FR2987743A1

FR2987743A1 - COSMETIC USE OF OAT EXTRACT AS ACTIVATOR OF CASPACE-14

Info

Publication number: FR2987743A1
Application number: FR1200742A
Authority: FR
Inventors: Jean Marie Botto; Nouha Domloge
Original assignee: ISP Investments LLC
Current assignee: ISP Investments LLC
Priority date: 2012-03-12
Filing date: 2012-03-12
Publication date: 2013-09-13
Anticipated expiration: 2032-03-12
Also published as: FR2987743B1; WO2013136174A1

Abstract

L'invention concerne une méthode de soin cosmétique comprenant l'application topique sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps, d'un extrait d'avoine (Avena sativa L.), dans une composition comprenant un milieu physiologiquement acceptable, qui active l'expression de la caspase-14 au niveau cutané.The invention relates to a cosmetic care method comprising the topical application to at least a portion of the skin of the face or body, an oat extract (Avena sativa L.), in a composition comprising a physiologically acceptable medium , which activates the expression of caspase-14 at the cutaneous level.

Description

La présente invention se situe dans le domaine de la cosmétique. Elle se rapporte à une méthode de soin cosmétique comprenant l'application topique sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps, d'un extrait d'avoine (Avena sativa L.), dans une composition comprenant un milieu physiologiquement acceptable, qui active l'expression de la caspase-14 au niveau cutané, et plus particulièrement pour prévenir et/ou réparer les dommages subis par l'ADN des cellules cutanées, en particulier liés au photo-vieillissement. Les signes visibles du vieillissement sont en partie attribués à la prédisposition génétique et en partie aux facteurs environnementaux de l'individu et autres facteurs de stress associés au mode de vie. La principale fonction de la peau, qui est l'organe le plus grand du corps humain, est de protéger l'organisme contre un grand nombre de ces facteurs, notamment extérieurs. A titre d'exemple, on peut citer des facteurs tels que la pollution, la surexposition au soleil, ou encore l'utilisation de produits à caractère irritant tels que les tensioactifs, les conservateurs ou les parfums, ou des facteurs mécaniques, telles que les abrasions, le rasage ou l'épilation. Par pollution, on entend aussi bien la pollution « extérieure » due par exemple aux particules de diesel, à l'ozone ou aux métaux lourds, que la pollution « intérieure » qui peut être due notamment aux émissions de solvants de peintures, de colles, ou de papier-peints (tels que toluène, styrène, xylène ou benzaldéhyde), ou bien encore le tabagisme ou l'exposition à la fumée de cigarette. La sécheresse de l'atmosphère est également une cause importante d'agression cutanée. Ces facteurs aboutissent à une altération de la fonction barrière de la peau, qui se traduit par un inconfort cutané, des phénomènes sensoriels désagréables, tels que des tiraillements ou des démangeaisons, voire des fragilités excessives et des rougeurs.The present invention is in the field of cosmetics. It relates to a method of cosmetic care comprising the topical application to at least a portion of the skin of the face or body, an oat extract (Avena sativa L.), in a composition comprising a physiologically acceptable medium , which activates the expression of caspase-14 at the cutaneous level, and more particularly for preventing and / or repairing damage to cutaneous cell DNA, in particular related to photo-aging. The visible signs of aging are partly attributed to genetic predisposition and partly to the individual's environmental factors and other lifestyle-related stressors. The main function of the skin, which is the largest organ of the human body, is to protect the body against many of these factors, including external factors. By way of example, mention may be made of factors such as pollution, overexposure to the sun, or the use of irritating products such as surfactants, preservatives or perfumes, or mechanical factors, such as abrasions, shaving or hair removal. Pollution is understood to mean both "external" pollution due for example to diesel particles, ozone or heavy metals, and "internal" pollution, which may be due in particular to solvent emissions from paints, glues, or wallpaper (such as toluene, styrene, xylene or benzaldehyde), or even smoking or exposure to cigarette smoke. Dryness of the atmosphere is also an important cause of skin aggression. These factors result in an alteration of the barrier function of the skin, which results in cutaneous discomfort, unpleasant sensory phenomena, such as tightness or itching, or even excessive fragility and redness.

Par ailleurs, ces facteurs participent à l'accélération du vieillissement dit « extrinsèque » de la peau. En effet, le vieillissement extrinsèque est dû à des facteurs environnementaux auxquels est soumis l'organisme tout au long de sa vie, facteurs l'on regroupe sous le terme d'agressions extérieures. Les personnes ayant la peau claire sont plus particulièrement sensibles aux effets nocifs des agressions extérieures, en particulier aux rayonnements ultraviolets du soleil. Cette barrière que représente la peau, est constituée par plusieurs couches composées de cellules de natures diverses qui permettent d'assurer à la peau son renouvellement continuel. Ce processus de renouvellement passe avant tout par un phénomène de desquamation des cellules qui se trouvent à la surface de la peau, phénomène qui doit être compensé par le renouvellement de l'épiderme assuré par les kératinocytes de la couche basale qui se divisent activement et se différencient en cellules de la couche cornée ou cornéocytes. Ces activités de renouvellement, mais aussi de réparation de la peau dans le cas de dommages tels que les rayonnements UV, sont extrêmement contrôlées par un ensemble de voies de signalisation. Parmi ces voies de signalisation, l'une d'entre elles fait intervenir une protéase, la caspase-14. La caspase-14 est un membre unique au sein de la famille des caspases. En effet, contrairement aux autres membres de la famille des caspases qui sont exprimés de façon ubiquitaire, la caspase-14 est uniquement exprimée et active dans l'épiderme et est absente de la plupart des autres tissus adultes (Eckart et al., J Invest. Dermatol., 2000, 44 :425-432). Il a notamment été prouvé le rôle crucial de la caspase-14 dans la formation de la barrière que forme l'épiderme (Denecker et al., Nat. Cell. Biol. 2007, 9 :666-674). En effet, celle-ci est exprimée et exerce son activité protéolytique seulement dans les couches de l'épiderme où ont lieu la différenciation et la « cornification », ainsi que dans le follicule pileux (Lippens et al., Cell Death Differ., 2000, 10 :257-259). De plus, il a été prouvé que la caspase-14 joue un grand rôle en particulier dans les processus de maintien de l'hydratation, de formation des cornéocytes, et de protection contre l'apoptose, notamment lors d'agressions extérieures comme celles dues aux rayonnements UV (Denecker et al., J Cell Biology, 2008, 451-458). L'ensemble de ces conclusions ont, entre autre, conduit à l'élaboration de compositions 20 pharmaceutiques comprenant la caspase-14 en tant qu'agent actif, utilisables plus particulièrement en tant qu'écran solaire (W02008025830). Cependant, il n'existe aucun composé facile à mettre en oeuvre, permettant d'activer la caspase-14, et présentant une activité cosmétique pour prévenir et/ou réparer les dommages au niveau de la peau, principalement liés au photo-vieillissement et, plus 25 particulièrement, protéger la peau contre les rayonnements UV, alors que le besoin de soin innovant de ce type existe. C'est ainsi que la Demanderesse a découvert et mis en évidence qu'un extrait d'avoine (Avena sativa L.), est un bon agent activateur de la caspase-14, et a une action significative sur la protection de la peau contre les agressions extérieures telles que les 30 rayonnements UV, grâce notamment, à une fonction de protection et de réparation de l'ADN des cellules cutanées. L'extrait d'avoine (Avena sativa L.) utilisé selon l'invention offre notamment les avantages suivants : - il active la caspase-14 ; - il permet de conserver l'hydratation de l'épiderme et optimise le rôle de barrière de l'épiderme ; et - il prévient et répare les dommages de l'ADN des cellules de la peau soumises à des rayonnements UV, en particulier UVB.Moreover, these factors contribute to the acceleration of so-called "extrinsic" aging of the skin. Indeed, the extrinsic aging is due to environmental factors to which the organism is subjected throughout its life, factors grouped under the term of external aggressions. People with fair skin are particularly sensitive to the harmful effects of external aggressions, especially ultraviolet radiation from the sun. This barrier represents the skin, consists of several layers of cells of various natures that ensure the skin its continual renewal. This renewal process is primarily due to a phenomenon of desquamation of the cells on the surface of the skin, a phenomenon that must be compensated for by the renewal of the epidermis provided by the keratinocytes of the basal layer which are actively dividing and differentiate into cells of the stratum corneum or corneocytes. These renewal activities, but also skin repair in the case of damage such as UV radiation, are extremely controlled by a set of signaling pathways. Among these signaling pathways, one of them involves a protease, caspase-14. Caspase-14 is a unique member of the caspase family. Indeed, unlike other members of the caspase family that are ubiquitously expressed, caspase-14 is only expressed and active in the epidermis and is absent from most other adult tissues (Eckart et al., J Invest Dermatol., 2000, 44: 425-432). In particular, the crucial role of caspase-14 in forming the barrier formed by the epidermis has been proven (Denecker et al., Nat Cell Biol 2007, 9: 666-674). Indeed, it is expressed and exerts its proteolytic activity only in the layers of the epidermis where differentiation and "cornification" take place, as well as in the hair follicle (Lippens et al., Cell Death Differ., 2000 , 10: 257-259). In addition, it has been proven that caspase-14 plays a large role, particularly in the processes of maintenance of hydration, formation of corneocytes, and protection against apoptosis, especially during external aggressions such as those due to UV radiation (Denecker et al., J. Cell Biology, 2008, 451-458). All these conclusions have, among other things, led to the development of pharmaceutical compositions comprising caspase-14 as an active agent, more particularly usable as a sunscreen (WO2008025830). However, there is no easy compound to use, to activate caspase-14, and having a cosmetic activity to prevent and / or repair damage to the skin, mainly related to photo-aging and, more particularly, protect the skin against UV radiation, while the need for innovative care of this type exists. Thus the Applicant has discovered and demonstrated that an oat extract (Avena sativa L.) is a good activator of caspase-14, and has a significant effect on the protection of the skin against external aggressions such as UV radiation, thanks in particular to a function of protection and repair of the DNA of the cutaneous cells. The oat extract (Avena sativa L.) used according to the invention offers the following advantages in particular: it activates caspase-14; - It helps maintain the hydration of the epidermis and optimizes the barrier role of the epidermis; and - it prevents and repairs DNA damage of skin cells subjected to UV radiation, in particular UVB.

