FR2880035A1 - Method of detecting biocontamination in a liquid fuel, comprises detecting micro-organisms in the liquid fuel by using an adenosinetriphosphate-metry technique - Google Patents
Method of detecting biocontamination in a liquid fuel, comprises detecting micro-organisms in the liquid fuel by using an adenosinetriphosphate-metry technique Download PDFInfo
- Publication number
- FR2880035A1 FR2880035A1 FR0453178A FR0453178A FR2880035A1 FR 2880035 A1 FR2880035 A1 FR 2880035A1 FR 0453178 A FR0453178 A FR 0453178A FR 0453178 A FR0453178 A FR 0453178A FR 2880035 A1 FR2880035 A1 FR 2880035A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- strains
- microorganisms
- liquid fuel
- atp
- technique
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 69
- 239000000446 fuel Substances 0.000 title claims abstract description 68
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 41
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 20
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 17
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 13
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 claims description 12
- 230000001680 brushing effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 9
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- 238000011109 contamination Methods 0.000 claims description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 3
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 30
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N Adenosine triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N 0.000 abstract 2
- 229960001456 adenosine triphosphate Drugs 0.000 abstract 2
- 239000003350 kerosene Substances 0.000 description 30
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 26
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 22
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 10
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 10
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 10
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 9
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 6
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 4
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 3
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002828 fuel tank Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 2
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 2
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 241000221832 Amorphotheca resinae Species 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000223678 Aureobasidium pullulans Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241001515917 Chaetomium globosum Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001236817 Paecilomyces <Clavicipitaceae> Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000007797 corrosion Effects 0.000 description 1
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002498 deadly effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- LIYGYAHYXQDGEP-UHFFFAOYSA-N firefly oxyluciferin Natural products Oc1csc(n1)-c1nc2ccc(O)cc2s1 LIYGYAHYXQDGEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000000295 fuel oil Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 1
- 239000003502 gasoline Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 229910001234 light alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000011169 microbiological contamination Methods 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- JJVOROULKOMTKG-UHFFFAOYSA-N oxidized Photinus luciferin Chemical compound S1C2=CC(O)=CC=C2N=C1C1=NC(=O)CS1 JJVOROULKOMTKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000011253 protective coating Substances 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/64—Geomicrobiological testing, e.g. for petroleum
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/26—Oils; Viscous liquids; Paints; Inks
- G01N33/28—Oils, i.e. hydrocarbon liquids
- G01N33/2835—Specific substances contained in the oils or fuels
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Zoology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Geology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Paleontology (AREA)
- General Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
PROCÉDÉ DE DÉTECTION DE LA BIOCONTAMINATION D'UNMETHOD FOR DETECTION OF BIOCONTAMINATION OF A
COMBUSTIBLE LIQUIDELIQUID FUEL
DESCRIPTIONDESCRIPTION
DOMAINE TECHNIQUETECHNICAL AREA
La présente invention concerne un procédé de détection de la biocontamination d'un combustible liquide. The present invention relates to a method for detecting the biocontamination of a liquid fuel.
Elle s'applique à tout combustible liquide, notamment aux combustibles domestiques tels que le fioule, et aux carburants, par exemple le gas-oil, l'essence pour automobile et les carburants destinés aux aéronefs et aux missiles. It applies to all liquid fuels, including domestic fuels such as fuel oil, and fuels, such as gas oil, automotive gasoline, and fuels for aircraft and missiles.
L'invention s'applique particulièrement à la détection de la biocontamination des carburéacteurs (en anglais jet fuels ) et plus particulièrement des kérosènes, et aussi de l'exo-THDCPD (exotétrahydrocyclopentadiène). The invention is particularly applicable to the detection of the biocontamination of jet fuels and more particularly kerosene, and also exo-THDCPD (exotetrahydrocyclopentadiene).
ÉTAT DE LA TECHNIQUE ANTÉRIEURE On sait que tout carburéacteur est contaminé par des microorganismes. Les spores de ces derniers engendrent une "bioglée" visqueuse qui peut conduire à des effets néfastes tels que: - l'augmentation de la consommation de carburéacteur, la diminution des performances énergétiques de celui-ci, - le colmatage de filtres du circuit d'alimentation en carburéacteur et le blocage de jauges, ce qui peut conduire à des informations erronées sur la quantité de carburant dans les réservoirs, et - la détérioration des revêtements de protection des fonds des réservoirs de carburéacteur et l'attaque des réservoirs structuraux en alliages légers, par corrosion intercristalline. STATE OF THE PRIOR ART It is known that all jet fuel is contaminated with microorganisms. The spores of the latter generate a viscous "bioglea" which can lead to harmful effects such as: - the increase in the consumption of jet fuel, the reduction of its energy performance, - the clogging of the circuit filters. feeding jet fuel and blocking gauges, which can lead to misinformation about the amount of fuel in the tanks, and - deterioration of the protective coatings of jet fuel tank bottoms and attack of structural tanks made of light alloys by intercrystalline corrosion.
Le contrôle de la biocontamination des réservoirs des avions permet de définir des traitements préventifs ou curatifs qu'il convient d'appliquer lors de l'entretien de ces avions. The control of the biocontamination of aircraft tanks makes it possible to define preventive or curative treatments that should be applied during the maintenance of these aircraft.
Actuellement, la détection de la biocontamination des carburéacteurs est réalisée au moyen d'un procédé de référence , qui est une méthode expérimentale bioanalytique de laboratoire. Currently, the detection of biocontamination of jet fuels is carried out by means of a reference method, which is an experimental bioanalytical laboratory method.
Ce procédé de référence consiste à isoler et à cultiver les souches de microorganismes, qui sont présentes dans un carburéacteur tel que le kérosène, à la surface d'une membrane filtrante microporeuse et stérile, de type écran. This reference method consists in isolating and culturing strains of microorganisms, which are present in a jet fuel such as kerosene, on the surface of a microporous and sterile filter membrane, screen type.
Ce procédé nécessite des moyens d'investigation tels que des dispositifs de stérilisation, de filtration, d'incubation et d'observation microscopique, que l'on trouve dans les laboratoires mais quasiment pas auprès des compagnies aériennes ou des organismes de contrôle de ces dernières. This process requires investigative means such as sterilization, filtration, incubation and microscopic observation devices, which are found in laboratories but almost not with the airlines or control bodies of the latter. .
De plus, la mise en oeuvre de ce procédé de référence nécessite des expérimentateurs capables de faire des analyses microbiologiques et des observations microscopiques de colonies de souches de micro- organismes. En outre, ce procédé nécessite, au minimum, 48 à 72 heures d'incubation, pour l'obtention des premiers résultats d'analyse, et deux à trois semaines d'incubation pour l'obtention des résultats définitifs. In addition, the implementation of this reference method requires experimenters capable of performing microbiological analyzes and microscopic observations of colonies of strains of microorganisms. In addition, this process requires, at least, 48 to 72 hours of incubation, to obtain the first results of analysis, and two to three weeks of incubation to obtain the final results.
Certes, on peut simplifier ce procédé en utilisant le système de filtration qui est commercialement disponible auprès de la Société Millipore sous la référence Milliflex-100. Néanmoins, ce procédé reste inadapté à une utilisation à proximité immédiate d'un avion et nécessite l'intervention de personnes ayant des compétences en microbiologie. Certainly, this process can be simplified by using the filtration system which is commercially available from the Millipore Company under the reference Milliflex-100. Nevertheless, this method remains unsuitable for use in the immediate vicinity of an aircraft and requires the intervention of people with skills in microbiology.
EXPOSÉ DE L'INVENTION La présente invention a pour objet un procédé peu coûteux, que l'on peut mettre en oeuvre à proximité immédiate d'un avion ou d'un réservoir de stockage et qui permet la détection rapide de la présence de microorganismes dans un carburéacteur. SUMMARY OF THE INVENTION The subject of the present invention is an inexpensive method that can be implemented in the immediate vicinity of an aircraft or a storage tank and which enables the rapid detection of the presence of microorganisms in the environment. a jet fuel.
