FR3028955A1

FR3028955A1 - METHOD FOR PREDICTING THE SENSITIVITY OF A PATIENT TO INHIBITORY TREATMENT OF THE MTOR PATH

Info

Publication number: FR3028955A1
Application number: FR1461510A
Authority: FR
Inventors: Chang Xian Zhang; Isabelle Treilleux; Thomas Bachelot
Original assignee: Centre Leon Berard
Current assignee: Centre Leon Berard
Priority date: 2014-11-26
Filing date: 2014-11-26
Publication date: 2016-05-27
Anticipated expiration: 2034-11-26
Also published as: WO2016083741A1; FR3028955B1

Abstract

La présente invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, ledit procédé comprenant la détermination du niveau d'expression de ménine dans un échantillon test de ladite tumeur, un niveau d'expression inférieur de ménine dans l'échantillon test par rapport à l'échantillon de référence étant indicatif de la sensibilité du patient audit traitement. La présente invention a également pour objet l'utilisation de ménine en tant que biomarqueur pour la prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR.The present invention relates to an in vitro method for predicting the sensitivity of a tumor patient to mTOR inhibitor treatment, said method comprising determining the level of menin expression in a test sample of said tumor, a lower level of menin expression in the test sample relative to the reference sample being indicative of the sensitivity of the patient to said treatment. The present invention also relates to the use of menin as a biomarker for predicting the susceptibility of a tumor patient to an inhibitory treatment of the mTOR pathway.

Description

PROCEDE DE PREDICTION DE LA SENSIBILITE D'UN PATIENT A UN TRAITEMENT INHIBITEUR DE LA VOIE mTOR La présente invention se situe dans le domaine de la prédiction de la sensibilité de patients atteints d'une tumeur à une thérapie anti-tumorale comprenant l'administration d'un inhibiteur de la voie mTOR. L'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité de patients atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, dans lequel le niveau d'expression de ménine est déterminé dans un échantillon test de ladite tumeur, un faible niveau d'expression de ménine dans ledit échantillon test étant indicateur de la sensibilité du patient à un traitement inhibiteur de la voie mTOR. Les inhibiteurs de mTOR, pour « mammalian target of rapamycin » constituent une 10 nouvelle classe de thérapie anti-tumorale ciblée. La protéine mTOR est une sérine/thréonine kinase appartenant à la famille des phosphoinositide 3-kinase (PI3K). Elle interagit avec plusieurs protéines pour former deux complexes protéiques distincts : mTORC1 et mTORC2 (Laplante et Sabatini, 2012). La protéine mTOR humaine ("Serine/threonine-protein kinase mTOR» ou « FK506-binding protein 12- 15 rapamycin complex-associated protein 1 » peut être trouvée dans la banque de données UniProtKB sous la référence P42345, révisée le 3 septembre 2014. mTOR joue un rôle de régulateur central de la croissance et de la prolifération cellulaires, de l'angiogenèse et du métabolisme cellulaire. La voie PI3K / AKT / mTOR, ou « voie mTOR» est fréquemment dérégulée dans les cellules cancéreuses, une dérégulation entrainant une suractivation de mTOR conduit à une plus grande 20 disponibilité en nutriments et permet ainsi la croissance et la survie de la tumeur. La rapamycine est un antibiotique, initialement développé pour ses propriétés immunosuppressives, et pour lequel des propriétés antitumorales, par son action inhibitrice sur mTOR, ont été montrées. Différents analogues de la rapamycine sont actuellement utilisées en cancérologie, notamment l'everolimus et le temsirolimus. Des essais cliniques, associant ou non les 25 inhibiteurs de mTOR à d'autres molécules de thérapie ciblée ou à des traitements tels que la chimiothérapie ou la radiothérapie ont été réalisés. Des essais de phase III ont obtenu des résultats cliniques très prometteurs chez des patients atteints de carcinome rénal. La protéine mTOR est donc une cible thérapeutique particulièrement intéressante et l'inhibition de la voie mTOR constitue l'une des approches thérapeutiques anti-tumorales prometteuse. 30 Par ailleurs, étant donné que l'activation de la voie mTOR est impliquée dans le cancer du sein hormono-résistant, l'association de deux molécules de thérapie ciblée aux mécanismes d'action différents, comme un inhibiteur de la voie mTOR et une molécule utilisée en hormonothérapie, 3028955 2 permet d'envisager un éventuel contournement d'un mécanisme de résistance impliquant l'une de ces voies. Afin d'optimiser les essais cliniques et les traitements thérapeutiques dans ce domaine, l'identification de biomarqueurs prédictifs de la sensibilité des patients à traitement comprenant 5 l'administration d'un agent inhibiteur de mTOR, utilisé seul ou en combinaison avec d'autres approches thérapeutiques, demeure un objectif important pour le développement futur de ces traitements (Laplante et Sabatini, 2012 ; Baselga et al., 2012). Il est donc nécessaire de disposer de procédés toujours plus efficaces pour prédire la sensibilité des patients à un tel type de traitement.The present invention is in the field of predicting the sensitivity of tumor patients to an antitumor therapy comprising the administration of a tumor to a tumor. an inhibitor of the mTOR pathway. The subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of patients suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, wherein the level of menin expression is determined in a test sample of said tumor, a low level of menin expression in said test sample being indicative of the patient's sensitivity to an inhibitory treatment of the mTOR pathway. The mTOR inhibitors for "mammalian target of rapamycin" constitute a new class of targeted anti-tumor therapy. The mTOR protein is a serine / threonine kinase belonging to the phosphoinositide 3-kinase (PI3K) family. It interacts with several proteins to form two distinct protein complexes: mTORC1 and mTORC2 (Laplante and Sabatini, 2012). The human mTOR protein ("Serine / threonine-protein kinase mTOR" or "FK506-binding protein 12-rapamycin complex-associated protein 1" can be found in the UniProtKB database under the reference P42345, revised September 3, 2014. mTOR acts as a central regulator of cellular growth and proliferation, angiogenesis and cellular metabolism.The PI3K / AKT / mTOR pathway, or "mTOR pathway", is frequently deregulated in cancer cells, with deregulation Overactivation of mTOR leads to greater nutrient availability and thus allows tumor growth and survival Rapamycin is an antibiotic, originally developed for its immunosuppressive properties, and for which antitumor properties, through its inhibitory action on mTOR. have been shown to have different rapamycin analogues currently used in oncology, including everolimus and temsirolimus Clinical trials, whether or not associating mTOR inhibitors with other targeted therapy molecules or with treatments such as chemotherapy or radiotherapy, have been performed. Phase III trials have shown very promising clinical results in patients with renal cell carcinoma. The mTOR protein is therefore a particularly interesting therapeutic target and inhibition of the mTOR pathway is one of the promising anti-tumor therapeutic approaches. Moreover, since activation of the mTOR pathway is involved in hormone-resistant breast cancer, the combination of two targeted therapy molecules with different mechanisms of action, such as an inhibitor of the mTOR pathway and molecule used in hormone therapy, 3028955 2 allows to consider a possible bypass of a resistance mechanism involving one of these routes. In order to optimize clinical trials and therapeutic treatments in this field, the identification of biomarkers predictive of the sensitivity of patients to treatment comprising the administration of an mTOR inhibitory agent, used alone or in combination with other therapeutic approaches, remains an important goal for the future development of these treatments (Laplante and Sabatini, 2012, Baselga et al., 2012). It is therefore necessary to have ever more efficient methods for predicting the sensitivity of patients to such a type of treatment.

La ménine est une protéine nucléaire ubiquitaire impliquée dans de multiples interactions protéine-protéine et décrite comme un suppresseur de tumeurs contrôlant directement la croissance cellulaire dans différents organes endocrines, comme les parathyroïdes, les ilots pancréatiques et la glande pituitaire. La ménine est codée par le gène MEN1 (pour Multiple Endocrine Neoplasia, type 1). Les mutations de MEN1 prédisposent les patients à une néoplasie endocrine multiple de type 1.Menin is a ubiquitous nuclear protein involved in multiple protein-protein interactions and described as a tumor suppressor that directly controls cell growth in various endocrine organs, such as parathyroid, pancreatic islet and pituitary gland. Menin is encoded by the MEN1 gene (for Multiple Endocrine Neoplasia, type 1). Mutations in MEN1 predispose patients to multiple endocrine neoplasia type 1.

