FR2891831A1

FR2891831A1 - Depolymerization of polysaccharides by ultrasound, useful for mixture of osidic chains, comprises depolymerizing the polysaccharides in the presence of hydrogen peroxide

Info

Publication number: FR2891831A1
Application number: FR0510379A
Authority: FR
Inventors: Jouault Sylvia Colliec; Nicolas Noiret; Anne Cecile Petit
Original assignee: ATRIUM BIOTECHNOLOGIES Inc; Institut Francais de Recherche pour lExploitation de la Mer (IFREMER); Ecole Nationale Superieure de Chimie de Rennes
Current assignee: ATRIUM BIOTECHNOLOGIES Inc; Institut Francais de Recherche pour lExploitation de la Mer (IFREMER); Ecole Nationale Superieure de Chimie de Rennes
Priority date: 2005-10-11
Filing date: 2005-10-11
Publication date: 2007-04-13

Abstract

Depolymerization of polysaccharides by ultrasound comprises depolymerizing the polysaccharides in the presence of hydrogen peroxide. An independent claim is included for a mixture of osidic chains obtained by the process.

Description

Procédé de dépolymérisation de polysaccharides par ultrasons La présenteUltrasonic polysaccharide depolymerization process

invention concerne le domaine des polysaccharides plus précisément les procédés de dépolymérisation par ultrasons des polysaccharides. Les polysaccharides sont en général des substances de poids molaire élevé. De nombreuses applications existent pour des chaînes osidiques obtenues par dépolymérisation de ces polysaccharides. Parmi les méthodes de dépolymérisation, la dépolymérisation par ultrasons a été utilisée avec succès pour dépolymériser différentes macromolécules comme l'ADN, le dextrane et des polysaccharides bactériens. On peut citer comme exemples EP0511932 et WO9722629. EP0511932 décrit un procédé de dépolymérisation par ultrasons à basse fréquence à une température comprise 20 entre 0 et 15 C. WO9722629 décrit un procédé à l'efficacité accrue de dépolymérisation par ultrasons de l'acide hyaluronique. La dépolymérisation s'effectue en présence de NaOC1 à une température de 4 C. Les rendements obtenus sont de 25 l'ordre de 60%. Au cours de la réaction de dépolymérisation, de nombreux produits présentant une structure osidique altérée sont formés; ce qui est indésirable et rend nécessaire des étapes ultérieures de purification. 30 Le but de la présente invention est de fournir un procédé de dépolymérisation par ultrasons de polysaccharides qui présente un rendement élevé, généralement supérieur à 90%. Un autre but de la présente invention est de fournir un procédé de dépolymérisation qui permet d'obtenir des polysaccharides de masse homogène tout en préservant leur composition en oses, c'est-à-dire tout en préservant leur structure osidique. The invention relates to the field of polysaccharides, more specifically ultrasonic depolymerization methods for polysaccharides. Polysaccharides are generally substances of high molar weight. Many applications exist for osidic chains obtained by depolymerization of these polysaccharides. Among the depolymerization methods, ultrasonic depolymerization has been successfully used to depolymerize various macromolecules such as DNA, dextran and bacterial polysaccharides. Examples which may be mentioned are EP0511932 and WO9722629. EP0511932 discloses a low frequency ultrasonic depolymerization process at a temperature of between 0 and 15 C. WO9722629 discloses a method with increased efficiency of ultrasonic depolymerization of hyaluronic acid. The depolymerization is carried out in the presence of NaOCl at a temperature of 4 C. The yields obtained are of the order of 60%. During the depolymerization reaction, many products having an altered osidic structure are formed; which is undesirable and necessitates subsequent purification steps. The object of the present invention is to provide a method of ultrasonic depolymerization of polysaccharides which has a high yield, generally greater than 90%. Another object of the present invention is to provide a depolymerization process which makes it possible to obtain polysaccharides of homogeneous mass while preserving their composition in oses, that is to say while preserving their osidic structure.

