK抗体(或抗原结合片段)含有：包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:154的CDR-H2、和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，和包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:183的CDR-L3的轻链可变结构域(3B2g1m2)。

在一个实施方案中，抗MuSK抗体(或抗原结合片段)含有：包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:154的CDR-H2、和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，和包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:195的CDR-L3的轻链可变结构域(3B2g2m2)。

在一个实施方案中，抗MuSK抗体(或抗原结合片段)含有：包含SEQ ID NO:147的CDR-H1、SEQ ID NO:150的CDR-H2、和SEQ ID NO:156的CDR-H3的重链可变结构域，和包含SEQ ID NO:159的CDR-L1、SEQ ID NO:172的CDR-L2和SEQ ID NO:183的CDR-L3的轻链可变结构域(3B2)。

在一个优选的实施方案中，组合物包含与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的抗体或抗原结合片段，其包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

在一个更优选的实施方案中，组合物包含与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的抗体或抗原结合片段，其包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

在一个优选的实施方案中，组合物包含与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的抗体或抗原结合片段，其包含野生型人IgG恒定Fc区、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中野生型人IgG恒定Fc区包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

在一个更优选的实施方案中，组合物包含与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的抗体或抗原结合片段，其包含野生型人IgG恒定Fc区、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中野生型人IgG恒定Fc区包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

在一个优选的实施方案中，组合物包含与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的抗体或抗原结合片段，其包含野生型人IgG恒定Fc区(其中根据EU编号系统编号的L234A和/或L235A替换被引入到所述Fc区中)、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中野生型人IgG恒定Fc区包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

在一个更优选的实施方案中，组合物包含与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的抗体或抗原结合片段，其包含野生型人IgG恒定Fc区(其中根据EU编号系统编号的L234A和/或L235A替换被引入到所述Fc区中)、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中野生型人IgG恒定Fc区包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

在一个实施方案中，组合物包含与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的抗体或抗原结合片段，其含有：

a)包含与SEQ ID NO:268具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列的全长重链和

b)包含与SEQ ID NO:269具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列的全长轻链，并且

在一个实施方案中，组合物包含与人肌肉特异性酪氨酸蛋白激酶(MuSK)结合的抗体或抗原结合片段，其包含：

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:268，和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:269，并且

在一个实施方案中，与在其人IgG恒定Fc区中不具有任何氨基酸替换的抗体与效应物配体的结合相比，与相同配体的结合降低至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％，或不再可检测。

a)全长重链，其包含与SEQ ID NO:270具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，和

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:270，和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:271，并且

本发明的基于MuSK抗体的分子可以通过肠胃外、表面、经口或鼻内方式施用以用于治疗性治疗。肌内注射(例如，注射到臂或腿肌肉中)和静脉内输注是本发明分子的优选施用方法。在一些方法中，这样的分子作为缓慢释放组合物或装置施用，例如Medipad^TM装置(Elan Pharm.Technologies,Dublin,Ireland)。在一些方法中，本文中公开的抗体直接注射到特定组织中，例如颅内注射。

在一个实施方案中，本发明的药物组合物是肠胃外施用的。本文中使用的短语“肠胃外施用”及其变形表示除肠内和表面施用以外的施用方式，通常通过注射，并且包括经表皮、静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、颅内、眶内、心内、皮内、腹膜内、腱内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、颅内、胸内、硬膜外和胸骨内注射、皮下和输注。在一个实施方案中，药物组合物通过静脉内或皮下注射或输注施用。

在一个实施方案中，根据本发明应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段(或者多核苷酸、表达载体、宿主细胞或者组合物)与抗胆碱能化合物组合施用。抗胆碱能化合物是能够抑制神经递质乙酰胆碱在突触或神经效应器接头(例如神经肌肉接头)处的作用的化合物。优选地，抗胆碱能化合物是能够抑制毒蕈碱乙酰胆碱受体活性的化合物。

抗胆碱能化合物也可配制在作为抗MuSK抗体或抗原结合片段的组合物中。本文中所公开的抗MuSK抗体或抗原结合片段的组合物类型也可用于包含抗胆碱能化合物的组合物。这两种化合物可存在于单个组合物中。或者，它们可以配制在单独的组合物中。

导致激活、诱导促进NMJ(神经肌肉接头)稳定性和/或修复的机制的化合物的使用对于任何神经肌肉疾病的治疗都是有吸引力的，尤其是在这样的NMJ受到影响的情况下。在一个优选的实施方案中，使用两种不同的化合物，每种化合物都激活、诱导促进NMJ稳定性和/或修复的机制，甚至是更有吸引力的，因为已证明这样的组合治疗是协同的。因此，所述组合对于神经肌肉疾病的治疗是高度有益的，特别是对于具有受影响NMJ的神经肌肉疾病或病症，例如ALS。

在一个实施方案中，根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、宿主细胞或者组合物，其中神经肌肉病症的特征在于受损的神经肌肉传递和/或NMJ去神经。

受损的神经肌肉传递的特征在于以下中的至少一种：

a.毒蕈碱过度兴奋，

b.运动神经元死亡，

c.NMJ去神经以及

d.突触传递受损。

在一个实施方案中，受损的神经肌肉传递或受损的突触传递的特征可在于MuSK信号传导不足、MuSK二聚化不足、MuSK磷酸化不足、MuSK信号传导不足和/或乙酰胆碱受体聚集不足。

在一个实施方案中，受损的神经肌肉传递或受损的突触传递的特征可在于运动表现较差、握力降低、NMJ处肌肉的收缩特性较差、对肌肉疲劳的抗性较差、肌肉重量降低。

在一个实施方案中，通过电生理学评估；药效学评估；在血清、血浆和/或脑脊液(cerebrospinal fluid，CSF)中的神经丝(例如神经丝轻链(neurofilament light chain，NFL))的水平；或NMJ活检来分析、评估或诊断神经肌肉病症。

神经肌肉病症可选自以下：肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)、脊髓性肌萎缩(spinal muscular atrophy，SMA)、重症肌无力(myasthenia gravis，MG)、先天性肌无力、兰伯特-伊顿肌无力综合征(Lambert-Eaton myasthenic syndrome，LEMS)、莱姆病、脊髓灰质炎、脊髓灰质炎后(post-poliomyelitis)、重金属中毒、肯尼迪综合征(Kennedy syndrome)、成年发作的泰-萨克斯病(adult-onset Tay-Sachs disease)、遗传性痉挛性截瘫、多灶性神经病、颈椎病、髓外肿瘤伴压迫性神经根病和脊髓病、包涵体肌炎、进行性延髓麻痹、进行性肌萎缩、运动神经元综合征和甲状腺毒性肌病。优选的神经肌肉病症是ALS。

在一个实施方案中，本文中所定义的抗MuSK抗体或其抗原结合片段可施用于无症状ALS对象。这意味着这样的抗体或抗原结合片段可在所述对象中的ALS发作之前施用。这同样适用于其他神经肌肉病症。

在本上下文中，无症状ALS对象可能是已被诊断为易发生神经肌肉病症或疾病(例如ALS)的对象。鉴定患有神经肌肉病症的个体(或对象)可意指使用诊断方法进行鉴定。这样的对象可能是在疾病发作时或疾病发作之后被诊断的有症状的对象，或者易发生神经肌肉病症或疾病(即，在疾病发作之前诊断的无症状对象，其与疾病发作前同义)。

神经肌肉病症可由遗传缺陷引起。遗传缺陷全部或部分是由基因组DNA序列相对于没有患有所述遗传缺陷的相应个体或对象的基因组DNA序列的变化引起的。遗传缺陷可以是由一个基因中的突变(单基因障碍)、多个基因中的突变(多因素遗传病症)、基因突变和环境因素的组合或染色体损伤(整个染色体的数目或结构、携带基因的结构中的变化)引起的。基因突变的类型包括碱基替换、缺失和插入。

在一个实施方案中，人对象被鉴定为患有(或为易于发生)由遗传缺陷引起的神经肌肉疾病。在一个实施方案中，神经肌肉疾病是ALS，并且遗传缺陷在SOD1基因中。易发生ALS的个体或人对象包括那些具有一种或更多种发生ALS风险因素(包括年龄增长、具有个人或家族病史，或者一种或更多种SOD-1相关疾病的遗传倾向)的个体或人对象。ALS的一个潜在遗传原因或倾向是人SOD1基因中的突变。因此，可以通过使用本领域已知的测定(例如基因测序)对对象的SOD1基因进行基因测试来鉴定患有ALS、易患ALS或易于发生ALS的对象。本领域中已知的人SOD1中至少180个突变与ALS有关。在一个实施方案中，SOD1突变是选白以下的一种或更多种突变：

A4V,H46R，G93S，A4T，G141X，D133A,V148G，N139K，G85R,G93A,V14G，C6S，I113T，D49K,G37R，

A89V,E100G，D90A,T137A，E100K,G41A，G41D，G41S，G13R，G72S，L8V,F20C，Q22L,H48R,T54R，

S591，V87A，T88δTAD，A89T，V97M，S105δSL，VI 18L，D124G，LI 14F，D90A,G12RG147R和G37R

在一个实施方案中，SOD1基因中的突变是G37R。

因此，当所述对象具有选白以下的一个SOD1突变时，可(在疾病发作之前)鉴定无症状个体或对象：

A4V，H46R，G93S，A4T，G141X，D133A，V148G，N139K，G85R，G93A，V14G，C6S，I 113T，D49K，G37R，A89V，E100G，D90A，T137A，E100K,G41A，G41D，G41S，G13R，G72S，L8V,F20C，Q22L，H48R，T54R,S591，V87A，T88δTAD，A89T，V97M，S105δSL，VI 18L，D124G，LI 14F，D90A,G12RG147R和G37R。

对象对ALS疾病易感性的分析(即易发生ALS的无症状对象)可通过分析对象的ALS的家族病史来进行。家族病史分析可包括记录ALS的三代系谱、家庭成员的病历和尸检报告的回顾、以及SOD1突变的常染色体显性模式的鉴定。