La publication de Seigne et al. (2010) enseigne que l'inactivation du gène Menl pourrait jouer un rôle dans la tumorigenèse de la prostate. La publication de Seigne et al. (2013) enseigne que le gène Men] joue un rôle dans la prédisposition des souris aux lésions mammaires précancéreuses. Ce dernier document divulgue aussi qu'une diminution de l'expression de ménine est observée dans une grande proportion chez des patientes atteintes de cancer du sein, avec 95 tumeurs sur 121 (78,5%) présentant un faible niveau d'expression de ménine. Cependant, ces documents ne divulguent pas l'altération des voies mTOR et/ou ER suite à l'inactivation de la ménine. Les inventeurs ont maintenant mis au point un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité de patients atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR. Ce procédé comprend la détermination du niveau d'expression de ménine dans un échantillon test de tumeur du patient, un niveau d'expression inférieur de ménine dans l'échantillon test par rapport à un échantillon de référence étant indicateur de la sensibilité du patient à un traitement inhibiteur de la voie mTOR. Les inventeurs ont également montré que la diminution de l'expression de ménine constitue un nouveau biomarqueur de sensibilité d'un patient à un traitement par un inhibiteur de la voie mTOR et peut donc être utilisée en tant que marqueur de sélection des patients susceptibles de bénéficier d'un traitement inhibiteur de la voie mTOR, le cas échéant en association avec un autre traitement antitumoral, tel que notamment une hormonothérapie. L'invention sera maintenant décrite de manière détaillée à l'aide d'exemples destinés à l'illustrer sans la limiter.The publication of Seigne et al. (2010) teaches that the inactivation of the Menl gene could play a role in tumorigenesis of the prostate. The publication of Seigne et al. (2013) teaches that the gene Men] plays a role in the predisposition of mice to pre-cancerous breast lesions. The latter document also discloses that a decrease in the expression of menin is observed in a large proportion in breast cancer patients, with 95 out of 121 (78.5%) tumors having a low level of menin expression. . However, these documents do not disclose the alteration of the mTOR and / or ER pathways following the inactivation of menin. The inventors have now developed an in vitro method for predicting the susceptibility of tumor patients to inhibit the mTOR pathway. This method includes determining the level of menin expression in a patient's tumor test sample, a lower level of menin expression in the test sample relative to a reference sample being indicative of the patient's sensitivity to a test sample. inhibitory treatment of the mTOR pathway. The inventors have also shown that the decrease in menin expression is a new biomarker of sensitivity of a patient to treatment with an inhibitor of the mTOR pathway and can therefore be used as a selection marker for patients likely to benefit. an inhibitor treatment of the mTOR pathway, if necessary in combination with another antitumor treatment, such as in particular hormonal therapy. The invention will now be described in detail with the aid of examples intended to illustrate it without limiting it.

3028955 3 La présente invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) La détermination du niveau d'expression de ménine dans un échantillon test de 5 ladite tumeur, b) La prédiction de la sensibilité dudit patient d'après le résultat de l'étape a), un faible niveau d'expression de ménine dans l'échantillon test étant indicatif de la sensibilité dudit patient à un traitement inhibiteur de la voie mTOR. Selon un mode particulier de réalisation, l'invention a pour objet un procédé in vitro de 10 prédiction de la sensibilité à un traitement inhibiteur de la voie mTOR d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle la voie mTOR est dérégulée, ou suractivée, ledit procédé comprenant la détermination du niveau d'expression de ménine dans un échantillon test de ladite tumeur, un faible niveau d'expression de ménine dans l'échantillon test étant indicatif de la sensibilité dudit patient à un traitement inhibiteur de la voie mTOR.The present invention relates to an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, said method comprising the following steps: a) determining the level of expression of menin in a test sample of said tumor; b) prediction of the sensitivity of said patient according to the result of step a), a low level of menin expression in the test sample being indicative of the sensitivity of said patient to an inhibitory treatment of the mTOR pathway. According to a particular embodiment, the subject of the invention is an in vitro method for predicting sensitivity to an inhibitory treatment of the mTOR pathway of a patient suffering from a tumor in which the mTOR pathway is deregulated or over-activated. said method comprising determining the level of menin expression in a test sample of said tumor, wherein a low level of menin expression in the test sample is indicative of the sensitivity of said patient to an inhibitory treatment of the mTOR pathway.

15 Par « sensibilité d'un patient à un traitement », on entend l'observation d'un effet thérapeutique tel que l'amélioration de la survie d'un patient ayant reçu ledit traitement thérapeutique. L'absence de réponse d'un patient, ou l'absence de sensibilité du patient à un traitement thérapeutique, est au contraire définie par le terme de « résistance » d'un patient audit traitement thérapeutique, dans laquelle aucun effet thérapeutique n'est observé. Un procédé in vitro 20 de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, selon l'invention, permet de sélectionner un patient susceptible de bénéficier d'un tel traitement. Par « traitement inhibiteur de la voie mTOR » on entend l'application d'un traitement destiné à inhiber la voie de transduction comprenant la sérine/théronine kinase mTOR (mammalian 25 target of rapamycin). Par « détermination du niveau d'expression de ménine » (ou « menin » en anglais), on entend la détermination du niveau d'expression de l'ARNm ou de la protéine ménine humaine codé(e) par le gène MEN], quelle que soit l'isoforme de ménine. La protéine ménine (Référence UniProtKB/SwissProt : 000255 révisée le 11 janvier 2011) 30 comprend trois isoformes : isoforme 1 (référence 000255-1, SEQ ID N°1, 615 acides aminés), isoforme 2 (référence 000255-2, 610 acides aminés, dans laquelle les acides aminés 149-153 de la séquence en acides aminés de l'isoforme 1 sont manquants) et isoforme 3 (référence 000255-3, 575 acides aminés, dans laquelle les acides aminés 149-153 et 189-223 de la séquence de l'isoforme 1 sont manquants).By "sensitivity of a patient to a treatment" is meant the observation of a therapeutic effect such as improving the survival of a patient having received said therapeutic treatment. The absence of a patient's response, or the patient's lack of sensitivity to a therapeutic treatment, is instead defined by the term "resistance" of a patient to said therapeutic treatment, in which no therapeutic effect is observed. An in vitro method for predicting the susceptibility of a tumor-affected patient to mTOR inhibitory treatment according to the invention makes it possible to select a patient likely to benefit from such treatment. By "inhibitory treatment of the mTOR pathway" is meant the application of a treatment to inhibit the transduction pathway including serine / theronin kinase mTOR (mammalian target of rapamycin). By "determination of the expression level of menin" (or "menin" in English) is meant the determination of the level of expression of the mRNA or the human menin protein encoded by the gene MEN], which that is the isoform of menin. The menin protein (UniProtKB reference / SwissProt: 000255 revised January 11, 2011) comprises three isoforms: isoform 1 (reference 000255-1, SEQ ID No. 1, 615 amino acids), isoform 2 (reference 000255-2, 610 acids). amines, in which amino acids 149-153 of the amino acid sequence of isoform 1 are missing) and isoform 3 (reference 000255-3, 575 amino acids, in which amino acids 149-153 and 189-223 of the sequence of isoform 1 are missing).

35 Selon un mode particulier de réalisation, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie 3028955 4 mTOR, dans lequel la détermination du niveau d'expression de ménine comprend la détermination du niveau d'expression de l'ensemble des isoformes de la protéine ménine. Plus particulièrement, dans un procédé de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR selon l'invention la détermination du 5 niveau d'expression de la protéine ménine est réalisée quantitativement ou semi-quantitativement par tout procédé connu par l'homme du métier permettant la détection spécifique et/ou la quantification d'une protéine particulière dans un échantillon. Un tel procédé est notamment choisi parmi les procédés utilisant des anticorps liant ménine, incluant en particulier l'immunohistochimie (IHC), une détection par immunofluorescence (IF), par immuno-précipitation, par une technique 10 ELISA ou par une méthode de type western-blot. Par « immunohistochimie », on entend d'une méthode de localisation de protéines dans les cellules d'une coupe de tissu, par la détection d'un antigène particulier au moyen d'anticorps polyclonaux ou monoclonaux liant cet antigène. Le couple anticorps-antigène peut être visualisé par exemple par la conjugaison à une enzyme qui peut catalyser une réaction de production de 15 couleur, par l'utilisation d'anticorps marqués, notamment par un fluorophore, ou par l'utilisation d'anticorps dits « secondaires » capables de lier les anticorps liant l'antigène. Dans une méthode d'immunohistochimie, le tissu est placé sur un support solide. Un anticorps primaire lié à un système de détection (ou un anticorps primaire suivi d'un anticorps secondaire) est ajouté. Le signal est observé par des techniques de microscopie.According to a particular embodiment, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, in which the determination of the level of Menin expression includes determining the level of expression of all the isoforms of the menin protein. More particularly, in a method for predicting the sensitivity of a patient with a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway according to the invention, the determination of the level of expression of the menin protein is carried out quantitatively or semi-quantitatively. quantitatively by any method known to those skilled in the art for the specific detection and / or quantification of a particular protein in a sample. Such a method is especially chosen from methods using menin-binding antibodies, including in particular immunohistochemistry (IHC), immunofluorescence (IF) detection, immunoprecipitation, an ELISA technique or a western-type method. -blot. By "immunohistochemistry" is meant a method of locating proteins in the cells of a tissue section, by detecting a particular antigen by means of polyclonal or monoclonal antibodies binding that antigen. The antibody-antigen pair can be visualized for example by conjugation to an enzyme which can catalyze a color production reaction, by the use of labeled antibodies, in particular by a fluorophore, or by the use of so-called antibodies. "Secondary" capable of binding antigen-binding antibodies. In an immunohistochemical method, the tissue is placed on a solid support. A primary antibody bound to a detection system (or a primary antibody followed by a secondary antibody) is added. The signal is observed by microscopy techniques.

