FR3126617A1 - compositions comprising extracellular vesicles, secreted biomolecules and/or conditioned media, and methods for producing them - Google Patents
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Abstract
compositions comprenant des vésicules extracellulaires, des biomolécules sécrétées et/ou des milieux conditionnés, et procédés pour les produire La divulgation concerne de nouvelles compositions comprenant des 1) milieux conditionnés, 2) des combinaisons de biomolécules sécrétées/molécules organiques, et/ou 3) des vésicules extracellulaires sécrétées/exosomes prélevées à partir d'une culture de cellules épithéliales différenciées, tous uniques, ainsi que des procédés de fabrication et d'utilisation de telles compositions. Figure pour l'abrégé : 1 compositions comprising extracellular vesicles, secreted biomolecules and/or conditioned media, and methods for producing them Disclosed are novel compositions comprising 1) conditioned media, 2) combinations of secreted biomolecules/organic molecules, and/or 3) secreted extracellular vesicles/exosomes taken from a culture of differentiated epithelial cells, all of which are unique, as well as methods of making and using such compositions. Figure for abstract: 1
Description
La divulgation concerne des compositions et des procédés de fabrication de compositions à partir de milieux conditionnés produits par des cellules épithéliales différenciées, et des procédés d'utilisation de celles-ci.The disclosure relates to compositions and methods of making compositions from conditioned media produced by differentiated epithelial cells, and methods of using the same.
CONTEXTECONTEXT
Les kératinocytes représentent le type de cellule majeur de l'épiderme, la plus externe des couches de la peau, constituant environ 90 % des cellules. Ils prennent naissance dans la couche la plus profonde de l'épiderme, la couche basale, et remontent jusqu'à la dernière couche barrière de la peau, le stratum corneum (couche cornée). Là, les kératinocytes se présentent sous la forme de cellules squameuses sans noyau, plates et hautement kératinisées. La fonction principale des kératinocytes est la formation d'une barrière contre les dommages environnementaux causés par la chaleur, le rayonnement UV, la perte d'eau, les bactéries pathogènes, les champignons, les parasites et les virus. Les kératinocytes jouent donc un rôle important dans nombre de processus physiologiques dont le vieillissement, la protection contre les coups de soleil et la modulation des réponses immunitaires. Les kératinocytes sécrètent une variété de biomolécules qui jouent un rôle dans ces processus. Le prélèvement de ces biomolécules pourrait s'avérer précieuse pour le traitement de diverses affections.Keratinocytes represent the major cell type of the epidermis, the outermost layer of the skin, constituting about 90% of the cells. They start in the deepest layer of the epidermis, the basal layer, and go up to the last barrier layer of the skin, the stratum corneum (horny layer). There, keratinocytes appear as nucleusless, flat, highly keratinized squamous cells. The main function of keratinocytes is to form a barrier against environmental damage caused by heat, UV radiation, water loss, pathogenic bacteria, fungi, parasites and viruses. Keratinocytes therefore play an important role in a number of physiological processes including aging, protection against sunburn and modulation of immune responses. Keratinocytes secrete a variety of biomolecules that play a role in these processes. Collecting these biomolecules could prove valuable for the treatment of various conditions.
Cependant, le prélèvement de quantités et de combinaisons biologiquement utiles de ces biomolécules est entravé par la source des kératinocytes. Dans certains cas, les lignées cellulaires sont cultivées en monocouche ou sur des billes, par opposition aux cellules cultivées en trois dimensions (3D). Le milieu de culture cellulaire conditionné conventionnel produit par les lignées cellulaires cultivées en monocouche ou sur des billes est généralement jeté. Dans d'autres cas, les cellules sont intégrées dans une matrice ou mises en suspension dans un milieu, tel qu'un milieu concentré, qui soutient les cellules dans un format tridimensionnel. Voir, par exemple, le document U.S. 8 138 147. Cependant, les tissus comportant des couches épithéliales différenciées, telles qu'une couche basale, un stratum spinosum, une couche granulaire et un stratum corneum (comme on le trouve in vivo), ne sont pas divulgués dans l'art en employant ces procédés de culture cellulaire tridimensionnelle. Ainsi, il n'existe actuellement aucune composition contenant la variété ou le niveau de facteurs de croissance ou de biomolécules que l'on trouve dans les milieux conditionnés préparés selon les procédés décrits ici.However, the uptake of biologically useful quantities and combinations of these biomolecules is hampered by the source of the keratinocytes. In some cases, cell lines are cultured in a monolayer or on beads, as opposed to cells cultured in three dimensions (3D). Conventional conditioned cell culture medium produced by cell lines grown in monolayer or on beads is usually discarded. In other cases, the cells are embedded in a matrix or suspended in a medium, such as a concentrated medium, which supports the cells in a three-dimensional format. See, for example, U.S. 8,138,147. However, tissues with differentiated epithelial layers, such as basal layer, stratum spinosum, granular layer, and stratum corneum (as found in vivo), do are not disclosed in the art employing these three-dimensional cell culture methods. Thus, no composition currently exists containing the variety or level of growth factors or biomolecules found in conditioned media prepared by the methods described herein.
RÉSUMÉSUMMARY
Une composition comprenant des vésicules extracellulaires et un vecteur cosmétique acceptable a maintenant été développée de manière étonnante et inattendue. Dans un mode de réalisation, les vésicules extracellulaires sont dérivées d'un milieu conditionné prélevé de kératinocytes cultivés à une interface air-liquide dans un milieu nutritif suffisant pour répondre aux besoins nutritionnels nécessaires à la croissance des cellules in vitro pour former des cellules épithéliales différenciées. Dans un mode de réalisation, la composition comprend des vésicules extracellulaires dérivées du milieu conditionné prélevé par les kératinocytes et un vecteur cosmétique acceptable, dans lequel les kératinocytes sont cultivés à une interface air-liquide dans un milieu nutritif suffisant pour répondre aux besoins nutritionnels nécessaires à la croissance des cellules in vitro pour former des cellules épithéliales différenciées.A composition comprising extracellular vesicles and a cosmetically acceptable carrier has now been surprisingly and unexpectedly developed. In one embodiment, the extracellular vesicles are derived from conditioned medium taken from keratinocytes cultured at an air-liquid interface in sufficient nutrient medium to meet the nutritional requirements necessary for cell growth in vitro to form differentiated epithelial cells. . In one embodiment, the composition comprises extracellular vesicles derived from the conditioned medium taken up by the keratinocytes and a cosmetically acceptable carrier, wherein the keratinocytes are cultured at an air-liquid interface in a nutrient medium sufficient to meet the nutritional requirements necessary for cell growth in vitro to form differentiated epithelial cells.
