FR3133132A1 - Process for producing an extract of the microalgae Emiliania huxleyi essentially without coccoliths, extract thus obtained, composition comprising this extract, and associated uses. - Google Patents
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Abstract
L’invention concerne un procédé de production d’un extrait de la microalgue Emiliania luxleyi essentiellement sans les coccolithes habituellement produits par cette microalgue. L’invention concerne également un tel extrait d’Emiliania huxleyi obtenu par ce procédé. L’invention concerne encore les compositions comprenant cet extrait. L’invention concerne également les utilisations cosmétiques d’un tel extrait ou de telles compositions pour préparer la peau à lutter contre les stress oxydants venant de l’environnement extérieur, et/ou préparer la peau à maintenir son homéostasie.The invention relates to a method for producing an extract of the microalgae Emiliania luxleyi essentially without the coccoliths usually produced by this microalgae. The invention also relates to such an extract of Emiliania huxleyi obtained by this process. The invention also relates to compositions comprising this extract. The invention also relates to the cosmetic uses of such an extract or such compositions to prepare the skin to combat oxidative stress coming from the external environment, and/or prepare the skin to maintain its homeostasis.
Description
Le domaine de l’invention est celui de la cosmétologie. Plus précisément, l’invention concerne un procédé de production d’un extrait de la microalgueEmiliania huxleyi(récemment renomméeGephyrocapsa huxleyi), essentiellement sans les coccolithes habituellement produits par cette microalgue, un tel extrait d’Emiliania huxleyiobtenu par ce procédé, les compositions comprenant cet extrait, ainsi que les utilisations cosmétiques d’un tel extrait ou de telles compositions pour préparer la peau à lutter contre les stress oxydants venant de l’environnement extérieur, et/ou pour préparer la peau à maintenir son homéostasie.The field of the invention is that of cosmetology. More specifically, the invention relates to a process for producing an extract of the microalgae Emiliania huxleyi (recently renamed Gephyrocapsa huxleyi ), essentially without the coccoliths usually produced by this microalgae, such an extract of Emiliania huxleyi obtained by this process, the compositions comprising this extract, as well as the cosmetic uses of such an extract or such compositions to prepare the skin to combat oxidative stress coming from the external environment, and/or to prepare the skin to maintain its homeostasis.
Un tel extrait permet notamment de stimuler l’expression de gènes ayant un impact sur la préparation de la peau à réagir face aux agressions de l’environnement extérieur.Such an extract makes it possible in particular to stimulate the expression of genes having an impact on the preparation of the skin to react to attacks from the external environment.
L’âge et les expositions chroniques aux stress extérieurs, notamment les stress environnementaux comprenant les radiations ultraviolettes (UV) ou encore des composés oxydants, tels que les dérivés réactifs de l’oxygène («reactive oxygen species », ROS), peuvent engendrer des effets délétères sur la peau. De tels effets peuvent s’illustrer par l’altération de certaines protéines, ou encore par la dégradation d’éléments de la matrice extracellulaire (MEC), par exemple le collagène ou l’élastine.Age and chronic exposure to external stress, particularly environmental stress including ultraviolet (UV) radiation or oxidizing compounds, such as reactive oxygen species (ROS), can cause harmful effects on the skin. Such effects can be illustrated by the alteration of certain proteins, or by the degradation of elements of the extracellular matrix (ECM), for example collagen or elastin.
Il est connu des solutions cosmétiques pour lutter contre ces effets délétères, comme par exemple des compositions comprenant des actifs anti-âge.Cosmetic solutions are known to combat these deleterious effects, such as for example compositions comprising anti-aging active ingredients.
Il est également connu d’utiliser des composés biominéraux, comme par exemple des coccolithes secrétées par des algues, ou des compositions les comprenant, en particulier pour protéger la peau contre les rayonnements UV tout en atténuant les aspects inesthétiques de la peau, tels que les cernes ou les rides.It is also known to use biomineral compounds, such as for example coccoliths secreted by algae, or compositions comprising them, in particular to protect the skin against UV radiation while reducing unsightly aspects of the skin, such as dark circles or wrinkles.
Les coccolithes sont formés de calcite (CaCO3) et d'une matrice polysaccharidique, et synthétisés par des coccolithophoridés.Coccoliths are formed of calcite (CaCO 3 ) and a polysaccharide matrix, and synthesized by coccolithophorids.
Les coccolithophoridés sont des microalgues unicellulaires marines se caractérisant par la présence à leur surface extérieure d'un assemblage de plaquettes calcaires les protégeant, que sont ces coccolithes.Coccolithophorids are unicellular marine microalgae characterized by the presence on their exterior surface of an assembly of calcareous platelets protecting them, which are these coccoliths.
Un objectif de la présente invention est donc de proposer des compositions cosmétiques comprenant des principes actifs destinés à préparer la peau pour mieux réagir aux agressions de l’environnement.An objective of the present invention is therefore to propose cosmetic compositions comprising active ingredients intended to prepare the skin to better react to environmental aggressions.
Il existe par ailleurs un besoin fort et constant pour des compositions cosmétiques efficaces comprenant des actifs naturels en lieu et place de composés chimiques de synthèse.There is also a strong and constant need for effective cosmetic compositions comprising natural active ingredients instead of synthetic chemical compounds.
Cet objectif est atteint grâce à l’invention, qui concerne un procédé de production d’un extrait de la microalgueEmiliania huxleyiessentiellement sans coccolithes.This objective is achieved thanks to the invention, which relates to a process for producing an extract of the microalga Emiliania huxleyi essentially without coccoliths.
Les inventeurs ont démontré de manière surprenante que l’utilisation d’un extrait de la microalgueEmiliania huxleyin’ayant pas produit, ou très peu, de coccolithes, permet d’obtenir des effets intéressants sur la protection de la peau et sur le maintien de son hydratation. Une telle utilisation permet notamment de préparer la peau à mieux réagir aux agressions de l’environnement, en stimulant les systèmes de détoxification des cellules de la peau ainsi que les défenses des cellules de la peau. L’application topique de cette microalgueEmiliania huxleyiparticulière permet donc de protéger la peau vis-à-vis des éléments extérieurs agressifs, ce qui permet de contrer les effets oxydants venant de l’extérieur, tels que les rayonnements ultraviolets, la pollution ou encore les métaux lourds.The inventors have surprisingly demonstrated that the use of an extract of the microalga Emiliania huxleyi which has produced no, or very few, coccoliths, makes it possible to obtain interesting effects on the protection of the skin and on the maintenance of its hydration. Such use makes it possible in particular to prepare the skin to better react to environmental aggressions, by stimulating the detoxification systems of skin cells as well as the defenses of skin cells. The topical application of this particular Emiliania huxleyi microalgae therefore makes it possible to protect the skin from aggressive external elements, which makes it possible to counter the oxidizing effects coming from the outside, such as ultraviolet radiation, pollution or even heavy metals.
La microalgueEmiliania huxleyi, de son nouveau nomGephyrocapsa huxleyi, est connue pour avoir un impact très important sur le climat. Elle est considérée comme étant responsable de l’homéostasie de la Terre.The microalga Emiliania huxleyi , its new name Gephyrocapsa huxleyi , is known to have a very significant impact on the climate. It is considered to be responsible for the homeostasis of the Earth.
Emiliania huxleyiprésente un rôle très important dans le cycle du carbone. Elle capte notamment du dioxyde de carbone (CO2). Sa faculté à produire de l’oxygène en fait un élément présentant également un rôle très important dans l’oxygénation de l’atmosphère, la formation de la couche d’ozone, et donc la vie sur Terre. Emiliania huxleyi plays a very important role in the carbon cycle. In particular, it captures carbon dioxide (CO 2 ). Its ability to produce oxygen makes it an element that also plays a very important role in the oxygenation of the atmosphere, the formation of the ozone layer, and therefore life on Earth.
Emiliania huxleyiproduit également du diméthylsulphoniopropionate (DMSP), qui est actif dans la régulation thermique en réfléchissant les radiations du soleil : il contribue donc à réduire les effets de serre. Le DMSP produit parEmiliania huxleyise transforme en diméthylsulfure (DMS), un gaz organosulfuré connu pour avoir un impact important sur le climat, et être impliqué dans la formation des nuages. Ce composé est antioxydant et possède une structure proche des glycine-bétaïnes produites par les plantes supérieures.Emiliania huxleyipeut faire la conversion du DMSP en DMS, tout comme les bactéries marines peuvent également le faire grâce à une DMSP-lyase. Lors de la dégradation du DMSP en DMS,Emiliania huxleyirelargue aussi des acrylates qui sont antimicrobiens. Emiliania huxleyi also produces dimethylsulphoniopropionate (DMSP), which is active in thermal regulation by reflecting radiation from the sun: it therefore helps to reduce greenhouse effects. The DMSP produced by Emiliania huxleyi transforms into dimethylsulfide (DMS), an organosulfur gas known to have a significant impact on the climate, and to be involved in the formation of clouds. This compound is antioxidant and has a structure close to glycine betaines produced by higher plants. Emiliania huxleyi can convert DMSP to DMS, just as marine bacteria can also do this using DMSP-lyase. During the degradation of DMSP into DMS, Emiliania huxleyi also releases acrylates which are antimicrobial.
Emiliania huxleyicapte également du calcium et produit de la calcite, via la production de coccolithes.Emiliania huxleyis’adapte à son environnement, car la taille des cellules et des coccolithes est augmentée quand le taux de CO2augmente. Emiliania huxleyi also captures calcium and produces calcite, via the production of coccoliths. Emiliania huxleyi adapts to its environment, because the size of cells and coccoliths is increased when the CO 2 level increases.