La présente invention a pour objet une méthode de soin cosmétique pour prévenir et/ou réparer les dommages subis par l'ADN des cellules cutanées, comprenant l'application topique sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps, d'un extrait d'avoine (Avena sativa L.), dans une composition comprenant un milieu physiologiquement acceptable, qui active l'expression de la caspase-14 au niveau cutané.The subject of the present invention is a cosmetic care method for preventing and / or repairing damage to cutaneous cell DNA, comprising topical application to at least a portion of the skin of the face or body, oat extract (Avena sativa L.), in a composition comprising a physiologically acceptable medium, which activates the expression of caspase-14 at the cutaneous level.

L'invention et les avantages qui en découlent seront mieux compris à la lecture de la description. L'avoine est une plante annuelle appartenant au genre Avena cultivée comme céréale ou comme fourrage. Les protéines de l'avoine, riches en tryptophane, participent à la production de sérotonine et mélatonine chez l'Homme. Aussi, l'avoine contient de nombreux antioxydants comme les avénanthramides, les tocophérols et les tocotriénols (Bryngelsson et al, 2002). Pour réaliser l'extraction, on peut utiliser la plante entière ou une partie spécifique de l'avoine (feuilles, graines, etc.). Plus particulièrement selon l'invention, on utilise les graines de l'avoine. L'extrait d'avoine (Avena sativa L.) utilisé selon l'invention est préférentiellement un extrait peptidique provenant de l'hydrolyse des protéines extraites des graines d'avoine. Il est possible, pour réaliser l'invention, d'extraire soit les protéines d'abord et de les hydrolyser ensuite, soit d'effectuer l'hydrolyse d'abord sur un extrait brut et de purifier ensuite les composés peptidiques ainsi obtenus. Selon la présente invention, un composé peptidique désigne les fragments de protéines, les peptides et les acides aminés libres présents dans l'extrait issu de l'hydrolyse. Toute méthode d'extraction ou de purification connue de l'homme du métier peut être utilisée afin de préparer l'extrait d'avoine selon l'invention. Préférentiellement, l'extrait d'avoine est obtenu par extraction des protéines, suivie d'une hydrolyse contrôlée qui libère des composés peptidiques.The invention and the advantages thereof will be better understood from reading the description. Oats is an annual plant belonging to the genus Avena grown as a grain or fodder. Oats proteins, rich in tryptophan, participate in the production of serotonin and melatonin in humans. Oats also contain many antioxidants such as avenanthramides, tocopherols and tocotrienols (Bryngelsson et al, 2002). To carry out the extraction, one can use the whole plant or a specific part of the oats (leaves, seeds, etc.). More particularly according to the invention, the seeds of oats are used. The oat extract (Avena sativa L.) used according to the invention is preferably a peptide extract derived from the hydrolysis of proteins extracted from oat seeds. It is possible, in order to carry out the invention, to extract either the proteins first and then hydrolyze them, or to carry out the hydrolysis first on a crude extract and then to purify the peptide compounds thus obtained. According to the present invention, a peptide compound refers to the protein fragments, the peptides and the free amino acids present in the extract resulting from the hydrolysis. Any method of extraction or purification known to those skilled in the art can be used to prepare the oat extract according to the invention. Preferentially, the oat extract is obtained by extraction of the proteins, followed by controlled hydrolysis which releases peptide compounds.

A titre d'exemple, dans une première étape, les graines d'avoine sont broyées à l'aide d'un broyeur à plantes. Avantageusement, la poudre ainsi obtenue est ultérieurement "délipidée" à l'aide d'un solvant organique classique, comme par exemple un alcool, l'hexane ou l'acétone.For example, in a first step, the oat seeds are crushed using a plant grinder. Advantageously, the powder thus obtained is subsequently "delipidated" with the aid of a conventional organic solvent, such as, for example, an alcohol, hexane or acetone.

On réalise ensuite l'extraction des protéines de l'avoine suivant le procédé classique (Osborne, 1924) modifié ; le broyat de graines d'avoine est mis en suspension dans une solution alcaline contenant un produit adsorbant de type polyvinylpolypyrrolidone (PVPP) insoluble (0,01 - 20%) ; en effet, il a été observé que les opérations d'hydrolyses et de purifications ultérieures étaient facilitées par ce moyen. En particulier, la concentration en substances de type phénolique, interagissant avec les protéines, se trouve nettement réduite. Les protéines peuvent ensuite être précipitées en faisant varier la force ionique en acidifiant le milieu, ce qui permet d'éliminer les composants solubles et les acides nucléiques. Le précipité est ensuite lavé à l'aide d'un solvant organique tel que, par exemple, l'éthanol ou le méthanol puis le solvant est évaporé par séchage sous vide. Le précipité riche en protéines est remis en solution dans l'eau ou un autre solvant et constitue alors une forme plus purifiée de l'hydrolysat. L'extraction peut également être réalisée en milieu neutre ou acide toujours en présence de polyvinylpolypyrrolidone. Après une étape de filtration, l'étape de précipitation s'effectue alors à l'aide d'un agent classique de précipitation tel que les sels (chlorure de sodium, sulfate d'ammonium) ou un solvant organique (alcool, acétone). Le précipité obtenu peut être séparé des agents de précipitation par dialyse après remise en solution dans de l'eau ou un autre solvant. La fraction soluble, contenant les protéines, des glucides et éventuellement des lipides, est recueillie après des étapes de centrifugation et de filtration. Cette solution brute est ensuite hydrolysée dans des conditions ménagées pour générer des composés peptidiques solubles. L'hydrolyse se définit comme étant une réaction chimique impliquant le clivage d'une molécule par de l'eau, cette réaction pouvant se faire en milieu neutre, acide ou basique.The oat proteins are then extracted by the conventional method (Osborne, 1924) modified; the crushed oat seed is suspended in an alkaline solution containing an insoluble polyvinylpolypyrrolidone adsorbent material (PVPP) (0.01-20%); in fact, it has been observed that the hydrolysis and subsequent purification operations are facilitated by this means. In particular, the concentration of phenolic-type substances, interacting with proteins, is significantly reduced. The proteins can then be precipitated by varying the ionic strength by acidifying the medium, thereby eliminating soluble components and nucleic acids. The precipitate is then washed with an organic solvent such as, for example, ethanol or methanol and the solvent is evaporated by drying in vacuo. The protein-rich precipitate is dissolved in water or other solvent and is then a more purified form of the hydrolyzate. The extraction can also be carried out in neutral or acidic medium always in the presence of polyvinylpolypyrrolidone. After a filtration step, the precipitation step is then carried out using a conventional precipitation agent such as salts (sodium chloride, ammonium sulfate) or an organic solvent (alcohol, acetone). The precipitate obtained can be separated from the precipitating agents by dialysis after redissolving in water or another solvent. The soluble fraction, containing proteins, carbohydrates and possibly lipids, is collected after centrifugation and filtration steps. This crude solution is then hydrolyzed under mild conditions to generate soluble peptide compounds. Hydrolysis is defined as a chemical reaction involving the cleavage of a molecule by water, this reaction being possible in a neutral, acidic or basic medium.