Remarquons que seule importe la détection de cette présence et qu'il n'est pas nécessaire d'identifier les microorganismes. Note that only the detection of this presence is important and that it is not necessary to identify microorganisms.
Le procédé objet de l'invention permet alors non seulement de contrôler régulièrement le degré de contamination des carburéacteurs mais aussi d'effectuer des interventions précoces sur les réservoirs de tels combustibles, pour y effectuer des traitements préventifs ou curatifs, en ajoutant des produits biocides (fongicides et bactéricides) dans ces réservoirs. The method which is the subject of the invention then makes it possible not only to regularly monitor the degree of contamination of the jet fuels but also to perform early interventions on the tanks of such fuels, to carry out preventive or curative treatments, by adding biocidal products ( fungicides and bactericides) in these reservoirs.
Plus généralement, l'invention résout le problème de la détection, d'une manière rapide et peu coûteuse, de la présence de microorganismes dans un combustible liquide. More generally, the invention solves the problem of detecting, in a fast and inexpensive manner, the presence of microorganisms in a liquid fuel.
Pour résoudre ce problème, l'invention utilise la technique d'ATPmétrie et bioluminescence (en anglais bioluminescent ATPmetry ), plus simplement appelée ATPmétrie ou dosage de l'ATP, sur laquelle on reviendra par la suite. To solve this problem, the invention uses the technique of ATPmetry and bioluminescence (in English bioluminescent ATPmetry), more simply called ATPmetry or assay of ATP, which will be discussed later.
L'inventeur a trouvé que l'ATPmétrie était compatible avec un combustible liquide tel qu'un carburéacteur. En utilisant des systèmes d'ATPmétrie commercialement disponibles, il a en effet trouvé qu'une enzyme, la luciférase, n'était pas annihilée par un carburéacteur tel que le kérosène Jet A-1. The inventor has found that ATPmetry is compatible with a liquid fuel such as a jet fuel. By using commercially available ATPmetry systems, he has indeed found that an enzyme, luciferase, was not annihilated by a jet fuel such as Jet A-1 kerosene.
Les systèmes d'ATPmétrie commercialisés par les Sociétés Prodemat, Merck et préférentiellement Euralam sont intéressants pour la mise en oeuvre de l'invention. The ATPmetry systems marketed by the Prodemat, Merck and preferably Euralam companies are interesting for the implementation of the invention.
Comme on le verra mieux par la suite, l'invention est simple à mettre en oeuvre, fournit rapidement une réponse (généralement en moins de 15 minutes) et permet de détecter les principaux microorganismes capables de vivre dans un combustible liquide tel qu'un carburéacteur, par exemple un kérosène, et l'exo-THDCPD, également appelé JP-10. As will be seen better later, the invention is simple to implement, provides a rapid response (usually in less than 15 minutes) and can detect the main microorganisms capable of living in a liquid fuel such as a jet fuel , for example a kerosene, and exo-THDCPD, also called JP-10.
De plus, l'invention est directement applicable là où se trouve le réservoir de combustible (par exemple à proximité immédiate d'un avion dont on veut contrôler le kérosène) et ne nécessite pas l'intervention de personnes ayant des compétences en microbiologie. In addition, the invention is directly applicable where the fuel tank is (for example in the immediate vicinity of an aircraft whose kerosene is to be controlled) and does not require the intervention of persons with microbiological skills.
L'invention permet aussi de remédier à un inconvénient que présentent des techniques connues d'ATPmétrie. The invention also makes it possible to overcome a drawback which is presented by known ATPmetry techniques.
En effet, ces techniques utilisent un stylo d'échantillonnage pourvu d'un écouvillon et, pour effectuer une analyse directe d'un carburant, tel que le kérosène, par ATPmétrie conformément à l'invention, on est conduit à immerger cet écouvillon dans un petit volume du kérosène, généralement de l'ordre de 1 cm3 ou moins, alors que les microorganismes sont uniquement présents dans la phase aqueuse de décantation du kérosène, phase qui peut ne représenter qu'un très faible pourcentage du volume total de carburant. Indeed, these techniques use a sampling pen provided with a swab and, to carry out a direct analysis of a fuel, such as kerosene, by ATPmetry in accordance with the invention, one is led to immerse this swab in a small volume of kerosene, generally of the order of 1 cm3 or less, while the microorganisms are only present in the aqueous phase of decantation of kerosene, phase which can represent only a very small percentage of the total volume of fuel.
La présente invention permet de remédier à cet inconvénient en augmentant le volume de carburant analysé. The present invention overcomes this disadvantage by increasing the volume of fuel analyzed.
De préférence, on utilise alors un volume supérieur à 50 cm3, par exemple 100 cm3, 0,5 dm3 ou même 1 dm3. Preferably, a volume greater than 50 cm 3, for example 100 cm 3, 0.5 dm 3 or even 1 dm 3, is then used.
En outre, on isole alors les souches de microorganismes, présentes dans le kérosène, par filtration à la surface d'une membrane stérile et microporeuse, et l'on met en uvre une technique d'ATPmétrie après avoir brossé la surface de rétention de la membrane stérile après filtration, à l'aide de l'écouvillon mentionné plus haut ou toute autre méthode qui permet de récupérer les microorganismes sur la membrane microporeuse. In addition, the strains of microorganisms present in the kerosene are then isolated by filtration on the surface of a sterile and microporous membrane, and an ATPmetry technique is used after having brushed the retention surface of the membrane. sterile membrane after filtration, using the swab mentioned above or any other method that allows the recovery of microorganisms on the microporous membrane.
Les résultats obtenus sont comparables aux dénombrements de colonies et à leur envahissement, que l'on obtient en mettant en uvre le procédé microbiologique de référence par filtration-incubation sur membrane en boîte de Pétri. The results obtained are comparable to the colony counts and their invasion, which is obtained by implementing the microbiological reference method by filtration-incubation on a Petri dish membrane.
Ainsi, selon un aspect avantageux de la présente invention, on propose une technique d'ATPmétrie et bioluminescence, optimisée en introduisant une microfiltration du combustible avant l'ATPmétrie proprement dite. Thus, according to an advantageous aspect of the present invention, an ATPmetry and bioluminescence technique is proposed, optimized by introducing a microfiltration of the fuel before the ATPmetry itself.
De façon précise, la présente invention a pour objet un procédé de détection de la biocontamination d'un combustible liquide, ce procédé étant caractérisé en ce que l'on utilise une technique d'ATPmétrie pour détecter la présence de microorganismes dans le combustible liquide. Specifically, the present invention relates to a method for detecting the biocontamination of a liquid fuel, this method being characterized in that an ATPmetry technique is used to detect the presence of microorganisms in the liquid fuel.
Selon un mode de mise en uvre particulier 15 du procédé objet de l'invention - on utilise un équipement d'ATPmétrie, - on filtre un volume de combustible liquide sur une membrane microporeuse stérile, de manière à isoler des souches de microorganismes qui sont susceptibles d'être présents dans le combustible liquide, - on recueille les souches de microorganismes ainsi isolées, et - on détecte la présence des microorganismes dans les souches ainsi recueillies, au moyen de l'équipement d'ATPmétrie afin de doser l'ATP. According to a particular mode of implementation of the method which is the subject of the invention - ATP metering equipment is used - a volume of liquid fuel is filtered on a sterile microporous membrane, so as to isolate strains of microorganisms which are susceptible to to be present in the liquid fuel, the strains of microorganisms thus isolated are collected, and the presence of the microorganisms in the strains thus collected is detected by means of the ATPmetry equipment in order to determine the ATP.
Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, l'équipement comporte un organe de prélèvement d'un échantillon devant être analysé avec cet équipement et l'on recueille les souches au moyen de l'organe de prélèvement. According to a particular embodiment of the invention, the equipment comprises a sampling member of a sample to be analyzed with this equipment and the strains are collected by means of the sampling member.
De préférence, le volume de combustible liquide que l'on filtre est environ égal à 100 cm3. Preferably, the volume of liquid fuel that is filtered is approximately equal to 100 cm 3.
Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, l'organe de prélèvement constitue une brosse au moyen de laquelle on brosse la surface de rétention de la membrane microporeuse, pour recueillir les souches de microorganismes. According to a preferred embodiment of the invention, the sampling member constitutes a brush by means of which the microporous membrane retention surface is brushed to collect the microorganism strains.
De préférence, on brosse la surface de rétention de la membrane microporeuse suivant deux 10 directions perpendiculaires. Preferably, the retention surface of the microporous membrane is brushed along two perpendicular directions.
De préférence, dans le cas du mode de mise en oeuvre du procédé objet de l'invention qui utilise la membrane microporeuse: - on mesure d'abord une intensité lumineuse blanc correspondant à l'organe de prélèvement seul, au moyen de l'équipement d'ATPmétrie, avant de recueillir les souches de microorganismes au moyen de cet organe de prélèvement, - on fait au moins une mesure d'intensité 20 lumineuse d) au moyen de l'équipement, pour les souches recueillies, - on calcule la différence -blanc et - on détermine la contamination à partir de cette différence. Preferably, in the case of the embodiment of the method which is the subject of the invention and which uses the microporous membrane: first, a white light intensity corresponding to the sampling member alone is measured by means of the equipment; Before collecting the microorganism strains by means of this sampling organ, at least one measurement of luminous intensity d) is made using the equipment, for the collected strains, the difference is calculated. white and the contamination is determined from this difference.
Selon un mode de réalisation préféré de l'invention: - on fait plusieurs mesures d'intensité lumineuse pour les souches, - on calcule la moyenne arithmétique Orel de ces mesures, - on calcule la différence (Dre, , d)blanc et - on détermine la contamination à partir de cette différence (Drei (DblancÉ L'équipement d'ATPmétrie comprend de préférence: - un écouvillon qui constitue l'organe de prélèvement, - un récipient qui contient des composants permettant la mise en uvre de la technique d'ATPmétrie et dans lequel on plonge l'écouvillon après avoir recueilli les souches de microorganismes au moyen de cet écouvillon, pour que ces souches réagissent avec les composants, et - un luminomètre pour mesurer l'intensité lumineuse émise par les souches ayant ainsi réagi. According to a preferred embodiment of the invention: - several light intensity measurements are made for the strains, - the average arithmetic average of these measurements is calculated, - the difference is calculated (Dre,, d) white and - one determines the contamination from this difference (Drei (Dblanced) The ATPmetry equipment preferably comprises: - a swab which constitutes the sampling organ, - a container which contains components allowing the implementation of the technique of ATPometry and in which the swab is immersed after collecting the strains of microorganisms by means of this swab, so that these strains react with the components, and - a luminometer for measuring the luminous intensity emitted by the strains having thus reacted.
Selon une application particulière de la présente invention, le combustible liquide est contenu dans un réservoir et l'on effectue un traitement préventif de ce réservoir si la technique d'ATPmétrie utilisée conduit à mesurer une intensité lumineuse supérieure ou sensiblement égale à un seuil préalablement fixé en fonction de l'application envisagée. Ce seuil est de préférence exprimé en unités relatives d'intensité de lumière. According to a particular application of the present invention, the liquid fuel is contained in a reservoir and a preventive treatment of this reservoir is carried out if the ATP metering technique used leads to measuring a luminous intensity greater than or substantially equal to a previously fixed threshold. depending on the intended application. This threshold is preferably expressed in relative units of light intensity.
EXPOSÉ DÉTAILLÉ DE MODES DE RÉALISATION PARTICULIERS On montre dans ce qui suit l'intérêt d'utiliser l'ATPmétrie pour détecter la biocontamination d'un combustible liquide, tel qu'un carburéacteur, et l'intérêt d'optimiser l'ATPmétrie par une microfiltration préalable. DETAILED DESCRIPTION OF PARTICULAR EMBODIMENTS The following shows the advantage of using ATPmetry to detect the biocontamination of a liquid fuel, such as a jet fuel, and the advantage of optimizing ATP metering by pre-microfiltration.
Rappelons que la technique d'ATPmétrie est une technique de dosage instantané de l'ATP, c'est-à-dire de l'adénosine triphosphate (en anglais adenosine triphosphate ). Recall that the technique of ATPmetria is an instantaneous technique of ATP dosing, that is to say, adenosine triphosphate (English adenosine triphosphate).
Cette technique, qui est fondée sur le principe de bioluminescence, met en ouvre une réaction enzymatique qui traduit une quantité d'ATP en quantité de lumière. This technique, which is based on the principle of bioluminescence, implements an enzymatic reaction that translates a quantity of ATP into a quantity of light.
L'ATP est présente, en concentrations variables, chez tous les organismes vivants. La présente d'ATP indique une souillure par des composé organiques. Partout où elle est présente, existe le risque d'une biocontamination. En outre, la molécule d'ATP est utilisée par les cellules pour le stockage de l'énergie cellulaire et comme co-enzyme. ATP is present in varying concentrations in all living organisms. The present ATP indicates a staining by organic compounds. Wherever it is present, there is the risk of bioburden. In addition, the ATP molecule is used by cells for storage of cellular energy and as a co-enzyme.
La présence d'ATP dans un milieu inerte, tel qu'un carburéacteur, indique une contamination biologique d'origine microbienne et/ou fongique. The presence of ATP in an inert medium, such as a jet fuel, indicates a biological contamination of microbial and / or fungal origin.
Pour mettre en oeuvre l'ATPmétrie, on ajoute un réactif qui induit la luminescence (en anglais luminescence inducing reagent ) au milieu réactionnel à analyser. Ce réactif comprend une enzyme, la luciférase, et son substrat, la luciférine, substance azotée qui est présente chez certains animaux et dont l'oxydation provoque la luminescence. To carry out ATPmetry, a reagent is added which induces luminescence (in English luminescence inducing reagent) to the reaction medium to be analyzed. This reagent includes an enzyme, luciferase, and its substrate, luciferin, a nitrogenous substance that is present in some animals and whose oxidation causes luminescence.
En présence d'ATP, la luciférine est immédiatement transformée en oxyluciférine par la luciférase. La réaction s'accompagne d'une émission de lumière, de couleur jaune vert, qui est proportionnelle à la quantité d'ATP initiale. In the presence of ATP, luciferin is immediately converted to oxyluciferin by luciferase. The reaction is accompanied by light emission, of a greenish yellow color, which is proportional to the amount of initial ATP.
Le mode opératoire de la technique d'ATPmétrie consiste à ajouter une quantité connue de luciférine et de la luciférase à un volume connu du milieu à analyser, à laisser agir quelques secondes (incubation), puis à mesurer l'intensité de la lumière émise au moyen d'un luminomètre. The procedure of the ATPmetry technique consists in adding a known quantity of luciferin and luciferase to a known volume of the medium to be analyzed, allowing to act for a few seconds (incubation) and then measuring the intensity of the light emitted at medium of a luminometer.
L'évaluation de la biomasse microbienne, par dosage de l'ATP, tend à se généraliser. Ce constituant est un intermédiaire important du métabolisme cellulaire, puisqu'il est au centre du métabolisme énergétique. La teneur en ATP des cellules varie d'un organisme à un autre. Pour un même organisme, cette variation est fonction de son état physiologique, d'où l'intérêt de son dosage, surtout si l'on travaille avec un seul type de cellule. The evaluation of microbial biomass, by assaying ATP, tends to become widespread. This constituent is an important intermediary of cellular metabolism, since it is at the center of energy metabolism. The ATP content of the cells varies from one organism to another. For the same organism, this variation is a function of its physiological state, hence the interest of its dosage, especially if one works with a single type of cell.