L'objet de la présente invention est un procédé de dépolymérisation par ultrasons de polysaccharides caractérisé en ce que la dépolymérisation a lieu en présence d' H2O2 . Les définitions qui suivent, permettront de mieux 15 définir les termes utilisés pour décrire la présente invention. Par exopolysaccharide (EPS), on entend un polysaccharide produit par un microorganisme et sécrété dans le milieu ou présent à la surface du 20 microorganisme. Par polysaccharide, on entend un polymère constitué d'oses. Ce polymère peut être ramifié ou non. Les polysaccharides se trouvent le plus souvent sous la forme d'un mélange de chaînes osidiques de différentes 25 tailles. Par Mn, on entend la masse molaire moyenne en nombre, à savoir la masse totale de toutes les chaînes osidiques dans un échantillon divisé par le nombre total des chaînes dans l'échantillon. 30 Mn = (E Ni Mi) / (E Ni) Mi représente la masse molaire de l'espèce i et Ni représente le nombre de molécules de l'espèce i. Par Mp, on entend la masse molaire moyenne en poids. Mp = (E Ni Mie) / (E Ni Mi) Par indice de polydispersité (Ip), on entend le rapport Mp/Mn. Cet indice permet de caractériser globalement la dispersité des masses molaires d'un polysaccharide. Par basse fréquence, on entend une fréquence comprise entre 10 et 40 kHz, typiquement 20 kHz. Par R(H202/EPS) ou ratio H2O2/EPS, on entend le rapport massique entre la quantité d'H2O2 et la quantité d'EPS introduite. The object of the present invention is a method of ultrasonic depolymerization of polysaccharides, characterized in that the depolymerization takes place in the presence of H 2 O 2. The following definitions will better define the terms used to describe the present invention. By exopolysaccharide (EPS) is meant a polysaccharide produced by a microorganism and secreted into the medium or present on the surface of the microorganism. By polysaccharide is meant a polymer consisting of monosaccharides. This polymer may be branched or unbranched. The polysaccharides are most often in the form of a mixture of osidic chains of different sizes. By Mn is meant the number average molecular weight, that is, the total mass of all of the saccharide chains in a sample divided by the total number of chains in the sample. Mn = (E Ni Mi) / (E Ni) Mi represents the molar mass of species i and Ni represents the number of molecules of species i. By Mp is meant the average molar mass by weight. Mp = (E Ni Mie) / (E Ni Mi) By polydispersity index (Ip) is meant the ratio Mp / Mn. This index makes it possible to characterize globally the dispersity of the molar masses of a polysaccharide. Low frequency means a frequency between 10 and 40 kHz, typically 20 kHz. By R (H2O2 / EPS) or H2O2 / EPS ratio is meant the mass ratio between the amount of H2O2 and the amount of EPS introduced.

Le procédé de dépolymérisation conforme à l'invention présente les avantages suivants : les rendements obtenus sont élevés, ils sont généralement supérieurs à 90%. Le procédé permet d'obtenir des polysaccharides de masse homogène et par conséquent les indices de polydispersité des produits obtenus sont faibles, c'est-à-dire toujours compris entre 1 et 5, en particulier compris entre 1,5 et 3. Les conditions de dépolymérisation étant douces, le procédé selon l'invention permet un contrôle aisé de la dépolymérisation. En effet, en choisissant la durée d'exposition aux ultrasons on peut contrôler la masse molaire moyenne en poids des chaînes osidiques obtenues, tout en préservant leur structure osidique. The depolymerization process according to the invention has the following advantages: the yields obtained are high, they are generally greater than 90%. The method makes it possible to obtain polysaccharides of homogeneous mass and consequently the polydispersity indices of the products obtained are low, that is to say always between 1 and 5, in particular between 1.5 and 3. The conditions Since the depolymerization process is gentle, the process according to the invention allows easy control of the depolymerization. Indeed, by choosing the duration of exposure to ultrasound can control the weight average molecular weight of the resulting glycoside chains, while preserving their osidic structure.

Le procédé de dépolymérisation conforme à l'invention et tel que décrit ci-dessus permet entre autre d'obtenir un mélange de chaînes osidiques présentant une masse molaire moyenne en poids comprise entre 80 000 et 120 000 g/mol et un indice de polydispersité compris entre 1 et 5, en particulier compris entre 1,5 et 3. The depolymerization process according to the invention and as described above makes it possible inter alia to obtain a mixture of chains having a weight average molecular weight of between 80 000 and 120 000 g / mol and an index of polydispersity included between 1 and 5, in particular between 1.5 and 3.

Les procédés conformes à l'invention peuvent mettre en oeuvre des composés tels que des sels ou des métaux et/ou comprendre des étapes de purification supplémentaires. The processes according to the invention can use compounds such as salts or metals and / or comprise additional purification steps.

Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, le procédé de dépolymérisation conforme à l'invention ne met pas en oeuvre des composés tels que des sels ou des métaux, composés qui peuvent être indésirables pour certaines applications. Selon un mode préféré de réalisation, dans le cas où le procédé ne met pas en œuvre de métaux, les phénomènes de "peeling", c'est-à-dire d'hydrolyse, sont fortement réduits, si bien qu'aucune étape supplémentaire destinée à stabiliser le mélange de chaînes osidiques obtenu n'est requise. According to a preferred embodiment of the invention, the depolymerization process according to the invention does not use compounds such as salts or metals, compounds which may be undesirable for certain applications. According to a preferred embodiment, in the case where the process does not use metals, the phenomena of "peeling", that is to say hydrolysis, are greatly reduced, so no additional step intended to stabilize the mixture of chains of glycosides obtained is required.

Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, une étape de purification supplémentaire n'est pas 25 nécessaire. According to a preferred embodiment of the invention, an additional purification step is not necessary.

Selon un mode de mise en œuvre de la présente invention, la fréquence des ultrasons utilisée au cours du procédé dépolymérisation est comprise entre 10 et 40 30 kHz, préférentiellement 20 kHz. According to one embodiment of the present invention, the ultrasound frequency used during the depolymerization process is between 10 and 40 kHz, preferably 20 kHz.

Selon un mode de réalisation de l'invention, au cours du procédé dépolymérisation H2O2 est ajouté de manière continue au cours de la réaction de dépolymérisation. According to one embodiment of the invention, during the depolymerization process H2O2 is added continuously during the depolymerization reaction.

Typiquement le rapport massique entre la quantité d'H2O2 et la quantité de polysaccharides introduite est compris entre 0,1 et 5, en particulier compris entre 0,3 et 1,5. Typically the mass ratio between the amount of H2O2 and the amount of polysaccharides introduced is between 0.1 and 5, in particular between 0.3 and 1.5.

Selon un mode de réalisation particulier, la réaction de dépolymérisation a lieu à pH neutre, c'est-à-dire à un pH compris entre 6,5 et 7,5. According to a particular embodiment, the depolymerization reaction takes place at neutral pH, that is to say at a pH of between 6.5 and 7.5.

Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, la concentration initiale en polysaccharide est comprise entre 0,5 g/l et 10 g/l, en particulier comprise entre 2 g/l et 7 g/l. According to a particular embodiment of the invention, the initial concentration of polysaccharide is between 0.5 g / l and 10 g / l, in particular between 2 g / l and 7 g / l.

Lorsque les réactions sont terminées, les chaînes osidiques obtenues à la suite de la dépolymérisation peuvent être recueillies par toute technique appropriée bien connue de l'homme du métier telle que par exemple l'ultrafiltration sur membrane, la précipitation. Une fois recueillies, les chaînes osidiques peuvent être lyophilisées. When the reactions are complete, the oside chains obtained as a result of the depolymerization can be collected by any appropriate technique well known to those skilled in the art such as, for example membrane ultrafiltration, precipitation. Once collected, the saccharide chains can be lyophilized.

Selon un mode de réalisation de l'invention, les polysaccharides utilisés sont des exopolysaccharides (EPS). According to one embodiment of the invention, the polysaccharides used are exopolysaccharides (EPS).

Selon un sous mode de réalisation de l'invention il s'agit d'exopolysaccharides provenant de bactéries marines mésophiles issues du milieu hydrothermal profond, en particulier il peut s'agir de bactéries du genre Alteromonas ou Vibrio, ou plus précisément des bactéries Alteromonas macleodii (par exemple les souches HYD657 et MS907 (J Appl Microbiol. 2002;93(2):310-5 et Curr Microbiol. 2003 Jun; 46(6):448-52)), Alteromonas infernus (par exemple la souche GY785 (J Appl Microbiol. 1997 Apr;82(4):422-430)), ou Vibrio diabolicus (par exemple la souche HE800 (Int J Syst Bacteriol. 1997 Oct;47(4):989-95)). According to one embodiment of the invention, these are exopolysaccharides derived from mesophilic marine bacteria originating from the deep hydrothermal medium, in particular they may be bacteria of the genus Alteromonas or Vibrio, or more precisely bacteria Alteromonas macleodii. (e.g., strains HYD657 and MS907 (J Appl Microbiol., 2002; 93 (2): 310-5 and Curr Microbiol, 2003 Jun; 46 (6): 448-52)), Alteromonas infernus (e.g. strain GY785 ( J Appl Microbiol 1997 Apr 82 (4): 422-430)), or Vibrio diabolicus (e.g., HE800 strain (Int J Syst Bacteriol, 1997 Oct; 47 (4): 989-95)).