Selon l'invention, l'hydrolyse est réalisée par voie chimique et/ou de façon avantageuse par des enzymes protéolytiques. On peut alors citer l'utilisation des endoprotéases d'origine végétale (papaïne, bromelaïne, ficine) et de micro-organismes (Aspergillus, Rhizopus, Bacillus, etc.). Pour les mêmes raisons que précédemment, c'est-à-dire l'élimination des substances polyphénoliques, une quantité de polyvinylpolypyrrolidone est additionnée au milieu réactionnel lors de cette étape d'hydrolyse ménagée. Après filtration, la solution obtenue constitue une première forme avantageuse d'extrait peptidique d'avoine selon l'invention.According to the invention, the hydrolysis is carried out chemically and / or advantageously by proteolytic enzymes. We can then mention the use of endoproteases of plant origin (papain, bromelain, ficin) and microorganisms (Aspergillus, Rhizopus, Bacillus, etc.). For the same reasons as above, that is to say the removal of the polyphenol substances, an amount of polyvinylpolypyrrolidone is added to the reaction medium during this mild hydrolysis step. After filtration, the solution obtained is a first advantageous form of oat peptide extract according to the invention.

L'extrait peptidique d'avoine peut être encore purifié afin de sélectionner les poids moléculaires et la nature des peptides générés. Le fractionnement peut s'effectuer avantageusement par ultrafiltration et/ ou par une méthode de type chromatographique. L'utilisation d'extraits peptidiques, et en particulier d'extraits peptidiques de bas poids 5 moléculaires, présente de nombreux avantages en cosmétique. Outre le fait de générer des composés peptidiques qui ne préexistaient pas dans le mélange protéique de départ extrait, l'hydrolyse et la purification permettent d'obtenir un mélange de composés peptidiques plus stables, plus facilement standardisables et ne provoquant pas de réactions allergiques en cosmétique. 10 L'extrait peptidique d'avoine préféré selon l'invention comprend essentiellement des composés peptidiques de bas poids moléculaires, c'est-à-dire ne comprend avantageusement que des peptides de bas poids moléculaire. Préférentiellement, il comprend essentiellement des composés peptidiques de poids moléculaire inférieur à 5 kDa, c'est-à-dire avantageusement l'extrait peptidique d'avoine selon l'invention ne 15 comprend que des peptides dont le poids moléculaire est inférieur à 5 kDa. L'extrait d'avoine obtenu selon l'invention est analysé qualitativement et quantitativement pour ses caractéristiques physico-chimiques et sa teneur en composés peptidiques ; les peptides, acides aminés et fragments de protéines sont dosés selon les techniques classiques, bien connues de l'homme du métier. 20 Ainsi, selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait d'avoine a un pH compris entre 4 et 7, et préférentiellement entre 5 et 6, et comprend entre 0,5 et 8 g/1 de composés peptidiques en poids d'extrait sec et entre 0,5 et 5 g/1 de sucres en poids d'extrait sec, préférentiellement l'extrait d'avoine selon l'invention est dilué pour contenir entre 1,5 et 3,5 g/1 de composés peptidiques en poids d'extrait sec et entre 2 et 5 g/1 de 25 sucres en poids d'extrait sec. L'extrait d'avoine selon l'invention, et plus particulièrement l'extrait peptidique d'avoine, active la caspase-14 après application au niveau cutané. Selon l'invention, l'extrait d'avoine augmente la quantité de caspase-14, soit par augmentation de la synthèse protéique de celle-ci (par modulation directe ou indirecte de l'expression génique), soit par 30 d'autres processus biologiques tels que la stabilisation des transcrits d'ARN messager. Ainsi, l'objet de l'invention se rapporte à une méthode de soin cosmétique pour prévenir et/ou réparer les dommages subis par l'ADN des cellules cutanées, comprenant l'application topique sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps, d'un extrait d'avoine selon l'invention, dans une composition comprenant un milieu physiologiquement acceptable, qui active l'expression de la caspase-14 au niveau cutané. Les dommages subis par l'ADN cellulaire chez l'Homme se réparent tous les jours, mais pas tous. Les dégâts non réparés vont alors s'accumuler au fil des ans. Il est ainsi essentiel de prévenir ces dommages et de les réparer. Par prévenir les dommages subis par l'ADN des cellules cutanées, on désigne le rôle protecteur de l'extrait d'avoine selon l'invention au niveau des cellules de la peau pour limiter l'apparition de dommages au niveau de l'ADN. Par réparer les dommages subis par l'ADN des cellules cutanées, on désigne le rôle 10 réparateur de l'extrait d'avoine selon l'invention au niveau de l'endommagement préalablement subi par les cellules de la peau. Les cellules cutanées selon l'invention désignent les cellules de l'épiderme et du derme, et en particulier les kératinocytes. Les dommages subis par l'ADN des cellules cutanées selon l'invention désignent les 15 dommages dus à des réactions photochimiques entre les bases de l'ADN, comme par exemple la formation de dimères pyrimidiques de cyclobutane ou encore tout autre dommage subi par l'ADN lors d'agressions extérieures que peut produire l'environnement. A titre d'exemple, on peut citer des agressions telles que la pollution, les rayonnements UV, en particulier UVB, liés par exemple à une surexposition au soleil, ou encore les 20 produits à caractère irritant tels que les tensioactifs, les conservateurs ou les parfums. La méthode de soin cosmétique selon l'invention vise préférentiellement à prévenir et/ou réparer les dommages subis par l'ADN des cellules cutanées qui sont liés au photo-vieillissement et induits par des rayonnements UV, en particulier les UVB, et ainsi prévenir et/ou retarder l'apparition des signes cutanés du photo-vieillissement. 25 Les dommages non réparés ainsi subis par l'ADN des cellules cutanées liés au photo- vieillissement, entrainent un vieillissement prématuré de la peau, qui ne deviennent souvent visibles que lorsque la personne a déjà passé le cap des 20 ans mais qui s'accentuent avec le temps. Ils prennent principalement la forme de rides, notamment de ridules autour de la 30 bouche et des yeux, et d'hyperpigmentation, notamment sous forme de taches brunes bénignes qui peuvent être disséminées sur le corps et en particulier sur le front, le nez et les joues.The oat peptide extract may be further purified to select the molecular weights and the nature of the peptides generated. The fractionation can advantageously be carried out by ultrafiltration and / or by a chromatographic type method. The use of peptide extracts, and in particular of low molecular weight peptide extracts, has many advantages in cosmetics. In addition to generating peptide compounds that did not pre-exist in the extracted starting protein mixture, hydrolysis and purification make it possible to obtain a mixture of peptide compounds that are more stable, more easily standardized and do not cause allergic reactions in cosmetics. . The preferred oat peptide extract according to the invention essentially comprises peptide compounds of low molecular weight, that is to say advantageously comprises only peptides of low molecular weight. Preferably, it essentially comprises peptide compounds with a molecular weight of less than 5 kDa, that is to say advantageously the oat peptide extract according to the invention comprises only peptides whose molecular weight is less than 5 kDa. . The oat extract obtained according to the invention is analyzed qualitatively and quantitatively for its physico-chemical characteristics and its content of peptide compounds; the peptides, amino acids and protein fragments are determined according to standard techniques, which are well known to those skilled in the art. Thus, according to an advantageous embodiment of the invention, the oat extract has a pH of between 4 and 7, and preferably between 5 and 6, and comprises between 0.5 and 8 g / l of peptide compounds. by weight of dry extract and between 0.5 and 5 g / l of sugar by weight of dry extract, preferably the oat extract according to the invention is diluted to contain between 1.5 and 3.5 g / l. 1 of peptide compounds by weight of solids and between 2 and 5 g / 1 of sugar by weight of solids. The oat extract according to the invention, and more particularly the oat peptide extract, activates caspase-14 after application to the skin. According to the invention, the oat extract increases the amount of caspase-14, either by increasing the protein synthesis thereof (by direct or indirect modulation of gene expression), or by other processes. such as the stabilization of messenger RNA transcripts. Thus, the subject of the invention relates to a cosmetic care method for preventing and / or repairing damage to dna of cutaneous cells, including topical application to at least a portion of the skin of the face or of the body, an oat extract according to the invention, in a composition comprising a physiologically acceptable medium, which activates the expression of caspase-14 at the cutaneous level. Damage to cellular DNA in humans is repaired every day, but not all. Unrepaired damage will accumulate over time. It is therefore essential to prevent this damage and to repair it. Preventing damage to the skin cells DNA is the protective role of the oat extract according to the invention in the cells of the skin to limit the occurrence of damage to the DNA. By repairing the damage to the DNA of the cutaneous cells, the repairing role of the oat extract according to the invention in terms of the damage previously suffered by the skin cells is designated. The cutaneous cells according to the invention designate the cells of the epidermis and of the dermis, and in particular the keratinocytes. Damage to the cutaneous cell DNA according to the invention refers to damage due to photochemical reactions between the bases of the DNA, such as for example the formation of cyclobutane pyrimidine dimers or any other damage suffered by the DNA during external aggressions that can produce the environment. By way of example, mention may be made of aggressions such as pollution, UV radiation, in particular UVB radiation, linked for example to overexposure to the sun, or irritating products such as surfactants, preservatives or perfumes. The cosmetic care method according to the invention is preferably aimed at preventing and / or repairing damage to the DNA of cutaneous cells which are linked to photoaging and induced by UV radiation, in particular UVB, and thus prevent and / or delay the appearance of cutaneous signs of photo-aging. The unrepaired damage thus suffered by the DNA of cutaneous cells linked to photoaging, causes premature aging of the skin, which often becomes visible only when the person has already passed the age of 20 but which is becoming more pronounced. with time. They mainly take the form of wrinkles, in particular fine lines around the mouth and eyes, and hyperpigmentation, especially in the form of benign brown spots that can be disseminated on the body and in particular on the forehead, the nose and the eyes. play.

