FR2988400A1

FR2988400A1 - Disque d'antibiotique

Info

Publication number: FR2988400A1
Application number: FR1252693A
Authority: FR
Inventors: Henri Drugeon
Original assignee: CERMIA
Current assignee: CERMIA
Priority date: 2012-03-26
Filing date: 2012-03-26
Publication date: 2013-09-27

Abstract

L'invention concerne un disque d'antibiotique (11) pour déterminer la sensibilité d'une souche bactérienne vis-à-vis d'un antibiotique, le disque d'antibiotique étant imprégné dudit antibiotique, caractérisé par le fait que le disque d'antibiotique présente au moins une encoche (12) découpée sur son bord, formant une fenêtre de lecture interne de la sensibilité de la souche bactérienne vis-à-vis de l'antibiotique. L'invention concerne également l'utilisation du disque d'antibiotique et un procédé de détermination de la sensibilité d'une souche bactérienne vis-à-vis d'un antibiotique, à l'aide dudit disque d'antibiotique.

Description

DISQUE D'ANTIBIOTIQUE L'invention concerne le domaine des méthodes de diagnostic d'infections bactériennes, et plus particulièrement concerne le domaine des tests visant déterminer la sensibilité d'une souche bactérienne vis-à-vis d'un ou plusieurs antibiotiques donnés. Actuellement, deux principales méthodes sont utilisées pour déterminer la sensibilité d'une souche bactérienne vis-à-vis d'agents antibactériens. Ces méthodes ont pour objectif de déterminer la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) d'une souche bactérienne vis-à-vis d'un antibiotique donné. La CMI correspond, selon l'OMS, à la plus petite quantité d'antibiotique 15 croissance bactérienne, appréciable exprimée en mg/L. Les méthodes de référence dilution en milieu liquide ou en capable d'inhiber une à l'oeil nu. Elle est sont les méthodes de milieu solide. Elles reposent sur la mise en contact d'une ou plusieurs souches 20 bactériennes des concentrations croissantes d'antibiotique en suivant une progression géométrique de raison 2. Ces méthodes sont bien standardisées et sont publiées par différents organismes : CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) aux Etats-Unis, EUCAST 25 (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) en Europe et CA-SFM (Comité de l'Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie) en France. Les valeurs de CMI obtenues sont ensuite comparées à des concentrations critiques préalablement 30 définies par les organismes mentionnés ci-dessus : une concentration critique basse et une concentration critique haute. Ces concentrations critiques permettent de classer les souches selon trois catégories cliniques : sensible (S), résistante (R) et intermédiaire (I). Les souches de catégorie S sont celles dont la CMI est inférieure ou égale à la concentration critique basse, et correspondent aux souches pour lesquelles la probabilité de succès thérapeutique est forte. Les souches de catégorie R sont celles dont la CMI est supérieure à la concentration critique haute et correspondent aux souches pour lesquelles la probabilité d'échec thérapeutique est forte. Les souches de catégorie I sont celles dont la CMI est comprise entre les deux concentrations critiques haute et basse et correspondent aux souches pour lesquelles le succès thérapeutique est imprévisible. Cependant, ces méthodes de référence sont délicates et onéreuses mettre en oeuvre et, par conséquent, ne sont réalisées que dans des laboratoires très spécialisés. Il existe néanmoins un mode de réalisation de ces méthodes de dilution sous forme de microplaques avec des concentrations d'antibiotiques prédistribuées, qui sont soit lyophilisées, soit congelées, et qui permettent l'utilisation de ces méthodes de dilution dans un plus grand nombre de laboratoires. En variante, la méthode de diffusion en gélose, ou antibiogramme standard, est également largement répandue. Elle présente les avantages d'être relativement 25 facile et économique à mettre en oeuvre en comparaison aux méthodes de dilution, ce qui lui permet d'être très utilisée dans les petits laboratoires, les laboratoires de diagnostic, et dans les pays en développement. De manière générale, un disque de papier buvard de 6 mm de diamètre 30 est imprégné de l'antibiotique à tester, puis est déposé à la surface d'un milieu gélose ensemencé par la souche bactérienne à étudier. Dès le dépôt du disque, l'antibiotique diffuse de manière radiale et principalement uniforme, de telle sorte que la concentration d'antibiotique à point donné de la boîte de gélose est proportionnelle à la distance le séparant du disque. Au bout de plusieurs heures (en général, de 18 à 24 heures), une zone d'inhibition circulaire plus ou moins grande s'est formée, correspondant à une absence de croissance de la souche bactérienne étudiée. Le diamètre de la zone d'inhibition est comparé à des diamètres critiques haut D et bas d de l'antibiotique testé pour catégoriser la souche en S, R ou I. Compte-tenu du fait que les diamètres critiques des zones d'inhibition sont généralement compris entre 10 et 25 mm, la méthode de diffusion nécessite une diffusion importante de la molécule d'antibiotique, ainsi qu'une bonne stabilité de la molécule d'antibiotique dans le milieu de culture. Cette méthode pose donc problème pour les molécules d'antibiotiques à haut poids moléculaire, qui présentent une faible vitesse de diffusion, ainsi que pour les molécules d'antibiotiques instables.

