FR2961106A1 - Composition obtained from a homeopathic 9CH dilution of Ruta graveolens, useful as an anticancer drug, and to prevent and/or treat a cancer such as melanoma, carcinoma, and cancers of thyroid, colon-rectum, breast, prostate and lung - Google Patents
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Abstract
Description
1 1
MEDICAMENT HOMEOPATHIQUE A ACTIVITE ANTI-CANCEREUSE HOMEOPATHIC DRUG WITH ANTI-CANCER ACTIVITY
DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention est relative au domaine des médicaments employés dans le traitement de cancers, dont notamment les mélanomes, les carcinomes, les cancers de la thyroïde, les cancers colorectaux, les cancers du sein, de la prostate et du poumon. En particulier, l'invention concerne un médicament homéopathique dénommé Ruta graveolens 9CH utilisé dans la prévention et/ou le traitement de cancers, plus spécifiquement dans le traitement de différentes formes du mélanome. FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to the field of medicaments used in the treatment of cancers, including in particular melanomas, carcinomas, thyroid cancers, colorectal cancers, breast, prostate and lung cancers. . In particular, the invention relates to a homeopathic medicine called Ruta graveolens 9CH used in the prevention and / or treatment of cancers, more specifically in the treatment of various forms of melanoma.
ARRIERE-PLAN TECHNOLOGIQUE Le mélanome est le deuxième cancer chez l'homme en termes de nombre d'années de vie perdues. Durant les dix dernières années, son incidence a augmenté de façon plus importante (3 à 5% par an) que les autres types de cancer, à l'exception du cancer bronchique chez la femme. En l'an 2000, il était estimé qu'un individu sur 100 développerait un mélanome dans le courant de sa vie et qu'un patient sur 2 aurait moins de 50 ans. Ce type de cancer devient inéluctablement un problème majeur de santé publique. Le mélanome est une tumeur maligne de très mauvais pronostic avec un risque élevé de métastases ganglionnaires et viscérales. BACKGROUND ART Melanoma is the second most common cancer in humans in terms of the number of years of life lost. During the last ten years, its incidence has increased more significantly (3 to 5% per year) than other types of cancer, with the exception of bronchial cancer in women. In the year 2000, it was estimated that one in 100 people would develop melanoma in the course of their life and that one in two patients would be under 50 years of age. This type of cancer inevitably becomes a major public health problem. Melanoma is a malignant tumor with a very poor prognosis and a high risk of lymph node and visceral metastases.
Au cours des dernières années, le mécanisme tumoral a été étudié et les mécanismes sous-tendant la progression tumorale peu à peu expliqués. On connaît déjà de nombreux principes actifs plus ou moins efficaces dans le traitement des différentes formes de cancer. La présente invention s'inscrit dans la recherche de nouveaux traitements du cancer sous 25 ses différentes formes, à l'aide de principes actifs pharmaceutiques connus pour d'autres indications. Dans ce contexte, les inventeurs se sont intéressés aux médicaments homéopathiques obtenus à partir d'un extrait de la plante Ruta graveolens L. (Rue fétide), appartenant à la famille des Rutaceae. Cette plante est originaire d'Europe, de la région méditerranéenne 30 en particulier, mais elle est largement répandue dans toutes les régions tropicales et tempérées. In recent years, the tumor mechanism has been studied and the mechanisms underlying tumor progression gradually explained. Many active ingredients that are more or less effective in the treatment of different forms of cancer are already known. The present invention is part of the search for new cancer treatments in its different forms, using active pharmaceutical ingredients known for other indications. In this context, the inventors are interested in homeopathic medicines obtained from an extract of the plant Ruta graveolens L. (Fetid Street), belonging to the family Rutaceae. This plant is native to Europe, especially the Mediterranean region, but it is widespread in all tropical and temperate regions.
Jusqu'à présent, les principales indications cliniques des dilutions homéopathiques de Ruta graveolens L. concernent la traumatologie et la rhumatologie en cas d'entorses 35 simples ou compliquées, de douleurs des luxations, de tendinites, périostites, périarthrites, lombalgies, lombosacralgies. Ruta graveolens L. est alors souvent prescrit en basse (5CH) ou moyenne (7CH) dilution. Les mêmes dilutions homéopathiques de Ruta graveolens L. sont prescrites en ophtalmologie en cas d'asthénopies et troubles de l'accommodation ou de surmenage oculaire. Heretofore, the main clinical indications of homeopathic dilutions of Ruta graveolens L. relate to trauma and rheumatology in case of simple or complicated sprains, pain of dislocations, tendinitis, periostitis, periarthritis, lumbago, lumbosacralgia. Ruta graveolens L. is then often prescribed in low (5CH) or medium (7CH) dilution. The same homeopathic dilutions of Ruta graveolens L. are prescribed in ophthalmology in case of asthenopia and disturbances of accommodation or ocular overwork.
