FR2877725A1 - Use of glyoxal, comprising a particulate stationary phase, in a binding system for layer of separation material in the liquid chromatography - Google Patents
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Abstract
Description
LIANT POUR PHASE STATIONNAIRE POUR LA. SEPARATION DE CONSTITUANTSBINDER FOR STATIONARY PHASE FOR THE. SEPARATION OF CONSTITUENTS
D'ECHANTILLONS PAR CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE, PLAQUES DE SEPARATION EN COMPORTANT ET LEUR PROCEDE DE PREPARATION SAMPLE BY LIQUID CHROMATOGRAPHY, SEPARATING PLATES COMPRISING THEM AND PROCESS FOR THEIR PREPARATION
Dans le domaine de la séparation des constituants d'échantillons complexes par chromatographie, les techniques de chromatographie liquide sur colonne et de chromatographie planaire permettent de séparer les constituants d'un échantillon dans un milieu attracteur appelé phase stationnaire, à l'aide d'un fluide porteur appelé phase mobile. In the field of the separation of the constituents of complex samples by chromatography, liquid column chromatography and planar chromatography techniques make it possible to separate the constituents of a sample in an attracting medium called a stationary phase, using a carrier fluid called mobile phase.
Ces techniques diffèrent par le type de phase stationnaire utilisé et par le mode d'introduction de l'échantillon dans la phase stationnaire. Plus précisément, en chromatographie liquide sur colonne dont l'acronyme anglais est HPLC pour High Performance Liquid Chromatography l'échantillon et la phase mobile sont introduits dans une boucle d'injection qui alimente une colonne, généralement cylindrique, contenant la phase stationnaire. Les constituants séparés de l'échantillon sortent de la colonne, puis sont élués et détectés. These techniques differ in the type of stationary phase used and in the mode of introduction of the sample into the stationary phase. More precisely, in column chromatography, HPLC for High Performance Liquid Chromatography, the sample and the mobile phase are introduced into an injection loop which feeds a generally cylindrical column containing the stationary phase. The separated constituents of the sample leave the column and are eluted and detected.
En chromatographie planaire, on distingue deux techniques appelées chromatographie en couche mince (CCN!) dont l'acronyme anglais est TLC pour Thin Layer Chromatography et chromatographie sous flux forcé dont l'acronyme anglais est OPLC pour Over Pressure Layer Chromatography ou Optimum Performance Laminar Chromatography , encore connue sous le nom de FF-TLC pour Forced Flow TLC . Dans ces deux techniques planaires différents échantillons sont déposés directement sur une couche formant la phase stationnaire, puis entraînés par la phase mobile selon un ordre connu, fonction de leur rétention. In planar chromatography, there are two techniques called thin-layer chromatography (NCC!) Whose acronym is TLC for Thin Layer Chromatography and Forced Flow Chromatography, OPLC for Over Pressure Layer Chromatography or Optimum Performance Laminar Chromatography , also known as FF-TLC for Forced Flow TLC. In these two planar techniques, different samples are deposited directly on a layer forming the stationary phase, then driven by the mobile phase in a known order, depending on their retention.
Dans la TLC, les échantillons sont placés sur une phase stationnaire avant l'admission de la phase mobile par capillarité. La phase stationnaire est 30 partiellement au contact de l'atmosphère, sans y subire de pression. La détection s'effectue dans un détecteur externe après évaporation de la phase mobile. In the TLC, the samples are placed on a stationary phase before the admission of the mobile phase by capillarity. The stationary phase is partially in contact with the atmosphere without being subjected to pressure. The detection is carried out in an external detector after evaporation of the mobile phase.
La TLC se distingue de la FF-TLC ou OPLC où l'on peut même injecter l'échantillon dans un flux de solvant, phase mobile. La technique OPLC consiste à déposer un échantillon à une extrémité d'une couche de phase stationnaire qui est enfermée de façon étanche entre deux parois pour être soumise à une pression externe appliquée sur ces parois. Les constituants de l'échantillon sont séparés par entraînement dans la phase stationnaire au moyen d'une phase mobile formée par un fluide sous pression. Les parois délimitant la phase stationnaire sont équipées de moyens d'injection de l'échantillon dans la phase stationnaire et d'alimentation de celle-ci en phase mobile, à une première extrémité de la phase stationnaire, et comprennent des moyens de collecte d'échantillon et de phase mobile à l'autre extrémité de la phase stationnaire. TLC differs from FF-TLC or OPLC where one can even inject the sample into a solvent stream, mobile phase. The OPLC technique involves depositing a sample at one end of a stationary phase layer which is sealed between two walls to be subjected to external pressure applied to these walls. The constituents of the sample are separated by entrainment in the stationary phase by means of a mobile phase formed by a fluid under pressure. The walls delimiting the stationary phase are equipped with means for injecting the sample into the stationary phase and supplying it with a mobile phase, at a first end of the stationary phase, and comprise means for collecting data. sample and mobile phase at the other end of the stationary phase.
Ces deux techniques mettent en oeuvre des phases stationnaires à base d'une matière appropriée adsorbante telle que de la poudre ou des particules de gel de silicate, de silice, de silice microporeuse et/ou greffée, d'alumine, de silicate de magnésium, de cellulose, de polyamide, etc., généralement sous forme d'une couche déposée sur une plaque d'un matériau imperméable, comme de l'aluminium, du verre ou du plastique, l'ensemble phase stationnaire plaque étant aussi appelé colonne plate . L' adhésion au support de la couche de phase stationnaire est généralement assurée par un adhésif. La phase stationnaire doit avoir une certaine cohésion. These two techniques use stationary phases based on a suitable adsorbent material such as powder or particles of silicate gel, silica, microporous silica and / or grafted silica, alumina, magnesium silicate, cellulose, polyamide, etc., generally in the form of a layer deposited on a plate of impermeable material, such as aluminum, glass or plastic, the stationary phase plate assembly being also called flat column. The adhesion to the support of the stationary phase layer is generally provided by an adhesive. The stationary phase must have some cohesion.
Ces techniques se distinguent donc de l'HPLC en ce que la phase stationnaire est déposée en général sur un support plat, et non dans une colonne cylindrique ou tube où la cohésion de la phase stationnaire libre n'est pas nécessaire. Cette disposition à plat présente de grands avantages en recherche sur les méthodes analytiques et pour la mise au point de nouvelles molécules car elle permet aux utilisateurs d'avoir un accès visuel direct au milieu de séparation et ainsi de s'assurer que la séparation a bien eu lieu comme ils l'entendent. These techniques are thus distinguished from HPLC in that the stationary phase is generally deposited on a flat support, and not in a cylindrical column or tube where the cohesion of the free stationary phase is not necessary. This flat layout has great advantages in researching analytical methods and in the development of new molecules because it allows users to have direct visual access to the separation medium and thus to ensure that the separation has a positive impact. occurred as they wish.
Les colonnes plates ou plaques de séparation par chromatographie liquide, ci-après plaques de séparation , commercialement disponibles pour la TLC, usuelles, peuvent être adaptées pour l'OPLC par exemple en créant des rainures dans la phase stationnaire, en enlevant du matériau de séparation du support, à la périphérie de la couche, et en introduisant une solution d'élastomère dans la rainure, sans toutefois dépasser le niveau de la couche elle-même, puis en durcissant l'élastomère. The flat columns or separation plates by liquid chromatography, hereinafter separation plates, commercially available for the TLC, usual, can be adapted for the OPLC for example by creating grooves in the stationary phase, by removing separation material of the support, at the periphery of the layer, and introducing an elastomer solution into the groove, without however exceeding the level of the layer itself, and then hardening the elastomer.
Les couches préparées usuellement pour des applications en chromatographie en couche mince (CMC) comportent un liant polymère ajouté au matériau de base de la phase stationnaire (silice, cellulose, alumine, etc). The layers usually prepared for thin layer chromatography (TLC) applications comprise a polymer binder added to the base material of the stationary phase (silica, cellulose, alumina, etc.).
