FR2997305A1 - Procede de traitement sous hautes pressions d'un milieu pour l'inactivation de spores bacteriennes - Google Patents

Abstract

L'objet de l'invention est un procédé de traitement d'un milieu compressible, caractérisé en ce qu'il comprend au moins deux cycles, chaque cycle consistant à appliquer audit milieu une pression comprise entre 200 et 400MPa avec une vitesse de compression comprise entre 0,5 et 8 MPa.s-1 et une vitesse de décompression comprise entre 0,5 et 100 MPa.s-1, la température initiale du milieu étant comprise entre 25°C et 50°C. L'invention vise également l'utilisation de ce procédé pour inactiver au moins une spore bactérienne présente dans le milieu traité ainsi que le milieu traité obtenu.

Description

PROCEDE DE TRAITEMENT SOUS HAUTES PRESSIONS D'UN MILIEU POUR L'INACTIVATION DE SPORES BACTERIENNES La présente invention concerne un procédé de traitement par pression d'un milieu compressible, en particulier pour inactiver les spores bactériennes qu'il contient. Les spores bactériennes constituent une source de contamination importante pour de nombreux milieux en particulier dans les secteurs de la santé, de la cosmétique et de l'agroalimentaire. Or, il s'agit de formes biologiques résistantes à des conditions environnementales très sévères, et leur inactivation nécessite la mise en oeuvre de procédés spécifiques. Les deux procédés majeurs utilisés pour la décontamination des produits, notamment des produits alimentaires, sont la stérilisation (destruction ou inactivation de toutes les formes viables de la vie microbienne) et la pasteurisation (réduction de manière significative de la quantité de microorganismes). L'utilisation de la température a été historiquement la voie la plus utilisée pour mettre en oeuvre ces procédés.

Plus récemment, l'utilisation de la température a été combinée à l'utilisation de la pression, sous la forme de procédés dits « Hautes Pressions ». On sait notamment que la pasteurisation pour les produits alimentaires est relativement accessible pour des valeurs de pression supérieures à 600 MPa et de température supérieures à 45°C, alors que la stérilisation sous « Hautes Pressions », c'est-à-dire la destruction totale des formes bactériennes y compris sporulées, nécessite des conditions de pressions supérieures à 700 MPa et de températures supérieures à 100°C (V. Heinz, R. Buckow (2010) « Food preservation by high pressure», J. Verbr. Lebensm. 5: 73-81; T. Koutchma, M. Marcotte (2009) « 1-ligh hydrostatic pressure processing of foods : challenges for pasteurization ana' sterilization» 8th World Congress of Chemical Engineering, Montreal, Canada, 23-27 August).

D'autres travaux ont mis en évidence que la combinaison de pressions supérieures à 500 MPa à des températures supérieures à 80°C était nécessaire pour inactiver les spores bactériennes, en particulier celles de Bacillus subtills (K. Reineke et al. (2011) « The impact of high pressures ana' tempera tures on bacterhal spores inactivation mechanisms of Bacillus subtills above 500 MPa » J. Food Sci. 76: M189-M197). Tous les procédés existant actuellement, présentent donc des conditions de température et/ou de pression élevées. Or, ces conditions sévères sont susceptibles d'induire des modifications importantes des propriétés du milieu traité. En agroalimentaire les propriétés organoleptiques des aliments peuvent être modifiées, et dans le domaine de la santé ou de la cosmétique, ces procédés ne sont tout simplement pas applicables car ils altèrent notamment des constituants essentiels, en particulier les protéines, les enzymes ou la microstructure du produit. Face à cette problématique, des travaux ont été menés sur l'utilisation de pressions et de températures plus faibles (E.P. Black et al. « Response of spores to high pressure processing» Comp. rev. Food Sci. Food Safety 7: 103-119), mais les procédés proposés ne permettent pas d'obtenir une décontamination satisfaisante sauf si l'on applique des durées de traitement économiquement non compétitives avec celles des procédés d'inactivation thermiques et non compatibles avec un développement industriel. En outre, ces procédés ne permettent pas de façon certaine une irréversibilité de l'inactivation des formes sporulées.

Il subsiste donc un besoin important pour un procédé palliant les inconvénients des procédés antérieurs, d'une part permettant la décontamination efficace d'un milieu sans altérer sa nature et ses propriétés initiales, d'autre part qui soit simple, économique et facile à mettre en oeuvre industriellement, et en outre applicable à des milieux biologiques variés Pour y répondre, la présente invention propose un procédé de traitement d'un milieu compressible, notamment liquide, pâteux ou gel, comprenant au moins deux cycles, chaque cycle consistant à appliquer audit milieu une pression comprise entre 200 et 400MPa avec une vitesse de compression comprise entre 0,5 et 8 MPa.s-1 et une vitesse de décompression comprise entre 0,5 et 100 MPa.s-1, la température initiale du milieu étant comprise entre 25°C et 50°C. be façon surprenante, grâce à la combinaison spécifique des paramètres mis en oeuvre qui agissent en synergie, ce procédé simple permet d'inactiver les spores bactériennes présentes dans le milieu, quel que soit le milieu, quand bien même la pression et la température utilisées sont peu élevées. L'invention se rapporte donc également à l'utilisation du procédé pour inactiver au moins une spore bactérienne présente dans le milieu traité, ainsi que les milieux traités obtenus. L'invention est à présent décrite en détails.