Dans un mode de réalisation, les cellules épithéliales différenciées sont confluentes à au moins 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 %.In one embodiment, the differentiated epithelial cells are at least 95%, 96%, 97%, 98% or 99% confluent.
Dans un autre mode de réalisation, les cellules épithéliales différenciées comprennent en moyenne au moins 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25 couches de cellules vivantes. Par exemple, les cellules épithéliales différenciées peuvent comprendre en moyenne 1 à 2 couches de cellules, telles que 2 couches de cellules vivantes, ou en moyenne 3 à 5 couches de cellules, telles que 3 à 4 couches de cellules vivantes, ou en moyenne 5 à 8 couches de cellules, telles que 6 à 7 couches de cellules vivantes, ou en moyenne 8 à 10 couches de cellules vivantes.In another embodiment, the differentiated epithelial cells comprise on average at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 or 25 layers of living cells. For example, differentiated epithelial cells may comprise an average of 1-2 cell layers, such as 2 live cell layers, or an average of 3-5 cell layers, such as 3-4 live cell layers, or an average of 5 to 8 cell layers, such as 6-7 live cell layers, or average 8-10 live cell layers.
Les cellules épithéliales différenciées peuvent former des couches de cellules comprenant une couche basale, un stratum spinosum, une couche granulaire et un stratum corneum.Differentiated epithelial cells can form cell layers including basal layer, stratum spinosum, granular layer, and stratum corneum.
Dans un mode de réalisation, les cellules épithéliales différenciées ont une épaisseur de couches de cellules vivantes d'au moins environ 2 µm, d'au moins environ 3 µm, d'au moins environ 4 µm, d'au moins environ 5 µm, d'au moins environ 6 µm, d'au moins environ 7 µm, d'au moins environ 8 µm, d'au moins environ 9 µm, d'au moins environ 10 µm, d'au moins environ 11 µm, d'au moins environ 12 µm, au moins environ 13 µm, au moins environ 14 µm, au moins environ 15 µm, au moins environ 16 µm, au moins environ 17 µm, au moins environ 18 µm, au moins environ 19 µm, au moins environ 20 µm, au moins environ 21 µm, au moins environ 22 µm, au moins environ 23 µm, au moins environ 24 µm, au moins environ 25 µm, au moins environ 26 µm, au moins environ 27 µm, au moins environ 28 µm, au moins environ 29 µm, au moins environ 30 µm, au moins environ 31 µm, au moins environ 32 µm, au moins environ 33 µm, au moins environ 34 µm, au moins environ 35 µm, au moins environ 36 µm, au moins environ 37 µm, au 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environ 120 µm.In one embodiment, the differentiated epithelial cells have a live cell layer thickness of at least about 2 µm, at least about 3 µm, at least about 4 µm, at least about 5 µm, at least about 6 µm, at least about 7 µm, at least about 8 µm, at least about 9 µm, at least about 10 µm, at least about 11 µm, at least about 12 µm, at least about 13 µm, at least about 14 µm, at least about 15 µm, at least about 16 µm, at least about 17 µm, at least about 18 µm, at least about 19 µm, at least about 20 µm, at least about 21 µm, at least about 22 µm, at least about 23 µm, at least about 24 µm, at least about 25 µm, at least about 26 µm, at least about 27 µm, at least about 28 μm, at least about 29 μm, at least about 30 μm, at least about 31 μm, at least about 32 μm, at least about 33 μm, at least about 34 μm, at least about 35 μm, at least about 36 μm, at least about 37 µm, at least about 38 µm, at least about 39 µm, at least about 40 µm, at least about 41 µm, at least about 42 µm, at least about 43 µm, at least about 44 µm, at least about 45 µm, at least about 46 µm, at least about 47 µm, at least about 48 µm, at least about 49 µm, at least about 50 µm, at least about 51 µm, at least about 52 µm, at least about 53 μm, at least about 54 μm, at least about 55 μm, at least about 56 μm, at least about 57 μm, at least about 58 μm, at least about 59 μm, at least about 60 μm, at least about 61 μm, at least about 62 µm, at least about 63 µm, at least about 64 µm, at least about 65 µm, at least about 66 µm, at least about 67 µm, at least about 68 µm, at least about 69 µm, at least about 70 µm, at least about 71 µm, at least about 72 µm, at least about 73 µm, at least about 74 µm, at least about 75 µm, at least about 76 µm, at least about 77 µm, at least about 78 μm, at least about 79 μm, at least about 80 μm, at least about 81 μm, at least about 82 μm, at least about 83 μm, at least about 84 μm, at least about 85 μm, at least about 86 μm, at least about 87 µm, at least about 88 µm, at least about 89 µm, at least about 90 µm, at least about 91 µm, at least about 92 µm, at least about 93 µm, at least about 94 µm, at least about 95 µm, at least about 96 µm, at least about 97 µm, at least about 98 µm, at least about 99 µm, at least about 100 µm, at least about 101 µm, at least about 102 µm, at least about 103 μm, at least about 104 μm, at least about 105 μm, at least about 106 μm, at least about 107 μm, at least about 108 μm, at least about 109 μm, at least about 110 μm, at least about 111 μm, at least about 112 µm, at least about 113 µm, at least about 114 µm, at least about 115 µm, at least about 116 µm, at least about 117 µm, at least about 118 µm, at least about 119 µm, or at less about 120 µm.