Emiliania huxleyis’adapte également très bien au changement de son environnement grâce à une très forte flexibilité génétique. Elle capte le sélénium de l’eau de mer et produit des sélénoprotéines qui se rapprochent dans leur structure et leur fonction des protéines antioxydantes des cellules de la peau, notamment de la thiorédoxine réductase 1 (TR1). Emiliania huxleyi also adapts very well to changes in its environment thanks to very strong genetic flexibility. It captures selenium from sea water and produces selenoproteins which are similar in their structure and function to the antioxidant proteins of skin cells, in particular thioredoxin reductase 1 (TR1).
Ainsi, l’invention repose sur une approche originale ayant consisté à étudier l’effet de l’application topique d’extraits d’Emiliania huxleyine comprenant essentiellement pas de coccolithes sur l’expression de gènes impliqués dans la lutte contre les effets oxydants/les stress oxydants de l’environnement/de l’extérieur.Thus, the invention is based on an original approach which consisted of studying the effect of the topical application of extracts of Emiliania huxleyi comprising essentially no coccoliths on the expression of genes involved in the fight against oxidative effects/ oxidative stresses from the environment/exterior.
Ainsi, un premier objet concerne un procédé de production d’un extrait de la microalgueEmiliania huxleyicomprenant :
-une étape de culture d’Emiliania huxleyien photobioréacteur, mettant en œuvre un milieu de culture comprenant de l’eau de mer, un ou plusieurs microéléments, tel que du sélénium, et préférentiellement entre 10 et 100 µM (micromoles.L-1) de phosphate, plus préférentiellement de 20 à 60 µM de phosphate. Cette étape permet la culture d’Emiliania huxleyiessentiellement sans production de coccolithes, c’est-à-dire que seulement quelques pourcents des cellules produites d’Emiliania huxleyipossèdent un coccolithe, préférentiellement moins de 1% des cellules produites, et encore plus préférentiellement moins de 0,1% des cellules produites.Thus, a first subject concerns a process for producing an extract of the microalgae Emiliania huxleyi comprising:
-a step of culturing Emiliania huxleyi in a photobioreactor, using a culture medium comprising sea water, one or more microelements, such as selenium, and preferably between 10 and 100 µM (micromoles.L -1 ) of phosphate, more preferably from 20 to 60 µM of phosphate. This step allows the culture of Emiliania huxleyi essentially without production of coccoliths, that is to say that only a few percent of the cells produced of Emiliania huxleyi have a coccolith, preferably less than 1% of the cells produced, and even more preferably less than 0.1% of cells produced.
Les étapes suivantes de ce procédé sont :
-une étape de récolte de la culture ;
-une étape de congélation de la culture ;
-une étape de décongélation de la culture congelée et d’ajout de propane-1,3-diol ; et
-au moins une étape de filtration.The following steps in this process are:
-a stage of harvesting the crop;
-a stage of freezing the culture;
-a step of thawing the frozen culture and adding 1,3-propanediol; And
-at least one filtration step.
Ainsi, il a été démontré que l’absence, ou la quasi-absence, de coccolithes dans l’extrait obtenu d’Emiliania huxleyijoue un rôle majeur dans la préparation de la peau à mieux réagir aux agressions de l’environnement extérieur. De plus, ce procédé est simple à mettre en œuvre et peu coûteux.Thus, it has been demonstrated that the absence, or near absence, of coccoliths in the extract obtained from Emiliania huxleyi plays a major role in preparing the skin to better react to attacks from the external environment. In addition, this process is simple to implement and inexpensive.
Selon un mode de réalisation avantageux, ladite au moins une étape de filtration finale de ce procédé comprend :
-une étape de filtration tangentielle à travers un filtre présentant un seuil de coupure de 0,2 μm ; et
-une étape de filtration stérilisante.According to an advantageous embodiment, said at least one final filtration step of this process comprises:
-a tangential filtration step through a filter having a cut-off threshold of 0.2 μm; And
-a sterilizing filtration step.
Ainsi, l’extrait obtenu par cette méthode est apte à être utilisé en formulation cosmétique.Thus, the extract obtained by this method is suitable for use in cosmetic formulation.
Un deuxième objet de l’invention consiste dans un extrait de la microalgueEmiliania huxleyiobtenu par le procédé précédemment décrit, cet extrait ne comprenant essentiellement et pratiquement pas de coccolithes, c’est-à-dire que seulement quelques pourcents des cellules produites d’Emiliania huxleyipossèdent un coccolithe, préférentiellement moins de 1% des cellules produites, et encore plus préférentiellement moins de 0,1% des cellules produites.A second object of the invention consists of an extract of the microalgae Emiliania huxleyi obtained by the process previously described, this extract comprising essentially and practically no coccoliths, that is to say only a few percent of the cells produced from Emiliania huxleyi have a coccolith, preferably less than 1% of the cells produced, and even more preferably less than 0.1% of the cells produced.
Selon un aspect de l’invention, cet extrait stimule l’expression de gènes codant pour des protéines du protéosome, et/ou des métallothionéines, et/ou des protéines de stress («Heat Shock Proteins »), et/ou des protéines de la matrice extracellulaire, et/ou la production des protéines HSP et de l’ubiquitine.According to one aspect of the invention, this extract stimulates the expression of genes coding for proteosome proteins, and/or metallothioneins, and/or stress proteins (“ Heat Shock Proteins” ), and/or heat shock proteins. the extracellular matrix, and/or the production of HSP proteins and ubiquitin.
La stimulation de ces gènes et l’augmentation de la production de ces protéines présentent un impact positif sur les défenses antioxydantes de la peau, afin notamment de mieux préparer la peau à lutter contre le déséquilibre provoqué par les stress et à maintenir son homéostasie.The stimulation of these genes and the increase in the production of these proteins have a positive impact on the skin's antioxidant defenses, in particular to better prepare the skin to fight against the imbalance caused by stress and to maintain its homeostasis.
Un troisième objet concerne une composition cosmétique pour application topique comprenant un extrait de la microalgueEmiliania huxleyitel que précédemment décrit, ainsi qu’un milieu physiologiquement acceptable.A third object relates to a cosmetic composition for topical application comprising an extract of the microalgae Emiliania huxleyi as previously described, as well as a physiologically acceptable medium.
Selon un mode de réalisation, cette composition selon l’invention comprend entre 0,01% et 10% en poids d’extrait d’Emiliania huxleyi, par rapport au poids total de la composition, de préférence entre 0,1% et 1% en poids, par rapport au poids total de la composition.According to one embodiment, this composition according to the invention comprises between 0.01% and 10% by weight of extract of Emiliania huxleyi , relative to the total weight of the composition, preferably between 0.1% and 1% by weight, relative to the total weight of the composition.
A ces concentrations d’extrait dans les compositions cosmétiques, une formulation cosmétique adéquate peut être réalisée, permettant la génération des effets cosmétiques recherchés sur la peau, sans effets secondaires.At these concentrations of extract in cosmetic compositions, an adequate cosmetic formulation can be produced, allowing the generation of the desired cosmetic effects on the skin, without side effects.
Un quatrième objet concerne l’utilisation d’un extrait d’Emiliania huxleyitel que précédemment décrit en tant qu’ingrédient actif cosmétique.A fourth object concerns the use of an extract of Emiliania huxleyi as previously described as a cosmetic active ingredient.
Un cinquième objet concerne l’utilisation d’une composition selon l’invention telle que précédemment introduite en tant que composition cosmétique destinée à être appliquée sur la peau saine.A fifth object concerns the use of a composition according to the invention as previously introduced as a cosmetic composition intended to be applied to healthy skin.
Selon un mode de réalisation, cette composition est utilisée en particulier pour préparer la peau à lutter contre les stress oxydants extérieurs, et/ou pour préparer la peau à maintenir son homéostasie.According to one embodiment, this composition is used in particular to prepare the skin to combat external oxidative stress, and/or to prepare the skin to maintain its homeostasis.
Procédé de production d’un extrait d’Process for producing an extract of Emiliania huxleyiEmiliania huxleyi selon l’inventionaccording to the invention
Selon un premier aspect de l’invention, un extrait d’Emiliania huxleyiest produit selon le procédé général suivant :
-une première étape de culture d’Emiliania huxleyiest mise en œuvre dans un photobioréacteur, en présence d’eau de mer, d’au moins un microélément, tel que le sélénium, et préférentiellement d’une teneur en phosphate comprise entre 10 et 100 µM, plus préférentiellement entre 20 à 60 µM ;
-il s’ensuit une étape de récolte de la culture ;
-la culture récoltée est congelée ;
-une étape suivante consiste à décongeler ce milieu congelé et à y ajouter du propane-1,3-diol ; et
-une étape finale de filtration est mise en œuvre, permettant l’obtention d’un extrait d’Emiliania huxleyine comprenant pas, ou à tout le moins très peu, de coccolithes.According to a first aspect of the invention, an extract of Emiliania huxleyi is produced according to the following general process:
-a first step of culturing Emiliania huxleyi is carried out in a photobioreactor, in the presence of sea water, at least one microelement, such as selenium, and preferably with a phosphate content of between 10 and 100 µM, more preferably between 20 to 60 µM;
-there follows a stage of harvesting the crop;
-the harvested culture is frozen;
-a next step consists of thawing this frozen medium and adding 1,3-propane diol to it; And
-a final filtration step is implemented, allowing an extract of Emiliania huxleyi to be obtained which does not include, or at least very few, coccoliths.
