FR2782519A1 - New polypeptide useful as an immunoassay reagent for specific detection of antibodies to human herpes virus type 8 (HHV8) comprises part of the C-terminal sequence of the ORF 65 capsid protein of HHV8 - Google Patents
New polypeptide useful as an immunoassay reagent for specific detection of antibodies to human herpes virus type 8 (HHV8) comprises part of the C-terminal sequence of the ORF 65 capsid protein of HHV8 Download PDFInfo
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Abstract
Description
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DESCRIPTION
La présente invention concerne des polypeptides constitués d'une partie des 85 acides aminés constituant l'extrémité C-terminale de la protéine de capside ORF 65 du virus humain de l'herpès de type 8 (HHV 8). Ce polypeptide permet de détecter directement ou indirectement la présence du virus humain du virus HHV 8 dans un échantillon biologique. DESCRIPTION
The present invention provides polypeptides consisting of a portion of the 85 amino acids constituting the C-terminus of the capsid protein ORF 65 of the human herpes virus type 8 (HHV 8). This polypeptide makes it possible to directly or indirectly detect the presence of the human virus of the HHV 8 virus in a biological sample.
Le huitième herpesvirus humain (HHV 8), encore dénommé herpès humain associé au sarcome de Kaposi (KSHV), a été découvert chez des patients infectés par le virus de l'immunodéficience humaine (HIV) et développant des lésions de maladie de Kaposi. On sait maintenant que ce virus se retrouve dans toutes les formes épidémiologiques de maladies de Kaposi. Il est aussi associé à certains processus lymphomateux tels que les lymphomes primitifs des séreuses, récemment caractérisés. Le virus HHV 8 est également associé à la maladie de Castleman, prolifération lymphocytaire atypique associée à la survenue d'une maladie de Kaposi. Il s'agit d'un gamma-herpesvirus dont le génome est d'environ 140 kilobases (kb). Certains de ces gènes sont potentiellement impliqués et/ou participent à la transformation cellulaire. The eighth human herpesvirus (HHV 8), also known as Kaposi's sarcoma-associated human herpes (KSHV), has been found in patients with human immunodeficiency virus (HIV) infection and developing Kaposi's disease lesions. It is now known that this virus is found in all epidemiological forms of Kaposi disease. It is also associated with certain lymphomatous processes such as serous primitive seromas, recently characterized. The HHV 8 virus is also associated with Castleman's disease, an atypical lymphocyte proliferation associated with the onset of Kaposi's disease. It is a gamma-herpesvirus whose genome is about 140 kilobases (kb). Some of these genes are potentially involved and / or involved in cellular transformation.
Les études de prévalence réalisées montrent que ce virus, contrairement aux autres herpesvirus, ne présente pas d'ubiquité. L'analyse de la séquence du génome du virus a permis de mettre en évidence des homologies avec deux autres herpesvirus qui sont le virus d'Epstein-Barr (EBV), chez l'homme, et le virus Saimiri (HVS), chez certaines espèces de singes. Prevalence studies show that this virus, unlike other herpesviruses, does not show ubiquity. Sequence analysis of the genome of the virus revealed homologies with two other herpesviruses, Epstein-Barr virus (EBV), in humans, and Saimiri virus (HVS), in some species of monkeys.
L'état de la technique montre qu'il existe déjà des procédés permettant de détecter la présence du virus HHV 8 chez un patient, susceptible d'être infecté. The state of the art shows that there are already methods for detecting the presence of the virus HHV 8 in a patient, likely to be infected.
Ainsi la demande de brevet WO-A-97/24057 revendique des tests pour détecter le virus HHV 8 qui utilise des anticorps spécifiques de la protéine de capside ORF 65 du virus. Ce brevet revendique également une séquence correspondant à ladite protéine et au gène codant laditeprotéine. Thus, the patent application WO-A-97/24057 claims tests for detecting the HHV 8 virus which uses antibodies specific for the capsid protein ORF 65 of the virus. This patent also claims a sequence corresponding to said protein and the gene encoding said protein.
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Toutefois, il est évident que seules certaines régions de la protéine ORF 65 ont des propriétés immunogéniques. L'utilisation de la protéine entière, pour la détection d'anticorps anti-HHV 8, rend le procédé peu efficace compte tenu du fait que la reconnaissance est parfois délicate, les épitopes pouvant être confinés à l'intérieur de la structure tridimensionnelle de la protéine. De plus, un encombrement stérique peut se produire entre les anticorps qui sont des molécules volumineuses. De même, la protéine ORF 65 ayant une homologie importante avec la protéine de capside BFRF3 du virus Epstein-Barr (EBV), le risque de détecter ce virus à la place du virus HHV 8 est très élevé lorsque l'on utilise la protéine entière. However, it is evident that only certain regions of the ORF 65 protein have immunogenic properties. The use of the entire protein, for the detection of anti-HHV8 antibodies, makes the process inefficient given the fact that the recognition is sometimes difficult, the epitopes being able to be confined within the three-dimensional structure of the protein. In addition, steric hindrance can occur between antibodies which are bulky molecules. Similarly, the ORF 65 protein having a high homology with the Epstein-Barr virus (EBV) BFRF3 capsid protein, the risk of detecting this virus in place of the HHV 8 virus is very high when the whole protein is used. .
La demande de brevet WO-A-98/11132 revendique un déterminant immunogénique consistant en une séquence d'acides aminés correspondant à l'extrémité C-terminale, située entre les acides aminés 86 et 170, ou substantiellement homologue à cette séquence, permettant de diagnostiquer la présence du virus HHV8 chez un patient et donc le sarcome de Kaposi. Patent application WO-A-98/11132 claims an immunogenic determinant consisting of an amino acid sequence corresponding to the C-terminus, located between amino acids 86 and 170, or substantially homologous to this sequence, allowing for diagnose the presence of the HHV8 virus in a patient and therefore Kaposi's sarcoma.
A propos de cette demande de brevet, la sélection de l'extrémité C-terminale dans son intégralité, afin de détecter les anticorps anti-HHV 8, ne permet pas de diminuer les risques de réactivité croisée entre le HHV 8 et l'EBV. En effet, l'extrémité C-terminale de ORF 65 possède une forte homologie avec l'extrémité C-terminale de BFRF3. Cette homologie est de quatorze (14) acides aminés sur les quatre-vingt-cinq (85) qui constituent l'extrémité C-terminale de ORF65 par rapport à BFRF3 de l'EBV. With regard to this patent application, the selection of the C-terminal end in its entirety, in order to detect anti-HHV 8 antibodies, does not make it possible to reduce the risks of cross-reactivity between HHV 8 and EBV. Indeed, the C-terminal end of ORF 65 has a strong homology with the C-terminus of BFRF3. This homology is fourteen (14) amino acids out of the eighty-five (85) which constitute the C-terminal end of ORF65 with respect to BFRF3 of EBV.
De plus, l'utilisation d'une séquence homologue à la région C-terminale de ORF 65, comme réactifde détection, favoriser la détection de EBV par rapport à HHV 8. In addition, the use of a sequence homologous to the C-terminal region of ORF 65, as a detection reagent, favor the detection of EBV with respect to HHV 8.
Ce problème est d'autant plus important que le virus EBV possède une prévalence plus importante que le virus HHV 8, puisqu'il est considéré comme un virus ubiquitaire présent dans le génome de près de 70 % de la population de race caucasienne. Ainsi, il est très probable de trouver le virus EBV chez des patients qui sont suspectés d'être infectés par le virus HHV 8. Le risque de détecter le virus EBV à la place du virus HHV 8 étant important, ces patients vont donc être considérés, à tort, comme séropositifs pour le virus HHV 8. Le procédé de détection de ce virus, tel que This problem is all the more important since the EBV virus has a higher prevalence than the HHV 8 virus, since it is considered a ubiquitous virus present in the genome of nearly 70% of the Caucasian population. Thus, it is very likely to find the EBV virus in patients who are suspected of being infected with the HHV 8 virus. The risk of detecting the EBV virus in place of the HHV 8 virus is important, these patients will therefore be considered , incorrectly, as seropositive for the HHV 8 virus. The method of detecting this virus, as
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revendiqué dans l'état de la technique, ci-dessus mentionné, ne peut donc pas être considéré comme fiable. claimed in the state of the art, mentioned above, can not therefore be considered reliable.
