FR2902109A1

FR2902109A1 - Sorting bacteria according to aerobic characteristics for degradation of hydrocarbons, comprises defining general characteristics of selected bacteria, and determining a Gram stain test result, and isolating a bacteria

Info

Publication number: FR2902109A1
Application number: FR0605045A
Authority: FR
Inventors: Patrick Duboys
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2006-06-07
Filing date: 2006-06-07
Publication date: 2007-12-14

Abstract

The method for sorting bacteria according to aerobic characteristics for degradation of hydrocarbons, comprises defining (1) general characteristics of selected bacteria, determining a Gram stain test result, isolating (4) a bacteria among other bacterias according to a first order of size of the selected bacteria, successively or concurrently subjecting the selected bacteria to oxygen and Gram stain test (5), and performing an initial identification such as marking and/or a first selection of bacterias according to the results of the behavioral analysis. The method for sorting bacteria according to aerobic characteristics for degradation of hydrocarbons, comprises defining (1) general characteristics of selected bacteria, determining a Gram stain test result, isolating (4) a bacteria among other bacterias according to a first order of size of the selected bacteria, successively or concurrently subjecting the selected bacteria to oxygen and Gram stain test (5), performing an initial identification such as marking and/or a first selection of bacterias according to the results of the behavioral analysis, performing a specific identification for each type of behavior responding to aerobic characteristics of bacteria, mixing bacteria with hydrocarbons to evoke a voluntary action of the selected bacteria and exposing the bacteria to Gram stain test, performing a second identification such as marking and/or second selection of bacterias, statistically analyzing marked bacterias to identify whether the selected bacteria rises above a predetermined threshold, and subjecting the selected or extracted bacteria to an operational phase. Other behavioral analysis of bacterias is produced by subjecting them to other oxygen and Gram stain test. The size of the bacteria is determined using the nature of the activities of individuals working in a specific field. The oxygen and Gram stain test are constituted by a reception of a targeted specific file comprising a questionnaire for collecting information. The targeted specific file is controlled by a communication system such as internet, telephone or fax. The questionnaire is transmitted and completed through internet. The marking comprises hybridization of a fluorescent probe. The bacteria is first extracted and then cultured.

Description

10 La présente invention concerne un procédé pour le tri sélectif en vueThe present invention relates to a method for selective sorting with a view to

d'un traitement d'une population d'entités par exemple des être vivants, selon des critères prédéterminés. a treatment of a population of entities, for example living beings, according to predetermined criteria.

D'une manière générale, on sait que pour effectuer un tri sélectif d'entités ou 15 de personnes, il existe de nombreuses techniques. La technique la plus courante consiste à effectuer pour chacune des entités, la recherche d'au moins un paramètre spécifique de l'entité que l'on désire sélectionner voire même une combinaison de paramètres, puis de procéder à l'extraction de cette entité lorsque cette détection s'est avérée positive. La nature des paramètres peut être 20 très variée, elle peut ainsi à titre d'exemple avoir pour objet : la taille, le poids, la couleur, la composition, la réponse spectrale à un rayonnement, la température, les propriétés physiques, les propriétés chimiques, etc. In general, it is known that in order to selectively sort entities or people, there are many techniques. The most common technique is to perform for each of the entities, the search for at least one specific parameter of the entity that one wishes to select or even a combination of parameters, then proceed to the extraction of this entity when this detection proved positive. The nature of the parameters can be very varied, it can thus for example be the object: size, weight, color, composition, spectral response to radiation, temperature, physical properties, properties chemical, etc.