La solution qui consisterait à augmenter la charge en antibiotique du disque d'antibiotique n'est pas satisfaisante, puisque la variabilité de la méthode augmente avec la charge du disque, d'après la formule de Vesterdal (Drugeon H.B., Antimicrob. Agents Chemother. 1987 Juin ; 31(6) : 870-5). La demande de brevet américain US 2,787,581 et la demande de brevet français FR 2691610 divulguent des disques d'antibiotiques ayant des formes différentes des disques circulaires habituellement utilisés lors de la méthode classique de diffusion en gélose. Cependant, aucun de ces deux documents n'aborde le problème de diffusion de molécules instables ou à haut poids moléculaire.

L'inventeur de la présente demande a recherché une solution à ce problème afin de proposer un disque d'antibiotique qui permet de déterminer de façon plus fiable la sensibilité de souches bactériennes vis-à-vis d'un antibiotique, y compris dans le cas d'antibiotiques à haut poids moléculaire et/ou d'antibiotiques instables. Cette solution est apportée par la présente invention qui a pour objet un disque d'antibiotique pour déterminer la sensibilité d'une souche bactérienne vis-à- vis d'un antibiotique, le disque d'antibiotique étant imprégné dudit antibiotique, caractérisé par le fait que le disque d'antibiotique présente au moins une encoche découpée sur son bord, formant une fenêtre de lecture interne de la sensibilité de la souche bactérienne vis-à- vis de l'antibiotique. Dans un mode de réalisation particulier, l'encoche s'étend selon une direction principale radiale par rapport au disque d'antibiotique, de préférence s'étend au maximum jusqu'au centre du disque d'antibiotique.