L'invention vise donc un procédé de traitement d'un milieu compressible, comprenant au moins deux cycles, chaque cycle consistant à appliquer audit milieu une pression comprise entre 200 et 400MPa avec une vitesse de compression comprise entre 0,5 et 8 MPa.s-1 et une vitesse de décompression comprise entre 0,5 et 100 MPa.s-1, la température initiale du milieu étant comprise entre 25°C et 50°C. Par milieu compressible, on entend tout milieu susceptible de conduire la pression, notamment un milieu liquide, pâteux ou gel. Il s'agit préférentiellement d'un milieu biologique, en particulier d'un produit du secteur de la santé, de la cosmétique, de l'alimentaire ou des compléments alimentaire. bans le secteur pharmaceutique et de la santé en général, il peut s'agir par exemple de médicaments, de réactifs, de solutions de produits injectables, de produits issus du corps humain, etc. bans le secteur cosmétique, il peut s'agir par exemple de crèmes, pommades, lotions, émulsions, etc. à visée cosmétique, notamment les produits commercialisés sous le label Bio. Pour le secteur alimentaire, il peut s'agir par exemple de soupes, boissons, compotes, yaourts, lait, aliments pour bébé, produits charcutiers, plats cuisinés, etc., ou des constituants de ces aliments. bans le secteur diététique, il peut s'agir de tout produit diététique, notamment un complément alimentaire, et en particulier tout produit pour lequel il est nécessaire de préserver les nutriments et les propriétés organoleptiques.

Le procédé selon l'invention consiste à appliquer une pression au milieu de façon cyclique sous certaines conditions. La température du milieu est comprise entre 25 et 50°C, préférentiellement entre 30 et 40°C. Le procédé comprend au moins deux cycles d'applications de la pression, préférentiellement au moins trois, encore plus préférentiellement entre deux et six. Chaque cycle consiste à faire passer le milieu traité de la pression initiale à une pression maximale comprise entre 200 et 400 MPa, préférentiellement entre 300 et 360 MPa. Cette pression peut être constante ou varier pendant un même cycle. be même, pour deux cycles différents, cette pression peut être identique ou différente. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, chaque cycle présente une durée d'application de la pression maximale comprise entre 2 et 60 minutes, préférentiellement entre 2 et 10 minutes. Pour chacun des différents cycles du procédé, cette durée peut être identique ou différente. bans ce dernier cas au moins deux cycles ont une durée d'application de la pression maximale différente. La pression initiale, c'est-à-dire la pression initiale du premier cycle ou la pression entre chaque cycle, peut être la pression ambiante ou une pression intermédiaire d'une valeur comprise entre la pression ambiante et la ou les pression(s) maximale(s) de traitement appliquée(s) pendant le cycle précédent et le cycle suivant. Il peut y avoir un temps de latence entre chaque cycle. Ce temps de latence est 10 préférentiellement compris entre 10 secondes et 5 minutes. Les temps de latence entre les cycles, s'il y a au moins 3 cycles, peuvent être identiques ou différents. be façon préférée, le temps de latence est réalisé à pression ambiante. Selon une variante, le temps de latence entre deux cycles peut être réalisé à une 15 pression intermédiaire d'une valeur comprise entre la pression ambiante et la ou les pression(s) maximale(s) appliquée(s) pendant le cycle précédent et le cycle suivant. La vitesse de compression, c'est-à-dire la vitesse de montée de la pression, est comprise entre 0,5 et 8MPa.s-1, préférentiellement entre 0,5 et 2MPa.s-1. Cette 20 vitesse peut être constante ou variable jusqu'à atteindre la pression désirée. be même, pour deux cycles différents, la vitesse de compression peut être identique ou différente. La vitesse de décompression, c'est-à-dire la vitesse de descente de la pression, est comprise entre 0,5 et 100MPa.s-1, préférentiellement entre 0,5 et 8MPa.s-1 25 et encore plus préférentiellement entre 0,5 et 2MPa.s-1. Cette vitesse peut être constante ou variable jusqu'à atteindre la pression désirée. be même, pour deux cycles différents, la vitesse de décompression peut être identique ou différente.

Pour un même cycle, les vitesses de compression et de décompression peuvent être identiques ou différentes. Chaque cycle présente un profil de compression et de décompression. Le profil de compression ou de décompression correspond à l'allure générale de l'application de la pression durant la montée ou la descente. Ainsi, la compression et la décompression peuvent se faire de manière monotone (à vitesse constante ou avec des vitesses variables) ou avec un ou plusieurs paliers de pression. Chaque palier est réalisé en appliquant une pression constante intermédiaire d'une valeur située entre la pression la plus basse du cycle et la pression la plus haute du cycle. L'atteinte de ce ou ces palier(s) peut se faire à vitesse constante ou à vitesses variables. Avant et après chaque palier, la vitesse d'application peut être identique ou différente. Pour un même cycle, le profil de compression et le profil de décompression peuvent être identiques ou différents.

