FR2776661A1 - IMMUNOREACTIVE POLYPEPTIDE OF THE NGF TRKA RECEPTOR AND USES - Google Patents

IMMUNOREACTIVE POLYPEPTIDE OF THE NGF TRKA RECEPTOR AND USES Download PDF

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Abstract

The invention concerns a polypeptide with immunoreactivity towards antibodies directed against the TrkA protein and consisting of any one of the following polypeptides: the polypeptide starting at amino acid 71 and terminating at amino acid 87 of the TrkA protein sequence identified by SEQ ID NO: 1, or in abbreviated form polypeptide 71-87; polypeptide 125-141; polypeptide 265-283; polypeptide 379-392; polypeptide 382-417; and equivalent polypeptides having immunoreactivity towards said antibodies, identical or similar to above polypeptides; preferably, the polypeptides are selected among SEQ ID NO: 2 to SEQ ID NO: 8. The invention also concerns their uses in particular for diagnosing neurodegenerative diseases.

Description

L'invention concerne un des récepteurs transmembranaires du facteurThe invention relates to one of the transmembrane factor receptors

neurotrophique NGF (facteur de croissance nerveux), le récepteur TrkA qui possède un  neurotrophic NGF (nerve growth factor), the TrkA receptor which has a

domaine intracellulaire et un domaine extracellulaire.  intracellular domain and an extracellular domain.

L'interaction de TrkA avec le NGF, par l'intermédiaire du domaine extracellulaire du récepteur, provoque l'autophosphorylation de celui-ci et l'activation de mécanismes cellulaires. La fonction principale de cette interaction réside dans la stimulation ou l'inhibition de la prolifération, de la différenciation cellulaire, ou de  The interaction of TrkA with NGF, via the extracellular domain of the receptor, causes its autophosphorylation and the activation of cellular mechanisms. The main function of this interaction is to stimulate or inhibit proliferation, cell differentiation, or

la mort de la cellule par apoptose.cell death by apoptosis.

Certaines maladies neurodégénératives ainsi que certaines tumeurs néoplasiques sont associées à une expression anormale du récepteur TrkA par les cellules, responsable d'une prolifération et/ou différenciation excessive de ces dernières, et/ou la mort cellulaire. Des études ont été réalisées sur la possibilité de contrôler l'activité du facteur NGF par un effet agoniste ou stimulant vis-à-vis de cette activité, de ligands, tels  Certain neurodegenerative diseases as well as certain neoplastic tumors are associated with an abnormal expression of the TrkA receptor by the cells, responsible for proliferation and / or excessive differentiation of the latter, and / or cell death. Studies have been carried out on the possibility of controlling the activity of factor NGF by an agonist or stimulating effect with regard to this activity, of ligands, such

qu'anticorps, spécifiques du récepteur TrkA.  as antibodies, specific for the TrkA receptor.

Ainsi, conformément au document WO-97/21732, il est décrit un anticorps dirigé contre le domaine extracellulaire du récepteur TrkA du NGF, et susceptible après fixation sur ledit récepteur soit d'imiter, soit d'inhiber le facteur NGF. Les auteurs de ces travaux ont en particulier obtenu un anticorps monoclonal (mAB)5C3 mimant le facteur NGF, et ils ont observé que la fixation dudit anticorps sur le récepteur TrkA entraînait notamment l'internalisation intracellulaire de ce dernier et/ou sa dimérisation. Outre l'étude de l'activité du récepteur, de tels anticorps peuvent être utilisés à la recherche d'agents pharmacologiques destinés à réguler l'activité du  Thus, in accordance with document WO-97/21732, there is described an antibody directed against the extracellular domain of the TrkA NGF receptor, and capable, after binding to said receptor, either of imitating or of inhibiting the NGF factor. The authors of this work have in particular obtained a 5C3 monoclonal antibody (mAB) mimicking the NGF factor, and they have observed that the binding of said antibody to the TrkA receptor leads in particular to the intracellular internalization of the latter and / or its dimerization. In addition to studying the activity of the receptor, such antibodies can be used to search for pharmacological agents intended to regulate the activity of

facteur NGF.NGF factor.

