FR3134289A1 - Non-destructive extraction of compounds of nutritional interest from living algae - Google Patents
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Abstract
La présente demande de brevet concerne un procédé d’extraction de composés hydrosolubles d’intérêt nutritionnels à partir d’une culture de microalgues vivantes grâce à une perméation temporaire de la paroi cellulaire.This patent application concerns a process for extracting water-soluble compounds of nutritional interest from a culture of living microalgae using temporary permeation of the cell wall.
Description
La présente demande de brevet concerne un procédé d’extraction de composés hydrosolubles d’intérêt nutritionnels à partir d’une culture de microalgues vivantes grâce à une perméation temporaire de la paroi cellulaire.This patent application concerns a process for extracting water-soluble compounds of nutritional interest from a culture of living microalgae using temporary permeation of the cell wall.
En raison des faibles volumes de production des microalgues dans le monde et de leur coût élevé, leur utilisation reste encore très limitée notamment dans le domaine de l’alimentation humaine.Due to the low production volumes of microalgae worldwide and their high cost, their use still remains very limited, particularly in the field of human food.
De nombreux industriels préfèrent ainsi valoriser les molécules à haute valeur ajoutée telle de la phycocyanine issue de la spiruline, ou bien l’astaxanthine extraite d’Haematococcus pluvialisdestinées à des applications pharmaceutiques.Many manufacturers thus prefer to promote molecules with high added value such as phycocyanin from spirulina, or astaxanthin extracted from Haematococcus pluvialis intended for pharmaceutical applications.
Le secteur de l’alimentaire quant à lui est confronté à de nombreux obstacles dont l’organoleptique constitue le principal. En effet, malgré leurs propriétés nutritionnelles exceptionnelles, les microalgues restent très peu consommées telles quelles du fait de leurs caractéristiques organoleptiques quelque peu rebutantes pour le consommateur lambda.The food sector is faced with numerous obstacles, the main one being organoleptics. Indeed, despite their exceptional nutritional properties, microalgae are rarely consumed as they are due to their organoleptic characteristics that are somewhat off-putting for the average consumer.
Pour pallier ce problème, de nombreux acteurs recourent à des procédés d’extraction et de fractionnement de la biomasse afin d’éliminer les contraintes organoleptiques et de ne conserver que les éléments d’intérêt nutritionnel/santé.To overcome this problem, many players use biomass extraction and fractionation processes in order to eliminate organoleptic constraints and only retain elements of nutritional/health interest.
Ainsi Soto-Sierra (2018) décrit différentes méthodes d’extraction physiques permettant d’extraire les protéines des algues pour des applications alimentaires comme les ultrasons, le broyage à billes, l’homogénéisation haute pression. Toutes ces techniques permettent l’obtention d’un extrait riche en protéines, séparé des parois cellulaires vertes, qui est ensuite purifié puis séché avant utilisation. Ces techniques peuvent être appliquées à diverses espèces de microalgues comme la spiruline, la chlorelle et bien d’autres. De manière similaire, Bleakley (2017) présente les techniques d’extraction appliquées aux algues pour en extraire les protéines destinées à des usages alimentaires pour l’homme. On peut ainsi citer la méthode biologique faisant intervenir l’hydrolyse enzymatique, le recourt à des procédés physiques ou bien les méthodes chimiques avec des traitements acides par exemple.Soto-Sierra (2018) describes different physical extraction methods for extracting proteins from algae for food applications such as ultrasound, ball milling, high pressure homogenization. All of these techniques make it possible to obtain a protein-rich extract, separated from the green cell walls, which is then purified and then dried before use. These techniques can be applied to various species of microalgae such as spirulina, chlorella and many others. Similarly, Bleakley (2017) presents extraction techniques applied to algae to extract proteins intended for human food use. We can thus cite the biological method involving enzymatic hydrolysis, the use of physical processes or chemical methods with acid treatments for example.