L'ATP étant par ailleurs absente des constituants du milieu de culture, sa détermination par réaction de bioluminescence est relativement simple, rapide et sensible. Since ATP is also absent from the constituents of the culture medium, its determination by bioluminescence reaction is relatively simple, rapid and sensitive.
Une fois la cellule morte, l'ATP est rapidement détruite. C'est pourquoi le taux d'ATP dans un échantillon peut être rapporté à la population des cellules, ou bactéries vivantes, qui sont présentes. Once the cell is dead, ATP is quickly destroyed. This is why the level of ATP in a sample can be related to the population of cells, or living bacteria, that are present.
L'ATPmétrie paraît bien adaptée pour la recherche de micro- organismes, sans identification, dans les carburéacteurs, car elle donne des résultats en quelques minutes. Elle peut être utilisée "au pied d'un avion", par un personnel ne possédant pas de qualification particulière en microbiologie. ATPmetry seems well suited for the search for microorganisms, without identification, in jet fuels, because it gives results in a few minutes. It can be used "at the foot of an airplane", by a staff with no particular qualification in microbiology.
Dans un premier temps, on s'est assuré que la luciférase n'était pas inhibée par les composés des combustibles endothermiques aéronautiques, principalement par les composés des kérosènes Jet A-1 et le combustible JP-10, et que l'ATPmétrie était applicable à de tels milieux réactionnels. Initially, it was ensured that the luciferase was not inhibited by the aerobic endothermic fuel compounds, mainly by the Jet A-1 kerosene compounds and the JP-10 fuel, and that the ATPmetry was applicable to such reaction media.
En outre, parmi les trousses ATP (en anglais ATP kits ) commercialement disponibles, on a choisi celle qui est la mieux adaptée au contrôle des avions, pratiqué sur le terrain, à savoir la trousse de la société Euralam. In addition, among commercially available ATP kits, the one best suited to aircraft control, practiced in the field, namely the Euralam kit, was selected.
Cette trousse ATP de la société Euralam est dénommée Pocket Swab . Elle comprend un dispositif en forme de stylo, comprenant un écouvillon (petite brosse) d'échantillonnage et une cuve de réaction, qui contient les composés de lyse (destruction des tissus ou des bactéries par des agents physiques, chimiques ou biologiques), une solution tampon (en anglais buffer solution ), la luciférine et la luciférase. This ATP kit from Euralam is called Pocket Swab. It comprises a pen-shaped device, comprising a sampling swab (small brush) and a reaction vessel, which contains the lysis compounds (destruction of tissues or bacteria by physical, chemical or biological agents), a solution buffer (in English buffer solution), luciferin and luciferase.
L'écouvillon est utilisé pour le prélèvement puis trempé dans la cuve de réactifs. Après quelques secondes d'incubation, cette incubation étant fondée sur la réaction enzymatique qui met en oeuvre le couple émetteur de lumière luciférine/luciférase, on détecte quantitativement l'émission des photons au moyen d'un luminomètre. On utilise celui qui est commercialisé par la société Charm Sciences sous la référence Luminator T (marque déposée). The swab is used for sampling and then dipped into the reagent tank. After a few seconds of incubation, this incubation being based on the enzymatic reaction using the luciferin / luciferase light emitting pair, the emission of photons is quantitatively detected by means of a luminometer. One uses the one marketed by Charm Sciences under the reference Luminator T (registered trademark).
Ce dernier est capable de traiter statistiquement les résultats, de les stocker, de les afficher sur son écran puis de les transférer ultérieurement vers une imprimante ou un ordinateur, ce qui permet de faire les essais sur site et de restituer les données, à un autre moment et en un autre lieu, soit une imprimante, soit dans un logiciel de traitement. The latter is able to statistically process the results, store them, display them on their screen and then transfer them later to a printer or a computer, which allows the on-site testing and restitution of the data, to another moment and in another place, either a printer or a processing software.
On précise que la teneur en ATP est exprimée en unités relatives d'intensité lumineuse (en anglais Relative Light Units . It is specified that the content of ATP is expressed in relative units of light intensity (English Relative Light Units.
Plus la lumière est intense, plus les valeurs mesurées sont élevées et plus la teneur en ATP est importante. Des valeurs RLU élevées indiquent ainsi clairement une contamination microbiologique. The brighter the light, the higher the measured values and the higher the ATP content. High RLU values clearly indicate microbiological contamination.
L'ATPmétrie n'a jamais été mise en uvre avec des kérosènes. Il convient donc de s'assurer que la luciférase n'est pas inhibée par l'un des composés de ces combustibles. ATPmetry has never been implemented with kerosene. It must therefore be ensured that luciferase is not inhibited by one of the compounds of these fuels.
L'étude de la compatibilité de l'ATPmétrie avec les kérosènes a été réalisée avec la trousse ATP de la société Euralam sur le kérosène Jet A-1. The study of the compatibility of ATPmetry with kerosenes was carried out with Euralam's ATP kit on Jet A-1 kerosene.
On a vérifié la capacité de cette trousse ATP à détecter, une à une, la présence de cinq souches de moisissures, à savoir Aspergillus piger, Paecilomyces varioti, Aureobasidium pullulans, Chaetomium globosum et Cladosporium resinae, et d'une bactérie aérobie, à savoir Pseudomonas aeruginosa, parmi celles que l'on rencontre le plus fréquemment dans les kérosènes. The ability of this ATP kit to detect, one by one, the presence of five mold strains, namely Aspergillus piger, Paecilomyces varioti, Aureobasidium pullulans, Chaetomium globosum and Cladosporium resinae, and an aerobic bacterium, namely Pseudomonas aeruginosa, among those most frequently found in kerosene.
Il faut toutefois rappeler que le point faible de la méthode est que l'analyse directe s'effectue en immergeant l'écouvillon dans un petit volume de combustible, environ 1 ml ou moins, alors que les microorganismes sont présents uniquement dans la phase aqueuse de décantation du kérosène qui peut ne représenter qu'un très faible pourcentage du volume total de carburant. However, it must be remembered that the weak point of the method is that the direct analysis is carried out by immersing the swab in a small volume of fuel, about 1 ml or less, while the microorganisms are present only in the aqueous phase. decantation of kerosene which may represent only a very small percentage of the total fuel volume.
Il est donc souhaitable d'optimiser la méthode en augmentant le volume de combustible analysé. On utilise de préférence un volume au moins égal à 100 cm3. It is therefore desirable to optimize the method by increasing the volume of fuel analyzed. A volume at least equal to 100 cm 3 is preferably used.
On a trouvé qu'il est intéressant d'optimiser l'ATPmétrie par une microfiltration préalable, par comparaison avec le procédé de référence, par microfiltration-incubation dans une boîte de Pétri. On reviendra sur ce procédé de référence à la fin de la présente description. It has been found that it is advantageous to optimize the ATPmetry by prior microfiltration, by comparison with the reference method, by microfiltration-incubation in a petri dish. We will return to this reference method at the end of the present description.
Un exemple de la méthode optimisée par 15 filtration et brossage est donné plus loin. An example of the method optimized by filtration and brushing is given later.
Les résultats (valeurs d'intensité bioluminescente) obtenus par cette méthode sont directement comparables, à partir de 100ml microfiltrés, aux dénombrements de colonies et à leur envahissement, exprimé en % SRF (pourcentage de croissance à la Surface de Rétention du Filtre), exploités lors de la mise en oeuvre du procédé microbiologique de référence par microfiltration et incubation de la membrane en boîte de Pétri, qui se rapporte à 100 cm3 de combustible filtré. The results (bioluminescent intensity values) obtained by this method are directly comparable, from 100ml microfiltered, to colony counts and their invasion, expressed in% SRF (growth percentage at the Filter Retention Surface), exploited during the implementation of the microbiological reference method by microfiltration and incubation of the membrane Petri dish, which refers to 100 cm3 of filtered fuel.