Néanmoins, cette solution ne convient pas dans de nombreuses applications, 25 notamment dans le cas où le processus de détection s'avère complexe si l'on veut obtenir un résultat significatif et dans le cas où le nombre d'entités à trier est très élevé, étant entendu que dans certaines hypothèses le processus de détection n'est pas envisageable. Ainsi, par exemple, il est hors de question d'effectuer un tri parmi d'importantes populations de microorganismes à partir 30 de critères liés aux séquences d'ADN. Il existe également une technique consistant à faire subir par les entités à tester des stimuli et à analyser le 1 comportement de ces entités en réponse à ces stimuli. La sélection s'effectue alors en prenant en compte un (ou plusieurs) type(s) de réponse à ces stimuli. Cette solution s'avère efficace. Néanmoins, le plus souvent, elle manque de précision. Une autre solution consiste à placer les entités dans un contexte réactif qui va déclencher au niveau des entités recherchées une action volontaire. La détection de cette action volontaire permettra alors d'effectuer cette sélection. Ici également, il s'agit d'un processus bien souvent imprécis. 10 L'invention a donc plus particulièrement pour but de proposer une technique de tri qui permet de cumuler les avantages des solutions précédemment évoquées sans en présenter les inconvénients. En particulier, elle vise à permettre le tri d'entités difficilement différenciables dans des proportions 15 relativement importantes. Nevertheless, this solution is not suitable in many applications, especially in the case where the detection process proves to be complex if we want to obtain a significant result and in the case where the number of entities to be sorted is very high. , it being understood that in certain cases the detection process is not conceivable. Thus, for example, it is out of the question to sort through large populations of microorganisms from criteria related to DNA sequences. There is also a technique of subjecting entities to test stimuli and analyzing the behavior of these entities in response to these stimuli. The selection is then made taking into account one (or more) type (s) of response to these stimuli. This solution is effective. Nevertheless, most often, it lacks precision. Another solution consists in placing the entities in a reactive context which will trigger at the level of the entities sought a voluntary action. The detection of this voluntary action will then make this selection. Here too, it is a very often imprecise process. The object of the invention is therefore more particularly to propose a sorting technique which makes it possible to combine the advantages of the previously mentioned solutions without presenting the disadvantages thereof. In particular, it aims to allow the sorting of entities that are difficult to differentiate in relatively large proportions.

Elle propose donc un procédé de tri comportant une séquence opératoire et qui comprend les étapes suivantes : • la définition de critères caractéristiques généraux que doivent satisfaire 20 des entités recherchées, la détermination de critères absolus susceptibles à eux seuls d'identifier les entités recherchées ainsi que la définition de critères de sélection classiques (tels que par exemple, la taille, le poids, la composition, la couleur, etc.) ; • l'isolation d'une population initiale parmi une population générale selon 25 un premier ordre de sélection de type classique, à l'intérieur de laquelle il existe une présomption de présence d'entités recherchées ; • la soumission des entités de la population initiale à des stimuli et l'analyse comportementale de ces entités en réponse à ces stimuli ; • une première identification pouvant consister en un marquage et/ou une 30 première sélection des entités en fonction des résultats de l'analyse comportementale ;5 o une identification spécifique étant prévue pour chacun des types de comportement recherchés répondant à au moins un critère général ; o la sélection s'opérant par extraction sélective des entités ayant un comportement recherché répondant à au moins un critère absolu ; • la création d'un contexte réactif apte à provoquer une action volontaire des entités recherchées et l'exposition des entités de la population initiale ou des entités n'ayant pas eu un comportement répondant à au moins un critère absolu ; • une analyse comportementale des entités ; • une deuxième identification pouvant consister en un marquage et/ou une deuxième sélection des entités ayant manifesté une action volontaire dans ledit contexte ; o une identification spécifique étant prévue pour chacun des types d'action volontaire correspondant à au moins un critère général ; o la sélection s'opérant par extraction sélective des entités recherchées ayant une action correspondant à au moins un critère absolu ; • une analyse statistique des entités marquées de manière à identifier les entités dont la probabilité de constituer une entité recherchée s'élève au-dessus d'un seuil prédéterminé ; • la sélection des entités ainsi identifiées ; • la soumission des entités sélectionnées ou extraites à une phase opérationnelle. It therefore proposes a method of sorting comprising an operating sequence and which comprises the following steps: the definition of general characteristic criteria which the desired entities must satisfy, the determination of absolute criteria capable alone of identifying the entities sought as well as the definition of classic selection criteria (such as, for example, size, weight, composition, color, etc.); • isolating an initial population from a general population according to a first conventional type of selection order, within which there is a presumption of presence of searched entities; • the submission of the entities of the initial population to stimuli and the behavioral analysis of these entities in response to these stimuli; A first identification which may consist of a marking and / or a first selection of the entities according to the results of the behavioral analysis; a specific identification being provided for each of the desired types of behavior corresponding to at least one general criterion; the selection taking place by selective extraction of the entities having a desired behavior corresponding to at least one absolute criterion; • the creation of a reactive context capable of provoking a voluntary action of the entities sought and the exposure of entities of the initial population or entities that have not had a behavior meeting at least one absolute criterion; • a behavioral analysis of the entities; • a second identification that may consist of a marking and / or a second selection of the entities having manifested a voluntary action in said context; o a specific identification being provided for each type of voluntary action corresponding to at least one general criterion; the selection taking place by selective extraction of the searched entities having an action corresponding to at least one absolute criterion; • a statistical analysis of the entities marked to identify the entities whose probability of constituting a desired entity rises above a predetermined threshold; • the selection of the entities thus identified; • the submission of selected or extracted entities to an operational phase.