Cependant ces Procédés sont longs, coûteux et nécessitent un approvisionnement continu en biomasse. D’après Vinayak (2015), les opérations post-récolte représenteraient 50 à 80% du coût global du procédé d’obtention de molécules à haute valeur ajoutée à partir de biomasse d’algue.However, these processes are long, expensive and require a continuous supply of biomass. According to Vinayak (2015), post-harvest operations represent 50 to 80% of the overall cost of the process of obtaining molecules with high added value from algal biomass.
Afin de réduire le nombre d’opérations unitaires et de continuer à travailler avec la même biomasse renouvelée, certains acteurs se sont intéressés à des techniques d’extraction dites non-destructives. Ainsi, le brevet US2012095245 (A1) (2012) mentionne l’emploi combiné d’un traitement aux ultrasons et l’usage d’un solvant organique pour extraire les lipides deNannochloropsistout en maintenant la culture vivante après traitement. De manière similaire, Hejazi (2004) recourt à un système de réacteur à deux phases permettant le passage de dodécane à contre-courant de la culture deDunaliella salinapour l’extraction en continue du bêta-carotène. Durant la période d’extraction, le dodécane, qui est un solvant biocompatible avec les algues, est renouvelé pour une meilleure efficacité d’extraction. Une fois, les cellules traites, elles sont remises en culture. De la même façon, Samori (2019) emploie du cyclohexane pour l’extraction biocompatible de l’astaxanthine issue de cultures vivantes d’Haematococcus pluvialis.In order to reduce the number of unit operations and continue to work with the same renewed biomass, certain players have become interested in so-called non-destructive extraction techniques. Thus, patent US2012095245 (A1) (2012) mentions the combined use of ultrasound treatment and the use of an organic solvent to extract the lipids from Nannochloropsis while maintaining the culture alive after treatment. Similarly, Hejazi (2004) uses a two-phase reactor system allowing the passage of dodecane against the current of the Dunaliella salina culture for the continuous extraction of beta-carotene. During the extraction period, dodecane, which is a solvent biocompatible with algae, is renewed for better extraction efficiency. Once the cells have been treated, they are returned to culture. Similarly, Samori (2019) employs cyclohexane for the biocompatible extraction of astaxanthin from live cultures of Haematococcus pluvialis .
Ces techniques biocompatibles présentent l’avantage de réduire le nombre d’opérations unitaires et de renouveler la culture d’algues contrairement à un procédé classique d’extraction. Néanmoins, ces méthodes nécessitent l’usage en grande quantité de solvants organiques peu écologiques et souvent interdits en alimentaire.These biocompatible techniques have the advantage of reducing the number of unit operations and renewing the cultivation of algae unlike a traditional extraction process. However, these methods require the use of large quantities of organic solvents that are not very ecological and are often prohibited in food.
Le Demandeur a résolu ce problème technique en mettant au point une technique permettant l’extraction de composés d’intérêt nutritionnels à partir d’une culture d’algues vivantes sans recours à des solvants organiques. Une perméation temporaire de la paroi induite par des champs électriques pulsés permet ainsi la sortie des composés d’intérêt de la cellule et leur solubilisation dans le milieu d’extraction. Les cellules de microalgue ayant été traitées par champs électriques pulsés sont ensuite remises en culture pour une future utilisation permettant ainsi de réduire considérablement le coût du procédé global ainsi que le nombre d’opérations unitaires. En effet, avec cette technique, il n’est pas nécessaire de récolter ni de sécher la biomasse avant extraction.The Applicant has solved this technical problem by developing a technique allowing the extraction of compounds of nutritional interest from a culture of living algae without the use of organic solvents. Temporary permeation of the wall induced by pulsed electric fields thus allows the compounds of interest to exit the cell and their solubilization in the extraction medium. The microalgae cells having been treated with pulsed electric fields are then returned to culture for future use, thus considerably reducing the cost of the overall process as well as the number of unit operations. Indeed, with this technique, it is not necessary to harvest or dry the biomass before extraction.