La Demanderesse a maintenant déterminé une nouvelle approche du récepteur TrkA, pour le diagnostic, la prophylaxie et la thérapie de maladies neurodégénératives. Elle a en effet défini des déterminants antigéniques du récepteur TrkA. A partir des polypeptides ainsi déterminés, qui constituent un premier objet de l'invention, elle a obtenu des anticorps spécifiques dont la présence et la quantification vont permettre une cytolocalisation du récepteur TrkA tout en apportant une information sur la forme dudit récepteur, et donc sur l'activité du facteur NGF. La Demanderesse a en outre observé que selon le processus d'internalisation du récepteur TrkA par le facteur NGF, il se produit une translocation périnucléaire et une translocation nucléaire, cette dernière étant réservée au domaine extracellulaire du récepteur, seule partie de TrkA à être détectée dans le noyau de la cellule, alors que le domaine intracellulaire reste dans  The Applicant has now determined a new approach to the TrkA receptor for the diagnosis, prophylaxis and therapy of neurodegenerative diseases. It has indeed defined antigenic determinants of the TrkA receptor. From the polypeptides thus determined, which constitute a first object of the invention, it obtained specific antibodies whose presence and quantification will allow cytolocation of the TrkA receptor while providing information on the form of said receptor, and therefore on NGF factor activity. The Applicant has further observed that according to the process of internalization of the TrkA receptor by the NGF factor, there is a perinuclear translocation and a nuclear translocation, the latter being reserved for the extracellular domain of the receptor, the only part of TrkA to be detected in the cell nucleus, while the intracellular domain remains in

la région cytoplasmique.the cytoplasmic region.

Les découvertes de la Demanderesse sont la base de  The Applicant's discoveries are the basis of

l'invention présente dont les différents objets sont ci-  the present invention whose various objects are below

après présentés.after presented.

Un premier objet de l'invention est un polypeptide possédant une immunoréactivité vis-à-vis des anticorps dirigés contre la protéine TrkA et consistant en l'un quelconque des polypeptides suivants: le polypeptide commençant à l'acide aminé 71 et finissant à l'acide aminé 87 de la séquence de la protéine TrkA identifiée par SEQ ID NO: 1 et représentée sur l'unique figure, soit en abrégé le polypeptide 71-87, le polypeptide 99-118, le polypeptide 125-141, le polypeptide 265- 283, le polypeptide 379-392, le polypeptide 382-417, et les polypeptides équivalents possédant une immunoréactivité vis-à-vis desdits anticorps, identique ou similaire à  A first object of the invention is a polypeptide having an immunoreactivity towards antibodies directed against the protein TrkA and consisting of any one of the following polypeptides: the polypeptide starting at amino acid 71 and ending at amino acid 87 of the sequence of the TrkA protein identified by SEQ ID NO: 1 and represented in the single figure, either for short the polypeptide 71-87, the polypeptide 99-118, the polypeptide 125-141, the polypeptide 265- 283, the polypeptide 379-392, the polypeptide 382-417, and the equivalent polypeptides having an immunoreactivity vis-à-vis said antibodies, identical or similar to

celles des polypeptides de référence définis ci-dessus.  those of the reference polypeptides defined above.

Avant de déterminer d'autres objets de l'invention, divers termes employés dans la présente  Before determining other objects of the invention, various terms used in the present

description sont définis.description are defined.