对ALS无症状(但易于发生这样的疾病)的个体或对象的鉴定也可通过ALS标志物进行分析。例如，ALS特异性标记物可以是循环微RNA、环状RNA(circRNA)或信使RNA(mRNA)、TDP-42聚集体、8-氧代-脱氧鸟苷(8-oxodG)、15-F2t-异前列烷(IsoP)、血浆TNF-a、IL-10、TRAIL、血浆IL-1b、CSF TRAIL、促炎性T辅助(Th)17细胞、Th1细胞、抗炎性Th2、调节性T细胞(Treg)、促炎性IL-1b、IL-6、IFN-g、抗炎性IL-10、胆固醇、LDL胆固醇、载脂蛋白B、HDL胆固醇、载脂蛋白AI、血浆肌酐(PCr)、血浆铁蛋白、转铁蛋白、铁调素、壳三糖苷酶-1(CHIT1)、类几丁质酶-3样蛋白2(CHI3L2/YKL39)、总τ(tTu)、磷酸化τ(pTau)、淀粉样蛋白b(Ab)、新型INHAT阻遏物(novel INHAT repressor,NIR)、泛素C端水解酶L1(UCHL1)、微管相关蛋白2、加帽肌动蛋白、类凝溶胶蛋白(CAPG)或糖蛋白非转移性黑素瘤蛋白B(glycoproteinnonmetastatic melanoma protein B，GPNMB)。当这样的标志物测量中的至少一个与相同年龄但未患ALS的正常人对象偏离至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％时，人对象可被认为易患ALS疾病。对象对ALS疾病易感性的分析也可以通过成像进行分析。例如，这样的成像分析可以是骨骼肌的MRI评估、成像衍生的功能性肌肉评分、或者与MRI组合或不组合的舌超声预测的延髓进展。

在一个实施方案中，抗胆碱能化合物与抗MuSK抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物分别、顺序或同时施用。

在一个实施方案中，抗胆碱能化合物在疾病发作时或在疾病发作之后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21天内或1、2、3、4、5、6、7周内；或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月内施用。在一个实施方案中，抗胆碱能化合物在疾病发作时或在疾病发作之后一周内施用。出乎意料地，当在疾病发作时或在疾病发作之后尽可能快地施用抗胆碱能化合物时，获得了有吸引力的结果。本领域技术人员应当理解，抗胆碱能化合物优选地不用于减少、减轻与神经肌肉病症(例如ALS)相关的症状。在一个实施方案中，抗胆碱能化合物不用于减少、减轻尿急。在一个实施方案中，抗胆碱能化合物不用于减少或减轻神经肌肉疾病(例如ALS)中的尿急。

在一个实施方案中，抗胆碱能化合物在疾病发作时施用，或在在疾病发作之后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天内；1、2、3、4、5、6或7周内；或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月内，但在疾病诊断之前施用。在一些优选的实施方案中，施用在诊断与在诊断之前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天；1、2、3、4、5、6或7周内；或者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月内之间。

在一个实施方案中，在疾病发作之前或在疾病发作时施用抗MuSK抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、宿主细胞或者组合物。疾病发作之前可意指疾病发作之前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21天，或疾病发作之前1、2，3、4、5、6，7、8周，或疾病发作之前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个月。在本上下文中，发作之前的人对象可意指没有针对所述神经肌肉病症(例如ALS)的症状的人对象。

因此，在本发明的另一个方面中，提供了用于在人对象中治疗ALS的抗MuSK抗体或其抗原结合片段(多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或组合物)，其中所述抗体或抗原结合片段在疾病发作之前施用，优选地在疾病发作之前1、2、3、4、5或6个月内施用。在本上下文中，在发作之前的人对象可意指没有针对ALS的症状的人对象。在一个实施方案中，对象被诊断为易于发生神经肌肉病症或疾病，例如ALS。

在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段结合SEQ ID NO:129的MuSK卷曲(Fz)样结构域序列。

在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含野生型人IgG恒定Fc区，其与SEQID NO:266或SEQ ID NO:267包含至少80％序列同一性。

在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段为激动剂MuSK抗体并且/或者效应物功能已被降低或消除。

在一个实施方案中，效应物功能的降低或消除是通过将以下突变(均根据EU编号系统编号)的一个或更多个引入本文中所述的基于抗体的分子的人IgG恒定Fc区SEQ IDNO:266或SEQ ID NO:267中获得的：N297A替换；N297Q替换；L234A替换；L234D替换；L234E替换；L234G替换；L234H替换；L234F替换；L234K替换；L234Q替换；L234R替换；L234S替换；L234T替换；L235A替换；L235D替换；L235E替换；L235F替换；L235G替换；L235V替换；L235H替换；L235I替换；L235K替换；L235R替换；L235S替换；L235T替换；L235Q替换；L237A替换；S239D替换；E233P替换；L234V替换；C236缺失；G236E替换；G236R替换；G236K替换；G237A替换；P238A替换；F243L替换；D265A替换；S267E替换；H268A替换；R292P替换；Y300L替换；K322A替换；K322Q替换；A327Q替换；L328F替换；L328R替换；P329A替换；P329G替换；A330L替换；A330S替换；P331S替换；I332E替换或P396L替换。

在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含：

a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列以及

在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)：

其中所述VH含有：

其中所述VL含有：

-其中所述VH包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且所述VL包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，以及

-其中所述VH含有：

○包含SEQ ID NO:147或者相对于SEQ ID NO:147具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1氨基酸序列，

○包含SEQ ID NO:153或者相对于SEQ ID NO:153具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2氨基酸序列，和

○包含SEQ ID NO:156或者相对于SEQ ID NO:156具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3氨基酸序列(3B2g2m1)并且-其中所述VL含有：

○包含SEQ ID NO:159或者相对于SEQ ID NO:159具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1氨基酸序列，

○包含SEQ ID NO:172或者相对于SEQ ID NO:172具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2氨基酸序列，和

○包含SEQ ID NO:195或者相对于SEQ ID NO:195具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3氨基酸序列(3B2g2m1)。

在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含：

a)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，和

在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含：

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:268，和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:269，并且

出乎意料地，当在疾病发作之前施用抗MuSK抗体(宿主细胞的表达载体或多核苷酸或抗原结合片段)时，获得了有吸引力的结果。在一个实施方案中，人对象因此没有针对所述神经肌肉病症(例如ALS)的症状。在这样的实施方案中，基于他/她的家族病史、遗传背景，或者基于如在他/她的血清或脑脊液(CSF)中确定的神经丝(例如神经丝轻链(NFL))的提高的水平，或者基于ALS相关基因突变的阳性基因测试，或者基于ALS的生物标志物水平的变化，或者其组合，人对象已被诊断为易于发生神经肌肉病症(例如ALS)。然而，他/她还没有发生任何明显的症状；他/她是无症状的。在一个优选的实施方案中，在被诊断出患有遗传缺陷或与ALS相关遗传突变但尚未发生任何可见症状(即无症状对象)之后，尽可能早地向人对象施用。在一个更优选的实施方案中，在被诊断出患有遗传缺陷或与ALS相关遗传突变但尚未发生任何可见症状之后(并且所述人对象具有ALS家族病史)，尽可能早地向人对象施用。在本上下文中，“立即”可意指在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24小时内，或者在1、2、3、4、5、6或7天内，或者1、2，3或4周内。在本上下文中，这样的治疗在ALS诊断没有证实的情况下最终显示出有限的或没有毒性和/或副作用，或者任何有害影响。

在本发明的另一个方面中，提供了包含本文中所述的抗MuSK抗体或其抗原结合片段和抗胆碱能化合物的组合。所述组合优选地用于在人对象中治疗神经肌肉疾病。

所述神经肌肉病症的特征在于神经肌肉传递受损和/或NMJ(神经肌肉接头)处的去神经。神经肌肉病症的特征在于以下的至少一种：

a.毒蕈碱过度兴奋，

b.运动神经元死亡，

c.神经肌肉接头(NMJ)去神经以及

d.突触传递受损。

在一个实施方案中，神经肌肉病症选自以下：肌萎缩侧索硬化(ALS)、脊髓性肌萎缩(SMA)、重症肌无力(MG)、先天性肌无力、兰伯特-伊顿肌无力综合征(LEMS)、莱姆病、脊髓灰质炎、脊髓灰质炎后、重金属中毒、肯尼迪综合征、成年发作的泰-萨克斯病、遗传性痉挛性截瘫、多灶性神经病、颈椎病、髓外肿瘤伴压迫性神经根病和脊髓病、包涵体肌炎、进行性延髓麻痹、进行性肌萎缩、运动神经元综合征和甲状腺毒性肌病。在优选的实施方案中，神经肌肉疾病是ALS。

在本上下文中，组合不需要物理上一起存在于一种组合物中的本文中所述的抗MuSK抗体或其抗原结合片段和抗胆碱能化合物。

在一个实施方案中，抗胆碱能化合物单独、顺序或同时施用。在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段在疾病发作之前施用，或者在疾病发作之前1、2、3、4、5或6个月内施用。在一个实施方案中，所述抗体或抗原结合片段在疾病发作之前施用，或者优选地在疾病发作之前1、2、3、4、5或6个月内施用，并且/或者其中抗胆碱能化合物在疾病发作时或者在疾病发作之后1、2、3、4、5、6或7周内施用。在本上下文中，在发作之前的人对象可意指没有针对所述神经肌肉病症的症状的人对象。在一个实施方案中，用抗体治疗的对象已首先被诊断为易于发生神经肌肉病症或疾病。

在一个实施方案中，抗MuSK抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO:129的MuSK卷曲(Fz)样结构域序列。

在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含：

其中所述VH含有：

其中所述VL包含：

-其中所述VH含有：

○包含SEQ ID NO:156或者相对于SEQ ID NO:156具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3氨基酸序列(3B2g2m1)并且-其中所述VL包含：

在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含：

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:268，和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:269，并且

在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含：

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:270，和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:271，并且

在一个实施方案中，抗MuSK抗体或其抗原片段(多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或组合物)在疾病发作之前(例如疾病发作之前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天或者疾病发作之前1、2、3、4、5、6或7周)施用，并且抗胆碱能化合物在疾病发作时(例如在疾病发作之后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天内或者1、2、3、4、5、6或7周内)施用。在本上下文中，在发作之前的人对象可意指没有针对所述神经肌肉病症(例如ALS)的症状的人对象。

在一个优选的实施方案中，疾病发作包括至少一种选自以下的症状：肌肉颤搐、肌肉痉挛、痉挛、肌无力、口齿不清和/或鼻音、咀嚼困难或吞咽困难(difficulty chewing orswallowing)、吞咽困难(dysphagia)、构音障碍和呼吸困难。在一个更优选的实施方案中，疾病是ALS并且疾病发作包括至少一种选自以下的症状：肌肉颤搐、肌肉痉挛、痉挛、肌无力、口齿不清和/或鼻音、咀嚼困难或吞咽困难、吞咽困难、构音障碍和呼吸困难。

疾病发作可由医师或兽医进行评估。在一个实施方案中，重量减轻的开始被认为是疾病发作。

在一个优选的实施方案中，神经肌肉病症是ALS并且抗MuSK抗体或抗原结合片段包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