Ainsi, selon un premier aspect, l’invention concerne un procédé d’extraction de composés hydrosolubles d’intérêt nutritionnels, de préférence des protéines, vitamines, minéraux, ou sucres, à partir d’une culture de microalgues vivantes comprenant les étapes de :
- Mise en culture des souches de microalgues jusqu’à obtenir une quantité de biomasse desdites microalgues de concentration comprise entre 1. 106et 1.108cellules/mL ;
- Séparation des microalgues obtenues à l’étape a. de leur milieu de culture, de préférence par centrifugation entre 1500 et 4000 g durant 5 à 20 minutes et à une température comprise entre 4 et 25°C ;
- Mélange des microalgues obtenues à l’étape b. dans de l’eau à un ratio compris entre 5 et 20% à une conductivité comprise entre 20 et 200 µS/cm ;
- Application au mélange obtenu à l’étape c. de champs électriques pulsés bipolaires, de préférence au nombre de 1 à 20 impulsions avec une durée d’impulsion de 1 à 2 ms, un voltage compris entre 0,5 et 6 kV/cm, une température comprise entre 4 et 25°C, et un débit de circulation des cellules algales dans la chambre d’impulsion de 10 à 100 mL/min,
- Dilution du mélange obtenu à l’étape d. entre 2 et 5 fois dans de l’eau ou un tampon durant entre 1 et 12h ;
- Centrifugation du mélange obtenu à l’étape e., de préférence à entre 1500 et 4000 g durant 5 à 20 minutes à une température comprise entre 4 et 25°C ;
- Récupération du surnageant de centrifugation comprenant lesdits composés d’intérêts nutritionnels ;
- Obtention de composés d’intérêts nutritionnels.
- Culturing the microalgae strains until obtaining a quantity of biomass of said microalgae with a concentration of between 1.10 6 and 1.10 8 cells/mL;
- Separation of the microalgae obtained in step a. of their culture medium, preferably by centrifugation between 1500 and 4000 g for 5 to 20 minutes and at a temperature between 4 and 25°C;
- Mixture of microalgae obtained in step b. in water at a ratio of between 5 and 20% at a conductivity of between 20 and 200 µS/cm;
- Application to the mixture obtained in step c. bipolar pulsed electric fields, preferably in the number of 1 to 20 pulses with a pulse duration of 1 to 2 ms, a voltage between 0.5 and 6 kV/cm, a temperature between 4 and 25°C, and a circulation rate of the algal cells in the pulse chamber of 10 to 100 mL/min,
- Dilution of the mixture obtained in step d. between 2 and 5 times in water or a buffer for between 1 and 12 hours;
- Centrifugation of the mixture obtained in step e., preferably at between 1500 and 4000 g for 5 to 20 minutes at a temperature between 4 and 25°C;
- Recovery of the centrifugation supernatant comprising said compounds of nutritional interest;
- Obtaining compounds of nutritional interest.
Le procédé selon l’invention présente l’avantage d’être « vert » et compatible avec des applications alimentaires. En effet, la culture d’algue est soumise à un traitement aux champs électriques pulsés rendant la paroi perméable de manière réversible (« perméation »). Ce phénomène permet ainsi la sortie des composés d’intérêt nutritionnel de la cellule et leur solubilisation dans le milieu d’extraction. Une fois le traitement terminé, l’algue retrouve sa paroi intègre. Elle est ensuite séparée du milieu d’extraction puis remise en culture jusqu’à la prochaine extraction.The process according to the invention has the advantage of being “green” and compatible with food applications. Indeed, the algae culture is subjected to a treatment with pulsed electric fields making the wall reversibly permeable (“permeation”). This phenomenon thus allows the exit of compounds of nutritional interest from the cell and their solubilization in the extraction medium. Once the treatment is completed, the algae regains its intact wall. It is then separated from the extraction medium and then recultured until the next extraction.
A l’étape g., les algues electroextraites comprises dans le culot, toujours vivantes, peuvent ensuite être remises en culture jusqu’à la prochaine extraction,In step g., the electroextracted algae included in the pellet, still alive, can then be put back into culture until the next extraction,
En effet, à la fin de ce procédé, les microalgues dont les composés ont été electroextraits, sont toujours vivantes et peuvent être ensuite remises en culture jusqu’à la prochaine extraction. Une même souche de microalgues peut donc subir plusieurs fois ce procédé d’extractions de composés.Indeed, at the end of this process, the microalgae whose compounds have been electroextracted are still alive and can then be put back into culture until the next extraction. The same strain of microalgae can therefore undergo this compound extraction process several times.