Par exemple, les cellules épithéliales différenciées peuvent avoir une épaisseur de couches de cellules vivantes d'environ 2 µm à environ 141 µm, d'environ 2 µm à environ 140 µm, d'environ 2 µm à environ 139 µm, d'environ 2 µm à environ 138 µm, d'environ 2 µm à environ 137 µm, d'environ 2 µm à environ 136 µm, d'environ 2 µm à environ 135 µm, d'environ 2 µm à environ 134 µm, d'environ 2 µm à environ 133 µm, d'environ 2 µm à environ 132 µm, d'environ 2 µm à environ 131 µm, d'environ 2 µm à environ 130 µm, d'environ 2 µm à environ 129 µm, d'environ 2 µm à environ 128 µm, d'environ 2 µm à environ 127 µm, d'environ 2 µm à environ 126 µm, d'environ 2 µm à environ 125 µm, d'environ 2 µm à environ 124 µm, d'environ 2 µm à environ 123 µm, d'environ 2 µm à environ 122 µm, d'environ 2 µm à environ 121 µm, ou d'environ 2 µm à environ 120 µm.For example, differentiated epithelial cells may have a live cell layer thickness of about 2 µm to about 141 µm, about 2 µm to about 140 µm, about 2 µm to about 139 µm, about 2 μm to about 138 μm, from about 2 μm to about 137 μm, from about 2 μm to about 136 μm, from about 2 μm to about 135 μm, from about 2 μm to about 134 μm, from about 2 μm to about 133 μm, from about 2 μm to about 132 μm, from about 2 μm to about 131 μm, from about 2 μm to about 130 μm, from about 2 μm to about 129 μm, from about 2 μm to about 128 μm, from about 2 μm to about 127 μm, from about 2 μm to about 126 μm, from about 2 μm to about 125 μm, from about 2 μm to about 124 μm, from about 2 µm to about 123 µm, from about 2 µm to about 122 µm, from about 2 µm to about 121 µm, or from about 2 µm to about 120 µm.
Par exemple, les cellules épithéliales différenciées peuvent avoir une épaisseur de couches de cellules vivantes d'environ 70 µm à environ 141 µm, d'environ 70 µm à environ 140 µm, d'environ 70 µm à environ 139 µm, d'environ 70 µm à environ 138 µm, d'environ 70 µm à environ 137 µm, d'environ 70 µm à environ 136 µm, d'environ 70 µm à environ 135 µm, d'environ 70 µm à environ 134 µm, d'environ 70 µm à environ 133 µm, d'environ 70 µm à environ 132 µm, d'environ 70 µm à environ 131 µm, d'environ 70 µm à environ 130 µm, d'environ 70 µm à environ 129 µm, d'environ 70 µm à environ 128 µm, d'environ 70 µm à environ 127 µm, d'environ 70 µm à environ 126 µm, d'environ 70 µm à environ 125 µm, d'environ 70 µm à environ 124 µm, d'environ 70 µm à environ 123 µm, d'environ 70 µm à environ 122 µm, d'environ 70 µm à environ 121 µm, ou d'environ 70 µm à environ 120 µm, comme d'environ 71 µm à environ 120 µm, d'environ 72 µm à environ 120 µm, d'environ 73 µm à environ 120 µm, d'environ 74 µm à environ 120 µm, d'environ 75 µm à environ 120 µm, d'environ 76 µm à environ 120 µm, d'environ 77 µm à environ 120 µm, d'environ 78 µm à environ 120 µm, d'environ 79 µm à environ 120 µm, d'environ 80 µm à environ 120 µm, comme d'environ 81 µm à environ 120 µm, d'environ 82 µm à environ 120 µm, d'environ 83 µm à environ 120 µm, d'environ 84 µm à environ 120 µm, d'environ 85 µm à environ 120 µm, d'environ 86 µm à environ 120 µm, d'environ 87 µm à environ 120 µm, d'environ 88 µm à environ 120 µm, d'environ 89 µm à environ 120 µm, ou d'environ 90 µm à environ 120 µm.For example, differentiated epithelial cells may have a live cell layer thickness of about 70 µm to about 141 µm, about 70 µm to about 140 µm, about 70 µm to about 139 µm, about 70 μm to about 138 μm, from about 70 μm to about 137 μm, from about 70 μm to about 136 μm, from about 70 μm to about 135 μm, from about 70 μm to about 134 μm, from about 70 μm to about 133 μm, from about 70 μm to about 132 μm, from about 70 μm to about 131 μm, from about 70 μm to about 130 μm, from about 70 μm to about 129 μm, from about 70 μm to about 128 μm, from about 70 μm to about 127 μm, from about 70 μm to about 126 μm, from about 70 μm to about 125 μm, from about 70 μm to about 124 μm, from about 70 µm to about 123 µm, from about 70 µm to about 122 µm, from about 70 µm to about 121 µm, or from about 70 µm to about 120 µm, such as from about 71 µm to about 120 µm, about 72 µm to about 120 µm, about 73 µm to about 120 µm, about 74 µm to about 120 µm, about 75 µm to about 120 µm, about 76 µm to about 120 µm, about 77 µm to about 120 µm, about 78 µm to about 120 µm, about 79 µm to about 120 µm, about 80 µm to about 120 µm, such as about 81 µm to about 120 µm, d about 82 μm to about 120 μm, from about 83 μm to about 120 μm, from about 84 μm to about 120 μm, from about 85 μm to about 120 μm, from about 86 μm to about 120 μm, d about 87 μm to about 120 μm, from about 88 μm to about 120 μm, from about 89 μm to about 120 μm, or from about 90 μm to about 120 μm.