L'encoche peut notamment avoir une forme sensiblement rectangulaire. Le diamètre du disque peut être d'au moins 9 mm, de préférence est compris entre 12 à 15 mm. L'encoche peut avoir une forme sensiblement 25 rectangulaire et avoir une largeur d'au plus 2,5 mm, et une longueur d'au plus 5 mm. Dans un mode de réalisation particulier, le disque d'antibiotique est imprégné d'un antibiotique à haut poids moléculaire choisi parmi les polymyxines, les 30 peptides tels que les glycopeptides, les lipopeptides et les lipoglycopeptides, ou d'un antibiotique instable choisi parmi les tétracyclines et les peptides. L'utilisation du disque d'antibiotique selon l'invention est particulièrement adaptée à ces classes d'antibiotiques à haut poids moléculaire ou instables. L'invention concerne également l'utilisation du disque d'antibiotique tel que défini ci-dessus pour la 5 détermination in vitro de la sensibilité d'une souche bactérienne vis-à-vis d'un antibiotique. L'invention concerne également un procédé de détermination de la sensibilité d'une souche bactérienne vis-à-vis d'un antibiotique, caractérisé par le fait qu'il 10 comprend les étapes consistant à : - ensemencer une boîte contenant un milieu gélosé par la souche bactérienne ; - déposer au moins un disque d'antibiotique tel que défini ci-dessus, imprégné dudit antibiotique, sur la 15 surface du milieu gélosé ; - laisser incuber la boîte dans des conditions permettant la croissance de la souche bactérienne ; - visualiser la présence et l'étendue d'une croissance de la souche bactérienne à l'intérieur de 20 l'encoche du disque d'antibiotique pour déterminer la sensibilité de la souche bactérienne vis-à-vis de l'antibiotique. Dans un mode de réalisation particulier du procédé, 25 - on classe la souche bactérienne comme sensible vis-à-vis de l'antibiotique lorsque l'étendue de la croissance de la souche bactérienne à l'intérieur de l'encoche est inférieure à une première valeur seuil, notamment est nulle ; 30 - on classe la souche bactérienne comme de sensibilité intermédiaire vis-à-vis de l'antibiotique lorsque l'étendue de la croissance de la souche bactérienne à l'intérieur de l'encoche, est comprise entre une première valeur seuil et une seconde valeur seuil, ladite seconde valeur seuil étant supérieure à la première valeur seuil et inférieure à l'étendue totale de l'encoche ; - on classe la souche bactérienne comme résistante vis-à-vis de l'antibiotique lorsque l'étendue de la croissance de la souche bactérienne à l'intérieur de l'encoche est supérieure à la seconde valeur seuil. Par étendue de la croissance de la souche bactérienne, on entend toute mesure pouvant permettre de caractériser la croissance de la souche bactérienne à l'intérieur de l'encoche, par exemple la surface de la zone de croissance à l'intérieur de l'encoche ; la distance séparant le front de croissance de la souche bactérienne à l'intérieur de l'encoche d'un point fixe, par exemple, une extrémité de l'encoche ; ou toute autre mesure possible. De même, selon la mesure choisie pour caractériser l'étendue de croissance, l'étendue totale de l'encoche correspond à la surface totale de l'encoche ; à la longueur de l'encoche ; ou toute autre mesure possible. Dans un mode de réalisation particulier du procédé, on évalue l'étendue de la croissance de la souche bactérienne à l'intérieur de l'encoche par mesure de la distance de croissance maximale de la souche bactérienne à l'intérieur de l'encoche. Pour mieux illustrer l'objet de la présente invention, on va en décrire ci-après des modes de réalisation particuliers, avec référence aux dessins 30 annexés. Sur ces dessins : Les Figures 1, 2 et 3 sont des représentations schématiques du résultat d'un essai de détermination de la sensibilité d'une souche bactérienne à un antibiotique, selon la méthode de diffusion classique utilisant un disque d'antibiotique de l'Etat antérieur de la technique, dans le cas d'une souche S (Figure 1), d'une souche R (Figure 2) et d'une souche I (Figure 3) ; La Figure 4 est une représentation schématique d'un disque d'antibiotique selon l'invention, posé sur une boîte de gélose ; Les Figures 5, 6 et 7 sont des représentations schématiques du résultat d'un essai de détermination de la sensibilité d'une souche bactérienne à un antibiotique, selon le procédé de l'invention, utilisant un disque d'antibiotique selon l'invention, dans le cas d'une souche S (Figure 5), d'une souche R (Figure 6) et d'une souche I (Figure 7) . Si l'on se réfère aux Figures 1 à 3, on peut y voir représenté le résultat, pour 3 souches différentes, d'un essai de détermination de la sensibilité d'une souche bactérienne à un antibiotique, selon la méthode de diffusion classique décrite dans l'état antérieur de la technique. Dans cette méthode classique, on utilise un disque d'antibiotique 1 circulaire, généralement en papier filtre, imprégné d'une concentration définie d'antibiotique. Le disque est déposé à la surface d'une boite 2, du type boîte de Pétri, remplie au moins partiellement de gélose, préalablement ensemencée par la souche bactérienne à étudier. On laisse ensuite la boîte de gélose incuber pendant une durée de 18 à 24 heures, à une température spécifique de croissance de la souche bactérienne à étudier, pour permettre à la fois la croissance des bactéries et la diffusion radiale de l'antibiotique partir du disque d'antibiotique. Consécutivement à l'incubation, il se forme une zone de croissance 3 des bactéries et, si l'antibiotique inhibe la croissance bactérienne, une zone d'inhibition 4 circulaire, plus ou moins grande autour du disque d'antibiotique 1. La 10 zone d'inhibition 4 correspond à la zone où les bactéries ne poussent pas en raison d'une concentration trop élevée d'antibiotique. La sensibilité de la souche bactérienne à étudier peut être caractérisée par la mesure du diamètre de la zone d'inhibition 4 qui est corrélé à la CMI de la 15 souche bactérienne pour l'antibiotique testé, et par sa comparaison avec les diamètres critiques haut D et bas d de l'antibiotique testé. Sur la Figure 1, le diamètre de la zone d'inhibition 4 est supérieur au diamètre critique haut D de 20 l'antibiotique testé. Par conséquent, la souche bactérienne 3 étudiée est considérée comme sensible S vis-à-vis de l'antibiotique testé. Sur la Figure 2, le diamètre de la zone d'inhibition 4 est inférieur au diamètre critique bas d de 25 l'antibiotique testé. Par conséquent, la souche bactérienne étudiée est considérée comme résistante R vis-à-vis de l'antibiotique testé. Sur la Figure 3, le diamètre de la zone d'inhibition 4 est compris entre le diamètre critique bas d 30 et le diamètre critique haut D de l'antibiotique testé. Par conséquent, la souche bactérienne étudiée est considérée comme étant de sensibilité intermédiaire I vis-à-vis de l'antibiotique testé.