Toutefois, les couches usuelles pour la TLC, couches de silice microporeuse, par exemple, adaptées à l'OPLC ne supportent pas l'utilisation intensive sous flux forcé impliquée par cette technique OPLC, sans voir leur performance baisser notamment avec des flux forcés d'éluants aqueux ou fortement aqueux, à plus de 20 % d'eau par exemple, ou même d'autres solvants sont susceptibles d'entraîner le liant et de fragiliser l'adhésion au support. Ceci se traduit par un élargissement ou un dédoublement des pics. La couche de phase stationnaire perd en effet de son homogénéité, du fait de la solubilisation du liant. On observe parfois en outre que des parcelles de la couche de silice se détachent du support en verre ou en aluminium, notamment quand le support est retiré du dispositif de réalisation de l'OPLC, ceci compromettant les mesures visuelles et densitométriques ultérieures. However, the conventional TLC layers, microporous silica layers, for example, adapted to the OPLC do not support the intensive use under forced flow implied by this OPLC technique, without seeing their performance drop especially with forced flows of aqueous or highly aqueous eluents, more than 20% water, for example, or even other solvents are likely to cause the binder and weaken the adhesion to the support. This results in an enlargement or a duplication of the peaks. The stationary phase layer loses its homogeneity because of the solubilization of the binder. It is also sometimes observed that plots of the silica layer are detached from the glass or aluminum support, particularly when the support is removed from the device for producing the OPLC, which compromises the subsequent visual and densitometric measurements.
Des liants typiques utilisés en TLC sont l'acide polyacrylique et/ou ses sels, la polyacrylamide, la polyvinylalcool, les polyviinylpyrrolidones; ils sont solubles le plus souvent dans l'eau, à des pH neutres, acides ou basiques, ce qui limite leur utilisation comme liants en OPLC, car l'eau de la phase mobile les entraîne vers la sortie durant le passage du flux forcé, laissant la phase stationnaire sans liant. De tels adhésifs sont décrits aux brevets US 3 535 265 ou US 4 658 000. Typical binders used in TLC are polyacrylic acid and / or its salts, polyacrylamide, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidones; they are most often soluble in water, at neutral pH, acidic or basic, which limits their use as OPLC binders, because the water of the mobile phase drives them to the exit during the passage of the forced flow, leaving the stationary phase without binder. Such adhesives are described in US Pat. Nos. 3,535,265 or 4,658,000.
Ce liant interagit avec les groupes polaires des matériaux particulaires et crée des liaisons entre les particules quand la couche sèche. Les couches dont les constituants comportent peu de sites polaires pour créer des liaisons sont inaptes à la TLC, par manque de cohésion, dû à un contact affaibli entre liant et particules. De plus, les couches hautement fonctionnalisées ou greffées ne sont pas non plus aptes à la TLC pour des raisons liées à la faible capillarité de phase mobile aqueuse ce qui la rend visqueuse alors que la bonne circulation du solvant est nécessaire à la séparation. De ce fait, bien que des matériaux à haut taux de greffage soient utilisés pour la chromatographie HPLC, on ne peut les employer facilement pour la TLC ou l'OPLC, applications visées ici. En effet, de façon générale, un liant peut lier des particules de la phase stationnaire entre elles et aussi la phase stationnaire au support, par une combinaison de un ou plusieurs mécanismes chimique (liaison directe avec la phase), physique (liaison-H et polaires) et/ou mécanique (interpénétration). Alors que la silice présente une abondance de groupements polaires, les phases greffées n'en présentent que peu, et par conséquent les liants usuels ne sont pas performants. De plus, les phases greffées fonctionnent plus couramment avec des solvants polaires, tel que l'eau, qui solubilisent les liants classiques, donc les entraînent hors de la couche CCM. De ce fait, les phases CCM dites greffées ne sont que peu greffées, c'est-à-dire présentent moins de greffons, donc plus de points polaires non greffés, afin d'avoir suffisamment de points d'ancrage entre liant et particules pour résister aux faibles contraintes de la CCM. This binder interacts with the polar groups of the particulate materials and creates bonds between the particles when the layer dries. Layers whose constituents have few polar sites to create bonds are unfit for TLC, due to lack of cohesion, due to a weakened contact between binder and particles. In addition, the highly functionalized or grafted layers are also not suitable for TLC for reasons related to the low capillarity of aqueous mobile phase which makes it viscous while the good circulation of the solvent is necessary for the separation. As a result, although high grafting materials are used for HPLC, they can not be easily used for TLC or OPLC applications herein. Indeed, in general, a binder can bind particles of the stationary phase between them and also the stationary phase to the support, by a combination of one or more chemical mechanisms (direct link with the phase), physical (H-bond and polar) and / or mechanical (interpenetration). While silica has an abundance of polar groups, the grafted phases have little, and therefore the usual binders are not efficient. In addition, the grafted phases function more commonly with polar solvents, such as water, which solubilize conventional binders, thus pulling them out of the TLC layer. As a result, the so-called grafted CCM phases are only slightly grafted, that is to say they have fewer grafts, and therefore more ungrafted polar points, in order to have sufficient anchoring points between the binder and the particles for resist the weak constraints of the CCM.
II existe donc un besoin pour des couches de chromatographie utilisables dans la technique OPLC ou même TLC qui présentent une meilleure résistance mécanique, notamment au stress mécanique causé par le flux forcé d'éluants en OPLC, particulièrement les éluants aqueux ou mélanges aqueux d'éluants. De plus, les couches doivent pouvoir supporter des phases hautement aqueuses telles qu'elles sont utilisées en chromatographie en phase inverse. There is therefore a need for chromatography layers that can be used in the OPLC technique or even TLC that have a better mechanical resistance, in particular to the mechanical stress caused by the forced flow of OPLC eluants, particularly aqueous eluents or aqueous mixtures of eluents. . In addition, the layers must be able to withstand highly aqueous phases as used in reverse phase chromatography.
L'invention a pour but de résoudre tout ou partie des inconvénients présentés ci-avant. The object of the invention is to solve all or some of the disadvantages presented above.
La présente invention concerne des nouveaux matériaux pour la couche de phase stationnaire de séparation de constituants d'échantillon à analyser par chromatographie liquide. Ces nouveaux matériaux sont préparés à partir d'au moins un matériau de base pour phase stationnaire et d'un système liant, le système liant comportant au moins un polymère du type polyacrylamide résultant de l'interaction avec du glyoxal d'au moins un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié. The present invention relates to novel materials for the stationary phase layer for separating sample constituents to be analyzed by liquid chromatography. These new materials are prepared from at least one stationary phase base material and a binder system, the binder system comprising at least one polyacrylamide type polymer resulting from the interaction with glyoxal of at least one polymer polyacrylamide type based on a first monomer of the acrylamide type and, optionally, one or more second comonomers and optionally at least one difunctional monomer for obtaining a branched copolymer.
L'invention concerne l'utilisation du glyoxal dans un système liant pour couche de matériau de séparation par chromatographie liquide à base d'une phase stationnaire particulaire. The invention relates to the use of glyoxal in a binder system for liquid chromatographic separation material layer based on a particulate stationary phase.
Elle concerne également une plaque de séparation pour chromatographie du type comportant une couche de phase stationnaire liée déposée sur un support, la phase stationnaire liée comportant au moins un matériau de base pour phase stationnaire. et un système liant comportant au moins un polymère du type polyacrylamide défini ci-dessus et du glyoxal. It also relates to a separation plate for chromatography of the type comprising a bonded stationary phase layer deposited on a support, the bonded stationary phase comprising at least one base material for stationary phase. and a binder system comprising at least one polymer of the polyacrylamide type defined above and glyoxal.