Par exemple, les cellules épithéliales différenciées peuvent avoir une épaisseur de couches de cellules vivantes d'environ 2 µm à environ 70 µm, d'environ 2 µm à environ 69 µm, d'environ 2 µm à environ 68 µm, d'environ 2 µm à environ 67 µm, d'environ 2 µm à environ 66 µm, d'environ 2 µm à environ 65 µm, d'environ 2 µm à environ 64 µm, d'environ 2 µm à environ 63 µm, d'environ 2 µm à environ 62 µm, d'environ 2 µm à environ 61 µm, d'environ 2 µm à environ 60 µm, d'environ 2 µm à environ 59 µm, d'environ 2 µm à environ 58 µm, d'environ 2 µm à environ 57 µm, d'environ 2 µm à environ 56 µm, d'environ 2 µm à environ 55 µm, d'environ 2 µm à environ 54 µm, d'environ 2 µm à environ 53 µm, d'environ 2 µm à environ 52 µm, d'environ 2 µm à environ 51 µm, d'environ 2 µm à environ 50 µm, d'environ 2 µm à environ 49 µm, d'environ 2 µm à environ 48 µm, d'environ 2 µm à environ 47 µm, d'environ 2 µm à environ 46 µm, d'environ 2 µm à environ 45 µm, d'environ 2 µm à environ 44 µm, d'environ 2 µm à environ 43 µm, d'environ 2 µm à environ 42 µm, d'environ 2 µm à environ 41 µm, d'environ 2 µm à environ 40 µm, d'environ 2 µm à environ 39 µm, d'environ 2 µm à environ 38 µm, d'environ 2 µm à environ 37 µm, d'environ 2 µm à environ 36 µm, d'environ 2 µm à environ 35 µm, d'environ 2 µm à environ 34 µm, d'environ 2 µm à environ 33 µm, d'environ 2 µm à environ 32 µm, d'environ 2 µm à environ 31 µm, d'environ 2 µm à environ 30 µm, d'environ 2 µm à environ 29 µm, d'environ 2 µm à environ 28 µm, d'environ 2 µm à environ 27 µm, d'environ 2 µm à environ 26 µm, d'environ 2 µm à environ 25 µm, d'environ 2 µm à environ 24 µm, d'environ 2 µm à environ 23 µm, d'environ 2 µm à environ 22 µm, d'environ 2 µm à environ 21 µm, d'environ 2 µm à environ 20 µm, d'environ 2 µm à environ 19 µm, d'environ 2 µm à environ 18 µm, d'environ 2 µm à environ 17 µm, d'environ 2 µm à environ 16 µm, d'environ 2 µm à environ 15 µm, d'environ 2 µm à environ 14 µm, d'environ 2 µm à environ 13 µm, d'environ 2 µm à environ 12 µm, d'environ 2 µm à environ 11 µm, d'environ 2 µm à environ 10 µm, d'environ 2 µm à environ 9 µm, d'environ 2 µm à environ 8 µm, d'environ 2 µm à environ 7 µm, d'environ 2 µm à environ 6 µm, d'environ 2 µm à environ 5 µm, d'environ 2 µm à environ 4 µm, ou d'environ 2 µm à environ 3 µm.For example, differentiated epithelial cells may have a live cell layer thickness of about 2 µm to about 70 µm, about 2 µm to about 69 µm, about 2 µm to about 68 µm, about 2 μm to about 67 μm, from about 2 μm to about 66 μm, from about 2 μm to about 65 μm, from about 2 μm to about 64 μm, from about 2 μm to about 63 μm, from about 2 μm to about 62 μm, from about 2 μm to about 61 μm, from about 2 μm to about 60 μm, from about 2 μm to about 59 μm, from about 2 μm to about 58 μm, from about 2 μm to about 57 μm, from about 2 μm to about 56 μm, from about 2 μm to about 55 μm, from about 2 μm to about 54 μm, from about 2 μm to about 53 μm, from about 2 μm to about 52 μm, from about 2 μm to about 51 μm, from about 2 μm to about 50 μm, from about 2 μm to about 49 μm, from about 2 μm to about 48 μm, from about 2 μm to about 47 μm, from about 2 μm to about 46 μm, from about 2 μm to about 45 μm, from about 2 μm to about 44 μm, from about 2 μm to about 43 μm, from about 2 μm to about 42 μm, from about 2 μm to about 41 μm, from about 2 μm to about 40 μm, from about 2 μm to about 39 μm, from about 2 μm to about 38 μm, from about 2 μm to about 37 μm, from about 2 μm to about 36 μm, from about 2 μm to about 35 μm, from about 2 μm to about 34 μm, from about 2 μm to about 33 μm, from about 2 μm to about 32 μm, from about 2 μm to about 31 μm, from about 2 μm to about 30 μm, from about 2 μm to about 29 μm, from about 2 μm to about 28 μm, from about 2 μm to about 27 μm, from about 2 μm to about 26 μm, from about 2 μm to about 25 μm, from about 2 μm to about 24 μm, from about 2 μm to about 23 μm, from about 2 μm to about 22 μm, from about 2 μm to about 21 μm, from about 2 μm to about 20 μm, from about 2 μm to about 19 μm, from about 2 μm to about 18 μm, from about 2 μm to about 17 μm, from about 2 μm to about 16 μm, from about 2 μm to about 15 μm, from about 2 μm to about 14 μm, from about 2 μm to about 13 μm, from about 2 μm to about 12 μm, from about 2 μm to about 11 μm, from about 2 μm to about 10 μm, from about 2 μm to about 9 μm, from about 2 μm to about 8 μm, from about 2 μm to about 7 μm, from about 2 μm to about 6 μm, from about 2 μm to about 5 μm, from about 2 μm to about 4 μm, or from about 2 μm to about 3 μm.
Par exemple, les cellules épithéliales différenciées peuvent avoir une épaisseur de couches de cellules vivantes d'environ 3 µm à environ 70 µm, d'environ 4 µm à environ 70 µm, d'environ 5 µm à environ 70 µm, d'environ 6 µm à environ 70 µm, d'environ 7 µm à environ 70 µm, d'environ 8 µm à environ 70 µm, d'environ 9 µm à environ 70 µm, d'environ 10 µm à environ 70 µm, d'environ 11 µm à environ 70 µm, d'environ 12 µm à environ 70 µm, d'environ 13 µm à environ 70 µm, d'environ 14 µm à environ 70 µm, d'environ 15 µm à environ 70 µm, d'environ 16 µm à environ 70 µm, d'environ 17 µm à environ 70 µm, d'environ 18 µm à environ 70 µm, d'environ 19 µm à environ 70 µm, d'environ 20 µm à environ 70 µm, d'environ 21 µm à environ 70 µm, d'environ 22 µm à environ 70 µm, d'environ 23 µm à environ 70 µm, d'environ 24 µm à environ 70 µm, d'environ 25 µm à environ 70 µm, d'environ 26 µm à environ 70 µm, d'environ 27 µm à environ 70 µm, d'environ 28 µm à environ 70 µm, d'environ 29 µm à environ 70 µm, d'environ 30 µm à environ 70 µm, d'environ 31 µm à environ 70 µm, d'environ 32 µm à environ 70 µm, d'environ 33 µm à environ 70 µm, d'environ 34 µm à environ 70 µm, d'environ 35 µm à environ 70 µm, d'environ 36 µm à environ 70 µm, d'environ 37 µm à environ 70 µm, d'environ 38 µm à environ 70 µm, d'environ 39 µm à environ 70 µm, d'environ 40 µm à environ 70 µm, d'environ 41 µm à environ 70 µm, d'environ 42 µm à environ 70 µm, d'environ 43 µm à environ 70 µm, d'environ 44 µm à environ 70 µm, d'environ 45 µm à environ 70 µm, d'environ 46 µm à environ 70 µm, d'environ 47 µm à environ 70 µm, d'environ 48 µm à environ 70 µm, d'environ 49 µm à environ 70 µm, d'environ 50 µm