Si l'on se réfère à la Figure 4, on peut y voir représenté un disque d'antibiotique 11 selon un mode de réalisation particulier de l'invention, posé sur une boîte 2, du type boîte de Pétri, remplie au moins partiellement de gélose. Le disque d'antibiotique 11 est un disque circulaire réalisé dans un matériau solide ou semi-solide apte à être imprégné de façon stable par un antibiotique. Il est de préférence en papier filtre, comme les disques classiques de l'état antérieur de la technique, mais d'autres matériaux convenant à la mise en oeuvre de la méthode selon l'invention peuvent être choisis par l'homme du métier. Le disque 11 présente une encoche 12 découpée sur un de ses bords. L'encoche est sensiblement rectangulaire, à savoir qu'elle forme un rectangle ouvert sur le bord du disque et est donc constituée de deux bordures latérales parallèles entre elles, et d'une bordure de fond, fermant le rectangle, perpendiculaire aux deux bordures latérales. L'encoche 12 s'étend radialement au disque, c'est-à-dire que l'axe médian longitudinal de l'encoche 12 sensiblement rectangulaire s'étend le long d'un rayon du disque. Dans le mode de réalisation particulier représenté en Figure 4, l'encoche 12 s'étend jusqu'au centre du disque 11.

Le disque d'antibiotique 11 selon l'invention a de préférence un diamètre supérieur aux disques classiques de 6 mm, pour permettre une lecture correcte au sein de la fenêtre de lecture formée par l'encoche 12. A titre d'exemple non limitatif, le disque peut avoir un diamètre supérieur à 9 mm, notamment compris entre 12 et 15 mm, et par exemple de 13mm. L'encoche 12 a de préférence une largeur de moins de 2,5 mm, notamment égale à 1,5 mm, et s'étend de préférence au maximum jusqu'au centre du disque.

Dans le cas d'un disque de 13mm de diamètre, l'encoche 12 s'étend par exemple sur une longueur d'au plus 5mm, et sur une largeur d'au plus 2,5 mm. Si l'on se réfère aux Figures 5 à 7, on peut y voir représenté une vue schématique agrandie du résultat, pour 3 souches différentes, d'un essai de détermination de la sensibilité d'une souche bactérienne à un antibiotique, selon la méthode de diffusion selon l'invention, utilisant un disque tel que décrit ci-dessus. La méthode est similaire à la méthode de diffusion classique décrite ci-dessus, à savoir que l'on dépose le disque d'antibiotique 11 sur une boîte 2, remplie au moins partiellement de gélose, préalablement ensemencée par une souche bactérienne. Après incubation pendant une durée définie, par exemple de 18 heures à 24 heures, à une température spécifique de croissance de la souche bactérienne testée, par exemple de 35 à 37°C, on visualise la croissance des bactéries à la surface de la boîte 2 de gélose. Sur la Figure 5, on visualise une zone de croissance 3 des bactéries et une zone d'inhibition 4. La zone d'inhibition 4 s'étend tout autour du disque d'antibiotique 11 en formant un cercle, et s'étend également à l'intérieur de l'encoche 12, où elle occupe la totalité de l'encoche 12. Dans ce cas spécifique, la souche bactérienne à étudier est considérée comme sensible S vis-à-vis de l'antibiotique testé. Sur la Figure 6, on visualise une zone de croissance 3 des bactéries, mais on ne visualise aucune zone d'inhibition, ni autour du disque d'antibiotique, ni à 30 l'intérieur de l'encoche 12. Dans ce cas spécifique, la souche bactérienne étudier est considérée comme résistante R vis-à-vis de l'antibiotique testé.