L'invention concerne aussi un procédé de préparation d'une plaque de séparation pour chromatographie du type comportant une couche de phase stationnaire liée déposée sur un support qui comporte au moins les étapes (a) de mélange d'un premier polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères, et d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un polymère du type polyacrylamide ou copolymère polyacrylamide ramifié et d'un matériau de. base de phase stationnaire, (b) de couchage de la phase stationnaire liée sur le support, (c) de chauffage de la phase stationnaire liée couchée sur le support, l'adjonction du glyoxal étant réalisée par a) mélange d'un second polymère de type polyacrylamide, résultant de l'interaction avec du glyoxal d'au moins un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement d'un ou plusieurs comonomères, et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un polymère ou copolymère du type polyacrylamide ramifié, avec ledit premier polymère ou avec le mélange dudit premier polymère et du matériau de base de phase stationnaire, avant couchage ou p) l'ajout de glyoxal, et/ou d'un second polymère du type polyacrylamide, résultant de l'interaction avec du glyoxal d'au moins un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs comonomères, et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un polymère ou copolymère du type polyacrylamide ramifié, à la phase stationnaire couchée sur le support, entre le couchage et le chauffage. The invention also relates to a method for preparing a separation plate for chromatography of the type comprising a bonded stationary phase layer deposited on a support which comprises at least steps (a) of mixing a first polyacrylamide type polymer with base of a first monomer of the acrylamide type and, optionally, of one or more second comonomers, and at least one difunctional monomer making it possible to obtain a polyacrylamide or branched polyacrylamide copolymer type polymer and a material of. stationary phase base, (b) coating of the bonded stationary phase on the support, (c) heating of the bound stationary phase lying on the support, the addition of the glyoxal being carried out by a) mixing a second polymer of polyacrylamide type, resulting from the interaction with glyoxal of at least one polyacrylamide type polymer based on a first monomer of the acrylamide type and, optionally of one or more comonomers, and optionally at least one difunctional monomer to obtain a branched polyacrylamide polymer or copolymer, with said first polymer or with the mixture of said first polymer and the stationary phase base material, before coating or p) the addition of glyoxal, and / or a second polymer of the polyacrylamide type, resulting from the interaction with glyoxal of at least one polyacrylamide type polymer based on a first monomer of the acrylamide type and, optionally, one or more comonomers and, optionally, at least one difunctional monomer making it possible to obtain a branched polyacrylamide polymer or copolymer from the stationary phase lying on the support, between the coating and the heating.
Selon un autre aspect, l'invention concerne un procédé de préparation d'une plaque de séparation par chromatographie du type comportant une couche d'un matériau de base pour phase stationnaire, liée par un système liant, déposée sur un support, dans lequel l'un au moins du système liant de la phase stationnaire et du support comporte un polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères, et éventuellement d'au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié, traité au glyoxal. According to another aspect, the invention relates to a method for preparing a chromatographic separation plate of the type comprising a layer of a base material for a stationary phase bonded by a binder system, deposited on a support, in which the at least one of the binder system of the stationary phase and the support comprises a polyacrylamide type polymer based on a first monomer of the acrylamide type and, optionally, one or more second comonomers, and optionally at least one monomer difunctional allowing to obtain a branched copolymer treated with glyoxal.
Ainsi, selon l'invention le résultat cle l'interaction d'un polymère défini ci-dessus avec du glyoxal est utilisé dans le système liant de la couche stationnaire et/ou en traitement du support, résultant dans la cohésion de la couche et/ou son adhésion au support. Thus, according to the invention, the result of the interaction of a polymer defined above with glyoxal is used in the binder system of the stationary layer and / or in treatment of the support, resulting in the cohesion of the layer and / or or his support membership.
L'invention concerne donc également un procédé de prétraitement du support de couche de phase stationnaire, par un traitement le rendant plus apte à faire des liaisons/interactions physique et/ou mécaniques avec un film de polymère de même type que le liant, ceci afin qu'il soit incorporé dans le réseau polymère liant les particules du matériau de base de la phase stationnaire, et ainsi créer une liaison entre les particules et la surface du support. The invention therefore also relates to a pretreatment method of the stationary phase layer support, by a treatment making it more suitable for making physical / mechanical bonds and / or interactions with a polymer film of the same type as the binder, in order to it is incorporated in the polymer network linking the particles of the base material of the stationary phase, and thus create a bond between the particles and the surface of the support.
L'invention permet d'obtenir des matériaux pour CCM qui, comme cela apparaîtra dans les exemples, non seulement permettent une cohésion de la couche stationnaire suffisante pour que la couche puisse être utilisée en TLC, mais aussi en OPLC, mais aussi présentent une homogénéité satisfaisante, et encore permettent une adhésion suffisante de la couche sur le support. The invention makes it possible to obtain materials for TLC which, as will appear in the examples, not only allow sufficient stationary layer cohesion so that the layer can be used in TLC, but also in OPLC, but also have homogeneity. satisfactory, and still allow sufficient adhesion of the layer on the support.
Ainsi, selon l'invention, on dispose d'un liant réticulable thermiquement en présence de particules d'absorbant utiles en chromatographie; la réticulation diminue la solubilité du liant et, de cette manière, le liant n'est pas éliminé lors des procédés de chromatographie séparative, notamment ceux où la phase mobile contient de l'eau, et il conserve ses propriétés de liant dans les conditions de ces séparations. Cette réticulation notamment est assurée par une réaction entre groupes acrylamide et glyoxal. Cette réticulation a (lieu de préférence en deux temps: d'abord une réaction quasi-totale sur un premier polymère du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères, et éventuellement au moins un monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié, pour former un autre polymère (polymère 2), puis le mélange du polymère 2 avec un premier polymère (polymère 1) à base d'un premier monomère du type acrylamide, d'un ou plusieurs comonomères et d'au moins un monomère difonctionel, ces deux polymères réagissant ensemble. La température de réaction entre polymère 1 et polymère 2 peut être de l'ordre de 40 C à 140 C, de préférence supérieure à 60 C, de façon encore préférée de plus de 120 C, pour des temps de réaction de l'ordre de 10 minutes à 1 heure. Toutefois, ces températures et temps de réaction dépendent bien entendu de la nature des polymères, et l'homme du métier saura adapter ces conditions réactionnelles aux polymères choisis. Thus, according to the invention, a thermally crosslinkable binder is available in the presence of absorbent particles useful in chromatography; the crosslinking decreases the solubility of the binder and, in this way, the binder is not removed during separation chromatography processes, especially those where the mobile phase contains water, and it retains its binder properties under the conditions of these separations. This crosslinking is in particular ensured by a reaction between acrylamide and glyoxal groups. This crosslinking preferably takes place in two stages: first, a substantially total reaction on a first polymer of the polyacrylamide type based on a first monomer of the acrylamide type and, optionally, one or more second comonomers, and optionally at least one difunctional monomer making it possible to obtain a branched copolymer, to form another polymer (polymer 2), then mixing the polymer 2 with a first polymer (polymer 1) based on a first monomer of the acrylamide type, one or more comonomers and at least one difunctional monomer, these two polymers reacting together The reaction temperature between polymer 1 and polymer 2 may be of the order of 40.degree. C. to 140.degree. C., preferably greater than 60.degree. still more preferably more than 120 ° C., for reaction times of the order of 10 minutes to 1 hour, but these temperatures and reaction times of course depend on the nature of the polymers, and Those skilled in the art will be able to adapt these reaction conditions to the chosen polymers.
Le procédé de traitement d'un premier polymère avec du glyoxal permet d'obtenir une solution homogène de polymère 'modifié et susceptible de réticuler avec un polymère acrylamide pour former un réseau de solubilité réduite, comme cela apparaîtra dans les exemples. Le traitement du polymère 4 avec le glyoxal est réalisé à température de l'ordre ambiante pour obtenir le polymère 2. La durée de l'interaction est de l'ordre de 30 minutes à 1 heure. The method of treating a first polymer with glyoxal provides a homogeneous polymer solution which is crosslinkable with an acrylamide polymer to form a reduced solubility network, as will become apparent in the examples. The treatment of the polymer 4 with the glyoxal is carried out at room temperature to obtain the polymer 2. The duration of the interaction is of the order of 30 minutes to 1 hour.