Typiquement, les polysaccharides qui sont dépolymérisés par le procédé de l'invention sont des polysaccharides hydrosolubles qui présentent un indice de polydispersité compris entre 1 et 5 et une masse molaire moyenne en poids supérieure à 700 000 g/mol, en particulier supérieure à 1 000 000 g/mol, préférentiellement supérieure à 1 500 000 g/mol. Typically, the polysaccharides which are depolymerized by the process of the invention are water-soluble polysaccharides which have a polydispersity index between 1 and 5 and a weight average molecular weight of greater than 700 000 g / mol, in particular greater than 1000 000 g / mol, preferably greater than 1 500 000 g / mol.

Selon un mode réalisation, le procédé dépolymérisation par ultrasons des polysaccharides hydrosolubles est effectué en présence ou en absence d'H2O2 à une température comprise entre Ti et T2, les températures Tl et T2 étant choisies indépendamment l'une de l'autre, Tl étant choisie parmi les valeurs 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 C et T2 étant choisie parmi les valeurs 60, 65, 70, 75, 80 C, préférentiellement Tl est égale à 50 C et T2 à 70 C, plus préférentiellement Tl et T2 sont égales à 60 C. A ces températures, la cinétique de la réaction est accrue. Ces résultats sont surprenants car il est connu dans l'art antérieur (cf. Chen et al, Carbohydrate Research 299 (1997) 287-294 et Lorimer et al. Ultrasonics Sonochemistry 1995 vol 2 Nol, S55-S57) qu'une élévation de température entraîne une diminution de la cinétique de la dépolymérisation par ultrasons. According to one embodiment, the ultrasonic depolymerization process of the water-soluble polysaccharides is carried out in the presence or absence of H 2 O 2 at a temperature between T 1 and T 2, the temperatures T 1 and T 2 being chosen independently of each other, T 1 being chosen from among the values 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 C and T2 being chosen from the values 60, 65, 70, 75, 80 C, preferentially T1 is equal to 50 C and T2 at 70 C, plus preferentially T1 and T2 are equal to 60 C. At these temperatures, the kinetics of the reaction is increased. These results are surprising because it is known in the prior art (see Chen et al., Carbohydrate Research 299 (1997) 287-294 and Lorimer et al., Ultrasonics Sonochemistry 1995 vol 2 No, S55-S57) that an elevation of temperature leads to a decrease in the kinetics of ultrasonic depolymerization.

Sans vouloir être lié par une quelconque théorie, ce phénomène inattendu pourrait s'expliquer par la forte viscosité des polysaccharides soumis au procédé. Une forte viscosité ne favorise pas la dépolymérisation par ultrasons. Ainsi, l'élévation de la température entraîne une diminution de la viscosité du milieu réactionnel, et c'est la diminution de la viscosité qui favorise la dépolymérisation par ultrasons. Without wishing to be bound by any theory, this unexpected phenomenon could be explained by the high viscosity of the polysaccharides subjected to the process. High viscosity does not promote ultrasonic depolymerization. Thus, the rise in temperature causes a decrease in the viscosity of the reaction medium, and it is the decrease in viscosity that promotes ultrasonic depolymerization.