Sur la Figure 7, on visualise une zone de croissance 3 des bactéries qui occupe une partie de l'encoche, du côté ouvert de celle-ci. La zone de croissance 3 s'étend dans l'encoche jusqu'à un front de 5 croissance net. La mesure de la position de front de croissance à l'intérieur de l'encoche permet de catégoriser la souche bactérienne étudiée. On visualise également une zone d'inhibition 4 qui occupe le reste de l'encoche 12. Dans ce cas spécifique, la souche bactérienne à étudier est 10 considérée comme étant de sensibilité intermédiaire I vis-à-vis de l'antibiotique testé. L'exemple suivant illustre un mode de réalisation particulier de la présente invention, sans toutefois en 15 limiter la portée. Exemple : Essai de détermination de la sensibilité de diverses souches bactériennes vis-à-vis de l'antibiotique Colistine. 20 On a préparé des échantillons de souches bactériennes selon la méthode du CLSI puis on les a déposés par écouvillon sur une boîte de Pétri contenant de la gélose Mueller-Hinton (MH) de 4 mm d'épaisseur (BBL, Becton 25 Dickinson). Les boîtes sont ensuite séchées. Puis les disques d'antibiotique, imprégnés par la Colistine (par trempage des disques dans une solution de colistine à 0,12 mg/mL pendant 10 min), sont séchés, perforés et disposés manuellement sur la surface du milieu gélose. Pour finir, 30 les boîtes sont incubées pendant 18 heures à la température spécifique de croissance de la souche bactérienne testée afin de permettre sa croissance.

Les disques d'antibiotique utilisés dans le présent exemple présentent un diamètre de 12 mm et une encoche sensiblement rectangulaire de 1,5 mm de largeur et de 5 mm de longueur.

L'essai de détermination de la sensibilité de diverses souches bactériennes vis-à-vis de l'antibiotique Colistine consiste à mesurer le diamètre de la zone d'inhibition et à déterminer la présence et l'étendue du front de pousse de la souche bactérienne testée l'intérieur de l'encoche du disque d'antibiotique. Ensuite, la souche bactérienne est catégorisée en S, R ou I vis-à-vis de la Colistine. Il est ensuite possible de comparer la classification de la souche bactérienne vis-à-vis de la Colistine publiée par l'EUCAST à la classification obtenue grâce au disque d'antibiotique selon l'invention. Le tableau 1 ci-dessous représente les données obtenues avec des disques de 12 mm de diamètre présentant une encoche sensiblement rectangulaire de 1,5 mm de large imprégnés par de la Colistine à 0,12 mg/mL.

La charge en antibiotique du disque est choisie de manière empirique pour permettre de distinguer les souches S, R et I via une lecture à l'intérieur de l'encoche. Elle peut par exemple être choisie par rapport à des souches données, de référence, pour que les souches S ne se développent pas du tout dans l'encoche, les souches I se développent dans une partie uniquement de l'encoche, et les souches R se développent dans une partie plus importante, voire dans la totalité de l'encoche. Cette charge est beaucoup plus faible que celle utilisée habituellement dans la méthode de diffusion en gélose. D'après la formule de Vesterdal, la variabilité de la méthode est fonction de la charge en antibiotique du disque d'antibiotique : plus la charge est petite, plus la variabilité est faible. Ainsi, l'utilisation du disque d'antibiotique selon l'invention permet une bonne reproductibilité des résultats.