Conformément à la présente invention, le polypeptide revendiqué dans la présente demande de brevet et appartenant à l'extrémité C-terminale, correspond à une zone qui est fortement immunodominante, mais qui est surtout une zone très faiblement homologue avec la protéine du virus EBV. Deux (2) des vingt-quatre (24) acides aminés du polypeptide sont homologues, lorsque l'on compare l'extrémité C-terminale de l'ORF65 par rapport à BFRF3 à l'EBV. Cette homologie, beaucoup plus faible pour le polypeptide de vingt-quatre (24) acides aminés que pour le polypeptide de quatrevingt-cinq (85) acides aminés, permet de pallier le manque de spécificité pour HHV 8 et donc le manque de fiabilité des techniques exposées plus haut. La possibilité d'avoir des épitopes croisés entre ORF65 et BFRF3 est plus faible lorsque l'on utilise notre polypeptide de vingt-quatre (24) acides aminés que le polypeptide de quatre-vingt-cinq (85) acides aminés. According to the present invention, the polypeptide claimed in the present patent application and belonging to the C-terminus, corresponds to a zone which is highly immunodominant, but which is above all a zone very weakly homologous with the EBV virus protein. Two (2) of the twenty-four (24) amino acids of the polypeptide are homologous, when the C-terminus of ORF65 versus BFRF3 is compared to EBV. This homology, which is much lower for the polypeptide of twenty-four (24) amino acids than for the polypeptide of eighty-five (85) amino acids, makes it possible to overcome the lack of specificity for HHV 8 and therefore the unreliability of the techniques. discussed above. The possibility of having cross-epitopes between ORF65 and BFRF3 is lower when our twenty-four (24) amino acid polypeptide is used than the eighty-five (85) amino acid polypeptide.
En effet, notre polypeptide peut être utilisé pour révéler directement la présence d'anticorps anti-ORF65 de HHV8 dans un échantillon biologique à tester, ou pour révéler indirectement cette présence, en permettant de produire des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, qui permettent de détecter spécifiquement le virus HHV 8 chez des patients. Bien entendu cette détection est possible, que les patients soient ou non infectés par le virus EBV. Indeed, our polypeptide can be used to directly reveal the presence of anti-ORF65 antibodies of HHV8 in a biological sample to be tested, or to indirectly reveal this presence, by making it possible to produce monoclonal or polyclonal antibodies, which make it possible to detect specifically the HHV 8 virus in patients. Of course, this detection is possible whether or not the patients are infected with the EBV virus.
A cet effet, la présente invention concerne un polypeptide comprenant une séquence peptidique appartenant à la séquence des 85 acides aminés de la partie Cterminale de la protéine de capside ORF 65 du virus humain de l'herpès de type 8 (HHV 8), caractérisé par le fait que le polypeptide comprend une séquence peptidique ou une séquence antigénique équivalente à ladite séquence peptidique, qui présente une réactivité immunologique vis-à-vis du virus HHV 8 et qui ne présente aucune réactivité immunologique vis-à-vis du virus d'Epstein-Barr (EBV). For this purpose, the present invention relates to a polypeptide comprising a peptide sequence belonging to the 85 amino acid sequence of the terminal portion of the capsid protein ORF 65 of the human herpes virus type 8 (HHV 8), characterized by the fact that the polypeptide comprises a peptide sequence or an antigenic sequence equivalent to the said peptide sequence, which has an immunological reactivity with respect to the HHV 8 virus and which exhibits no immunological reactivity with respect to the Epstein virus -Barr (EBV).
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Plus précisément, le polypeptide se compose des 24 acides aminés C-terminaux de ladite protéine, selon SEQ ID NO1. More specifically, the polypeptide consists of the 24 C-terminal amino acids of said protein, according to SEQ ID NO1.
Selon une variante, le polypeptide est constitué uniquement par une séquence peptidique ou par une séquence antigénique équivalente à ladite séquence peptidique, qui présente une réactivité immunologique vis-à-vis du virus HHV 8 et qui ne présente aucune réactivité immunologique vis-à-vis du virus d'Epstein-Barr (EBV). According to one variant, the polypeptide consists solely of a peptide sequence or an antigenic sequence equivalent to the said peptide sequence, which has an immunological reactivity with respect to the HHV 8 virus and which shows no immunological reactivity with respect to Epstein-Barr virus (EBV).
Plus précisément, le polypeptide est constitué uniquement par les 24 acides aminés C-terminaux de ladite protéine, selon SEQ ID NO1. More specifically, the polypeptide consists solely of the 24 C-terminal amino acids of said protein, according to SEQ ID NO1.
Selon une autre variante, le polypeptide est constitué uniquement par une séquence peptidique, dont au moins un des acides aminés constitutifs présente des propriétés chimiques identiques ou analogues à celles de l'acide aminé homologue présent dans SEQ ID NO1, ou par une séquence antigénique équivalente à cette séquence peptidique. According to another variant, the polypeptide consists solely of a peptide sequence, of which at least one of the constituent amino acids has identical or similar chemical properties to those of the homologous amino acid present in SEQ ID NO1, or an equivalent antigenic sequence to this peptide sequence.
L'invention concerne également un réactif de détection du virus humain de l'herpès de type 8 (HHV 8), qui comprend à titre de substance réactive, un polypeptide tel que décrit ci-dessus. The invention also relates to a detection reagent for the human herpes virus type 8 (HHV 8), which comprises as a reactive substance, a polypeptide as described above.
La présente invention concerne aussi un moyen de détection du virus humain de l'herpès de type 8 (HHV 8), dans lequel un réactif, décrit au-dessus, est solidarisé à un support solide, immunologiquement compatible avec ledit réactif. The present invention also relates to a means for detecting the human herpes virus type 8 (HHV 8), wherein a reagent, described above, is secured to a solid support immunologically compatible with said reagent.
L'invention concerne encore un premier procédé de détection d'anticorps antiHHV 8 dans un échantillon biologique, tel qu'un échantillon de sang d'un individu suspecté d'être infecté par HHV 8, qui comprend les étapes suivantes : - on prépare un mélange comprenant : i) l'échantillon à analyser, ii) un réactif immobilisé sur un support solide, déjà exposé ci-dessus, - on rince de manière à éliminer le matériel non fixé au réactif, - on détecte la présence d'un complexe immun formé par la liaison entre le réactif et des anticorps anti-HHV 8. The invention also relates to a first method for detecting antiHHV 8 antibodies in a biological sample, such as a blood sample of an individual suspected of being infected with HHV 8, which comprises the following steps: mixture comprising: i) the sample to be analyzed, ii) a reagent immobilized on a solid support, already exposed above, - rinsed so as to remove the material not fixed to the reagent, - the presence of a complex is detected formed by the binding between the reagent and anti-HHV 8 antibodies.
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L'invention concerne un second procédé de détection d'anticorps anti-HHV 8 dans un échantillon biologique, tel qu'un échantillon de sang d'un individu suspecté d'être infecté par HHV 8, qui comprend les étapes suivantes : - on prépare un mélange comprenant : i) l'échantillon à analyser, ii) un réactif immobilisé sur un support solide, décrit plus haut, iii) des anticorps monoclonaux ou polyclonaux dirigés contre ledit réactif et entrant en compétition avec des anticorps anti-HHV 8 susceptibles d'être présents dans l'échantillon, - on rince de manière à éliminer le matériel non fixé au réactif, - on détecte la présence d'un complexe immun formé par la liaison entre le réactif et les anticorps anti-HHV 8, qu'ils soient d'origine exogène ou endogène par rapport à l'échantillon. The invention relates to a second method for detecting anti-HHV 8 antibodies in a biological sample, such as a blood sample of an individual suspected of being infected with HHV 8, which comprises the following steps: a mixture comprising: i) the sample to be analyzed, ii) a reagent immobilized on a solid support, described above, iii) monoclonal or polyclonal antibodies directed against said reagent and competing with anti-HHV 8 antibodies likely to be present in the sample, rinse so as to remove the material not fixed to the reagent, the presence of an immune complex formed by the binding between the reagent and the anti-HHV 8 antibodies is detected, which they are of exogenous or endogenous origin with respect to the sample.
L'invention concerne un troisième procédé de détection d'anticorps antiHHV 8 dans un échantillon biologique, tel qu'un échantillon de sang d'un individu suspecté d'être infecté par HHV 8, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - on prépare un mélange comprenant : i) l'échantillon à analyser, ii) un premier réactif immobilisé sur un support solide, selon la revendication
7, ou issu de toute ou partie de la protéine de capside ORF65 du virus HHV8, et un second réactif issu de toute ou partie de la protéine ORF 73 du virus HHV8, - on rince de manière à éliminer le matériel non fixé aux réactifs, - on détecte la présence d'un complexe immun formé par la liaison entre les réactifs et des anticorps anti-HHV 8. The invention relates to a third method for detecting antiHHV 8 antibodies in a biological sample, such as a blood sample of an individual suspected of being infected with HHV 8, characterized in that it comprises the following steps: a mixture is prepared comprising: i) the sample to be analyzed, ii) a first reagent immobilized on a solid support, according to the claim
7, or derived from all or part of the capsular protein ORF65 of the HHV8 virus, and a second reagent derived from all or part of the ORF 73 protein of the HHV8 virus, rinsed so as to eliminate the material not fixed to the reagents, the presence of an immune complex formed by the binding between the reagents and anti-HHV 8 antibodies is detected.