Selon l'invention, on entend par "une maladie neurodégénérative", une maladie dans laquelle un processus de mort cellulaire est associé aux troubles physiologiques et/ou cliniques. On classe notamment dans les maladies neurodégénératives, la maladie d'Alzheimer, la maladie de Parkinson, la maladie de Huntington, la sclérose latérale  According to the invention, the term "a neurodegenerative disease" means a disease in which a process of cell death is associated with physiological and / or clinical disorders. We classify in particular in neurodegenerative diseases, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, lateral sclerosis

amyotrophique, la GM1 gangliosidose.  amyotrophic, GM1 gangliosidosis.

Par "polypeptide" selon l'invention, on désigne un peptide, à l'état isolé, présentant un enchaînement d'un nombre variable d'acides aminés, tel qu'un oligopeptide, une protéine, une protéine de fusion, un peptide de fusion, un peptide de synthèse. A titre d'exemple de peptide de fusion, on peut citer le peptide obtenu avec la  By “polypeptide” according to the invention, is meant a peptide, in the isolated state, having a sequence of a variable number of amino acids, such as an oligopeptide, a protein, a fusion protein, a peptide of fusion, a synthetic peptide. As an example of a fusion peptide, mention may be made of the peptide obtained with the

pénétratine (conformément à l'enseignement du document FR-  penetatin (according to the teaching of document FR-

A-2 739 621). Un polypeptide peut être obtenu par différentes techniques bien connues de l'homme du métier, et notamment par synthèse chimique ou par des techniques de recombinaison génétique. Ainsi il peut être obtenu par des méthodes de synthèse classique, par exemple dans un synthétiseur automatique de peptides, ou par les techniques de génie génétique comprenant l'insertion d'une séquence d'ADN codant pour ledit polypeptide dans un  A-2 739 621). A polypeptide can be obtained by various techniques well known to those skilled in the art, and in particular by chemical synthesis or by genetic recombination techniques. Thus it can be obtained by conventional synthesis methods, for example in an automatic peptide synthesizer, or by genetic engineering techniques comprising the insertion of a DNA sequence coding for said polypeptide in a

vecteur d'expression tel qu'un plasmide ou un virus.  expression vector such as a plasmid or a virus.

Un polypeptide de l'invention peut être glycosylé.  A polypeptide of the invention can be glycosylated.

En outre un polypeptide de l'invention peut être marqué par tout marqueur conventionnel, tel que marqueur  In addition, a polypeptide of the invention can be labeled with any conventional marker, such as marker

radioactif, fluorescent, enzymatique ou analogue.  radioactive, fluorescent, enzymatic or the like.

L'immunoréactivité d'un polypeptide (ou polypeptide immunoréactif) vis-à-vis d'anticorps, définit, selon l'invention, le pouvoir antigénique du polypeptide, à savoir sa capacité à être reconnu spécifiquement par lesdits anticorps pour former un complexe immun, et/ou le pouvoir immunogène du polypeptide, éventuellement après couplage avec un haptène comme le KLH (Keyhole limpet haemocyanin), à savoir sa capacité à induire la production  The immunoreactivity of a polypeptide (or immunoreactive polypeptide) with respect to antibodies, defines, according to the invention, the antigenic power of the polypeptide, namely its capacity to be recognized specifically by said antibodies to form an immune complex , and / or the immunogenic power of the polypeptide, optionally after coupling with a hapten such as KLH (Keyhole limpet haemocyanin), namely its capacity to induce production

de tels anticorps.such antibodies.

Un polypeptide équivalent à un polypeptide de référence diffère de ce dernier par des modifications de  A polypeptide equivalent to a reference polypeptide differs from the latter by modifications of

la séquence d'acides aminés qui lui confère néanmoins une immunoréactivité identique, similaire, voire supérieure à5 celle du polypeptide de référence.  the amino acid sequence which nevertheless gives it an identical, similar or even greater immunoreactivity than that of the reference polypeptide.

Par anticorps dirigé contre la protéine TrkA, on comprend un anticorps dirigé contre tout ou partie de la  By antibody directed against the TrkA protein, is understood an antibody directed against all or part of the

protéine TrkA.TrkA protein.