à environ 70 µm, d'environ 51 µm à environ 70 µm, d'environ 52 µm à environ 70 µm, d'environ 53 µm à environ 70 µm, d'environ 54 µm à environ 70 µm, d'environ 55 µm à environ 70 µm, d'environ 56 µm à environ 70 µm, d'environ 57 µm à environ 70 µm, d'environ 58 µm à environ 70 µm, d'environ 59 µm à environ 70 µm, d'environ 60 µm à environ 70 µm, d'environ 61 µm à environ 70 µm, d'environ 62 µm à environ 70 µm, d'environ 63 µm à environ 70 µm, d'environ 64 µm à environ 70 µm, d'environ 65 µm à environ 70 µm, d'environ 66 µm à environ 70 µm, d'environ 67 µm à environ 70 µm, d'environ 68 µm à environ 70 µm, ou d'environ 69 µm à environ 70 µm.For example, differentiated epithelial cells may have a living cell layer thickness of about 3 µm to about 70 µm, about 4 µm to about 70 µm, about 5 µm to about 70 µm, about 6 μm to about 70 μm, from about 7 μm to about 70 μm, from about 8 μm to about 70 μm, from about 9 μm to about 70 μm, from about 10 μm to about 70 μm, from about 11 μm to about 70 μm, from about 12 μm to about 70 μm, from about 13 μm to about 70 μm, from about 14 μm to about 70 μm, from about 15 μm to about 70 μm, from about 16 μm to about 70 μm, from about 17 μm to about 70 μm, from about 18 μm to about 70 μm, from about 19 μm to about 70 μm, from about 20 μm to about 70 μm, from about 21 μm to about 70 μm, from about 22 μm to about 70 μm, from about 23 μm to about 70 μm, from about 24 μm to about 70 μm, from about 25 μm to about 70 μm, from about 26 μm to about 70 μm, from about 27 μm to about 70 μm, from about 28 μm to about 70 μm, from about 29 μm to about 70 μm, from about 30 μm to about 70 μm, from about 31 μm to about 70 μm, from about 32 μm to about 70 μm, from about 33 μm to about 70 μm, from about 34 μm to about 70 μm, from about 35 μm to about 70 μm, from about 36 μm to about 70 μm, from about 37 μm to about 70 μm, from about 38 μm to about 70 μm, from about 39 μm to about 70 μm, from about 40 μm to about 70 μm, from about 41 μm to about 70 μm, from about 42 μm to about 70 μm, from about 43 μm to about 70 μm, from about 44 μm to about 70 μm, from about 45 μm to about 70 μm, from about 46 μm to about 70 μm, from about 47 μm to about 70 μm, from about 48 μm to about 70 μm, from about 49 μm to about 70 μm, from about 50 μm to about 70 μm, from about 51 μm to about 70 μm, from about 52 μm to about 70 μm, from about 53 μm to about 70 μm, from about 54 μm to about 70 μm, from about 55 μm to about 70 μm, from about 56 μm to about 70 μm, from about 57 μm to about 70 μm, from about 58 μm to about 70 μm, from about 59 μm to about 70 μm, from about 60 μm to about 70 μm, from about 61 μm to about 70 μm, from about 62 μm to about 70 μm, from about 63 μm to about 70 μm, from about 64 μm to about 70 μm, from about 65 μm to about 70 μm, from about 66 µm to about 70 µm, from about 67 µm to about 70 µm, from about 68 µm to about 70 µm, or from about 69 µm to about 70 µm.
Dans un mode de réalisation, les kératinocytes sont des kératinocytes humains.In one embodiment, the keratinocytes are human keratinocytes.
Dans un mode de réalisation, les kératinocytes peuvent être cultivés pendant au moins 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ou 35 jours.In one embodiment, the keratinocytes can be cultured for at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 or 35 days.
Les kératinocytes peuvent être cultivés sur un substrat poreux. Par exemple, les kératinocytes peuvent être incubés pendant au moins 3 heures. Les kératinocytes peuvent être incubés à une température d'environ 36°C à environ 38°C. Les kératinocytes peuvent être incubés à environ 4 %-6 % de CO2. Dans un mode de réalisation, les kératinocytes sont incubés à une humidité d'environ 10 % à environ 100 %, de préférence d'environ 20 % à environ 99 %, de préférence d'environ 30 % à environ 99 %, de préférence d'environ 40 % à environ 99 %, de préférence d'environ 50 % à environ 99 %, de préférence d'environ 60 % à environ 99 %, de préférence d'environ 70 % à environ 99 %, de préférence d'environ 80 % à environ 99 %, de préférence d'environ 85 % à environ 99 %, d'environ 90 % à environ 98 %, d'environ 92 % à environ 97 %, ou d'environ 94 % à environ 96 %.Keratinocytes can be cultured on a porous substrate. For example, keratinocytes can be incubated for at least 3 hours. The keratinocytes can be incubated at a temperature of about 36°C to about 38°C. Keratinocytes can be incubated at approximately 4%-6% CO 2 . In one embodiment, the keratinocytes are incubated at a humidity of from about 10% to about 100%, preferably from about 20% to about 99%, preferably from about 30% to about 99%, preferably from about 40% to about 99%, preferably about 50% to about 99%, preferably about 60% to about 99%, preferably about 70% to about 99%, preferably about 80% to about 99%, preferably about 85% to about 99%, about 90% to about 98%, about 92% to about 97%, or about 94% to about 96%.
Dans certains modes de réalisation, le milieu conditionné comprenant les vésicules extracellulaires est concentré, filtré et/ou purifié avant de combiner les vésicules extracellulaires avec un vecteur acceptable pour former la composition. Les vésicules extracellulaires peuvent être isolées du milieu conditionné avant de combiner les vésicules extracellulaires avec un vecteur acceptable pour former la composition. Les vésicules extracellulaires peuvent être lysées avant d'être combinées avec un vecteur acceptable.In some embodiments, the conditioned medium comprising the extracellular vesicles is concentrated, filtered and/or purified before combining the extracellular vesicles with an acceptable carrier to form the composition. The extracellular vesicles can be isolated from the conditioned medium before combining the extracellular vesicles with an acceptable carrier to form the composition. Extracellular vesicles can be lysed before being combined with an acceptable carrier.
Dans un mode de réalisation, le milieu nutritif est un milieu chimiquement défini. Les kératinocytes peuvent être cultivés en culture discontinue.In one embodiment, the nutrient medium is a chemically defined medium. The keratinocytes can be cultured in discontinuous culture.