L’étape de culture d’Emiliania huxleyiest réalisée en photobioréacteur présentant une capacité de 30 L à 750 L, avec de l’eau de mer, éclairé par lumière artificielle.The cultivation stage of Emiliania huxleyi is carried out in a photobioreactor with a capacity of 30 L to 750 L, with sea water, illuminated by artificial light.
La microalgueEmiliania huxleyiest utilisée entière, sous forme de cellules individuelles.The Emiliania huxleyi microalgae is used whole, in the form of individual cells.
Un ajout de sélénium dans le milieu de culture en faible quantité, de 1 à 100 nM (nanomoles.L-1), plus préférentiellement de 2 à 10 nM, est nécessaire à la production deEmiliania huxleyi, cette microalgue étant séléno-dépendante pour sa croissance. En effet, le sélénium capté parEmiliania huxleyis’incorpore ensuite à des sélénoprotéines qui sont indispensables au fonctionnement des cellules, leur permettant de se multiplier rapidement.An addition of selenium to the culture medium in a small quantity, from 1 to 100 nM (nanomoles.L -1 ), more preferably from 2 to 10 nM, is necessary for the production of Emiliania huxleyi , this microalga being seleno-dependent for his growth. Indeed, the selenium captured by Emiliania huxleyi is then incorporated into selenoproteins which are essential for the functioning of cells, allowing them to multiply rapidly.
En amont, le photobioréacteur est stérilisé chimiquement à l’aide d’hypochlorite de sodium NaClO, et neutralisé avec une solution de sulfite de sodium Na2SO3.Upstream, the photobioreactor is chemically sterilized using sodium hypochlorite NaClO, and neutralized with a solution of sodium sulphite Na 2 SO 3 .
Le taux d’inoculation est d’environ 4%.The inoculation rate is around 4%.
Une pré-culture est réalisée de façon préliminaire, dans une bonbonne de 10 L, dans les mêmes conditions de milieu que celles appliquées à l’étape de culture de la microalgue.A pre-culture is carried out preliminary, in a 10 L cylinder, under the same environmental conditions as those applied to the microalgae cultivation stage.
Au cours de la culture, les paramètres suivis sont la densité optique, en particulier à 750 nm, le dénombrement cellulaire, à l’aide d’une lame de Malassez (permettant de compter le nombre de cellules en suspension dans une solution), et le pH.During the culture, the parameters monitored are the optical density, in particular at 750 nm, the cell count, using a Malassez slide (allowing the number of cells suspended in a solution to be counted), and the pH.
La culture dure entre 10 à 15 jours. Elle est récoltée lorsque le nombre de cellules est supérieur à 2x106cellules.mL-1. Cette concentration permet en effet de s’assurer de la présence d’une quantité minimale de cellules permettant la production de l’extrait d’Emiliania huxleyi. A titre d’illustration, les inventeurs ont réussi à obtenir en trois semaines 4 milliards de cellules par litre de culture.The culture lasts between 10 to 15 days. It is harvested when the number of cells is greater than 2x10 6 cells.mL -1 . This concentration makes it possible to ensure the presence of a minimum quantity of cells allowing the production of the Emiliania huxleyi extract. By way of illustration, the inventors succeeded in obtaining 4 billion cells per liter of culture in three weeks.
La particularité de ce procédé de production d’Emiliania huxleyiest que les conditions de culture utilisées ne favorisent pas la production des coccolithes d’Emiliania huxleyi, contrairement aux procédés existants de production d’extraits de coccolithophoridés, et notamment à visée cosmétique. En particulier, dans le procédé selon l’invention, la souche de microalgue utilisée perd sa capacité à produire des coccolithes, à force notamment de repiquage dans le milieu de culture mis en œuvre, qui est légèrement plus riche en phosphate que les milieux habituellement utilisés pour favoriser la production de coccolithes d’algues. Ainsi, ce procédé selon l’invention permet de limiter drastiquement la production de coccolithes, de façon que, par exemple, seulement quelques pourcents, avantageusement moins de 1%, en encore plus avantageusement moins de 0,1%, des cellules d’Emiliania huxleyiproduites produise des coccolithes.The particularity of this Emiliania huxleyi production process is that the cultivation conditions used do not favor the production of Emiliania huxleyi coccoliths, unlike existing processes for producing coccolithophorid extracts, and in particular for cosmetic purposes. In particular, in the process according to the invention, the strain of microalgae used loses its capacity to produce coccoliths, in particular by transplanting into the culture medium used, which is slightly richer in phosphate than the media usually used. to promote the production of algal coccoliths. Thus, this process according to the invention makes it possible to drastically limit the production of coccoliths, so that, for example, only a few percent, advantageously less than 1%, and even more advantageously less than 0.1%, of Emiliania cells huxleyi produced produce coccoliths.
L’extrait final obtenu est un extrait hydro-glycolique, comprenant également de l’eau de mer et du propanediol.The final extract obtained is a hydro-glycolic extract, also comprising sea water and propanediol.
Selon un deuxième aspect de l’invention, un extrait d’Emiliania huxleyin’ayant pas, ou à tout le moins très peu, produit de coccolithes est obtenu.According to a second aspect of the invention, an extract of Emiliania huxleyi having no, or at least very little, production of coccoliths is obtained.
Il a été démontré par les inventeurs qu’un tel extrait d’Emiliania huxleyisans coccolithes, ou en possédant très peu, stimule l’expression de gènes codant pour des protéines de stress («Heat Shock Proteins », HSP).It has been demonstrated by the inventors that such an extract of Emiliania huxleyi without coccoliths, or having very few, stimulates the expression of genes coding for stress proteins (“ Heat Shock Proteins” , HSP).
Quand les premières HSP ont été découvertes, elles ont tout d’abord été mises en évidence quand les cellules étaient exposées à un stress thermique (Ritossa, 1962). Il est désormais connu que les HSP sont de différentes tailles et qu’elles jouent des rôles divers dans les cellules, dans la réparation des protéines endommagées, dans l’aide à la synthèse de nouvelles protéines et dans l’assemblage des protéines récemment produites. Elles permettent la survie cellulaire lors de divers types de stress.When the first HSPs were discovered, they were first demonstrated when cells were exposed to thermal stress (Ritossa, 1962). It is now known that HSPs come in different sizes and play diverse roles in cells, in repairing damaged proteins, helping to synthesize new proteins, and assembling newly produced proteins. They enable cell survival during various types of stress.
La principale fonction des HSP est de permettre aux protéines néoformées ou non correctement formées d’acquérir une forme correcte dans laquelle elles seront fonctionnelles. En l’absence de ce changement de conformation, les protéines peuvent être inactives et non fonctionnelles.The main function of HSPs is to allow newly formed or incorrectly formed proteins to acquire a correct form in which they will be functional. In the absence of this conformational change, proteins can be inactive and nonfunctional.
Les inventeurs ont également démontré que l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention stimule l’expression de gènes codant pour des protéines du protéasome.The inventors have also demonstrated that the Emiliania huxleyi extract according to the invention stimulates the expression of genes coding for proteasome proteins.
Le protéasome permet de détoxifier les cellules en éliminant les protéines altérées qui s’accumulent avec l’âge.The proteasome helps detoxify cells by eliminating altered proteins that accumulate with age.
Il a encore été démontré que l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention stimule l’expression de gènes codant pour des métallothionéines (MT).It has further been demonstrated that the Emiliania huxleyi extract according to the invention stimulates the expression of genes coding for metallothioneins (MT).
Les métallothionéines permettent également de détoxifier les cellules, contre les métaux lourds.Metallothioneins also help detoxify cells against heavy metals.
Il a enfin été démontré que l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention stimule l’expression de gènes codant pour des protéines de la matrice extracellulaire.It has finally been demonstrated that the extract of Emiliania huxleyi according to the invention stimulates the expression of genes coding for proteins of the extracellular matrix.
Un troisième objet de l’invention concerne une composition cosmétique comprenant un extrait de microalgueEmiliania huxleyiselon l’invention, ne comprenant donc pas, ou très peu, de coccolithes de cette microalgue. Une telle composition comprend en outre un milieu physiologiquement acceptable.A third object of the invention relates to a cosmetic composition comprising an extract of Emiliania huxleyi microalgae according to the invention, therefore comprising no, or very few, coccoliths of this microalgae. Such a composition further comprises a physiologically acceptable medium.