Pour deux cycles différents, les profils de compression peuvent être identiques ou différents. be même, pour deux cycles différents, les profils de décompression peuvent être identiques ou différents. Le procédé peut être mis en oeuvre à l'aide de dispositifs « Hautes Pressions » adaptés aux conditions de l'invention. Le milieu à traiter doit être conditionné dans un emballage déformable entièrement ou en partie, nécessaire pour transmettre la pression. Par exemple il peut s'agir d'un emballage en matériau rigide comme du verre, du plastique ou tout autre matériau approprié à être utilisé comme contenant, fermé par un opercule déformable ou possédant une partie déformable.

Avantageusement la combinaison des différentes caractéristiques du procédé conduit à l'inactivation des spores bactériennes présentes initialement dans le milieu, tout en n'altérant pas les propriétés et la composition du milieu originelle qui sont conservées. L'inactivation des spores bactériennes par le procédé selon l'invention est irréversible. Le procédé peut donc être utilisé pour inactiver au moins une spore bactérienne dans un milieu compressible, en particulier un milieu liquide, pâteux ou gel.

Les spores bactériennes peuvent appartenir par exemple aux espèces suivantes : Bacillus atrophaeus, Bacillus cereus, Bacillus stearothermophilus, Clostridium per fringens, Clostridium bifermentans, Clostridium sporogenes, ou tout autre espèce appartenant aux genres Bacillus, Clostridium ou Sporosarcina. Le taux d'inactivation obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'invention est préférentiellement supérieur ou égal à 4 log. L'inactivation peut être totale. Le procédé peut également être utilisé pour améliorer la conservation, notamment la durée de conservation des milieux traités. Les produits obtenus après traitement selon l'invention peuvent donc être caractérisés par un taux d'inactivation d'au moins 4 log (équivalent à 104 15 UFC/mL). Par taux d'inactivation selon l'invention, on entend le taux de spores bactériennes inactivées présentes dans le milieu par rapport au taux de spores bactériennes totales présentes dans le milieu. Ce taux peut être exprimé en log, sachant que pour x log, cela correspond à un pourcentage de spores bactériennes inactivées 20 de 100-10(2'). Par exemple : - un taux d'inactivation de 4 log, signifie que 99,99% des spores bactériennes présentes dans le milieu sont inactivées, - un taux d'inactivation de 2 log, signifie que 99% des spores bactériennes 25 présentes dans le milieu sont inactivées, - un taux de 5 log, signifie que 99,999% des spores bactériennes présentes dans le milieu sont inactivées.

Selon l'invention, le pourcentage de spores inactivées dans le milieu après traitement est donc supérieur ou égal à 99,99% des spores bactériennes initialement présentes dans le milieu. La limite de 4 log correspond d'ailleurs avantageusement à la limite fixée par de 5 nombreux organismes afin d'évaluer la possibilité de mettre en oeuvre des traitements alternatifs pour assurer la sécurité microbiologique de produits d'origine biologique. Par exemple, la STAATT (State and Territorial Association on Alternate Treatment Technologies) a fixé des standards pour l'évaluation de l'efficacité de procédés alternatifs pour la destruction des déchets infectieux. 10 bans sa définition du niveau III, « un tel procédé doit prouver sa capacité à détruire les agents infectieux en conduisant à une réduction de 6 log des formes végétatives et une réduction de 4 log des formes sporulées ». Les conditions du procédé selon l'invention peuvent être optimisées à l'intérieur des fourchettes de valeurs revendiquées en fonction de la nature du milieu à 15 traiter et en fonction de la nature de la souche de spores bactériennes à inactiver pour obtenir le meilleur taux d'inactivation possible. Les conditions peuvent également être optimisées à l'intérieur des fourchettes de valeurs revendiquées pour que la durée totale du procédé de traitement soit en agrément avec les contraintes économiques adaptées au milieu traité. 20 Par exemple, dans le cas des spores de Bacillus atrophaeus pour le milieu modèle utilisé dans les exemples (bouillon Tryptone Sel (TS)), pour une valeur de la pression de 350MPa et une température initiale de 36°C avec une vitesse de compression et de décompression de 1MPa.s-1, l'application de 4 cycles d'une durée de 5 minutes, conduit à un taux d'inactivation de 5,2 log et l'application de 25 4 cycles de 10 minutes conduit à une inactivation totale de la population de spores initialement présentes dans le milieu (taux initial de 5,8 log). L'invention est à présent illustrée par des exemples et essais non limitatifs.