L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description détaillée ci-dessus et des exemples. The invention will be better understood on reading the detailed description above and examples.
Comme support selon la présente demande, on utilise les supports usuels pour colonnes plates. Ainsi, sont utilisées usuellement des feuilles d'aluminium, de verre ou de plastique, typiquement de polyester, pour plaquette de chromatographie en couches minces. Les feuilles en aluminium ont de façon standard une épaisseur de l'ordre de 100 pm. D'autres épaisseurs peuvent cependant convenir, dépendant notamment du dispositif utilisé pour réaliser la chromatographie, par exemple de l'ordre de 10 pm à 2 mm, de préférence environ 100 pm à 11 mm dans les appareils de mesure usuels actuels. De même, les plaques de verre standard ont une épaisseur de l'ordre de 1 mm, mais d'autres épaisseurs peuvent convenir. Comme on le verra par la suite, ces matériaux peuvent être prétraités. As support according to the present application, the usual supports for flat columns are used. Thus, aluminum, glass or plastic sheets, typically polyester, are usually used for thin-layer chromatography wafers. The aluminum sheets have a standard thickness of the order of 100 .mu.m. Other thicknesses may however be suitable, depending in particular on the device used to carry out the chromatography, for example of the order of 10 μm to 2 mm, preferably about 100 μm to 11 mm in the current conventional measuring apparatus. Similarly, the standard glass plates have a thickness of the order of 1 mm, but other thicknesses may be suitable. As will be seen later, these materials can be pretreated.
A titre de matériau de base pour phase stationnaire, on peut utiliser selon l'invention les matériaux particulaires pour phase stationnaire que sont la silice microporeuse, la silice greffée, l'alumine, la cellulose, le talc, les microbilles de silice, l'agarose, la silice diatomée par exemple, et similaire, à savoir tout matériau utilisable comme phase stationnaire en chromatographie et notamment aussi des particules polymériques, telles que polystyrènedivinylbenzène, polyacrylates, polyméthacrylates, ainsi que des systèmes plus complexes de phases stationnaires composites, telle que la silice imprégnée de polymères à base de silicone, polystyrène, etc. Des particules de phase stationnaire greffées sont également utilisables, par exemple des silices greffées, ainsi que des phases greffées dites endcappées , c'est-à-dire qu'elles ont subi un post traitement au triméthylsilyl. Ce matériau peut être poreux ou non, et les particules de forme irrégulière ou sphérique. As base material for stationary phase, it is possible to use, according to the invention, particulate materials for stationary phase which are microporous silica, grafted silica, alumina, cellulose, talc, silica microspheres, agarose, diatomaceous silica for example, and the like, ie any material which can be used as a stationary phase in chromatography and in particular also polymeric particles, such as polystyrene-denedivinylbenzene, polyacrylates, polymethacrylates, as well as more complex systems of composite stationary phases, such as the silica impregnated with silicone-based polymers, polystyrene, etc. Grafted stationary phase particles are also usable, for example grafted silicas, as well as so-called endcapped graft phases, that is to say that they have undergone a post-treatment with trimethylsilyl. This material can be porous or not, and the particles of irregular or spherical shape.
Les particules de la phase stationnaire ont selon l'invention une taille moyenne inférieure à environ 50 pm, de préférence environ 20 pm, de façon encore préférée environ 10 pm. According to the invention, the particles of the stationary phase have an average size of less than about 50 μm, preferably about 20 μm, more preferably about 10 μm.
Plus précisément, on peut utiliser de la silice microporeuse standard comportant des pores de l'ordre de 6 nm (60 angstrôms), plus couramment connue sous le nom de silice 60, mais on peut également utiliser de la silice microporeuse à 10, 15 ou 30 nm (100, 150, 300 ou 500 angstrôms ou même plus). La surface d'absorption est de façon générale comprise entre 200 et 700 m2/gr. More specifically, standard microporous silica having pores in the range of 6 nm (60 angstroms), more commonly known as silica 60, can be used, but also microporous silica at 10, 15 or 30 nm (100, 150, 300 or 500 angstroms or even more). The absorption surface is generally between 200 and 700 m2 / gr.
On peut également utiliser de la silice greffée. Ces silices sont classiquement greffées avec des chaînes aliphatiques en C2 à C18, et peuvent également l'être avec des groupements hydroxyl, dihydroxypropyl, aminopropyl, phényl, fluorés ou cyanés en C3 par exemple, et des silices comportant d'autres motifs greffés usuels similaires étant également utilisables, ainsi que des particules portant des fonctions d'échangeur d'ions (sulfate, diméthylamine, carboxy, etc.). It is also possible to use grafted silica. These silicas are conventionally grafted with C2 to C18 aliphatic chains, and can also be grafted with hydroxyl, dihydroxypropyl, aminopropyl, phenyl, fluoro or C3 cyano groups, for example, and silicas comprising other similar common grafted units. being also usable, as well as particles bearing ion exchange functions (sulfate, dimethylamine, carboxy, etc.).
Selon l'invention, on utilise un système liant comportant un premier polymère ou copolymère (ci-après aussi polymère 1) du type polyacrylamide à base d'un premier monomère du type acrylamide et, éventuellement, d'un ou plusieurs seconds comonomères, et d'un ou plusieurs comonomères difonctionnels permettant d'obtenir un copolymère ramifié, et un second polymère ou copolymère du type polyacrylamide (ci-après aussi polymère 2), identique ou similaire au premier, et qui a été mis en présence de glyoxal. On appelle ici par la suite polymère indistinctement un polymère et un copolymère. According to the invention, a binder system comprising a first polymer or copolymer (hereinafter also polymer 1) of the polyacrylamide type based on a first monomer of the acrylamide type and, optionally, of one or more second comonomers, and one or more difunctional comonomers making it possible to obtain a branched copolymer, and a second polymer or copolymer of the polyacrylamide type (hereinafter also polymer 2), identical or similar to the first, and which has been put in the presence of glyoxal. Hereinafter polymer is referred to indistinctly as a polymer and a copolymer.
Ainsi, le premier polymère (polymère 1) peut être mélangé avec le résultat de l'interaction d'un autre premier polymère (qui peut être similaire ou identique au polymère 1) avec du glyoxal. On peut ainsi envisager le mélange du premier polymère avec un second polymère préparé par interaction de glyoxal avec un polymère du type polyacrylamide similaire au premier, sans lui être identique. Thus, the first polymer (polymer 1) may be mixed with the result of the interaction of another first polymer (which may be similar or identical to polymer 1) with glyoxal. It is thus possible to envisage mixing the first polymer with a second polymer prepared by interaction of glyoxal with a polymer of the polyacrylamide type similar to the first one, without being identical to it.
Selon l'invention, le premier polymère peut comporter 1 à 99 % en poids d'acrylamide ou méthacrylamide et au moins 0,1 % en poids de monomère difonctionnel. Selon l'invention, le monomère difonctionnel permettant d'obtenir un copolymère ramifié peut être utilisé à raison de 0,1 % en poids de premier polymère. According to the invention, the first polymer may comprise 1 to 99% by weight of acrylamide or methacrylamide and at least 0.1% by weight of difunctional monomer. According to the invention, the difunctional monomer making it possible to obtain a branched copolymer can be used in a proportion of 0.1% by weight of first polymer.