On entend par milieu physiologiquement acceptable tout milieu convenant à un usage cosmétique, en particulier pour une application sur la peau. Par exemple, un milieu physiologiquement acceptable pourra être choisi parmi ou comprendre de l’eau ou un solvant organique hydrosoluble, des agents de texture, notamment un agent gélifiant, des parfums, des conservateurs, des colorants, des huiles essentielles de végétaux, des extraits végétaux ou des mélanges de ceux-ci. Une eau convenant à l'invention peut être une eau thermale et/ou minérale, notamment choisie parmi l'eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy et l'eau de la Roche-Posay. Un agent gélifiant convenant à l’invention peut être choisi parmi la pectine, la gomme de guar, la cellulose, la dextrine, la maltodextrine, l'amidon, la gomme de Tara, la gomme de Caroube, l'inuline, la gomme d'acacia, la gomme arabique, les polymères riches en fucose, les carraghénanes, la gomme de Konjac, la gomme de xanthane, le dextrane, le chitosane, la gomme Adragante, la gomme de Ghatti, la gomme de Karaya, la gomme de tamarin, l'agar-agar, l'alginate, la gomme de Gellane et leurs mélanges.By physiologically acceptable medium is meant any medium suitable for cosmetic use, in particular for application to the skin. For example, a physiologically acceptable medium may be chosen from or include water or a water-soluble organic solvent, texturing agents, in particular a gelling agent, perfumes, preservatives, dyes, essential oils of plants, extracts plants or mixtures thereof. A water suitable for the invention may be a thermal and/or mineral water, in particular chosen from Vittel water, the waters of the Vichy basin and the water of Roche-Posay. A gelling agent suitable for the invention can be chosen from pectin, guar gum, cellulose, dextrin, maltodextrin, starch, Tara gum, locust bean gum, inulin, gum of acacia, gum arabic, fucose-rich polymers, carrageenans, Konjac gum, xanthan gum, dextran, chitosan, Tragacanth gum, Ghatti gum, Karaya gum, tamarind gum , agar-agar, alginate, Gellan gum and their mixtures.
Ces additifs sont bien connus pour leur utilisation dans les compositions cosmétiques, et permettent d’améliorer les caractéristiques organoleptiques de la composition et la qualité de l’expérience de l’utilisateur de la composition.These additives are well known for their use in cosmetic compositions, and make it possible to improve the organoleptic characteristics of the composition and the quality of the user's experience of the composition.
Les compositions selon l’invention peuvent également comprendre un ou plusieurs autres principes actifs, tant que ceux-ci sont compatibles avec l’extrait d’Emiliania huxleyitel que décrit ci-dessus. Ces principes actifs peuvent notamment être choisis pour leur activité hydratante, pigmentante, dépigmentante, apaisante, oxygénante, régénérante, anti-âge, anti-rides, anti-rougeurs et leurs combinaisons.The compositions according to the invention may also comprise one or more other active ingredients, as long as these are compatible with the extract of Emiliania huxleyi as described above. These active ingredients may in particular be chosen for their moisturizing, pigmenting, depigmenting, soothing, oxygenating, regenerating, anti-aging, anti-wrinkle, anti-redness activity and their combinations.
Une composition selon l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour une application topique sur la peau. Elle peut alors prendre la forme d’une solution aqueuse ou huileuse, d’une lotion, d’un sérum, d'une émulsion, d’un lait, d’une crème, d’un gel, d’une pommade, d’un beurre, d’une émulsion huile-dans-eau, d’une émulsion eau-dans-huile, d’une émulsion triple, de microcapsules ou de microparticules. Ces compositions peuvent être préparées selon les méthodes connues de l’art.A composition according to the invention can be presented in all the galenic forms normally used for topical application to the skin. It can then take the form of an aqueous or oily solution, a lotion, a serum, an emulsion, a milk, a cream, a gel, an ointment, a butter, an oil-in-water emulsion, a water-in-oil emulsion, a triple emulsion, microcapsules or microparticles. These compositions can be prepared according to methods known in the art.
Ces formulations et textures sont simples à produire, et sont compatibles avec une application sur la peau. Elles seront choisies en fonction de l’application souhaitée et du type de peaux. Par exemple, il est plus intéressant de formuler un lait plutôt qu’une crème pour une application sur le corps entier, tandis qu’un beurre se révèle être mieux adapté pour une application sur peaux sèches.These formulations and textures are simple to produce, and are compatible with application to the skin. They will be chosen according to the desired application and skin type. For example, it is more interesting to formulate a milk rather than a cream for application to the whole body, while a butter turns out to be better suited for application to dry skin.
L’extrait d’Emiliania huxleyipeut également être incorporé dans des démaquillants deux-en-un ou trois-en-un, pour un nettoyage en profondeur et pour préparer la peau à mieux lutter contre les effets du stress. Cet extrait peut aussi être utilisé en complément d’actifs anti-pollution de surface dans de telles compositions cosmétiques. Emiliania huxleyi extract can also be incorporated into two-in-one or three-in-one makeup removers, for deep cleansing and to prepare the skin to better combat the effects of stress. This extract can also be used in addition to surface anti-pollution active ingredients in such cosmetic compositions.
Préférentiellement, l’extrait d’Emiliania huxleyide l’invention est présent dans la composition à une concentration comprise entre 0,01 et 10% en poids, par rapport au poids total de la composition, de préférence entre 0,1 et 1% en poids, par rapport au poids total de la composition.Preferably, the Emiliania huxleyi extract of the invention is present in the composition at a concentration of between 0.01 and 10% by weight, relative to the total weight of the composition, preferably between 0.1 and 1%. by weight, relative to the total weight of the composition.
Il a été démontré qu’à ces concentrations, une composition cosmétique comprenant un tel extrait d’Emiliania huxleyiet appliquée sur la peau stimule de façon efficace et satisfaisante l’expression de gènes codant pour des HSP, et/ou des protéines du protéosome, et/ou des métallothionéines, et/ou des protéines de la matrice extracellulaire. Ces protéines sont impliquées dans la détoxification cellulaire et la protection de la peau au regard des éléments extérieurs agressifs.It has been demonstrated that at these concentrations, a cosmetic composition comprising such an extract of Emiliania huxleyi and applied to the skin effectively and satisfactorily stimulates the expression of genes coding for HSPs, and/or proteosome proteins, and/or metallothioneins, and/or extracellular matrix proteins. These proteins are involved in cellular detoxification and protection of the skin from aggressive external elements.
Utilisation de l’extrait d’Use of the extract Emiliania huxleyiEmiliania huxleyi et/ou d’une composition le comprenant, selon l’inventionand/or a composition comprising it, according to the invention
Selon des quatrième et cinquième aspects de l’invention, un extrait d’Emiliania huxleyiet/ou des compositions le comprenant est/sont utilisé(es) de façon topique pour préparer la peau à lutter contre le déséquilibre provoqué par les stress oxydant, et/ou à maintenir son homéostasie.According to fourth and fifth aspects of the invention, an extract of Emiliania huxleyi and/or compositions comprising it are/are used topically to prepare the skin to combat the imbalance caused by oxidative stress, and /or to maintain homeostasis.
De telles compositions selon l’invention peuvent être utilisées sur le visage ou le corps.Such compositions according to the invention can be used on the face or body.
L’utilisation de la composition selon l’invention pourra être quotidienne ou biquotidienne. Elle pourra être moins fréquente, comme par exemple une fois par semaine, deux fois par semaine, trois fois par semaine, quatre fois par semaine, cinq fois par semaine ou six fois par semaine.The use of the composition according to the invention may be daily or twice daily. It may be less frequent, such as once a week, twice a week, three times a week, four times a week, five times a week or six times a week.
Ainsi, la fréquence d’utilisation de la composition selon l’invention pourra être adaptée en fonction de l’amélioration de la préparation de la peau à mieux réagir aux agressions de l’environnement.Thus, the frequency of use of the composition according to the invention can be adapted according to the improvement in the preparation of the skin to better react to environmental aggressions.
L’invention sera maintenant illustrée par les exemples non limitatifs suivants.The invention will now be illustrated by the following non-limiting examples.
Exemple 1 : Obtention de l’extrait d’Example 1: Obtaining the extract Emiliania huxleyiEmiliania huxleyi selon l’inventionaccording to the invention
Cet exemple illustre l’obtention d’un extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention, selon un procédé mis en œuvre selon les étapes suivantes :
-une première étape de culture d’Emiliania huxleyia été mise en œuvre dans un photobioréacteur, comprenant entre autres de l’eau de mer, une teneur comprise entre 1 à 100 nM de sélénium, et une teneur comprise entre 10 et 100 µM de phosphate, et étant éclairé par une lumière artificielle.This example illustrates the obtaining of an extract of Emiliania huxleyi according to the invention, according to a process implemented according to the following steps:
-a first stage of cultivation of Emiliania huxleyi was implemented in a photobioreactor, comprising, among other things, sea water, a content of between 1 to 100 nM of selenium, and a content of between 10 and 100 µM of phosphate, and being illuminated by artificial light.
La particularité de cette étape de culture est basée sur le fait qu’elle permet la culture d’Emiliania huxleyiessentiellement sans production de coccolithes de microalgue, c’est-à-dire que moins de 1% des cellules d’Emiliania huxleyiprésentent un coccolithe, et plus préférentiellement moins de 0,1% ;
-une étape de récolte de cette culture a ensuite été effectuée, notamment lorsque le nombre de cellules d’Emiliania huxleyiproduites a été supérieur à 2x106cellules.mL-1;
-dans une étape suivante, la culture récoltée a été congelée ;
-ensuite, la culture congelée a subi une étape de décongélation, et du propane-1,3-diol a été ajouté au milieu ;
-une étape de filtration tangentielle a ensuite été mise en œuvre, via un filtre présentant un seuil de coupure de 0,2 μm ; et
-le milieu a subi une dernière étape de filtration stérilisante.The particularity of this culture step is based on the fact that it allows the cultivation of Emiliania huxleyi essentially without production of microalgal coccoliths, that is to say that less than 1% of the cells of Emiliania huxleyi present a coccolith, and more preferably less than 0.1%;
-a step of harvesting this culture was then carried out, in particular when the number of Emiliania huxleyi cells produced was greater than 2x10 6 cells.mL -1 ;
-in a following step, the harvested culture was frozen;
-then, the frozen culture underwent a thawing step, and propane-1,3-diol was added to the medium;
-a tangential filtration step was then implemented, via a filter having a cut-off threshold of 0.2 μm; And
-the medium has undergone a final stage of sterilizing filtration.