Pour ces exemples, les essais ont été menés sur deux souches de spores bactériennes : Bacillus atrophaeus (ATCC 9372) et Bac'. Ilus cereus (ATCC 14579) dans différents milieux. L'efficacité d'inactivation a été testée dans plusieurs milieux : lait maternel (Lait mat.), bouillon tryptone sel (T5), solution d'albumine (Alb.), solution de glucose à 5% (Glc), soupe commerciale (soupe), eau distillée (eau dist.), eau du robinet (eau rob.), suspensions de polymères [plusieurs suspensions de concentrations variables ont été préparées à partir de deux types de polymères anioniques solubles dans l'eau : CMC 7M XF PH (PHX) et CMC Type 12 M31 XP (T12) - CMC: carboxymethylcellulose. Ces milieux sont représentatifs notamment des secteurs de la santé, de la cosmétique et de l'agro-alimentaire. Les essais ont été réalisés pour un profil de compression et de décompression monotone. bans les tableaux de résultats, les abréviations utilisées sont les suivantes : - VA : vitesse d'application de la pression, exprimée en MPa.s-1 - Ti : température initiale du traitement, exprimée en °C - MA : mode d'application de la pression, soit continu (cont.), soit cyclique (cycl.). Le temps de maintien en pression pour chaque cycle sera donné (t, exprimé en min) et dans le cas d'un mode d'application cyclique, le nombre de cycles (n) ainsi que le temps de latence à pression ambiante exprimé en min) seront précisés. - P: valeur de la pression, exprimée en MPa. - Nav : concentration en bactéries avant traitement « Hautes Pressions », exprimée en log - Nap : concentration en bactéries après traitement « Hautes Pressions », exprimée en log - Eb : Efficacité destructrice du traitement (Nav - Nap) exprimée en log Le critère retenu pour estimer que l'efficacité d'inactivation d'un traitement « Hautes Pressions » était suffisante a été El) 4,0 log. Les essais consistent en des « challenge tests », c'est-à-dire que chacun des milieux testés a été volontairement contaminé par des spores soit de Bacillus 5 atrophaeus (ATCC 9372) soit de Bacillus cereus (ATCC 14579). Préparation des échantillons Les suspensions de spores ont été achetées « prêtes à l'emploi » dans le commerce (AES Chemunex pour B. atrophaeus et Amilabo pour B. cereus). La concentration en spores de ces suspensions était d'environ 108/mL. En fonction 10 du milieu à tester et de la concentration finale en spores souhaitée, un volume déterminé de milieu était inoculé par le volume adéquat de suspension de spores. Après homogénéisation, une partie de l'échantillon était conservée afin de déterminer la concentration finale réelle en spores. L'autre partie était placée dans un emballage souple qui était thermoscellé après remplissage avant d'être 15 soumis au traitement « Hautes Pressions ». Protocole de dénombrement Avant et après traitement, un dénombrement des échantillons est réalisé afin de déterminer l'efficacité destructrice de ce traitement. Pour cela, des dilutions en cascade des échantillons sont réalisées dans du bouillon TS. Pour chaque 20 dilution, deux boîtes de pétri sont ensemencées de la manière suivante : 1 mL de la dilution est placé au fond de la boîte puis de la gélose TSA (Tryptic Soy Agar - AES Chemunex) en surfusion est versée. Après homogénéisation et gélification, les boîtes de pétri sont mises à l'étuve à 35°C pendant 48h. Les boîtes contenant entre 15 et 300 colonies isolées sont ensuite sélectionnées pour le 25 dénombrement.