Pathak S et al. [Pathak S, Multani AS, Banerji P, Banerji P. "Ruta 6 selectively induces cet/ death in brain cancer cells but proliferation in normal peripheral blood lymphocytes: A nove/ treatment for human brain cancer". Int J OncolOct; 23:975-982,2003] ont testé l'association de 2 médicaments homéopathiques Ruta graveolens (6CH, 1CH et teinture mère Q) et Calcarea phosphorica 3DH sur des patients souffrant de cancers cérébraux intracrâniens et sur des cultures de cellules tumorales (cellules de gliome humain MGR1, de mélanome métastasique murin K1735x et de leucémie murine HL-60) et des cultures de cellules lymphoïdes humaines normales. L'action de Ruta graveolens 6CH avec Calcarea phosphorica 3DH induit les voies de signalisation de l'apoptose au niveau des cellules tumorales et notamment au niveau des cellules tumorales cérébrales (augmentation du nombre d'aberrations chromosomiques de 6 fois, réduction significative des télomères, arrêt des cellules en phase G2/M supérieure de 3 fois par rapport au contrôle). Cette association de médicaments possède un effet plutôt mitogène au niveau des cellules lymphoïdes normales (augmentation du nombre de cellules en phase mitotique par rapport au contrôle) et semble être différente en fonction du type cellulaire testé. De plus, l'association Ruta graveolens 6CH avec Calcarea phosphorica 3DH protège les cellules lymphoïdes normales des dommages génétiques induits par le peroxyde d'hydrogène (H202), alors qu'elle a un effet synergique avec H202, délétère sur les cellules tumorales testées. De manière générale, ces travaux montrent que l'association Ruta graveolens 6CH avec Calcarea phosphorica 3DH peut induire une réduction des gliomes cérébraux humains in vivo, en détruisant sélectivement les cellules de gliomes, sans nuire aux cellules normales (protection des lymphocytes normaux en induisant une division cellulaire dans les cellules hématopoïétiques). Pathak S et al. [Pathak S, Multani AS, Banerji P, Banerji P. "Ruta 6 selectively induces this / death in brain cancer cells but proliferation in normal peripheral blood lymphocytes: A nove / treatment for human brain cancer". Int J OncolOct; 23: 975-982,2003] tested the combination of 2 homeopathic medicines Ruta graveolens (6CH, 1CH and Q mother tincture) and Calcarea phosphorica 3DH on patients with intracranial brain cancers and on tumor cell cultures (tumor cells). human glioma MGR1, murine metastatic melanoma K1735x and murine leukemia HL-60) and normal human lymphoid cell cultures. The action of Ruta graveolens 6CH with Calcarea phosphorica 3DH induces the signaling pathways of apoptosis at the level of tumor cells and in particular at the level of brain tumor cells (increase in the number of chromosomal aberrations by 6 times, significant reduction of telomeres, stopping cells in the G2 / M phase 3 times higher than the control). This combination of drugs has a rather mitogenic effect on normal lymphoid cells (increased number of cells in the mitotic phase compared to control) and appears to be different depending on the cell type tested. In addition, the combination Ruta graveolens 6CH with Calcarea phosphorica 3DH protects normal lymphoid cells from genetic damage induced by hydrogen peroxide (H202), while it has a synergistic effect with H202, deleterious on the tumor cells tested. In general, these studies show that the combination Ruta graveolens 6CH with Calcarea phosphorica 3DH can induce a reduction of human brain gliomas in vivo, by selectively destroying glioma cells, without harming normal cells (protection of normal lymphocytes by inducing cell division in hematopoietic cells).