Avantageusement, les entités de la population initiale peuvent être successivement ou de manière concomitante soumises auxdits stimuli et exposées audit contexte réactif.30 -4- De manière avantageuse, la détermination desdits stimuli et/ou dudit contexte réactif et/ou desdits critères de sélection classiques peut être effectuée en fonction de la nature de la population générale. Advantageously, the entities of the initial population may be successively or concomitantly subjected to said stimuli and exposed to said reactive context. Advantageously, the determination of said stimuli and / or of said reactive context and / or said conventional selection criteria. can be done depending on the nature of the general population.

Avantageusement, le procédé selon l'invention pourra comprendre d'autres analyses comportementales des entités pouvant résulter de la soumission de ces entités à d'autres stimuli et/ou à d'autres contextes réactifs. Advantageously, the method according to the invention may comprise other behavioral analyzes of the entities that may result from the submission of these entities to other stimuli and / or to other reactive contexts.

De manière avantageuse, les étapes du procédé selon l'invention peuvent être réalisées de manière itérative de plus, la détermination desdits stimuli et/ou dudit contexte réactif et/ou desdits critères de sélection classiques peut être affinée après chaque réalisation de l'ensemble desdites étapes du procédé. Advantageously, the steps of the method according to the invention can be performed iteratively moreover, the determination of said stimuli and / or said reactive context and / or said conventional selection criteria can be refined after each embodiment of all of said steps of the process.

Des modes d'exécution de l'invention seront décrits ci-après, à titre d'exemples 15 non limitatifs, avec référence aux dessins annexés, dans lesquels : Embodiments of the invention will be described hereinafter by way of nonlimiting examples with reference to the accompanying drawings, in which:

La figure 1 est une représentation sous forme d'organigramme du procédé selon l'invention appliqué à un tri de bactéries utilisables pour dégrader des hydrocarbures ; La figure 2 est une représentation sous forme d'organigramme du procédé selon l'invention appliqué à des personnes physiques. FIG. 1 is a representation in flowchart form of the process according to the invention applied to a sort of bacteria that can be used to degrade hydrocarbons; Figure 2 is a flowchart representation of the method according to the invention applied to natural persons.

L'exemple de la figure 1 est une représentation d'un organigramme illustrant 25 l'application du procédé selon l'invention au tri de bactéries utilisables pour dégrader des hydrocarbures. The example of FIG. 1 is a representation of a flowchart illustrating the application of the method according to the invention to the sorting of bacteria that can be used to degrade hydrocarbons.