Après comptage des colonies, la concentration en micro-organismes est déterminée par le calcul suivant : N= Ec (n, +0,1x n2) x d avec N : concentration en micro-organismes (en UFC/ml) Sc: somme des colonies comptées sur toutes les boîtes retenues ni : nombre de boîtes retenues à la première dilution nz : nombre de boîtes retenues à la deuxième dilution d : taux de dilution de la première dilution Les concentrations en micro-organismes sont exprimées en Unités Formant Colonies par mL. Cette dénomination est basée sur le principe que chaque colonie isolée présente dans la boîte de pétri est issue d'un seul micro-organisme présent dans le volume (1 mL) de suspension ayant servi à l'ensemencement. Afin de pouvoir comparer les résultats, ces derniers sont exprimés en efficacité destructrice (Eb). L'efficacité destructrice du traitement est alors calculée de la façon suivante : ED= -log avec El) : efficacité destructrice Nap : concentration en micro-organismes après traitement hautes pressions Na, : concentration en micro-organisme avant traitement hautes pressions Caractéristiques générales du traitement appliqué avec le procédé selon l'Invention Chaque traitement Hautes Pressions est défini selon un maximum de sept paramètres, à savoir la valeur de la pression, la vitesse d'application de la 25 pression et de descente en pression, le mode d'application de la pression, le profil de compression et de décompression, la durée de traitement, le temps de latence entre chaque cycle et la température: - La valeur de la pression (P) est équivalente au niveau de pression auquel le traitement hautes pressions est réalisé. Celle-ci est exprimée en MégaPascal (MPa) ou en bar. - La vitesse d'application de la pression (VA) pour la compression, correspond au temps nécessaire pour atteindre le palier final, la valeur de pression maximale à laquelle se fait le traitement hautes pressions ou pour atteindre un ou plusieurs paliers de pression intermédiaires ; elle est exprimée en MPa.s-1. La vitesse d'application de la pression (VA) pour la décompression, correspond au temps nécessaire pour atteindre la pression ambiante ou une pression intermédiaire (pression d'un palier intermédiaire ou pression intermédiaire appliquée entre deux cycles) ; elle est exprimée en MPa.s-1. - Le mode d'application de la pression (MA) représente la façon dont cette dernière est appliquée, c'est-à-dire soit en continu, soit de manière cyclique. En mode continu, l'échantillon est comprimé jusqu'à la pression souhaitée, maintenu à cette pression pendant une durée de traitement t, et enfin ramené à pression ambiante. bans le cas d'une application cyclique, chaque enchaînement (correspondant à un cycle) compression / maintien de la pression / décompression peut être répété plusieurs fois. Par exemple, pour un traitement de 10 minutes, celui-ci peut être réalisé en mode continu, et dans ce cas la pression est maintenue pendant 10 min avant retour à pression ambiante ; ou en mode cyclique, et dans ce cas le traitement peut être divisé en n cycles, la pression étant maintenue pendant 10/n min pour chaque cycle (par exemple 5 cycles de 2 min). La pression entre chaque cycle peut être la pression ambiante ou une pression intermédiaire entre la pression maximale de traitement et la pression ambiante. - Le profil de compression ou de décompression (Pf) pour un cycle correspond à l'allure générale de l'application de la pression durant la montée ou la descente. - Le temps de latence (tic) entre chaque cycle. Ce temps de latence est défini comme le temps entre chaque cycle à la pression ambiante ou à une pression intermédiaire. - La durée de traitement (t) est définie comme le temps de maintien de la pression maximale pour chaque cycle une fois la pression souhaitée atteinte. - La température (T) initiale à laquelle le traitement hautes pressions est réalisé. La durée globale du procédé de traitement selon l'invention dépend : - des profils de montée et de descente Pf en pression et des vitesses VA les caractérisant, - de la durée t à pression constante maximale pour chaque cycle - de la durée du temps de latence flat entre chaque cycle. Description de l'équipement utilisé pour les essais Il s'agit d'un équipement utilisant un système de compression directe mis au point en collaboration avec les sociétés NFM-Technologies, FRAMATOME et la société CLEXTRAL. Son principe repose sur la poussée d'un vérin hydraulique (de surface Si), promu par une pompe hydraulique, qui entraîne alors la montée de l'enceinte « hautes pressions » de surface interne 52 le long d'un piston fixe. Ainsi, le volume de l'enceinte d'expérience se réduit, ce qui conduit à une augmentation de la pression interne. be manière approximative (en ne tenant pas compte des frottements), sa valeur est égale à la pression délivrée par la pompe Si et 52, à hydraulique multipliée par le rapport entre les surfaces . S1 savoir- , 23. 52 Cet équipement est constitué de quatre parties principales : - une plateforme sur laquelle repose l'enceinte réactionnelle de 3 litres de volume utile, - un générateur basses pressions (pompe hydraulique), produisant des pressions jusqu'à environ 300 MPa, - un système de contrôle-commande et d'acquisition du signal, géré par une interface informatique, - un générateur thermique, permettant de refroidir ou chauffer l'enceinte réactionnelle entre -20°C et +80°C. Il est à noter que le procédé selon l'invention, et notamment le procédé décrit dans les exemples, peut également être appliqué à l'aide d'un équipement à compression indirecte où le volume de l'enceinte est constant et pour lequel c'est le milieu transmetteur de pression qui est injecté à l'aide d'une ou plusieurs pompe(s) dans l'enceinte. D'une manière générale, le procédé selon l'invention peut être mis en oeuvre par tout type d'équipement générateur de hautes pressions. Mise en oeuvre du traitement appliqué avec le procédé selon l'Invention Avant tout traitement, il est nécessaire, afin d'éviter toute contamination ultérieure, de mettre le produit à traiter dans un emballage étanche et résistant à la pression, dans les conditions de température ambiante. Une fois l'échantillon préparé, celui-ci est placé au sein de l'enceinte d'expérience de l'équipement Hautes Pressions. Les différents paramètres du traitement (vitesse d'application, valeur de la pression, durée du traitement...) sont saisis sur l'ordinateur avant la mise en route. Une fois le traitement fini, le dispositif est ouvert et les échantillons pré-emballés sont récupérés afin d'être analysés. Les essais 1 à 22 ont été réalisés dans les conditions de l'invention, et les essais 23 à 43 dans des conditions en dehors de celles de l'invention.