Typiquement le procédé selon l'invention peut être réalisé à l'échelle industrielle. Des équipements capables de traiter par ultrasons des volumes de produit de l'ordre de 100 1 et plus sont disponibles dans le commerce. Un exemple de montage d'un procédé en continu est commercialisé par Sodeva (process sonitube ). Ce montage peut être décrit de la façon suivante . Le produit contenu dans un réservoir approprié circule en boucle. Le réservoir peut être à double enveloppe avec circulation d'un liquide de refroidissement, pour maintenir le produit dans une fourchette de température précise, si nécessaire. Le produit passe dans un dispositif d'irradiation ultrasonique en continu, le temps opportun pour obtenir l'effet désiré ; certaines applications demandent quelques heures de traitement. Si le traitement est répétitif et le produit présente des caractéristiques constantes, les paramètres de l'opération (puissance ultrasonique dissipée, débit de produit, temps de traitement) peuvent être fixés une fois pour toutes. Si le produit présente des caractéristiques variables, il pourra être avantageux de faire des prélèvements de temps à autre pour contrôler l'état du produit par rapport à l'effet désiré. Le dispositif assure un traitement totalement homogène du lot complet de produit. Typically, the process according to the invention can be carried out on an industrial scale. Equipment capable of ultrasonically processing product volumes of the order of 100 l and more are commercially available. An example of mounting a continuous process is marketed by Sodeva (sonitube process). This arrangement can be described as follows. The product contained in a suitable tank circulates in a loop. The tank can be double jacketed with a coolant flow, to keep the product in a precise temperature range, if necessary. The product passes into a continuous ultrasonic irradiation device, the time to obtain the desired effect; some applications require a few hours of treatment. If the treatment is repetitive and the product has constant characteristics, the parameters of the operation (ultrasonic power dissipated, product flow rate, treatment time) can be fixed once and for all. If the product has variable characteristics, it may be advantageous to take samples from time to time to control the state of the product with respect to the desired effect. The device ensures a completely homogeneous treatment of the complete batch of product.

La puissance unitaire est très élevée : plus de 1500 W par litre pour Sonitube 20 kHz et plus de 5000 W par litre pour le Sonitube de 35 kHz. The unit power is very high: more than 1500 W per liter for Sonitube 20 kHz and more than 5000 W per liter for the Sonitube of 35 kHz.

L'invention couvre également les mélanges de chaînes osidiques susceptibles d'être obtenus selon les procédés de l'invention. En particulier, l'invention couvre les mélanges qui présentent une masse molaire moyenne en poids comprise entre 80 000 et 120 000 g/mol et un indice de polydispersité compris entre 1 et 5, en particulier compris entre 1,5 et 3. The invention also covers mixtures of osidic chains that can be obtained according to the methods of the invention. In particular, the invention covers mixtures which have a weight average molecular weight of between 80,000 and 120,000 g / mol and a polydispersity index of between 1 and 5, in particular between 1.5 and 3.

La présente invention sera mieux illustrée ci-après à l'aide des exemples qui suivent. Ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. The present invention will be better illustrated hereinafter with the aid of the following examples. These examples are given solely by way of illustration of the subject of the invention, of which they in no way constitute a limitation.

Exemples . Les expériences avec ajout d'H2O2 qui suivent, ont été 30 réalisées à basses fréquences (20 kHz) en mode batch. Les expériences ont été réalisées selon les conditions du laboratoire : Les polysaccharides sont dissous dans de l'eau déminéralisée afin d'obtenir une concentration donnée. Un sonificateur haute intensité VCX 600 basse fréquence de 20 kHz commandé par un microprocesseur Vibra Cell 72412 (Bioblock Scientific) est utilisé. Le microprocesseur permet de prérégler la température de consigne et la durée des pulses et de l'intervalle entre ceux-ci. La microsonde conique ultra haute intensité, d'une amplitude de 16% soit environ 100W, permet de travailler sur des échantillons ayant un volume compris entre 1 et 10 ml. La sonde standard haute intensité, d'une amplitude de 40%, permet de travailler sur des échantillons ayant une volume compris entre 10 et 250 ml. Le sonificateur est destiné à délivrer une amplitude constante. Au fur et à mesure que la charge ou la pression exercée sur la face de la sonde augmente, le générateur amplifie automatiquement la puissance afin de garantir que l'amplitude reste telle qu'elle a été sélectionnée. La sonde est préférablement immergée à une profondeur suffisante pour empêcher l'air d'être injecté dans l'échantillon et pour éviter la formation d'aérosol et de mousse. Examples. The following H2O2 addition experiments were performed at low frequencies (20 kHz) in batch mode. The experiments were carried out according to the conditions of the laboratory: The polysaccharides are dissolved in demineralized water in order to obtain a given concentration. A 20 kHz high frequency low frequency VCX 600 sonicator controlled by a Vibra Cell 72412 microprocessor (Bioblock Scientific) is used. The microprocessor makes it possible to preset the setpoint temperature and the duration of the pulses and the interval between them. The ultra high intensity conical microprobe, with an amplitude of 16% or about 100W, makes it possible to work on samples having a volume of between 1 and 10 ml. The standard high intensity probe, with an amplitude of 40%, makes it possible to work on samples having a volume between 10 and 250 ml. The sonifier is intended to deliver a constant amplitude. As the load or pressure on the face of the probe increases, the generator automatically boosts power to ensure that the amplitude remains as it was selected. The probe is preferably immersed to a depth sufficient to prevent air from being injected into the sample and to prevent the formation of aerosol and foam.