Afin de vérifier l'efficacité d'un traitement préventif bactéricide et fongicide d'un kérosène biocontaminé, on a identifié la réaction de l'ATPmétrie et bioluminescence vis-à-vis des organismes morts. Pour cela, on a utilisé un échantillon de kérosène que l'on a inoculé des cinq souches de moisissures et de la bactérie aérobie étudiée. On a traité le kérosène biocontaminé par une solution mortifère de microorganismes, à savoir l'hypochlorite de sodium (eau de Javel). In order to verify the effectiveness of a bactericidal and fungicidal preventive treatment of a biocontaminated kerosene, the reaction of ATPmetry and bioluminescence against dead organisms has been identified. For this, a sample of kerosene was used which was inoculated with the five strains of mold and the aerobic bacterium studied. Biocontaminated kerosene was treated with a deadly solution of microorganisms, namely sodium hypochlorite (bleach).
On a identifié la réaction en utilisant la trousse de la société Euralam, à partir de la méthode optimisée par microfiltration et brossage. A l'origine, le kérosène inoculé donne une intensité de 344144 RLU. Immédiatement après ajout de 500 ml d'eau de Javel, l'intensité bioluminescente notée est de 4536 RLU. Ensuite, en fonction du temps de mortalité de 1 heure à 24 heures, l'intensité bioluminescente présente une décroissance monotone asymptotique jusqu'à 1151 RLU. The reaction was identified using the Euralam kit, using the optimized microfiltration and brushing method. Originally, the inoculated kerosene gives an intensity of 344144 RLU. Immediately after adding 500 ml of bleach, the bioluminescent intensity noted is 4536 RLU. Then, depending on the time of death from 1 hour to 24 hours, the bioluminescent intensity has an asymptotic monotone decrease up to 1151 RLU.
Sachant que l'intensité bioluminescente de l'eau de Javel est de l'ordre de 4600 RLU, on peut considérer que l'ATPmétrie n'est pas influencée par la présence d'organismes morts et qu'elle réagit seulement vis-à-vis des organismes vivants. Knowing that the bioluminescent intensity of bleach is of the order of 4600 RLU, it can be considered that ATPmetry is not influenced by the presence of dead organisms and that it reacts only vis-à- live organisms.
En outre, on a montré la possibilité de mettre en uvre l'ATPmétrie et bioluminescence au pied d'un avion , sur un site d'exploitation ou dans une zone de maintien en conditions opérationnelles. In addition, the possibility of implementing ATP metering and bioluminescence at the foot of an aircraft, at an operating site or in a holding zone under operational conditions has been shown.
Plus précisément, on a validé cette technique en tant que méthode de contrôle de la biocontamination des carburéacteurs, sur le terrain, lorsque l'identification des micro-organismes n'est pas exigée. Specifically, this technique has been validated as a method for controlling biocontamination of jet fuels in the field when identification of microorganisms is not required.
Pour tout aéronef et toute cuve de stockage que l'on a étudiés, on a mis en oeuvre le protocole suivant, avec la technique Pocket Swab de la société Euralam. For any aircraft and any storage tank that has been studied, the following protocol has been implemented with the Pocket Swab technique of Euralam.
Au pied de l'avion, à l'aide d'un outillage de prélèvement connecté au point de purge ou de prélèvement du kérosène, on effectue un échantillonnage du combustible avec la phase aqueuse de décantation. At the foot of the aircraft, using a sampling tool connected to the purge or kerosene sampling point, the fuel is sampled with the aqueous phase of decantation.
Les volumes prélevés sont d'au moins cm3. Ils sont conditionnés dans des flacons stériles. The volumes collected are at least cm3. They are packaged in sterile vials.
Les prélèvements de carburant sont agités manuellement afin d'homogénéiser la dispersion des colonies de micro-organismes et leur répartition lors du fractionnement des prises d'essai de kérosène. The fuel samples are stirred manually in order to homogenize the dispersion of the colonies of microorganisms and their distribution during the fractionation of the kerosene test samples.
On procède alors immédiatement, sur place, aux essais d'ATPmétrie, avec des prises d'essai de 100 cm3 de combustible, microfiltrée à 0,45 pm de rétention absolue, par le système Milliflex-100, afin de brosser la surface de rétention de la membrane stérile à l'aide de l'écouvillon du stylo d' échantillonage. The on-site ATPmétrie tests are then carried out immediately, with 100 cc samples of fuel, microfiltered at 0.45 μm absolute retention, by the Milliflex-100 system, in order to brush the retention surface. the sterile membrane using the swab of the sampling pen.
Le volume prélevé restant est utilisé pour réaliser les essais microbiologiques de référence par microfiltration sur membrane et incubation en boîte de Pétri au contact d'un milieu nutritif global MTGE . Ces essais permettent, outre la comparaison des valeurs obtenues avec les degrés de biocontamination de référence, de valider l'utilisation de la technique de contrôle de la biocontamination "au pied de l'avion". The remaining sample volume is used to carry out the microbiological reference tests by membrane microfiltration and incubation in petri dishes in contact with a global nutrient medium MTGE. These tests make it possible, in addition to comparing the values obtained with the reference biocontamination levels, to validate the use of the biocontamination control technique "at the foot of the aircraft".
D'autre part, l'ensemble des résultats expérimentaux comparatifs obtenus servent également à la définition des traitements préventifs et curatifs des réservoirs (voir plus loin). On the other hand, all the comparative experimental results obtained are also used to define the preventive and curative treatments of reservoirs (see below).
Pour valider la méthode d'ATPMétrie, on a choisi de quantifier: - la biocontamination du kérosène Jet A-1 stocké pendant environ 4 mois dans les réservoirs structuraux de trois avions, et - la biocontamination du kérosène Jet A-1 stocké dans deux cuves de 20000 litres chacune. To validate the ATPMetry method, we chose to quantify: - the biocontamination of jet A-1 kerosene stored for about 4 months in the structural tanks of three aircraft, and - the biocontamination of Jet A-1 kerosene stored in two tanks of 20000 liters each.
On a utilisé la méthode rapide par ATPmétrie et bioluminescence et les résultats ont été comparés au procédé de référence par microfiltration et incubation sur membrane. The rapid ATPmetry and bioluminescence method was used and the results were compared to the reference method by microfiltration and membrane incubation.
Pour chaque avion, le combustible a été échantillonné au niveau des points de purge des trois réservoirs structuraux central, droit et gauche, selon les règles de l'art. For each aircraft, the fuel was sampled at the purge points of the three central, right and left structural tanks, according to the rules of the art.
Pour chaque réservoir, un demi-litre de carburéacteur a été soutiré, conditionné et fractionné dans deux flacons ayant chacun un volume de 250 cm3. L'un des flacons a servi à l'expertise microbiologique sur place. L'autre flacon a été utilisé pour des investigations complémentaires et des essais de référence par microfiltration et incubation sur membrane. For each tank, half a liter of jet fuel was withdrawn, conditioned and fractionated in two flasks each having a volume of 250 cm3. One of the flasks was used for on-site microbiological expertise. The other vial was used for further investigations and reference tests by microfiltration and membrane incubation.
Sur certains prélèvements de 250 cm3 effectués sur les avions, on a pratiqué la méthode ATPmétrique optimisée selon laquelle, au moyen de la brosse de l'écouvillon du stylo d'échantillonnage, on brosse la surface de rétention de la membrane stérile qui a servi à microfiltrer 100 cm3 de kérosène Jet A-1. On some 250 cm3 samples taken from airplanes, the optimized ATPmetric method was performed in which, using the brush of the sampling pen swab, the sterile membrane retention surface used to microfilter 100 cm3 Jet A-1 kerosene.