Ce procédé comprend les étapes suivantes : • la détermination d'une population générale de bactéries et une 30 définition de critères caractéristiques généraux tels que le caractère aérobie des bactéries à sélectionner, une détermination de critères 20 absolus tels qu'un résultat au test de coloration de Gram, en effet les bactéries Gram (-), c'est-à-dire celles n'ayant pas conservé la coloration violette sous l'action de l'alcool ou de l'acétone, présentent une bonne aptitude pour la dégradation des hydrocarbures ainsi qu'une définition de critères de sélection classiques tels que la taille des bactéries recherchées (Bloc 1), • une isolation d'une population initiale (Bloc 4) parmi une population générale (Bloc 2) selon un premier ordre de sélection de type classique tel que la taille (Bloc 3), population à l'intérieur de laquelle il existe une présomption de présence de bactéries recherchées ; • une soumission des bactéries de la population initiale à des stimuli qui sont par exemple la présence d'oxygène et le test de coloration de Gram (Bloc 5) ; • une analyse comportementale de ces bactéries en réponse à ces stimuli (Bloc 6) selon que leur comportement répond à au moins un critère général, caractère aérobie, (Blocs 7-8) ou à au moins un critère absolu, des bactéries Gram (-) (Blocs 9-10) ou à aucun desdits critères (Bloc 11) ; • un premier marquage par exemple par hybridation d'une sonde fluorescente (Bloc 12) et/ou une première sélection (Bloc 13) des bactéries en fonction des résultats de l'analyse comportementale ; o le marquage spécifique étant prévu pour chacun des types de comportement recherchés répondant à au moins un critère général, ici les bactéries aérobies (Bloc 12) ; o la sélection s'opérant par extraction sélective des bactéries ayant un comportement recherché répondant à au moins un critère absolu, ici une coloration négative après le test de coloration de Gram (Bloc 13) puis une éventuelle mise en culture (Bloc 14) ; • la mise en présence des bactéries de la population initiale ou des bactéries n'ayant pas eu un comportement répondant à au moins un -6- critère absolu avec des hydrocarbures afin de provoquer une réaction de dégradation desdits hydrocarbures (Bloc 15) ; • une analyse comportementale des bactéries (Bloc 16) selon que leur comportement répond à au moins un critère général (Blocs 17-18) tel qu'une réaction de dégradation partielle des hydrocarbures ou à au moins un critère absolu (Blocs 19-20) tels qu'une réaction totale de dégradation des hydrocarbures ; • un deuxième marquage par exemple par hybridation d'une sonde fluorescente (Bloc 21) et/ou une deuxième sélection (Bloc 22) des bactéries ayant effectuées une dégradation des hydrocarbures ; o le marquage spécifique des bactéries étant prévu pour chaque type de bactéries n'ayant pas effectuée une réaction totale de dégradation (Bloc 21) ; o la sélection s'opérant par extraction sélective des bactéries ayant effectuées une réaction totale de dégradation (Bloc 22) puis une éventuelle mise en culture desdites bactéries (Bloc 23) ; • une analyse statistique des bactéries marquées de manière à identifier les bactéries dont la réaction de dégradation partielle peut correspondre à l'action recherchée qui est la dépollution, c'est-à-dire qui ne produisent pas de produits de dégradation plus polluants que les hydrocarbures (Bloc 24) ; • l'extraction des bactéries ainsi identifiées (Bloc 25) puis une éventuelle mise en culture desdites bactéries identifiées (Bloc 26) ; • la soumission des bactéries