L'invention concerne enfin un quatrième procédé de détection d'anticorps antiHHV 8 dans un échantillon biologique, tel qu'un échantillon de sang d'un individu suspecté d'être infecté par HHV 8, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - on prépare un mélange comprenant : The invention finally relates to a fourth method for detecting antiHHV 8 antibodies in a biological sample, such as a blood sample of an individual suspected of being infected with HHV 8, characterized in that it comprises the following steps a mixture comprising:
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i) l'échantillon à analyser, ii) un premier réactifimmobilisé sur un support solide, selon la revendication
7, ou issu de toute ou partie de la protéine de capside ORF65 du virus HHV8, et un second réactif issu de toute ou partie de la protéine ORF 73 du virus HHV8, iii) des anticorps monoclonaux ou polyclonaux dirigés contre ledit réactif et entrant en compétition avec des anticorps anti-HHV 8 susceptibles d'être présents dans l'échantillon, - on rince de manière à éliminer le matériel non fixé au réactif, - on détecte la présence d'un complexe immun formé par la liaison entre le réactif et les anticorps anti-HHV 8, qu'ils soient d'origine exogène ou endogène par rapport à l' échantillon. i) the sample to be analyzed, ii) a first reagent immobilized on a solid support, according to the claim
7, or derived from all or part of the capsular protein ORF65 of the HHV8 virus, and a second reagent derived from all or part of the ORF 73 protein of the HHV8 virus, iii) monoclonal or polyclonal antibodies directed against said reagent and entering into competition with anti-HHV 8 antibodies likely to be present in the sample, rinsing so as to eliminate the material not fixed to the reagent, the presence of an immune complex formed by the binding between the reagent and anti-HHV 8 antibodies, whether of exogenous or endogenous origin relative to the sample.
Dans un mode préférentiel d'utilisation, le procédé est caractérisé en ce que toute ou partie de la protéine de capside ORF65 du virus HHV8 contient le polypeptide, qui est décrit ci-dessus selon SEQ ID NO 3. In a preferred mode of use, the method is characterized in that all or part of the capsid protein ORF65 of the HHV8 virus contains the polypeptide, which is described above according to SEQ ID NO 3.
Quel que soit le cas de figure, la détection s 'effectue par l'ajout dans le mélange d'anticorps marqués, monoclonaux ou polyclonaux, dirigés contre les anticorps antiHHV 8. Whatever the case, the detection is carried out by adding to the mixture of labeled antibodies, monoclonal or polyclonal, directed against antiHHV 8 antibodies.
Selon un mode préférentiel de mise en #uvre, la détection s'effectue par l'intermédiaire d'un test ELISA ( Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay). According to a preferred mode of implementation, the detection is carried out by means of an ELISA test (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay).
Les figures ci-jointes sont données à titre d'exemple explicatif et n'ont aucun caractère limitatif. Elles permettront de mieux comprendre l'invention. The attached figures are given as an explanatory example and are not limiting in nature. They will help to better understand the invention.
La figure 1 représente la séquence de la protéine de capside ORF 65 du virus HHV 8 et le positionnement des peptides R22T et L22K qui ont été synthétisés pour la détection des anticorps dans le sérum des patients. Figure 1 shows the sequence of the ORF 65 capsid protein of the HHV 8 virus and the positioning of the R22T and L22K peptides which have been synthesized for the detection of antibodies in the serum of the patients.
La figure 2 représente un histogramme présentant les résultats du test ELISA réalisés sur des sérums de différentes natures de douze patients en présence du peptide R22T, d'une part, et en présence du peptide L22K, d'autre part. FIG. 2 represents a histogram presenting the results of the ELISA test carried out on sera of different types of twelve patients in the presence of the R22T peptide, on the one hand, and in the presence of the L22K peptide, on the other hand.
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Enfin, la figure 3 représente un histogramme présentant les résultats comparatifs avec et sans inhibition du test ELISA réalisés sur des sérums de différentes natures de douze patients en présence du peptide L22K. Finally, FIG. 3 represents a histogram showing the comparative results with and without ELISA inhibition performed on sera of different natures from twelve patients in the presence of the L22K peptide.
Conformément à la figure 1, deux peptides ont été synthétisés : - le peptide R22T, SEQ ID NO 2, s'étendant de l'arginine 78 à la thréonine
101, qui est partiellement inclus dans la partie C-terminale de la protéine ORF 65, SEQ ID NO 1, de HHV8, et - le peptide L22K, SEQ ID NO 3, s'étendant de la leucine 147 à la lysine 170 et faisant partie intégrante de l'extrémité C-terminale de cette protéine. According to FIG. 1, two peptides were synthesized: the peptide R22T, SEQ ID No. 2, extending from arginine 78 to threonine
101, which is partially included in the C-terminal part of the ORF 65 protein, SEQ ID NO 1, of HHV8, and - the peptide L22K, SEQ ID NO 3, extending from leucine 147 to lysine 170 and making integral part of the C-terminus of this protein.
1 - Détection des anticorps anti-HHV 8 par ELISA :
La réactivité des peptides R22T et L22K vis-à-vis de sérums de patients sains ou souffrant de la maladie de Kaposi associée ou non à une infection par le HIV, est mesurée en ELISA. 1 - Detection of anti-HHV 8 antibodies by ELISA:
The reactivity of the R22T and L22K peptides vis-à-vis sera of healthy patients or suffering from Kaposi's disease, with or without HIV infection, is measured by ELISA.
Les puits d'une plaque de microtitration de marque NUNC maxisorb sont saturés par 100 l d'une solution contenant le peptide (lOug/ml) durant 2 heures à 37 C. The wells of a NUNC maxisorb microtiter plate are saturated with 100 l of a solution containing the peptide (10 μg / ml) for 2 hours at 37 ° C.
La plaque est ensuite vidée puis lavée à l'aide d'un tampon de lavage contenant 0,05 % de Tween 20. Les puits sont saturés par lOOul de tampon de lavage additionné de 10 % de sérum de chèvre (v/v), puis incubés pendant 30 minutes à 37 C, puis lavés à nouveau comme précédemment. Les sérums à analyser sont dilués à la dilution approprié avec le tampon de saturation. L'incubation des sérums est de 1 heure à 37 C. Les puits sont à nouveau lavés. La solution de conjugué (IgG de chèvre anti IgG humain marquées par la péroxydase), à une dilution de 1/1000 dans le tampon de saturation, est alors ajoutée et l'incubation dure 90 minutes à 37 C. Après lavages, la solution de substrat orthophénylène-diamine est ajoutée. Après 10 minutes, la réaction est stoppée par 50 l d'H2SO4 et la densité optique est lue à 492 nm. Il est à noter que tous les tests ont été réalisés en double. The plate is then emptied and then washed with a wash buffer containing 0.05% Tween 20. The wells are saturated with 100ul of wash buffer supplemented with 10% goat serum (v / v). then incubated for 30 minutes at 37 ° C. and then washed again as before. The sera to be analyzed are diluted to the appropriate dilution with the saturation buffer. The incubation of the sera is 1 hour at 37 C. The wells are washed again. The conjugate solution (peroxidase labeled anti-human IgG goat IgG), at a dilution of 1/1000 in the saturation buffer, is then added and the incubation lasts 90 minutes at 37 ° C. After washes, the solution of orthophenylene-diamine substrate is added. After 10 minutes, the reaction is stopped by 50 l of H 2 SO 4 and the optical density is read at 492 nm. It should be noted that all tests were performed in duplicate.
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Les valeurs obtenues sont regroupées dans les tableaux 1 et 2 et correspondent à la densité optique (D. O.) mesurée à 492 nm et multipliée par mille. The values obtained are grouped together in Tables 1 and 2 and correspond to the optical density (OD) measured at 492 nm and multiplied by one thousand.
Dans le tableau 1, les expériences ayant été réalisées avec des dilutions différentes de sérums, les valeurs de D.O. ont été ramenées à une même valeur de dilution (1/100) afin de pouvoir comparer les résultats.