Ainsi, à titre de premier polymère, on utilise selon l'invention soit du type polyacrylamide à base de monomères H2C=CR3-CO-NR1R2 où RI et R2 sont identiques ou différents et représentent H ou un groupe alkyle en CI à C6, et R3 est H ou Me, ou les copolymères avec l'acide acrylique ou méthacrylique, ou encore des copolymère d'acrylamide et de méthylènebisacrylamide. A titre de seconds comonomères, ont peut utiliser l'acide acrylique, l'acide méthacrylique, l'acrylate ou le méthacrylate de sodium, le N,N-diméthylacrylamide, les acrylates ou méthacrylates de méthyle, éthyle, propyle, butyle, phényle, glycidyle ou dihydroxypropyle ou tout autre comonomère similaire, ou leurs mélanges. Thus, as the first polymer, there is used according to the invention either of the polyacrylamide type based on monomers H 2 C = CR 3 -CO-NR 1 R 2 where R 1 and R 2 are identical or different and represent H or a C 1 to C 6 alkyl group, and R3 is H or Me, or copolymers with acrylic or methacrylic acid, or copolymers of acrylamide and methylenebisacrylamide. As second comonomers, it is possible to use acrylic acid, methacrylic acid, sodium acrylate or methacrylate, N, N-dimethylacrylamide, methyl, ethyl, propyl, butyl or phenyl acrylates or methacrylates. glycidyl or dihydroxypropyl or any other similar comonomer, or mixtures thereof.
Les procédés de préparation des polymères utilisables sont décrits dans US 4 685 000 et US 3 535 265. The processes for preparing the usable polymers are described in US 4,685,000 and US 3,535,265.
Comme cela apparaîtra dans les exemples, le premier polymère est de préférence un copolymère acrylamide/N,N'-méthylène-bis-acrylamide. II est préparé de façon usuelle et de préférence en présence de N,N,N',N'tétraméthyl-éthylène-diamine (TMED) additif usuel de polymérisation radicalaire, et d'un amorceur radicalaire. As will be apparent from the examples, the first polymer is preferably an acrylamide / N, N'-methylene-bis-acrylamide copolymer. It is prepared in the usual manner and preferably in the presence of the usual additive N, N ', N'tetramethyl-ethylene-diamine (TMED) radical radical polymerization, and a radical initiator.
Le monomère difonctionel présent dans le polymère 1 et éventuellement présent dans le polymère 2 est choisi parmi le méthylène-bisacrylamide ou méthylène-bis-méthacrylarnide, de préférence, mais d'autres monomères difonctionels sont envisageables, par exemple propylèneglycol- d iacrylate, propylèneglycol-diméthacrylate, éthylèneglycol-diacrylate ou dans l'éthylèneglycol-bis-acrylate ou méthacrylate. The difunctional monomer present in the polymer 1 and optionally present in the polymer 2 is chosen from methylenebisacrylamide or methylene-bis-methacrylamide, preferably, but other difunctional monomers are conceivable, for example propylene glycol dicarbonate, propylene glycol. dimethacrylate, ethylene glycol diacrylate or in ethylene glycol-bis-acrylate or methacrylate.
A titre d'amorceur radicalaire, ors peut utiliser les amorceurs usuels tels que les dialkylperoxides, hydroperoxides, diacylperoxides, peresters, polyoxides organiques, composés diazo, ozone, halogènes, persulfate, sels métalliques, par exemple, etc. Le second polymère (polymère 2) résulte de l'interaction d'un premier polymère avec du glyoxal, dans des proportions de l'ordre de 0,1 à 5 moles de glyoxal par mole de CONH2 dans le premier polymère, de préférence 0,5 à 1,5 mole de glyoxal par mole de CONH2, et de façon encore préférée 0,8 à 1,3 mole par mole de CONH2, plus précisément préférée de 0,9 à 1,1 mole de glyoxal par mole de CONH2 dans le premier polymère. As a radical initiator, the usual initiators can be used such as dialkylperoxides, hydroperoxides, diacylperoxides, peresters, organic polyoxides, diazo compounds, ozone, halogens, persulfate, metal salts, for example, etc. The second polymer (polymer 2) results from the interaction of a first polymer with glyoxal, in proportions of the order of 0.1 to 5 moles of glyoxal per mole of CONH 2 in the first polymer, preferably 0, 5 to 1.5 moles of glyoxal per mole of CONH 2, and more preferably 0.8 to 1.3 moles per mole of CONH 2, more preferably 0.9 to 1.1 moles of glyoxal per mole of CONH 2 in the first polymer.
Ceci correspond à des proportions de l'ordre de 0,2 à 20 % en poids, de préférence 0,5 à 10 % en poids de glyoxal dans le système liant, de façon encore préférée de 1 à 3 % en poids de glyoxal dans le système liant. This corresponds to proportions of the order of 0.2 to 20% by weight, preferably 0.5 to 10% by weight of glyoxal in the binder system, more preferably 1 to 3% by weight of glyoxal in the linking system.
Selon l'invention, dans le mélange du premier et du second polymère au glyoxal (polymère 2), le premier est majoritaire. Ils sont mélangés dans des proportions allant d'environ 1 à environ 50 % en poids sec du résultat de l'interaction polymère-glyoxal dans le premier polymère, de préférence 2 à 30 % en poids. According to the invention, in the mixture of the first and the second polymer with glyoxal (polymer 2), the first is predominant. They are mixed in proportions ranging from about 1 to about 50% by dry weight of the result of the polymer-glyoxal interaction in the first polymer, preferably 2 to 30% by weight.
De plus, selon l'invention, le pourcentage en poids du système liant dans la couche stationnaire est d'environ 0,5 à 20 % en poids, de préférence 1 à 10 %, de façon encore préférée 2 à 6 % en poids, et plus précisément préférée 3 à 5 % en poids de la couche. In addition, according to the invention, the weight percentage of the binder system in the stationary layer is about 0.5 to 20% by weight, preferably 1 to 10%, more preferably 2 to 6% by weight, and more preferably 3 to 5% by weight of the layer.
Ainsi on peut dans un premier temps mélanger le premier polymère et le second polymère préalablement préparé, avec le matériau de base pour phase stationnaire, coucher ce mélange sur le support et chauffer. Thus it is possible firstly to mix the first polymer and the second polymer previously prepared, with the base material for stationary phase, coat this mixture on the support and heat.
On peut aussi faire le mélange clu premier polymère avec la phase stationnaire, puis mélanger le second polymère préalablement préparé au mélange du premier polymère et de la phase stationnaire, coucher ce mélange sur le support et chauffer. It is also possible to mix the first polymer with the stationary phase, then mix the second polymer previously prepared with the mixture of the first polymer and the stationary phase, coat the mixture on the support and heat.
Néanmoins, dans un autre mode de réalisation, on peut mélanger le premier polymère et la phase stationnaire, coucher ce mélange sur le support, y adjoindre le second polymère préalablement préparé ou du glyoxal, puis chauffer. Nevertheless, in another embodiment, it is possible to mix the first polymer and the stationary phase, to coat this mixture on the support, to add thereto the second previously prepared polymer or glyoxal, and then to heat.
Selon un autre aspect de l'invention, la surface du support est préparée avant le couchage, par une étape qui introduit sur le support des sites d'accrochage pour le système liant, par exemple une étape de préoxydation suivie du dépôt d'un film du second polymère. According to another aspect of the invention, the surface of the support is prepared before coating, by a step which introduces on the support of the attachment sites for the binder system, for example a preoxidation step followed by the deposition of a film of the second polymer.
Ainsi, on prépare le support d'aluminium par un pré-traitement oxydant. De tels traitements (eau/air) sont usuels pour former de l'alumine en surface. De tels traitements forment des irrégularités de surface qui permettent la liaison mécanique au support. Les supports en verre sont traités pour former des sites silanol, à la soude. Les supports en plastique peuvent être oxydés au plasma ou par effet Corona, par exemple. Thus, the aluminum support is prepared by an oxidizing pretreatment. Such treatments (water / air) are customary for forming alumina on the surface. Such treatments form surface irregularities which allow the mechanical connection to the support. The glass supports are treated to form silanol sites, with sodium hydroxide. Plastic supports can be plasma oxidized or corona-effect, for example.