14 Tableau 1 Résultats Interpré Genre/Espèce N° de souche Diamètre de Pousse Interprétation CMI tation la zone dans selon Colistine selon d'inhibition l'encoche l'invention (solide) EUCAST (mm) (mm) mg/L 0,5 S E.coli 317 15 - S 2 S P.aeruginosa 318 14 - S 0,5 S E.cloacae 3128 16,5 - S 1 S K.pneumoniae 5023 16 - S 0,5 S K.pneumoniae 5025 17 - S 0,5 S K.pneumoniae 5026 16,5 - S 0,5 S E.cloacae 5027 17 - S 0,5 S E.cloacae 5036 17 - S 0,5 S E.cloacae 5041 17 - S 0,5 S E.coli 5042 18 - S 0,5 S E.cloacae 5063 15 - S 0,5 S C.freundii 5071 17 - S 0,5 S C.freundii 5073 17 - S 0,5 S C.freundii 5077 16 - S 15 Tableau 1 (suite) 0,5 S C.freundii 5079 16,5 - S 1 S C.freundii 5081 18 - S 1 S C.freundii 5086 17,5 - S 0,5 S C.freundii 5088 16 - S 1 S K.pneumoniae 5091 16 - S 1 S C.freundii 5098 17 - S 0,25 S E.coli 5168 17,5 - S 1 S K.pneumoniae 5175 16 - S 0,5 S K.pneumoniae 5185 16 - S 0,5 S E.cloacae 5187 17 - S 0,5 S E.coli 5189 17 - S 0,5 S E.coli 5192 15 - S 0,5 S E.coli 5198 17 - S 1 S E.coli 5207 15 - S 1 S K.pneumoniae 5209 15 - S 0,5 S E.coli 5214 16 - S 1 S K.pneumoniae 5218 13 - S 1 S E.cloacae 5227 17 - S 1 S E.cloacae 5230 17 - S 16 Tableau 1 (suite) 0,25 S E.coli 5239 17 - S 0,5 S E.coli 5248 17 - S 0,5 S E.coli 5255 17 - S 0,5 S E.cloacae 5256 16 - S 0,25 S E.coli 5258 16 - S 0,25 S E.coli 5264 16 - S 1 S E.cloacae 5265 16 - S 0,25 S E.coli 5267 16,5 - S 1 S K.pneumoniae 5272 13,5 - S 1 S E.coli 5275 16 - S 0,5 S E.coli 5288 17 - S 0,25 S E.cloacae 5295 16 - S 0,25 S E.coli 5299 16 - S 0,5 S E.cloacae 5309 17 - S 0,5 S E.cloacae 5346 16 - S 1 S C.freundii 5347 16 - S 1 S E.coli 5350 16 - S 1 S E.cloacae 5351 16 - S 1 S E.cloacae 5352 17 - S 17 Tableau 1 (suite) 0,5 S E.cloacae 5354 17 - S 0,5 S E.cloacae 5356 16 - S 0,25 S E.coli 5359 16 - S 0,25 S C.freundii 5657 16 - S 0,5 S K.pneumoniae 5659 14 - S 0,5 S K.pneumoniae 5660 15 - S 0,5 S K.pneumoniae 5661 15 - S 0,5 S K.pneumoniae 5662 16 - S 1 S K.pneumoniae 5663 15 - S 0,5 S K.pneumoniae 5664 15 - S 0,25 S K.pneumoniae 5665 16 - S 1 S K.pneumoniae 5666 16 - S 0,5 S K.pneumoniae 5667 16 - S 1 S K.pneumoniae 5668 15 - S 0,5 S E.coli 5679 17 - S 1 S E.cloacae 5680 16 - S 0,5 S E.cloacae 5681 15 - S 0,5 S K.pneumoniae 5682 16 - S 0,5 S E.cloacae 5683 17 - S 18 Tableau 1 (suite) 2 S P.aeruginosa A9985 16 - S 2 S P.aeruginosa A9990 13 - S i S P.aeruginosa B0001 16 - S 4 I P.aeruginosa B0005 0,5 - S 2 S P.aeruginosa B0006 13 - S 1 S P.aeruginosa B0007 13,5 - S 1 S P.aeruginosa B0008 13 - S 1 S P.aeruginosa B0009 15 - S 2 S P.aeruginosa B0019 13 - S 1 S P.aeruginosa B0020 15 - S 1 S P.aeruginosa B0022 16 - S 1 S P.aeruginosa B0023 0 1 I 1 S P.aeruginosa B0025 0,5 - S 0,5 S P.aeruginosa B0026 18 - S 2 S P.aeruginosa B0027 14 - S 1 S P.aeruginosa B0029 15 - S 1 S P.aeruginosa B0030 16 - S 2 S P.aeruginosa