在一个更优选的实施方案中，神经肌肉病症是ALS并且抗MuSK抗体或抗原结合片段包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

在一个优选的实施方案中，神经肌肉病症是ALS并且抗MuSK抗体或抗原结合片段包含野生型人IgG恒定Fc区、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中野生型人IgG恒定Fc区包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

在一个更优选的实施方案中，神经肌肉病症是ALS并且抗MuSK抗体或抗原结合片段包含野生型人IgG恒定Fc区、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中野生型人IgG恒定Fc区包含SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，以及

在一个优选的实施方案中，神经肌肉病症是ALS并且抗MuSK抗体或抗原结合片段包含野生型人IgG恒定Fc区(其中根据EU编号系统编号的L234A和/或L235A替换被引入到所述Fc区中)、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中野生型人IgG恒定Fc区包含SEQ IDNO:266或SEQ ID NO:267、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

在一个更优选的实施方案中，神经肌肉病症是ALS并且抗MuSK抗体或抗原结合片段包含野生型人IgG恒定Fc区(其中根据EU编号系统编号的L234A和/或L235A替换被引入到所述Fc区中)、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中野生型人IgG恒定Fc区包含SEQ IDNO:266或SEQ ID NO:267、重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

在一个实施方案中，神经肌肉病症是ALS并且抗MuSK抗体或抗原结合片段包含：

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:268，和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:269，并且

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:270，和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:271，并且

在一些实施方案中，抗胆碱能化合物是毒蕈碱受体拮抗剂。毒蕈碱受体也称为毒蕈碱乙酰胆碱受体或mAchR，是在某些神经元和其他细胞的细胞膜中形成G蛋白受体复合物的乙酰胆碱受体。毒蕈碱受体在介导神经递质乙酰胆碱的作用中发挥数种作用。例如，毒蕈碱受体包含在神经肌肉接头的体细胞神经元的突触前膜中，在那里它们参与乙酰胆碱释放的调节。

毒蕈碱受体的五种亚型M1至M5是普遍认可的。这种分类源于它们对某些激动剂和拮抗剂的不同选择性。M1、M3和M5受体与细胞膜中的Gq蛋白偶联，而M2和M4受体与细胞膜中的Gi/o蛋白偶联。不受该理论的约束，基因CHRM1-5分别编码M1至M5受体。

毒蕈碱受体的基础活性或组成型活性定义为在不存在乙酰胆碱、毒蕈碱受体激动剂和毒蕈碱受体拮抗剂的情况下受体的物理、生物和/或化学活性。

毒蕈碱受体的激动剂(agonist of a muscarinic receptor)，也称为毒蕈碱受体激动剂(muscarinic receptor agonist)，定义为当其接触受体时提高受体的物理、生物和/或化学活性的化合物。提高的活性意指与将受体与乙酰胆碱接触所引起的活性相似的活性。

毒蕈碱受体的拮抗剂(antagonist of a muscarinic receptor)，也称为毒蕈碱受体拮抗剂(muscarinic receptor antagonist)，定义为毒蕈碱受体中性拮抗剂或毒蕈碱负性拮抗剂。

毒蕈碱受体中性拮抗剂是这样的化合物，所述化合物与毒蕈碱受体中性激动剂或与毒蕈碱受体负性拮抗剂竞争与受体结合，从而阻断激动剂或负性拮抗剂的作用(即提高或降低活性)，而中性拮抗剂单独结合时不显著改变受体的基础活性。

在一些实施方案中，抗胆碱能化合物是毒蕈碱受体中性拮抗剂。

毒蕈碱受体负性拮抗剂是这样的化合物，当所述化合物接触受体时，即使在不存在毒蕈碱受体激动剂的情况下，也会降低受体的物理、生物和/或化学活性。降低的活性意指与将受体与乙酰胆碱接触所引起的活性相反的活性。

在一些实施方案中，抗胆碱能化合物是毒蕈碱受体负性拮抗剂。

如果拮抗剂(阻断激动剂、阻断负性拮抗剂(negative antagonist)或降低活性)的作用仅在接触一种或更多种亚型的毒蕈碱受体时显著，而在接触另一种亚型的毒蕈碱受体后作用显著较小或没有作用，则毒蕈碱受体拮抗剂被定义为对一种或更多种毒蕈碱受体亚型M1、M2、M3、M4和/或M5具有选择性。因此，毒蕈碱受体拮抗剂被称为是对毒蕈碱受体M3具有选择性，应当理解，当拮抗剂与亚型M1、M2、M4或M5的毒蕈碱受体接触时，获得显著更小的作用或没有作用。在本上下文中，显著更小可以是至多1/10、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90、1/100、1/200、1/300、1/400、1/500、1/600、1/700、1/800、1/900、1/1000、1/10000、1/100000或1/1000000小，或至少小

10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，100％，120％，140％，160％，180％，200％，220％，240％，260％，280％，300％，320％，340％，360％，380％，400％，420％，440％，460％，480％，500％，600％，700％，800％，900％，1000％，1500％，2000％，2500％，3000％，3500％，4000％，4500％，5000％，5500％，6000％，6500％，7000％，7500％，8000％，8500％，9000％，9500％，10000％，20000％，30000％，40000％，50000％，60000％，70000％，80000％，90000％，100000％，1000000％，10000000％或100000000％。

毒蕈碱受体(优选为M1、M3和M5亚型)的活性可使用动态Ca2+成像进行测量。这些受体调节IP3的水平，其然后控制Ca2+从内部储存的释放[7]。

在一些实施方案中，抗胆碱能化合物是毒蕈碱受体拮抗剂，其：

-对毒蕈碱受体M1具有选择性，或

-对毒蕈碱受体M3具有选择性，或

-对毒蕈碱受体M5具有选择性，或

-对毒蕈碱受体M1和毒蕈碱受体M3具有选择性，或

-对毒蕈碱受体M1和毒蕈碱受体M5具有选择性，或

-对毒蕈碱受体M3和毒蕈碱受体M5具有选择性，或

-对毒蕈碱受体M1、毒蕈碱受体M3和毒蕈碱受体M5具有选择性。

-对毒蕈碱受体M3具有选择性，或

-对毒蕈碱受体M1和毒蕈碱受体M3具有选择性，或

-对毒蕈碱受体M3和毒蕈碱受体M5具有选择性，或

-对毒蕈碱受体M1、毒蕈碱受体M3和毒蕈碱受体M5具有选择性。

在一些实施方案中，抗胆碱能化合物为达非那新(darifenacin)、异丙托溴铵(ipratropium bromide)、噻托溴铵(tiotropium bromide)、曲司氯铵(trospium)、格隆溴铵(glycopyrronium)、阿地溴铵(aclidinium)、芜美溴铵(umeclidinium)、索非那新(solifenacin)、双环胺(dicylomine)、弗斯特罗定(fesoterodine)、黄酮哌酯(fiavoxate)、甘罗溴铵(glycopyrrolate)、普鲁本辛(propantheline)、1R,2R,4S,5S,7S)-7-[({4-氟-2-(噻吩-2-基)苯基}氨基甲酰基)氧基]-9,9-二甲基-3-氧杂-9-氮杂三环[3.3.1.02,4]壬烷-9-甲酸([38]中的BS46)、N-(2-[3-([3R]-1-(环己基甲基)-3-哌啶基]甲基氨基)-3-氧代丙基]氨基-2-氧代乙基)-3,3,3-三苯基-丙酰胺([39]中的J-115311)，在三苯基丙酸部分和哌啶基甲胺部分之间具有一个或两个氨基酸残基的3,3,3-三苯基丙酰胺衍生物([40])，OrM3([41])或(3R)-3-[[[(3-氟苯基)[(3,4,5-三氟苯基)甲基]氨基]羰基]氧基]-1-[2-氧代-2-(2-噻吩基)乙基]-1-氮阳离子二环[2.2.2]辛烷溴化物([41]中的CHF 5407)。不受该理论的约束，这些化合物可被认为是毒蕈碱受体拮抗剂。

在一些实施方案中，抗胆碱能化合物为达非那新、异丙托溴铵、噻托溴铵、曲司氯铵、格隆溴铵、阿地溴铵、芜美溴铵、索非那新、双环胺、弗斯特罗定、黄酮哌酯、甘罗溴铵或普鲁本辛。不受该理论的约束，达非那新、异丙托溴铵和噻托溴铵可被认为是毒蕈碱受体拮抗剂。

在一些实施方案中，抗胆碱能化合物为达非那新、异丙托溴铵、噻托溴铵或曲司氯铵。不受该理论的约束，达非那新、异丙托溴铵和噻托溴铵可被认为是毒蕈碱受体拮抗剂。

在一个优选的实施方案中，抗胆碱能化合物是达非那新。达非那新可由以下结构表示：

优选地，达非那新是氢溴酸达非那星。氢溴酸达非那新可由以下结构表示：

在一些实施方案中，上述实施方案中所公开的任何抗胆碱能化合物可作为其可药用盐存在。特别地，抗胆碱能化合物是达非那新或其可药用盐。

可药用盐的实例包括但不限于碱金属(例如钠、钾或锂)盐或碱土金属(例如钙)盐；然而，当施用于所治疗的对象时通常非毒性且有效的任何盐是可接受的。其他盐可包括但不限于：(1)酸加成盐，其可通过母体化合物的游离碱与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、硫酸和高氯酸等)或有机酸(例如乙酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、马来酸、氨基甲酸酯磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸等)反应获得；或者(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子(例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)替代，或与有机碱(例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、三甲胺、N-甲基葡糖胺等)配位时形成的盐。可药用盐是本领域技术人员公知的，并且可考虑与本文中所述的实施方案结合的任何这样的可药用盐。

可接受的盐可使用本领域已知的标准操作获得，包括(但不限于)使足够酸性的化合物与提供生理学上可接受的阴离子的合适的碱反应。合适的酸加成盐由形成非毒性盐的酸形成。说明性但非限制性的实例包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、蔗糖盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。本文中所述化合物的合适碱盐由形成无毒盐的碱形成，说明性但非限制性的实例包括精氨酸、苄星(benzathine)、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、甘氨酸、赖氨酸、镁、葡甲胺、乙醇胺、钾、钠、氨丁三醇和锌盐。也可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。

上述实施方案中所公开的抗胆碱能化合物可作为组合物施用，优选地作为治疗组合物施用。在一些实施方案中，组合物被配制为一天一次的用于经口应用的延长释放片剂，所述延长释放片剂包含达非那新，优选地氢溴酸达非那新。优选地，组合物包含以下赋形剂的一种或更多种：无水磷酸氢钙、羟丙甲纤维素、硬脂酸镁、二氧化钛、氧化铁黄、氧化铁红、PEG 400和/或滑石。在一个实施方案中，组合物被称为ENABLEX^TM。ENABLEX^TM被配制为7.5mg或15mg达非那新(氢溴酸达非那新)。