sélectionnées ou extraites à une phase opérationnelle consistant en une dépollution (Bloc 27). This method comprises the following steps: the determination of a general population of bacteria and a definition of general characteristic criteria such as the aerobic nature of the bacteria to be selected, a determination of absolute criteria such as a color test result. of Gram, in fact Gram (-) bacteria, that is to say those which have not retained the violet coloration under the action of alcohol or acetone, have a good aptitude for the degradation of hydrocarbons and a definition of conventional selection criteria such as the size of the bacteria sought (Block 1), • an isolation of an initial population (Block 4) among a general population (Block 2) according to a first selection order of conventional type such as size (Block 3), population within which there is a presumption of presence of desired bacteria; • a submission of the bacteria of the initial population to stimuli which are for example the presence of oxygen and the Gram staining test (Block 5); • a behavioral analysis of these bacteria in response to these stimuli (Block 6) according to whether their behavior meets at least one general criterion, aerobic character (Blocks 7-8) or at least one absolute criterion, Gram bacteria (- ) (Blocks 9-10) or none of the said criteria (Block 11); A first labeling, for example by hybridization of a fluorescent probe (Block 12) and / or a first selection (Block 13) of the bacteria according to the results of the behavioral analysis; the specific marking being provided for each of the desired types of behavior meeting at least one general criterion, in this case aerobic bacteria (Block 12); the selection taking place by selective extraction of the bacteria having a desired behavior corresponding to at least one absolute criterion, here a negative staining after the Gram stain test (Block 13) and then a possible culturing (Block 14); • bringing into contact with the bacteria of the initial population or bacteria that did not have a behavior meeting at least one absolute criterion with hydrocarbons in order to cause a degradation reaction of said hydrocarbons (Block 15); • a behavioral analysis of bacteria (Block 16) according to whether their behavior meets at least one general criterion (Blocks 17-18) such as a partial degradation reaction of hydrocarbons or at least one absolute criterion (Blocks 19-20) such as a total hydrocarbon degradation reaction; A second labeling, for example by hybridization of a fluorescent probe (Block 21) and / or a second selection (Block 22) of the bacteria having carried out a degradation of the hydrocarbons; the specific labeling of the bacteria being provided for each type of bacteria that has not performed a total degradation reaction (Block 21); o the selection being carried out by selective extraction of the bacteria having carried out a total degradation reaction (Block 22) then a possible culturing of said bacteria (Block 23); • a statistical analysis of the labeled bacteria in order to identify the bacteria whose partial degradation reaction may correspond to the desired action which is the depollution, that is to say which do not produce degradation products more polluting than the hydrocarbons (Block 24); Extraction of the bacteria thus identified (block 25) and then possible culturing of said identified bacteria (Block 26); • the submission of the selected or extracted bacteria to an operational phase consisting of a depollution (Block 27).