<tb>
<tb> <Tb>
<Tb>
Code <SEP> patient <SEP> Renseignements <SEP> DO <SEP> Dilution <SEP> DO
<tb> (dilution
<tb> 1/100) <SEP> ~~~~~~~~~~~~~~~
<tb> Patient <SEP> 1 <SEP> Négatif <SEP> 23 <SEP> 1/100 <SEP> 23
<tb> Patient <SEP> 2 <SEP> Négatif <SEP> 11 <SEP> 1/100 <SEP> 11
<tb> Patient <SEP> 3 <SEP> EBV <SEP> + <SEP> 12 <SEP> 1/50 <SEP> 24
<tb> Patient <SEP> 4 <SEP> EBV <SEP> + <SEP> 35 <SEP> 1/100 <SEP> 35
<tb> Patient <SEP> 5 <SEP> HIV <SEP> + <SEP> 120 <SEP> 1/100 <SEP> 120
<tb> Patient <SEP> 6 <SEP> Homme <SEP> 38 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> HIV+ <SEP> et <SEP> Sida <SEP> + <SEP> 40 <SEP> 1/800 <SEP> 5
<tb> Patient <SEP> 7 <SEP> Homme <SEP> 46 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> HIV+ <SEP> et <SEP> Sida <SEP> + <SEP> 0 <SEP> 1/2000 <SEP> 0
<tb> Patient <SEP> 8 <SEP> Homme <SEP> 67 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> HIV <SEP> + <SEP> Sida <SEP> + <SEP> 40 <SEP> 1/2000 <SEP> 2
<tb> Patient <SEP> 9 <SEP> Homme <SEP> 83 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> stade <SEP> 3 <SEP> 40 <SEP> 1/2000 <SEP> 2
<tb> Patient <SEP> 10 <SEP> Homme <SEP> 80 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> stade <SEP> 1 <SEP> 0 <SEP> 1/8000 <SEP> 0
<tb> Patient <SEP> 11 <SEP> Femme <SEP> 70 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> stade <SEP> 1 <SEP> 200 <SEP> 1/2000 <SEP> 10
<tb> Patient <SEP> 12 <SEP> Homme <SEP> 80 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> stade <SEP> 1 <SEP> 20 <SEP> 1/1000 <SEP> 2
<tb>
Tableau 1 : du test ELISA réalisés sur des sérums de différentes natures de douze patients en présence du peptide R22T
Dans le tableau 2, les expériences sont identiques à celles effectuées dans le tableau 1 précédent. Néanmoins, la réactivité du peptide L22K étant plus forte que celle du peptide R22T, certaines valeurs de D. O. sont supérieures à 2 et sont donc indéterminées, c'est le cas pour les patients 6 à 12. On a donc réalisé des dilutions adaptées à chaque sérum, afin d'obtenir des valeurs de D. O. chiffrables. Code <SEP> patient <SEP> Information <SEP> DO <SEP> Dilution <SEP> DO
<tb> (dilution
<tb> 1/100) <SEP> ~~~~~~~~~~~~~~~
<tb> Patient <SEP> 1 <SEP> Negative <SEP> 23 <SEP> 1/100 <SEP> 23
<tb> Patient <SEP> 2 <SEP> Negative <SEP> 11 <SEP> 1/100 <SEP> 11
<tb> Patient <SEP> 3 <SEP> EBV <SEP> + <SEP> 12 <SEP> 1/50 <SEP> 24
<tb> Patient <SEP> 4 <SEP> EBV <SEP> + <SEP> 35 <SE> 1/100 <SEP> 35
<tb> Patient <SEP> 5 <SEP> HIV <SEP> + <SEP> 120 <SEP> 1/100 <SEP> 120
<tb> Patient <SEP> 6 <SEP> Male <SEP> 38 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> HIV + <SEP> and <SEP> AIDS <SEP> + <SEP> 40 <SEP> 1/800 <SEP> 5
<tb> Patient <SEP> 7 <SEP> Male <SEP> 46 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> HIV + <SEP> and <SEP> AIDS <SEP> + <SEP> 0 <SEP> 1/2000 <SEP> 0
<tb> Patient <SEP> 8 <SEP> Male <SEP> 67 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> HIV <SEP> + <SEP> AIDS <SEP> + <SEP> 40 <SEP> 1/2000 <SEP> 2
<tb> Patient <SEP> 9 <SEP> Male <SEP> 83 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> stage <SEP> 3 <SEP> 40 <SEP> 1/2000 <SEP> 2
<tb> Patient <SEP> 10 <SEP> Male <SEP> 80 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> stage <SEP> 1 <SEP> 0 <SEP> 1/8000 <SEP> 0
<tb> Patient <SEP> 11 <SEP> Female <SEP> 70 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> stage <SEP> 1 <SEP> 200 <SEP> 1/2000 <SEP> 10
<tb> Patient <SEP> 12 <SEP> Male <SEP> 80 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> stage <SEP> 1 <SEP> 20 <SEP> 1/1000 <SEP> 2
<Tb>
Table 1: ELISA Assay Performed on Sera of Different Kinds of Twelve Patients in the Presence of R22T Peptide
In Table 2, the experiments are identical to those carried out in Table 1 above. Nevertheless, since the reactivity of the L22K peptide is higher than that of the R22T peptide, certain OD values are greater than 2 and are therefore indeterminate, which is the case for patients 6 to 12. Therefore, dilutions adapted to each serum to obtain quantifiable OD values.
<Desc/Clms Page number 9> <Desc / Clms Page number 9>
<tb>
<tb> Code <SEP> patient <SEP> Renseignements <SEP> DO <SEP> (x1000) <SEP> Dilution <SEP> DO <SEP> (x1000)
<tb> (dilution
<tb> <Tb>
<tb> Code <SEP> patient <SEP> Information <SEP> DO <SEP> (x1000) <SEP> Dilution <SEP> DO <SEP> (x1000)
<tb> (dilution
<Tb>
~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 1/100) ~~~~~~~ ~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 1/100) ~~~~~~~~~~~~~~~~
<tb>
<tb> Patient <SEP> 1 <SEP> Négatif <SEP> 15 <SEP> 1/100 <SEP> 15
<tb> Patient <SEP> 2 <SEP> Négatif <SEP> 8 <SEP> 1/100 <SEP> 8
<tb> Patient <SEP> 3 <SEP> EBV <SEP> + <SEP> 6 <SEP> 1/100 <SEP> 6
<tb> Patient <SEP> 4 <SEP> EBV <SEP> + <SEP> 30 <SEP> 1/100 <SEP> 30
<tb> Patient <SEP> 5 <SEP> HIV <SEP> + <SEP> 107 <SEP> 1/100 <SEP> 107
<tb> Patient <SEP> 6 <SEP> Homme <SEP> 38 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> HIV+ <SEP> et <SEP> Sida <SEP> + <SEP> > <SEP> à <SEP> 2000 <SEP> 1/800 <SEP> 286
<tb> Patient <SEP> 7 <SEP> Homme <SEP> 46 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> HIV+ <SEP> et <SEP> Sida <SEP> + <SEP> > <SEP> à <SEP> 2000 <SEP> 1/2000 <SEP> 1296
<tb> Patient <SEP> 8 <SEP> Homme <SEP> 67 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> HIV <SEP> + <SEP> Sida <SEP> + <SEP> > <SEP> à <SEP> 2000 <SEP> 1/2000 <SEP> 468
<tb> Patient <SEP> 9 <SEP> Homme <SEP> 83 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> stade <SEP> 3 <SEP> > <SEP> à <SEP> 2000 <SEP> 1/2000 <SEP> 295
<tb> Patient <SEP> 10 <SEP> Homme <SEP> 80 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> stade <SEP> 1 <SEP> > <SEP> à <SEP> 2000 <SEP> 1/8000 <SEP> 988
<tb> Patient <SEP> 11 <SEP> Femme <SEP> 70 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> stade <SEP> 1 <SEP> > <SEP> à <SEP> 2000 <SEP> 1/2000 <SEP> 410
<tb> Patient <SEP> 12 <SEP> Homme <SEP> 80 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> stade <SEP> 1 <SEP> > <SEP> à <SEP> 2000 <SEP> 1/1000 <SEP> 205
<tb> <Tb>
<tb> Patient <SEP> 1 <SEP> Negative <SEP> 15 <SEP> 1/100 <SEP> 15
<tb> Patient <SEP> 2 <SEP> Negative <SEP> 8 <SEP> 1/100 <SEP> 8