Dans le cadre des méthodes de soin cosmétique selon l'invention, la composition comprenant l'extrait d'avoine et un milieu physiologiquement acceptable est appliquée topiquement sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps. Un milieu physiologiquement acceptable selon l'invention désigne en particulier des 5 milieux qui conviennent à une utilisation en contact avec la peau ou les phanères humains, sans risque par exemple de toxicité, d'incompatibilité, d'instabilité, ou encore de réponse allergique. A cet effet, l'une quelconque des formes plus ou moins purifiées de l'extrait d'avoine selon l'invention est alors solubilisée dans de l'eau ou dans tout mélange contenant de 10 l'eau, puis stérilisée par ultrafiltration. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait d'avoine est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants physiologiquement acceptables, classiquement utilisés par l'homme du métier, comme l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou 15 propoxylés, les polyols cycliques, la vaseline, une huile végétale ou tout mélange de ces solvants. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait d'avoine selon l'invention est solubilisé dans un vecteur cosmétique comme les liposomes, ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, 20 et plus généralement solubilisé dans, ou fixé sur, tout vecteur physiologiquement adapté. De manière préférée, la composition selon l'invention destinée à être appliquée de façon topique sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps se présente sous forme de crème, émulsion huile-dans-eau, ou eau-dans-huile ou émulsion multiple, solution, suspension, microémulsion, gel aqueux ou anhydre, sérum, ou encore de 25 dispersion de vésicules, de patch, de spray, d'onguent, de pommade, de lotion, de colloïde, de lait, de lotion, de stick ou de poudre. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait d'avoine selon l'invention est présent dans la composition à une concentration comprise entre 0,0001% à 20% environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,05% et 5% 30 environ, encore plus préférentiellement à une concentration comprise entre 1% et 3% environ par rapport au poids total de la composition finale. Encore plus préférentiellement, la composition selon l'invention contient en outre, au moins un autre agent actif, préférentiellement un agent favorisant l'action de l'extrait d'avoine selon l'invention. On peut citer, de manière non limitative, les classes d'ingrédients suivantes : d'autres agents actifs peptidiques, des extraits de végétaux, des agents cicatrisants, anti-âge, antirides, apaisants, anti-radicalaires, anti-UV, des agents stimulant la synthèse de macromolécules dermiques ou le métabolisme énergétique, des agents hydratants, antibactériens, antifongiques, anti-inflammatoires, anesthésiques, des agents modulants la différenciation, la pigmentation ou la dépigmentation cutanée, des agents stimulants la pousse des ongles ou des cheveux etc. Préférentiellement, on utilisera un agent présentant une activité dans le domaine des antirides, tel qu'un agent antiradicalaire ou antioxydant, ou un agent stimulant la synthèse de macromolécules dermiques, ou encore un agent stimulant le métabolisme énergétique. Plus particulièrement, l'agent actif est choisi parmi les vitamines, les phytostérols, les flavonoïdes, la DHEA et/ou un de ses précurseurs ou un de ses dérivés chimiques ou biologiques, un inhibiteur de métalloprotéinase, ou un rétinoïde. En outre, des additifs tels que des solvants, des diluants, des colorants, des filtres solaires, des agents auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des absorbeurs d'odeurs, des agents épaississants, émulsifiants, humectants, émollients, des parfums, des antioxydants, des agents filmogènes, chélatants, séquestrants, conditionnants. peuvent être ajoutés à la composition selon l'invention. Dans tous les cas, l'homme du métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition comprenant l'extrait d'avoine selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, être compris entre 0,01% et 20% du poids total de la composition. Lorsque la composition selon l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5% à 80% en poids et de préférence de 5% à 50% en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés dans une proportion allant de 0,3% à 30% en poids par rapport au poids total de la composition. Enfin, dans un mode préférentiel de réalisation des méthodes de soin cosmétique selon l'invention, la composition est appliquée le matin en tant que soin anti-âge de jour et/ou le soir au coucher en tant que soin réparateur de nuit. En cas d'application en soin de jour, la composition permet en particulier une protection de la peau vis-à-vis des agressions de l'environnement, notamment les rayonnements UV, en particulier UVB, en limitant l'apparition de dommages au niveau de l'ADN des cellules cutanées. En tant que soin de nuit, la composition joue plus particulièrement un rôle de réparation des éventuels dommages que la peau aura subie lors de la journée. Dans un autre mode de réalisation avantageux des méthodes de soin cosmétique selon l'invention, la composition est appliquée avant une exposition de la peau au soleil, et constitue donc un excellent soin avant-soleil permettant en particulier de prévenir les dommages au niveau de l'ADN des cellules cutanées, et/ou après une exposition au soleil, en tant que soin après-soleil afin de réparer plus particulièrement les éventuels dommages subis par la peau au niveau de l'ADN. Les exemples suivants décrivent et démontrent l'efficacité d'un extrait d'avoine tel que décrit selon l'invention mais ne doivent pas être interprétés comme une limitation de la présente invention. Exemple 1 : préparation d'un extrait peptidique d'avoine (Avenu sativa L.) Les graines d'avoine (Avena sativa L.) sont mises en solution dans 10 volumes d'eau en présence de 2% de POLYCLAR® 10 (polyvinylpyrrolidone - PVPP - insoluble). Le mélange est ajusté à un pH compris entre 6 et 8 avec une solution aqueuse de soude 1 M. Une précipitation en milieu acide est ensuite réalisée. Le culot est remis en solution et après ajustement du pH, de la bromélaïne à 2% est ajoutée dans le milieu réactionnel. L'hydrolyse est obtenue après 2 heures d'agitation à 50°C. On procède ensuite à l'inactivation de l'enzyme par chauffage de la solution à 80°C pendant 2 heures. Après centrifugation, la solution aqueuse surnageante correspondant à un hydrolysat brut d'avoine est récupérée. Le procédé de purification de l'hydrolysat brut commence par des filtrations successives à l'aide de filtres-plaques Seitz-Orion de porosité décroissante (jusqu'à 0,2 jam) afin d'obtenir une solution beige brillante et limpide, qualifié d'hydrolysat.As part of the cosmetic care methods according to the invention, the composition comprising oat extract and a physiologically acceptable medium is applied topically to at least a portion of the skin of the face or body. A physiologically acceptable medium according to the invention refers in particular to media which are suitable for use in contact with human skin or integuments, without risk, for example, of toxicity, incompatibility, instability or allergic response. For this purpose, any of the more or less purified forms of the oat extract according to the invention is then solubilized in water or in any mixture containing water, and then sterilized by ultrafiltration. According to an advantageous embodiment of the invention, the oat extract is first solubilized in one or more physiologically acceptable solvents, conventionally used by the person skilled in the art, such as water, glycerol, ethanol, propylene glycol, butylene glycol, dipropylene glycol, ethoxylated or propoxylated diglycols, cyclic polyols, petroleum jelly, a vegetable oil or any mixture of these solvents. According to another advantageous embodiment of the invention, the oat extract according to the invention is solubilized in a cosmetic vector such as liposomes, or adsorbed on powdery organic polymers, mineral supports such as talcs and bentonites, and more generally solubilized in, or attached to, any physiologically adapted vector. Preferably, the composition according to the invention intended to be applied topically to at least a part of the skin of the face or the body is in the form of cream, oil-in-water emulsion, or water-in-oil or multiple emulsion, solution, suspension, microemulsion, aqueous or anhydrous gel, serum, or dispersion of vesicles, patch, spray, ointment, ointment, lotion, colloid, milk, lotion, stick or powder. According to an advantageous embodiment of the invention, the oat extract according to the invention is present in the composition at a concentration of between approximately 0.0001% and 20%, and preferably at a concentration of between 0.05 and 0.05%. about 5% and 5%, more preferably at a concentration of about 1% to about 3% based on the total weight of the final composition. Even more preferentially, the composition according to the invention further contains at least one other active agent, preferably an agent promoting the action of the oat extract according to the invention. There may be mentioned, in a non-limiting manner, the following classes of ingredients: other peptide active agents, plant extracts, cicatrizing, anti-aging, anti-wrinkle, soothing, anti-radical, anti-UV, agents stimulating the synthesis of dermal macromolecules or energy metabolism, moisturizing, antibacterial, antifungal, anti-inflammatory, anesthetic agents, modulating agents differentiation, pigmentation or skin depigmentation, stimulating agents the growth of nails or hair etc. Preferably, an agent having an activity in the field of anti-wrinkles, such as an antiradical or antioxidant agent, or an agent stimulating the synthesis of dermal macromolecules, or an agent stimulating the energy metabolism, will be used. More particularly, the active agent is chosen from vitamins, phytosterols, flavonoids, DHEA and / or one of its precursors or one of its chemical or biological derivatives, a metalloproteinase inhibitor, or a retinoid. In addition, additives such as solvents, diluents, dyes, sunscreens, self-tanning agents, pigments, fillers, preservatives, odor absorbers, thickeners, emulsifiers, humectants, emollients , perfumes, antioxidants, film-forming agents, chelating agents, sequestering agents, conditioning agents. may be added to the composition according to the invention. In all cases, those skilled in the art will ensure that these adjuvants and their proportions are chosen in such a way as not to impair the desirable properties of the composition comprising the oat extract according to the invention. These adjuvants may, for example, be between 0.01% and 20% of the total weight of the composition. When the composition according to the invention is an emulsion, the fatty phase may represent from 5% to 80% by weight and preferably from 5% to 50% by weight relative to the total weight of the composition. The emulsifiers and co-emulsifiers used in the composition will be chosen from those conventionally used in the field under consideration. For example, they may be used in a proportion ranging from 0.3% to 30% by weight relative to the total weight of the composition. Finally, in a preferred embodiment of the cosmetic care methods according to the invention, the composition is applied in the morning as anti-aging day care and / or bedtime evening as a night repairing care. In case of application in day care, the composition allows in particular a protection of the skin vis-à-vis environmental aggressions, including UV radiation, in particular UVB, limiting the occurrence of damage at the level of the DNA of the cutaneous cells. As a night care, the composition plays a role in repairing any damage that the skin has suffered during the day. In another advantageous embodiment of the cosmetic care methods according to the invention, the composition is applied before an exposure of the skin to the sun, and is therefore an excellent sun care, in particular to prevent damage to the skin. Cutaneous cells DNA, and / or after exposure to the sun, as an after-sun care to specifically repair any damage to the skin at the DNA level. The following examples describe and demonstrate the efficacy of an oat extract as described according to the invention but should not be construed as a limitation of the present invention. Example 1 Preparation of a Peptide Extract of Oats (Avenu Sativa L.) The oat seeds (Avena sativa L.) are dissolved in 10 volumes of water in the presence of 2% of POLYCLAR® 10 (polyvinylpyrrolidone) - PVPP - insoluble). The mixture is adjusted to a pH of between 6 and 8 with a 1M aqueous sodium hydroxide solution. Precipitation in an acid medium is then carried out. The pellet is put back into solution and after adjusting the pH, 2% bromelain is added to the reaction medium. The hydrolysis is obtained after 2 hours of stirring at 50 ° C. The enzyme is then inactivated by heating the solution at 80 ° C for 2 hours. After centrifugation, the supernatant aqueous solution corresponding to a crude oat hydrolyzate is recovered. The purification process of the crude hydrolyzate begins with successive filtrations using Seitz-Orion plate filters of decreasing porosity (up to 0.2 jam) in order to obtain a bright and clear beige solution, qualified as hydrolyzate.