Dans un mode de réalisation, les vésicules extracellulaires comprennent de grandes vésicules extracellulaires ayant un diamètre supérieur à 150 nm et de petites vésicules extracellulaires ayant un diamètre de 150 nm ou moins, et dans lequel le rapport moyen des petites vésicules extracellulaires sur les grandes vésicules extracellulaires n'est pas supérieur à 20,5:1, pas supérieur à 20:1, non supérieur à environ 19,5:1, non supérieur à environ 19:1, non supérieur à environ 18,5:1, non supérieur à environ 18:1, non supérieur à environ 17,5:1, non supérieur à environ 17:1, non supérieur à environ 16,5:1, non supérieur à environ 16:1, non supérieur à environ 15,5:1, non supérieur à environ 15:1, non supérieur à environ 14,5:1, non supérieur à environ 14:1, non supérieur à environ 13,5:1, non supérieur à environ 13:1, non supérieur à environ 12,5:1, non supérieur à environ 12:1, non supérieur à environ 11,5:1, non supérieur à environ 11:1, non supérieur à environ 10,5:1, non supérieur à environ 10:1, non supérieur à environ 9,5:1, non supérieur à environ 9:1, non supérieur à environ 8,5:1, non supérieur à environ 8:1, non supérieur à environ 7,5:1, non supérieur à environ 7:1, non supérieur à environ 6,5:1, non supérieur à environ 6:1, non supérieur à environ 5,5:1, non supérieur à environ 5:1, non supérieur à environ 4,5:1, non supérieur à environ 4:1, non supérieur à environ 3. 5:1, non supérieur à environ 3:1, non supérieur à environ 2,5:1, non supérieur à environ 2:1, non supérieur à environ 1,5:1, ou non supérieur à environ 1:1 lorsque les petites vésicules extracellulaires sont détectées dans le milieu conditionné en utilisant une combinaison de filtration à flux tangentiel (TFF pour « Tangential Flow Filtration »)) et de chromatographie d’exclusion diffusion (SEC pour « Size Exclusion Chromatography »), et lorsque les grandes vésicules extracellulaires sont détectées dans le milieu conditionné par TFF.In one embodiment, the extracellular vesicles include large extracellular vesicles having a diameter greater than 150 nm and small extracellular vesicles having a diameter of 150 nm or less, and wherein the average ratio of small extracellular vesicles to large extracellular vesicles is not greater than 20.5:1, not greater than 20:1, not greater than approximately 19.5:1, not greater than approximately 19:1, not greater than approximately 18.5:1, not greater than about 18:1, not more than about 17.5:1, not more than about 17:1, not more than about 16.5:1, not more than about 16:1, not more than about 15.5:1 , not more than about 15:1, not more than about 14.5:1, not more than about 14:1, not more than about 13.5:1, not more than about 13:1, not more than about 12 ,5:1, not greater than about 12:1, not greater than about 11.5:1, not greater than about 11:1, not greater than about 10.5:1, not greater than about 10:1, no greater than about 9.5:1, not greater than about 9:1, not greater than about 8.5:1, not greater than about 8:1, not greater than about 7.5:1, not greater than about 7 :1, not greater than about 6.5:1, not greater than about 6:1, not greater than about 5.5:1, not greater than about 5:1, not greater than about 4.5:1, no greater than about 4:1, not greater than about 3.5:1, not greater than about 3:1, not greater than about 2.5:1, not greater than about 2:1, not greater than about 1.5 :1, or no greater than about 1:1 when small extracellular vesicles are detected in conditioned medium using a combination of tangential flow filtration (TFF) and size exclusion chromatography (SEC for "Size Exclusion Chromatography"), and when the large extracellular vesicles are detected in the medium conditioned by TFF.
Dans un mode de réalisation, les vésicules extracellulaires comprennent de grandes vésicules extracellulaires ayant un diamètre supérieur à 150 nm et de petites vésicules extracellulaires ayant un diamètre de 150 nm ou moins, et dans lequel le rapport moyen des petites vésicules extracellulaires sur les grandes vésicules extracellulaires est compris entre environ 1 : 1 à environ 20:1, d'environ 1:1 à environ 19:1, d'environ 1:1 à environ 18:1, d'environ 1:1 à environ 17:1, d'environ 1:1 à environ 16:1, d'environ 1:1 à environ 15:1, d'environ 1:1 à environ 14:1, d'environ 1:1 à environ 13 : 1, d'environ 1:1 à environ 12:1, d'environ 1:1 à environ 11:1, d'environ 1:1 à environ 10:1, d'environ 1:1 à environ 9:1, d'environ 1:1 à environ 8:1, d'environ 1:1 à environ 7:1, d'environ 1:1 à environ 6:1, d'environ 1:1 à environ 5:1, d'environ 1:1 à environ 4:1, d'environ 1:1 à environ 3:1, d'environ 1:1 à environ 2:1, d'environ 2:1 à environ 20:1, d'environ 2:1 à environ 19:1, d'environ 2:1 à environ 18:1, d'environ 2:1 à environ 17:1, d'environ 2:1 à environ 16:1, d'environ 2:1 à environ 15:1, d'environ 2:1 à environ 14 : 1, d'environ 2:1 à environ 13:1, d'environ 2:1 à environ 12:1, d'environ 2:1 à environ 11:1, d'environ 2:1 à environ 10:1, d'environ 2:1 à environ 9:1, d'environ 2:1 à environ 8:1, d'environ 2:1 à environ 7:1, d'environ 2:1 à environ 6:1, d'environ 2:1 à environ 5 : 1, d'environ 2:1 à environ 4:1, d'environ 2:1 à environ 3:1, d'environ 3:1 à environ 20:1, d'environ 3:1 à environ 19:1, d'environ 3:1 à environ 18:1, d'environ 3:1 à environ 17:1, d'environ 3:1 à environ 16:1, d'environ 3:1 à environ 15:1, d'environ 3:1 à environ 14:1, d'environ 3:1 à environ 13:1, d'environ 3:1 à environ 12:1, d'environ 3:1 à environ 11:1, d'environ 3:1 à environ 10:1, d'environ 3:1 à environ 9:1, d'environ 3:1 à environ 8:1, d'environ 3:1 à environ 7:1, d'environ 3:1 à environ 6:1, d'environ 3:1 à environ 5:1, ou d'environ 3:1 à environ 4:1 lorsque les petites vésicules extracellulaires sont détectées dans le milieu conditionné par filtration à flux tangentiel (TFF) et chromatographie d’exclusion diffusion (SEC), et lorsque les grandes vésicules extracellulaires sont détectées dans le milieu conditionné par TFF.In one embodiment, the extracellular vesicles include large extracellular vesicles having a diameter greater than 150 nm and small extracellular vesicles having a diameter of 150 nm or less, and wherein