Une solution liquide du second polymère est alors appliquée sur le support préoxydé par exemple inférieure à 40 % pds, de préférence inférieure à 20 % pds, par exemple environ 10 9'o. Le film peut être appliqué par enduction, par exemple au pinceau, ou par immersion, puis essuyé, ou par pulvérisation ou tout autre moyen adapté au dépôt d'un tel film. On procède à la réticulation, par exemple par chauffage pendant un temps nécessaire à la réticulation, par exemple à des températures de l'ordre de 100 à 130 C pendant des temps variant de 10 minutes à une heure, ceci dépendant de la nature du polymère. A liquid solution of the second polymer is then applied to the preoxidized support, for example less than 40% by weight, preferably less than 20% by weight, for example approximately 10%. The film may be applied by coating, for example with a brush, or by immersion, and then wiped off, or by spraying or any other means suitable for depositing such a film. The crosslinking is carried out, for example by heating for a time necessary for the crosslinking, for example at temperatures of the order of 100 to 130 ° C. for times varying from 10 minutes to one hour, this being dependent on the nature of the polymer. .
Cette étape permet d'améliorer l'adhésion de la couche au support. This step improves the adhesion of the layer to the support.
Exemple 1: Préparation du polymère 1 selon US 4,685,000 On a dissous 5 g d'acrylamide et 500 mg de N,N'-méthylène-bisacrylamide dans 250 ml d'eau distillée. On a alors ajouté 0,75m1 de N,N,N',N'-tétraméthyl-éthylènediamine (TMED) à la solution, sous agitation. Enfin, on a versé 200 mg de (NH4)2S2O8 dissous dans 0,750 ml d'eau distillée au centre de la solution. La solution a alors été fortement agitée quelques secondes et on l'a laissé gélifier une demi-heure. EXAMPLE 1 Preparation of Polymer 1 According to US Pat. No. 4,685,000 5 g of acrylamide and 500 mg of N, N'-methylenebisacrylamide were dissolved in 250 ml of distilled water. 0.75 ml of N, N, N ', N'-tetramethyl-ethylenediamine (TMED) was then added to the solution, with stirring. Finally, 200 mg of (NH4) 2S2O8 dissolved in 0.750 ml of distilled water was poured into the center of the solution. The solution was then stirred for a few seconds and allowed to gel for half an hour.
Le gel légèrement teinté d'opaline a été agité jusqu'à obtenir une composition lisse. 250 ml d'acétone ont été versés lentement au centre de cette composition sous agitation, et on a agité ensuite durant 15 minutes. Après avoir versé l'acétone en excès, on a récupéré un précipité blanc et on l'a dissous dans 200ml d'eau distillée avec un mélangeur. The lightly tinted gel of opaline was stirred until a smooth composition was obtained. 250 ml of acetone was slowly poured into the center of this composition with stirring, and then stirred for 15 minutes. After pouring excess acetone, a white precipitate was recovered and dissolved in 200 ml of distilled water with a mixer.
La solution obtenue, homogène et sans précipité, contient 0,022g/ml de polyacrylamide et présente une densité de 0,988/mI. The solution obtained, homogeneous and without precipitate, contains 0.022 g / ml of polyacrylamide and has a density of 0.988 / ml.
Exemple 2: Préparation de polymère réticulable 2 3,785 ml d'une solution de glyoxal à 40% Pds dans l'eau ont été dissous dans 37,865 ml d'eau distillée et passés aux ultrasons pendant 5 minutes. 118,350 ml d'une solution de polymère obtenu de façon analogue à celle de l'exemple 1, contenant 0,019 g.lml de polymère et de densité 0,96 g/ml ont alors été ajoutés au goutte à goutte au centre de la solution de glyoxal sous agitation. La composition obtenue a enfin été passée aux ultrasons pendant 5 minutes. Example 2: Preparation of Crosslinkable Polymer 3.785 ml of a 40% solution of glyoxal in water was dissolved in 37.865 ml of distilled water and sonicated for 5 minutes. 118.350 ml of a solution of polymer obtained in a manner analogous to that of Example 1, containing 0.019 g.lml of polymer and a density of 0.96 g / ml, were then added dropwise to the center of the solution of glyoxal with stirring. The composition obtained was finally sonicated for 5 minutes.
La composition ainsi obtenue présente aune concentration en polymère de 0, 2 mol/I. The composition thus obtained has a polymer concentration of 0.2 mol / l.
Exemple 3: Préparation d'un support en aluminium La préparation des plaquettes d'aluminium plates implique la préparation préalable a) d'un polymère 1, de façon analogue à celle de l'exemple 1, et b) d'une solution du polymère 2, de façon analogue à la façon décrite à l'exemple 2. Example 3 Preparation of an Aluminum Support The preparation of the flat aluminum plates involves the prior preparation of a) a polymer 1, in a manner analogous to that of Example 1, and b) a solution of the polymer. 2, similarly to the manner described in Example 2.
a) On a dissous 1 g d'acrylamide et 100 mg de N,N'-méthylènebisacrylamide dans 50 ml d'eau distillée. On a alors ajouté 0,150 ml de N, N,N',N'-tétraméthyl-éthylène-diamine (TMED) à la solution, sous agitation. Enfin, on a versé 40 mg de (NH4)2S2O8 dissous dans 0,150 ml d'eau distillée au centre de la solution. La solution a alors été fortement agitée quelques secondes et on l'a laissé gélifier une demi-heure. Le gel légèrement teinté d'opaline a été mélangé jusqu'à obtenir une composition lisse. 50 ml d'acétone ont été versés lenternent au centre de la composition sous agitation, et on a agité ensuite durant 15 minutes. Après avoir versé l'acétone en excès, on a récupéré un précipité blanc et on l'a dissous dans 25m1 d'eau distillée avec un mélangeur. a) 1 g of acrylamide and 100 mg of N, N'-methylenebisacrylamide were dissolved in 50 ml of distilled water. 0.150 ml of N, N, N ', N'-tetramethyl-ethylenediamine (TMED) was then added to the solution with stirring. Finally, 40 mg of (NH4) 2S2O8 dissolved in 0.150 ml of distilled water was poured into the center of the solution. The solution was then stirred for a few seconds and allowed to gel for half an hour. The lightly tinted gel of opaline was mixed until a smooth composition was obtained. 50 ml of acetone was poured internally into the center of the composition with stirring, and then stirred for 15 minutes. After pouring excess acetone, a white precipitate was recovered and dissolved in 25 ml of distilled water with a mixer.
La solution concentrée obtenue, lisse et sans précipité, contient 0, 036g/ml de polyacrylamide et présente une densité de 0,98g/ml. The concentrated solution obtained, smooth and without precipitate, contains 0.036 g / ml of polyacrylamide and has a density of 0.98 g / ml.
b) 1,435 ml d'une solution de glyoxal à 40% Pds dans l'eau ont été dissous dans 2,165 ml d'eau distillée et passés aux ultrasons pendant 5 minutes. 21,400 ml de la solution concentré de polymère obtenue en a) ont alors été ajoutés au goutte à goutte au centre de la solution de glyoxal sous agitation. La solution a enfin été passée aux ultrasons pendant 5 minutes. b) 1.435 ml of a solution of 40% w / w glyoxal in water was dissolved in 2.165 ml of distilled water and sonicated for 5 minutes. 21.400 ml of the concentrated polymer solution obtained in a) was then added dropwise to the center of the glyoxal solution with stirring. The solution was finally sonicated for 5 minutes.
La solution ainsi obtenue présente une concentration en polymère de 0,5 mol/I. c) Une plaquette d'aluminium a été degraissée au CH2Cl2, plongée dans The solution thus obtained has a polymer concentration of 0.5 mol / l. (c) An aluminum blister was degreased with CH2Cl2, dipped in
l'eau bouillante pendant 2 minutes et séchée au four à 120 C. boiling water for 2 minutes and oven dried at 120 C.