在一个优选的实施方案中，神经肌肉病症是ALS，抗MuSK抗体或抗原结合片段包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:195或者相对于SEQ ID NO:195具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3氨基酸序列(3B2g2m1)

并且使用了抗胆碱能化合物。

在一个更优选的实施方案中，神经肌肉病症是ALS，抗MuSK抗体或抗原结合片段包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列并且轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，并且

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

-包含SEQ ID NO:195或由SEQ ID NO:195组成的CDR-L3氨基酸序列(3B2g2m1)

并且使用了抗胆碱能化合物。

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，和

其中重链可变结构域含有：

其中轻链可变结构域含有：

其中重链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:147或由SEQ ID NO:147组成的CDR-H1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:153或由SEQ ID NO:153组成的CDR-H2氨基酸序列，和

其中轻链可变结构域含有：

-包含SEQ ID NO:159或由SEQ ID NO:159组成的CDR-L1氨基酸序列，

-包含SEQ ID NO:172或由SEQ ID NO:172组成的CDR-L2氨基酸序列，以及

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:268，和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:269，并且

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:270，和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:271，并且

在一个人对象或患者已被诊断为患有神经肌肉病症(例如上文公开的那些之一)的实施方案中，任选地与抗胆碱能化合物组合的本发明的MuSK抗体以足以治愈、治疗或至少部分抑制疾病症状(例如通过生物化学、组织学和/或行为评估得出)(包括其并发症和疾病发展中的中间病理表型)的量施用于这样的患者。在一些实施方案中，施用本发明的治疗性分子减轻或消除神经肌肉病症。

用于治疗上述病症的本发明所提供的治疗性分子(即抗MuSK抗体或其抗原结合片段和抗胆碱能化合物)的有效剂量可根据许多不同因素而变化，包括施用方式、靶部位、患者的生理状态、所施用的其他药物。通常滴定治疗剂量以优化其安全性和效力。在给予剂量的任何给定日期，本文中所述的基于MuSK抗体的分子的剂量可以为约0.0001mg/kg至约100mg/kg患者体重，并且更通常为约0.01mg/kg至约20mg/kg患者体重。例如，剂量可以是1mg/kg体重或10mg/kg体重或在1mg/kg至10mg/kg体重范围内。因此示例性剂量包括：约0.1mg/kg至约10mg/kg体重、约0.1mg/kg至约5mg/kg体重、约0.1mg/kg至约2mg/kg体重、约0.1mg/kg至约1mg/kg体重，例如约0.15mg/kg体重、约0.2mg/kg体重、约0.5mg/kg体重、约1mg/kg体重、约1.5mg/kg体重、约2mg/kg体重、约5mg/kg体重、或约10mg/kg体重。

具有本领域普通技术的医师或兽医可以容易地确定和开出所需药物组合物的有效量。例如，医师或兽医可以以低于为达到所期望治疗作用所需水平的水平开始药物组合物中的基于抗体的分子的剂量，并逐渐提高剂量直至达到所期望效果。一般而言，本发明组合物的合适日剂量将是有效产生治疗作用的最低剂量的化合物的量。这样的有效剂量将通常取决于上述因素。施用可以例如是静脉内的、肌内的、腹膜内的或皮下的，并且例如靠近靶部位施用。如果期望的话，药物组合物的有效日剂量可以作为两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量在全天以适当的间隔分开施用来施用，任选地以单位剂型施用。虽然本发明的基于抗体的分子可以单独施用，但优选将基于抗体的分子作为药物组合物施用，如上所述。

出于治疗目的，本发明的基于MuSK抗体的分子(以及任选的抗胆碱能化合物)通常在多个时刻施用。单次剂量(例如，推注或输注)之间的间隔可以是每周、每月或每年。在一些实施方案中，本发明的基于MuSK抗体的分子(以及任选的抗胆碱能化合物)在四个月的过程中向人对象施用至少1次、至少2次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次、至少9次、至少10次。

在某些实施方案中，向人对象施用药物组合物的一个或更多个负荷剂量，随后施用一个或更多个维持剂量。在一些情况下，施用三个负荷剂量，其中负荷剂量间隔两周，例如在第1天、第15天和第29天。在一些情况下，在第三次负荷剂量之后4周开始，每4周施用维持剂量(例如，持续1个月、2个月、三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月)。

在某些实施方案中，向人对象施用三个负荷剂量的药物组合物，然后施用至少一个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12)维持剂量。在一些情况下，三个负荷剂量间隔两周施用。在一些情况下，三个负荷剂量间隔14天施用。在一些情况下，从第三个负荷剂量之后4周开始，每4周施用一个/更多个维持剂量。在一些情况下，在第三个负荷剂量之后1个月开始，每个月施用一个/更多个维持剂量。在一些情况下，在第三个负荷剂量之后28天开始，每28天施用一个/更多个维持剂量。

在一些方法中，调整剂量以达到1ng/ml至1000μg/mL的血浆浓度，优选1至1000μg/mL的血浆浓度，更优选25至300μg/mL的血浆浓度。或者，本发明的治疗分子可以作为缓慢释放制剂施用，在这种情况下需要较低频率的施用。剂量和频率取决于抗体在患者中的半衰期而变化。一般而言，人抗体显示出最长的半衰期，其次是人源化抗体、嵌合抗体和非人抗体。scFv分子通常具有短的血清半衰期。

在另一个实施方案中，包含编码如本文中所述的基于MuSK抗体的分子(以及任选地与抗胆碱能化合物组合)的重组核酸序列的药物组合物施用于对象以促进基于抗体的分子的体内表达和形成以治疗由减少的信号传导和/或MuSK的磷酸化介导的病症。适用于本发明的该实施方案的表达载体构建体在上文进行了描述。

多核苷酸组合物可使得在向对象施用组合物的至少约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、20小时、25小时、30小时、35小时、40小时、45小时、50小时、或60小时内在对象中产生基于MuSK抗体的分子。所述组合物可以使得在向对象施用组合物的至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天之内在对象中产生基于抗体的分子。所述组合物可使得在向对象施用组合物的约1小时至约6天、约1小时至约5天、约1小时至约4天、约1小时至约3天、约1小时至约2天、约1小时至约1天、约1小时至约72小时、约1小时至约60小时、约1小时至约48小时、约1小时至约36小时、约1小时至约24小时、约1小时至约12小时或约1小时至约6小时内在对象中产生基于抗体的分子。

所述组合物在施用于有此需要的对象时可使得在对象中持续产生基于抗体的分子。组合物可以使得在对象中持续至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天、40天、41天、42天、43天、44天、45天、46天、47天、48天、49天、50天、51天、52天、53天、54天、55天、56天、57天、58天、59天、或60天产生基于抗体的分子。

本文中使用的术语“治疗”及其变形意指改善、减缓或逆转疾病或病症的进展或严重程度，或改善、减缓或逆转这样的疾病或病症的一种或更多种症状或副作用。出于本发明的目的，“治疗”或其变形还意指用于获得有益或期望的临床结果的方法，其中“有益或期望的临床结果”包括但不限于部分或全部地，可检出或不可检出地，缓解症状、减轻病症或疾病程度、稳定(即，不恶化)疾病或病症状态、延迟或减慢疾病或病症状态的进展、改善或减轻疾病或病症状态、以及缓解疾病或病症。

因此，在一个实施方案中，根据本发明的抗MuSK抗体或抗原结合片段或者根据本发明的组合物用于在人对象中治疗神经肌肉病症，其中所述治疗导致所述病症的稳定。稳定可持续至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月或者至少1年、2年或3年。本文中进一步表征的每一种治疗性效果都可以被视为病症的稳定。

在一个实施方案中，抗MuSK抗体或抗原结合片段(或多核苷酸、表达载体、宿主细胞、组合物)的使用对本文中所限定的经治疗的人对象表现出治疗性效果。

这样的治疗作用可以是以下公开的作用中的至少一种。

通过与MuSK的表位结合，本发明的抗MuSK抗体或抗原结合片段能够引发激动性MuSK活性。在本申请的上下文中，“引发激动性MuSK活性”可用“激活MuSK”替代。激动性MuSK活性或MuSK的激活可在分子和/或细胞水平和/或在更生物复杂的系统中(如NMJ、突触、活生物体)触发。在本申请的上下文中，激动性MuSK活性可通过触发MuSK诱导的信号或通过在NMJ处的肌细胞中诱导MuSK激活来替代。MuSK诱导的信号(或MuSK激活或MuSK活性)可以是以下的至少一种：MuSK二聚化的诱导、MuSK酪氨酸磷酸化的诱导、在NMJ处聚集的AChR(或在肌管AChR斑块(patch)中体外聚集)的诱导的诱导或提高、完全受神经支配的NMJ的数目或百分比的提高、完全去神经的NMJ的数目或百分比的提高的降低、完全受神经支配的NMJ的数目或百分比的维持(疾病稳定/疾病进展稳定)、突触传递的可靠性的改善、运动表现的改善、运动神经元死亡的预防/稳定或甚至减少/降低、经治疗对象的寿命延长。

本发明的通过抗MuSK抗体的MuSK诱导的信号可以是MuSK二聚化的诱导，其可通过Western印迹来评估。在本发明的上下文中，在使用本发明的抗体的实验中，通过与没有任何抗体或有阴性对照或有阴性对照抗体的相同实验设置相比，当MuSK二聚化的诱导提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％或更多时，可评估MuSK的激动活性。或者，在本发明的上下文中，当在使用本发明抗体的实验中，通过与没有阳性对照抗体的相同实验设置相比，MuSK二聚化的诱导相同或大约相同(20％以下、10％以下或相同或10％以上或20％以上)时，可评估MuSK抗体的激动活性。这样的MuSK二聚化可在没有突触蛋白聚糖(agrin)的情况下进行评估。MuSK二聚化评估中的阳性对照是突触蛋白聚糖。

本发明的通过抗MuSK抗体的MuSK诱导的信号可以是MuSK酪氨酸磷酸化和这样的磷酸化的诱导，其可使用对酪氨酸磷酸化具有特异性的抗体通过Western印迹来评估。在本发明的上下文中，在使用本发明的抗体的实验中，通过与没有任何抗体的相同实验设置相比，当MuSK酪氨酸磷酸化的诱导提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、120％、150％、180％、200％或更多时，可评估MuSK的激动活性。或者，在本发明的上下文中，在使用本发明抗体的实验中，通过与没有阳性对照抗体的相同实验设置相比，当MuSK酪氨酸磷酸化的诱导相同或大约相同(低20％、低10％或相同或高10％或高20％)时，可评估MuSK抗体的激动活性。这样的MuSK酪氨酸磷酸化可在没有突触蛋白聚糖的情况下进行评估。MuSK酪氨酸磷酸化评估中的阳性对照是突触蛋白聚糖。