<tb> Patient <SEP> 3 <SEP> EBV <SEP> + <SEP> 6 <SEP> 1/100 <SEP> 6
<tb> Patient <SEP> 4 <SEP> EBV <SEP> + <SEP> 30 <SEP> 1/100 <SEP> 30
<tb> Patient <SEP> 5 <SEP> HIV <SEP> + <SEP> 107 <SEP> 1/100 <SEP> 107
<tb> Patient <SEP> 6 <SEP> Male <SEP> 38 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> HIV + <SEP> and <SEP> AIDS <SEP> + <SEP>><SEP> to <SEP > 2000 <SEP> 1/800 <SEP> 286
<tb> Patient <SEP> 7 <SEP> Male <SEP> 46 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> HIV + <SEP> and <SEP> AIDS <SEP> + <SEP>><SEP> to <SEP > 2000 <SEP> 1/2000 <SEP> 1296
<tb> Patient <SEP> 8 <SEP> Male <SEP> 67 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> HIV <SEP> + <SEP> AIDS <SEP> + <SEP>><SEP> to <SEP > 2000 <SEP> 1/2000 <SEP> 468
<tb> Patient <SEP> 9 <SEP> Male <SEP> 83 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> stage <SEP> 3 <SEP>><SEP> to <SEP> 2000 <SEP> 1/2000 <SEP> 295
<tb> Patient <SEP> 10 <SEP> Male <SEP> 80 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> stage <SEP> 1 <SEP>><SEP> to <SEP> 2000 <SEP> 1/8000 <SEP> 988
<tb> Patient <SEP> 11 <SEP> Female <SEP> 70 <SEP> years old <SEP> Kaposi <SEP> stage <SEP> 1 <SEP>><SEP> to <SEP> 2000 <SEP> 1/2000 <SEP> 410
<tb> Patient <SEP> 12 <SEP> Male <SEP> 80 <SEP> years old <SEP> Kaposi <SEP> stage <SEP> 1 <SEP>><SEP> to <SEP> 2000 <SEP> 1/1000 <SEP> 205
<Tb>
Tableau 2 : Résultats du test ELISA réalisés sur des sérums de différentes natures de douze patients en présence du peptide L22K
On constate, tout d'abord que les résultats sont très différents d'un peptide à l'autre. En effet, il apparaît clairement que les résultats obtenus avec le peptide R22T ne permettent pas de différencier les patients atteints du sarcome de Kaposi, et donc contaminer par le virus HHV 8, par rapport aux patients sains puisque les valeurs de D. O. ne différent pas significativement. Il apparaît donc que le peptide R22T ne permet pas de détecter spécifiquement les anticorps anti-HHV 8, bien que ce peptide soit majoritairement inclus dans la partie C-terminale de la protéine ORF 65. Table 2: Results of the ELISA Test Performed on Sera of Different Kinds of Twelve Patients in the Presence of the L22K Peptide
It is found, first of all, that the results are very different from one peptide to another. Indeed, it is clear that the results obtained with the R22T peptide do not differentiate patients with Kaposi's sarcoma, and therefore contaminate with the HHV 8 virus, compared to healthy patients since the OD values do not differ significantly. . It therefore appears that the R22T peptide does not make it possible to specifically detect the anti-HHV 8 antibodies, although this peptide is mainly included in the C-terminal part of the ORF 65 protein.
Concernant le peptide L22K, on constate que les valeurs de D. O. sont bien supérieures pour les sérums de patients infectés par le virus HHV 8 que pour les sérums de patients sains ou infectés par un autre virus, et notamment le virus EBV. Ces résultats montrent clairement que le peptide L22K possède une bonne immunoréactivité vis-à-vis des anticorps anti-HHV 8. Ce peptide est donc un bon candidat pour la détection des anticorps anti-HHV 8 dans le sérum de patients. Regarding the peptide L22K, it is found that the values of D. O. are much higher for the sera of patients infected with the virus HHV 8 than for the sera of healthy patients or infected with another virus, including the EBV virus. These results clearly show that the L22K peptide has a good immunoreactivity with anti-HHV 8 antibodies. This peptide is therefore a good candidate for the detection of anti-HHV 8 antibodies in the serum of patients.
<Desc/Clms Page number 10> <Desc / Clms Page number 10>
II - Test d'inhibition :
Toutefois afin de confirmer ces résultats, il est nécessaire de montrer que la fixation des anticorps anti-HHV 8 est bien spécifique. Pour cela, des expériences d'inhibition ont été réalisées par réaction en phase liquide des sérums avec le peptide L22K, suivie de la réaction des anticorps restants avec ledit peptide adsorbé sur les microplaques. Le peptide inhibiteur est incubé à une concentration de 0,1 mg/ml, avec les sérums de la dilution appropriée. La suite de la manipulation est identique à celle décrite pour le test ELISA. II - Inhibition test:
However, in order to confirm these results, it is necessary to show that the binding of anti-HHV 8 antibodies is very specific. For this, inhibition experiments were performed by liquid phase reaction of the sera with the L22K peptide, followed by the reaction of the remaining antibodies with said peptide adsorbed on the microplates. The inhibitory peptide is incubated at a concentration of 0.1 mg / ml, with the sera of the appropriate dilution. The rest of the manipulation is identical to that described for the ELISA test.
Les résultats de cette expérience sont regroupés dans le tableau 3. On y trouve les valeurs de D. O. mesurées, multipliées par mille, avec et sans inhibition par le peptide L22K.
<tb>
<tb> <Tb>
<Tb>
Code <SEP> Renseignements <SEP> Dilution <SEP> DO <SEP> DO <SEP> Pourcentage
<tb> patient <SEP> (xlOOO) <SEP> (xlOOO) <SEP> d'inhibition
<tb> sans <SEP> avec
<tb> inhibition <SEP> inhibition
<tb> par <SEP> L22K <SEP> à <SEP> 10 g/ml
<tb> par <SEP> L22K
<tb> Patient <SEP> 1 <SEP> Négatif <SEP> 1/50 <SEP> 80 <SEP> - <SEP> 79 <SEP> 1,2%
<tb> Patient <SEP> 2 <SEP> Négatif <SEP> 1/50 <SEP> 146 <SEP> 122 <SEP> 16,4%
<tb> Patient <SEP> 3 <SEP> EBV+ <SEP> 1/50 <SEP> 101 <SEP> 111 <SEP> 0%
<tb> Patient <SEP> 4 <SEP> EBV+ <SEP> 1/50 <SEP> 199 <SEP> 211 <SEP> 0%
<tb> Patient <SEP> 5 <SEP> HIV <SEP> + <SEP> 1/50 <SEP> 248 <SEP> 234 <SEP> 5,6%
<tb> Patient <SEP> Homme <SEP> 38 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> HIV+ <SEP> et <SEP> Sida <SEP> + <SEP> 1/400 <SEP> 745 <SEP> 141 <SEP> 81%
<tb> Patient <SEP> 7 <SEP> Homme <SEP> 46 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> HIV+ <SEP> et <SEP> Sida <SEP> + <SEP> 1/4000 <SEP> 956 <SEP> 108 <SEP> 88,7%
<tb> Patient <SEP> 8 <SEP> Homme <SEP> 67 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> HIV <SEP> + <SEP> Sida <SEP> + <SEP> 1/1000 <SEP> 1259 <SEP> 144 <SEP> 88,6%