Preethi et al., 2006 [Preethi KC, Kuttan G, Kuttan R "Anti-tumour activity of Ruta graveolens extract". Asian Pac J Cancer Prev, vol 7, 2006, 439-443] enseigne que Ruta graveolens 200CH a une activité anti-tumorale chez la souris vis-à-vis de "Ehrlich Ascites Carcinoma". De la même manière, le traitement de 10 à 12 jours par Ruta graveolens 200CH de ces mêmes lignées de souris présentant des tumeurs solides (injection sous-cutanée de cellules EAC ou DLA) permet de réduire de 8 à 22 fois le volume de la tumeur environ 30 jours post-injection par rapport au contrôle. Preethi et al., 2006 indique également que Ruta graveolens 200CH est actif contre la carcinogénèse chimique dans le foie. Preethi et al., 2006 [Preethi KC, Kuttan G, Kuttan R "Anti-tumor activity of Ruta graveolens extract". Asian Pac J Cancer Prev, vol 7, 2006, 439-443] teaches that Ruta graveolens 200CH has anti-tumor activity in mice against "Ehrlich Ascites Carcinoma". In the same way, the treatment of 10 to 12 days by Ruta graveolens 200CH of these same mouse lines presenting solid tumors (subcutaneous injection of EAC or DLA cells) makes it possible to reduce from 8 to 22 times the volume of the tumor. approximately 30 days post-injection compared to the control. Preethi et al., 2006 also indicates that Ruta graveolens 200CH is active against chemical carcinogenesis in the liver.
Sunila et al., 2007 [Sunila ES, Kuttan G, Preethi KC, Kuttan R. Effect of homeopathic medicines on transplanted tumors in mice. Asian Pacific J Cancer Prev. 2007; 8:390-394] révèle que l'administration de Ruta graveolens 200CH à des souris porteuses de tumeurs ou du lymphome de Dalton, permet d'augmenter d'environ 50% le temps de survie de ces souris. Sunila et al., 2007 [Sunila ES, Kuttan G, KC Preethi, Kuttan R. Effect of homeopathic medicines on transplanted tumors in mice. Asian Pacific J Cancer Prev. 2007; 8: 390-394] reveals that the administration of Ruta graveolens 200CH to tumor-bearing mice or Dalton's lymphoma makes it possible to increase the survival time of these mice by approximately 50%.
Hari Kumar et al., 2007 [Hari Kumar KB, Sunila ES, Kuttan G, Preethi KC, Venugopal CN, Kuttan R. Inhibition of chemically induced carcinogenesis by drugs used in homeopathic medicine. Asian Pac J Cancer Prev. 2007; 8(l):98-102.] montre lui aussi que des souris Swiss Albinos présentant un sarcome hépatique chimiquement induit, et traitées pendant 20 semaines par Ruta graveolens 200CH, présentent un retard dans l'apparition de leur tumeur. Le traitement de ces souris par Ruta graveolens 200 CH permet ainsi d'augmenter de manière significative leur survie par rapport à un groupe contrôle et induit également une réduction du taux de certaines enzymes hépatiques (Gamma-GT...) ou des marqueurs d'anomalie hépatique (bilirubine). Hari Kumar et al., 2007 [Hari Kumar KB, Sunila ES, Kuttan G, Preethi KC, Venugopal CN, Kuttan R. Inhibition of chemically induced carcinogenesis by drugs in homeopathic medicine. Asian Pac J Cancer Prev. 2007; 8 (1): 98-102.] Also shows that Swiss Albino mice with chemically induced hepatic sarcoma, treated for 20 weeks with Ruta graveolens 200CH, have a delayed onset of tumor. The treatment of these mice with Ruta graveolens 200 CH thus makes it possible to significantly increase their survival compared with a control group and also induces a reduction in the level of certain liver enzymes (Gamma-GT, etc.) or markers of the liver. hepatic abnormality (bilirubin).
Il ressort de cette revue de l'art antérieur que les dilutions homéopathiques de Ruta graveolens 200CH & 6CH sont connues pour avoir des propriétés anticancéreuses. BREVE DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION It is apparent from this review of the prior art that the homeopathic dilutions of Ruta graveolens 200CH & 6CH are known to have anticancer properties. BRIEF DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Les inventeurs ont mis en évidence le fait que, de manière surprenante et très spécifique, les dilutions homéopathiques moyennes de Ruta graveolens 9CH peuvent être utilisées 25 pour traiter le cancer chez l'animal et plus spécialement chez l'homme. The inventors have demonstrated that, surprisingly and very specifically, the average homeopathic dilutions of Ruta graveolens 9CH can be used to treat cancer in animals and especially in humans.