Les résultats obtenus sont présentés dans les tableaux ci-après. Tableau 1.1 : Traitements 1 à 22 - Paramètres du procédé N° Traitement HP trait VA T 1 MA Cyclage 1 Cyclage 2 (MPa.s (°C) 1) t P n tat. t P n tiat. (min) (MPa) (min) (min) (MPa) (mm) 1 7,1 36 cycl. 5 300 4 5 /Il/1U _Aill 2 3,3 36 cycl. 5 320 5 5 3 3,3 36 cycl. 5 330 4 5 MillMINMI 4 3,3 36 cycl. 10 330 4 5 MIMIUM1 5 3,3 36 cycl. 10 350 4 5 M01/11,M11 6 3,3 36 cycl. 7,5 330 4 0,5 7 3,3 36 cycl. 10 330 4 0,5 %Mn% 8 2,7 36 cycl. 10 320 4 5 /IMIUM1 9 2 36 cycl. 10 300 4 0,5 M01/11,M11 1,4 36 cycl. 5 320 4 0,5 11 1,4 36 cycl. 5 320 5 0,5 Illee'-Plee"-Fr 30s 350 12 1 36 cycl. 10 350 1 5 13 1 36 cycl. 5 300 4 5 MIIMIUM11 14 1 36 cycl. 5 350 4 5 1 36 cycl. 5 350 5 5 %Mn% 16 1 36 cycl. 10 300 3 5 /IMIUM1 17 1 36 cycl. 10 350 3 5 M01/11-MI 18 1 36 cycl. 10 350 4 5 MIMIN/I 19 1 36 cycl. 5 320 4 0,5 %Mn% mr!, 1 46 cycl. 10 250 4 5 21 1 36 cycl. 10 300 3 5 (mont.) 8 (desc.) 22 0,6 36 cycl. 10 300 3 5 Tableau 1.2 : Traitements 1 à 22 - Résultats Bacillus atrophaeus (7 milieux) Spores Bacillus atrophaeus (ATCC 9372) N° Lait TS Alb. Glc Soupe eau eau trait mat. dist. rob. Na, ED Na, ED Na, ED Na, ED Na, ED Na, ED Na, ED 5,0 3,6 MM 4,9 1,3 MMMMMM 5,4 4,4 5,2 4,6 5,5 3,7 MMMMMMMM 2 5,4 3,5 5,5 4,1 5,5 3,5 MMMMMMMM 3 4,9 4,9 6,0 6,3 5,0 2,3 MMMMMMMM 4 5,2 5,2 5,3 4,6 5,3 4,1 MMMMMMMM 5,3 4,6 5,3 4,4 MMMMMMMMMM 6 5,0 4,2 5,0 3,4 4,9 2,9 MMMMMMMM 7 5,1 5.() 5,2 4,4 5,2 3,8 MMMMMMMM 8 5,0 4,4 5,2 4,0 5,1 3,1 MMMMMMMM 9 5,0 4.4 4,9 3,8 5,0 0,6 MMMMMMMM 5,0 5.() 5,0 4,1 5,0 2,8 MMMMMMMM 11 6,0 5,1 6,1 5,2 MM 6,1 1,4 MMMIMMM 12 5,1 5,1 AM 5,0 3,9 5,0 1,5 4,9 4,0 5,0 1,1 4,9 3,9 13 6,1 4,7 6,2 5,2 MM 6,2 1,3 MMMMMM 14 6,0 5,2 6,1 5,9 MM 6,1 1,5 MMMMMM 5,1 4,2 4,9 4,7 5,1 3,3 MMMMMMMM 16 6,2 4,5 6,1 4,5 MM 6,0 1,3 MMMMMM 17 5,8 5,8 5,9 5,9 MM 6,0 1,7 MMMMMM 18 5,0 4,5 5,0 3,8 5,0 3,4 MMMMMMMM 19 4,9 4,9 MM 4,9 3,7 MMMMMM 4 6 A.M.M....MM 9 21 5,0 5,0 4,9 4,9 MM 4,9 3,0 MMMMMM Tableau 1.3 : Traitements 1 à 22 - Résultats Bacillus atrophaeus (6 milieux) Spores Bacillus atrophaeus (ATCC 9372) N° trait PIIX 0,5% PHX 1% PHX 2% T120,5% T121% T122% Na, ED Na, ED Na, ED Na, ED Na, ED Na, ED 5 77 5,0 4,4 5,0 4,1.7 5,0 4,4 5,0 4,2 18 4,9 4,9 5,0 4,8 4,9 4,9 4,9 4,7 Tableau 1.4: Traitements 1 à 22 - Résultats Bacillus cereus Spores Bacillus cereus (ATCC 14579) N° trait Lait TS Alb. Glc Soupe eau eau mat. dist. rob. Na, ED Na, ED Na, ED Na, ED Na, ED Na, ED Na, ED 1 5,0 4,7 MMM 4,8 4,3 MMMMMM 13 6,3 6,3 M 5,3 5,3 5,0 4,5 5,1 5,1 4,7 4,7 4,8 4,8 16 5,3 5,3 5,2 5,0 5,3 4,7 MMMMMM 20 5,3 MM 5,1 5,1 MMMMMM 21 5,1 5,1 MMM MMMMMM 22 5,0 5,0 5,0 4,6 MM 4,8 4,8 MMMMMM Tableau 2.1 : Traitements 23 à 43 - Paramètres du procédé N° Traitement HP trait . VA Ti ,,'. A tvi tt- Cyclage 1 Cyclage 2 (mpa.s-t) c C) t P n tlat. t '....-----.1_-----1,-------' P n tlat. (min) (MPa) (min) (min) (MPa) 1 (min) 10 500 - 23 3,3 20 cycl. 10 500 4 5 24 7,7 28 cycl. 15 100 1 20 25 3,3 36 cycl. 15 100 1 20 10 500 1 - 26 3,3 36 cycl. ,-------- 100 1 20 10 10 350 3 30s 1 500 1 - 27 3,3 28 cycl. 28 3,3 28 cycl. 15 50 1 20 10 500 1 - 29 3,3 28 cycl. 15 100 1 10 500 1 - 30 3,3 28 cycl. 15 100 1 5 10 500 1 - 31 3,3 28 cycl. 15 100 1 20 10 400 1 - 32 3,3 28 cycl. 15 100 1 20 10 500 1 - 33 3,3 28 cycl. 15 100 1 20 30 500 1 - 34 3,3 28 cycl. 15 100 1 20 2 500 5 30s 35 3,3 28 cycl. 15 100 1 60 10 500 1 - 36 3,3 28 cycl. 15 200 1 20 10 500 1 - 37 3,3 28 cycl. 30 100 1 20 10 500 1 - 38 3,3 28 cycl. ,,-----' 1 20 10 500 1 - 39 3,3 28 cont _.--------- 1 ,...---"-- 10 500 1 - 40 3,3 20 cycl. 15 100 1 20 10 ,,-----_____----'1_,-------- 500 320 500 1 - 5 10 4 30s 1 - 41 1 36 cycl. 5 100 4 5 ,..------- 1 ,-------- 15 1 20 150 cycl. 42 1 30 43 1 28 cycl.