A l’étape c., la conductivité comprise entre 20 et 200 µS/cm est fonction de l’espèce d’algue considérée.In step c., the conductivity between 20 and 200 µS/cm depends on the species of algae considered.
De manière préférée, à l’étape d., les impulsions sont espacées par un délai d’entre 10 ms et 2 secondes.Preferably, in step d., the pulses are spaced by a delay of between 10 ms and 2 seconds.
De manière préférée, ledit procédé d’extraction comprend en outre une étape i. de concentration des composés d’intérêts nutritionnels obtenus à l’étape h. par des procédés de filtration membranaires de 3 à 1000 kDa ou par l’usage de colonnes d’affinité, de préférence de type colonne à échange d’ion, de manière encore plus préférée par l’utilisation d’une filtration membranaire entre 10 et 500 kDa.Preferably, said extraction method further comprises a step i. concentration of compounds of nutritional interest obtained in step h. by membrane filtration processes from 3 to 1000 kDa or by the use of affinity columns, preferably of the ion exchange column type, even more preferably by the use of membrane filtration between 10 and 500 kDa.
Par procédés de filtration membranaires sont entendus de préférence la filtration tangentielle ou la filtration frontale.Membrane filtration processes are preferably understood as tangential filtration or frontal filtration.
Les composés obtenus à l’étape h. sont en solution aqueuse liquide.The compounds obtained in step h. are in liquid aqueous solution.
Selon un mode de réalisation, il est possible d’obtenir une solution concentrée ou sous forme de poudre de ladite solution obtenue à l’étape h., par exemple par séchage.According to one embodiment, it is possible to obtain a concentrated solution or in powder form of said solution obtained in step h., for example by drying.
De manière préférée, ledit procédé d’extraction comprend en outre une étape j. de séchage des composés d’intérêts nutritionnels obtenus à l’étape h. ou i., par :
- lyophilisation, de préférence à une température comprise entre -20 et -80°C et une pression de 5 à 500 µbar ; ou
- atomisation, de préférence dans un flux d’air chaud à une température comprise entre 80°C et 300°C, de préférence entre 90°C à 220°C. : ou
- séchage à une température comprise entre 40 et 80°C, ou séchage sous pression,
- freeze-drying, preferably at a temperature between -20 and -80°C and a pressure of 5 to 500 µbar; Or
- atomization, preferably in a flow of hot air at a temperature between 80°C and 300°C, preferably between 90°C to 220°C. : Or
- drying at a temperature between 40 and 80°C, or drying under pressure,
Par « champs électriques pulsés bipolaires » est entendu un traitement non-thermique sélectif de très courte durée, généralement de quelques microsecondes à quelques millisecondes. Il s’agit d’un champ électrique d’intensité E dont la valeur oscille entre positif et négatif causant des changements de répartition de charge dans la cellule soumise au champ électrique. L’application d’un champ électrique pulsé engendre ainsi l’accumulation de charges sur les surfaces membranaires, et l’augmentation du potentiel transmembranaire de la membrane cellulaire. L’attraction entre les charges de signes opposés accumulées de part et d’autre de la membrane cellulaire provoque une compression de cette dernière, une force élastique tend à s’opposer à cette électrocompression. Lorsque les champs électriques pulsés appliqués dépassent une valeur critique Ecr, la force électrocompressive devient supérieure à la force élastique, on assiste alors à l’apparition de pores au niveau de la membrane cellulaire. L’électroporation est généralement réversible, mais au-delà d’une intensité de champs électriques pulsés élevée, ainsi que pour de longues durées de traitement, on assiste à une intensification de la perméabilisation et une destruction irréversible de la membrane cellulaire. Les paramètres sont variables d’une cellule à l’autre en fonction de sa composition et donc de sa rigidité.By “bipolar pulsed electric fields” is meant a selective non-thermal treatment of very short duration, generally from a few microseconds to a few milliseconds. It is an electric field of intensity E whose value oscillates between positive and negative causing changes in charge distribution in the cell subjected to the electric field. The application of a pulsed electric field thus causes the accumulation of charges on the membrane surfaces, and the increase in the transmembrane potential of the cell membrane. The attraction between charges of opposite signs accumulated on either side of the cell membrane causes compression of the latter, an elastic force tends to oppose this electrocompression. When the applied pulsed electric fields exceed a critical value Ecr, the electrocompressive force becomes greater than the elastic force, and we then witness the appearance of pores at the cell membrane. Electroporation is generally reversible, but beyond a high intensity of pulsed electric fields, as well as for long treatment durations, there is an intensification of permeabilization and an irreversible destruction of the cell membrane. The parameters vary from one cell to another depending on its composition and therefore its rigidity.