La mise en œuvre de l’ensemble des étapes de ce procédé a donc permis d’obtenir un extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention, ne comprenant essentiellement pas de coccolithes de cette microalgue.The implementation of all the steps of this process therefore made it possible to obtain an extract of Emiliania huxleyi according to the invention, essentially comprising no coccoliths of this microalgae.
Exemple 2 : Effets de l’extrait d’Example 2: Effects of the extract Emiliania huxleyiEmiliania huxleyi obtenu sur l’expression de gènes impliqués dans la préparation et la protection de la peau contre le stress environnemental - expérimentation in vitroobtained on the expression of genes involved in the preparation and protection of the skin against environmental stress - in vitro experimentation
L’exemple 2 démontre les effets de l’extrait d’Emiliania huxleyiobtenu dans l’exemple 1 sur la protection de la peau vis-à-vis du stress oxydant environnemental.Example 2 demonstrates the effects of the Emiliania huxleyi extract obtained in Example 1 on the protection of the skin against environmental oxidative stress.
Une première expérimentation in vitro a été conduite afin de mesurer les effets de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention sur l’expression de gènes codant pour des protéines de stress, pour des protéines du protéasome, pour des métallothionéines et pour des protéines de la matrice extracellulaire.A first in vitro experiment was carried out in order to measure the effects of the extract of Emiliania huxleyi according to the invention on the expression of genes coding for stress proteins, for proteasome proteins, for metallothioneins and for extracellular matrix proteins.
Conditions des testsTest conditions
L’extrait d’Emiliania huxleyiproduit a été testé à 0,1% en poids dans le milieu de culture des cellules. Il a été mis en contact pendant 24 heures avec des fibroblastes normaux du derme humain (FNDH), isolés à partir d’un fragment de peau humaine, et utilisés après soit un faible nombre de repiquages (simulation de fibroblastes jeunes), soit après un nombre élevé de repiquages (simulation de fibroblastes âgés). Un test comparatif a été effectué avec des cellules non traitées.The Emiliania huxleyi extract produced was tested at 0.1% by weight in the cell culture medium. It was placed in contact for 24 hours with normal human dermal fibroblasts (FNDH), isolated from a fragment of human skin, and used after either a small number of subcultures (simulation of young fibroblasts), or after a high number of subcultures (simulation of aged fibroblasts). A comparative test was carried out with untreated cells.
Après 24 heures, l’ARNm des cellules ayant été mises en contact avec l’extrait et celui des cellules n’ayant pas subi un tel contact ont été extraits, et une analyse comparative a été effectuée dans le but de mettre en évidence les effets de l’extrait d’Emiliania huxleyisur les expressions de gènes codant pour des protéines de stress, pour des protéines du protéasome, pour des métallothionéines et pour des protéines de la matrice extracellulaire.After 24 hours, the mRNA of the cells having been brought into contact with the extract and that of the cells which had not undergone such contact were extracted, and a comparative analysis was carried out in order to highlight the effects of Emiliania huxleyi extract on the expressions of genes coding for stress proteins, for proteasome proteins, for metallothioneins and for extracellular matrix proteins.
Expression de gènes codant pour des protéines de stress (HSP)Expression of genes encoding stress proteins (HSP)
L’analyse de l’application topique de l’extrait d’Emiliania huxleyiobtenu a démontré que l’expression des gènes suivants, codant pour des HSP, molécules chaperonnes, a été augmentée :Analysis of the topical application of the Emiliania huxleyi extract obtained demonstrated that the expression of the following genes, coding for HSPs, chaperone molecules, was increased:
- le gène HFS4, codant pour un facteur de transcription qui stimule l’expressions des HSP. Ce gène est donc un régulateur de l’expression des HSP.- the HFS4 gene, coding for a transcription factor which stimulates the expression of HSPs. This gene is therefore a regulator of HSP expression.
- le gène HSPA5, codant pour des sous-unités de la protéine HSP70. Cette protéine chaperonne est connue pour son rôle de protection contre les changements de température, permettant ainsi la thermo tolérance des cellules exposées à un stress température. C’est aussi une chaperonne importante lors du transport des protéines dans les mitochondries, qui est donc impliquée dans la fonction mitochondriale. La protéine HSP70 se lie à de nombreuses protéines et permet leur bonne conformation, augmente la survie cellulaire vis-à-vis d’un stress (Nonaka et al, Inhibitory effect of heat shock protein 70 on apoptosis induced by photodynamic therapy in vitro. Photochem Photobiol, 2004, 79(1):94-98), et aide à décider si une protéine altérée sera sélectionnée pour être réparée ou envoyée vers le système de recyclage qu’est le protéasome (Wagstaff et al, 2007).- the HSPA5 gene, coding for subunits of the HSP70 protein. This chaperone protein is known for its role in protection against temperature changes, thus allowing the thermo tolerance of cells exposed to temperature stress. It is also an important chaperone during the transport of proteins into the mitochondria, which is therefore involved in mitochondrial function. The HSP70 protein binds to numerous proteins and allows their correct conformation, increases cell survival in the face of stress (Nonaka et al, Inhibitory effect of heat shock protein 70 on apoptosis induced by photodynamic therapy in vitro. Photochem Photobiol, 2004, 79(1):94-98), and helps decide whether an altered protein will be selected for repair or sent to the proteasome recycling system (Wagstaff et al, 2007).
- les 7 gènes HSPB6, HSPB8, HSPB1, HSPB3, DNAJC24, DNAJC16, et DNAJB9, codant pour des sous-unités des HSP, qui tendent à diminuer avec l’âge des fibroblastes.- the 7 genes HSPB6, HSPB8, HSPB1, HSPB3, DNAJC24, DNAJC16, and DNAJB9, coding for HSP subunits, which tend to decrease with the age of the fibroblasts.
- les 3 gènes DNAJC24, DNAJB9, DNAJC16, codants pour des sous-unités de la protéine HSP40. La protéine HSP40 est une chaperonne connue pour se fixer aux protéines HSP70 et leur conférer une spécificité d’action et de localisation (Fan et al., Mechanisms for regulation of Hsp70 function by Hsp40, Cell Stress Chaperones. 2003 Oct ; 8(4): 309–316). HSP40 est donc un régulateur de HSP70.- the 3 genes DNAJC24, DNAJB9, DNAJC16, coding for subunits of the HSP40 protein. The HSP40 protein is a chaperone known to bind to HSP70 proteins and give them specificity of action and localization (Fan et al., Mechanisms for regulation of Hsp70 function by Hsp40, Cell Stress Chaperones. 2003 Oct; 8(4) : 309–316). HSP40 is therefore a regulator of HSP70.
-les 4 gènes HSPB6, HSPB8, HSPB1, HSPB3, codant pour des sous-unités des petites HSP (HSP20, HSP22 et HSP27). Notamment, la protéine HSP27 est une molécule chaperonne ayant une fonction dans la survie cellulaire. HSP27 possède également un rôle important dans l’architecture et la réparation des tissus nouvellement formés, ce qui se traduit par un effet tenseur et un effet raffermissant (Hirano et al, HSP27 regulates fibroblast adhesion, motility, and matrix contraction.Cell Stress Chaperones. 2004;9(1):29-37). HSP27 est phosphorylée en présence d’une forte teneur en TGF-beta, ce qui stimule la production de collagène de type 1. HSP27 permet une meilleure adhésion des fibroblastes aux fibres de collagène. De plus, HSP27 possède une activité chaperon intrinsèque, et stimule la dégradation par le protéasome 26S des protéines altérées et marquées par l’ubiquitine, et permet ainsi de limiter l’accumulation de ces protéines altérées dans la peau, et notamment la lipofuscine (Arrigo AP, Heat Shock Proteins as molecular chaperones. Med Sci (Paris) 2005 ; 21 : 619–625).-the 4 genes HSPB6, HSPB8, HSPB1, HSPB3, coding for small HSP subunits (HSP20, HSP22 and HSP27). In particular, the HSP27 protein is a chaperone molecule with a function in cell survival. HSP27 also has an important role in the architecture and repair of newly formed tissues, which results in a tensor and firming effect (Hirano et al, HSP27 regulates fibroblast adhesion, motility, and matrix contraction. Cell Stress Chaperones . 2004;9(1):29-37). HSP27 is phosphorylated in the presence of a high content of TGF-beta, which stimulates the production of type 1 collagen. HSP27 allows better adhesion of fibroblasts to collagen fibers. In addition, HSP27 has an intrinsic chaperone activity, and stimulates the degradation by the 26S proteasome of altered proteins marked by ubiquitin, and thus makes it possible to limit the accumulation of these altered proteins in the skin, and in particular lipofuscin (Arrigo AP, Heat Shock Proteins as molecular chaperones. Med Sci (Paris) 2005; 21: 619–625).
Dès lors, en stimulant des sous-unités des HSP impliquées en particulier dans la formation des HSP27, HSP40 et HSP70, l’extrait d’Emiliania huxleyiobtenu n’ayant pas, ou très peu, formé de coccolithes est apte à favoriser la réponse aux stress environnementaux, la réparation des protéines ou leur dégradation par le système du protéasome, et à avoir un effet sur la matrice de collagène, notamment sur sa synthèse, sa structure et sa contraction.Therefore, by stimulating HSP subunits involved in particular in the formation of HSP27, HSP40 and HSP70, the extract of Emiliania huxleyi obtained having not, or very little, formed coccoliths is able to promote the response to environmental stresses, the repair of proteins or their degradation by the proteasome system, and to have an effect on the collagen matrix, in particular on its synthesis, its structure and its contraction.