20 Le niveau d'expression de ménine peut être défini à l'aide d'un score histologique prenant en compte, d'une part, l'intensité de marquage observée et, d'autre part, le pourcentage de cellules marquées, ou en combinant le pourcentage de cellules marquées et l'intensité de marquage. Selon ce procédé, des sections d'échantillon tumoral sont analysées par microscopie après avoir mis en présence lesdites sections avec un anticorps liant spécifiquement ménine.The level of menin expression can be defined by means of a histological score taking into account, on the one hand, the observed labeling intensity and, on the other hand, the percentage of labeled cells, or combining the percentage of labeled cells and the intensity of labeling. According to this method, tumor sample sections are analyzed by microscopy after bringing said sections into contact with a specifically menin-binding antibody.

25 Selon un aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, dans lequel la détermination du niveau d'expression de ménine comprend la détermination du pourcentage de cellules tumorales marquées. Par «faible niveau d'expression » on entend un niveau d'expression dans un tissu dans lequel le pourcentage de cellules tumorales marquées est inférieur 30 ou égal à 80% des cellules tumorales présentes dans le tissu. Un niveau d'expression élevé correspond à un tissu dans lequel le pourcentage de cellules tumorales marquées est supérieur à 80% des cellules tumorales présentes dans le tissu. De façon avantageuse, dans un procédé selon l'invention, le niveau d'expression de la protéine ménine peut être déterminé par comparaison avec le niveau d'expression de la protéine 35 ménine dans un échantillon contrôle. L'échantillon contrôle peut notamment être choisi parmi : le niveau médian d'expression de ménine dans un tissu sain, le niveau médian d'expression de 3028955 5 ménine dans un échantillon de tumeur et le niveau médian d'expression de ménine dans un échantillon de tumeur hormonodépendante choisie parmi une tumeur mammaire, une tumeur gynécologique et une tumeur de la prostate. Selon un autre mode particulier de réalisation, l'invention a pour objet un procédé in vitro 5 de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, dans lequel la détermination du niveau d'expression de ménine comprend la détermination du niveau d'expression d'un ARNm codant pour la protéine ménine. Plus particulièrement, un procédé selon l'invention comprend la détermination de la quantité d'un ARNm codant pour la protéine ménine. La détermination de la quantité de l'ARNm codant pour la protéine ménine est 10 réalisée par tout procédé connu par l'homme du métier permettant la détection spécifique d'un ARNm dans un tissu. Un tel procédé comprend notamment la détection spécifique d'un ARNm à l'aide de sondes d'acide nucléique complémentaires de la séquence dudit ARNm, notamment par RT-PCR, par un procédé de type Northern-Blot ou par hybridation sur une sonde immobilisée. La PCR quantitative permet de mesurer la quantité initiale d'acide nucléique. Les acides 15 nucléiques amplifiés, et notamment les ARNm, peuvent être détectés et quantifiés par tout procédé connu par un homme du métier, tel que notamment par spectrométrie à 260 nm ou par Northern blot en utilisant un procédé d'hybridation de sondes radioactives ou fluorescentes sur l'acide nucléique amplifié. Selon un aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la 20 sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, comprenant la détermination du niveau d'expression de ménine dans un échantillon test de tumeur, dans lequel l'échantillon test de tumeur est choisi parmi : un tissu tumoral, une pièce opératoire et une biopsie. Selon un autre aspect particulier, dans un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité 25 d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, le traitement inhibiteur de la voie mTOR consiste en l'administration d'au moins un agent choisi parmi : les inhibiteurs de la voie mTORC1, les inhibiteurs de la voie mTORC2, les inhibiteurs de la voie mTORC1 et de la voie mTORC2, les inhibiteurs de la voie PI3K/mTOR (phosphatidylinositol 3- kinase/mTOR), les inhibiteurs de la voie mTOR de nouvelle génération, les analogues de la 30 rapamycine, l'évérolimus et le temsirolimus. Selon un aspect encore plus particulier, dans un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR selon l'invention, ledit traitement inhibiteur de la voie mTOR est un traitement inhibiteur de la voie PI3K/mTOR. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ledit traitement inhibiteur 35 de la voie mTOR consiste en l'administration d'évérolimus.According to one particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, in which the determination of the level of menin expression. comprises determining the percentage of labeled tumor cells. By "low level of expression" is meant a level of expression in tissue in which the percentage of labeled tumor cells is less than or equal to 80% of the tumor cells present in the tissue. A high expression level corresponds to a tissue in which the percentage of labeled tumor cells is greater than 80% of the tumor cells present in the tissue. Advantageously, in a method according to the invention, the level of expression of the menin protein can be determined by comparison with the level of expression of the menin protein in a control sample. The control sample may be selected from: the median level of menin expression in healthy tissue, the median level of menin expression in a tumor sample and the median level of menin expression in a sample hormonally dependent tumor selected from a mammary tumor, a gynecological tumor and a prostate tumor. According to another particular embodiment, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, in which the determination of the level of Menin expression includes determining the level of expression of an mRNA encoding the menin protein. More particularly, a method according to the invention comprises determining the amount of an mRNA encoding the menin protein. The determination of the amount of the mRNA encoding the menin protein is accomplished by any method known to those skilled in the art for the specific detection of mRNA in tissue. Such a method notably comprises the specific detection of an mRNA using nucleic acid probes complementary to the sequence of said mRNA, in particular by RT-PCR, by a Northern-Blot type method or by hybridization on an immobilized probe. . Quantitative PCR is used to measure the initial amount of nucleic acid. The amplified nucleic acids, and in particular the mRNAs, can be detected and quantified by any method known to a person skilled in the art, such as in particular by 260 nm spectrometry or by Northern blotting using a method of hybridization of radioactive or fluorescent probes. on the amplified nucleic acid. In a particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the susceptibility of a tumor patient to mTOR inhibitory therapy, including determining the level of menin expression in the tumor. a tumor test sample, wherein the tumor test sample is selected from: tumor tissue, an operative specimen, and a biopsy. In another particular aspect, in an in vitro method of predicting the susceptibility of a tumor patient to mTOR inhibitory treatment, the mTOR inhibitory treatment consists of administration of least one agent selected from: inhibitors of the mTORC1 pathway, inhibitors of the mTORC2 pathway, inhibitors of the mTORC1 and mTORC2 pathway, inhibitors of the PI3K / mTOR (phosphatidylinositol-kinase / mTOR) pathway, Next-generation mTOR pathway inhibitors, rapamycin analogs, everolimus and temsirolimus. According to an even more particular aspect, in an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway according to the invention, said inhibitor treatment of the mTOR pathway is an inhibitory treatment. PI3K / mTOR track. More particularly, in a method according to the invention, said inhibitor treatment of the mTOR pathway consists in the administration of everolimus.

3028955 6 Selon un autre aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, combiné à un autre traitement anti-tumoral. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ledit traitement anti-tumoral est choisi parmi : l'hormonothérapie, la chimiothérapie et 5 un traitement ciblant les récepteurs aux facteurs de croissance. L'hormonothérapie peut être utilisée dans le but de diminuer les risques de récidive du cancer après la chirurgie, et peut également être utilisée pour traiter les cancers récidivants après un premier traitement antitumoral. En effet, rcestrogène favorise la croissance des cellules tumorales positives pour les récepteurs à rcestrogène (ER+).According to another particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitory treatment of the mTOR pathway, combined with another antitumor treatment. More particularly, in a method according to the invention, said anti-tumor treatment is chosen from: hormone therapy, chemotherapy and a treatment targeting the growth factor receptors. Hormone therapy can be used to reduce the risk of cancer recurrence after surgery, and can also be used to treat recurrent cancers after a first antitumor treatment. In fact, rcestrogen promotes the growth of tumor cells that are positive for receptors with rcestrogen (ER +).