Un polypeptide de l'invention tel que défini ci-  A polypeptide of the invention as defined above

dessus a une séquence peptidique qui consiste avantageusement en l'une quelconque des séquences choisies parmi SEQ ID NO: 2 à SEQ ID NO: 8, identifiées en fin de  above has a peptide sequence which advantageously consists of any of the sequences chosen from SEQ ID NO: 2 to SEQ ID NO: 8, identified at the end of

description. Il peut en outre être glycosylé.  description. It can also be glycosylated.

L'invention concerne également un procédé pour détecter, dans un échantillon biologique, tout ou partie de la protéine TrkA, sous une forme liée ou non au facteur de croissance nerveux (NGF), procédé selon lequel on met en contact l'échantillon avec un anticorps dirigé contre au moins un fragment de la protéine TrkA, et on détecte le complexe immun formé entre ledit anticorps et ledit fragment, ledit anticorps étant choisi dans le groupe constitué des anticorps provoquant au moins l'une quelconque des phénomènes suivants: translocation cytoplasmique, périnucléaire ou nucléaire de tout ou partie du récepteur TrkA, suppression de la translocation nucléaire de TrkA, suppression du clivage protéolytique de TrkA et interférence dans la signalisation cellulaire  The invention also relates to a method for detecting, in a biological sample, all or part of the TrkA protein, in a form linked or not to the nerve growth factor (NGF), method according to which the sample is brought into contact with a antibody directed against at least one fragment of the TrkA protein, and the immune complex formed between said antibody and said fragment is detected, said antibody being chosen from the group consisting of antibodies causing at least any one of the following phenomena: cytoplasmic translocation, perinuclear or nuclear of all or part of the TrkA receptor, suppression of the nuclear translocation of TrkA, suppression of the proteolytic cleavage of TrkA and interference in cell signaling

telle que activité agoniste ou antagoniste.  such as agonist or antagonist activity.

Selon une variante préférée de ce procédé, les anticorps sont choisis parmi ceux interagissant spécifiquement avec au moins l'un quelconque des polypeptides suivants: le polypeptide 71-87, le polypeptide 99-118, le polypeptide 125-141, le polypeptide  According to a preferred variant of this method, the antibodies are chosen from those interacting specifically with at least any of the following polypeptides: the polypeptide 71-87, the polypeptide 99-118, the polypeptide 125-141, the polypeptide

265-283, le polypeptide 379-392 et le polypeptide 382-417.  265-283, polypeptide 379-392 and polypeptide 382-417.

L'invention concerne aussi un procédé pour détecter, dans un échantillon biologique, un anticorps dirigé contre au moins un fragment immunoréactif de la protéine TrkA, cette dernière étant sous forme liée ou non au facteur de croissance nerveux (NGF), procédé selon lequel on met l'échantillon biologique en contact avec un composé comprenant au moins un fragment immunoréactif, et on détecte la formation d'un complexe immun entre le composé et l'anticorps, ledit fragment immunoréactif  The invention also relates to a method for detecting, in a biological sample, an antibody directed against at least one immunoreactive fragment of the protein TrkA, the latter being in the form or not linked to the nerve growth factor (NGF), method according to which puts the biological sample in contact with a compound comprising at least one immunoreactive fragment, and the formation of an immune complex is detected between the compound and the antibody, said immunoreactive fragment

consistant en un polypeptide de l'invention.  consisting of a polypeptide of the invention.

La mise en évidence d'un anticorps conformément au procédé précité peut révéler une dérégulation du fonctionnement biologique du récepteur TrkA,  Demonstration of an antibody in accordance with the above process can reveal a deregulation of the biological functioning of the TrkA receptor,

éventuellement associé à une maladie neurodégénérative.  possibly associated with a neurodegenerative disease.