Ces résultats sont résumés dans le tableau 1 ci-après.These results are summarized in Table 1 below.
Effet de l’extrait d’Emiliania huxleyi sur l’expression des gènes des HSP (résultats exprimés en % d’augmentation, par rapport au témoin ne comprenant pas l’extrait).Effect of Emiliania huxleyi extract on the expression of HSP genes (results expressed as a % increase, compared to the control not including the extract).
Expression de gènes codant pour des protéines du protéasomeExpression of genes encoding proteasome proteins
L’analyse de l’application de l’extrait d’Emiliania huxleyia également démontré que l’expression des 8 gènes PSMA3, PSMA4, PSMA6, PSMB8, PSMB9, PSMB10, PSME1 et PSME2, codant pour des sous-unités du protéasome ou pour des activateurs du protéasome, a été augmentée, aussi bien dans les fibroblastes jeunes qu’âgés.Analysis of the application of Emiliania huxleyi extract also demonstrated that the expression of the 8 genes PSMA3, PSMA4, PSMA6, PSMB8, PSMB9, PSMB10, PSME1 and PSME2, coding for proteasome subunits or for proteasome activators, was increased, both in young and aged fibroblasts.
La stimulation de ces gènes démontre donc la capacité de l’extrait selon l’invention à éliminer les protéines altérées.The stimulation of these genes therefore demonstrates the capacity of the extract according to the invention to eliminate altered proteins.
Ces résultats sont résumés dans le tableau 2 ci-après.These results are summarized in Table 2 below.
Effet de l’extrait d’Emiliania huxleyi sur l’expression des gènes du protéasome (résultats exprimés en % d’augmentation, par rapport au témoin ne comprenant pas l’extrait).Effect of Emiliania huxleyi extract on the expression of proteasome genes (results expressed as a % increase, compared to the control not including the extract).
Expression de gènes codant pour des métallothionéines (MT)Expression of genes encoding metallothioneins (MT)
L’analyse de l’application de l’extrait d’Emiliania huxleyia également démontré que l’expression de 8 gènes (MTF1, MT1A, MT1B, MT1E, MT1F, MT1M, MT1X, MT2A) a été augmentée dans les fibroblastes jeunes. Ces gènes codent pour différentes MT.Analysis of the application of Emiliania huxleyi extract also demonstrated that the expression of 8 genes (MTF1, MT1A, MT1B, MT1E, MT1F, MT1M, MT1X, MT2A) was increased in young fibroblasts. These genes encode different MTs.
Ces résultats sont résumés dans le tableau 3 ci-après.These results are summarized in Table 3 below.
Effet de l’extrait d’Emiliania huxleyi sur l’expression des gènes des métallothionéines (résultats exprimés en % d’augmentation, par rapport au témoin ne comprenant pas l’extrait).Effect of Emiliania huxleyi extract on the expression of metallothionein genes (results expressed as a % increase, compared to the control not including the extract).
L’extrait obtenu stimule également l’expression de gènes codant pour des sélénoprotéines, notamment le gène DIO2, qui baisse avec l’âge ; le gène GPX6 codant pour la glutathion peroxidase GPx-6 ; le gène SELENOM codant pour la sélénoprotéine M et le gène TXN codant pour la thiorédoxine 1 (+24%).The extract obtained also stimulates the expression of genes coding for selenoproteins, in particular the DIO2 gene, which declines with age; the GPX6 gene encoding glutathione peroxidase GPx-6; the SELENOM gene encoding selenoprotein M and the TXN gene encoding thioredoxin 1 (+24%).
Enfin, l’extrait stimule l’expression du gène SOD2 codant pour la SuperOxyde Dismutase de type 2 (SOD mitochondriale et manganèse dépendante) sur des fibroblastes âgés (+546%).Finally, the extract stimulates the expression of the SOD2 gene coding for type 2 SuperOxide Dismutase (mitochondrial SOD and manganese dependent) on aged fibroblasts (+546%).
La stimulation de ces gènes démontre également la capacité de l’extrait selon l’invention à détoxifier les cellules contre les métaux lourds.The stimulation of these genes also demonstrates the capacity of the extract according to the invention to detoxify cells against heavy metals.
Expression de gènes codant pour des protéines de la matrice extracellulaire (MEC)Expression of genes encoding extracellular matrix (ECM) proteins
L’analyse de l’application de l’extrait d’Emiliania huxleyia également démontré que cet extrait a un effet sur les protéines impliquées dans les interactions des cellules avec la matrice extracellulaire.Analysis of the application of Emiliania huxleyi extract also demonstrated that this extract has an effect on proteins involved in the interactions of cells with the extracellular matrix.
Il augmente notamment l’expression des 4 gènes ITGA3, ITGA5, FN1 et COL8A1, impliqués dans les interactions des cellules du derme avec la MEC. Il s’agit de récepteurs ou de protéines de la matrice qui diminuent avec l’âge des cellules. Leur augmentation dans les cellules âgées est donc intéressante.It notably increases the expression of the 4 genes ITGA3, ITGA5, FN1 and COL8A1, involved in the interactions of dermis cells with the ECM. These are receptors or matrix proteins that decrease with cell age. Their increase in aged cells is therefore interesting.
De plus, il diminue de 22% l’expression du gène MMP3, codant pour la métalloprotéinase (MMP) de type 3, impliquée dans la dégradation des collagènes dans les fibroblastes âgés. Il est notamment intéressant de diminuer cette protéine car l’expression de MMP3 augmente avec l’âge des cellules (x2,2).In addition, it reduces by 22% the expression of the MMP3 gene, coding for type 3 metalloproteinase (MMP), involved in the degradation of collagen in aged fibroblasts. It is particularly interesting to reduce this protein because the expression of MMP3 increases with the age of the cells (x2.2).
La stimulation de ces gènes démontre également l’action de l’application de l’extrait selon l’invention au niveau de la MEC.The stimulation of these genes also demonstrates the action of the application of the extract according to the invention at the level of the ECM.
Ainsi, en stimulant les défenses anti-oxydantes, par la stimulation des HSP et des MT, et en favorisant l‘élimination des protéines altérées par l’activation du protéasome, l’application topique de l’extrait d’Emiliania huxleyiobtenu selon l’invention permet de préparer la peau à lutter contre le déséquilibre provoqué par les stress et à maintenir son homéostasie.Thus, by stimulating anti-oxidant defenses, by stimulating HSP and MT, and by promoting the elimination of altered proteins by activation of the proteasome, the topical application of the extract of Emiliania huxleyi obtained according to the The invention prepares the skin to fight against the imbalance caused by stress and to maintain its homeostasis.
Une seconde expérimentation in vitro a également été conduite sur des fibroblastes du derme humain, afin d’évaluer l’effet de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention sur la stimulation de gènes codant pour des HSP au niveau des protéines, et codant également pour l’ubiquitine.A second in vitro experiment was also carried out on human dermal fibroblasts, in order to evaluate the effect of the Emiliania huxleyi extract according to the invention on the stimulation of genes coding for HSPs at the protein level, and also encoding ubiquitin.
Conditions de testsTest conditions
Les cellules utilisées dans cette expérimentation étaient des fibroblastes normaux de derme humain (FNDH) d’un donneur de 51 ans, utilisées au 7ème passage. Les cellules ont été ensemencées à 1,1.106cellules en monocouche dans des flasques de culture de 75 cm² pendant 7 jours dans un milieu de culture approprié (Zen Bio). Au 7èmejour et à 80% de confluence, les cellules ont été traitées, ou non (témoin), avec l’extrait d’Emiliania huxleyià 1% (v/v) dans le milieu de culture, en trois exemplaires, pendant 24 heures. Après 24 heures, les cellules ont été traitées à la trypsine pour les détacher, puis lysées avec 350 µL d’un tampon fourni par le fournisseur du kitHuman Heat Shock Protein Antibody Array, dans lequel un cocktail d’inhibiteurs de protéases a été ajouté. La teneur totale en protéines a été mesurée avec un kit BCA assay (Pierce). Les HSP et l’ubiquitine ont été mesurées dans le lysat cellulaire avec le kit RayBio®Heat Shock Protein Antibody Array. Chaque membrane du kit a été imprimée avec des anticorps capables de reconnaître de façon spécifique 9 HSP différentes. Les lysats cellulaires des cellules traitées et des cellules non traitées avec l’extrait d’Emiliania huxleyià 1% (v/v) ont été déposés sur chaque membrane. Après un lavage intensif, les membranes ont été incubées avec un cocktail d’anticorps anti-HSP préalablement marqués à la biotine. Après une incubation avec un complexe Steptavidin-HRP, le signal a été visualisé par chimioluminescence. Cette analyse avait pour but d’évaluer les effets de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention sur la stimulation de l’expression de gènes codant pour des HSP au niveau des protéines, et codant également pour l’ubiquitine.The cells used in this experiment were normal human dermal fibroblasts (FNDH) from a 51-year-old donor, used at the 7th passage. The cells were seeded at 1.1 × 10 6 cells in monolayer in 75 cm² culture flasks for 7 days in an appropriate culture medium (Zen Bio). On the 7th day and at 80% confluence, the cells were treated, or not (control), with the extract of Emiliania huxleyi at 1% (v/v) in the culture medium, in triplicate, for 24 hours. After 24 hours, the cells were treated with trypsin to detach them, then lysed with 350 µL of a buffer provided by the supplier of the Human Heat Shock Protein Antibody Array kit, to which a cocktail of protease inhibitors was added . Total protein content was measured with a BCA assay kit (Pierce). HSPs and ubiquitin were measured in the cell lysate with the RayBio® Heat Shock Protein Antibody Array kit. Each membrane in the kit was printed with antibodies capable of specifically recognizing 9 different HSPs. Cell lysates from cells treated and cells not treated with 1% (v/v) Emiliania huxleyi extract were spotted onto each membrane. After intensive washing, the membranes were incubated with a cocktail of anti-HSP antibodies previously labeled with biotin. After incubation with a Steptavidin-HRP complex, the signal was visualized by chemiluminescence. The aim of this analysis was to evaluate the effects of the Emiliania huxleyi extract according to the invention on the stimulation of the expression of genes coding for HSPs at the protein level, and also coding for ubiquitin.