通过本发明的抗MuSK抗体的MuSK诱导的信号可以是在NMJ处乙酰胆碱受体(AChR)聚集的诱导，并且这样的聚集可以通过使用与AChR特异性结合的抗体对AChR进行染色并使用本领域技术人员已知的技术在荧光显微镜中可视化这样的染色来评估。或者，可在肌管AChR斑块中体外评估聚集。用于可视化AChR聚集的优选抗体是对AChR具有特异性的抗体。更优选的抗体是AlexaFluor488缀合的α-银环蛇毒素(B13422，ThermoFisher)。通常将待分析的区域固定在多聚甲醛中，并在室温下与本发明的相关抗体或者与阳性或阴性对照一起孵育，并且随后用PBS洗涤每个区域并在落射荧光显微镜下观察。在本发明的上下文中，在使用本发明抗体的实验中，通过与没有任何抗体的相同实验设置相比，当NMJ处AChR聚集的诱导相同或大约相同(即低20％、低10％或相同或高10％或高20％)或者提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％时，可评估MuSK抗体的激动活性。这样的AchR聚集可在没有突触蛋白聚糖的情况下进行评估。AchR聚集评估中的阳性对照是突触蛋白聚糖。

在一个优选的实施方案中，本发明的抗MuSK抗体表现出在NMJ处聚集乙酰胆碱受体的诱导或提高的诱导，并且与没有MuSK激动剂抗体所获得的染色相比，这样的聚集可通过可视化小鼠膈肌NMJ处的AchR的染色或增加的染色来评估。在一个实施方案中，在NMJ处的AchR聚集的这种诱导或提高导致维持突触神经支配和/或突触前和突触后排列(alignment)的更正常/生理的NMJ形态。

在NMJ处的肌细胞中的通过本发明的抗MuSK抗体的MuSK诱导的信号可以是完全受神经支配的NMJ的数目或百分比的提高、完全去神经的NMJ的数目或百分比的提高的降低、完全受神经支配的NMJ的数目或百分比的维持(疾病稳定/疾病进展稳定)、突触传递的可靠性的改善、运动神经元死亡的预防/稳定或甚至减少/降低。这些特征中的每一个都可以使用本领域技术人员已知的技术来评估，例如使用本文中先前限定的a-银环蛇毒素抗体对AchR进行染色，通过荧光共聚焦显微镜进行突触前标记和量化神经支配，EMG单纤维EMG，单个突触的电生理学，骨髓特异性区域中运动神经元细胞体的染色。所有这些测定都已在Cantor S et al2018(Elife，2018；7:e34375)中进行了描述。

抗MuSK抗体或抗原结合片段可改善经治疗对象的运动表现和/或握力。在使用本发明的抗MuSK抗体的实验中，与没有任何抗体的相同实验设置相比，当这样的运动表现或握力可提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％时，可认为经治疗对象的运动表现和握力已得到改善。可使用本领域技术人员已知的测定来评估经治疗对象的运动表现(或握力)。实验部分公开了一些示例性的方法。

抗MuSK抗体或抗原结合片段可改善经治疗对象NMJ处肌肉的收缩特性。在使用本发明的抗MuSK抗体的实验中，与没有任何抗体的相同实验设置相比，当这样的肌肉的收缩特性可提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％时，可认为经治疗对象肌肉的收缩特性已得到改善。可使用本领域技术人员已知的测定来评估经治疗对象的(NMJ处)肌肉的收缩特性。实验部分公开了一些示例性的方法。在这种情况下，对象可以是动物。

抗MuSK抗体或抗原结合片段可改善经治疗对象NMJ处肌肉的对疲劳的抗性。在使用本发明的抗MuSK抗体的实验中，与没有任何抗体的相同实验设置相比，当这样的肌肉的疲劳特性可改善至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％时，可认为经治疗对象肌肉的对疲劳的抗性已得到改善。可使用本领域技术人员已知的测定来评估经治疗对象(NMJ处)肌肉的疲劳特性。实验部分公开了一些示例性的方法。在这种情况下，对象可以是动物。

抗MuSK抗体或抗原结合片段可诱导经治疗对象NMJ处肌肉重量的提高。在使用本发明的抗MuSK抗体的实验中，与没有任何抗体的相同实验设置相比，当这样的重量可提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％时，可认为经治疗对象肌肉重量已得到改善。实验部分公开了一些示例性的方法。在这种情况下，对象可以是动物。

通过本发明的抗MuSK抗体的MuSK诱导的信号或作用的特征可在于经治疗对象的生活质量的改善或生活质量恶化出现的延迟。生活质量可以通过对象的体重来量化。生活质量的改善或生活质量恶化出现的延迟可以是至少1天、1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1年或更长。这是与患有相同病症并且未用本发明抗体治疗的对象的预期生活质量(或预期生活质量恶化的出现)进行比较来评估的。在这种情况下，对象可以是动物。

通过本发明的抗MuSK抗体的MuSK诱导的信号或作用的特征可在于经治疗对象的寿命。延长可以是至少1天、1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1年或更长。这是与患有相同病症并且未用本发明抗体治疗的对象的预期寿命进行比较来评估的。在这种情况下，对象可以是动物。

本文中所述的抗MuSK抗体的特性可根据本文中所述的测定进行测量。MuSK激动剂抗体的激活活性可相对于对照(例如可不结合MuSK的阴性对照抗体(例如同种型对照))来测量。不与MuSK结合的优选对照抗体是靶向RSV的莫维珠单抗(综述，MAbs,1(5),439-442,Sept-Octo 2009,DOI:10.4161/mabs.1.5.9496)。优选的阳性对照激动剂MuSK抗体是来自Genentech的mAb#13。用于证明激活MuSK活性的另一个优选的阳性对照分子是突触蛋白聚糖(来自R&D系统的大鼠突触蛋白聚糖，550-AG)。

在另一个实施方案中，与本文中先前限定的抗胆碱能化合物组合的抗MuSK抗体或其抗原结合片段(或多核苷酸、表达载体、宿主细胞、组合物)在本文中限定的经治疗的人对象中表现出治疗作用。在一个优选的实施方案中，与使用抗MuSK抗体或抗原结合片段(或多核苷酸、表达载体、宿主细胞、组合物)作为独立治疗相比，当使用这两种化合物时，会引发另外的并且更优选的协同治疗作用。

另外的治疗作用可能是突触周围施万细胞(perisynaptic Schwann cell，PSC)毒蕈碱活性的降低(“抑制”)，NMJ修复。这样的另外的治疗作用可以是PSC毒蕈碱活性的特异性降低(“抑制”)。这样的另外的治疗作用可以是在神经肌肉病症的情况下PSC的过度兴奋的降低(“抑制”)。本发明的化合物或组合特异性作用于毒蕈碱受体。本发明的化合物或组合似乎对PSC上表达的纯化受体没有任何影响。

NMJ修复可以是神经芽生(nerve sprouting)的诱导或提高和/或NMJ神经支配状态的提高。可以使用技术人员已知的技术来评估这些作用中的每一个。此外，抑制PSC的毒蕈碱活性可有助于维持NMJ神经支配。

在本发明的上下文中，在使用抗胆碱能化合物的实验中，与没有所述化合物的相同实验设置相比，当在NMJ处的神经芽生(或NMJ的神经支配状态)的诱导提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％时，可以评估神经芽生(或NMJ的神经支配状况)的诱导或提高。可使用神经肌肉制剂的免疫组织化学来评估神经芽生或神经支配状态。实验部分公开了如何获得这样的神经肌肉制剂。

在本发明的上下文中，在使用抗胆碱能化合物的实验中，与没有所述化合物的相同实验设置相比，当PSC的毒蕈碱活性(或者毒蕈碱过度兴奋(hyperexcitability)或过度兴奋(overexcitability))降低了至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％时，可评估PSC的毒蕈碱活性的降低(或者毒蕈碱过度兴奋(hyperexcitability)或过度兴奋(overexcitability)的降低)。

因此，在一个实施方案中，抗MuSK抗体或抗原结合片段(或多核苷酸、表达载体、宿主细胞、组合物)的使用，优选地与本文中先前限定的抗胆碱能化合物组合，表现出以下一种或更多种治疗作用：

-所述对象中完全受神经支配的NMJ的数目或百分比的提高，所述对象中完全受神经支配NMJ的数目或百分比的维持，所述对象中完全去神经的NMJ的数目或百分比的降低，突触传递的可靠性的改善，所述对象中运动神经元死亡的预防、稳定或降低；以及/或者

-所述对象的运动表现和/或握力的改善；以及/或者

-所述对象的NMJ处的肌肉的收缩特性的改善；以及/或者

-所述对象的NMJ处的肌肉的对疲劳的抗性的改善；以及/或者

-诱导所述对象的NMJ处的肌肉重量增加；以及/或者

-所述对象生活质量的改善或生活质量恶化出现的延迟；以及/或者

-所述对象中的突触周围施万细胞(PSC)的毒蕈碱活性的降低(或者毒蕈碱过度兴奋(hyperexcitability)或过度兴奋(overexcitability)的降低)或所述对象中的NMJ修复。

如实验部分中所表明的，当使用两种化合物时，获得协同治疗作用。这些协同作用包括以下参数/症状的改善/提高：运动功能和握力、NMJ处肌肉的收缩特性、对肌肉的疲劳的抗性、肌肉重量、对一般生活状况(例如体重)的影响。

基于抗体的分子的“有效量”是指在必要的剂量和时间段内足以实现预期的生物学作用或期望的治疗结果(包括但不限于临床结果)的量。当应用于本发明的基于抗体的分子时，短语“治疗有效量”旨在表示足以改善、减轻、稳定、逆转、减缓或延迟病症或疾病状态的进展或病症或疾病的症状的进展的抗体的量。在一个实施方案中，本发明的方法提供了与其他化合物组合的基于抗体的分子的施用。在这样的情况下，“有效量”是足以引起预期生物学作用的组合的量。

在另一个方面中，提供了用于预防和/或治疗神经肌肉疾病和/或障碍和/或病症的方法，其包括向有此需要的对象施用抗MuSK抗体或其抗原结合片段(多核苷酸、表达载体、宿主细胞或组合物，均如本文中先前所限定)，以及优选地抗胆碱能化合物。此方法的所有特征已在本文中先前进行了限定。