Il est à noter que la mise en culture (Blocs 14, 23, 26) est recommandée en particulier lorsque l'extraction consiste en un prélèvement d'un échantillon. It should be noted that the culturing (Blocks 14, 23, 26) is recommended especially when the extraction consists of a sampling of a sample.

Selon une autre variante d'exécution de l'invention, tel que cela est illustré sur la figure 2, le procédé de tri selon l'invention peut comprendre une séquence opératoire comprenant les étapes suivantes : • la détermination d'une population générale pouvant être constituée par 5 des personnes physiques (Bloc 2') ; • la définition de critères de sélection classique (Bloc 3'), à titre d'exemple, ces critères de sélection classiques peuvent être déterminés en tenant compte de la nature des activités d'organismes exerçant dans un domaine spécifique tel que le jardinage ainsi, si un entreprise A est 10 spécialisée dans les outils de jardin, une entreprise B dans les engrais, un entreprise C dans les abris de jardin et une entreprise D dans l'arrosage, ces critères de sélection classique pourront être constitués par le fait de posséder un jardin dans une résidence située dans une zone géographique déterminée ; 15 • la définition de critères caractéristiques généraux (Bloc 1') que doivent satisfaire les entités recherchées parmi la population générale ; à titre d'exemple, ces critères caractéristiques généraux peuvent comprendre : o une première catégorie de critères caractéristiques généraux pouvant être constituée par le fait d'avoir plus de trente ans ou de 20 constituer un foyer de plus de deux personnes ou d'avoir acquis récemment une résidence ; o une seconde catégorie de critères caractéristiques généraux pouvant être constituée par le fait d'avoir répondu à une invitation à une activité relationnelle ; 25 • la détermination de critères absolus (Bloc 1') susceptibles à eux seuls d'identifier les entités recherchées, ces critères absolus pouvant être par exemple, le fait de manifester son intention d'acquérir un bien ayant un rapport avec le jardinage ; • l'isolation d'une population initiale parmi ladite population générale 30 (Bloc 2') à l'aide des critères de sélection classique ainsi, dans cet exemple, cette population initiale est constituée de toutes les personnes -8- physiques possédant un jardin dans une résidence située dans une zone géographique déterminée ; • la soumission des entités de la population initiale à des stimuli (Bloc 5') et l'analyse comportementale (Bloc 6') de ces entités en réponse à ces stimuli, en l'espèce ces stimuli peuvent être constitués par la réception d'un dossier spécifique consacré aux jardins résidentiels et qui comprend un mécanisme de collecte d'informations tel qu'un questionnaire ; toutefois, selon une variante d'exécution de l'invention, l'envoi dudit dossier spécifique peut être subordonné à la transmission préalable d'un questionnaire rempli du type susdit ; • une première identification (Bloc 12') et/ou une première sélection (Bloc 13') des entités en fonction des résultats de l'analyse comportementale ; o une identification spécifique (Bloc 12') étant prévue pour chacun des types de comportement recherchés répondant à au moins un critère général (Bloc 7' et 8') de ladite première catégorie de cette façon, les noms des personnes composant un foyer de plus de deux personnes, ceux qui ont plus de trente ans, ainsi que ceux qui ont récemment acquis une résidence pourront faire l'objet de ladite identification spécifique (Bloc 12') qui pourra se traduire par exemple par la constitution d'une liste spécifique ; o la sélection s'opérant par extraction sélective (Bloc 13') des entités ayant un comportement recherché répondant à au moins un critère absolu (Bloc 9' et 10') ainsi, dans cet exemple, les noms des personnes ayant manifesté leur intention d'acquérir un bien ayant un rapport avec le jardinage seront extraits ; • la création d'un contexte réactif (Bloc 15') apte à provoquer une action volontaire des entités recherchées et l'exposition des entités de la population initiale ou des entités n'ayant pas eu un comportement répondant à au moins un critère absolu ; ce contexte réactif (Bloc 15') peut consister, à titre d'exemple, par des invitations à des activités -9- relationnelles telles que des réunions d'informations, des séminaires ciblés, de cocktails, etc. ; • une analyse comportementale des entités (Bloc 16') ; • une deuxième identification (Bloc 21') et/ou une deuxième sélection 5 (Bloc 22') des entités ayant manifesté une action volontaire dans ledit contexte ; o une identification spécifique (Bloc 21') étant prévue pour chacun des types d'action volontaire correspondant à au moins un critère général (Bloc 17' et 18') de ladite seconde catégorie ainsi, les 10 noms des personnes qui ont répondu auxdites invitations pourront faire l'objet de ladite identification spécifique (Bloc 21') ; o la sélection (Bloc 22') s'opérant par extraction sélective des entités recherchées ayant une action correspondant à au moins 15 un critère absolu (Bloc 19' et 20') de cette façon, les noms des personnes ayant manifesté leur intention d'acquérir un bien ayant un rapport avec le jardinage seront extraits ; • une analyse statistique (Bloc 24') des entités marquées de manière à identifier les entités dont la probabilité de constituer une entité 20 recherchée s'élève au-dessus d'un seuil prédéterminé en l'espèce, cette analyse peut consister à identifier les noms des personnes répondant à un nombre déterminé