Les réalisations expérimentales sont précisées ci-après et constituent un exemple de la méthode optimisée par filtration et brossage. The experimental achievements are specified below and are an example of the method optimized by filtration and brushing.
- Avant chaque essai, on détermine le blanc (zéro) du stylo d'échantillonnage: on identifie l'intensité luminescente de l'écouvillon de ce stylo avant brossage du filtre. On introduit l'écouvillon vierge dans le luminomètre et l'on effectue la lecture de l'intensité lumineuse blanc (en valeur empirique RLU). Trois mesures sont effectuées par ordre chronologique. - Before each test, the white (zero) of the sampling pen is determined: the luminescent intensity of the swab of this pen is identified before brushing the filter. The virgin swab is introduced into the luminometer and the white light intensity is read (in empirical value RLU). Three measurements are performed in chronological order.
- Sur une membrane microporeuse stérile, de type écran, d'au moins 0,45 pm de rétention absolue, on microfiltre 100 cm3 de kérosène Jet A-l. Pour cette opération, on utilise un séparateur et une unité Milliflex (ensemble de filtration stérile) ainsi que la pompe à vide correspondante Milliflex-100. On a sterile microporous membrane, of screen type, of at least 0.45 μm absolute retention, 100 cc of Jet A-1 kerosene is microfiltered. For this operation, a separator and a Milliflex unit (sterile filtration unit) and the corresponding Milliflex-100 vacuum pump are used.
Remarquons toutefois que d'autres systèmes de micro filtration, commercialement disponibles, pourraient être aussi utilisés. It should be noted, however, that other commercially available micro-filtration systems could also be used.
L'analyse est conduite de la façon suivante. The analysis is conducted as follows.
- On place un séparateur et une unité Milliflex sur le support de la pompe à vide Milliflex-100. - A separator and a Milliflex unit are placed on the support of the Milliflex-100 vacuum pump.
- On verse 100 ml d'échantillon de kérosène dans l'entonnoir et l'on fait le vide, grâce à la pompe, pour filtrer l'échantillon. 100 ml of kerosene sample are poured into the funnel and the pump is evacuated to filter the sample.
- Ensuite, on effectue deux rinçages successifs du vase de filtration et du filtre à l'aide des solutions stériles suivantes: 1) 100 cm3 de Triton X-100 dilué à 0,1% en volume dans l'eau permutée, et 2) 30 cm3 de sérum physiologique, contenant 0,85% de NaCl dilué dans de l'eau permutée. - Then, two successive rinsing of the filter vessel and the filter are carried out using the following sterile solutions: 1) 100 cm3 of Triton X-100 diluted to 0.1% by volume in deionized water, and 2) 30 cm3 of physiological saline containing 0.85% of NaCl diluted in deionized water.
- Avec l'écouvillon du stylo d'échantillonnage, on brosse soigneusement la totalité de la surface de rétention de la membrane filtrante en respectant deux directions perpendiculaires qui suivent celles des carrés imprimés sur la membrane. Après brossage, la membrane est jetée. En aucun cas, par ce procédé, la membrane ne peut être utilisée à une mise en incubation au contact d'un milieu nutritif quelconque. - With the swab of the sampling pen, carefully brush the entire retention surface of the filter membrane in two perpendicular directions that follow those of the printed squares on the membrane. After brushing, the membrane is discarded. In no case, by this method, the membrane can be used to be incubated in contact with any nutrient medium.
- L'écouvillon est mis en contact avec les réactifs luciférine et luciférase . - The swab is put in contact with the luciferin and luciferase reagents.
- Après quelques secondes d'incubation, on introduit l'écouvillon dans le luminomètre et l'on effectue la lecture d'intensité bioluminescente relative (en valeur empirique RLU). Trois mesures sont effectuées par ordre chronologique. After a few seconds of incubation, the swab is introduced into the luminometer and the relative bioluminescent intensity reading is read (in empirical value RLU). Three measurements are performed in chronological order.
- La valeur de l'intensité bioluminescente relative (Dre/ est définie par la moyenne arithmétique de ces trois mesures: = 3 (01 + (I)2 + (133) - On détermine la valeur de l'intensité bioluminescente absolue moyenne 1û,,,,. qui est égale à l'intensité bioluminescente relative moyenne moins la valeur de l'intensité lumineuse correspondant au stylo vierge ( blanc ), avant brossage de la surface de rétention de la membrane filtrante: nhs (1)rel hlanc En outre, pour chaque prélèvement de 250 cm3, effectué dans les avions, on procède à des analyses microbiologiques en utilisant le procédé de référence par microfiltration et incubation sur membrane. The value of the relative bioluminescent intensity (Dre / is defined by the arithmetic mean of these three measurements: = 3 (01 + (I) 2 + (133). The value of the average absolute bioluminescent intensity is determined. ,,, which is equal to the average relative bioluminescent intensity minus the value of the luminous intensity corresponding to the virgin pen (white), before brushing the retention surface of the filtering membrane: nhs (1) rel hlanc In addition for each 250 cm3 sample taken from airplanes, microbiological analyzes are carried out using the reference method by microfiltration and membrane incubation.
Pour ce faire, sur une membrane microporeuse stérile, de type écran, de 0,45}gym de rétention absolue, on microfiltre 100 cm3 de kérosène Jet A-l. La membrane est rincée par 100 cm3 de solution Triton X- 100 puis par 30 cm3 de sérum physiologique. Puis la membrane est mise en incubation, en boîte de Pétri, au contact d'un tampon imbibé d'un milieu nutritif global MTG-E . To do this, on a sterile microporous membrane, screen type, 0.45} g of absolute retention, 100 cm3 of Jet A-1 kerosene was microfiltered. The membrane is rinsed with 100 cm3 of Triton X-100 solution and then with 30 cm3 of physiological saline. The membrane is then incubated, in a petri dish, in contact with a swab soaked in a MTG-E nutrient medium.
Ce procédé permet d'interpréter les résultats de bioluminescence exprimés en RLU, engendrant l'établissement d'une corrélation avec le dénombrement de souches et leur degré d'envahissement (exprimé en % SRF ) . This method makes it possible to interpret the results of bioluminescence expressed in RLU, causing the establishment of a correlation with the enumeration of strains and their degree of invasion (expressed in SRF%).
Les degrés de biocontamination obtenus à partir du procédé microbiologique de référence par microfiltration sur membrane et incubation en boîte de Pétri au contact d'un milieu nutritif global MTG- E permettent de définir des traitements préventifs et curatifs des réservoirs structuraux des avions, ou de réservoirs similaires ou identiques, en fonction des différents niveaux de biocontamination exploités par ATPmétrie et bioluminescence. The levels of biocontamination obtained from the microbiological reference method by microfiltration on a membrane and incubation in a Petri dish in contact with a global nutrient medium MTG-E make it possible to define preventive and curative treatments of the structural reservoirs of the aircraft, or reservoirs. similar or identical, depending on the different biocontamination levels exploited by ATPmetry and bioluminescence.
En pratique, si une détection par ATPmétrie, de préférence au moyen d'une trousse de la société Euralam, et en utilisant au préalable une filtration et un brossage, donne des valeurs supérieures à environ 500 RLU, cette détection doit déclencher les traitements préventifs habituels. Les traitements curatifs sont à étudier au cas par cas à partir du moment où les traitements préventifs ne sont plus efficaces. In practice, if a detection by ATPmetry, preferably by means of a kit from Euralam, and by previously using a filtration and brushing, gives values greater than about 500 RLU, this detection should trigger the usual preventive treatments . Curative treatments are to be studied on a case by case basis from the moment when the preventive treatments are no longer effective.