B0033 13,5 - S 2 S P.aeruginosa B0034 16 - S 19 Tableau 1 (suite) 2 S P.aeruginosa B0035 15 - S 1 S P.aeruginosa B0036 16 - S 1 S P.aeruginosa B0037 17 - S 0,5 S P.aeruginosa B0038 16 - S 1 S P.aeruginosa B0039 16 - S 1 S P.aeruginosa B0040 16 - S 2 S P.aeruginosa B0041 14 - S 4 I P.aeruginosa B0042 0 0,5 I 0,5 S P.aeruginosa B0051 13 - S 1 5 P.aeruginosa B0060 14 - S 2 S P.aeruginosa B0063 14 - S 2 S P.aeruginosa B0066 13 - S 2 S P.aeruginosa B0071 14 - S 2 S P.aeruginosa B0072 14 - S 2 S P.aeruginosa B0079 13,5 - S 2 S P.aeruginosa B0085 14 - S 2 S P.aeruginosa B0086 13 - S 2 S P.aeruginosa B0090 0 0,5 I 2 S P.aeruginosa B0094 15 - S 20 Tableau 1 (suite) 2 S P.aeruginosa B0095 14 - S 2 S P.aeruginosa B0096 13 - S 1 S P.aeruginosa B0098 14 - S 0,5 S P.aeruginosa B0103 18 - S 2 S P.aeruginosa B0105 14 - S 2 S P.aeruginosa B0106 15 - S 2 S P.aeruginosa B0108 15 - S 2 S P.aeruginosa B0111 15 - S 2 S P.aeruginosa B0114 16 - S 1 S P.aeruginosa B0117 16 - S 2 S P.aeruginosa B0118 14 - S 2 S P.aeruginosa B0120 14 - S 2 S P.aeruginosa B0123 14 - S 2 S P.aeruginosa B0124 15 - S 4 I P.aeruginosa B0139 13 - S 4 I P.aeruginosa B0157 13 - S 4 I P.aeruginosa B0160 13 - S 4 I P.aeruginosa B0171 13 - S 0,5 S P.aeruginosa B0173 19 - S 21 Tableau 1 (suite) 4 I P.aeruginosa B0179 0 1 I 2 S P.aeruginosa B0194 14 - S 4 S P.aeruginosa B0209 13 - S 4 S P.aeruginosa B0226 14 - S 4 S P.aeruginosa B0231 13 - S 4 S P.aeruginosa B0244 14 - S 4 S P.aeruginosa B0245 14 - S 4 S P.aeruginosa B0251 14 - S 16 R E.coli A9405/coli/Mutl 0 4 R 16 R E.coli A9320/coli/Mut2 0 5 R 32 R E.coli A9336/coli/Mut3 0 4 R 16 R E.coli A9332/colistine/Mutl 0 5 R 32 R E.coli A9332/colistine/Mut2 0 3 I 32 R E.coli A9336/coli/108/Mutl 0 5 R 32 R K.pneumoniae A6258/coli/Mutl 0 2 I 64 R K.pneumoniae A6261/coli/108/Mutl 0 3 I 32 R E.cloacae A4045/coli/Mut3 0 5 R 32 R C.freundii A4018/colistine/Mutl 0 5 R 0,5 S E.cloacae A9285/colistine/Mutl 15 - S 22 Tableau 1 (suite) 32 R E.coli A9415/colistine/Mul 0 5 R 16 R E.coli A9415/colistine/Mut2 0 1 I 0,5 S E.cloacae A9293/colistine/Mutl 15 - S Le Tableau 1 fait apparaître que certaines souches bactériennes auparavant catégorisées sensibles par l'EUCAST vis-à-vis de la Colistine s'avèrent, selon la présente invention, de sensibilité intermédiaire (P. 5 aeruginosa B0023 et B0090). De plus, certaines souches bactériennes auparavant catégorisées résistantes vis-à-vis de la Colistine s'avèrent, selon la présente invention, de sensibilité intermédiaire (E.coli A9332/colistine/Mut2 et A9415/colistine/Mut2, K.pneumoniae A6258/coli/Mutl et 10 A6261/colistine/108/Mut1). Aussi, des souches bactériennes catégorisées comme ayant une sensibilité intermédiaire selon l'EUCAST sont, selon l'invention, sensibles vis-à-vis de la Colistine : P.aeruginosa B0139, B0157, B0160 et B0171.