Tableau 2.2 : Traitements 23 à 43 - Résultats Bacillus atrophaeus Spores B. atrophaeus (ATCC 9372) N° Lait mat. TS Alb. Glc trait Na, ED Na, ED Na, ED Na, ED 23 4,9 0,7 4,8 0,6 24 6,0 2,1 6,2 2,0 00 6,1 1,6 25 5,9 3,1 6,1 2,8 00 6,0 2,1 26 4,9 3,5 5,0 2,9 5,0 0 0,0 27 6,0 1,8 6,2 1,1 6,1 1,1 28 5,8 1,9 6,0 0,9 00 6,1 1,3 29 5,9 2,0 6,2 1,7 00 5,9 0,7 00 30 5,9 2,2 6,0 1,8 5,6 0,8 31 5,9 2,1 6,2 1.9 6,2 2,0 6,0 0,3 32 6,0 2,3 6,0 1,9 6,1 0,8 33 6,1 2,1 6,2 1,6 00 6,1 2,0 34 6,1 3,3 6,2 3,4 6,2 1,3 35 5,9 2,0 6,0 1,6 6,0 1,0 36 6,0 2,0 6,0 1,4 6,1 1,0 37 6,0 2,6 6,1 2,2 6,0 0,8 38 6,0 0,1 6,2 0,4 6,1 1,3 39 6,0 0,1 6,0 0,4 6,0 1,3 40 6,0 0,3 6,1 0,4 6,0 0,1 41 5,0 2,7 4,9 3,3 MM 42 5,1 3,1 5,1 2,7 5,0 2,4 0,0 43 6,1 2,4 6,0 2,1 6,1 0,6 Tableau 2.3 : Traitements 23 à 43 - Résultats Bacillus cereus Spores B. cereus (ATCC 14579) N° Lait mat. TS Alb. Glc trai ( N., ED Na, ED Na, ED Na, ED 23 4,9 0,8 4.6 2.4 41 5,0 3,9 5,1 3,9 fflM On constate que dans les conditions de l'invention (essais 1 à 22), quelles que soient les valeurs des paramètres sélectionnés, les résultats obtenus en termes d'inactivation de la population de spores bactériennes initialement présentes dans le milieu de suspension et pour au moins une des souches de spores, sont d'au moins 4 log, alors que pour les essais 23 à 43, le taux d'inactivation est beaucoup moins bon. Certains traitements par application du procédé selon l'invention permettent même de conduire à une inactivation totale de la population de spores initialement présentes (résultats surlignés en gris dans les tableaux de résultats).