10 Selon un aspect encore plus particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie. Selon un aspect encore plus particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie 15 mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, ladite tumeur étant une tumeur hormonodépendante. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ladite tumeur hormono-dépendante est choisie parmi les tumeurs mammaires, les tumeurs gynécologiques et les tumeurs de la prostate. Par tumeur gynécologique on entend notamment tumeur de l'ovaire ou de l'utérus.According to a still more particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitory treatment of the mTOR pathway combined with treatment with hormone therapy. According to an even more particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitory treatment of the mTOR pathway combined with a hormone therapy treatment, said tumor being a hormone-dependent tumor. More particularly, in a method according to the invention, said hormone-dependent tumor is selected from mammary tumors, gynecological tumors and prostate tumors. By gynecological tumor is meant in particular tumor of the ovary or uterus.

20 Selon un aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur mammaire primaire à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, ledit procédé comprenant la détermination du niveau d'expression de ménine. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ladite tumeur mammaire est classée ER+/HER2-. ER et HER2 sont des marqueurs conventionnels de tumeurs mammaires désignant 25 respectivement la présence de récepteurs aux oestrogenes (ER) et la surexpression, ou pas, du « Human Epidermal Growth Factor 2 (HER2/ErbB-2). Selon un aspect encore plus particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur mammaire ayant fait l'objet d'une étape de chirurgie destinée à retirer ladite tumeur.According to a particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a primary mammary tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, said method comprising determining the level of menin's expression. More particularly, in a method according to the invention, said mammary tumor is classified ER + / HER2-. ER and HER2 are conventional markers of mammary tumors respectively denoting the presence of estrogen receptors (ER) and overexpression, or not, of the Human Epidermal Growth Factor 2 (HER2 / ErbB-2). According to a still more particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a mammary tumor having undergone a surgical step intended to remove said tumor.

30 Selon un autre aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, ledit patient n'ayant pas reçu de traitement par hormonothérapie préalablement au procédé selon l'invention. Selon un autre aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction 35 de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, ledit patient ayant reçu un traitement par 3028955 7 hormonothérapie préalablement au procédé selon l'invention. Plus particulièrement, ledit patient a reçu un traitement par hormonothérapie préalablement au procédé selon l'invention et présente une résistance audit traitement par hormonothérapie. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration d'un traitement choisi 5 parmi : au moins un agent anti-oestrogène, au moins un agent anti-aromatase, et au moins un agent anti-oestrogène et au moins un agent anti-aromatase. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration d'au moins un agent anti-oestrogène choisi parmi : les SERM (pour Selective Estrogen Receptor Modulators), les SERD (pour Selective Estrogen Receptor Degradation), le tamoxifène, le toremifène et le fulvestrant.According to another particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitory treatment of the mTOR pathway combined with a hormone therapy treatment, said patient not being have not received treatment with hormone therapy prior to the method according to the invention. According to another particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway combined with a hormone therapy treatment, said patient having received treatment with hormone therapy prior to the process according to the invention. More particularly, said patient has received a hormone therapy treatment prior to the method according to the invention and has a resistance to said hormone therapy treatment. More particularly, in a method according to the invention, said hormone therapy treatment consists of the administration of a treatment chosen from: at least one anti-estrogen agent, at least one anti-aromatase agent, and at least one anti-anti-aromatase agent; estrogen and at least one anti-aromatase agent. More particularly, in a method according to the invention, said hormone therapy treatment consists of the administration of at least one anti-estrogen agent chosen from: SERMs (for Selective Estrogen Receptor Modulators), SERDs (for Selective Estrogen Receptor Degradation) ), tamoxifen, toremifene and fulvestrant.

10 Selon un aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, dans lequel ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration de tamoxifène. Selon un autre aspect particulier, l'invention a également pour objet un procédé in vitro de 15 prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, dans lequel le traitement inhibiteur de la voie mTOR consiste en l'administration d'évérolimus et ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration de tamoxifène. L'invention a également pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un 20 patient atteint d'une tumeur mammaire à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, dans lequel le traitement inhibiteur de la voie mTOR consiste en l'administration d'évérolimus et ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration de tamoxifène. L'invention a également pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un 25 patient atteint d'une tumeur mammaire à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, dans lequel le traitement inhibiteur de la voie mTOR consiste en l'administration d'évérolimus et ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration de tamoxifène, et caractérisé en ce que ledit patient présente une résistance à un premier traitement par hormonothérapie. L'invention a également pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un 30 patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, dans lequel ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration d'au moins un agent anti-aromatase. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ledit agent anti-aromatase est choisi parmi : le létrozole, l'anastrozole et l'exémestane. L'invention a également pour objet une composition comprenant un agent inhibiteur de la 35 voie mTOR pour une utilisation dans le traitement d'un patient atteint d'une tumeur, ladite utilisation comprenant - 3028955 8 a) La sélection d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle l'expression de ménine est faible b) L'administration audit patient d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un agent inhibiteur de la voie mTOR.According to a particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway combined with a treatment with hormone therapy, wherein said treatment with Hormone therapy is the administration of tamoxifen. According to another particular aspect, the invention also relates to an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway combined with treatment with hormone therapy, in which the inhibitory treatment of the mTOR pathway is the administration of everolimus and said hormone therapy treatment is the administration of tamoxifen. The invention also relates to an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient with a mammary tumor to an inhibitory treatment of the mTOR pathway combined with a hormone therapy treatment, wherein the inhibitor treatment of the pathway mTOR is the administration of everolimus and said hormone therapy is the administration of tamoxifen. The invention also relates to an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient with a mammary tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, wherein the mTOR inhibitor treatment consists of the administration of everolimus and said treatment with hormone therapy consists of the administration of tamoxifen, and characterized in that said patient has a resistance to a first treatment by hormone therapy. The invention also relates to an in vitro method for predicting the susceptibility of a tumor-affected patient to mTOR inhibitory therapy in combination with hormone therapy, wherein said hormone therapy treatment comprises administration of at least one anti-aromatase agent. More particularly, in a process according to the invention, said anti-aromatase agent is chosen from: letrozole, anastrozole and exemestane. The subject of the invention is also a composition comprising an inhibitor agent of the mTOR pathway for use in the treatment of a patient having a tumor, said use comprising: a) selection of a patient suffering from a tumor in which the expression of menin is weak b) The administration to said patient of a therapeutically effective amount of an inhibitor agent of the mTOR pathway.

5 Plus particulièrement, l'invention a également pour objet une composition comprenant un agent inhibiteur de la voie mTOR, pour une utilisation dans le traitement d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle la voie mTOR est dérégulée, ladite utilisation comprenant la sélection d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle l'expression de ménine est faible, et l'administration audit patient d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un agent inhibiteur de la voie mTOR.More particularly, the subject of the invention is also a composition comprising an inhibitor agent of the mTOR pathway, for use in the treatment of a patient suffering from a tumor in which the mTOR pathway is deregulated, said use comprising the selection a patient with a tumor in which menin expression is low, and administering to said patient a therapeutically effective amount of an inhibitor agent of the mTOR pathway.

10 Plus particulièrement encore, dans une composition comprenant un agent inhibiteur de la voie mTOR pour une utilisation dans le traitement d'un patient atteint d'une tumeur, selon l'invention, ladite tumeur est une tumeur mammaire ou une tumeur de la prostate, plus particulièrement une tumeur mammaire primaire, et encore plus particulièrement une tumeur mammaire définie comme ER+.Even more particularly, in a composition comprising an inhibitor agent of the mTOR pathway for use in the treatment of a patient suffering from a tumor, according to the invention, said tumor is a mammary tumor or a tumor of the prostate, more particularly a primary mammary tumor, and even more particularly a mammary tumor defined as ER +.