En particulier, les inventeurs ont découvert que Ruta graveolens L. sous forme de dilution homéopathique 9CH, inhibe plus particulièrement l'invasion tumorale et la croissance ou le développement de la tumeur. 30 La présente invention concerne donc une composition pharmaceutique comprenant ou obtenue à partir d'une dilution homéopathique 9CH de Ruta graveolens pour utilisation: - comme médicament anticancéreux; - dans la prévention et/ou le traitement du cancer; 35 - ou pour prévenir et/ou traiter le cancer.20 Ruta graveolens 9CH inhibe plus particulièrement l'invasion tumorale et le développement de la croissance de la tumeur. Ce médicament peut être utilisé seul ou en association avec d'autres médicaments homéopathiques ou agents chimiothérapiques conventionnels. Ruta graveolens 9CH peut être utilisé sous différentes formes pharmaceutiques et sous différentes voies d'administrations. In particular, the inventors have discovered that Ruta graveolens L. in the form of 9CH homeopathic dilution, more particularly inhibits tumor invasion and growth or tumor development. The present invention therefore relates to a pharmaceutical composition comprising or obtained from a homeopathic 9CH dilution of Ruta graveolens for use: as an anticancer drug; - in the prevention and / or treatment of cancer; 35 - or to prevent and / or treat cancer.20 Ruta graveolens 9CH particularly inhibits tumor invasion and the growth of tumor growth. This medicine may be used alone or in combination with other homeopathic medicines or conventional chemotherapeutic agents. Ruta graveolens 9CH can be used in different pharmaceutical forms and under different administration channels.
Dé initions Ces définitions sont données à titre d'exemples non limitatifs. Dans tout le présent exposé, "tout" singulier désigne indifféremment un singulier ou un 10 pluriel. Au sens de l'invention, le terme "Ruta graveolens L." ou rue officinale appartient à la division des Magnoliophyta, à la classe des Magnoliopsida, à l'ordre des Sapindales, à la famille des Rutaceae et au genre Ruta. Au sens de la présente invention, un médicament homéopathique est défini par le 15 parlement européen et du conseil selon la directive 2001/83/CE. Un médicament homéopathique est obtenu à partir de produits, substances ou compositions, appelés souches homéopathiques d'origine végétale, animale ou de produits chimiques (minéraux ou organiques), par la méthode des déconcentrations successives. Cette déconcentration est réalisée par des opérations successives de division de la souche dans un véhicule 20 (dilution ou trituration) au 1/100 (centésimales) ou au 1/10 (décimales), et par des opérations de dynamisations successives. Le nombre d'opérations ainsi effectuées définit la hauteur de dilution. Ainsi, les médicaments homéopathiques sont habituellement désignés par le nom latin de la souche suivi de l'indication du degré de dilution. 25 Deitions These definitions are given as non-limiting examples. Throughout this presentation, "any" singular denotes either a singular or a plural. For the purposes of the invention, the term "Ruta graveolens L." or officinal street belongs to the division of Magnoliophyta, to the class of Magnoliopsida, to the order of Sapindales, to the family of Rutaceae and to the genus Ruta. For the purposes of the present invention, a homeopathic medicinal product is defined by the European Parliament and the Council according to Directive 2001/83 / EC. A homeopathic medicine is obtained from products, substances or compositions, called homeopathic strains of vegetable, animal or chemical (mineral or organic) origin, by the method of successive deconcentrations. This deconcentration is carried out by successive operations of division of the strain in a vehicle 20 (dilution or trituration) to 1/100 (centesimal) or 1/10 (decimal), and by successive dynamization operations. The number of operations thus performed defines the dilution height. Thus, homeopathic medicines are usually referred to by the Latin name of the strain followed by the indication of the degree of dilution. 25
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Les cancers plus particulièrement concernés par l'invention sont de préférence 30 choisis dans le groupe constitué par les mélanomes, les carcinomes, les cancers de la thyroïde, du colon-rectum, du sein, de la prostate et du poumon. Les dilutions homéopathiques de Ruta graveolens 9CH sont spécifiquement actives contre les mélanomes. The cancers more particularly concerned by the invention are preferably selected from the group consisting of melanomas, carcinomas, thyroid, colon-rectum, breast, prostate and lung cancers. Homeopathic dilutions of Ruta graveolens 9CH are specifically active against melanoma.
35 S'agissant du mécanisme d'action, la composition selon l'invention est spécialement adaptée pour une utilisation comme agent inhibiteur de la croissance tumorale et/ou du processus d'invasion tumorale. With regard to the mechanism of action, the composition according to the invention is especially suitable for use as an inhibitory agent for tumor growth and / or the tumor invasion process.
Avantageusement, la composition selon l'invention, est constituée par une solution aqueuse, alcoolique ou hydroalcoolique obtenue par dilution d'un extrait de Ruta graveolens L. Selon une variante, la composition selon l'invention est caractérisée en ce qu'elle 5 comprend une solution aqueuse, alcoolique ou hydroalcoolique obtenue par dilution 9CH d'un extrait de Ruta graveolens L. Advantageously, the composition according to the invention consists of an aqueous, alcoholic or aqueous-alcoholic solution obtained by diluting an extract of Ruta graveolens L. According to one variant, the composition according to the invention is characterized in that it comprises an aqueous, alcoholic or aqueous-alcoholic solution obtained by diluting 9CH of an extract of Ruta graveolens L.