A cette étape, l'hydrolysat d'avoine ainsi obtenu est caractérisé par un extrait sec titrant de 10 à 15 g/kg, un taux de protéines de 8 à 12 g/1 et un taux de sucres de 2 à 4 g/l. La nature protéique de cet hydrolysat est mise en évidence après analyse par électrophorèse sur gel de polyacrylamide NuPAGE® Bis-Tris Pre-cast (Invitrogen). L'hydrolysat protéique d'avoine est chauffé à 70°C pendant 10 minutes dans des conditions réductrices dénaturantes dans un tampon de préparation d'échantillon NuPAGE® LDS. Une solution de NuPAGE® Antioxydant est ajoutée dans la cuve intérieure (cathode) pour éviter que les protéines réduites ne se réoxydent durant l'électrophorèse. La migration des protéines est réalisée dans du tampon de migration NuPAGE® MES avec le standard SeeBlue Plus2 comme marqueur de poids moléculaire. La coloration des protéines est effectuée à l'aide de Bleu de Coomassie® R-250. Dans ces conditions, on observe que les protéines obtenues ont un poids moléculaire inférieur à 40 kDa.At this stage, the oat hydrolyzate thus obtained is characterized by a solids content of 10 to 15 g / kg, a protein content of 8 to 12 g / l and a sugar content of 2 to 4 g / l. . The protein nature of this hydrolyzate is demonstrated after analysis by NuPAGE® Bis-Tris Pre-cast polyacrylamide gel electrophoresis (Invitrogen). The oat protein hydrolyzate is heated at 70 ° C for 10 minutes under denaturing reducing conditions in NuPAGE® LDS sample preparation buffer. A solution of NuPAGE® Antioxidant is added to the inner chamber (cathode) to prevent the reduced proteins from reoxidizing during electrophoresis. Protein migration is performed in NuPAGE® MES Migration Buffer with the SeeBlue Plus2 standard as a molecular weight marker. Protein staining is performed using Coomassie® Blue R-250. Under these conditions, it is observed that the proteins obtained have a molecular weight of less than 40 kDa.