15 Selon un aspect particulier, dans une composition selon l'invention comprenant un agent inhibiteur de la voie mTOR pour une utilisation dans le traitement d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle la voie mTOR est dérégulée, ladite tumeur a fait l'objet d'une première étape de chirurgie destinée à retirer ladite tumeur. Selon un aspect particulier, dans une composition selon l'invention comprenant un agent 20 inhibiteur de la voie mTOR pour une utilisation dans le traitement d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle la voie mTOR est dérégulée' ledit agent inhibiteur de la voie mTOR est l'évérolimus. Selon un autre aspect particulier, dans une composition selon l'invention comprenant un agent inhibiteur de la voie mTOR pour une utilisation dans le traitement d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle la voie mTOR est dérégulée, ledit agent inhibiteur de la voie mTOR est 25 administré en combinaison avec un traitement par hormonothérapie. La présente invention a également pour objet un procédé in vitro d'identification d'une tumeur susceptible de répondre à un traitement comprenant l'administration d'un agent inhibiteur de la voie mTOR, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) La détermination du niveau d'expression de ménine dans un échantillon de tumeur 30 préalablement prélevé sur un patient, b) L'identification de ladite tumeur comme susceptible de répondre à un traitement comprenant l'administration d'un agent inhibiteur de la voie mTOR, si le niveau d'expression de ménine dans ladite tumeur est faible. Plus particulièrement, dans un procédé d'identification d'une tumeur susceptible de 35 répondre à un traitement comprenant l'administration d'un agent inhibiteur de la voie mTOR selon l'invention, ladite tumeur est une tumeur mammaire, plus particulièrement ladite tumeur est une 3028955 9 tumeur mammaire définie comme ER+. Encore plus particulièrement, dans un procédé d'identification d'une tumeur susceptible de répondre à un traitement comprenant l'administration d'un agent inhibiteur de la voie mTOR selon l'invention, ledit traitement comprend l'administration d'un traitement inhibiteur de la voie mTOR en combinaison avec un traitement par 5 hormonothérapie. L'invention a également pour objet l'utilisation de ménine en tant que biomarqueur pour la prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR.According to one particular aspect, in a composition according to the invention comprising an inhibitor agent of the mTOR pathway for use in the treatment of a patient suffering from a tumor in which the mTOR pathway is deregulated, said tumor has made the subject of a first surgical step for removing said tumor. According to a particular aspect, in a composition according to the invention comprising an inhibitor agent of the mTOR pathway for use in the treatment of a patient suffering from a tumor in which the mTOR pathway is deregulated, said pathway inhibiting agent mTOR is everolimus. According to another particular aspect, in a composition according to the invention comprising an inhibitor agent of the mTOR pathway for use in the treatment of a patient suffering from a tumor in which the mTOR pathway is deregulated, said pathway inhibiting agent mTOR is administered in combination with hormone therapy. The present invention also relates to an in vitro method for identifying a tumor capable of responding to a treatment comprising the administration of an inhibitor agent of the mTOR pathway, said method comprising the following steps: a) the determination of the expression level of menin in a tumor sample previously taken from a patient; b) identification of said tumor as likely to respond to treatment comprising administration of an inhibitor agent of the mTOR pathway, if the level of of menin expression in said tumor is low. More particularly, in a method of identifying a tumor capable of responding to a treatment comprising the administration of an inhibitor agent of the mTOR pathway according to the invention, said tumor is a mammary tumor, more particularly said tumor is a mammary tumor defined as ER +. Even more particularly, in a method of identifying a tumor capable of responding to a treatment comprising the administration of an inhibitor agent of the mTOR pathway according to the invention, said treatment comprises the administration of an inhibitor treatment of the mTOR pathway in combination with hormone therapy. The subject of the invention is also the use of menin as a biomarker for predicting the susceptibility of a tumor patient to an inhibitory treatment of the mTOR pathway.

10 Selon un aspect particulier, l'invention a également pour objet l'utilisation de ménine en tant que biomarqueur pour la prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie. Selon un aspect particulier, l'invention a également pour objet l'utilisation de ménine en tant que biomarqueur pour la prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un 15 traitement inhibiteur de la voie /mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie. Selon un autre aspect particulier, l'invention a également pour objet l'utilisation de ménine en tant que biomarqueur pour la prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, en combinaison avec l'utilisation d'au moins un autre biomarqueur choisi parmi les récepteurs aux 20 oestrogènes, le récepteur à la progestérone et le GATA3. Listage de séquences : SEQ ID N°1 : isoforme 1 de ménine, référence UniProtKB/SwissProt : 000255-1 révisée le 11 janvier 2011. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaissent dans les exemples et figures suivants : 25 BREVE DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1 : La probabilité de survie des patients est représentée en fonction du temps (TTP, time to progression, en mois). La courbe en pointillés représente les patients ayant un faible taux de 30 ménine, la courbe continue représente les patients ayant un taux normal de ménine. Figures 2A et 2B : Activation de la S6K1 dans la ligné MCF7 stimulée par l'insuline et le sérum. Figure 2A : La forme phosphorylée de la S6K1 a été détectée par western blot à partir des d'échantillons extraits protéiques obtenus des cellules MCF7 à 5, 10, 30 minutes, et à 1, 2, 4, 6 et 24 heures après une stimulation à l'insuline 100nM. La migration de protéines a été effectuée sur un 35 gel de SDS-PAGE à 10%. Les anticorps primaires ont été utilisé aux concentrations suivantes : 1/50 000 pour l'actine et 1/ 1 000 pour S6K1 phosphorylée, et l'anticorps secondaire au 1/10 000.According to one particular aspect, the invention also relates to the use of menin as a biomarker for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway combined with a treatment with hormone therapy. In a particular aspect, the invention also relates to the use of menin as a biomarker for predicting the sensitivity of a tumor patient to an inhibitory treatment of the / mTOR pathway combined with a treatment. by hormone therapy. According to another particular aspect, the invention also relates to the use of menin as a biomarker for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway combined with a treatment with hormone therapy, in combination with the use of at least one other biomarker selected from estrogen receptors, progesterone receptor and GATA3. SEQ ID NO: 1: Menin isoform 1, reference UniProtKB / SwissProt: 000255-1 revised January 11, 2011. Other features and advantages of the invention appear in the following examples and figures: BRIEF DESCRIPTION FIGURES Figure 1: The probability of survival of patients is represented as a function of time (TTP, time to progression, in months). The dotted line represents patients with low menin, the continuous curve represents patients with normal menin. Figures 2A and 2B: Activation of S6K1 in MCF7 line stimulated by insulin and serum. Figure 2A: The phosphorylated form of S6K1 was detected by western blot from protein extract samples obtained from MCF7 cells at 5, 10, 30 minutes, and at 1, 2, 4, 6 and 24 hours after stimulation. with insulin 100nM. Protein migration was performed on a 10% SDS-PAGE gel. The primary antibodies were used at the following concentrations: 1: 50,000 for actin and 1: 1,000 for phosphorylated S6K1, and the secondary antibody at 1: 10,000.

3028955 10 Deux isoformes de la S6K1 phosphorylées, p75 et p85, ont été révélées. Figure 2B : La S6K1 phorphorylée a été détectée par western blot à partir des d'échantillons extraits protéiques obtenus des cellules MCF7 après une stimulation du sérum à 10% pendant 30 minutes. Figures 3A à 3C : Effets de l'expression réduite de ménine sur l'activation de la voie mTORC1.Two isoforms of phosphorylated S6K1, p75 and p85, were revealed. Figure 2B: Phorphorylated S6K1 was detected by western blot from protein extract samples obtained from MCF7 cells after 10% serum stimulation for 30 minutes. Figures 3A-3C: Effects of reduced menin expression on activation of the mTORC1 pathway.

5 Les formes phosphorylées de la S6K1 et de la S6RP ont été analysées par western blot à partir des extraits protéiques obtenus des cellules MCF7 (Fig.Phosphorylated forms of S6K1 and S6RP were analyzed by western blot from protein extracts obtained from MCF7 cells (Fig.

3A) et T47D (Fig.3A) and T47D (Fig.

3B) transfectées par Si-Contrôles ou Si-MEN1 et traitées ou non par l'insuline et par Rad 001. Fig.3B) transfected with Si-Controls or Si-MEN1 and treated or not with insulin and Rad 001. FIG.

3C. Les analyses des formes phosphorylées de la S6K1 ont été également effectuées dans les cellules MCF7 stimulées ou non par le sérum.3C. The phosphorylated forms of S6K1 were also assayed in MCF7 cells stimulated or not by serum.

10 Figure 4 : Analyse par immunohistochimie montrant l'augmentation de la phosphorylation de la S6K1 et S6RP dans les insulinomes déficients en Men] . Les images représentatives de l'IHC en utilisant les anticorps contre la S6K1 (en bas) et de la S6RP (en haut) sur les pancréas issus des souris contrôles (Men1F/FRipCre) et des souris mutantes PMen1 (Men1F/FRipCre+).Figure 4: Immunohistochemistry analysis showing increased phosphorylation of S6K1 and S6RP in Men1-deficient insulinomas. Representative images of IHC using antibodies against S6K1 (bottom) and S6RP (top) on pancreas from control mice (Men1F / FRipCre) and mutant mice MEN1 (Men1F / FRipCre +).