Par « composés d’intérêts nutritionnels » sont entendus des composés de nature hydrosolubles tels que des protéines, vitamines, minéraux, sucres…qui varient en fonction de l’organisme traité.By “compounds of nutritional interest” are meant compounds of a water-soluble nature such as proteins, vitamins, minerals, sugars, etc. which vary depending on the organism treated.
Par « extraction biocompatible » est entendu : extraction non-destructive des cellules permettant de les conserver vivantes après traitement.By “biocompatible extraction” is meant: non-destructive extraction of cells allowing them to be kept alive after treatment.
Par « microalgue » on entend désigner selon la présente invention les microalgues eucaryotes, qui sont caractérisée par un noyau, comprenant par exemple les chlorophytes, les rhodophytes, les haptophytes, les bacillariophytes, les eustigmatophytes, les euglenophytes, les thraustochytriaceae ou encore les dinophytes, lesdits microalgues eucaryotes étant communément dénommées « microalgues », et les microalgues procaryotes, qui ne possèdent pas de noyau, comprenant les cyanophytes, ci-après dénommées spécifiquement « cyanobactéries ».By “microalgae” is meant according to the present invention eukaryotic microalgae, which are characterized by a nucleus, comprising for example chlorophytes, rhodophytes, haptophytes, bacillariophytes, eustigmatophytes, euglenophytes, thraustochytriaceae or even dinophytes, said eukaryotic microalgae being commonly referred to as “microalgae”, and prokaryotic microalgae, which do not have a nucleus, including cyanophytes, hereinafter specifically referred to as “cyanobacteria”.
De manière préférée selon l’invention, les microalgues eucaryotes sont choisies parmi les chlorophytes, de préférence parmi Chlorella, Auxenochlorella, Dunaliella, Tetraselmis, Haematococcus, Scenedesmus; les eustigmatophytes, de préférence Nannochloropsis; les euglénophytes, de préférenc, Euglena; les rhodophytes, de préférence Porphyridium; les bacillariophyceae, de préférence Phaeodactylum et Odontella, et les thraustochytriaceae, de préférence Schizochytrium.Preferably according to the invention, the eukaryotic microalgae are chosen from chlorophytes, preferably from Chlorella, Auxenochlorella, Dunaliella, Tetraselmis, Haematococcus, Scenedesmus; eustigmatophytes, preferably Nannochloropsis; euglenophytes, preferably Euglena; rhodophytes, preferably Porphyridium; bacillariophyceae, preferably Phaeodactylum and Odontella, and thraustochytriaceae, preferably Schizochytrium.
De manière préférée, les cyanobactéries sont choisies parmi la spiruline (Arthrospira platensis ou Spirulina maxima) et l’AFA (Aphanizomenon Floes-aquae).Preferably, the cyanobacteria are chosen from spirulina (Arthrospira platensis or Spirulina maxima) and AFA (Aphanizomenon Floes-aquae).