在另一个方面中，提供了抗MuSK抗体或其抗原结合片段(多核苷酸、表达载体、宿主细胞或组合物，均如本文中先前所限定)以及优选地抗胆碱能化合物用于制备预防和/或治疗神经肌肉疾病和/或障碍和/或病症的药物的用途。此用途的所有特征已在本文中先前进行了限定。

本说明书中引用的所有文件在此均通过引用整体并入。除非另有定义，否则用于公开本发明的所有术语(包括技术术语和科学术语)具有如本发明所属领域普通技术人员通常所理解的含义。通过进一步的指导，包括术语定义以更好地理解本发明的教导。除非另外指明，否则本文中所述的每个实施方案可以与本文中所述的任何其他实施方案组合在一起。

通过以下实施例进一步描述本发明，所述实施例不应被解释为对本发明范围的限制。

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实施例

实施例1：方法

动物

从杰克逊实验室(Jackson Laboratory)获得过表达人突变的SOD1^G37R转基因的小鼠，系29，并在蒙特利尔大学(Universitéde Montréal)动物设施在C57BL/6背景下饲养。这种小鼠模型是发作晚、进展缓慢的ALS模型，它重现了该疾病的人表型。该品系表型的表征先前已发表在数项ALS研究中(5、7、20、31、32)。所有实验都是根据加拿大动物保护委员会和蒙特利尔大学动物伦理委员会(Comitéde déontologie animale of UniversitédeMontréal.)的指南进行的。

临床前试验设计

根据ALS/MND中的临床前动物研究指南(33)进行临床前试验设计。这项研究是以双盲方式进行的。将来自SOD1^G37R背景的15只雄性小鼠随机分配为三组。

1.ARGX-119(3B2g2m1-hIgG1LALAdelk：具有降低的效应物功能的全长重链SEQ IDNO:268和具有降低的效应物功能的全长轻链SEQ ID:269)：和达非那新

2.ARGX-119(3B2g2m1-hIgG1LALAdelk)和载剂(达非那新对照)

3.同种型对照mAb+载剂(达非那新对照)

ARGX-119处理在发作之前(出现症状之前或无症状)开始，并且达非那新处理在发作时(出现症状)开始，并持续到处死。使用一组神经学评分(1至5级，附录1)来确定症状的发作以及疾病进展期间症状的进展和严重程度。通过以下来评估疾病的发作：重量减轻的开始(34)和震颤的出现，相当于神经评分为1，而本研究的终点在晚期有症状阶段，相当于神经评分为3至5。

在P400以20mg/kg的初始剂量开始腹膜内注射ARGX-119MuSK抗体(3B2g2m1-hlgG1LALAdelk)或安慰剂(莫维珠单抗-hlgG1LALAdelk：具有降低的效应物功能的全长重链SEQ ID NO:272和具有降低的效应物功能的全长轻链SEQ ID:273)，并随后每周以10mg/kg的剂量进行腹膜内注射，直至处死。在疾病发作时(约P425)开始经口给予达非那新(10mg/kg，在DMSO中稀释，5天/周)。达非那新的安慰剂是单独的DMSO。小鼠接受这两种处理约4个月，直到约520天的年龄，这是它们通常达到严重疾病终点的中位年龄。

莫维珠单抗-hlgG1LALAdelk:SEQ ID NO:272来源于SEQ ID NO:274并且SEQ ID:273来源于SEQ ID:275。

处理、行为监测、实验和结果分析以盲法进行。每周进行标准ALS行为测量，以测量不同研究组的疾病进展。这包括转棒仪测试、握力测量、重量测量和尾悬吊测试，以评估后肢伸展反射。在处死时，将趾长伸肌(Extensor Digitorum Longus，EDL)和比目鱼肌(Soleus，SOL)及其神经支配解剖并放置在生理室中。获得了两组测量值。首先，使用力传感器确定肌肉的功能特性(强度和疲劳)。其次，固定肌肉并确定肌肉质量。

转棒仪加速方案

使用转棒仪(TSE转棒仪，TSE系统Gmbh，Germany)评估运动协调、力量和平衡。将动物以4rpm的起始速度放置在转轮上，在300秒内提高到40rpm。在加速方案期间，小鼠每组(block)有两次尝试，并且每个环节(session)有两组(组之间有休息时间)来保持在转棒仪上，并对两个最长的掉落的等待时间取平均值。

握力

为了测量小鼠的肢的整体力量，使用了握力计(图1C)。小鼠每个环节有九次尝试(3组，每组3次尝试；每组之间间隔1分钟的休息期)，并且对每组的最佳三个值进行平均。

神经-肌肉标本(preparation)

将EDL和SOL肌肉及其支配神经的标本在如下的含氧Ree's溶液(以mM计)中解剖：110NaCl、5KCl、1MgCl₂、25NaHCO₃、2CaCl₂、11葡萄糖、0.3谷氨酸、0.4谷氨酰胺、5BES(N,N-双(2-羟基乙基)-2-氨基乙磺酸钠盐)、0.036氯化胆碱和4.34×10^-7辅羧酶。在解剖之后，用含氧Ree's溶液(95％ O₂，5％ CO₂)不断灌注神经肌肉标本。

神经肌肉特性的测量

使用手术缝合线将EDL和SOL神经-肌肉样品垂直附接到固定的力传感器(型号402A-500mN，Aurora Scientific Inc.)上。将样品在肌腱水平上附接到一端的触感器上，并在另一端附接到适应性钩上(图2A)。然后将铂参比电极与肌肉并置，定位在靠近肌腱的肌肉末端附近。为了刺激肌肉，将第二个铂电极并置在肌肉的另一端。为了引发运动神经的肌肉收缩和神经肌肉活动，将胫神经(SOL)或腓深神经(EDL)吸入到由PE管制成的电极中，并用生理溶液填充。因此，该系统被设计用于从肌肉和/或神经刺激二者中引发肌肉收缩。通过在运动神经上施加的500mV、0.1ms脉冲的单个超大方波引发神经肌肉收缩基础力响应。通过15V，1ms的方脉冲刺激引发肌肉收缩基础力响应。通过逐渐拉伸肌肉直到获得最大收缩力输出来确定最佳肌肉长度。

力-频率曲线：进行神经和肌肉刺激以生成标准力-频率图。以多个频率(5Hz，10Hz，20Hz，30Hz，40Hz，50Hz，60Hz，70Hz，80Hz，90Hz，100Hz，120Hz，140Hz，160Hz，180Hz，200Hz，250Hz，和300Hz，)进行500ms的交替神经和肌肉刺激，并监测产生的力。每次刺激之间有2分钟的休息期。在神经刺激时神经肌肉系统使用的肌肉能力比例表示为收缩能力比，并对每个频率进行如下计算：

最大力：在50Hz和80Hz的频率下获得由交替的神经和肌肉刺激产生的最大力，持续2秒，每次间隔2(SOL)或5(EDL)分钟。

肌肉疲劳：疲劳方案如图4A所示。疲劳方案因其内在特性的差异而适用于每种肌肉。对于EDL，使用在120Hz的频率下引发的持续时间为300ms的一回180次神经刺激来测试疲劳。每次刺激之间的休息期为700ms，总方案持续时间为3分钟。每10次刺激将神经刺激叠加在肌肉刺激上(18次同时的神经-肌肉刺激)，以评价肌肉储备。针对SOL的疲劳方案由以下组成：在50Hz下进行一回300次神经刺激持续500ms，其中两次刺激之间的休息期为600ms，总持续时间为5分30。每10次刺激将神经刺激叠加在肌肉刺激上(30次同时的神经-肌肉刺激)。

肌肉恢复：每个疲劳方案之后都有30分钟的恢复期，在所述恢复期期间，在疲劳方案之后5s、10s、15s、30s、45s、1分钟、1.5分钟、2分钟、2.5分钟、5分钟、10分钟、20分钟和30分钟测量神经肌肉收缩力和神经肌肉+肌肉收缩力(针对EDL为120Hz-300ms并且针对SOL为50Hz-500ms)。

肌肉重量

在每次实验之后，将肌肉固定(10分钟，PFA)并洗涤(3次洗涤，每次5分钟，PBS1X)。然后，切割两根肌腱并对肌肉进行称重，并将其储存在4℃下用于进一步处理。

统计

结果表示为平均值±SEM，其中动物数目确定为N(重复的数目)，并且肌肉数目表示为n(观察的数目)。在比较三个或四个不同组的大多数情况下，使用单因素ANOVAKruskal-Wallis检验和多重t检验。使用重复单因素ANOVA和事后Bonferroni多重比较试验来比较来自不同组中的相同动物在多个频率或随时间变化获得的值。研究中使用的置信水平为95％(α＝0.05)。所有分析均使用GraphPad 8软件(Prism)进行。

实施例2：结果

与达非那新组合的ARGX-119抗体改善运动功能和握力

测试动物的运动功能和总体力量，以研究用ARGX-119抗体和达非那新的组合治疗是否能改善肌肉功能。

首先，使用转棒仪上的标准加速方案测量运动表现、平衡和协调(图1A)，已知随着疾病的进展，这会揭示ALS运动缺陷(34)。图1B示出了如转棒仪掉落的等待时间较短所揭示的单独ARGX-119、单独达非那新或安慰剂处理组的小鼠运动表现的逐渐下降，显示了ALS运动表型的预期进展。然而，与ARGX-119+DMSO(p<0.001)、PBS+达非那新(p<0.001)和安慰剂处理的小鼠(p<0.001)相比，用ARGX-119抗体和达非那新组合处理的小鼠的运动表现不太明显，导致运动表现显著改善(图1B；ARGX-119+DMSO N＝5，ARGX-119+达非那新N＝4，PBS+达非那新N＝5；安慰剂N＝5、单因素ANOVA、Kruskal-Wallis’s检验和多重t检验)。当接近终点阶段时，这一点尤其明显，其中与安慰剂组相比，对经组合处理的小鼠观察到在P475龄至P525龄时获得的评分显著更高。事实上，在这个晚期症状阶段，大多数安慰剂小鼠不再能够在转轮上奔跑，而达非那新处理组中超过一半的小鼠仍然能够奔跑。有趣的是，从P510龄到P525龄，ARGX-119+DMSO处理的小鼠在转棒仪有改善的运动行为的趋势(分别为p＝0.07、p＝0.06和p＝0.053)。这些结果表明，与其他单一处理和安慰剂组相比，组合处理具有有益影响。