de critères généraux de la première catégorie et au critère général de la seconde catégorie ; • la sélection (Bloc 25') des entités ainsi identifiées ; 25 • la soumission des entités sélectionnées ou extraites à une phase opérationnelle (Bloc 27'), celleci pouvant consister à des transmissions régulières d'offres préférentielles. - 10 - According to another variant embodiment of the invention, as illustrated in FIG. 2, the sorting method according to the invention may comprise an operating sequence comprising the following steps: the determination of a general population that can be consisting of 5 natural persons (Block 2 '); • the definition of classic selection criteria (Block 3 '), for example, these classic selection criteria can be determined taking into account the nature of the activities of organizations operating in a specific field such as gardening, if a company A is specialized in garden tools, a company B in fertilizers, a company C in garden sheds and a company D in watering, these classic selection criteria may be constituted by the fact of owning a garden in a residence located in a specific geographical area; • the definition of general characteristic criteria (Block 1 ') to be met by the desired entities among the general population; for example, these general characteristic criteria may include: o a first category of general characteristic criteria which may be constituted by the fact of having more than thirty years of age or of constituting a home of more than two persons or having acquired recently a residence; o a second category of general characteristic criteria that may be constituted by having responded to an invitation to a relational activity; 25 • the determination of absolute criteria (Block 1 ') which alone can identify the entities sought, these absolute criteria being, for example, the fact of manifesting its intention to acquire a property related to gardening; • isolation of an initial population from said general population (Block 2 ') using conventional selection criteria, and in this example, this initial population consists of all physical persons with a garden in a residence located in a specific geographical area; • the submission of entities of the initial population to stimuli (Block 5 ') and behavioral analysis (Block 6') of these entities in response to these stimuli, in this case these stimuli can be constituted by the reception of a specific file on residential gardens that includes a mechanism for collecting information such as a questionnaire; however, according to an alternative embodiment of the invention, the sending of said specific file may be subject to the prior transmission of a completed questionnaire of the aforementioned type; • a first identification (Block 12 ') and / or a first selection (Block 13') of the entities according to the results of the behavioral analysis; o a specific identification (Block 12 ') being provided for each of the desired behavioral types satisfying at least one general criterion (Block 7' and 8 ') of said first category in this way, the names of the persons making up one more household two persons, those over thirty years of age, as well as those who have recently acquired a residence, may be the subject of the said specific identification (Block 12 ') which may be translated, for example, by the constitution of a specific list; o selection by selective extraction (Block 13 ') of entities having a desired behavior corresponding to at least one absolute criterion (Block 9' and 10 ') and, in this example, the names of persons who have indicated their intention to acquire a property related to gardening will be extracted; • the creation of a reactive context (Block 15 ') capable of provoking a voluntary action of the entities sought and the exposure of entities of the initial population or entities that have not had a behavior meeting at least one absolute criterion; this reactive context (Block 15 ') can consist, for example, of invitations to relational activities such as information meetings, targeted seminars, cocktails, etc. ; • a behavioral analysis of the entities (Block 16 '); A second identification (Block 21 ') and / or a second selection (Block 22') of the entities having manifested a voluntary action in said context; o a specific identification (Block 21 ') being provided for each of the types of voluntary action corresponding to at least one general criterion (Block 17' and 18 ') of said second category and the names of the persons who responded to said invitations may be subject to the said specific identification (Block 21 '); o the selection (Block 22 ') operating by selective extraction of the searched entities having an action corresponding to at least one absolute criterion (Block 19' and 20 ') in this way, the names of the persons who have indicated their intention to acquire a property related to gardening will be extracted; • a statistical analysis (Block 24 ') of the entities marked in order to identify the entities whose probability of constituting a desired entity rises above a predetermined threshold in this case, this analysis can consist in identifying the names of persons answering a fixed number of general criteria of the first category and the general criterion of the second category; • the selection (Block 25 ') of the entities thus identified; • the submission of selected or extracted entities to an operational phase (Block 27 '), which may consist of regular transmissions of preferential offers. - 10 -

