HK1237261B

HK1237261B - Nucleic acid constructs and gene therapy vectors for use in the treatment of wilson disease

Info

Publication number: HK1237261B
Application number: HK17111164.8A
Authority: HK
Inventors: Oihana MURILLO SAUCA; Gloria GONZÁLEZ ASEGUINOLAZA; Rubén HERNÁNDEZ ALCOCEBA
Original assignee: Fundación Para La Investigación Mèdica Aplicada
Priority date: 2014-12-17
Filing date: 2015-12-17
Publication date: 2021-06-25

Claims

Construction d'acide nucléique qui comprend
a) une séquence nucléotidique d'un promoteur eucaryote ;

b) une séquence nucléotidique codant pour une ATPase 2 tronquée de transport de cuivre (ATP7B) dans laquelle les sites N-terminaux associés aux métaux lourds HMA 1, HMA 2, HMA 3, et HMA 4 sont totalement délétés et HMA 5 et HMA 6 restent non délétés ; et

c) une séquence signal de polyadénylation,

d) flanquée par une répétition terminale inversée en 5' (ITR) et une 3'ITR d'un virus adéno-associé (AAV).
Construction d'acide nucléique selon la revendication 1, dans laquelle la délétion dans l'ATP7B tronquée comprend les acides aminés 57 à 486 de la séquence SEQ ID NO : 2.
Construction d'acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, dans laquelle la séquence d'acides aminés de l'ATP7B tronquée est SEQ ID NO : 7.
Construction d'acide nucléique selon la revendication 3, dans laquelle la séquence nucléotidique codant pour l'ATP7B tronquée est sélectionnée dans le groupe consistant en
a) la séquence codante CDS de SEQ ID NO : 6, bases 473..3580 ;

b) la séquence SEQ ID NO : 8 ; et

c) une séquence dans laquelle au moins 827, au moins 879, au moins 931, ou au moins 983 des codons codant pour l'ATP7B tronquée sont identiques aux codons de la séquence codante SEQ ID NO : 8.
Construction d'acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle la séquence nucléotidique du promoteur eucaryote est une séquence nucléotidique du promoteur du gène de l'α1-antitrypsine, ou une séquence promotrice chimérique qui comprend une séquence promotrice du gène de l'α1-antitrypsine combinée à un élément amplificateur du gène de l'albumine.
Construction d'acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle la séquence nucléotidique du promoteur eucaryote est la séquence délimitée par les bases 156..460 de SEQ ID NO : 1 (AAT), ou SEQ ID NO : 5 (EalbPa1AT).
Construction d'acide nucléique selon la revendication 1, dans laquelle les séquences 5'ITR et 3'ITR d'un AAV sont d'un sérotype sélectionné dans le groupe consistant en les AAV1, AAV2, et AAV4, de préférence sont du sérotype AAV2.
Vecteur d'expression qui comprend une construction d'acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 7.
Vecteur d'expression selon la revendication 9, dans lequel le vecteur est un vecteur AAV.
Cellule hôte comprenant une construction d'acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, ou un vecteur d'expression selon l'une quelconque des revendications 8 et 9.
Particule virale qui comprend une construction d'acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 ou un vecteur d'expression selon l'une quelconque des revendications 8 et 9.
Particule virale selon la revendication 11, dans laquelle la particule virale comprend des protéines de capside d'un AAV.
Composition pharmaceutique qui comprend une construction d'acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, un vecteur d'expression selon l'une quelconque des revendications 8 et 9, ou une cellule hôte selon la revendication 10 ou une particule virale selon l'une quelconque des revendications 11 et 12, et un vecteur pharmaceutiquement acceptable.
Construction d'acide nucléique qui comprend
a) une séquence nucléotidique d'un promoteur eucaryote ;

b) une séquence nucléotidique codant pour une ATP7B tronquée dans laquelle les sites N-terminaux associés aux métaux lourds HMA 1, HMA 2, HMA 3, et HMA 4 sont totalement délétés et HMA 5 et HMA 6 restent non délétés ; et

c) une séquence signal de polyadénylation ;

d) flanquée par une répétition terminale inversée en 5' (ITR) et une 3' ITR d'un virus adéno-associé (AAV) ;
un vecteur d'expression selon l'une quelconque des revendications 8 et 9, une cellule hôte selon la revendication 10 ou une particule virale selon l'une quelconque des revendications 11 et 12, pour son utilisation en tant que médicament.
Construction d'acide nucléique qui comprend :
a) une séquence nucléotidique d'un promoteur eucaryote ;

b) une séquence nucléotidique codant pour une ATP7B dans laquelle les sites N-terminaux associés aux métaux lourds HMA 1, HMA 2, HMA 3, et HMA 4 sont totalement délétés et HMA 5 et HMA 6 restent non délétés ; et

c) une séquence signal de polyadénylation ;

d) flanquée par une répétition terminale inversée en 5' (ITR) et une 3' ITR d'un virus adéno-associé (AAV) ;
un vecteur d'expression selon l'une quelconque des revendications 8 et 9, une cellule hôte selon la revendication 10 ou une particule virale selon l'une quelconque des revendications 11 et 12 ou une composition pharmaceutique selon la revendication 13 pour son utilisation dans le traitement d'une affection causée par une déficience ou un dysfonctionnement de l'ATP7B chez un être humain, sélectionnée parmi les affections suivantes : des troubles cholestatiques, la maladie d'Alzheimer, le cancer, et la maladie de Wilson.
Procédé de production de particules virales selon l'une quelconque des revendications 11 et 12, comprenant les étapes suivantes :
a) culture d'une cellule hôte selon la revendication 10 dans un milieu de culture ; et

b) récolte des particules virales du surnageant de culture et/ou de l'intérieur des cellules.