HK40070552B - Improvements in nucleic acid sequencing - Google Patents
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- Procédé de préparation d'une matrice destinée à une réaction de séquençage d'acides nucléiques, le procédé comprenant :a) la fourniture d'un support solide, dans lequel ledit support solide comprend une pluralité d'amorces d'acide nucléique immobilisées sur celui-ci ;b) la mise en contact d'une préparation de bibliothèques d'acides nucléiques avec le support solide, la préparation de bibliothèques comprenant une pluralité de fragments à simple brin d'acide nucléique de matrice à séquencer, les fragments d'acide nucléique de matrice comprenant en outre une ou plusieurs séquences d'acide nucléique adaptateur qui s'hybrident à une ou plusieurs des amorces d'acide nucléique, et la préparation de bibliothèques ayant une concentration en acides nucléiques de 400 pM ou moins ;c) le fait de permettre aux fragments à simple brin d'acide nucléique de matrice de se lier auxdites amorces d'acide nucléique, immobilisant de ce fait lesdits fragments à simple brin sur ledit support solide ; etd) la répétition des étapes b) et c) au moins trois fois supplémentaires ; dans lequel la répétition de l'étape de mise en contact se déroule avec la même préparation de bibliothèques que celle utilisée à l'étape (b) ; pour fournir de ce fait un support solide ayant des fragments à simple brin d'acide nucléique de matrice immobilisés sur celui-ci ; dans lequel le procédé ne comprend pas d'étape d'amplification jusqu'à ce que les étapes b) et c) aient été répétées au moins trois fois.
- Procédé selon la revendication 1, dans lequel le procédé est un procédé de préparation d'une matrice destinée à une réaction de séquençage d'acides nucléiques, le procédé comprenant :a) la fourniture d'une cellule d'écoulement comprenant un support solide ayant une pluralité de nanopuits formés sur celui-ci, chaque nanopuits comprenant une pluralité d'amorces d'acide nucléique immobilisées sur le support solide, et lesnanopuits étant formés dans un réseau à motifs ayant un pas de 500 nm ou moins ;b) la mise en contact d'une préparation de bibliothèques d'acides nucléiques avec la cellule d'écoulement, la préparation de bibliothèques comprenant une pluralité de fragments à simple brin d'acide nucléique de matrice à séquencer, les fragments d'acide nucléique de matrice comprenant en outre une ou plusieurs séquences d'acide nucléique adaptateur qui s'hybrident à une ou plusieurs des amorces d'acide nucléique, et la préparation de bibliothèques ayant une concentration en acides nucléiques de 400 pM ou moins ;c) le fait de permettre aux fragments à simple brin d'acide nucléique de matrice de se lier auxdites amorces d'acide nucléique, immobilisant de ce fait lesdits fragments à simple brin dans les nanopuits ; etd) la répétition des étapes b) et c) au moins trois fois supplémentaires ; dans lequel la répétition de l'étape de mise en contact se déroule avec la même préparation de bibliothèques que celle utilisée à l'étape (b) ; pour fournir de ce fait une cellule d'écoulement ayant des fragments à simple brin d'acide nucléique de matrice immobilisés dans des nanopuits ; dans lequel le procédé ne comprend pas d'étape d'amplification jusqu'à ce que les étapes b) et c) aient été répétées au moins trois fois.
- Procédé selon la revendication 1 ou la revendication 2 dans lequel une concentration effective en acides nucléiques calculée en tant que nombre de cycles de l'étape (c) fois la concentration en acides nucléiques de bibliothèque est d'au moins 800 pM.
- Procédé selon l'une quelconque revendication précédente dans lequel la préparation de bibliothèques a une concentration en acides nucléiques de 250 pM ou moins.
- Procédé selon l'une quelconque revendication précédente comprenant la dénaturation d'une préparation de bibliothèques comprenant des fragments à double brin d'acide nucléique de matrice à séquencer, pour obtenir les fragments à simple brin d'acide nucléique de matrice à séquencer utilisés à l'étape (b).
- Procédé selon l'une quelconque revendication précédente comprenant en outre l'amplification des fragments à simple brin d'acide nucléique immobilisés, pour générer de ce fait de multiples copies des fragments.
- Procédé selon l'une quelconque revendication précédente dans lequel le support solide est du verre.
- Procédé selon la revendication 1, ou les revendications 3 à 7 prises en dépendance de la revendication 1, dans lequel ledit support solide est sur une cellule d'écoulement, dans lequel ledit support solide a une pluralité de nanopuits formés sur celui-ci, chaque nanopuits comprenant une pluralité d'amorces d'acide nucléique immobilisées sur le support solide, et les nanopuits étant formés dans un réseau à motifs.
- Procédé selon la revendication 8, dans lequel le pas du réseau de nanopuits est de 500 nm ou moins.
- Procédé selon l'une quelconque des revendications 2 à 9 dans lequel le pas du réseau de nanopuits est de 350 nm ou moins.
- Procédé selon la revendication 1, ou les revendications 3 à 7 prises en dépendance de la revendication 1, dans lequel le support solide est une microperle.
- Procédé selon l'une quelconque revendication précédente comprenant en outre le séquençage des fragments à simple brin d'acide nucléique immobilisés.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62/987,047 | 2020-03-09 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HK40070552A HK40070552A (en) | 2022-10-28 |
| HK40070552B true HK40070552B (en) | 2024-12-20 |
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