Avantageusement le procédé de l'invention est appliqué à un échantillon biologique choisi parmi le sérum, le liquide céphalo-rachidien, une biopsie de tissu,  Advantageously, the method of the invention is applied to a biological sample chosen from serum, cerebrospinal fluid, a tissue biopsy,

des cellules, un extrait cellulaire.  cells, a cell extract.

La formation des complexes précités peut être détectée par différents formats de bio-essais classiques bien connus de l'homme du métier, tels que les techniques  The formation of the above complexes can be detected by different conventional bioassay formats well known to those skilled in the art, such as techniques

d'immunoprécipitation, immunocytochimiques, immuno-  immunoprecipitation, immunocytochemicals, immuno-

enzymatiques (ELISA, Western).enzymatic (ELISA, Western).

Enfin l'invention concerne les utilisations suivantes: - l'utilisation d'un polypeptide de l'invention, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie neurodégénérative, - l'utilisation d'un anticorps spécifique d'un polypeptide de l'invention, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie neurodégénérative, l'utilisation d'un fragment nucléotidique, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie neurodégénérative, selon laquelle ledit fragment nucléotidique est choisi parmi les fragments qui codent pour un polypeptide de l'invention.5 Exemple: Protocole de détection de l'internalisation du récepteur TrkA dans la cellule Des cellules PC12 exprimant le récepteur TrkA (B.B. Rudkin, P. Lazarovici, B.Z. Levi, Y. Abe, K. Fujita, G. Guroff, 1989, Cell cycle-specific action of nerve growth factor in PC12 cells: differentiation without proliferation. EMBO J. 8:3319-3325) ont été mises en culture. Les cellules PC12 sont récoltées à l'aide d'une agitation mécanique dans solution saline de tampon phosphate (PBS), puis sont utilisées en l'état (c'est-à- dire sans perméabilisation, ni fixation) ou bien après fixation pendant 15 minutes à température ambiante dans du paraformaldéhyde 1 %. Les cellules sont traitées avec un tampon de blocage (albumine de sérum bovin à 2 % (BSA)20 (Sigma, St Louis, MO), sérum de veau foetal (Gibco/BRL), PBS exempt de Ca2+ et de Mg2+ (TechGen International, France) ou milieu d'Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) et de l'azide de sodium comme conservateur), puis elles sont exposées à des dilutions appropriées d'anticorps de25 l'invention dans le tampon de blocage pendant 20 minutes sur de la glace. Après trois lavages dans du PBS, les cellules sont exposées à un second anticorps marqué par de l'isocyanate de fluorescéine ou par de la phycoérythrine, employé à des dilutions de 1/200 dans du tampon de blocage pendant 20 minutes sur de la glace. Les observations microscopiques sont faites à l'aide d'un microscope à  Finally, the invention relates to the following uses: - the use of a polypeptide of the invention, to obtain a diagnostic, prophylactic or therapeutic composition intended to detect, prevent or treat a pathological condition associated with a neurodegenerative disease, - use of an antibody specific for a polypeptide of the invention, for obtaining a diagnostic, prophylactic or therapeutic composition intended for detecting, preventing or treating a pathological condition associated with a neurodegenerative disease, the use of a nucleotide fragment, for obtain a diagnostic, prophylactic or therapeutic composition intended to detect, prevent or treat a pathological condition associated with a neurodegenerative disease, according to which said nucleotide fragment is chosen from the fragments which code for a polypeptide of the invention. 5 Example: Detection protocol internalization of the TrkA receptor in the cell ule PC12 cells expressing the TrkA receptor (B.B. Rudkin, P. Lazarovici, B.Z. Levi, Y. Abe, K. Fujita, G. Guroff, 1989, Cell cycle-specific action of nerve growth factor in PC12 cells: differentiation without proliferation. EMBO J. 8: 3319-3325) were cultured. The PC12 cells are harvested using mechanical stirring in saline phosphate buffer (PBS), then are used as they are (that is to say without permeabilization, or fixation) or else after fixation for 15 minutes at room temperature in 1% paraformaldehyde. The cells are treated with a blocking buffer (2% bovine serum albumin (BSA) 20 (Sigma, St Louis, MO), fetal calf serum (Gibco / BRL), PBS free of Ca2 + and Mg2 + (TechGen International , France) or modified Eagle's medium from Dulbecco (DMEM) and sodium azide as a preservative), then they are exposed to appropriate dilutions of antibodies of the invention in the blocking buffer for 20 minutes on ice. After three washes in PBS, the cells are exposed to a second antibody labeled with fluorescein isocyanate or with phycoerythrin, used at 1/200 dilutions in blocking buffer for 20 minutes on ice. Microscopic observations are made using a microscope