the average ratio of small extracellular vesicles to large extracellular vesicles is from about 1:1 to about 20:1, from about 1:1 to about 19:1, from about 1:1 to about 18:1, from about 1:1 to about 17:1, d about 1:1 to about 16:1, about 1:1 to about 15:1, about 1:1 to about 14:1, about 1:1 to about 13:1, about 1:1 to about 12:1, about 1:1 to about 11:1, about 1:1 to about 10:1, about 1:1 to about 9:1, about 1: 1 to about 8:1, about 1:1 to about 7:1, about 1:1 to about 6:1, about 1:1 to about 5:1, about 1:1 to about 4:1, about 1:1 to about 3:1, about 1:1 to about 2:1, about 2:1 to about 20:1, about 2:1 to about 19 :1, about 2:1 to about 18:1, about 2:1 to about 17:1, about 2:1 to about 16:1, about 2:1 to about 15:1 , from about 2:1 to about 14:1, from about 2:1 to about 13:1, from about 2:1 to about 12:1, from about 2:1 to about 11:1, d about 2:1 to about 10:1, about 2:1 to about 9:1, about 2:1 to about 8:1, about 2:1 to about 7:1, about 2:1 to about 6:1, about 2:1 to about 5:1, about 2:1 to about 4:1, about 2:1 to about 3:1, about 3: 1 to about 20:1, about 3:1 to about 19:1, about 3:1 to about 18:1, about 3:1 to about 17:1, about 3:1 to about 16:1, about 3:1 to about 15:1, about 3:1 to about 14:1, about 3:1 to about 13:1, about 3:1 to about 12 :1, about 3:1 to about 11:1, about 3:1 to about 10:1, about 3:1 to about 9:1, about 3:1 to about 8:1 , about 3:1 to about 7:1, about 3:1 to about 6:1, about 3:1 to about 5:1, or about 3:1 to about 4:1 when small extracellular vesicles are detected in conditioned medium by tangential flow filtration (TFF) and size exclusion chromatography (SEC), and when large extracellular vesicles are detected in conditioned medium by TFF.
Dans un mode de réalisation, la composition comprend un rapport des vésicules extracellulaires positives CD63 détectées sur les vésicules extracellulaires positives CD81 détectées allant d'au moins environ 0,2:1, d'au moins environ 0,3:1, d'au moins environ 0,4:1, d'au moins environ 0. 5:1, d'au moins environ 0,6:1, d'au moins environ 0,7:1, d'au moins environ 0,8:1, d'au moins environ 0,9:1, ou d'au moins environ 1:1, ou d'au moins environ 1,1, ou d'au moins environ 1,2:1, ou d'au moins environ 1,3:1, ou d'au moins environ 1,4:1, ou d'au moins environ 1. 5:1, ou d'au moins environ 1,6:1, ou d'au moins environ 1,7:1, ou d'au moins environ 1. 9:1, ou d'au moins environ 2:1, lorsque CD63 et CD81 sont détectés sur de petites vésicules extracellulaires comprenant CD9 et ayant un diamètre de 150 nm ou moins, dans lequel CD9 est capturé par des dosages immuno-enzymatiques après que les vésicules ont été isolées du milieu conditionné en utilisant une combinaison de filtration à flux tangentiel et de chromatographie d’exclusion diffusion, et dans lequel les concentrations relatives de CD63 et CD81 sont déterminées en utilisant des dosages immuno-enzymatiques.In one embodiment, the composition comprises a ratio of detected CD63 positive extracellular vesicles to detected CD81 positive extracellular vesicles of at least about 0.2:1, at least about 0.3:1, at least about 0.3:1, at least about 0.4:1, at least about 0.5:1, at least about 0.6:1, at least about 0.7:1, at least about 0.8: 1, at least about 0.9:1, or at least about 1:1, or at least about 1.1, or at least about 1.2:1, or at least about 1.3:1, or at least about 1.4:1, or at least about 1.5:1, or at least about 1.6:1, or at least about 1. .7:1, or at least about 1.9:1, or at least about 2:1, when CD63 and CD81 are detected on small extracellular vesicles comprising CD9 and having a diameter of 150 nm or less, wherein CD9 is captured by enzyme immunoassays after the vesicles have been isolated from the conditioned medium using a combination of tangential flow filtration and size exclusion chromatography, and wherein the relative concentrations of CD63 and CD81 are determined using enzyme immunoassays.
Dans un mode de réalisation, la composition comprend un rapport des vésicules extracellulaires positives CD63 détectées sur les vésicules extracellulaires positives CD81 détectées d'environ 0,2:1 à environ 2,8:1, d'environ 0,2:1 à environ 2,7:1, d'environ 0,3:1 à environ 2,6:1, d'environ 0,3:1 à environ 2. 5:1, d'environ 0,4:1 à environ 2,4:1, d'environ 0,4:1 à environ 2,3:1, d'environ 0,5:1 à environ 2,2:1, d'environ 0,6:1 à environ 2,1:1, d'environ 0,6:1 à environ 2,0:1, d'environ 0,6:1 à environ 1,9:1, d'environ 0,7:1 à environ 1,8:1, d'environ 0,7:1 à environ 1,7:1, d'environ 0. 8:1 à environ 1,6:1, d'environ 0,8:1 à environ 1,5:1, d'environ 0,9:1 à environ 1,4:1, ou d'environ 0,9:1 à environ 1. 3:1 lorsque CD63 et CD81 sont détectés sur de petites vésicules extracellulaires comprenant CD9 et ayant un diamètre de 150 nm ou moins, dans lequel CD9 est capturé par des dosages immuno-enzymatiques après que les vésicules ont été isolées du milieu conditionné en utilisant une combinaison de filtration à flux tangentiel et de chromatographie d’exclusion diffusion, et dans lequel les concentrations relatives de CD63 et CD81 sont déterminées en utilisant des dosages immuno-enzymatiques.In one embodiment, the composition comprises a ratio of detected CD63 positive extracellular vesicles to detected CD81 positive extracellular vesicles of from about 0.2:1 to about 2.8:1, from about 0.2:1 to about 2.7:1, about 0.3:1 to about 2.6:1, about 0.3:1 to about 2. 5:1, about 0.4:1 to about 2, 4:1, about 0.4:1 to about 2.3:1, about 0.5:1 to about 2.2:1, about 0.6:1 to about 2.1: 1, about 0.6:1 to about 2.0:1, about 0.6:1 to about 1.9:1, about 0.7:1 to about 1.8:1, from about 0.7:1 to about 1.7:1, from about 0.8:1 to about 1.6:1, from about 0.8:1 to about 1.5:1, from about 0.9:1 to about 1.4:1, or about 0.9:1 to about 1.3:1 when CD63 and CD81 are detected on small extracellular vesicles comprising CD9 and having a diameter of 150 nm or less, wherein CD9 is captured by enzyme immunoassays after vesicles have been isolated from conditioned medium using a combination of tangential flow filtration and size exclusion chromatography, and wherein the relative concentrations of CD63 and CD81 are determined using enzyme immunoassays.