Selon une autre variante, la composition selon l'invention est caractérisée en ce qu'elle qu'elle est constituée par une forme sèche préparée à l'aide d'une solution aqueuse, 10 alcoolique ou hydroalcoolique obtenue par dilution 9CH d'un extrait de Ruta graveolens L. According to another variant, the composition according to the invention is characterized in that it consists of a dry form prepared using an aqueous, alcoholic or aqueous-alcoholic solution obtained by diluting 9CH of an extract of Ruta graveolens L.
Pour optimiser son efficacité, la composition selon l'invention peut comprendre en outre au moins une autre molécule pharmaceutiquement active dans la prévention et/ou le 15 traitement du cancer. To optimize its effectiveness, the composition according to the invention may further comprise at least one other pharmaceutically active molecule in the prevention and / or treatment of cancer.
Sur la plan de la galénique, la composition selon l'invention est de préférence formulée pour une administration par voie orale, nasale, intramusculaire, intraveineuse ou sous-cutanée. 20 Selon un autre de ses aspects, l'invention vise l'utilisation de la composition selon l'invention pour l'obtention (la fabrication) d'un médicament anticancéreux ou d'un médicament destiné à une utilisation préventive et/ou thérapeutique basée sur l'inhibition du développement tumoral et/ou du processus d'invasion tumorale. 25 Avantageusement, l'administration du médicament est une administration par voie orale, nasale, intramusculaire, intraveineuse ou sous-cutanée, de préférence par voie orale. In terms of dosage, the composition according to the invention is preferably formulated for oral, nasal, intramuscular, intravenous or subcutaneous administration. According to another of its aspects, the invention relates to the use of the composition according to the invention for obtaining (the manufacture) of an anticancer drug or a medicinal product intended for preventive and / or therapeutic use based on on inhibition of tumor development and / or tumor invasion process. Advantageously, the administration of the medicament is an oral, nasal, intramuscular, intravenous or subcutaneous administration, preferably orally.
Selon encore un autre de ses aspects, l'invention vise une association médicamenteuse comprenant la composition selon l'une au moins des revendications 30 précédentes et au moins un médicament homéopathique ou allopathique. According to yet another of its aspects, the invention relates to a medicinal combination comprising the composition according to at least one of the preceding claims and at least one homeopathic or allopathic medicine.
L'invention sera mieux comprise à l'aide des exemples qui suivent et des figures annexées qui s'y réfèrent. 35 DESCRIPTION DES FIGURES - La figure 1 montre un graphe donnant le volume tumoral (mm) des souris cancéreuses traitées avec la solution de Ruta graveolens 9CH et avec le témoin (cf. exemple 3). The invention will be better understood with the aid of the examples which follow and the appended figures which refer to it. DESCRIPTION OF THE FIGURES FIG. 1 shows a graph giving the tumoral volume (mm) of the cancerous mice treated with the solution of Ruta graveolens 9CH and with the control (see Example 3).
NB : p < 0,05 indiqué sur les figures 1 à 3 correspond au seuil statistique de significativité p < 0, 05. - La figure 2 montre un graphe donnant le pourcentage de survie en fonction du temps en jours pour les souris cancéreuses traitées avec Ruta graveolens 9CH et avec le témoin (cf. exemple 3). - La figure 3 montre un graphe donnant le nombre de nodules pulmonaires des souris cancéreuses traitées avec la solution de Ruta graveolens 9CH et avec le témoin (cf. exemple 4). NB: p <0.05 indicated in FIGS. 1 to 3 corresponds to the statistical threshold of significance p <0.05. FIG. 2 shows a graph giving the percentage of survival as a function of time in days for cancer mice treated with Ruta graveolens 9CH and with the control (see example 3). FIG. 3 shows a graph giving the number of pulmonary nodules of the cancerous mice treated with the Ruta graveolens 9CH solution and with the control (see Example 4).