De manière encore plus préférée, ladite microalgue est choisie parmi la Chlorelle, Chlorella sp., Chlorella vulgaris, Chlorella protothecoides, Chlorella sorokiniana, Chlorella pyrenoidosa, Euglena sp., Euglena gracilis, Schizochytrium sp.Even more preferably, said microalgae is chosen from Chlorella, Chlorella sp., Chlorella vulgaris, Chlorella protothecoides, Chlorella sorokiniana, Chlorella pyrenoidosa, Euglena sp., Euglena gracilis, Schizochytrium sp.
Par exemple, les composés hydrosolubles d’intérêts nutritionnels obtenu par le procédé de l’invention appliqué à la Chlorelle comprennent une concentration en protéine d’environ 1 mg/mL.For example, the water-soluble compounds of nutritional interest obtained by the process of the invention applied to Chlorella include a protein concentration of approximately 1 mg/mL.
Par « tampon » est entendu selon l’invention à l’étape e. une solution tamponnée de pH compris entre 6 et 12, variable en fonction des composés ciblés. De manière préféré, ledit tampon à l’étape e. est un tampon phosphate.By “buffer” is meant according to the invention in step e. a buffered solution with a pH between 6 and 12, variable depending on the targeted compounds. Preferably, said buffer in step e. is a phosphate buffer.
Selon un deuxième aspect, l’invention concerne les composés hydrosolubles d’intérêt nutritionnels obtenus par le procédé selon l’invention.According to a second aspect, the invention relates to the water-soluble compounds of nutritional interest obtained by the process according to the invention.
De manière préférée, lesdits composés hydrosolubles d’intérêts nutritionnels comprennent des protéines, vitamines, minéraux, ou sucres.Preferably, said water-soluble compounds of nutritional interest include proteins, vitamins, minerals, or sugars.
Lesdites protéines, vitamines, minéraux ou sucres varient en fonction de la microalgue utilisée dans le procédé.Said proteins, vitamins, minerals or sugars vary depending on the microalgae used in the process.
Selon un troisième aspect, l’invention concerne l’utilisation des composés hydrosolubles d’intérêt nutritionnels dans des produits alimentaires.According to a third aspect, the invention relates to the use of water-soluble compounds of nutritional interest in food products.
De préférence, lesdits produits alimentaires sont choisis parmi les substituts de poisson, des boissons, des produits de la gamme boulangerie/pâtisserie…Preferably, said food products are chosen from fish substitutes, drinks, products from the bakery/pastry range, etc.
ExemplesExamples
Exemple 1 : Application du procédé d’extraction de composés d’intérêt nutritionnel selon l’invention à partir de Chlorelle.Example 1: Application of the process for extracting compounds of nutritional interest according to the invention from Chlorella.
Electroextraction des protéines cytoplasmiques deChlorellepour des applications alimentairesElectroextraction of Chlorella cytoplasmic proteins for food applications
Avant de débuter le procédé, les souches de chlorelles sont mises en culture afin d’optimiser la production de biomasse jusqu’à atteindre une concentration de 107cellules/mL.Before starting the process, the chlorella strains are cultured in order to optimize biomass production until reaching a concentration of 10 7 cells/mL.
Le procédé d’obtention des protéines cytoplasmiques de chlorelle comprend ensuite les étapes suivantes :The process for obtaining cytoplasmic chlorella proteins then includes the following steps:
a. Séparation des algues fraîches de leur milieu de culture par centrifugation à 2500 g durant 5 minutes, à une température de 20°C,has. Separation of fresh algae from their culture medium by centrifugation at 2500 g for 5 minutes, at a temperature of 20°C,
b. Dilution des algues dans l’eau à 10% à une conductivité de 200 µS/cm,b. Dilution of algae in water to 10% at a conductivity of 200 µS/cm,
e. Traitement de la solution algale à l’aide de champs électriques pulsés bipolaires selon le protocole détaillé dans le Tableau 1 ci-dessous,e. Treatment of the algal solution using bipolar pulsed electric fields according to the protocol detailed in Table 1 below,
f. Dilution du mélange 5 fois dans un tampon phosphate durant 1h,f. Dilution of the mixture 5 times in phosphate buffer for 1 hour,
g. Centrifugation du mélange à 2500 g durant 5 minutes, à une température de 20°C,g. Centrifugation of the mixture at 2500 g for 5 minutes, at a temperature of 20°C,
h. Les algues électroextraites, toujours vivantes, sont ensuite remises en culture jusqu’à la prochaine extraction.h. The electroextracted algae, still alive, are then returned to culture until the next extraction.