15 EXEMPLES Exemple 1 : Etude TAMRAD L'étude TAMRAD (Bachelot et al., 2012) est une étude multicentrique de phase II randomisée évaluant la tolérance et l'efficacité du tamoxifène seul versus association tamoxifène20 rad001 (évérolimus), chez les patientes atteintes de cancer du sein métastatique résistant aux antiaromatases. Les patientes incluses étaient ménopausées, avec un adénocarcinome mammaire histologiquement prouvé, ayant reçu en lère ou 2ème ligne une hormonothérapie en situation métastatique et ayant reçu un traitement par anti-aromatase en situation adjuvante ou métastatique, 25 avec des récepteurs hormonaux positifs aux oestrogènes et/ou à la progestérone et ne surexprimant pas HER2 et n'ayant pas reçu de traitement antérieur par tamoxifène sauf en situation adjuvante et arrêté au moins un an avant la rechute métastatique Des patientes en première rechute métastatique après traitement par anti-aromatase ont été randomisées dans deux bras de traitement : Tamoxifène seul (20 mg/jour) versus Tamoxifène (20 30 mg/jour) + Evérolimus (Rad001) (10 mg/jour). Exemple 2 : Analyse par immuno-histochimie de l'expression de ménine sur tissu fixé L'expression de ménine a été analysée par IHC sur tissu fixé, en utilisant les anticorps antiménine (Cat Num A300-105A, BL342, Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA), selon le 35 protocole décrit dans Seigne et al., 2010. Ces anticorps polyclonaux ont été obtenus en utilisant un peptide synthétique représentant une portion de la protéine codée par l'exon 10 de Multiple 3028955 11 Endocrine Neoplasia humaine (Menl, Locus Link ID 4221) et après purification des anticorps sur un support solide sur laquelle le peptide a été immobilisé. Des sections de tumeurs primaires de patients inclus dans l'étude TAMRAD ont été récupérées. Les tumeurs du sein incluses dans la paraffine ont été sectionnées, avec une épaisseur 5 de 4 microns. Brièvement, après inactivation de la péroxydase endogène, le démasquage des antigènes (« antigen retrieval ») et la dilution des anticorps (DAKO, Capintaria, CA, USA), les sections ont été incubées pendant la nuit avec les anticorps primaires. Après l'incubation avec l'anticorps secondaire correspondant (Vector Lab, 1 :200), le signal a été amplifié à l'aide du kit ABC 10 Vectastain elite (Vector Lab) et révélé avec les DAB (Vector Lab). Dans toutes les analyses, le contrôle en absence d'anticorps primaire a été systématiquement inclus pour éliminer le marquage non spécifique dû aux anticorps secondaires. Les anticorps primaires utilisés sont les anticorps antiménine (Cat Num A300-1015A, BL342, anticorps polyclonal de lapin, Bethyl Laboratories, dilution 1 :2000). L'étape de démasquage des antigènes n'a pas été effectuée pour la détection de 15 l'hormone de croissance et la prolactine. Dans chaque cas, le pourcentage de cellules tumorales dont le noyau est marqué est déterminé, et les tumeurs ont été réparties en deux groupes : faible expression lorsque moins de 80%, ou 80%, des cellules sont marquées, et forte expression lorsque plus de 80% des cellules sont marquées.EXAMPLES Example 1: TAMRAD Study The TAMRAD study (Bachelot et al., 2012) is a randomized phase II multicenter study evaluating the safety and efficacy of tamoxifen alone versus the combination of tamoxifen20 rad001 (everolimus), in patients with metastatic breast cancer resistant to antiaromatases. The included patients were postmenopausal, with a histologically proven mammary adenocarcinoma, who received, in the first or second line, metastatic hormone therapy and received anti-aromatase treatment in an adjuvant or metastatic setting, with estrogen-positive hormone receptors and / or or with progesterone and not overexpressing HER2 and having not received previous treatment with tamoxifen except in adjuvant situation and stopped at least one year before metastatic relapse. Patients in first metastatic relapse after anti-aromatase treatment were randomized to two treatment arms: Tamoxifen alone (20 mg / day) versus Tamoxifen (20 mg / day) + Everolimus (Rad001) (10 mg / day). Example 2: Immunohistochemical Analysis of Menin Expression on Tissue Fixed Menin expression was analyzed by IHC on fixed tissue, using the anti-menin antibodies (Cat Nos. A300-105A, BL342, Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA), according to the protocol described in Seigne et al., 2010. These polyclonal antibodies were obtained using a synthetic peptide representing a portion of the protein encoded by the exon 10 of Multiple Human Endocrine Neoplasia (Menl , Locus Link ID 4221) and after purification of the antibodies on a solid support on which the peptide has been immobilized. Primary tumor sections of patients included in the TAMRAD study were retrieved. Breast tumors included in the paraffin were sectioned, with a thickness of 4 microns. Briefly, after inactivation of endogenous peroxidase, antigen retrieval and antibody dilution (DAKO, Capintaria, CA, USA), the sections were incubated overnight with primary antibodies. After incubation with the corresponding secondary antibody (Vector Lab, 1: 200), the signal was amplified using the ABC 10 Vectastain elite kit (Vector Lab) and revealed with the DABs (Vector Lab). In all assays, control in the absence of primary antibody was systematically included to eliminate non-specific labeling due to secondary antibodies. The primary antibodies used are the anti-menin antibodies (Cat Num A300-1015A, BL342, rabbit polyclonal antibody, Bethyl Laboratories, dilution 1: 2000). The antigen unmasking step was not performed for the detection of growth hormone and prolactin. In each case, the percentage of tumor cells whose nucleus is labeled is determined, and the tumors were divided into two groups: low expression when less than 80%, or 80%, of the cells are labeled, and strong expression when more than 80% of the cells are labeled.

20 Analyse statistique La probabilité de survie (Time To Progression, ou TTP) a été définie à partir de la date de randomisation des patients jusqu'à la date de la première progression documentée ou du décès due au cancer, estimée selon la méthode de Kaplan-Meier. Les courbes de survie ont été comparées en utilisant le test log-rank. Les modèles de régression proportionnelle de hasards Cox ont été utilisés 25 pour estimer la proportion dûe au hasard (Hazard Ratios). Les analyses statistiques ont été réalisées en utilisant SAS 9.3 (SAS Institute, CaryNC). Conclusion Dans l'analyse des biomarqueurs associés à la restauration de l'hormonosensibilité, il est montré qu'un faible taux d'expression de ménine dans la tumeur mammaire est associé à une 30 meilleure survie sans rechute dans le bras Tamoxifène + Everolimus (traitement TamRad) (Figure 1, courbe en pointillés) indiquant une restauration de l'hormonosensibilité c'est-à-dire une meilleure réponse à l'addition d'Everolimus au Tamoxifène. Exemple 3 : Analyse de l'interaction fonctionnelle et physique entre ménine et mTORC1.Statistical Analysis The Time To Progression (TTP) was defined from the date of randomization of patients to the date of the first documented progression or death due to cancer, estimated using the Kaplan method. -Meier. Survival curves were compared using the log-rank test. Cox random proportional regression models were used to estimate the hazard ratio (Hazard Ratios). Statistical analyzes were performed using SAS 9.3 (SAS Institute, CaryNC). Conclusion In the analysis of biomarkers associated with the restoration of hormonosensitivity, it is shown that a low level of menin expression in the breast tumor is associated with a better relapse-free survival in the Tamoxifen + Everolimus arm (treatment TamRad) (Figure 1, dashed line) indicating a restoration of hormone sensitivity, that is, a better response to the addition of Everolimus to Tamoxifen. Example 3: Analysis of the functional and physical interaction between menin and mTORC1.