其次，测量握力，以评估组合处理是否改善了动物的总体力量(图1C)。所有组的小鼠都以相似的握力开始试验。然而，经组合处理的小鼠表现好于安慰剂组的小鼠，如P460时产生的更大握力所示，直到临床前试验结束(图1D；ARGX-119+DMSO N＝5，ARGX-119+达非那新N＝4，PBS+达非那新N＝5，安慰剂N＝5，单因素ANOVA，p<0.05，Tukey’s检验和多重t检验)。有趣的是，在P507时，与安慰剂组相比，PBS+达非那新处理的小鼠握力显著增加。

第三，测试ARGX-119抗体与达非那新组合处理是否对小鼠的一般状况产生影响。为此，监测了动物体重的变化，其是与疾病进展和存活直接相关的指标，其中动物在症状发作之后表现出重要的体重逐渐减轻。然而，两组之间没有观察到差异(ARGX-119+DMSO N＝5，ARGX-119+达非那新N＝4，PBS+达非那新N＝5，安慰剂N＝5，p>0.05，单因素ANOVA，Tukey’s检验和多重t检验)。

实施例2.1：组合处理改善神经肌肉收缩肌力和NMJ效力

改善的收缩肌肉特性是肌肉和NMJ功能也应通过组合处理而改善的有力指标。研究了两种具有不同特性和对疾病的抗性的肌肉。EDL被用作易受疾病影响的快速颤搐易疲劳肌肉，并且SOL被用作对疾病更具有抗性的慢速颤搐疲劳抗性肌肉。肌力传感器用于测量肌肉在刺激运动神经和/或直接肌肉刺激时产生的力(参见图2A)。使用该系统，以多个频率刺激运动神经通过NMJ效力引发肌肉收缩，仅反映与受神经支配的NMJ相关的收缩纤维的强度。相反，肌肉刺激使所有肌肉纤维去极化，并反映所有肌肉的最大颤搐力，与神经支配状态无关。这种方法尤其适用于对表现NMJ和肌肉缺陷的疾病(如ALS)进行表征(35，36)。

快速-易疲劳EDL肌肉

首先，执行标准的刺激方案，以生成力频率曲线(5Hz至300Hz)，以表征ARGX-119和达非那新慢性处理之后的NMJ效力。在方案期间，由运动神经刺激和NMJ激活引发的收缩产生的肌力显著高于安慰剂组(p<0.001)或ARGX-119+DMSO组(p<0.05)的EDL(图2B；ARGX-119+DMSO N＝5，ARGX-119+达非那新N＝4，安慰剂N＝5；重复单因素ANOVA，Bonferroni事后检验)。事实上，组合处理产生的颤搐力为66.3±15.7mN，安慰剂组为47.2±12.4mN并且ARGX-119+DMSO组为53.6±14.9mN。与安慰剂处理的小鼠相比，ARGX-119抗体组没有显著差异。

对于直接肌肉刺激，在更高的频率下观察到组合处理小鼠和其他组之间的显著差异(图2C)。与ARGX-119和DMSO组(p<0.05)以及安慰剂组(p<0.001)相比，组合处理组显示出显著的高峰值力(mN)。这表明EDL的快速颤搐特性的保持(37，38)(图2C，ARGX-119+DMSO N＝5，ARGX-119+达非那新N＝4，安慰剂N＝5，重复单因素ANOVA，Bonferroni事后检验和多重t检验)。有趣的是，如图2E所示，与安慰剂组相比，在经组合处理的动物中也观察到收缩力的提高，并且EDL肌肉重量的保持更好。

接下来，确定了在神经刺激时神经肌肉系统使用的肌肉能力的比例。这表示为收缩能力比。在WT小鼠中，这一比例为100％，表明肌肉的神经元控制募集了其100％的收缩能力。因此，如果处理改善了NMJ神经支配，导致产生的力提高，则认为与其他组相比，经组合处理动物的EDL肌肉中的该比例应该更高。如图2D所示，与经组合处理小鼠的52.3±1.8％(p<0.001)和安慰剂组的53.3±3.6％(p<0.0001)相比，ARGX-119+DMSO小鼠的EDL比例显著更高，为61.1±1.0％(ARGX-119+DMSO N＝5，ARGX-119+达非那新N＝4，安慰剂N＝5，单因素ANOVA，Kruskal-Wallis’s检验)。

慢速颤搐SOL肌肉

然后，执行相同的方案，但针对SOL肌肉(图3)。在神经刺激方案期间，经组合处理的组表现出与经ARGX-119+DMSO处理的组(p<0.0001)和安慰剂组(p<0.0001)相比显著更高的颤搐力(图3A；ARGX-119+DMSO N＝5，ARGX-119+达非那新N＝4，安慰剂N＝5，重复单因素ANOVA和多重t检验)。然而，与安慰剂相比，经ARGX-119+DMSO处理的组产生了较小的收缩力(p<0.05)。组合处理产生的颤搐力为114.5±3.5mN，安慰剂组的为83.1±4.5mN并且ARGX-119+DMSO组的为64.6±5.1mN。在直接肌肉刺激的情况下，在神经刺激方案期间，经组合处理的组再次表现出与经ARGX-119+DMSO处理的组(98.3±2.1mN；p<0.01)和安慰剂组(119.5±1.6mN；p<0.001)相比显著更高的颤搐力(140.6±2.1mM)(图3B；ARGX-119+DMSO N＝5，ARGX-119+达非那新N＝4，安慰剂N＝5，重复单因素ANOVA)。经ARGX-119+DMSO处理的组与安慰剂组之间也有显著差异(p<0.05)。

与经ARGX-119处理的组的收缩能力比68.4±7.8％(p<0.0001)和对照小鼠的收缩能力比56.1±相比，经组合处理的小鼠的收缩能力比(图3C)显著更高，为82.0±2.8％，(p<0.0001；ARGX-119+DMSO N＝5，ARGX-119+达非那新N＝4，安慰剂N＝5，重复单因素ANOVA)。有趣的是，在经处理的动物的SOL肌肉重量保持较好的情况下，观察到收缩力和收缩能力比的提高。事实上，与安慰剂组相比，经ARGX-119+达非那新处理的小鼠具有更好地保持的肌肉重量(p<0.05；ARGX-119+DMSO N＝5，ARGX-119+达非那新N＝4，安慰剂N＝5，单因素ANOVA)。有趣的是，ARGX-119+DMSO处理组和安慰剂组之间也存在显著差异(p＜0.001)，其中来自ARGX-119的SOL产生了比安慰剂组的SOL更好的收缩能力比。

总体而言，这些结果表明，组合处理改善了两种肌肉的肌肉和神经肌肉收缩力以及肌肉重量，但仅对于ARGX-119+DMSO组，EDL和SOL的收缩能力比提高。

实施例2.2:ARGX-119抗体与达非那新组合保持肌肉疲劳特性

除了产生的力外，肌肉的特征还在于对疲劳的抗性。例如，与慢速颤搐肌肉(如SOL)相比，主要由快速易疲劳的运动单元构成的快速颤搐肌肉(如EDL)表现出更高的疲劳(37)。在ALS中，神经支配类型的改变(从快速到慢速颤搐)和肌肉本身特性的改变会改变疲劳特性，使其更具抗性。由于ARGX-119+达非那新组合的处理显著保持了肌力，接下来研究了EDL和SOL肌肉对疲劳的抗性。

使用疲劳刺激方案，随后是30分钟的恢复期(参见图4A)。来自经安慰剂处理的组的EDL肌肉在神经被直接刺激时表现出非典型的对疲劳的抗性。然而，如延迟恢复所揭示的，来自经ARGX-119+达非那新组合处理的小鼠的EDL肌肉表现出对这种类型的快速颤搐肌肉更典型的疲劳水平(图4B；ARGX-119+达非那新N＝4，ARGX-119+DMSO N＝5，安慰剂N＝5；p<0.05，单因素ANOVA，Kruskal-Wallis’s检验和多重t检验)。有趣的是，在恢复过程中，ARGX-119处理和安慰剂组之间存在显著差异(p<0.05)，其中经ARGX-119+DMSO处理的肌肉表现出更典型的疲劳。这表明，组合处理以及单一处理(如ARGX-119抗体)的使用改善了肌肉特性。

然而，当所有肌纤维被募集时，没有发现神经+肌肉刺激的疲劳和恢复率的差异(图4C；ARGX-119+达非那新N＝4，ARGX-119+DMSO N＝5，安慰剂N＝5；p>0.05；单因素ANOVA，Kruskal-Wallis’s检验)。

SOL是慢性颤搐和抗性肌肉，与快速颤搐肌肉EDL相比，预计其对退行性疾病中观察到的去神经也更具抗性，并且恢复更快。对于SOL肌肉的神经刺激，与ARGX-119+达非那新处理组相比，如通过较慢的疲劳恢复所揭示的，安慰剂组表现出更明显的疲劳，这对于这种抗疲劳肌肉来说是非典型的。因此，组合处理恢复了SOL肌肉的抗疲劳特性。(图4D至E；ARGX-119+达非那新N＝4，ARGX-119+DMSO N＝5，安慰剂N＝5；p<0.01；单因素ANOVA，Kruskal-Wallis’s检验和多重t检验)。对于神经+肌肉刺激来说，ARGX-119+达非那新和ARGX-119+DMSO组之间存在显著差异(p<0.001)，并且ARGX-119+DMSO和安慰剂组之间存在显著差异(p<0.0001)。

Claims

1.抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其用于在人对象中治疗神经肌肉病症。

2.根据权利要求1所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段结合SEQ ID NO:129的MuSK卷曲(Fz)样结构域序列。

3.根据权利要求1或2所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含野生型人IgG恒定Fc区，所述野生型人IgG恒定Fc区与SEQ ID NO:266或SEQID NO:267包含至少80％序列同一性。

4.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其为激动剂MuSK抗体并且/或者效应物功能已被降低或消除。

5.优选地根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其中效应物功能的降低或消除是通过将以下突变(均根据EU编号系统编号)的一个或更多个引入基于抗体的分子的恒定区SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267中获得的：N297A替换；N297Q替换；L234A替换；L234D替换；L234E替换；L234G替换；L234H替换；L234F替换；L234K替换；L234Q替换；L234R替换；L234S替换；L234T替换；L235A替换；L235D替换；L235E替换；L235F替换；L235G替换；L235V替换；L235H替换；L235I替换；L235K替换；L235R替换；L235S替换；L235T替换；L235Q替换；L237A替换；S239D替换；E233P替换；L234V替换；C236缺失；G236E替换；G236R替换；G236K替换；G237A替换；P238A替换；F243L替换；D265A替换；S267E替换；H268A替换；R292P替换；Y300L替换；K322A替换；K322Q替换；A327Q替换；L328F替换；L328R替换；P329A替换；P329G替换；A330L替换；A330S替换；P331S替换；I332E替换；P396L替换；或者在本申请的第四实施方案中前面描述的突变的组合的每一者，优选地所述突变是L234A或L235A，更优选地所述突变是L234A和L235A。