2 ml de la solution du polymère obtenue en b) ont alors été coulés 5 et étalés à la raclette sur la plaquette, qui a finalement été séchée à nouveau au four à 120 C pendant 1 min. Exemple 4: Préparation de la phase stationnaire avant dépôt. 2 ml of the solution of the polymer obtained in b) were then cast and spread on the wafer on the wafer, which was finally dried again at 120 ° C. for 1 min. Example 4: Preparation of the stationary phase before deposition.
7,3 ml de la solution de polymère obtenu à l'exemple 1 ont été dissous dans 8,5 ml d'eau distillée. La solution de polymère ainsi obtenue a été agitée pendant 5 minutes et passée aux ultrasons pendant 5 minutes. 5 g de silice Silice Merck Silica 60 45 pm ont alors été ajoutés à la solution sous agitation, et le mélange a été agité sous vide pendant 20 minutes. Finalement, après passage aux ultrasons du mélange obtenu pendant 7 minutes, 2,2 ml de la solution cle polymère obtenue à l'exemple 2 ont été versés doucement au centre du mélange agité et le mélange résultant a été agité sous vide pendant 5 minutes. 7.3 ml of the polymer solution obtained in Example 1 were dissolved in 8.5 ml of distilled water. The polymer solution thus obtained was stirred for 5 minutes and sonicated for 5 minutes. 5 g of Silica Merck Silica Silica 60 45 μm was then added to the stirred solution, and the mixture was stirred under vacuum for 20 minutes. Finally, after sonication of the resulting mixture for 7 minutes, 2.2 ml of the polymer solution obtained in Example 2 was gently poured into the center of the stirred mixture and the resulting mixture was stirred under vacuum for 5 minutes.
Exemple 5: Préparation de la phase stationnaire avant dépôt. Example 5: Preparation of the stationary phase before deposition.
De même, on a préparé une suspension pour préparer une couche de phase stationnaire avec 5,810 ml de la solution de polymère obtenu à l'exemple 1 dissous dans 6,260 ml d'eau distillée. La solution de polymère ainsi obtenue a été agitée pendant 5 minutes et passée aux ultrasons pendant 5 minutes. 4 g de silice Zeochem C.Gel 5-2C) pm ont alors été ajoutés à la solution sous agitation, et le mélange a été agité sous vide pendant 20 minutes. Finalement, après passage aux ultrasons du mélange obtenu pendant 7 minutes, 0,170 ml de la solution de polymère obtenue à l'exemple 2 ont été versés doucement au centre du mélange agité et le mélange résultant a été agité sous vide pendant 5 minutes. Similarly, a slurry was prepared to prepare a stationary phase layer with 5.810 ml of the polymer solution obtained in Example 1 dissolved in 6.260 ml of distilled water. The polymer solution thus obtained was stirred for 5 minutes and sonicated for 5 minutes. 4 g of Zeochem C.Gel silica 5-2C) was then added to the stirred solution, and the mixture was stirred under vacuum for 20 minutes. Finally, after sonication of the obtained mixture for 7 minutes, 0.170 ml of the polymer solution obtained in Example 2 was gently poured into the center of the stirred mixture and the resulting mixture was stirred under vacuum for 5 minutes.
16 Exemple 6: Dépôt sur plaque Sur une plaque on dépose un excès de la suspension préparée ci- dessus (ex 4 ou 5) qui est ensuite étalée à l'aide d'une réglette ajustée pour laisser une couche de 200 pm de suspension humide de manière uniforme sur la surface de l'aluminium. On laisse la couche sécher à l'air libre pendant 1 heure. puis on la place dans un four à 120 pendant 20 min. L'épaisseur finale obtenue est d'environ 80 pm. Example 6: Plate Deposition On a plate is deposited an excess of the suspension prepared above (ex 4 or 5) which is then spread with a ruler adjusted to leave a 200 μm layer of wet suspension evenly on the surface of the aluminum. The layer is allowed to air dry for 1 hour. then placed in an oven at 120 for 20 min. The final thickness obtained is about 80 μm.
Exemple 7: plaques avec silice RP18 On procède selon le procédé des exemples 4 et 6, avec des polymères préparés de façon analogue aux exemples 1 et 2 et avec de la silice RP18 (Merck LiChroprep RP-Select B, 25-40 prn). 1 ml éthanol est ajouté à 5.1 ml de polymère 1 dont la concentration est de 7,2 % en poids avant de l'ajouter à 4 g silice. Après avoir obtenu une suspension homogène, on ajoute 0,74 ml de polymère 2 de l'exemple 2 et 3,37 ml d'eau, puis on suit le reste du protocole de l'exemple 4 et les proportions, puis sur une plaque d'aluminium traité, on a étalé et séché selon l'exemple 6. EXAMPLE 7 Plates with RP18 Silica The procedure is carried out according to the method of Examples 4 and 6, with polymers prepared in a similar manner to Examples 1 and 2 and with RP18 silica (Merck LiChroprep RP-Select B, 25-40 μm). 1 ml of ethanol is added to 5.1 ml of polymer 1, the concentration of which is 7.2% by weight before adding it to 4 g of silica. After obtaining a homogeneous suspension, 0.74 ml of polymer 2 of Example 2 and 3.37 ml of water are added, followed by the rest of the protocol of Example 4 and the proportions, then on a plate. of treated aluminum, it was spread and dried according to Example 6.
Exemple 8: plaques avec silice R.P18 endcappée On procède comme à l'exemple 7, en utilisant pour phase stationnaire: RP18 3 pm sphérique et endcappée Alltech Exsil 80 ODS, 3 pm . EXAMPLE 8 Plates with endcapped silica R.P18 The procedure is as in Example 7, using as a stationary phase: RP18 3 μm spherical and endcapped Alltech Exsil 80 ODS, 3 μm.
Exemple 9: étalement sans pré-traitement Les plaques ont été préparées selon l'exemple 7 à ceci près que la plaque aluminium est seulement dégraissée au dichlorométhane, c'est-à-5 dire qu'elle n'est pas préalablement oxydée. La phase stationnaire a été étalée et séchée comme dans l'exemple 6. Example 9: Plating without pre-treatment The plates were prepared according to Example 7 except that the aluminum plate is only degreased with dichloromethane, that is to say that it is not previously oxidized. The stationary phase was spread and dried as in Example 6.
Exemple 10: Test de stabilité à l'eau (résistance à l'eau) Méthode et Résultats a) La stabilité des plaquettes portant d'une couche de phase stationnaire a été déterminée par OPLC en utilisant une cassette de développement radial 20x20 cm. Après avoir pompé 300 pl d'eau dans des conditions de flux forcé à une vitesse de flux de 100 pi/min, la cassette est retirée de l'appareil OPLC et la couche inspectée pour constater visuellement l'état de la phase stationnaire. On a noté si la silice est arrachée du support, ou si la silice est venue s'appliquer à la couche supérieure en Teflon de la cassette ou si la couche est dégradée mécaniquement, ou si aucun dommage n'est visible. Example 10: Water Stability Test (Water Resistance) Method and Results a) The stability of platelets bearing a stationary phase layer was determined by OPLC using a 20x20 cm radial development cassette. After having pumped 300 μl of water under forced flow conditions at a flow rate of 100 μl / min, the cassette is removed from the OPLC apparatus and the layer inspected to visually ascertain the state of the stationary phase. It has been noted whether the silica is torn from the support, or if the silica has come to apply to the Teflon top layer of the cassette or if the layer is degraded mechanically, or if no damage is visible.
b) Résultats - Une plaque commerciale (Merck ref 105560) jointoyée on observe que la silice RP18 se détache cle la plaquette aluminium. Elle est poudreuse, montrant un manque de cohésion et d'adhésion de la couche. b) Results - A commercial plate (Merck ref 105560) jointed is observed that the RP18 silica is detached from the aluminum plate. It is powdery, showing a lack of cohesion and adhesion of the layer.