<tb> Patient <SEP> 9 <SEP> Homme <SEP> 83 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> stade <SEP> 3 <SEP> 1/1000 <SEP> 932 <SEP> 55 <SEP> 94%
<tb> Patient <SEP> 10 <SEP> Homme <SEP> 80 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> stade <SEP> 1 <SEP> 1/4000 <SEP> 1183 <SEP> 143 <SEP> 87,9%
<tb> Patient <SEP> 11 <SEP> Femme <SEP> 70 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> stade <SEP> 1 <SEP> 1/1000 <SEP> 894 <SEP> 19 <SEP> 97,8%
<tb> Patient <SEP> 12 <SEP> Homme <SEP> 80 <SEP> ans <SEP> Kaposi <SEP> stade <SEP> 1 <SEP> 1/400 <SEP> 832 <SEP> 198 <SEP> 76,2%
<tb>
Tableau 3 : comparatifs avec et sans peptide inhibiteur du test ELISA réalisé sur des sérums de différentes natures de douze patients en présence du peptide L22K
On constate que les pourcentages d'inhibition sont très élevés pour les sérums de patients 6 à 12 infectés par le virus HHV 8, alors qu'ils sont très faibles, voir nuls, Code <SEP> Information <SEP> Dilution <SEP> DO <SEP> DO <SEP> Percentage
<tb> patient <SEP> (xlOOO) <SEP> (xlOOO) <SEP> inhibition
<tb> without <SEP> with
<tb> inhibition <SEP> inhibition
<tb> by <SEP> L22K <SEP> to <SEP> 10 g / ml
<tb> by <SEP> L22K
<tb> Patient <SEP> 1 <SEP> Negative <SEP> 1/50 <SEP> 80 <SEP> - <SEP> 79 <SEP> 1.2%
<tb> Patient <SEP> 2 <SEP> Negative <SEP> 1/50 <SEP> 146 <SEP> 122 <SEP> 16.4%
<tb> Patient <SEP> 3 <SEP> EBV + <SEP> 1/50 <SEP> 101 <SEP> 111 <SEP> 0%
<tb> Patient <SEP> 4 <SEP> EBV + <SEP> 1/50 <SEP> 199 <SEP> 211 <SEP> 0%
<tb> Patient <SEP> 5 <SEP> HIV <SEP> + <SEP> 1/50 <SEP> 248 <SEP> 234 <SEP> 5.6%
<tb> Patient <SEP> Male <SEP> 38 <SEP> years old <SEP> Kaposi <SEP> HIV + <SEP> and <SEP> AIDS <SEP> + <SEP> 1/400 <SEP> 745 <SEP> 141 <SEP> 81%
<tb> Patient <SEP> 7 <SEP> Male <SEP> 46 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> HIV + <SEP> and <SEP> AIDS <SEP> + <SEP> 1/4000 <SEP> 956 <SEP> 108 <SEP> 88.7%
<tb> Patient <SEP> 8 <SEP> Male <SEP> 67 <SEP> years old <SEP> Kaposi <SEP> HIV <SEP> + <SEP> AIDS <SEP> + <SEP> 1/1000 <SEP> 1259 <SEP> 144 <SEP> 88.6%
<tb> Patient <SEP> 9 <SEP> Male <SEP> 83 <SEP> years old <SEP> Kaposi <SEP> stage <SEP> 3 <SEP> 1/1000 <SEP> 932 <SEP> 55 <SEP> 94 %
<tb> Patient <SEP> 10 <SEP> Male <SEP> 80 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> stage <SEP> 1 <SEP> 1/4000 <SEP> 1183 <SE> 143 <SEP> 87 9%
<tb> Patient <SEP> 11 <SEP> Female <SEP> 70 <SEP> years old <SEP> Kaposi <SEP> stage <SEP> 1 <SEP> 1/1000 <SEP> 894 <SEP> 19 <SEP> 97 8%
<tb> Patient <SEP> 12 <SEP> Male <SEP> 80 <SEP> years <SEP> Kaposi <SEP> stage <SEP> 1 <SEP> 1/400 <SEP> 832 <SEP> 198 <SEP> 76 , 2%
<Tb>
Table 3: Comparative With and Without ELISA Peptide Inhibiting Peptide Performed on Sera of Different Kinds of Twelve Patients in the Presence of the L22K Peptide
It is found that the percentages of inhibition are very high for the sera of patients 6 to 12 infected with the virus HHV 8, whereas they are very weak, see void,
<Desc/Clms Page number 11><Desc / Clms Page number 11>
pour les sérums de patients sains 1 et 2 ou infectés par un autre virus que le HHV 8, patients 3 à 5, et notamment le virus EBV, patients 3 et 4, dont la protéine de capside BFRF3 présente une homologie avec la protéine ORF 65. for the sera of healthy patients 1 and 2 or infected with a virus other than HHV 8, patients 3 to 5, and in particular the EBV virus, patients 3 and 4, whose capsid protein BFRF3 has a homology with the ORF protein 65 .
Cette expérience permet de mettre en évidence la spécificité de reconnaissance du peptide L22K par les anticorps anti-HHV 8 présents dans le sérum. Le peptide L22K apparaît donc comme un candidat intéressant pour détecter la présence du virus HHV 8 chez des patients. This experiment makes it possible to demonstrate the recognition specificity of the L22K peptide by the anti-HHV8 antibodies present in the serum. The L22K peptide therefore appears as an interesting candidate for detecting the presence of the HHV 8 virus in patients.
Une autre protéine utilisée pour la détection du virus HHV 8 est la protéine ORF 73. Cette protéine a déjà été décrite dans une technique de détection par immunofluorescence. Il apparaît donc comme intéressant de comparer les résultats obtenus avec la protéine ORF 73 et le peptide L22K pour la détection d'anticorps antiHHV 8 dans des sérums identiques. Another protein used for the detection of the HHV 8 virus is the ORF 73 protein. This protein has already been described in an immunofluorescence detection technique. It thus appears to be interesting to compare the results obtained with the ORF 73 protein and the L22K peptide for the detection of antiHHV 8 antibodies in identical sera.
III - Comparaison des résultats obtenus par ELISA avec L22K et par Immunofluorescence avec ORF 73 :
Le test d'immunofluorescence est pratiqué sur des cellules infectées par le virus HHV8. III-Comparison of the Results Obtained by ELISA with L22K and by Immunofluorescence with ORF 73:
The immunofluorescence test is performed on cells infected with the HHV8 virus.
Le tableau 4 regroupe les résultats obtenus avec le test ELISA, pour le peptide L22K, et le test d'immunofluorescence, pour la protéine ORF 73 de HHV 8, pour les patients 13 à 48. Les résultats sont mis sous la forme de résultats positifs ou négatifs et non pas de valeurs numériques. Les résultats du test ELISA avec le peptide L22K sont présentées et une correspondance en résultats positifs ou négatifs a été effectuée afin de faciliter la comparaison avec ceux d'immunofluorescence. L'ensemble des résultats de l'ELISA sont donnés avec une dilution au 1/100 pour tous les échantillons. Table 4 groups together the results obtained with the ELISA test, for the L22K peptide, and the immunofluorescence test, for the ORF 73 protein of HHV 8, for the patients 13 to 48. The results are put in the form of positive results. or negative and not numerical values. The results of the L22K peptide ELISA were presented and a positive or negative result match was made to facilitate comparison with those of immunofluorescence. All the results of the ELISA are given with a 1/100 dilution for all the samples.