35 Les données décrites dans l'exemple 1 et l'exemple 2 suggèrent que la diminution de l'expression de ménine dans les cancers du sein favoriserait l'activation de la voie mTORC1. Pour 3028955 12 confirmer cette hypothèse et disséquer l'action de ménine sur la voie mTORC1, des analyses ont été effectuées afin de révéler les effets de la diminution de l'expression de ménine sur la voie mTORC1 dans des modèles cellulaires et murins. 3.1. Matériels et méthodes 5 Lignées cellulaires MCF7 (Michigan Cancer Fondation-7) et T47D, toutes deux dérivées de métastases pleurales de cancer du sein, sont des lignées humaines ayant des caractéristiques de l'épithélium mammaire luminal. Ces cellules ont été maintenues dans le milieu DMEM complet composé de milieu de Eagle modifié par Dulbecco (DMEM, Gibco) supplémenté avec 10% de sérum bovin 10 foetal (FBS) (de Biowhittaker) et de la pénicilline streptomycine (P / S) solution (100 unités / ml pénicilline, 100 lag / ml de streptomycine, Gibco), à 37 ° C, dans un incubateur avec 5% CO2. Stimulation des cellules par l'insuline et le sérum Les cellules ont été incubées tout d'abord dans un milieu sans sérum pendant 24h avant la stimulation, puis, traitées avec 100 nM d'insuline (Sigma) dans du milieu sans sérum avec des 15 durées différentes, respectivement pour 0 ', 5', 10 ', 30', lh, 2h, 4h, 6h et 12h. La stimulation par le sérum à 10% a été réalisée avec le même procédé. Traitement des cellules par Evérolimus (RAD001) Cellules ont été tout d'abord incubées dans un milieu sans sérum pendant 24h avant stimulation par l'insuline Les cellules ont été traitées, avec Evérolimus (RAD001, SIGMA- 20 ALDRICH, 20 nM) ou d'un véhicule (diméthylsulfoxyde, DMSO) dans du milieu sans sérum pendant une heure. Ensuite, les cellules ont été traitées avec 100 nM d'insuline et 20 nM Evérolimus (RAD001) pendant une heure dans du milieu sans sérum. Transfection par Si-RNA Des cellules ont été ensemencées à 500.000 cellules / puit dans des plaques à 6 puits et 25 cultivées dans du DMEM complet pendant 24 h. Les cellules ont été transfectées avec le Si-RNA contrôle à 100 nmol / 1 (contrôle négatif, de faible complexité de GC, INVITROGEN), ou avec le siRNA ciblant le transcrit du gène MEN1 humain (Si-MEN1 hsl 106 468, Invitrogen) à 100 nmol / 1, en utilisant les réactifs de transfection DharmaFECT (Thermo Scientific) dans le milieu sans sérum, sans P/S pendant 48h.The data described in Example 1 and Example 2 suggest that the decrease in menin expression in breast cancers would promote activation of the mTORC1 pathway. To confirm this hypothesis and dissect the meninic action on the mTORC1 pathway, assays were performed to reveal the effects of decreased menin expression on the mTORC1 pathway in mouse and murine models. 3.1. Materials and Methods MCF7 (Michigan Cancer Foundation-7) and T47D cell lines, both derived from breast cancer pleural metastases, are human lines with features of the luminal mammary epithelium. These cells were maintained in complete DMEM medium consisting of Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM, Gibco) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) (Biowhittaker) and penicillin streptomycin (P / S) solution (100 units / ml penicillin, 100 μg / ml streptomycin, Gibco), at 37 ° C, in an incubator with 5% CO2. Stimulation of cells with insulin and serum Cells were first incubated in serum-free medium for 24 hours prior to stimulation and then treated with 100 nM insulin (Sigma) in serum-free medium with 15 μl of insulin and serum. different durations, respectively for 0 ', 5', 10 ', 30', 1h, 2h, 4h, 6h and 12h. Stimulation with 10% serum was performed with the same method. Treatment of cells with Everolimus (RAD001) Cells were first incubated in serum free medium for 24 hours prior to insulin stimulation. The cells were treated with Everolimus (RAD001, SIGMA-ALDRICH, 20 nM) or a vehicle (dimethylsulfoxide, DMSO) in serum-free medium for one hour. Then the cells were treated with 100 nM insulin and 20 nM Everolimus (RAD001) for one hour in serum-free medium. Si-RNA transfection Cells were inoculated at 500,000 cells / well in 6-well plates and cultured in complete DMEM for 24 h. The cells were transfected with the Si-RNA control at 100 nmol / l (negative control, low complexity GC, INVITROGEN), or with the siRNA targeting the human MEN1 gene transcript (Si-MEN1 hsl 106 468, Invitrogen) at 100 nmol / l, using DharmaFECT transfection reagents (Thermo Scientific) in serum-free media, without P / S for 48h.

30 Préparation des extraits protéiques Pour préparer des extraits totaux de protéines, les cellules ont été lavées avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et lysées dans un tampon contenant du PBS sans Ca2 + et Mg2 +, deoxychlorate de sodium à 0,5%, 1% NP40, 0,1% de SDS et du cocktail des inhibiteurs de protéases et phosphatases (100 nM Na3VO4, 500 nM NaF, 100 nM Na pyropohosphate, 10 nM 35 PiC). Les échantillons ont été bouillis dans un tampon SDS-échantillon (lameli) pendant 5 min à 95 ° C avant l'analyse sur l'immunoblot.Preparation of Protein Extracts To prepare total protein extracts, the cells were washed with phosphate buffered saline (PBS) and lysed in a buffer containing PBS without Ca2 + and Mg2 +, 0.5 sodium deoxychlorate %, 1% NP40, 0.1% SDS and the cocktail of protease inhibitors and phosphatases (100 nM Na3VO4, 500 nM NaF, 100 nM Na pyropohosphate, 10 nM 35 PiC). Samples were boiled in SDS-sample buffer (lameli) for 5 min at 95 ° C prior to immunoblot analysis.

3028955 13 Immunoblotting Les extraits protéiques ont été séparés sur des gels SDS-PAGE à 8%, et transférés sur des membranes PVDF (Polyvinylidene fluoride). Les membranes ont été saturées avec l'albumine bovine de sérum à 5% dilué dans du PBS avec 0,3 % de Tween 20 pendant 1 heure, et ensuite 5 lavées trois fois (10 minutes chacun) avec de la PBS + 0,3 % de Tween 20. Membranes ont été incubées avec les anticorps primaires suivants pendant une nuit à 4°C : anti-ménine (1 : 8000, lapin Acm, Bethyl), anti-phospho-S6K1 (1:4000, Thr389, 108D2, CellSignaling), anti-phospho-AKT (1:4000, Ser473, CellSignaling), anti-phospho-S6-protéine ribosomique (1:2000, Ser2351236, D57.2.2E, CellSignaling) , anticorps polyclonaux anti-topoisomérase 1 (1:1000, BD Pharmingen).Immunoblotting Protein extracts were separated on 8% SDS-PAGE gels, and transferred to PVDF (Polyvinylidene fluoride) membranes. The membranes were saturated with 5% serum bovine serum albumin diluted in PBS with 0.3% Tween 20 for 1 hour, and then washed three times (10 minutes each) with PBS + 0.3. Tween 20. Membranes were incubated with the following primary antibodies overnight at 4 ° C: anti-menin (1: 8000, rabbit Acm, Bethyl), antiphospho-S6K1 (1: 4000, Thr389, 108D2, CellSignaling), anti-phospho-AKT (1: 4000, Ser473, CellSignaling), anti-phospho-S6-ribosomal protein (1: 2000, Ser2351236, D57.2.2E, CellSignaling), polyclonal anti-topoisomerase 1 antibodies (1: 1000, BD Pharmingen).

10 Les membranes ont été ensuite lavées trois fois avec une solution saline tamponnée au Tris (TBS) avec 0,3 % de Tween 20 (10 minutes chacun), et incubés avec des anticorps secondaires conjugués à la peroxydase (CellSignaling) pendant 1 h à température ambiante. Les protéines ont été visualisées selon le protocole du fabricant. 3.2. Résultats expérimentaux 15 1.1 Activation de la voie mTORC1 dans les cellules mammaires par l'insuline et le sérum Pour mieux comprendre l'activation de la voie mTORC1, il est nécessaire de déterminer la cinétique de cette activation par différents stimuli dans les cellules à étudier. La cinétique de l'activation de la voie mTORC1 par l'insuline, dans les cellules MCF7 a été évaluée en analysant les formes phosphorylées de S6K1, une des cibles les plus connues de la 20 voie mTORC1, par western blot. Par rapport au contrôle des dépôts protéiques, une augmentation de l'intensité des bandes correspondant aux iso-formes de la S6k1 a été observée dès 5 minutes (5'). Cette augmentation s'est poursuivie pour atteindre un plateau à 2 heures (2h) (Fig.The membranes were then washed three times with Tris-buffered saline (TBS) with 0.3% Tween 20 (10 minutes each), and incubated with peroxidase-conjugated secondary antibodies (CellSignaling) for 1 hr. ambient temperature. Proteins were visualized according to the manufacturer's protocol. 3.2. Experimental Results 1.1 Activation of the mTORC1 pathway in mammary cells by insulin and serum To better understand the activation of the mTORC1 pathway, it is necessary to determine the kinetics of this activation by different stimuli in the cells to be studied. The kinetics of activation of the mTORC1 pathway by insulin in MCF7 cells was assessed by analyzing the phosphorylated forms of S6K1, one of the most well-known targets of the mTORC1 pathway, by western blotting. In comparison with the control of protein deposits, an increase in the intensity of the bands corresponding to the iso-forms of S6k1 was observed as early as 5 minutes (5 '). This increase continued to reach a plateau at 2 o'clock (2h) (Fig.

2A). Un résultat similaire a été obtenu dans les cellules T47D (Figure 3B). L'activation de la voie mTORC1 par le sérum à 10% dans les cellules MCF7 a été également déterminée (Fig.2A). A similar result was obtained in T47D cells (Figure 3B). Activation of the mTORC1 pathway by 10% serum in MCF7 cells was also determined (Fig.