EXEMPLES Les exemples qui suivent décrivent la préparation d'un médicament homéopathique Ruta graveolens 9CH et d'un témoin, la mesure de l'effet de Ruta graveolens 9CH sur la croissance tumorale in vivo chez des souris présentant une forme de mélanome murin induit par voie sous-cutanée et par voie intraveineuse. 1. Mode de préparation de Ruta graveolens 9CH Ruta graveolens 9CH est un médicament homéopathique préparé suivant la monographie 2371 de la pharmacopée européenne 6.1 de 2008 intitulée Méthodes de préparation des souches homéopathiques et déconcentration. Ruta graveolens 9CH est préparée à partir de la partie aérienne fraîche non ligneuse récoltée avant la floraison de Ruta Graveolens L. (matière première) qui satisfait aux exigences de la monographie Préparations homéopathiques (1038) et constitue la matière première. En fait, 80,43 kg de Ruta Graveolens L. sont mélangés à 108,43 kg d'alcool pur et 8,257 kg d'eau osmosée dans une cuve en inox lors de la phase de macération. Cette phase s'étend sur une période de 37 jours avec une agitation manuelle quotidienne. Ensuite, le mélange est exprimé à l'aide d'une presse hydraulique et filtré à l'aide de filtres spécifiques de 101um puis de 1µm afin d'obtenir une solution parfaitement limpide. Cette solution constitue la teinture mère et contient au moins 0,08% de rutine et entre 0,03 et 0,09% de furanocoumarines. On ajoute alors 29,7 ml d'eau stérile (Fresenius) à 0,30g de la teinture mère dans un flacon carré de 45 ml sous hotte à flux laminaire. Ce mélange est alors agité selon les recommandations de la pharmacopée française Xe édition 6e supplément de 1983 afin d'obtenir Ruta graveolens 1CH. EXAMPLES The following examples describe the preparation of a homeopathic drug Ruta graveolens 9CH and a control, measuring the effect of Ruta graveolens 9CH on tumor growth in vivo in mice with a form of induced murine melanoma. subcutaneous and intravenous. 1. Method of preparation of Ruta graveolens 9CH Ruta graveolens 9CH is a homoeopathic medicine prepared following monograph 2371 of the European Pharmacopoeia 6.1, 2008 entitled Methods for the preparation of homeopathic stocks and deconcentration. Ruta graveolens 9CH is prepared from the non-woody fresh aerial part harvested before the flowering of Ruta Graveolens L. (raw material) which meets the requirements of the Homeopathic Preparations monograph (1038) and is the raw material. In fact, 80.43 kg of Ruta Graveolens L. are mixed with 108.43 kg of pure alcohol and 8.257 kg of osmosis water in a stainless steel tank during the maceration phase. This phase extends over a period of 37 days with daily manual agitation. Then, the mixture is expressed using a hydraulic press and filtered using specific filters 101um and 1μm to obtain a perfectly clear solution. This solution is the mother tincture and contains at least 0.08% rutin and between 0.03 and 0.09% furanocoumarins. 29.7 ml of sterile water (Fresenius) are then added to 0.30 g of the mother tincture in a 45 ml square flask under a laminar flow hood. This mixture is then agitated according to the recommendations of the French Pharmacopoeia Xth edition 6th supplement of 1983 in order to obtain Ruta graveolens 1CH.
Ensuite, 1,98 ml d'eau stérile sont ajoutés à 0,02 ml de Ruta graveolens 1CH dans un tube de 5 ml sous hotte à flux laminaire, puis la solution est agitée de la même manière que lors de l'étape précédente afin d'obtenir Ruta graveolens 2CH. Les mêmes opérations de fabrication sont répétées jusqu'à l'obtention de Ruta graveolens 7CH. Ensuite, 29,70 ml d'eau stérile sont ajoutés à 0,30 ml de Ruta graveolens 7CH dans un flacon carré de 45,0 ml sous hotte à flux laminaire puis la solution est agitée comme précédemment afin d'obtenir Ruta graveolens 8CH. Dès lors, 83,16 ml d'eau stérile sont ajoutés à 0,84 ml de Ruta graveolens 8CH dans un flacon rond de 125 ml sous hotte à flux laminaire puis la solution est agitée comme précédemment afin d'obtenir Ruta graveolens 9CH. Then, 1.98 ml of sterile water is added to 0.02 ml of Ruta graveolens 1CH in a 5 ml tube under a laminar flow hood, then the solution is shaken in the same manner as in the previous step so to obtain Ruta graveolens 2CH. The same manufacturing operations are repeated until Ruta graveolens 7CH is obtained. Then, 29.70 ml of sterile water is added to 0.30 ml of Ruta graveolens 7CH in a 45.0 ml square flask under a laminar flow hood and then the solution is shaken as before to obtain Ruta graveolens 8CH. Therefore, 83.16 ml of sterile water are added to 0.84 ml of Ruta graveolens 8CH in a 125 ml round flask under a laminar flow hood and then the solution is shaken as before to obtain Ruta graveolens 9CH.