Cet hydrolysat est ensuite purifié afin d'éliminer les protéines de poids moléculaire supérieur à 10 kDa, à l'aide de filtrations à flux tangentiel. Pour cela, l'hydrolysat est pompé sous pression à travers un support Pellicon® équipée de cassette Pellicon® 2 Biomax 10 kDa. Le filtrat récupéré est encore élué à travers une cassette Pellicon® 2 Biomax 5 kDa. En fin de purification, on obtient un hydrolysat peptidique brillant et limpide comprenant uniquement des composés peptidiques de poids moléculaire inférieur à 5 kDa. On procède ensuite à une phase de dilution afin d'obtenir un hydrolysat peptidique caractérisé par une teneur en composés peptidiques de 1,5 à 3,5 g/l. Cet hydrolysat peptidique correspond à l'extrait d'avoine actif préféré selon l'invention.This hydrolyzate is then purified to remove proteins of molecular weight greater than 10 kDa, using tangential flow filtrations. For this, the hydrolyzate is pumped under pressure through a Pellicon® support equipped with Pellicon® 2 Biomax 10 kDa cassette. The filtrate recovered is further eluted through a Pellicon® 2 Biomax 5 kDa cassette. At the end of purification, a bright and clear peptide hydrolyzate comprising only peptide compounds with a molecular weight of less than 5 kDa is obtained. A dilution phase is then carried out in order to obtain a peptide hydrolyzate characterized by a content of peptide compounds of 1.5 to 3.5 g / l. This peptide hydrolyzate corresponds to the preferred active oat extract according to the invention.

Exemple 2 : étude de l'expression de la caspase-14 dans des kératinocytes humains normaux, en présence de l'extrait peptidique d'avoine selon l'exemple 1 Le but de cette étude est de déterminer l'expression de la caspase-14 dans des kératinocytes humains normaux traités ou non à l'aide d'un extrait peptidique d'avoine selon l'invention.EXAMPLE 2 Study of the Expression of Caspase-14 in Normal Human Keratinocytes in the Presence of the Peptide Oat Extract According to Example 1 The aim of this study is to determine the expression of caspase-14 in normal human keratinocytes treated or not with the aid of a peptide oat extract according to the invention.

Protocole : Des kératinocytes humains normaux, KHN, en culture sont traités avec l'extrait peptidique selon l'exemple 1 à 1 % ou à 3 % pendant 24 h. Les cellules sont ensuite lavées, fixées au paraformaldéhyde 3,7% avec triton 0,1% en présence de BSA (dilué au 1/100ième). Les cellules sont incubées en présence d'un anticorps monoclonal de souris spécifique de la caspase-14 (BD Biosciences), puis d'un anticorps secondaire, couplé à un marqueur fluorescent. Les cellules sont alors examinées au microscope à Epi-fluorescence (Nikon Eclipse E600 microscope). Résultats : On observe une augmentation de l'intensité lumineuse dans les cellules KHN traitées avec l'extrait peptidique par rapport à la condition contrôle. Cette augmentation de fluorescence est dose-dépendante puisqu'elle est plus importante lorsque l'extrait peptidique selon l'exemple 1 est dosé à 3 % qu'à 1 %. Par conséquent, l'extrait peptidique d'avoine selon l'invention active l'expression de la caspase-14 dans les KHN.Protocol: Normal human keratinocytes, KHN, in culture are treated with the peptide extract according to Example 1 at 1% or 3% for 24 h. The cells are then washed, fixed with 3.7% paraformaldehyde with 0.1% triton in the presence of BSA (diluted 1/100). The cells are incubated in the presence of a mouse monoclonal antibody specific for caspase-14 (BD Biosciences), and then a secondary antibody, coupled to a fluorescent marker. The cells are then examined under an Epi-fluorescence microscope (Nikon Eclipse E600 microscope). Results: An increase in light intensity is observed in the KHN cells treated with the peptide extract compared with the control condition. This increase in fluorescence is dose-dependent since it is greater when the peptide extract according to Example 1 is assayed at 3% than at 1%. Therefore, the oat peptide extract according to the invention activates the expression of caspase-14 in KHNs.

Exemple 3 : étude de l'expression de la caspase-14 par siRNA dans des KHN traités avec l'extrait peptidique selon l'exemple 1 Afin de quantifier l'efficacité d'un extrait peptidique d'avoine selon l'invention sur la surexpression de la caspase-14 dans une population de KHN, le gène codant pour la caspase-14 a été « éteint » par utilisation de la technique du siRNA. Protocole : Des cellules KHN sont mises en culture en plaque 6 puits jusqu'à une confluence de 60 puis traitées avec 20 !..tt d'extrait peptidique selon l'exemple 1 à 1 %. Ensuite, 100 IaL d'un mélange préalablement réalisé contenant le siRNA de la caspase-14 et l'agent transfectant sont rajoutés délicatement au goutte à goutte, puits par puits. La plaque de culture cellulaire est incubée à 37°C et à 5 % en CO2 pendant 72 h. Le milieu de culture est renouvelé tous les 2 jours. Quatre conditions sont mises en place : - condition 1 : contrôle sans siRNA et sans extrait peptidique ; - condition 2 : cellules transfectées avec le siRNA, sans extrait peptidique ; - condition 3 : cellules non transfectées mais traitées avec l'extrait peptidique ; - condition 4: cellules transfectées avec le siRNA et traitées avec l'extrait peptidique. La quantification de l'expression de la caspase-14 est observée par la technique classique d'immunotransfert (Western Blot) réalisée à l'aide d'un anticorps anti-caspase- 14 et selon un protocole classique. Afin d'analyser la compensation apportée par le peptide dans les KHN ayant été transfectés avec le siRNA, la comparaison sera faite par rapport à des KHN non traités et dont le gène n'a pas été éteint par siRNA. Résultats : Entre les conditions 1 et 3, on constate que l'ajout de l'extrait peptidique selon l'exemple 1 a entraîné une augmentation d'environ 1/5 de l'expression de la protéine caspase-14 par rapport au contrôle. Entre les conditions 1 et 2, on constate bien l'effet du siRNA sur l'expression de la protéine caspase-14 : en effet, celle-ci est en baisse d'environ 1/3. Par contre, l'ajout de l'extrait peptidique selon l'exemple 1 aux cellules transfectées avec le siRNA permet de restaurer l'expression de la caspase-14, et la baisse due à la présence de siRNA n'est plus que d'environ 1/6 par rapport à la condition contrôle. En conclusion, l'extrait peptidique d'avoine selon l'invention a permis d'augmenter l'expression de la caspase-14 dans les KHN.EXAMPLE 3 Study of the Expression of Caspase-14 by siRNA in KHNs Treated with the Peptide Extract According to Example 1 In order to Quantify the Efficacy of a Peptide Oat Extract According to the Invention on Overexpression of caspase-14 in a KHN population, the gene coding for caspase-14 was "extinguished" using the siRNA technique. Protocol: KHN cells are cultured in 6-well plate to a confluence of 60 and then treated with 20 μl of peptide extract according to Example 1 at 1%. Then, 100 μl of a pre-made mixture containing caspase-14 siRNA and the transfecting agent are gently added dropwise, well per well. The cell culture plate is incubated at 37 ° C and 5% CO 2 for 72 h. The culture medium is renewed every 2 days. Four conditions are put in place: - condition 1: control without siRNA and without peptide extract; condition 2: cells transfected with siRNA, without peptide extract; - condition 3: non-transfected cells but treated with the peptide extract; condition 4: cells transfected with siRNA and treated with the peptide extract. Quantification of the expression of caspase-14 is observed by the standard immunoblotting technique (Western blot) carried out using an anti-caspase-14 antibody and according to a conventional protocol. In order to analyze the compensation provided by the peptide in the siRNA-transfected KHNs, the comparison will be made with untreated KHNs whose gene has not been extinguished by siRNA. Results: Between conditions 1 and 3, it is found that the addition of the peptide extract according to example 1 resulted in an increase of about 1/5 of the expression of the protein caspase-14 compared to the control. Between conditions 1 and 2, we can see the effect of siRNA on the expression of the protein caspase-14: indeed, it is down by about 1/3. On the other hand, the addition of the peptide extract according to Example 1 to the cells transfected with siRNA makes it possible to restore the expression of caspase-14, and the decrease due to the presence of siRNA is no longer than about 1/6 compared to the control condition. In conclusion, the peptide extract of oats according to the invention has made it possible to increase the expression of caspase-14 in KHNs.