L’analyse de l’application systémique (dans le milieu de culture) de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention à 1% (v/v) a ainsi permis de démontrer une augmentation significative (p<0,01) de la synthèse des protéines HSP, par comparaison avec le témoin ne comprenant pas l’extrait : HSP10 (+87%), HSP27 (+76%), HSP32 (+145%), HSP40 (+213%), HSP70 (+94%), et également de l’ubiquitine (+74%).The analysis of the systemic application (in the culture medium) of the Emiliania huxleyi extract according to the invention at 1% (v/v) thus made it possible to demonstrate a significant increase (p<0.01) of HSP protein synthesis, compared to the control not including the extract: HSP10 (+87%), HSP27 (+76%), HSP32 (+145%), HSP40 (+213%), HSP70 (+ 94%), and also ubiquitin (+74%).
Ceci confirme donc bien la stimulation de la production des HSP au niveau des protéines, ainsi que de l’ubiquitine, par l’extrait selon l’invention.This therefore confirms the stimulation of HSP production at the protein level, as well as ubiquitin, by the extract according to the invention.
Ces résultats sont résumés dans le tableau 4 ci-après.These results are summarized in Table 4 below.
Effet de l’extrait d’Emiliania huxleyi sur la synthèse des HSP et de l’ubiquitine (résultats exprimés en % d’augmentation de l’expression des gènes, par rapport au témoin ne comprenant pas l’extrait).Effect of Emiliania huxleyi extract on the synthesis of HSPs and ubiquitin (results expressed as % increase in gene expression, compared to the control not including the extract).
Exemple 3 : Effets de l’extrait d’Example 3: Effects of the extract Emiliania huxleyiEmiliania huxleyi obtenu sur l’expression de gènes impliqués dans la préparation et la protection de la peau contre le stress environnemental - expérimentation in vivoobtained on the expression of genes involved in the preparation and protection of the skin against environmental stress - in vivo experimentation
Exemple 3a : Effets de l’application de l’extrait selon l’invention sur la protection de la peau face aux agressions des rayons UVExample 3a: Effects of the application of the extract according to the invention on the protection of the skin against attacks from UV rays
L’exemple 3a démontre les effets de l’extrait d’Emiliania huxleyiobtenu dans l’exemple 1 sur la peau, notamment ses propriétés de protection de la peau face aux agressions extérieurs, en particulier au regard des rayonnements UV.Example 3a demonstrates the effects of the Emiliania huxleyi extract obtained in Example 1 on the skin, in particular its properties of protecting the skin against external aggressions, in particular with regard to UV radiation.
Conditions des testsTest conditions
De l’extrait d’Emiliania huxleyisous la forme d’une émulsion stockée à température ambiante a été appliqué sur 21 volontaires, de sexe féminin et masculin, âgés de 23 à 53 ans, au niveau de la zone du dos. 14% de ces volontaires présentaient une peau à tendance grasse, et 86% présentaient une peau considérée comme normale. Emiliania huxleyi extract in the form of an emulsion stored at room temperature was applied to 21 female and male volunteers, aged 23 to 53 years, to the back area. 14% of these volunteers had oily skin, and 86% had skin considered normal.
Pour cette expérimentation, quatre zones ont été délimitées au niveau du dos des volontaires :
-une zone ayant été exposée aux UV et sur laquelle a été appliqué l’extrait selon l’invention (zone 1) ;
-une zone ayant été exposée aux UV et sur laquelle a été appliqué un placébo (zone 2) ;
-une zone ayant été uniquement exposée aux UV (zone 3) ; et
-une zone n’ayant pas été exposée aux UV, et n’ayant subi aucune application de produit (zone 4).For this experiment, four zones were demarcated on the volunteers' backs:
-an area which has been exposed to UV and to which the extract according to the invention has been applied (zone 1);
-an area that has been exposed to UV and to which a placebo has been applied (zone 2);
-an area that has only been exposed to UV (zone 3); And
-an area which has not been exposed to UV, and which has not undergone any application of product (zone 4).
Un prélèvement au niveau de chacune de ces quatre zones du dos a été effectué à l’aide d’une bande adhésive, pour analyse.A sample from each of these four areas of the back was taken using an adhesive strip for analysis.
i) Dans un premier temps, il a été analysé le stress oxydant effectivement induit au niveau de la peau par une exposition aux UV, c’est-à-dire au niveau des zones 3 et 4. Les groupes carbonyles dustratum corneumprélevé par les bandes adhésives ont été marqués avec de la fluorescéine-5-thiosemicarbazide (FTZ). En effet, les protéines carbonylées sont induites après un stress dû aux UV, et sont donc un bon marqueur de stress oxydant. Les images de coloration de ces groupes carbonyles ont été observées par microscopie à fluorescence, et l'intensité de fluorescence moyenne dustratum corneumextraite des images a été calculée en tant que ‘niveau de protéine carbonylée du stratum corneum’ («stratum corneum carbonylated protein », SCCP).i) Firstly, the oxidative stress actually induced in the skin by UV exposure, that is to say in zones 3 and 4, was analyzed. The carbonyl groups of the stratum corneum taken by The adhesive strips were labeled with fluorescein-5-thiosemicarbazide (FTZ). Indeed, carbonylated proteins are induced after UV stress, and are therefore a good marker of oxidative stress. The staining images of these carbonyl groups were observed by fluorescence microscopy, and the average fluorescence intensity of the stratum corneum extracted from the images was calculated as ' stratum corneum carbonylated protein level'. » , SCCP).
Les résultats de cette analyse sont présentés dans le tableau 5 ci-après. The results of this analysis are presented in Table 5 below .
(en U.I.*/mg de teneur en protéines)Mean and standard deviation
(in IU*/mg of protein content)
(en valeur absolue)Δ% [zone 3 - zone 4]
(in ultimate value)
Validation du stress oxydant induit par l'exposition aux UV (zones non traitées et exposées VS zones non traitées ni exposées)Validation of oxidative stress induced by UV exposure (untreated and exposed areas VS untreated and exposed areas)
* U.I. : Unité Internationale* I.U.: International Unity
La
Il est donc clair, à la lecture de ces résultats, que l’exposition de la peau aux rayons UV induit un stress oxydant.It is therefore clear, after reading these results, that exposure of the skin to UV rays induces oxidative stress.
ii) Dans un second temps, il a été analysé l’effet protecteur de l’extrait selon l’invention contre le stress oxydant induit par l'exposition aux UV. Les résultats de cette analyse sont présentés dans le tableau 6 ci-après.ii) Secondly, the protective effect of the extract according to the invention against oxidative stress induced by UV exposure was analyzed. The results of this analysis are presented in Table 6 below.
(moyenne et écart-type)Δ (zone 1 or 2 – zone 3)
(mean and standard deviation)
Effet protecteur de l’extrait selon l’invention contre le stress oxydant induit par l'exposition aux UV. Protective effect of the extract according to the invention against oxidative stress induced by exposure to UV .
La
Dès lors, il a été démontré que l'application topique des produits testés (extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention et placébo) a réduit de manière significative l'effet du stress induit par les UV au niveau de la peau. La diminution du niveau de SCCP d’une zone exposée et ayant reçu l’application de ces produits par rapport à une zone exposée n’ayant reçu aucune application est, respectivement de 36% en moyenne pour l’extrait d’Emiliania huxleyi, et de 28% en moyenne pour le placébo.Therefore, it was demonstrated that the topical application of the products tested ( Emiliania huxleyi extract according to the invention and placebo) significantly reduced the effect of stress induced by UV rays on the skin. The reduction in the SCCP level of an exposed area having received the application of these products compared to an exposed area having received no application is, respectively, 36% on average for the Emiliania huxleyi extract, and 28% on average for the placebo.
Au vu de ces résultats, il a pu être déterminé un indice de protection antioxydant pour chaque produit, qui est de 92% pour l’extrait d’Emiliania huxleyi, et de seulement 71% pour le placébo.In view of these results, it was possible to determine an antioxidant protection index for each product, which is 92% for the Emiliania huxleyi extract, and only 71% for the placebo.
Il peut être remarqué que l’effet de l’extrait d’Emiliania huxleyiest significativement meilleur que celui du placébo.It can be noted that the effect of Emiliania huxleyi extract is significantly better than that of the placebo.