En conclusion, la technique d'ATPmétrie et bioluminescence est parfaitement compatible avec le kérosène Jet A-1. Elle est très intéressante car elle est simple à mettre en oeuvre. Elle fournit une réponse très rapidement, en moins de 15 minutes, et permet de détecter les principaux organismes viables dans les carburéacteurs. De plus, elle est applicable directement sur le terrain et ne demande pas l'intervention d'un personnel ayant des compétences particulières en microbiologie. In conclusion, the ATPmetry and bioluminescence technique is perfectly compatible with Jet A-1 kerosene. It is very interesting because it is simple to implement. It provides a response very quickly, in less than 15 minutes, and can detect the main viable organisms in jet fuels. In addition, it is directly applicable in the field and does not require the intervention of personnel with special skills in microbiology.
On revient dans ce qui suit sur le procédé dit de référence par microfiltration et incubation. In the following, reference is made to the so-called reference process by microfiltration and incubation.
Dans le cas de ce procédé, les micro- organismes qui sont présents dans les carburéacteurs, essentiellement dans les kérosènes, sont isolés et cultivés à la surface de rétention d'une membrane filtrante, stérile, microporeuse, de type écran. In the case of this process, the microorganisms which are present in the jet fuel, essentially in the kerosenes, are isolated and cultured on the retention surface of a filter membrane, sterile, microporous, screen type.
L'analyse est conduite de la façon qui suit. The analysis is conducted as follows.
- On prépare une solution de Triton X-100 , disponible auprès de lasociété Rohm et Haas, diluée à 0,1% en volume dans de l'eau permutée, et une solution de sérum physiologique, à 0,85% en masse de NaCl dilué dans de l'eau permutée. A solution of Triton X-100, available from the company Rohm and Haas, diluted to 0.1% by volume in deionized water, and a solution of physiological saline, at 0.85% by weight of NaCl, is prepared. diluted in deionized water.
Pour ces deux solutions, l'eau permutée est microfiltrée par une membrane de 0,45 pm de rétention absolue et, après répartition dans des flacons à vis de 10 cm3, les solutions sont stérilisées par autoclavage, pendant 20 minutes à 121 C. For these two solutions, the permutated water is microfiltered by a membrane of 0.45 pm absolute retention and, after distribution in 10 cm3 screw vials, the solutions are sterilized by autoclaving for 20 minutes at 121 C.
- On filtre, sous dépression, 100 cm3 de prélèvement de carburéacteur au moyen d'une membrane stérile, microporeuse, de 0,45 pm de rétention absolue. 100 cm3 of jet fuel removal are filtered under vacuum using a sterile, microporous membrane of 0.45 μm absolute retention.
- On fait des rinçages successifs du vase de filtration et de la membrane filtrante à l'aide des solutions stériles suivantes: 1) 100 cm3 de Triton X-100 , et 2) 30 cm3 de sérum physiologique. - The filter vessel and filter membrane are rinsed successively with the aid of the following sterile solutions: 1) 100 cm3 of Triton X-100, and 2) 30 cm3 of physiological saline.
- On transfère le filtre dans une boîte de Pétri qui contient un tampon absorbant stérile, imbibé et saturé par 2 cm3 de bouillon MTG-E . Ce bouillon est un milieu nutritif global pour le développement de bactéries, de champignons et d'actinomycètes, stade intermédiaire entre les bactéries et les champignons de la classe des bactéries filamenteuses, vivants dans les carburéacteurs de type kérosène Jet A-1. The filter is transferred to a petri dish which contains a sterile absorbent pad, soaked in and saturated with 2 cm 3 of MTG-E broth. This broth is a global nutrient medium for the development of bacteria, fungi and actinomycetes, an intermediate stage between bacteria and fungi of the class of filamentous bacteria, living in Jet A-1 kerosene jet fuels.
- On examine le filtre, avant incubation, au microscope binoculaire biologique, sous un grossissement de 40 et par une lumière incidente, dans le but d'identifier toute pollution particulaire solide non biologique. The filter is examined, before incubation, under a binocular biological microscope, at a magnification of 40 and by incident light, in order to identify any non-biological solid particulate pollution.
- On met en incubation l'ensemble de la boîte de Pétri retournée, à une température de 30 à 35 C et pendant un temps minimum de 48 heures. Pendant cette incubation, le filtre est en contact avec le tampon imbibé, qui se situe sur la membrane, afin que le bouillon MTG-E vienne en contact avec les micro-organismes, par capillarité au travers des pores. The entire inverted Petri dish is incubated at a temperature of 30 ° C. to 35 ° C. and for a minimum of 48 hours. During this incubation, the filter is in contact with the impregnated buffer, which is located on the membrane, so that the MTG-E broth comes into contact with the microorganisms, by capillarity through the pores.
- Au cours de l'incubation et après celle-ci, on examine les filtres au microscope binoculaire biologique, sous des grossissements de 40, de 100 et de 200, et par une lumière incidente, afin de détecter, de dénombrer et d'identifier les colonies et les germes de micro-organismes. - During incubation and after incubation, biological binocular microscope filters, at magnifications of 40, 100 and 200, and incident light are examined for detection, enumeration and identification. colonies and germs of microorganisms.
Les développements de micro-organismes sont quantifiés, en fonction de leur nature et du temps d'incubation, en pourcentage de croissance à la Surface de Rétention du Filtre (% SRF). Developments of microorganisms are quantified, depending on their nature and incubation time, as percent growth at the Filter Retention Surface (% SRF).
Les observations microscopiques sous grossissement de 200 sont faites à l'issue de l'incubation, la distance focale nécessitant un montage de la membrane filtrante entre deux lames de verre. The microscopic observations under magnification of 200 are made at the end of the incubation, the focal length requiring a mounting of the filter membrane between two glass slides.
On précise que toutes ces opérations de filtration et de préparation des solutions et des filtres ainsi que les opérations microscopiques en cours d'incubation sont réalisées au sein d'une enceinte à empoussièrement contrôlé, à flux laminaire. It is specified that all these operations of filtration and preparation of the solutions and filters as well as the microscopic operations being incubated are carried out within a controlled dust controlled enclosure, with laminar flow.
Avant et après ces manipulations, toute la verrerie servant à la préparation des solutions et à la filtration est stérilisée par autoclavage, pendant 20 minutes à 121 C. Before and after these manipulations, all the glassware used for the preparation of the solutions and the filtration is sterilized by autoclaving for 20 minutes at 121 ° C.
On revient maintenant sur la détection de la biocontamination des carburéacteurs au moyen de la méthode qui utilise le systeme de filtration "Milliflex-100". We are now returning to the detection of biocontamination of jet fuels using the method that uses the "Milliflex-100" filtration system.
Dans le cas de cette méthode, les micro- organismes, qui sont présents dans le kérosène, sont isolés et cultivés à la surface d'une membrane filtrante, microporeuse, de type écran. In the case of this method, the microorganisms, which are present in kerosene, are isolated and cultured on the surface of a filter membrane, microporous, screen type.
L'analyse est conduite de la façon qui suit. The analysis is conducted as follows.
- On place un séparateur et une unité Milliflex sur le support d'une pompe à vide Milliflex ou d'une rampe de filtration sous vide standard. - A separator and a Milliflex unit are placed on the support of a Milliflex vacuum pump or a standard vacuum filtration line.
- On verse 100 ml d'un échantillon de kérosène dans un entonnoir et l'on met la pompe en marche pour filtrer l'échantillon. - 100 ml of a kerosene sample is poured into a funnel and the pump is turned on to filter the sample.
- On place l'unité Milliflex sur une cassette dont le tampon a été préalablement imbibé d'un milieu nutritif global pour la culture des micro-organismes. - The Milliflex unit is placed on a cassette whose buffer has been soaked with a global nutrient medium for the culture of microorganisms.