Une syntonisation de la sonde est réalisée régulièrement. Celle-ci augmente l'efficacité et assure un transfert maximum d'énergie, en adaptant la fréquence du générateur d'ultrasons à celle du dispositif convertisseur/sonde.30 La taille des chaînes osidiques a été déterminée à l'aide d'analyse par chromatographie d'exclusion stérique à haute performance (HPSEC). La composition osidique des chaînes a été déterminée à l'aide d'analyse par chromatographie en phase gazeuse (CPG). Dans tous les essais avec H2O2, la composition osidique est conservée. A tuning of the probe is performed regularly. This increases the efficiency and ensures maximum energy transfer, by adapting the frequency of the ultrasound generator to that of the converter / probe device. The size of the osidic chains has been determined by means of analysis by High Performance Steric Exclusion Chromatography (HPSEC). The osidic composition of the chains was determined using gas chromatographic analysis (GC). In all the tests with H2O2, the osidic composition is preserved.

Description des EPS utilisés pour les différents 10 essais . Tous les EPS utilisés présentent une masse molaire moyenne en poids supérieure à 700 000 g/mol et un indice de polydispersité compris entre 1 et 5. 15 Tableau I Souche COMPOSITION OSIDIQUE Sulfates Ose Ose osamine % Neutre Acide % % % HYD 657 47 26 1.6 5 Alteromonas macleodii sp supsp fijiensis biovar deepsane GY 785 55 40 < 0.7 10 Alteromonas infernus sp MS 907 50 37 0 0 Alteromonas macleodii sp subsp fijiensis biovar medioatlantica HE 800 1 32 30 0 Vibrio diabolicus sp Exemple 1 : Essais réalisés sur différents EPS: Les essais ont été réalisés sur des échantillons de 10 ml d'EPS à 2g.1-1 soumis à 2 heures d'exposition aux ultrasons à 60 C, en batch. L'ajout d'H202 a été réalisé en une fois en début de manipulation. Les valeurs de Mp et Ip ont été ensuite déterminées. Les résultats obtenus sont présentés au tableau II. Tableau II EPS R(H202/EPS) ajouté Mp (g/mol) Ii, HE 800 0 85 000 1,2 0,5 40 000 1,9 GY 785 0 130 000 1,6 0,5 80 000 2 MS 907 0 100 000 1,8 0,5 40 000 1,7 HYD 657 0 200 000 1,5 0,5 125 000 3 Exemple 2 Essais réalisés à 4 C avec NaOC1 à la place du peroxyde d'hydrogène : Des conditions semblables à celles décrites à l'exemple 1 ont été choisies. Les essais ont été réalisés sur des échantillons de 10 ml de l'EPS HYD 657 à 2g.1-1 soumis à 2 heures d'exposition aux ultrasons à 4 C, en batch. L'ajout de NaOC1 a été réalisé en une fois en début de manipulation. Un rapport massique entre NaOCl et l'EPS de 0,5 a été choisi. Description of the EPS used for the different tests. All EPS used have a weight average molecular weight of greater than 700,000 g / mol and a polydispersity index of between 1 and 5. Table I Strain OSIDIC COMPOSITION Sulphates Ose osamine% Neutral Acid%%% HYD 657 47 26 1.6 5 Alteromonas macleodii sp supsp fijiensis biovar deepsane GY 785 55 40 <0.7 10 Alteromonas infernus sp MS 907 50 37 0 0 Alteromonas macleodii sp subsp fijiensis biovar medioatlantica HE 800 1 32 30 0 Vibrio diabolicus sp Example 1: Tests performed on different EPS: tests were carried out on samples of 10 ml of EPS at 2g.1-1 subjected to 2 hours of ultrasound exposure at 60 C, in batch. The addition of H202 was carried out once at the beginning of the handling. The values of Mp and Ip were then determined. The results obtained are shown in Table II. Table II EPS R (H202 / EPS) added Mw (g / mol) Ii, HE 800 0 85,000 1,2 0,5 40,000 1,9 GY 785 0 130,000 1,6 0,5 80,000 2 MS 907 0 100 000 1.8 0.5 40 000 1.7 HYD 657 0 200 000 1.5 0.5 125 000 3 Example 2 Tests carried out at 4 C with NaOC1 instead of hydrogen peroxide: Conditions similar to those described in Example 1 were chosen. The tests were carried out on 10 ml samples of EPS HYD 657 at 2g.1-1 subjected to 2 hours of ultrasonic exposure at 4 C, batchwise. The addition of NaOC1 was performed at once at the beginning of the manipulation. A mass ratio between NaOCl and EPS of 0.5 was chosen.