Cette solution est alors filtrée avec des filtres de 0,2 µm. Des ampoules bouteilles de 2 ml sont stérilisées à l'étuve (160°c pendant 2 heures) puis remplies sous hotte à flux laminaire et sous vide avec Ruta graveolens 9CH. This solution is then filtered with 0.2 μm filters. Bottle ampoules of 2 ml are sterilized in an oven (160 ° C for 2 hours) and then filled under laminar flow and vacuum hood with Ruta graveolens 9CH.
2. Mode de préparation du témoin Le témoin utilisé dans les expérimentations correspond à de l'eau stérile (Fresenius). Des ampoules bouteilles de 2 ml sont stérilisées à l'étuve (160°c pendant 2 heures) puis remplies sous hotte à flux laminaire avec cette eau stérile. 3. Mesure de l'effet de Ruta graveolens 9CH in vivo après injection sous cutanée de cellules tumorales Les effets de Ruta graveolens 9CH ont été étudiés sur le processus d'invasion tumoral in vivo. Les souris utilisées appartiennent à la lignée C57BL/6 et sont regroupées par lots de 10 individus. A JO, on leur injecte au niveau du flanc gauche en sous cutanée un volume de 100 id d'une solution contenant 2.5.105 de cellules B 16F 1 (cellules de mélanome murin). La solution d'injection contient du NaCl 0,85%. Dans le groupe témoin, on injecte chaque matin et à chaque souris 100 id d'eau stérile contenue dans une ampoule à usage unique par voie intra péritonéale (IP) à raison d'une injection/jour tout au long du suivi de la progression tumorale. 2. Mode of preparation of the control The control used in the experiments corresponds to sterile water (Fresenius). Bottle ampoules of 2 ml are sterilized in an oven (160 ° C for 2 hours) and then filled under laminar flow hood with this sterile water. 3. Measurement of the effect of Ruta graveolens 9CH in vivo after subcutaneous injection of tumor cells The effects of Ruta graveolens 9CH were studied on the in vivo tumor invasion process. The mice used belong to the C57BL / 6 line and are grouped in batches of 10 individuals. At 0, a volume of 100 μl of a solution containing 2.5 × 10 5 of 16F1 B cells (murine melanoma cells) is injected into the left subcutaneous flank. The injection solution contains 0.85% NaCl. In the control group, each morning, each mouse is injected with 100 μl of sterile water contained in a single-use ampoule intraperitoneally (IP) at the rate of one injection / day throughout the monitoring of the tumor progression. .
Dans le groupe traité, on injecte chaque matin et à chaque souris 100 gl de Ruta graveolens 9CH contenue dans une ampoule à usage unique par voie intra péritonéale (IP) à raison d'une injection/jour tout au long du suivi de la progression tumorale. In the treated group, 100 gl of Ruta graveolens 9CH contained in a single-use ampule intraperitoneally (IP) is injected every morning and to each mouse at the rate of one injection / day throughout the follow-up of the tumor progression. .
L'effet de Ruta graveolens 9CH dans le groupe traité est évalué par la mesure de la cinétique du volume tumoral et comparé au groupe témoin. Le volume de la tumeur est déterminé selon la formule suivante : v=1/2 A x B2 où A correspond à la plus large dimension de la tumeur alors que B correspond à la plus petite dimension de la tumeur (Wald M, Olejar T, Sebkova V, Zadinova M, Boubelik M, Pouckova P. Mixture of trypsin, chymotrypsin and papain reduces formation of metastases and extends survival time of C57B16 mice with syngeneic melanoma B16. Cancer Chemother Pharmacol. 2001 Jul 47; 47:S16-22). The effect of Ruta graveolens 9CH in the treated group is assessed by measuring the kinetics of tumor volume and compared to the control group. The volume of the tumor is determined according to the following formula: v = 1 / 2A x B2 where A corresponds to the widest dimension of the tumor while B corresponds to the smallest dimension of the tumor (Wald M, Olejar T, Sebkova V, Zadinova M, Boubelik M, Pouckova P. Mixture of trypsin, chymotrypsin and papain reduced formation of metastases and extends survival time of C57B16 mice with syngeneic melanoma B16, Cancer Chemother Pharmacol 2001, 47: 47: S16-22).
L'effet de Ruta graveolens 9CH dans le groupe traité est aussi évalué par le calcul du temps de survie des souris par rapport au groupe témoin, sachant que la taille de la tumeur ne peut pas excéder 1000 mm3. Une souris dont le volume dépasserait 1000 mm3 est sacrifiée et considérée comme morte. The effect of Ruta graveolens 9CH in the treated group is also evaluated by the calculation of the survival time of the mice compared to the control group, knowing that the size of the tumor can not exceed 1000 mm3. A mouse whose volume exceeds 1000 mm3 is sacrificed and considered dead.