- on applique une pression manuelle afin de séparer l'entonnoir. - Manual pressure is applied to separate the funnel.
- On ferme la cassette.- Close the cassette.
- On met la cassette en incubation à 35 C pendant un temps minimum de 48 heures. The cassette is incubated at 35 ° C. for a minimum of 48 hours.
- On examine les membranes filtrantes au microscope sous des grossissements de 40, 100 et 200. Filter membranes are examined under a microscope at magnifications of 40, 100 and 200.
Les exemples de l'invention, que l'on a donnés, sont relatifs à la détection de la biocontamination d'un carburéacteur. Cependant, le 25 procédé objet de l'invention n'est pas limité aux carburéacteurs. L'homme du métier peut adapter les exemples donnés à la détection de la biocontamination de tout combustible liquide. The examples of the invention, which have been given, relate to the detection of the biocontamination of a jet fuel. However, the method of the invention is not limited to jet fuels. Those skilled in the art can adapt the examples given to the detection of the biocontamination of any liquid fuel.
De plus, dans la présente invention, on peut aussi récupérer les microorganismes susceptibles d'être présents dans le combustible liquide par une 20 technique quelconque de récupération, telle que la filtration, et analyser directement les microorganismes ainsi récupérés dans une cellule d'ATPmétrie. In addition, in the present invention, microorganisms likely to be present in the liquid fuel can also be recovered by any recovery technique, such as filtration, and directly analyze the microorganisms thus recovered in an ATP metry cell.
Claims (10)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR0453178A FR2880035A1 (en) | 2004-12-23 | 2004-12-23 | Method of detecting biocontamination in a liquid fuel, comprises detecting micro-organisms in the liquid fuel by using an adenosinetriphosphate-metry technique |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR0453178A FR2880035A1 (en) | 2004-12-23 | 2004-12-23 | Method of detecting biocontamination in a liquid fuel, comprises detecting micro-organisms in the liquid fuel by using an adenosinetriphosphate-metry technique |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FR2880035A1 true FR2880035A1 (en) | 2006-06-30 |
Family
ID=34953213
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FR0453178A Withdrawn FR2880035A1 (en) | 2004-12-23 | 2004-12-23 | Method of detecting biocontamination in a liquid fuel, comprises detecting micro-organisms in the liquid fuel by using an adenosinetriphosphate-metry technique |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
FR (1) | FR2880035A1 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2925959A4 (en) * | 2012-11-29 | 2016-06-08 | Mi Llc | Use of rapid onsite bacteria test for oil and gas applications |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0563858A1 (en) * | 1992-04-01 | 1993-10-06 | Nihon Millipore Kogyo Kabushiki Kaisha | Method of determining viable count |
GB2294115A (en) * | 1994-10-11 | 1996-04-17 | Whitlock Hughes Ltd | Measuring surface contamination by organisms |
WO1998032020A1 (en) * | 1997-01-15 | 1998-07-23 | New Horizons Diagnostics Corporation | Method for detection of contaminants |
-
2004
- 2004-12-23 FR FR0453178A patent/FR2880035A1/en not_active Withdrawn
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0563858A1 (en) * | 1992-04-01 | 1993-10-06 | Nihon Millipore Kogyo Kabushiki Kaisha | Method of determining viable count |
GB2294115A (en) * | 1994-10-11 | 1996-04-17 | Whitlock Hughes Ltd | Measuring surface contamination by organisms |
WO1998032020A1 (en) * | 1997-01-15 | 1998-07-23 | New Horizons Diagnostics Corporation | Method for detection of contaminants |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
ANONYMOUS: "HY-LITE Jet A1 Fuel Test", INTERNET ARTICLE, October 2004 (2004-10-01), XP002344755, Retrieved from the Internet <URL:http://pronet-internet.merck.de/Attachment/200409.031.ProNet.pdf?file> * |
MIYAMOTO TAKAHISA ET AL: "Rapid detection and counting of viable bacteria in vegetables and environmental water using a photon-counting TV camera", JOURNAL OF FOOD PROTECTION, vol. 61, no. 10, October 1998 (1998-10-01), pages 1312 - 1316, XP008052110, ISSN: 0362-028X * |
TANAKA H ET AL: "Development and application of a bioluminescence ATP assay method for rapid detection of coliform bacteria", WATER RESEARCH, PERGAMON PRESS, OXFORD, GB, vol. 31, no. 8, 1997, pages 1913 - 1918, XP002297602, ISSN: 0043-1354 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2925959A4 (en) * | 2012-11-29 | 2016-06-08 | Mi Llc | Use of rapid onsite bacteria test for oil and gas applications |
US9732372B2 (en) | 2012-11-29 | 2017-08-15 | M-I L.L.C. | Use of rapid onsite bacteria test for oil and gas applications |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Hu et al. | Applicability of LIVE/DEAD BacLight stain with glutaraldehyde fixation for the measurement of bacterial abundance and viability in rainwater | |
US7485262B2 (en) | Apparatus for chemiluminescent assays | |
US7060223B2 (en) | Polymeric medium for the retention of reagent species for use in a hand-held device for the relatively rapid detection of the presence of an analyte of interest in a sample | |
US20060216196A1 (en) | Narrow swab (access swab) for ATP Measurement | |
PL189724B1 (en) | Method of detecting presence and determining content of impurities and apparatus therefor 329009 | |
CN1908186B (en) | Method of measuring bacteria amount and special agent and apparatus therefor | |
US6653147B2 (en) | Apparatus and method for chemiluminescent assays | |
JP5960421B2 (en) | Cell measuring method and cell measuring reagent | |
US6541194B2 (en) | Method for the detection of the presence of chemical species known to inhibit a chemiluminescent reaction | |
US20010046687A1 (en) | Method for the enhancement of luminescence intensity from a reaction between adenosine triphosphate (ATP) and a luciferase/luciferin reactant system | |
WO2004050902A1 (en) | Method for universal detection of micro-organisms and reaction medium therefor | |
Singh et al. | Evaluation of biomass | |
JP5493387B2 (en) | Method for producing selective medium and use thereof | |
EP2872867A1 (en) | Automated system for the lysis of microorganisms present in a sample, for extraction and for purification of the nucleic acids of said microorganisms for purposes of analysis | |
FR2880035A1 (en) | Method of detecting biocontamination in a liquid fuel, comprises detecting micro-organisms in the liquid fuel by using an adenosinetriphosphate-metry technique | |
CA1335704C (en) | Process for counting, screening and identifying mycoplasms generally and specially urogenital mycoplasms, and biological substrate specially adapted to such | |
JP3599979B2 (en) | Microbial assay | |
Bakermans et al. | Use of substrate responsive-direct viable counts to visualize naphthalene degrading bacteria in a coal tar-contaminated groundwater microbial community | |
JP2009136205A (en) | Method for measuring intracellular atp | |
JP2003180395A (en) | Method for detecting microorganism | |
Santander | Insights into ocean-to-atmosphere transfer of humic-like substances and bacteria | |
FR2846338A1 (en) | MULTI-ENZYMATIC ELECTROCHEMICAL BIOSENSOR WITH SINGLE-CELL ALGAE, METHOD AND USE USING SUCH A BIOSENSOR | |
FR2786782A1 (en) | METHOD FOR DETECTION OF MICROORGANISMS AND MEDIUM FOR USE IN SUCH A METHOD | |
WO1992021779A1 (en) | Detection of pesticides of the organophosphorus and/or carbamate family | |
Roberta et al. | Micro-algal biosensors |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
ST | Notification of lapse |
Effective date: 20090831 |
|
CL | Concession to grant licences |
Name of requester: MBDA FRANCE, FR Effective date: 20140408 Name of requester: AIRBUS FRANCE, FR Effective date: 20140408 Name of requester: ASTRIUM SAS, FR Effective date: 20140408 |