Dans un mode de réalisation, la composition comprend en outre des petites molécules, produits biologiques, agents thérapeutiques, conservateurs ou enzymes.In one embodiment, the composition further includes small molecules, biologics, therapeutic agents, preservatives, or enzymes.
Sont également divulgués des procédés de fabrication d'une composition comprenant des vésicules extracellulaires et un vecteur cosmétique acceptable, dans lesquels les vésicules extracellulaires sont dérivées d'un milieu conditionné prélevé de kératinocytes cultivés à une interface air-liquide dans un milieu nutritif suffisant pour répondre aux besoins nutritionnels nécessaires à la croissance des cellules in vitro pour former des cellules épithéliales différenciées.Also disclosed are methods of making a composition comprising extracellular vesicles and a cosmetically acceptable carrier, wherein the extracellular vesicles are derived from conditioned medium taken from keratinocytes cultured at an air-liquid interface in a nutrient medium sufficient to meet nutritional requirements necessary for cell growth in vitro to form differentiated epithelial cells.
Des procédés de traitement comprenant l'application des compositions sur des cellules épithéliales sont également divulgués. Des procédés de culture de cellules épidermiques comprenant l'application de la composition sur un épiderme sont également divulgués. Dans un mode de réalisation, les compositions peuvent être utilisées dans un procédé pour favoriser la croissance cellulaire comprenant l'application de la composition sur des cellules épithéliales. Dans un mode de réalisation, les compositions peuvent être utilisées dans un procédé pour favoriser la croissance cellulaire comprenant l'application de la composition sur la peau. Sont également divulgués des procédés pour favoriser la réparation cellulaire comprenant l'application de la composition sur la peau, ainsi que l'utilisation de la composition comme cosmétique et/ou médicament. Un procédé d'utilisation comprenant l'application de la composition sur la peau est également divulgué ici.Methods of treatment comprising applying the compositions to epithelial cells are also disclosed. Methods of culturing epidermal cells comprising applying the composition to an epidermis are also disclosed. In one embodiment, the compositions can be used in a method for promoting cell growth comprising applying the composition to epithelial cells. In one embodiment, the compositions can be used in a method for promoting cell growth comprising applying the composition to the skin. Also disclosed are methods for promoting cellular repair comprising applying the composition to the skin, as well as using the composition as a cosmetic and/or drug. A method of use comprising applying the composition to the skin is also disclosed herein.
Il est entendu que la description générale précédente et la description détaillée suivante présentent diverses réalisations de la divulgation, et sont censées fournir une vue d'ensemble ou un cadre pour comprendre la nature et le caractère des revendications.It is intended that the foregoing general description and the following detailed description set forth various embodiments of the disclosure, and are intended to provide an overview or framework for understanding the nature and character of the claims.
BRÈVE DESCRIPTION DES FIGURESBRIEF DESCRIPTION OF FIGURES
[Fig.3A-3D] Les figures 3A-3D démontrent l'expression différentielle des marqueurs de surface des exosomes sur les CD9+ comprenant de petites vésicules extracellulaires prélevées de milieux conditionnés de kératinocytes différenciés à différents moments (A-C) par rapport aux petites vésicules extracellulaires prélevées de kératinocytes 2D (D), comme mesuré à l'aide de dosages immuno-enzymatiques.[Fig.3A-3D] Figures 3A-3D demonstrate the differential expression of exosome surface markers on CD9+ comprising small extracellular vesicles taken from conditioned media of differentiated keratinocytes at different time points (A-C) compared to small extracellular vesicles taken from 2D keratinocytes (D), as measured using enzyme immunoassays.
[Fig.4A-4D] Les figures 4A-4D démontrent l'expression différentielle des marqueurs de surface exosomaux sur les grandes vésicules extracellulaires provenant de milieux conditionnés de kératinocytes différenciés (A-C) et de kératinocytes 2D (D), comme mesuré à l'aide d'ELISA. Les quantités inférieures au « seuil », ou bruit de fond, indiquent peu ou pas de marqueurs de surface exosomaux.[Fig.4A-4D] Figures 4A-4D demonstrate differential expression of exosomal surface markers on large extracellular vesicles from differentiated keratinocyte (A-C) and 2D keratinocyte (D) conditioned media, as measured at using ELISA. Amounts below "threshold", or background, indicate little or no exosomal surface markers.
[Fig.5A-5D] Les figures 5A-5D démontrent l'expression différentielle des marqueurs internes de petites vésicules extracellulaires prélevées de milieux conditionnés de kératinocytes différenciés, telle que mesurée en utilisant des dosages immuno-enzymatiques.[Fig.5A-5D] Figures 5A-5D demonstrate the differential expression of internal markers of small extracellular vesicles taken from conditioned media of differentiated keratinocytes, as measured using enzyme immunoassays.
[Fig.6A-6D] Les figures 6A-6D montrent l'expression différentielle des marqueurs internes des grandes vésicules extracellulaires prélevées de milieux conditionnés de kératinocytes différenciés, comme mesuré à l'aide de dosages immuno-enzymatiques.[Fig.6A-6D] Figures 6A-6D show the differential expression of internal markers of large extracellular vesicles taken from conditioned media of differentiated keratinocytes, as measured using enzyme immunoassays.
Il est entendu que les descriptions précédentes et suivantes ne sont qu'exemplaires et explicatives, et ne sont pas censées retreindre un sujet revendiqué quelconque.It is understood that the preceding and following descriptions are exemplary and explanatory only, and are not intended to restrict any subject matter claimed.
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