Avantageusement, la commande dudit dossier spécial pourra s'effectuer par des moyens de communication tels qu'Internet, le téléphone, la télécopie. De plus, les questionnaires pourront être transmis et remplis par l'intermédiaire du réseau Internet. Advantageously, the order of said special file can be made by means of communication such as the Internet, telephone, fax. In addition, the questionnaires can be transmitted and filled via the Internet.

Claims

claims

1. A method of sorting comprising an operating sequence, characterized in that it comprises carrying out the following steps: the definition of general characteristic criteria (Block 3, 3 ') that must be satisfied by the entities sought, the determination of absolute criteria which by themselves to identify the desired entities as well as the definition of conventional selection criteria; • isolating an initial population (Block 2, 2 ') from a general population according to a first conventional type of selection order, within which there is a presumption of presence of searched entities; • Submission of the initial population entities to stimuli (Block 5, 5 ') and behavioral analysis (Block 6, 6') of these entities in response to these stimuli; • a first identification (Block 12, 12 ') which may consist of a marking and / or a first selection (Block 13, 13') of the entities according to the results of the behavioral analysis; a specific identification (Block 12, 12 ') being provided for each of the desired behavioral types responding to at least one general criterion (Block 7, 8 / Block 7', 8 '); o selection being carried out by selective extraction (Block 13, 13 ') of entities having a desired behavior corresponding to at least one absolute criterion (Block 9, 10 / Block 9', 10 '); 25 • the creation of a reactive context (Block 15, 15 ') able to provoke a voluntary action of the searched entities and the exposure of the entities of the initial population or entities that have not had a behavior corresponding to at least one absolute criterion; • a behavioral analysis of the entities (Block 16, 16 ') - 12 - • a second identification (Block 21, 21') which may consist of a marking and / or a second selection (Block 22, 22 ') of the entities that have demonstrated voluntary action in said context; o a specific identification (Block 21, 21 ') is provided for each type of voluntary action corresponding to at least one general criterion (Block 17, 18/17', 18 '); the selection (Block 22, 22 ') taking place by selective extraction of the searched entities having an action corresponding to at least one absolute criterion (Block 19, 20/19', 20 '); • a statistical analysis (Block 24, 24 ') of the entities marked so as to identify the entities whose probability of constituting a desired entity rises above a predetermined threshold; • the selection (Block 25, 25 ') of the entities thus identified; • the submission of selected or extracted entities to an operational phase (Block 27, 27 ').

2. Sorting method according to claim 1, characterized in that the entities of the initial population are successively or concomitantly subjected to said stimuli (Block 5, 5 ') and exposed to said reactive context (Block 15, 15').

3. Sorting method according to one of claims 1 and 2, characterized in that the determination of said stimuli and / or said reactive context and / or said conventional selection criteria is performed depending on the nature of the general population.

4. Sorting method according to one of the preceding claims, characterized in that it comprises other behavioral analyzes of entities that may result from the submission of these entities to other stimuli (Block 5, 5 ') and / or to other reactive contexts (Block 15, 15 ') .- 13 -

5. Sorting method according to one of the preceding claims, characterized in that: • the general population consists of natural persons; • conventional selection criteria are determined taking into account the nature of the activities of organizations operating in a specific area; • the general characteristic criteria comprise two distinct categories. 10

6. A method of sorting according to claim 5, characterized in that the stimuli are constituted by the receipt of a specific file targeted including a collection mechanism of information that can be a questionnaire. 15

7. Sorting method according to claim 6, characterized in that the order of said specific file is made by means of communication may be the Internet, telephone or fax more, the questionnaires are transmitted and filled by the intermediate of the Internet network, the sending of the specific file being subordinated to the prior referral of the completed information collection mechanism.

8. Sorting method according to one of the preceding claims, characterized in that: • the general population consists of bacteria, the general characteristic criteria include the aerobic nature of the bacteria to be selected and / or the partial degradation of hydrocarbons by the bacteria, the absolute criteria include a Gram stain test result and / or the total degradation of hydrocarbons by the bacteria, the conventional selection criteria include the size of the desired bacteria (Block 1), stimuli are the presence of oxygen and the Gram stain test (Block 5), • the reactive context is the presence of bacteria with hydrocarbons (Block 15).

9. Sorting method according to claim 8, characterized in that the labeling comprises the hybridization of a fluorescent probe (Blocks 12, 21). 10

10. A method of sorting according to claim 8, characterized in that the extraction of bacteria is followed by culturing said bacteria (Blocks 14, 23, 26).

11. Sorting method according to one of the preceding claims, characterized in that its steps are performed iteratively, the determination of said stimuli and / or said reactive context and / or said conventional selection criteria being refined after each embodiment of all of these steps.5