6.优选地根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含野生型人IgG恒定Fc区SEQ ID NO:266或SEQ ID NO:267，并且其中将根据EU编号系统编号的L234A和L235A突变引入所述Fc区。

7.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：

8.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)：

其中所述VH含有：

其中所述VL含有：

9.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)：

-其中所述VH含有：

ο包含SEQ ID NO:147或者相对于SEQ ID NO:147具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H1氨基酸序列，

ο包含SEQ ID NO:153或者相对于SEQ ID NO:153具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H2氨基酸序列，和

ο包含SEQ ID NO:156或者相对于SEQ ID NO:156具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-H3氨基酸序列(3B2g2m1)并且

-其中所述VL含有：

ο包含SEQ ID NO:159或者相对于SEQ ID NO:159具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L1氨基酸序列，

ο包含SEQ ID NO:172或者相对于SEQ ID NO:172具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L2氨基酸序列，和

ο包含SEQ ID NO:195或者相对于SEQ ID NO:195具有1、2、3、4或5个氨基酸改变的CDR-L3氨基酸序列(3B2g2m1)。

10.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：

-重链可变结构域(VH)，其包含SEQ ID NO:234，和

-轻链可变结构域(VL)，其包含SEQ ID NO:235。

11.抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其用于在人对象中治疗神经肌肉病症，其中所述抗体或抗原结合片段包含如表3中所确定的重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)以及/或者如表1或2中所确定的CDR。

12.抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其优选地用于在人对象中治疗神经肌肉病症，其中所述抗体或抗原结合片段含有：

-包含与SEQ ID NO:270具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列的全长重链和包含与SEQ ID NO:271具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列的全长轻链，或者

-包含与SEQ ID NO:268具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列的全长重链和包含与SEQ ID NO:269具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列的全长轻链，

-其中以下突变(均根据EU编号系统编号)的一个或更多个已被引入所述全长重链：N297A替换；N297Q替换；L234A替换；L234D替换；L234E替换；L234G替换；L234H替换；L234F替换；L234K替换；L234Q替换；L234R替换；L234S替换；L234T替换；L235A替换；L235D替换；L235E替换；L235F替换；L235G替换；L235V替换；L235H替换；L235I替换；L235K替换；L235R替换；L235S替换；L235T替换；L235Q替换；L237A替换；S239D替换；E233P替换；L234V替换；C236缺失；G236E替换；G236R替换；G236K替换；G237A替换；P238A替换；F243L替换；D265A替换；S267E替换；H268A替换；R292P替换；Y300L替换；K322A替换；K322Q替换；A327Q替换；L328F替换；L328R替换；P329A替换；P329G替换；A330L替换；A330S替换；P331S替换；I332E替换；P396L替换；或者在本申请的第四实施方案中前面描述的突变的组合的每一者，优选地所述突变是L234A或L235A，更优选地所述突变是L234A和L235A。

13.抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其优选地用于根据权利要求12所述应用，其中所述抗体或抗原结合片段包含：

-全长重链，其包含SEQ ID NO:270，和

-全长轻链，其包含SEQ ID NO:271，并且

-其中所述全长重链包含根据EU编号系统编号的L234A和L235A突变。

14.抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其优选地用于根据权利要求12所述应用，其中所述抗体或抗原结合片段包含：

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:268，和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:269，并且

15.多核苷酸，其用于在人对象中治疗神经肌肉病症，所述多核苷酸包含编码权利要求1至14中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或者其VH或VL或CDR的核苷酸序列。

16.表达载体，其用于在人对象中治疗神经肌肉病症，其包含权利要求15所述的多核苷酸，优选地与允许抗体或其抗原结合片段或者其VH或VL或CDR在宿主细胞或无细胞表达系统中表达的调节区可操作地连接。

17.宿主细胞或无细胞表达系统，其用于在人对象中治疗神经肌肉病症，其含有权利要求16所述的表达载体。

18.组合物，其用于在人对象中治疗神经肌肉病症，其包含如权利要求1至14中任一项所限定的抗体或其抗原结合片段、如权利要求15中所限定的多核苷酸、如权利要求中16所限定的表达载体或者如权利要求17中所限定的宿主细胞或无细胞表达系统。

19.根据权利要求18所述的组合物，其用于在人对象中治疗神经肌肉病症，其为包含至少一种可药用载体或赋形剂的药物组合物。

20.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中所述抗体或抗原结合片段，多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达体系或者组合物与抗胆碱能化合物组合施用。

21.根据权利要求20所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中所述抗胆碱能化合物单独、顺序或同时施用。

22.根据权利要求20或21中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中所述抗胆碱能化合物是毒蕈碱受体拮抗剂，优选地是对毒蕈碱受体M1和/或毒蕈碱受体M3和/或毒蕈碱受体M5具有选择性的毒蕈碱受体拮抗剂。

23.根据权利要求22中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中所述毒蕈碱受体拮抗剂对毒蕈碱受体M3具有选择性，优选地其中所述抗胆碱能化合物是达非那新、异丙托溴铵、噻托溴铵或曲司氯铵。

24.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中所述神经肌肉病症的特征在于神经肌肉传递受损和/或NMJ(神经肌肉接头)处的去神经。

25.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中所述神经肌肉病症的特征在于以下至少一种：

a.毒蕈碱过度兴奋，

b.运动神经元死亡，

c.神经肌肉接头(NMJ)去神经以及

d.突触传递受损。

26.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中所述神经肌肉病症选自以下：肌萎缩侧索硬化(ALS)、脊髓性肌萎缩(SMA)、重症肌无力(MG)、先天性肌无力、兰伯特-伊顿肌无力综合征(LEMS)、莱姆病、脊髓灰质炎、脊髓灰质炎后、重金属中毒、肯尼迪综合征、成年发作的泰-萨克斯病、遗传性痉挛性截瘫、多灶性神经病、颈椎病、髓外肿瘤伴压迫性神经根病和脊髓病、包涵体肌炎、进行性延髓麻痹、进行性肌萎缩、运动神经元综合征和甲状腺毒性肌病。

27.根据权利要求1至14中任一项或当回引权利要求1至14中任一项时权利要求15至26中任一项所述应用的抗MuSK抗体或抗原结合片段，其中所述病症为ALS。

28.抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其用于在人对象中治疗ALS，其中所述抗体或抗原结合片段施用于无症状人对象，优选地在疾病发作之前1、2、3、4、5或6个月内施用于无症状人对象。

29.根据权利要求28所述的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其中所述无症状人对象被诊断为易于发生神经肌肉病症或疾病。

30.根据权利要求28或29所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段结合SEQ ID NO:129的MuSK卷曲(Fz)样结构域序列。

31.根据权利要求28至30所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：

c)重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，和

d)轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列。

32.根据权利要求28至31中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:268，和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:269，并且

33.根据权利要求20至27中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中所述抗胆碱能化合物在疾病发作时施用或者在疾病发作之后1、2、3、4、5、6或7周内施用。

34.组合，其包含抗MuSK抗体或其抗原结合片段和抗胆碱能化合物，其优选地用于在人对象中治疗ALS。

35.根据权利要求34所述的组合，其中所述抗体或抗原结合片段施用于无症状人对象，优选地在疾病发作之前1、2、3、4、5或6个月内施用于无症状人对象，以及/或者其中所述抗胆碱能化合物在疾病发作时施用或在疾病发作之后1、2、3、4、5、6或7周内施用。

36.根据权利要求35所述的组合，其中用所述抗体治疗的无症状人对象已首先被诊断为易于发生神经肌肉病症或疾病。

37.根据权利要求34至36所述的组合，其中所述抗MuSK抗体或其抗原结合片段结合SEQID NO:129的MuSK卷曲(Fz)样结构域序列。

38.根据权利要求34至37中任一项所述的组合，其中所述抗MuSK抗体或其抗原结合片段包含：

重链可变结构域(VH)，其包含与SEQ ID NO:234具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列，和

轻链可变结构域(VL)，其包含与SEQ ID NO:235具有至少80％同一性或相似性的氨基酸序列。

39.根据权利要求34至38中任一项所述的组合，其中所述抗体或抗原结合片段包含：

a)全长重链，其包含SEQ ID NO:268，和

b)全长轻链，其包含SEQ ID NO:269，并且

40.根据权利要求1至39中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、组合、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中在疾病发作时，将所述抗MuSK抗体或其抗原结合片段、组合、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物施用于无症状人对象，优选地在疾病发作之前1、2、3、4、5或6个月内将所述抗MuSK抗体或其抗原结合片段、组合、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物施用于无症状人对象。

41.根据权利要求40所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、组合、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中疾病发作包括至少一种选自以下的症状：肌肉颤搐、肌肉痉挛、痉挛、肌无力、口齿不清和/或鼻音、咀嚼困难或吞咽困难、吞咽困难、构音障碍和呼吸困难。

42.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、组合、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中在以下中通过电生理学评估或药效学评估来分析神经肌肉病症：在血清、血浆和/或脑脊液(CSF)中的神经丝(例如神经丝轻链(NFL))；或者NMJ活检。

43.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、组合、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中向所述人对象施用所述抗MuSK抗体或其抗原结合片段、所述组合、多核苷酸、表达载体，宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物导致以下治疗作用的一种或更多种：

-所述对象的运动表现和/或握力的改善；以及/或者

-所述对象的NMJ处的肌肉的收缩特性的改善；以及/或者

-所述对象的NMJ处的肌肉的对疲劳的抗性的改善；以及/或者

-诱导所述对象的NMJ处的肌肉重量增加；以及/或者

-所述对象中的突触周围施万细胞(PSC)的毒蕈碱活性的降低(或毒蕈碱过度兴奋的降低)或所述对象中的NMJ修复。

44.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、组合、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中所述治疗导致所述病症的稳定。

45.根据前述权利要求中任一项所述应用的抗MuSK抗体或其抗原结合片段、组合、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物，其中相对于没有用所述抗MuSK抗体或其抗原结合片段、多核苷酸、表达载体、宿主细胞、无细胞表达系统或者组合物治疗的人对象，所述神经肌肉病症的治疗导致受治人对象通过电生理学评估或药效学评估中的改善；在血清、血浆和/或脑脊液(CSF)中的神经丝(例如神经丝轻链(NFL))中的改善；或者在NMJ活检中的改善。