Pour cette étude in vivo, les volumes tumoraux sont comparés entre le groupe traité Ruta graveolens 9CH et le groupe témoin à l'aide d'un test non paramétrique u-test Mann et Whitney. For this in vivo study, tumor volumes are compared between the Ruta graveolens 9CH treatment group and the control group using a non-parametric Mann-Whitney u-test.
Le résultat de l'effet de Ruta graveolens 9CH sur la progression tumorale in vivo est présenté à J14 (soit 14 jours après l'injection des cellules tumorales) sur la figure 1. Ruta graveolens 9CH ralentit le développement tumoral de manière statistiquement significative par rapport à un traitement témoin. The result of the effect of Ruta graveolens 9CH on tumor progression in vivo is presented on D14 (ie 14 days after injection of tumor cells) in Figure 1. Ruta graveolens 9CH slows tumor development statistically significantly compared to to a control treatment.
Le résultat de l'effet de Ruta graveolens 9CH sur la survie des animaux est présenté sur la 20 figure 2. Nous montrons ici que Ruta graveolens 9CH améliore le temps de survie des animaux par rapport au groupe témoin traité avec H2O. The result of the effect of Ruta graveolens 9CH on animal survival is shown in Figure 2. We show here that Ruta graveolens 9CH improves the survival time of animals compared to the control group treated with H2O.
4. Mesure de l'effet de Ruta graveolens 9CH in vivo après injection intraveineuse de cellules tumorales 25 Cette mesure vise à étudier les effets de Ruta graveolens 9CH sur le développement de métastases pulmonaires in vivo par l'évaluation du nombre de nodules présents au niveau des poumons après l'injection de cellules tumorales par voie intraveineuse. Les souris utilisées appartiennent à la lignée C57BL/6 et sont regroupées par lots de 8 individus. A JO, on leur injecte au niveau de la veine de la queue un volume de 100 gl d'une solution 30 contenant 2.5.105 de cellules B16F10 (cellules de mélanome murin). La solution d'injection contient du NaCl 0,85%. Dans le groupe témoin, on injecte chaque matin et à chaque souris 100 µl d'eau stérile contenue dans une ampoule à usage unique par voie intra péritonéale (IP) à raison d'une injection/jour tout au long du suivi de la progression tumorale. 35 Dans le groupe traité, on injecte chaque matin et à chaque souris 100 gl de Ruta graveolens 9CH contenue dans une ampoule à usage unique par voie intra péritonéale (IP) à raison d'une injection/jour tout au long du suivi de la progression tumorale. 5 L'effet de Ruta graveolens 9CH dans le groupe traité est évalué par le nombre de nodules présents au niveau des poumons de la souris et comparé au groupe témoin. Le nombre de nodules pulmonaires est compté visuellement par l'expérimentateur après prélèvement des poumons. 4. Measurement of the effect of Ruta graveolens 9CH in vivo after intravenous injection of tumor cells This measure aims at studying the effects of Ruta graveolens 9CH on the development of pulmonary metastases in vivo by evaluating the number of nodules present at the level of the tumor. lungs after injection of tumor cells intravenously. The mice used belong to the C57BL / 6 line and are grouped in batches of 8 individuals. At 0, a volume of 100 μl of a solution containing 2.5 × 10 5 B16F10 cells (murine melanoma cells) is injected into the tail vein. The injection solution contains 0.85% NaCl. In the control group, 100 μl of sterile water contained in a single-use ampoule intraperitoneally (IP) is injected every morning and into each mouse at the rate of one injection / day throughout the monitoring of the tumor progression. . In the treated group, 100 gl of Ruta graveolens 9CH, contained in a single-use ampule intraperitoneally (IP), were injected every morning and with each mouse at the rate of one injection per day throughout the follow-up of the progression. tumor. The effect of Ruta graveolens 9CH in the treated group is evaluated by the number of nodules present in the lungs of the mouse and compared to the control group. The number of pulmonary nodules is counted visually by the experimenter after removal of the lungs.
Le résultat de l'effet de Ruta graveolens 9CH sur la progression tumorale in vivo est présenté à J16 (soit 16 jours après l'injection des cellules tumorales) sur la figure 3. Ruta graveolens 9CH diminue significativement le nombre de nodules pulmonaires par rapport à un traitement témoin. The result of the effect of Ruta graveolens 9CH on tumor progression in vivo is presented on D16 (ie 16 days after the injection of tumor cells) in Figure 3. Ruta graveolens 9CH significantly decreases the number of pulmonary nodules compared to a control treatment.
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