- Une plaque selon l'exemple 6 a été testée selon l'exemple 10a). A plate according to Example 6 was tested according to Example 10a).
On observe que la silice est maintenue en parfait état sur le support et la silice ne se détache pas. It is observed that the silica is maintained in perfect condition on the support and the silica does not come off.
- Une plaque selon l'exemple 7 a été testée selon l'exemple 10a). On observe que la silice RP18 est maintenue en parfait état sur la plaquette et la silice ne se détache pas. A plate according to Example 7 was tested according to Example 10a). It is observed that the RP18 silica is kept in perfect condition on the wafer and the silica does not come off.
- Une plaque préparée selon l'exemple 8 présente après essai une couche parfaitement adhésive et cohésive. - A plate prepared according to Example 8 shows after testing a perfectly adhesive and cohesive layer.
- Une plaque préparée selon l'exemple 9 présente après essai une couche cohésive sans adhésion. - A plate prepared according to Example 9 shows after testing a cohesive layer without adhesion.
Exemple 11: séparation d'échantillons Méthode et résultats a) Des analyses séparatives en ligne (on-line) ont été réalisées pour des surfaces de plaquettes de 5x20 ou 20x20 cm2 dans un système OPLC usuel. On équilibre la plaquette avec le solvant d'élution à un débit de 200 pl/min. Example 11: Separation of Samples Method and Results a) Online (on-line) separation analyzes were performed for platelet surfaces of 5x20 or 20x20 cm2 in a conventional OPLC system. The wafer is equilibrated with the elution solvent at a rate of 200 μl / min.
Un mélange standard de paraben (méthyl-/éthyl-/propyl-/ et butyl- paraben) a été préparé en le dissolvant à raison de 1 mg/ml dans un mélange eau/acétonitrile (50:50). L'élution avec un rnélange isocratique (50:50 acétonitrile eau) a été faite continuellement sur une période d'une semaine à un débit de l'ordre de 200 pl/min. Périodiquement, pendant cette semaine la séparation du paraben a été réalisée sur système OPLC équipé d'une vanne d'injection manuelle et d'un détecteur d'UV. A standard mixture of paraben (methyl- / ethyl- / propyl- / and butyl-paraben) was prepared by dissolving it at a rate of 1 mg / ml in a water / acetonitrile mixture (50:50). Elution with isocratic mixing (50:50 acetonitrile water) was done continuously over a period of one week at a rate of about 200 pl / min. Periodically, during this week the separation of paraben was carried out on OPLC system equipped with a manual injection valve and a UV detector.
b) Résultats - Avec une plaquette commerciale (Merck réf. 105560), coupées à la dimension 5x20 cm et jointoyée avec élastomère pour OPLC. Dans le test décrit ci-dessus, on a observé dès l'obtention de l'équilibre une contrepression très importante, supérieure à 40 Bar. b) Results - With a commercial insert (Merck P / N 105560), cut to size 5x20 cm and elastomeric grouted for OPLC. In the test described above, it was observed, as soon as the equilibrium was obtained, a very significant counterpressure greater than 40 bar.
Lorsqu'on a arrêté le système OPLC et que l'on a retiré la plaquette, la silice est tombée de son support, révélant un manque 25 d'adhésion au support. When the OPLC system was stopped and the wafer was removed, the silica fell out of its support, revealing a lack of adhesion to the support.
Même avec une plaquette Merck 105560 20x20 cm2, la contrepression a été aussi très forte. Even with a Merck 105560 20x20 cm2 insert, the counterpressure was also very strong.
Ces colonnes sont inexploitables car les pics d'élution ont été très irréguliers (large ou dédoublés) dès la première injection, montrant une inhomogénéité de la phase de séparation sur la plaque. Lorsqu'on a arrêté le système OPLC et l'on a retiré la plaquette, la silice est tombée de son support. These columns are unusable because the elution peaks were very irregular (wide or split) from the first injection, showing an inhomogeneity of the separation phase on the plate. When the OPLC system was stopped and the wafer removed, the silica fell out of its support.
- Avec une plaquette commerciale (Machery-Nagel réf. Alugram C18), de dimensions 5x20 cm et jointoyée avec élastomère pour OPLC, on a observé une contrepression trop importante, supérieure à 40 Bar. - With a commercial plate (Machery-Nagel No. Alugram C18), 5x20 cm in size and elastomer-welded for OPLC, too much backpressure has been observed, greater than 40 bar.
Toutefois, un gradient d'élution de solvants a pu être fait et répété sur une période d'une semaine. Les temps de rétention des différents composés on été stables. However, a solvent elution gradient could be made and repeated over a period of one week. The retention times of the various compounds have been stable.
Lorsqu'on a arrêté le système OPLC et l'on a retiré la plaquette, la silice est tombée de son support. When the OPLC system was stopped and the wafer removed, the silica fell out of its support.
- Avec une plaquette selon l'exemple 9, de dimensions 5x20 cm et jointoyée avec élastomère pour OPLC. On a observé une contrepression moyenne à faible (30 à 40 Bar). With a wafer according to Example 9, of dimensions 5 × 20 cm and elastomer-bonded for OPLC. Medium to low pressure (30 to 40 Bar) was observed.
Un gradient d'élution de solvants a pu être fait et répété sur une période d'une semaine. Les temps de rétention des différents composés ont été stables. Lorsqu'on a arrêté le système OPLC et l'on a retiré la plaquette, la silice n'adhérait pas sur le support, cependant, elle est restée cohésive, comme un film, et pouvant être retirée d'une seule pièce. A solvent elution gradient could be made and repeated over a period of one week. The retention times of the different compounds were stable. When the OPLC system was stopped and the wafer was removed, the silica did not adhere to the support, however, it remained cohesive, like a film, and could be removed in one piece.
- Avec une plaquette selon les exemples 7 et 8, de dimensions 5x20 cm et jointoyée avec élastomère pour OPLC. On a observé une contrepression moyenne à faible (30 à 40 Bar). - With a plate according to Examples 7 and 8, of dimensions 5x20 cm and grouted with elastomer for OPLC. Medium to low pressure (30 to 40 Bar) was observed.
Un gradient d'élution de solvants a pu être fait sur une période d'une semaine. Les temps de rétention des différents composés ont été stables. Lorsqu'on a arrêté le système OPLC et l'on a retiré la plaquette, la silice adhérait sur le support et est restée cohésive. A solvent elution gradient could be done over a period of one week. The retention times of the different compounds were stable. When the OPLC system was stopped and the platelet was removed, the silica adhered to the support and remained cohesive.
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| US3535265A (en) * | 1965-06-18 | 1970-10-20 | Merck Ag E | Chromatographic adsorbents |
| US3922431A (en) * | 1969-02-20 | 1975-11-25 | Edmund Radmacher | Elements for thin-layer chromatography |
| US4658000A (en) * | 1983-08-16 | 1987-04-14 | Reanal Finomvegyszergyar | Polyacrylamide adhesive for fixing the sorbent layers of overpressured, one-and multilayer-chromatographic plates and a process for the preparation thereof |
-
2004
- 2004-11-05 FR FR0411821A patent/FR2877725B1/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3535265A (en) * | 1965-06-18 | 1970-10-20 | Merck Ag E | Chromatographic adsorbents |
| US3922431A (en) * | 1969-02-20 | 1975-11-25 | Edmund Radmacher | Elements for thin-layer chromatography |
| US4658000A (en) * | 1983-08-16 | 1987-04-14 | Reanal Finomvegyszergyar | Polyacrylamide adhesive for fixing the sorbent layers of overpressured, one-and multilayer-chromatographic plates and a process for the preparation thereof |
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