Exemple 4 : test comètes sur des cellules KHN Le test comètes est un test qui permet de quantifier les dommages causés à l'ADN au niveau cellulaire. Protocole : Dans ce but, des cellules KHN sont : - condition a : mises en culture pendant 24 h avec l'extrait peptidique selon l'exemple 1 à une concentration de 1 % et de 3 %, puis irradiées avec des rayonnements UVB à raison de 20 mJ/ cm2, afin de constater un effet protecteur de l'actif peptidique selon l'invention sur les cellules ; - condition b : irradiées dans un premier temps avec des rayonnements UVB à raison de 20 mJ/ cm2, puis traitées pendant 24 h avec l'extrait peptidique selon l'exemple 1 à une concentration de 1 % et de 3 %, afin de constater un effet réparateur de l'actif sur les cellules. Une condition contrôle est réalisée dans chaque cas sans actif peptidique.Example 4: Comet test on KHN cells The comet test is a test that quantifies DNA damage at the cellular level. Protocol: For this purpose, KHN cells are: - condition a: cultured for 24 h with the peptide extract according to Example 1 at a concentration of 1% and 3%, and then irradiated with UVB radiation at a rate of of 20 mJ / cm 2, in order to find a protective effect of the peptide active agent according to the invention on the cells; - condition b: irradiated initially with UVB radiation at a rate of 20 mJ / cm 2, then treated for 24 h with the peptide extract according to example 1 at a concentration of 1% and 3%, in order to find a repairing effect of the asset on the cells. A control condition is carried out in each case without peptide active.

Les cellules sont ensuite trypsinées de leur support, puis centrifugées à 900 tour/min pendant 5 minutes afin de les concentrer et les dénombrer. Un nombre défini de cellules (25 000 cellules) est ensuite inclus dans un gel d'agarose Low Melting à 0,75 %, puis déposé sur une lame de verre préalablement recouverte d'agarose à 1 %. Les lames sont ensuite immergées dans une solution de lyse pendant 1h30 à 4 °C, puis dans une solution alcaline pendant 20 minutes à 4 °C. Les cellules sont ainsi lysées et l'ADN dénaturé. Les lames sont plongées dans une solution d'électrophorèse avant d'appliquer un champ électrique (20 V - 250 mA). L'ADN ainsi dénaturé est soumis à une migration au sein du gel d'agarose à 4 °C. L'application d'un colorant fluorescent de l'ADN sur les lames (l'iodure de propidium à 2 lig/ ml) permet d'observer au microscope l'ADN apparaissant sous forme de comètes dans le cas où il a été endommagé. Un logiciel de quantification permet de déterminer le Tail Moment moyen appliqué à chaque condition testée. Ce paramètre renseigne sur le niveau d'endommagement de l'ADN : plus il est élevé, plus les dommages sur l'ADN sont importants.The cells are then trypsinized from their support and then centrifuged at 900 rpm for 5 minutes in order to concentrate and count them. A defined number of cells (25,000 cells) is then included in a 0.75% Low Melting agarose gel and then deposited on a glass slide previously coated with 1% agarose. The slides are then immersed in a lysis solution for 1 h 30 at 4 ° C. and then in an alkaline solution for 20 minutes at 4 ° C. The cells are thus lysed and the DNA denatured. The slides are immersed in an electrophoresis solution before applying an electric field (20 V - 250 mA). The denatured DNA is subjected to migration within the agarose gel at 4 ° C. The application of a fluorescent dye of the DNA on the slides (propidium iodide at 2 μg / ml) makes it possible to observe under the microscope the DNA appearing in the form of comets in the case where it has been damaged. Quantification software is used to determine the average Tail Moment applied to each condition tested. This parameter gives information on the level of DNA damage: the higher it is, the greater the damage to the DNA.

Résultats : Dans la condition a, le Tail Moment diminue sensiblement lorsque l'extrait peptidique selon l'exemple 1 est appliqué en prétraitement (à une concentration de 1 % ou de 3 %), c'est-à-dire que les cellules ont subies moins de dommages que dans la condition contrôle, lorsqu'elles sont soumises à des rayonnements UVB ultérieurs. Ces résultats confirment bien l'effet protecteur de l'extrait peptidique d'avoine selon l'invention sur les cellules KHN, plus particulièrement au niveau de leur ADN. Par ailleurs, lorsque l'extrait peptidique selon l'exemple 1 est appliqué après irradiation, sans prétraitement (condition b), le Tail Moment diminue de façon dose dépendante. Ce test en condition b a permis de mettre en évidence le rôle réparateur de l'extrait peptidique d'avoine selon l'invention sur l'ADN des cellules cutanées testées soumises à des irradiations UVB préalables. Exemple 5 : mise en évidence de l'action réparatrice de l'extrait peptidique selon l'exemple 1 sur des biopsies de peau humaine soumises à des rayonnements UVB Le but de cette expérience est de mesurer les capacités de réparation de l'extrait peptidique d'avoine selon l'invention après irradiation par rayonnements UVB de biopsies de peau humaine. Le rayonnement UV, et particulièrement UVB, entraîne des réactions de dimérisation qui ont lieu au niveau des sites comprenant deux pyrimidines adjacentes (thymidine, cytosine). Plusieurs types de photoproduits sont alors formés, dont les dimères de cyclobutane-pyrimidine ou DCPs. Or, il est connu que lorsqu'une cellule est exposée à un stress génotoxique, son cycle de division est temporairement arrêté pour permettre la réparation de l'ADN et éviter ainsi l'apparition de mutations dans les générations suivantes de cellules. La prolifération cellulaire ne reprend qu'ensuite. Si la fréquence ou la quantité des dommages est trop élevée, ou encore la réparation inefficace, les cellules enclenchent un processus de mort programmée, l'apoptose. Par conséquent, en mesurant par immunomarquage à l'aide d'un anticorps anti-DCPs, la quantité de photoproduits formés, il est possible d'évaluer l'efficacité d'un composé ayant une action réparatrice sur l'ADN. Protocole d'immunomarquage des DCPs sur des biopsies de peau soumises à des UVB Des biopsies de peau humaine sont mises en culture à l'interface air/liquide. Ces biopsies sont soumises à des irradiations par rayonnements UVB à raison de 200 mJ/ cm2. Après irradiation, dans une première condition, une solution à 1 % de l'extrait peptidique selon l'exemple 1 est appliquée topiquement sur les biopsies durant 24 h. Dans une seconde condition, une solution à 3 % de l'extrait peptidique selon l'exemple 1 est appliquée topiquement durant 24 h. Une condition contrôle est réalisée par application topique d'une solution de PBS après irradiation. Pour le marquage des dimères cyclobutane-pyrimidine, les biopsies de peau sont incluses dans de la paraffine et des coupes histologiques de 3 pim d'épaisseur sont effectuées. Les lames sont déparaffinées, hydratées puis soumises à un immunomarquage par un anticorps dirigé contre les dimères cyclobutane-pyrimidine (MBL D194-1, mouse monoclonal) puis par un anticorps secondaire adapté (Invitrogen A21202), couplé à un marqueur fluorescent. Les coupes de peau sont alors examinées au microscope à Epifluorescence (Nikon Eclipse E 80i microscope). Résultats : En condition contrôle, la fluorescence observée est plus intense lorsque les biopsies ont été soumises aux rayonnements UVB. Dans les deux conditions testées avec post-traitement avec l'extrait peptidique selon l'exemple 1, on observe une fluorescence beaucoup moins intense que dans la condition contrôle avec UVB. Conclusions : L'extrait peptidique d'avoine selon l'invention a permis une meilleure et une plus importante réparation des dommages subis par l'ADN des cellules cutanées tetsées, ceci grâce notamment à l'activation de la caspase-14. On observe aussi que cette action de réparation est dose-dépendante puisque celle-ci est plus importante lorsqu'une plus grande quantité d'extrait peptidique selon l'exemple 1 est appliquée.Results: In condition a, the Tail Moment decreases appreciably when the peptide extract according to Example 1 is applied in pretreatment (at a concentration of 1% or 3%), that is to say that the cells have suffered less damage than in the control condition, when subjected to subsequent UVB radiation. These results confirm the protective effect of the oat peptide extract according to the invention on KHN cells, more particularly at the level of their DNA. Moreover, when the peptide extract according to Example 1 is applied after irradiation, without pretreatment (condition b), the Tail Moment decreases in a dose-dependent manner. This test in condition b made it possible to highlight the repairing role of the oat peptide extract according to the invention on the DNA of the cutaneous cells tested subjected to prior UVB irradiations. EXAMPLE 5 Demonstration of the Restorative Action of the Peptide Extract According to Example 1 on Human Skin Biopsies Subjected to UVB Radiations The aim of this experiment is to measure the repair capacities of the peptide extract. oats according to the invention after irradiation with UVB radiation of human skin biopsies. UV radiation, and particularly UVB, results in dimerization reactions that take place at sites comprising two adjacent pyrimidines (thymidine, cytosine). Several types of photoproducts are then formed, including cyclobutane-pyrimidine dimers or DCPs. However, it is known that when a cell is exposed to genotoxic stress, its division cycle is temporarily stopped to allow the repair of DNA and thus avoid the appearance of mutations in subsequent generations of cells. Cell proliferation only resumes afterwards. If the frequency or amount of damage is too high, or the repair inefficient, the cells engage a programmed death process, apoptosis. Therefore, by immunostaining using an anti-DCP antibody, the amount of photoproducts formed, it is possible to evaluate the effectiveness of a compound having a repairing action on the DNA. Protocol for immunostaining DCPs on skin biopsies subjected to UVB Biopsies of human skin are cultured at the air / liquid interface. These biopsies are irradiated with UVB radiation at a rate of 200 mJ / cm 2. After irradiation, in a first condition, a 1% solution of the peptide extract according to Example 1 is applied topically to the biopsies for 24 hours. In a second condition, a 3% solution of the peptide extract according to Example 1 is applied topically for 24 hours. A control condition is achieved by topical application of a PBS solution after irradiation. For the labeling of cyclobutane-pyrimidine dimers, skin biopsies are embedded in paraffin and histological sections of 3 μm thick are made. The slides are deparaffinized, hydrated and then subjected to immunolabeling with an antibody directed against cyclobutane-pyrimidine dimers (MBL D194-1, monoclonal mouse) and then with a suitable secondary antibody (Invitrogen A21202), coupled to a fluorescent marker. The skin sections are then examined under an Epifluorescence microscope (Nikon Eclipse E 80i microscope). Results: In the control condition, the observed fluorescence is more intense when the biopsies have been subjected to UVB radiation. In both conditions tested with post-treatment with the peptide extract according to Example 1, a much less intense fluorescence is observed than in the control condition with UVB. Conclusions: The peptide extract of oats according to the invention has allowed a better and a more important repair of the damage suffered by the DNA of the cutaneous skin cells, this thanks in particular to the activation of caspase-14. It is also observed that this repair action is dose-dependent since it is greater when a greater amount of peptide extract according to Example 1 is applied.