2B). 25 1.2 Effet de ménine sur l'activation de la voie mTORC1 dans les cellules mammaires Inhibition de l'expression de ménine par l'interférence d'ARN Les cellules ont été transfectées soit par Si-Contrôles, soit par Si-MEN1 , puis stimulées à l'insuline 100 nM pendant 40 minutes avant la récolte de cellules. Les analyses en western blot ont montré qu'une diminution de ménine en présence de Si MENT a été détectée, avec et sans 30 stimulation à l'insuline, avec une efficacité satisfaisante (Fig.2B). 1.2 Effect of menin on the activation of the mTORC1 pathway in mammary cells Inhibition of menin expression by RNA interference The cells were transfected either by Si-Controls or by Si-MEN1 and then stimulated to insulin 100 nM for 40 minutes before cell harvest. Western blot analyzes showed that a reduction of menin in the presence of Si MENT was detected, with and without insulin stimulation, with satisfactory efficacy (Fig.

3A à 3C). Augmentation de la phosphorylation de S6K1 et de S6RP après l'inactivation de ménine Les mêmes expériences ont permis d'analyser, dans les cellules MCF7 (Fig.3A to 3C). Increased phosphorylation of S6K1 and S6RP after menin inactivation The same experiments were used to analyze in MCF7 cells (Fig.

3A) et T47D (Fig.3A) and T47D (Fig.

3B), la phosphorylation de la S6K1 et celle de sa cible S6RP sous les influences, d'une part de l'expression de ménine, et d'autre part de la stimulation par l'insuline ou par le sérum. Il a été 35 démontré qu'en présence de la stimulation de l'insuline, une nette augmentation de l'intensité de deux isoformes phosphorylées de la S6K1 peut être observée dans les cellules traitées par Si MENT 3028955 14 par rapport aux celles traitées par Si-contrôles. Parallèlement, il a été observé que les cellules MCF7 transférées par Si MENT présentent une expression plus importante des formes phosphorylées de la S6K1 après une stimulation par le sérum à 10% (Fig.3B), the phosphorylation of S6K1 and that of its target S6RP under the influences, on the one hand, of the expression of menin, and on the other hand of stimulation by insulin or serum. It has been demonstrated that in the presence of insulin stimulation, a marked increase in the intensity of two phosphorylated isoforms of S6K1 can be observed in cells treated with Si MENT compared to those treated with Si -Controls. At the same time, it was observed that the Si MENT-transferred MCF7 cells showed greater expression of phosphorylated forms of S6K1 after 10% serum stimulation (Fig.

3C). II. Activation de la voie mTORC1 dans les cellules beta pancréatiques murines déficientes en 5 Men] Les tissus pancréatiques issus de 2 souris contrôles (Men1F/FCre) et 3 souris mutantes ont été analysés pour le gène Men] spécifique des cellules beta pancréatiques (Men1F/F Cre+ , ou /Ment) âgées de 12 mois. Les résultats ont montré une très faible expression de S6K1 phosphorylée dans des ilots issus de souris contrôles, le marquage étant cytoplasmique et diffus de 10 façon homogène dans les ilots. Par contre, il a été observé un marquage largement plus fort de la S6K1 phosphorylée dans les ilots pancréatiques issus de souris /Ment du même âge (Figure 3, rangée du bas). On peut observer un marquage essentiellement cytoplasmique, avec une répartition peu homogène. La forme phosphorylée de la protéine S6RP, la protéine cible principale de la S6K1, a 15 également été analysée dans les tissus pancréatiques issus de 3 souris contrôles Men1F/FCre- et 6 souris f3Menl, âgées de 12 mois. Les analyses des immunohistochimies (IHC) obtenues ont montré une très faible expression, majoritairement cytoplasmique de la S6RP phosphorylée dans les ilots issus des souris contrôles. Par contre, dans les îlots issus de souris mutantes, il a été observé une augmentation importante de l'expression de S6RP phosphorylée (Fig. 2, rangée en haut), le 20 marquage étant essentiellement cytoplasmique et diffus. III. Conclusions Ces études expérimentales ont pu mettre en évidence que la diminution d'expression de ménine dans les cellules humaines cancéreuses mammaires conduit à une augmentation considérable du niveau de phosphorylation de la protéine S6K1 et de sa cible S6RP, connue pour 25 être parmi les principaux effecteurs de la voie mTORC1. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 30 - Bachelot et al., "Randomized Phase II trial of Everolimus in combination with taoxifen in patients with hormone-receptor positive, HER2 negative metastatic breast cancer with prion exprosure to aromatase inhibitors: a GINECO study", J. Clin. Oncol., May 7. - Baselga et al., (2012), « Everolimus in postmenopausal hormone-receptor-positive advanced breast cancer », N. Engl. J. Med., 366, 520-529. 35 - Laplante M. Sabatini DM. (2012), « mTOR signaling in growth control and disease » Cell, 49(2) :274-93. 3028955 15 - Seigne C. et al. (2010), "Characterization of prostate cancer lesions in heterozygous Men] mutant mice" BMC Cancer, 10 : 395. - Seigne C. et al. (2013), "High incidence of mammary intraepithelial neoplasia development in Men] -disrupted mucine mammary glands", J. Pathol., 229: 546-558.3C). II. Activation of the mTORC1 pathway in pancreatic beta cells deficient in 5 Men] Pancreatic tissues from 2 control mice (Men1F / FCre) and 3 mutant mice were analyzed for the gene Men] specific for pancreatic beta cells (Men1F / F Cre +, or / Ment) 12 months old. The results showed a very weak expression of phosphorylated S6K1 in islets from control mice, the labeling being cytoplasmic and homogeneously diffused in the islets. In contrast, much stronger labeling of phosphorylated S6K1 in pancreatic islets from mice / mice of the same age was observed (Figure 3, bottom row). It is possible to observe an essentially cytoplasmic marking with a poor homogeneous distribution. The phosphorylated form of the S6RP protein, the main target protein of S6K1, was also analyzed in pancreatic tissues from 3 control mice Men1F / FCre- and 6 mouse f3Men1, 12 months old. Immunohistochemistry (IHC) analyzes obtained showed a very weak expression, predominantly cytoplasmic of phosphorylated S6RP in the islets from the control mice. On the other hand, in the islets from mutant mice, there was a significant increase in phosphorylated S6RP expression (Fig. 2, top row), the labeling being essentially cytoplasmic and diffuse. III. Conclusions These experimental studies have been able to demonstrate that the reduction of menin expression in human breast cancer cells leads to a considerable increase in the level of phosphorylation of the S6K1 protein and its target S6RP, known to be among the main effectors. of the mTORC1 pathway. BIBLIOGRAPHIC REFERENCES 30 - Bachelot et al., "Randomized Phase II trial of Everolimus in combination with taoxifen in patients with hormone-receptor positive, HER2 negative metastatic breast cancer with prion exprosure to aromatase inhibitors: a GINECO study", J. Clin. Oncol., May 7. - Baselga et al., (2012), "Everolimus in postmenopausal hormone-receptor-positive advanced breast cancer," N. Engl. J. Med., 366, 520-529. 35 - Laplante M. Sabatini DM. (2012), "mTOR signaling in growth control and disease" Cell, 49 (2): 274-93. Seigne C. et al. (2010), "Characterization of prostate cancer lesions in heterozygous men" mutant mice "BMC Cancer, 10: 395. - Seigne C. et al. (2013), "High incidence of mammary intraepithelial neoplasia development in Men] -disrupted mucin mammary tassels", J. Pathol., 229: 546-558.

Claims

REVENDICATIONS1. An in vitro method for predicting the sensitivity of a tumor patient to mTOR inhibitory treatment, said method comprising the steps of: a. Determining the level of menin expression in a test sample of said tumor, b. The prediction of the sensitivity of said patient suffering from said tumor according to the result of step a), a low level of menin expression in the test sample being indicative of the sensitivity of said patient to an inhibitor treatment of the pathway. mTOR.

The method of claim 1, wherein determining the level of menin expression comprises determining the level of expression of the menin protein. The method according to one of claims 1 or 2, wherein the level of menin expression is determined by evaluating the percentage of labeled tumor cell nuclei in said sample. The method of claim 1, wherein determining the level of menin expression comprises determining the level of expression of an RNAin encoding the menin protein. Method according to one of claims 1 to 4, wherein, in step b), a low level of menin expression in the test sample is indicative of the sensitivity of said patient to inhibit treatment of the chosen mTOR pathway among: mTORC1 inhibitors, mTORC2 inhibitors, PI3K / mTOR inhibitors, everolimus and ternsirolimus. 6. Method according to one of claims 1 to 5, wherein, in step b), a low level of menin expression in the test sample is indicative of the sensitivity of said patient to an inhibitory treatment of the pathway. mTOR combined with a treatment chosen from: hormone therapy, chemotherapy and a treatment targeting growth factor receptors. Method according to one of claims 1 to 6, wherein said tumor is a hormone-dependent tumor selected from: a mammary tumor, a gynecological tumor and a tumor of the prostate. The method of one of claims 6 or 7, wherein said tumor is a primary breast tumor. Use of menin as a biomarker for predicting the sensitivity of a tumor patient to an inhibitory treatment of the niTOR pathway.