<Desc/Clms Page number 12> <Desc / Clms Page number 12>
<tb>
<tb> <Tb>
<Tb>
Code <SEP> patient <SEP> Renseignements <SEP> L22K, <SEP> DO <SEP> Résultats <SEP> Résultats
<tb> (xlOOO) <SEP> L22K <SEP> IF <SEP> ORF73
<tb> Patient <SEP> 13 <SEP> négatif <SEP> 62
<tb> Patient <SEP> 14 <SEP> négatif <SEP> 38
<tb> Patient <SEP> 25 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+T1I1S1 <SEP> 3000 <SEP> +Patient <SEP> 26 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+TOIOSO <SEP> 1668 <SEP> +Patient <SEP> 27 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+T1I1S0 <SEP> 616 <SEP> +Patient <SEP> 28 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+T0T1S0 <SEP> 3000 <SEP> +Patient <SEP> 32 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+TOIOSO <SEP> 3000 <SEP> +Patient <SEP> 34 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+T1I1S0 <SEP> 3000 <SEP> +Patient <SEP> 36 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+TOI <SEP> 1 <SEP> SI <SEP> 3000 <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 38 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+T1I0S0 <SEP> 2497 <SEP> +Patient <SEP> 41 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+TOIOSO <SEP> 1565 <SEP> +Patient <SEP> 42 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+T0I1S1/CAST <SEP> 3000 <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 43 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+T0I1S1/LNH <SEP> 3000 <SEP> +Patient <SEP> 44 <SEP> Kaposi+HIV+T1I1S0 <SEP> 917 <SEP> +Patient <SEP> 45 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+TOIOSO <SEP> 3000 <SEP> +Patient <SEP> 46 <SEP> castleman <SEP> 3000 <SEP> +Patient <SEP> 19 <SEP> classique <SEP> 1 <SEP> HIV- <SEP> 67- <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 20 <SEP> classique <SEP> 1 <SEP> HIV- <SEP> petit <SEP> Kaposi <SEP> 102- <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 23 <SEP> classique <SEP> 1 <SEP> HIV- <SEP> prelvt <SEP> au <SEP> début <SEP> 142- <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 35 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+TOIOSO <SEP> 191- <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 48 <SEP> castleman <SEP> 192- <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 15 <SEP> classique <SEP> II <SEP> HIV- <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 16 <SEP> classique <SEP> 1 <SEP> HIV- <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 17 <SEP> classique <SEP> II <SEP> HIV- <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 18 <SEP> classique <SEP> 1 <SEP> HIV- <SEP> 2236 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 21 <SEP> classique <SEP> 1 <SEP> HIV- <SEP> 675 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 22 <SEP> classique <SEP> I <SEP> HIV- <SEP> 519 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 24 <SEP> classique <SEP> II <SEP> HIV- <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 29 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+TOIOSO/CAST <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 30 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+T1I0S0 <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 31 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+T1I1S0 <SEP> 632 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 33 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+TOIOSO <SEP> 356 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 37 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+T0I1S0 <SEP>3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 39 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+T1I0S0 <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 40 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV+T1I0S0/CAST <SEP> 334 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 47 <SEP> castleman <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb>
Tableau 4 : comparatifs de deux techniques différentes de détection de la présence du virus HHV 8 : 1 ) test ELISA en présence du peptide L22K - 2 ) test d'immunoflorescence vis-à-vis de la protéine ORF 73
Premièrement, on constate que les deux tests donnent des résultats identiques et négatifs pour les deux sérums de patients sains (patients 13 et 14). Code <SEP> Patient <SEP> Information <SEP> L22K, <SEP> DO <SEP> Results <SEP> Results
<tb> (x100) <SEP> L22K <SEP> IF <SEP> ORF73
<tb> Patient <SEP> 13 <SEP> Negative <SEP> 62
<tb> Patient <SEP> 14 <SEP> Negative <SEP> 38
<tb> Patient <SEP> 25 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + T1I1S1 <SEP> 3000 <SEP> + Patient <SEP> 26 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + TOIOSO <MS> 1668 <SEP> + Patient <SEP> 27 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + T1I1S0 <SEP> 616 <SEP> + Patient <SEP> 28 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + T0T1S0 <SEP> 3000 <SEP> + Patient <SEP> 32 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + TOIOSO <SEP> 3000 <SEP> + Patient <SEP> 34 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + T1I1S0 <SEP> 3000 <SEP> + Patient <SEP> 36 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + TO <SEP> 1 <SEP> IF <SEP> 3000 <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 38 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + T1I0S0 <SEP> 2497 <SEP> + Patient <SEP> 41 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + TOIOSO <MS> 1565 <SEP> + Patient <SEP> 42 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + T0I1S1 / CAST <SEP> 3000 <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 43 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + T0I1S1 / NHL <SEP> 3000 <SEP> + Patient <SEP> 44 <SEP> Kaposi + HIV + T1I1S0 <SEP> 917 <MS> + Patient <SEP> 45 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + TOIOSO <SEP> 3000 <SEP> + Patient <SEP> 46 <SEP> castleman <SEP> 3000 <SEP> + Patient <SEP > 19 <SEP> classical <SEP> 1 <SEP> HIV- <SEP> 67- <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 20 <SEP> classical <SEP> 1 <SEP> HIV- <SEP> small <SEP> Kaposi <SEP> 102- <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 23 <SEP> classical <SEP> 1 <SEP> HIV- <SEP> prelvt <SEP> at <SEP> start <SEP> 142- <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 35 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + TOIOSO <SEP> 191- <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 48 <SEP> castleman <SEP> 192- <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 15 <SEP> classical <SEP> II <SEP> HIV- <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 16 <SEP> classical <SEP> 1 <SEP> HIV- <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 17 <SEP> classical <SEP> II <SEP> HIV- <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 18 <SEP> classical <SEP> 1 <SEP> HIV- <SEP> 2236 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 21 <SEP> classical <SEP> 1 <SEP> HIV- <SEP> 675 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 22 <SEP> classical <SEP> I <SEP> HIV- <SEP> 519 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 24 <SEP> classical <SEP> II <SEP> HIV- <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 29 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + TOIOSO / CAST <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 30 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + T1I0S0 <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 31 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + T1I1S0 <SEP> 632 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 33 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + TOIOSO <SEP> 356 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 37 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + T0I1S0 <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 39 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + T1I0S0 <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 40 <SEP> Kaposi <SEP> + <SEP> HIV + T1I0S0 / CAST <SEP> 334 <SEP> + <SEP> +
<tb> Patient <SEP> 47 <SEP> castleman <SEP> 3000 <SEP> + <SEP> +
<Tb>
Table 4: Comparative of two different techniques for detecting the presence of the HHV virus 8: 1) ELISA test in the presence of the peptide L22K - 2) immunofluorescence test with respect to the ORF protein 73
First, we find that both tests give identical and negative results for the two sera of healthy patients (patients 13 and 14).
<Desc/Clms Page number 13> <Desc / Clms Page number 13>
Deuxièmement, quatorze sérums diagnostiqués non contaminés par le test d'immunofluorescence sont reconnus HHV 8-positifs par le test ELISA (patients 25 à 28,32, 34, 36, 38, 41 à 46 ). Secondly, fourteen sera diagnosed uncontaminated by the immunofluorescence assay are recognized HHV 8-positive by the ELISA test (patients 25 to 28,32, 34, 36, 38, 41 to 46).
Troisièmement, à l'inverse, cinq sérums dans lesquels des anticorps anti-HHV 8 ont été détectés par le test d'immunofluorescence, ont été diagnostiqués HHV 8négatifs par les tests ELISA (patients 19, 20, 23, 35 et 48). Third, conversely, five sera in which anti-HHV8 antibodies were detected by the immunofluorescence assay, were diagnosed as negative HHV by ELISA assays (patients 19, 20, 23, 35 and 48).
Dans les autres cas (patients 15 à 18, 21, 22, 24, 29 à 31,33, 37, 39, 40 et 47), les résultats des tests donnent des résultats identiques et positifs pour les sérums de patients. In the other cases (patients 15 to 18, 21, 22, 24, 29 to 31, 33, 37, 39, 40 and 47), the results of the tests give identical and positive results for the sera of patients.
Cette différence de résultats peut être expliquée par le fait que l'utilisation d'une seule protéine ou d'un seul peptide ne permet de couvrir la reconnaissance de toutes les spécificités d'anticorps anti-HHV 8. Il est donc possible que certains types d'anticorps ne soient pas détectés par l'une ou l'autre des méthodes. Toutefois, on constate que pour tous les sérums testés, l'utilisation conjointe des deux techniques permet d'obtenir un diagnostic correct puisque tous les sérums sains sont diagnostiqués négatifs par les deux techniques et les sérums contaminés ont été détectés positifs par au moins une technique. Ce qui montre les insuffisances d'un test d'immunofluorescence basé sur l'utilisation de la protéine ORF 73. This difference in results can be explained by the fact that the use of a single protein or a single peptide does not cover the recognition of all the specificities of anti-HHV 8 antibodies. It is therefore possible that certain types antibodies are not detected by either method. However, it is found that for all the sera tested, the joint use of the two techniques makes it possible to obtain a correct diagnosis since all the healthy sera are diagnosed negative by both techniques and the contaminated sera have been detected positive by at least one technique. . This shows the inadequacies of an immunofluorescence test based on the use of the ORF 73 protein.
La demanderesse a donc mis au point un procédé de détection qui combine deux polypeptides. Ainsi le réactif, constitué par le polypeptide L22K immobilisé sur un support solide, est associé à un réactif issu de toute ou partie de la protéine ORF 73 du virus HHV 8. The Applicant has therefore developed a detection method that combines two polypeptides. Thus the reagent, constituted by the L22K polypeptide immobilized on a solid support, is associated with a reagent derived from all or part of the ORF 73 protein of the HHV 8 virus.
L'utilisation conjointe du peptide L22K et de toute ou partie de la protéine ORF 73 dans la détection des anticorps anti-HHV 8 apparaît comme la solution la plus efficace et la plus fiable pour diagnostiquer l'infection des patients par le virus HHV 8. The joint use of the L22K peptide and all or part of the ORF 73 protein in the detection of anti-HHV 8 antibodies appears to be the most effective and reliable solution for diagnosing HHV 8 infection in patients.
Le procédé peut également associer toute ou partie de la protéine de capside ORF 65 du virus HHV 8 et toute ou partie de la protéine ORF 73 du virus HHV 8. The method can also associate all or part of the ORH 65 capsid protein of the HHV 8 virus and all or part of the ORF 73 protein of the HHV 8 virus.
Préférentiellement, ladite protéine de capside ORF 65 du virus HHV 8 ou la partie de cette protéine, qui est utilisée dans le procédé, contient le polypeptide L22K. Preferably, said HHV 8 capsid ORF 65 protein or portion thereof, which is used in the method, contains the L22K polypeptide.