Après centrifugation, le surnageant contenant les protéines cytoplasmiques de chlorelle est récolté. La concentration en protéines cytoplasmiques de l’extrait est d’environ 1 mg/mL. Il sera ensuite concentré puis séché pour être intégré dans une formulation alimentaire.
After centrifugation, the supernatant containing the cytoplasmic chlorella proteins is harvested. The concentration of cytoplasmic proteins in the extract is approximately 1 mg/mL. It will then be concentrated and then dried to be integrated into a food formulation.
Claims (6)
- Mise en culture des souches de microalgues jusqu’à obtenir une quantité de biomasse desdites microalgues de concentration comprise entre 1. 106et 1.108cellules/mL ;
- Séparation des microalgues obtenues à l’étape a. de leur milieu de culture, de préférence par centrifugation à entre 1500 et 4000 g durant 5 à 20 minutes et à une température comprise entre 4 et 25°C ;
- Mélange des microalgues obtenues à l’étape b. dans de l’eau à un ratio compris entre 5 et 20% à une conductivité comprise entre 20 et 200 µS/cm ;
- Application au mélange obtenu à l’étape c. de champs électriques pulsés bipolaires, de préférence au nombre de 1 à 20 impulsions avec une durée d’impulsion de 1 à 2 ms, un voltage compris entre 0,5 et 6 kV/cm, une température comprise entre 4 et 25°C, et un débit de circulation des cellules algales dans la chambre d’impulsion de 10 à 100 mL/min,
- Dilution du mélange obtenu à l’étape d. entre 2 et 5 fois dans de l’eau ou un tampon durant entre 1 et 12h ;
- Centrifugation du mélange obtenu à l’étape e., de préférence à entre 1500 et 4000 g durant 5 à 20 minutes à une température comprise entre 4 et 25°C ;
- Récupération du surnageant de centrifugation comprenant lesdits composés d’intérêt nutritionnel ;
- Obtention de composés d’intérêt nutritionnel.
- Culturing the microalgae strains until obtaining a quantity of biomass of said microalgae with a concentration of between 1.10 6 and 1.10 8 cells/mL;
- Separation of the microalgae obtained in step a. of their culture medium, preferably by centrifugation at between 1500 and 4000 g for 5 to 20 minutes and at a temperature between 4 and 25°C;
- Mixture of microalgae obtained in step b. in water at a ratio of between 5 and 20% at a conductivity of between 20 and 200 µS/cm;
- Application to the mixture obtained in step c. bipolar pulsed electric fields, preferably in the number of 1 to 20 pulses with a pulse duration of 1 to 2 ms, a voltage between 0.5 and 6 kV/cm, a temperature between 4 and 25°C, and a circulation rate of the algal cells in the pulse chamber of 10 to 100 mL/min,
- Dilution of the mixture obtained in step d. between 2 and 5 times in water or a buffer for between 1 and 12 hours;
- Centrifugation of the mixture obtained in step e., preferably at between 1500 and 4000 g for 5 to 20 minutes at a temperature between 4 and 25°C;
- Recovery of the centrifugation supernatant comprising said compounds of nutritional interest;
- Obtaining compounds of nutritional interest.
- lyophilisation, de préférence à une température comprise entre -20 et -80°C et une pression de 5 à 500 µbar ; ou
- atomisation, de préférence dans un flux d’air chaud à une température comprise entre 80°C et 300°C, de préférence entre 90°C à 220°C. : ou
- séchage à une température comprise entre 40 et 80°C, ou séchage sous pression,
- freeze-drying, preferably at a temperature between -20 and -80°C and a pressure of 5 to 500 µbar; Or
- atomization, preferably in a flow of hot air at a temperature between 80°C and 300°C, preferably between 90°C to 220°C. : Or
- drying at a temperature between 40 and 80°C, or drying under pressure,
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