Les résultats obtenus montrent également que, dans les conditions du procédé selon l'invention, les paramètres peuvent être ajustés par l'homme de l'art pour obtenir la meilleure efficacité en fonction du milieu de suspension à traiter et/ou de la souche de spores à inactiver. Les résultats montrent par exemple que la solution de glucose constitue un 10 environnement beaucoup plus « baroprotecteur » (protecteur vis-à-vis de l'action de la pression) que le lait maternel ou le bouillon TS. be même les résultats montrent que la souche Bacillus cereus semble plus sensible au procédé que la souche Bacillus atrophaeus. Par ailleurs, la comparaison des résultats obtenus avec les caractéristiques du 15 procédé selon l'invention et avec des caractéristiques autres en dehors de l'invention, montrent l'importance du choix de ces caractéristiques. On peut citer par exemple le choix du mode d'application, de la fourchette de pression ou de la fourchette de température. - Mode d'application : 20 Les résultats montrent que l'utilisation d'un mode d'application cyclique est indispensable pour atteindre un taux satisfaisant d'inactivation des spores bactériennes. En effet, l'application d'un traitement continu (voir les résultats du traitement n° 39 dans le tableau 2.2) même à une pression élevée (500 MPa) conduit à un très faible taux d'inactivation des spores de Bacillus atrophaeus, 25 n'excédant pas 1,3 log lorsqu'elles sont mises en suspension dans une solution de glucose. - Fourchette de pression : La comparaison des traitements n°13 et 41, montre que l'utilisation de valeurs de pression inférieures à 200 MPa conduit à des efficacités destructrices inférieures à 4 log. - Fourchette de température : La comparaison des traitements n°13 et 42 montre que l'utilisation de valeurs de température inférieure à 25°C conduit à des efficacités d'inactivation inférieures à 4 log. Enfin, il est à noter que dans les procédés de traitement « Hautes Pressions » de l'art antérieur, il est généralement mentionné qu'un pré-cycle réalisé à une pression de 50 à 200 MPa suivi d'un temps de latence à pression ambiante afin de faciliter la germination des spores puis d'un deuxième cycle à une pression supérieure à 400 MPa, est nécessaire pour obtenir un inactivation des spores bactériennes. bes procédés de traitement suivant ce schéma ont été appliqués aux traitements 24, 28 à 37, 40 et 44. On constate que tous ces traitements conduisent à une réduction de la population des spores au maximum de 3,4 log, alors que le procédé selon l'invention, sans pré-cycle, conduit à inactiver totalement les spores bactériennes dans de nombreux milieux de suspension.

Claims (20)

1. REVENDICATIONS1. Procédé de traitement d'un milieu compressible, caractérisé en ce qu'il comprend au moins deux cycles, chaque cycle consistant à appliquer audit milieu une pression comprise entre 200 et 400MPa avec une vitesse de compression comprise entre 0,5 et 8 MPa.s-1 et une vitesse de décompression comprise entre 0,5 et 100 MPa.s-1, la température initiale du milieu étant comprise entre 25°C et 50°C.
2. 2. Procédé de traitement selon la revendication 1, caractérisé en ce que chaque cycle présente une durée d'application de la pression maximale comprise entre 2 et 60 minutes.
3. 3. Procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que chaque cycle a une durée d'application de la pression maximale comprise entre 2 et 10 minutes.
4. 4. Procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'au moins deux des cycles ont une durée d'application de la pression maximale différente.
5. 5. Procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que la pression entre deux cycles est la pression ambiante ou une pression intermédiaire comprise entre la pression ambiante et la ou les pression(s) maximale(s) de traitement appliquée(s) pendant lesdits deux cycles.
6. 6. Procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'au moins deux des cycles présentent une vitesse de compression et/ou de décompression différente.
7. 7. Procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que la vitesse de compression et/ou la vitesse de 25 décompression peuvent varier jusqu'à atteindre la pression désirée.
8. 8. Procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'au moins deux cycles présentent un profil de compression et/ou de décompression différents.
9. 9. Procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, 5 caractérisé en ce que pour un même cycle, le profil de compression et le profil de décompression sont différents.
10. 10. Procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'entre chaque cycle, il y a un temps de latence.
11. 11. Procédé de traitement selon la revendication 10, caractérisé en ce que 10 le temps de latence entre chaque cycle est compris entre 10 secondes et 5 minutes.
12. 12. Procédé de traitement selon l'une des revendications, caractérisé en ce que la pression appliquée est comprise entre 300 et 360 MPa.
13. 13. Procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, 15 caractérisé en ce que la vitesse de compression et/ou de décompression est comprise entre 0,5 et 2 MPa.s-1.
14. 14. Procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que la température initiale est comprise entre 30 et 40°C.
15. 15. Procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, 20 caractérisé en ce que ledit milieu compressible est un milieu liquide, gel ou pâteux.
16. 16. Procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, caractérisé en ce que ledit milieu compressible est un produit du secteur de la santé, de la cosmétique, de l'alimentaire ou des compléments alimentaires. 25
17. 17. Utilisation du procédé de traitement selon l'une des précédentes revendications, pour inactiver au moins une spore bactérienne présente dans le milieu traité.
18. 18. Utilisation du procédé de traitement selon l'une des revendications 1 à 16, pour inactiver au moins une spore bactérienne choisie parmi les espèces Bacillus atrophaeus, Bacillus cereus, Bacillus stearothermophilus, Clostridium per fringens, Clostridium bifermentans, Clostridum sporogenes, ou tout autre espèce appartenant aux genres Bacillus, Clostridium ou Sporosarcina présentent dans le milieu traité.
19. 19. Utilisation du procédé de traitement selon l'une des revendications 1 à 16, pour améliorer la conservation des milieux traités.
20. 20. Produit obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 1 à 16, caractérisé en ce qu'il présente un taux d'inactivation des spores bactériennes présentes dans le milieu au moins égal à 4 log.