Ainsi, de par l’ensemble des résultats de cet exemple 3a, et notamment la diminution des marqueurs de stress oxydant au niveau de la peau exposée aux UV et ayant reçu une application topique de l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention, c’est-à-dire ne comprenant pas, ou très peu seulement, de coccolithes, il a été démontré la réduction de la carbonylation des protéines au niveau de la peau par cet extrait, ce qui illustre bien l’effet protecteur de la peau de l’extrait selon l’invention, en particulier au regard des agressions extérieures par les rayonnements UV.Thus, from all the results of this example 3a, and in particular the reduction in oxidative stress markers in the skin exposed to UV and having received a topical application of the Emiliania huxleyi extract according to the invention, that is to say not including any, or only very few, coccoliths, it has been demonstrated the reduction of protein carbonylation in the skin by this extract, which clearly illustrates the protective effect of the skin of the extract according to the invention, in particular with regard to external attacks by UV radiation.
Exemple 3b : Effets de l’application de l’extrait selon l’invention sur la réparation de la peau face à une agression extérieure de type produit chimiqueExample 3b: Effects of the application of the extract according to the invention on the repair of the skin in the face of external aggression such as a chemical product
L’exemple 3b démontre les effets sur la peau de l’extrait d’Emiliania huxleyiobtenu dans l’exemple 1, notamment ses propriétés de réparation de la peau, en particulier après une agression par un détergent.Example 3b demonstrates the effects on the skin of the Emiliania huxleyi extract obtained in Example 1, in particular its skin repair properties, in particular after attack by a detergent.
Conditions des testsTest conditions
De l’extrait d’Emiliania huxleyisous la forme d’une émulsion stockée à température ambiante a été appliqué sur 23 volontaires de sexe féminin, âgées de 18 à 56 ans, au niveau de la zone des avant-bras. Emiliania huxleyi extract in the form of an emulsion stored at room temperature was applied to 23 female volunteers, aged 18 to 56 years, to the forearm area.
Pour cette expérimentation, quatre zones ont été délimitées au niveau des avant-bras des volontaires. Des patchs comprenant 300 μL de 0,5% de détergent, qui est du sodium lauryl sulfate, ont été appliqués sur certaines de ces zones. Les zones sont les suivantes :
-une zone patchée sur laquelle a été appliqué de l’extrait selon l’invention (zone 1) ;
-une zone patchée sur laquelle a été appliqué un placébo (zone 2) ;
-une zone patchée n’ayant reçu aucune application de produit (zone 3) ;
-une zone non patchée et n’ayant reçu aucune application de produit (zone 4).For this experiment, four zones were demarcated on the volunteers' forearms. Patches comprising 300 μL of 0.5% detergent, which is sodium lauryl sulfate, were applied to some of these areas. The areas are as follows:
-a patched area to which the extract according to the invention has been applied (zone 1);
-a patched area to which a placebo was applied (zone 2);
-a patched area that has not received any product application (zone 3);
-an area that has not been patched and has not received any product application (zone 4).
L’application de l’extrait selon l’invention et du placébo a été faite biquotidiennement, pendant 6 jours.The application of the extract according to the invention and the placebo was done twice daily for 6 days.
La perte en eau transépidermique («Trans Epidermal Water Loss », TEWL) a été mesurée sur les quatre zones, avec un Tewameter TM 300® (Courage & Khazaka). En effet, la barrière cutanée agit comme un régulateur de l'équilibre hydrique de la peau. Lorsque celle-ci est endommagée, le système de régulation des échanges hydriques est déstabilisé. L'eau migre alors plus facilement vers le milieu extérieur, ce qui augmente la TEWL. En revanche, si l'état de la barrière cutanée s'améliore, la perte en eau diminue car le mécanisme de régulation des échanges hydriques retrouve son équilibre. La mesure de la perte en eau permet donc d'évaluer l'effet barrière de la couche cornée et du film hydrolipidique.Transepidermal water loss (“ Trans Epidermal Water Loss” (TEWL) was measured in the four zones, with a Tewameter TM 300® (Courage & Khazaka). In fact, the skin barrier acts as a regulator of the skin's water balance. When this is damaged, the water exchange regulation system is destabilized. The water then migrates more easily towards the external environment, which increases the TEWL. On the other hand, if the condition of the skin barrier improves, water loss decreases because the mechanism for regulating water exchange regains its balance. Measuring water loss therefore makes it possible to evaluate the barrier effect of the stratum corneum and the hydrolipidic film.
Les résultats de cette analyse sont présentés dans les tableaux 7 à 9 ci-après :The results of this analysis are presented in tables 7 to 9 below:
Comparaison de l'effet réparateur et restructurant de l’extrait selon l’invention face à une zone n’ayant pas reçu d’application de produitComparison of the restorative and restructuring effect of the extract according to the invention in relation to an area which has not received any product application
**J : jour**D: day
Comparaison de l'effet réparateur et restructurant du placébo face à une zone n’ayant pas reçu d’application de produitComparison of the restorative and restructuring effect of the placebo compared to an area that has not received any product application
Comparaison de l'effet réparateur et restructurant de l’extrait selon l’invention face au placéboComparison of the restorative and restructuring effect of the extract according to the invention versus the placebo
Les
La
La
Dès lors, de par l’ensemble des résultats de cet exemple 3b, il a été démontré que, par rapport à une zone de peau agressée avec un détergent et sur laquelle aucune application de produit (extrait selon l’invention et placébo) n’a été effectuée, et après application topique biquotidienne à partir du jour 2, l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention a présenté un effet restructurant/réparateur du jour 3 au jour 8. Cet effet est en particulier illustré par une diminution significative de la perte en eau transépidermique (facteur TEWL) de 20 % entre les jours 2 et 4, observée chez 78% des volontaires.Therefore, from all the results of this example 3b, it has been demonstrated that, compared to an area of skin attacked with a detergent and on which no application of product (extract according to the invention and placebo) was carried out, and after twice-daily topical application from day 2, the extract of Emiliania huxleyi according to the invention presented a restructuring/repairing effect from day 3 to day 8. This effect is in particular illustrated by a significant reduction transepidermal water loss (TEWL factor) of 20% between days 2 and 4, observed in 78% of volunteers.
A l’inverse, il a été démontré que le placébo n'a pas présenté d'effet restructurant/réparateur.Conversely, it was demonstrated that the placebo did not have a restructuring/restorative effect.
Ainsi, l’ensemble des résultats de ces deux exemples 2 et 3 viennent démontrer que l’extrait d’Emiliania huxleyiselon l’invention ne comprenant essentiellement pas de coccolithes permet de préparer la peau à réagir de façon optimale aux agressions de l’environnement, et à la protéger, notamment face au stress oxydant pouvant être induit par de multiples facteurs extérieurs, tels que les rayonnements UV ou le contact avec des produits chimiques. Cet extrait permet également de la réparer en cas de telles agressions.
Thus, all the results of these two examples 2 and 3 demonstrate that the extract of Emiliania huxleyi according to the invention, essentially not comprising coccoliths, makes it possible to prepare the skin to react optimally to environmental aggressions. , and to protect it, particularly in the face of oxidative stress that can be induced by multiple external factors, such as UV radiation or contact with chemicals. This extract also allows it to be repaired in the event of such attacks.
Claims (10)
-une étape de culture d’Emiliania huxleyi en photobioréacteur, mettant en œuvre un milieu de culture comprenant de l’eau de mer, un ou plusieurs microéléments, tel que du sélénium, et entre 10 et 100 µM (micromoles.L-1) de phosphate, ladite étape permettant la culture d’Emiliania huxleyi essentiellement sans production de coccolithes, c’est-à-dire que seulement quelques pourcents des cellules produites d’Emiliania huxleyi possèdent un coccolithe, préférentiellement moins de 1% des cellules produites, et encore plus préférentiellement moins de 0,1% des cellules produites ;
-une étape de récolte de ladite culture ;
-une étape de congélation de ladite culture ;
-une étape de décongélation de ladite culture congelée et d’ajout de propane-1,3-diol ; et
-au moins une étape de filtration.Process for producing an extract of the microalgae Emiliania huxleyi comprising:
-a step of culturing Emiliania huxleyi in a photobioreactor, using a culture medium comprising sea water, one or more microelements, such as selenium, and between 10 and 100 µM (micromoles.L -1 ) of phosphate, said step allowing the cultivation of Emiliania huxleyi essentially without production of coccoliths, that is to say that only a few percent of the cells produced of Emiliania huxleyi have a coccolith, preferably less than 1% of the cells produced, and even more preferably less than 0.1% of the cells produced;
-a step of harvesting said culture;
-a step of freezing said culture;
-a step of thawing said frozen culture and adding 1,3-propane diol; And
-at least one filtration step.
-une étape de filtration tangentielle à travers un filtre présentant un seuil de coupure de 0,2 μm ; et
-une étape de filtration stérilisante.Method according to claim 1, wherein said at least one filtration step comprises:
-a tangential filtration step through a filter having a cut-off threshold of 0.2 μm; And
-a sterilizing filtration step.
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|---|---|---|---|
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| FR2201873 | 2022-03-03 | ||
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Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3270887B1 (en) * | 2015-03-18 | 2020-10-21 | Pierre Fabre Dermo-Cosmétique | Method for producing an extract of a matrix of vegetable origin by extrusion with a hydrotrope solution |
-
2022
- 2022-03-03 FR FR2201873A patent/FR3133132A1/en active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| EP3270887B1 (en) * | 2015-03-18 | 2020-10-21 | Pierre Fabre Dermo-Cosmétique | Method for producing an extract of a matrix of vegetable origin by extrusion with a hydrotrope solution |
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