Les valeurs de Mp et Ip ont été ensuite déterminées. Les résultats obtenus montrent que les chaînes osidiques obtenues présentent une valeur de Mp inférieure à 3000 g/mol et qu'une proportion de ces chaînes présente une structure osidique modifiée. The values of Mp and Ip were then determined. The results obtained show that the saccharide chains obtained have a Mp value of less than 3000 g / mol and that a proportion of these chains has a modified oside structure.

Exemple 3 Importance d'un ajout continu d'H202: Une pompe péristaltique a permis de tester l'effet d'un ajout continu de la solution de peroxyde d'hydrogène. 5 ml d'une solution d'EPS HYD 657 à 4 g/1 ont été placés dans le réacteur et soumis à 2 heures d'ultrasons. Après deux minutes d'ultrasons (pulse de 2s avec un intervalle entre les pulses de 2s), 5 ml d'une solution de peroxyde d'hydrogène permettant d'obtenir le rapport massique final souhaité ont été ajoutés goutte à goutte pendant 100 minutes. Les valeurs de Mp et Ip ont été ensuite déterminées. Les résultats obtenus sont présentés au tableau III. Tableau III Rapport massique = m H202 Ajout Mp (g/mol) Ip mHYD657) 0 - 195 000 1,8 en 1 fois 140 000 2,6 0,5 continu 110 000 1,2 L'ajout de peroxyde d'hydrogène permet de diminuer de façon considérable la masse molaire: celle-ci peut être est divisée par 2 par rapport à l'utilisation des ultrasons seuls. Example 3 Importance of a continuous addition of H202: A peristaltic pump made it possible to test the effect of a continuous addition of the hydrogen peroxide solution. 5 ml of a solution of EPS HYD 657 at 4 g / l were placed in the reactor and subjected to 2 hours of ultrasound. After two minutes of ultrasound (pulse of 2s with a pulse interval of 2s), 5 ml of a solution of hydrogen peroxide to obtain the desired final mass ratio was added dropwise for 100 minutes. The values of Mp and Ip were then determined. The results obtained are shown in Table III. Table III Mass ratio = m H202 Addition Mp (g / mol) Ip mHYD657) 0 - 195 000 1.8 in 1 time 140 000 2.6 0.5 continuous 110 000 1.2 The addition of hydrogen peroxide allows to considerably reduce the molar mass: this can be divided by 2 compared to the use of ultrasound alone.

Claims

claims

1. A method of ultrasonic depolymerization of polysaccharides characterized in that said depolymerization takes place in the presence of H2O2.

2. Method according to claim 1 characterized in that the ultrasound frequency used is between 10 and 40 kHz.

3. Process according to any one of claims 1-2, characterized in that H2O2 is added continuously during the depolymerization reaction.

4. Method according to any one of claims 1-3 characterized in that the mass ratio between the amount of H2O2 and the amount of polysaccharides introduced is between 0.1 and 5, in particular between 0.3 and 1.5.

5. Process according to any one of claims 1-4, characterized in that the depolymerization reaction takes place at a pH of between 6.5 and 7.5.

6. Method according to any one of claims 1-5 characterized in that the initial concentration of polysaccharides is between 0.5 g / 1 and 10 g / l.

7. Method according to any one of claims 1-6 characterized in that the polysaccharides are exopolysaccharides.

8. Process according to any one of claims 1-7, characterized in that the polysaccharides are water-soluble polysaccharides which have a polydispersity index of between 1 and 5 and a weight average molar mass of greater than 700 000 g / mol, in greater than 1,000,000 g / mol.

9. The method of claim 8 characterized in that the depolymerization is carried out at a temperature between 30 and 80 C, preferably between 50 and 70 C.

10. Mixture of osidic chains obtainable by the process of any one of claims 1-9.

11. Mixture of osidic chains according to claim 10, characterized in that the mixture has a weight average molecular weight of between 80,000 and 120,000 g / mol and a polydispersity index of between 1 and 5, in particular between 1, 5 and 3.