15 En particulier, l'invention permet ainsi de séparer avec précision les souches sensibles des souches à sensibilité intermédiaire, qui étaient parfois confondues par les méthodes classiques, et affine donc considérablement le niveau de lecture en comparaison aux 20 méthodes de l'état antérieur de la technique.

Claims

REVENDICATIONS1 - Disque d'antibiotique (11) pour déterminer la sensibilité d'une souche bactérienne vis-à-vis d'un antibiotique, le disque d'antibiotique (11) étant imprégné dudit antibiotique, caractérisé par le fait que le disque d'antibiotique (11) présente au moins une encoche (12) découpée sur son bord, formant une fenêtre de lecture interne de la sensibilité de la souche bactérienne vis-à-vis de l'antibiotique.
2 - Disque d'antibiotique (11) selon la revendication 1, caractérisé par le fait que l'encoche (12) s'étend selon une direction principale radiale par rapport au disque d'antibiotique (11), de préférence s'étend au maximum jusqu'au centre du disque d'antibiotique (11).
3 - Disque d'antibiotique selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé par le fait que 20 l'encoche (12) a une forme sensiblement rectangulaire.
4 - Disque d'antibiotique (11) selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que le diamètre du disque d'antibiotique (11) est d'au moins 9 mm, de préférence est compris entre 12 à 15 mm. 25
5 - Disque d'antibiotique (11) selon la revendication 4, caractérisé par le fait que l'encoche (12) a une forme sensiblement rectangulaire et a une largeur d'au plus 2,5 mm, et une longueur d'au plus 5 mm.
6 - Disque d'antibiotique (11) selon l'une des 30 revendications 1 à 5, caractérisé par le fait que le disque d'antibiotique (11) est imprégné d'un antibiotique à haut poids moléculaire choisi parmi les polymyxines, les peptides tels que les glycopeptides, les lipopeptides etles lipoglycopeptides, ou d'un antibiotique instable choisi parmi les tétracyclines et les peptides.
7 - Utilisation du disque d'antibiotique (11) selon l'une des revendications 1 à 6 pour la détermination 5 in vitro de la sensibilité d'une souche bactérienne vis-à-vis d'un antibiotique.
8 - Procédé de détermination de la sensibilité d'une souche bactérienne vis-à-vis d'un antibiotique, caractérisé par le fait qu'il comprend les étapes 10 consistant à : - ensemencer une boîte (2) contenant un milieu gélosé par la souche bactérienne ; - déposer au moins un disque d'antibiotique (11) tel que défini à l'une des revendications 1 à 6, imprégné 15 dudit antibiotique, sur la surface du milieu gélosé ; - laisser incuber la boîte (2) dans des conditions permettant la croissance de la souche bactérienne ; - visualiser la présence et l'étendue de la croissance de la souche bactérienne à l'intérieur de 20 l'encoche (12) du disque d'antibiotique (11) pour déterminer la sensibilité de la souche bactérienne vis-à-vis de l'antibiotique.
9 - Procédé selon la revendication 8, caractérisé par le fait que : 25 - on classe la souche bactérienne comme sensible vis-à-vis de l'antibiotique lorsque l'étendue de la croissance de la souche bactérienne à l'intérieur de l'encoche (12) est inférieure à une première valeur seuil, notamment est nulle ; 30 - on classe la souche bactérienne comme de sensibilité intermédiaire vis-à-vis de l'antibiotique lorsque l'étendue de la croissance de la souche bactérienne à l'intérieur de l'encoche (12), est comprise entre unepremière valeur seuil et une seconde valeur seuil, ladite seconde valeur seuil étant supérieure à la première valeur seuil et inférieure à l'étendue totale de l'encoche (12); - on classe la souche bactérienne comme résistante 5 vis-à-vis de l'antibiotique lorsque l'étendue de la croissance de la souche bactérienne à l'intérieur de l'encoche (12) est supérieure à la seconde valeur seuil.
10 - Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait qu'on évalue l'étendue de la 10 croissance de la souche bactérienne à l'intérieur de l'encoche (12) par mesure de la distance de croissance maximale de la souche bactérienne à l'intérieur de l'encoche (12).