<Desc/Clms Page number 14> <Desc / Clms Page number 14>
LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATIONS GENERALES: (i) DEPOSANT: (A) NOM : MERIEUX (B) RUE : DE L'ORME (C) VILLE : MARCYL'ETOILE (E) PAYS : (F) CODE POSTAL : (ii) TITRE DE L' INVENTION : CONSTITUANT UN REACTIF, UN MOYEN DE DETECTION DIRECTE OU INDIRECTE DU VIRUS HHV8 (iii) NOMBRE DE SEQUENCES : (iv) FORME DECHIFFRABLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT : disk (B) ORDINATEUR : PC compatible (C) SYSTEME D' EXPLOITATION : PC-DOS/MS-DOS (D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.30 (OEB) (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 1 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : 170 acides aminés (B) TYPE : aminé (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : non-connue(ii) TYPE DE MOLECULE : peptide(iii) HYPOTHETIQUE : NON (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 1 : SEQUENCE LIST (1) GENERAL INFORMATION: (i) DEPOSITOR: (A) NAME: MERIEUX (B) STREET: ELME (C) TOWN: MARCYL'ETITE (E) COUNTRY: (F) POSTAL CODE: (ii) ) TITLE OF THE INVENTION: CONSTITUTING A REAGENT, A MEANS FOR DIRECT OR INDIRECT DETECTION OF THE HHV8 VIRUS (iii) NUMBER OF SEQUENCES: (iv) COMPUTER-DEPENDABLE FORM: (A) TYPE OF MEDIA: disk (B) COMPUTER: PC compatible (C) OPERATING SYSTEM: PC-DOS / MS-DOS (D) SOFTWARE: PatentIn Release # 1.0, Version # 1.30 (EPO) (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 1: (i) CHARACTERISTICS OF SEQUENCE: (A) LENGTH: 170 amino acids (B) TYPE: amine (C) NUMBER OF STRANDS: (D) CONFIGURATION: not known (ii) TYPE OF MOLECULE: peptide (iii) HYPOTHETIC: NO (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: ID NO: 1:
<Desc/Clms Page number 15> <Desc / Clms Page number 15>
Met Ser Asn Phe Lys Val Arg Asp Pro Val Ile Gln Glu Arg Leu Asp 1 5 10 15
His Asp Tyr Ala His His Pro Leu Val Ala Arg Met Asn Thr Leu Asp
20 25 30
Gln Gly Asn Met Ser Gln Ala Glu Tyr Leu Val Gln Lys Arg His Tyr
35 40 45
Leu Val Phe Leu Ile Ala His His Tyr Tyr Glu Ala Tyr Leu Arg Arg
50 55 60
Met Gly Gly Ile Gln Arg Arg Asp His Leu Gln Thr Leu Arg Asp Gln
65 70 75 80
Lys Pro Arg Glu Arg Ala Asp Arg Val Ser Ala Ala Ser Ala Tyr Asp
85 90 95
Ala Gly Thr Phe Thr Val Pro Ser Arg Pro Gly Pro Ala Ser Gly Thr
100 105 110
Thr Pro Gly Gly Gln Asp Ser Leu Gly Val Ser Gly Ser Ser Ile Thr
115 120 125
Thr Leu Ser Ser Gly Pro His Ser Leu Ser Pro Ala Ser Asp Ile Leu
130 135 140
Thr Thr Leu Ser Ser Thr Thr Glu Thr Ala Ala Pro Ala Val Ala Asp
145 150 155 160
Ala Arg Lys Pro Pro Ser Gly Lys Lys Lys
165 170 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 2 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : acides aminés (B) TYPE : aminé (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : non-connue(ii) TYPE DE MOLECULE : peptide(iii) HYPOTHETIQUE : NON (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 2 : Met Ser Asn Phe Lys Val Arg Asp Pro Val Gln Glu Glu Arg Leu Asp 1 5 10 15
His Asp Tyr Ala His His Pro Leu Val Ala Arg Asn Met Thr Asp Asp
20 25 30
Gln Gly Asn Met Gln Ala Glu Tyr Leu Val Gln Lys Arg His Tyr
35 40 45
Leu Val Phe Leu Ile Ala His Tyr Tyr Glu Ala Tyr Leu Arg Arg
50 55 60
Met Gly Gly Gln Arg Arg Asp His Gln Leu Thr Arg Asp Gln
65 70 75 80
Lys Pro Arg Arg Arg Ala Asp Arg Arg Ser Ala Ala Ser Ala Tyr Asp
85 90 95
Ala Gly Thr Phe Thr Pro Pro Ser Pro Gly Pro Pro Ala Ser Gly Thr Pro
100 105 110
Thr Pro Gly Gly Asp Gln Ser Leu Gly Ser Val Ser Gly Ser Ser Thr
115 120 125
Ser Leu Ser Ser Gly Pro Ser Ser Leu Pro Ser Ala Ser Asp Ile Leu
130 135 140
Thr Thr Leu Ser Ser Ser Thr Thr Glu Thr Ala Ala Pro Ala Val Ala Asp
145 150 155 160
Ala Arg Pro Lys Pro Ser Gly Lys Lys Lys
165 170 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 2: (i) CHARACTERISTICS OF THE SEQUENCE: (A) LENGTH: amino acids (B) TYPE: amine (C) NUMBER OF STRANDS: (D) CONFIGURATION: not known (ii) TYPE OF MOLECULE: peptide (iii) HYPOTHETIC: NO (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: ID NO: 2:
<Desc/Clms Page number 16> <Desc / Clms Page number 16>
Leu Ser Ser Thr Thr Glu Thr Ala Ala Pro Ala Val Ala Asp Ala Arg 1 5 10 15
Lys Pro Pro Ser Gly Lys Lys Lys
20 (2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 3 : (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR : acides aminés (B) TYPE : aminé (C) NOMBRE DE BRINS : (D) CONFIGURATION : non-connue(ii) TYPE DE MOLECULE : peptide(iii) HYPOTHETIQUE : NON (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE : ID NO: 3 :
Leu Ser Ser Thr Thr Glu Thr Ala Ala Pro Ala Val Ala Asp Ala Arg 1 5 10 15
Lys Pro Pro Ser Gly Lys Lys Lys
20Ser Ser Ser Thr Thr Glu Thr Ala Ala Pro Ala Val Ala Asp Ala Arg 1 5 10 15
Pro Pro Lys Ser Gly Lys Lys Lys
(2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 3: (i) CHARACTERISTICS OF THE SEQUENCE: (A) LENGTH: amino acids (B) TYPE: amine (C) NUMBER OF STRANDS: (D) CONFIGURATION: not known ( ii) TYPE OF MOLECULE: peptide (iii) HYPOTHETIC: NO (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: ID NO: 3:
Ser Ser Ser Thr Thr Glu Thr Ala Ala Pro Ala Val Ala Asp Ala Arg 1 5 10 15
Pro Pro Lys Ser Gly Lys Lys Lys
20
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Priority Applications (1)
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| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR2782519A1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010093924A1 (en) * | 2009-02-12 | 2010-08-19 | Government Of The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Serological screening for hhv-8 infection using antigen mixtures |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997024057A2 (en) * | 1995-12-27 | 1997-07-10 | Yale University | Screening tests for lytic cycle antigens and antibodies to kaposi's sarcoma-associated herpesvirus |
| WO1998011132A1 (en) * | 1996-09-10 | 1998-03-19 | The University Of Liverpool | An immunogenic determinant for use in the diagnosis of kaposi's sarcoma |
-
1998
- 1998-08-24 FR FR9810736A patent/FR2782519A1/en not_active Withdrawn
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997024057A2 (en) * | 1995-12-27 | 1997-07-10 | Yale University | Screening tests for lytic cycle antigens and antibodies to kaposi's sarcoma-associated herpesvirus |
| WO1998011132A1 (en) * | 1996-09-10 | 1998-03-19 | The University Of Liverpool | An immunogenic determinant for use in the diagnosis of kaposi's sarcoma |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| DAVIS DA ET AL.: "Detection of serum antibodies to a Kaposi's sarcoma- associated herpesvirus-specific peptide", JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES, vol. 175, no. 5, May 1997 (1997-05-01), US, pages 1071 - 1079, XP002103028 * |
| PAU CP ET AL.: "Mapping and serodiagnostic application of a dominant epitope within the human herpesvirus 8 ORF 65-encoded protein", JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, vol. 36, no. 6, June 1998 (1998-06-01), US, pages 1574 - 1577, XP002103027 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010093924A1 (en) * | 2009-02-12 | 2010-08-19 | Government Of The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Serological screening for hhv-8 infection using antigen mixtures |
| US8951723B2 (en) | 2009-02-12 | 2015-02-10 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Serological screening for HHV-8 infection using antigen mixtures |
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