Exemple 6 : composition d'une crème solaire Noms Ingrédient (Noms INCI) % commerciaux massique PHASE A Aqua (Eau déminéralisée) qsp Glycerin 3,00 Versene NA2 Disodium EDTA 0,10 Triethanolamine 0,50 UltraThix® P100 Acrylic acid/VP Crosspolymer 0,70 PHASE B Dimethicone (100cs) 0,50 Glucamate S SE20 PEG-20 Methyl Glucose Sesquistearate 2,50 Glucamate SS Methyl Glucose Sesquistearate 0,50 Noms Ingrédient (Noms INCI) % commerciaux massique Lanette® 16 Cetyl Alcohol 1,50 Ceraphyl® SLK Isodecyl Neopentanoate 3,00 Ceraphyl® 230 Diisopropyl Adipate 2,00 Escalol® 517 Avobenzone 3,00 Escalol® 587 Octisalate 5,00 Escalol® 597 Octocrylene 2,00 Escalol® S Bis-Ethylhexyloxyphenol 3,00 Methoxyphenyl Triazine PHASE C Cyclopentasiloxane 5,00 Si-Tec TM RE-100 Cyclopentasiloxane, 1,00 Dimethicone/Vinyltrimethylsiloxysilicate Crosspolymer PHASE D Ethanol 5,00 OptiphenTM ND Phenoxyethanol, Benzoic acid, 1,20 Dehydroacetic acid PHASE E Extrait d'avoine selon l'exemple 1 3,00 Parfum (Fragrance) qsp Colorant qspExample 6: Composition of a sunscreen Ingredient Name (INCI Names)% commercial mass PHASE A Aqua (Demineralized water) qsp Glycerin 3.00 Versene NA2 Disodium EDTA 0.10 Triethanolamine 0.50 UltraThix® P100 Acrylic acid / VP Crosspolymer 0 , 70 PHASE B Dimethicone (100ccs) 0.50 Glucamate S SE20 PEG-20 Methyl Glucose Sesquistearate 2.50 Glucamate SS Methyl Glucose Sesquistearate 0.50 Ingredient Name (INCI Names)% Commercial Weight Lanette® 16 Cetyl Alcohol 1.50 Ceraphyl® SLK Isodecyl Neopentanoate 3.00 Ceraphyl® 230 Diisopropyl Adipate 2.00 Escalol® 517 Avobenzone 3.00 Escalol® 587 Octisalate 5.00 Escalol® 597 Octocrylene 2.00 Escalol® S Bis-Ethylhexyloxyphenol 3.00 Methoxyphenyl Triazine PHASE C Cyclopentasiloxane 5 Si-Tec TM RE-100 Cyclopentasiloxane, 1.00 Dimethicone / Vinyltrimethylsiloxysilicate Crosspolymer PHASE D Ethanol 5.00 OptiphenTM ND Phenoxyethanol, Benzoic acid, 1.20 Dehydroacetic acid PHASE E Oat extract according to Example 1 3.00 Perfume (Fragrance) qsp dye qs

Claims

REVENDICATIONS1. A cosmetic care method for preventing and / or repairing DNA damage to cutaneous cells, comprising topically applying to at least a portion of the skin of the face or body an oat extract (Avena sativa L.), in a composition comprising a physiologically acceptable medium, which activates the expression of caspase-14 at the cutaneous level.

2. The cosmetic care method according to claim 1, wherein the damage to the cutaneous cell DNA is induced by UV radiation.

3. Cosmetic care method according to claim 2, wherein the damage to the DNA of the skin cells is induced by UVB radiation. 15

4. Cosmetic care method according to one of the preceding claims, wherein the oat extract (Avena sativa L.) is a peptide extract derived from the hydrolysis of proteins extracted from oat seeds.

The cosmetic care method according to claim 4, wherein the oat peptide extract essentially comprises peptide compounds of molecular weight less than 5 kDa.

6. A cosmetic care method according to claim 4 or 5, wherein the oat peptide extract comprises between 0.5 and 8 g / l of peptide compounds by weight of solids and between 0.5 and 5 g. / 1 of sugars by weight of dry extract.

7. Cosmetic treatment method according to claim 6, characterized in that the oat peptide extract comprises between 1.5 and 3.5 g / l of peptide compounds by weight of dry extract and between 2 and 5 g / l of 1 of sugars by weight of dry extract. 30

8. Cosmetic care method according to one of the preceding claims, wherein the oat extract is present at a concentration between 0.0001% and 20% relative to the total weight of the final composition.

9. Cosmetic care method according to claim 8, wherein the oat extract is present at a concentration of between 1% and 3% relative to the total weight of the final composition.

10. Cosmetic care method according to one of the preceding claims, wherein the composition intended to be applied topically to at least a portion of the skin of the face or body is in the form of cream, oil-in-oil emulsion. water, or water-in-oil or multiple emulsion, solution, suspension, microemulsion, aqueous or anhydrous gel, serum, or dispersion of vesicles, patch, spray, ointment, ointment, lotion, colloid , milk, lotion, stick or powder.

11. Cosmetic care method according to one of claims 1 to 10, wherein the composition is applied in the morning as anti-aging day care and / or evening bedtime as a repairing night care.

12. Cosmetic care method according to one of claims 1 to 10, wherein the composition is applied before exposure to the sun, as a sun care.

13. Cosmetic care method according to one of claims 1 to 10, wherein the composition is applied after exposure to the sun, as after-sun care.