fluorescence Olympus Vanox AH2.Olympus Vanox AH2 fluorescence.

LISTAGE DE SEQUENCESSEQUENCE LIST

(1) INFORMATIONS GENERALES:(1) GENERAL INFORMATION:

(i) DEPOSANT:(i) DEPOSITOR:

(A) NOM:(A) NAME:

(B) RUE:(B) STREET:

(C) VILLE:(C) CITY:

(E) PAYS: FRANCE(E) COUNTRY: FRANCE

(F) CODE POSTAL:(F) POSTAL CODE:

(ii) TITRE DE L'INVENTION: (iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 9 (iv) FORME DECHIFFRABLE PAR ORDINATEUR: (A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk (B) ORDINATEUR: IBM PC compatible  (ii) TITLE OF THE INVENTION: (iii) NUMBER OF SEQUENCES: 9 (iv) FORM DETECTABLE BY COMPUTER: (A) TYPE OF MEDIUM: Floppy disk (B) COMPUTER: IBM PC compatible

(C) SYSTEME D'EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS  (C) OPERATING SYSTEM: PC-DOS / MS-DOS

(D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.30 (OEB)  (D) SOFTWARE: PatentIn Release # 1.0, Version # 1.30 (EPO)

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO:1:  (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 1:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 790 résidus d'acide aminé (B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine TrkA  (i) CHARACTERISTICS OF THE SEQUENCE: (A) LENGTH: 790 amino acid residues (B) TYPE: amino acids (ii) TYPE OF MOLECULE: TrkA protein

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:l:  (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: SEQ ID NO: l:

cf figuresee figure

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO:2:  (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 2:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 18 résidus d'acide aminé (B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide de la protéine TrkA du rat (71-87)  (i) CHARACTERISTICS OF THE SEQUENCE: (A) LENGTH: 18 amino acid residues (B) TYPE: amino acids (ii) TYPE OF MOLECULE: peptide of rat TrkA protein (71-87)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:2:  (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: SEQ ID NO: 2:

LYX1ENQX2X3L QX4LEX5X6DLLYX1ENQX2X3L QX4LEX5X6DL

o X1 représente I ou V, X2 représente Q ou R, X3 représente H ou D, X4 représente H ou R, X5 représente L ou F, X6 représente R ou E.  o X1 represents I or V, X2 represents Q or R, X3 represents H or D, X4 represents H or R, X5 represents L or F, X6 represents R or E.

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 3:  (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 3:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 20 résidus d'acide aminé (B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide de la protéine TrkA de l'humain et du rat (99-118)  (i) CHARACTERISTICS OF THE SEQUENCE: (A) LENGTH: 20 amino acid residues (B) TYPE: amino acids (ii) TYPE OF MOLECULE: peptide of the protein TrkA of humans and rats (99-118)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3:  (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: SEQ ID NO: 3:

VKSGLRFVAP DAFHFTPRLSVKSGLRFVAP DAFHFTPRLS

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 4:  (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 4:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 17 résidus d'acide aminé (B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide de la protéine TrkA de l'humain et du rat (125-141)  (i) CHARACTERISTICS OF THE SEQUENCE: (A) LENGTH: 17 amino acid residues (B) TYPE: amino acids (ii) TYPE OF MOLECULE: peptide of the protein TrkA of humans and rats (125-141)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 4:  (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: SEQ ID NO: 4:

NALESLSWKT VQGLSLQNALESLSWKT VQGLSLQ

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 5:  (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 5:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 19 résidus d'acide aminé (B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide de la protéine TrkA (265-283)  (i) CHARACTERISTICS OF THE SEQUENCE: (A) LENGTH: 19 amino acid residues (B) TYPE: amino acids (ii) TYPE OF MOLECULE: peptide of the protein TrkA (265-283)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 5:  (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: SEQ ID NO: 5:

CWAENDVGRA EVSVQVX1VSCWAENDVGRA EVSVQVX1VS

o X1 représente S ou N.o X1 represents S or N.

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 6:  (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 6:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 14 résidus d'acide aminé (B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide de la protéine TrkA de l'humain et du rat (379-392)  (i) CHARACTERISTICS OF THE SEQUENCE: (A) LENGTH: 14 amino acid residues (B) TYPE: amino acids (ii) TYPE OF MOLECULE: peptide of the protein TrkA of humans and rats (379-392)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 6:  (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: SEQ ID NO: 6:

MDNPFEFNPE DPIPMDNPFEFNPE DPIP

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 7:  (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 7:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 35 résidus d'acide aminé (B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide de la protéine TrkA (382-417)  (i) CHARACTERISTICS OF THE SEQUENCE: (A) LENGTH: 35 amino acid residues (B) TYPE: amino acids (ii) TYPE OF MOLECULE: peptide of the protein TrkA (382-417)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 7:  (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: SEQ ID NO: 7:

PFEFNPEDPI PDTNSTSX1DP VEKKDETPFG SVAVG  PFEFNPEDPI PDTNSTSX1DP VEKKDETPFG SVAVG

o X1 représente R ou G.o X1 represents R or G.

(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 8:  (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 8:

(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 41 résidus d'acide aminé (B) TYPE: acides aminés (ii) TYPE DE MOLECULE: peptide de la protéine TrkA (382-417)  (i) CHARACTERISTICS OF THE SEQUENCE: (A) LENGTH: 41 amino acid residues (B) TYPE: amino acids (ii) TYPE OF MOLECULE: peptide of the protein TrkA (382-417)

(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 8:  (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: SEQ ID NO: 8:

PFEFNPEDPI PVSFSPVDTN STSX1DPVEKK DETPFGSVAV G  PFEFNPEDPI PVSFSPVDTN STSX1DPVEKK DETPFGSVAV G

o X1 représente R ou G.o X1 represents R or G.

Claims (11)

REVENDICATIONS 1. Polypeptide possédant une immunoréactivité vis-  1. Polypeptide having an immunoreactivity vis- à-vis des anticorps dirigés contre la protéine TrkA et consistant en l'un quelconque des polypeptides suivants: le polypeptide commençant à l'acide aminé 71 et finissant à l'acide aminé 87 de la séquence de la protéine TrkA identifiée par SEQ ID NO: 1, soit en abrégé le polypeptide 71-87, le polypeptide 99-118, le polypeptide 125-141, le polypeptide 265-283, le polypeptide 379-392, le polypeptide 382-417, et les polypeptides équivalents possédant une immunoréactivité vis- à-vis desdits anticorps, identique ou similaire à celles des polypeptides précités.15  against antibodies directed against the TrkA protein and consisting of any one of the following polypeptides: the polypeptide starting at amino acid 71 and ending at amino acid 87 of the sequence of the TrkA protein identified by SEQ ID NO : 1, either for short the polypeptide 71-87, the polypeptide 99-118, the polypeptide 125-141, the polypeptide 265-283, the polypeptide 379-392, the polypeptide 382-417, and the equivalent polypeptides having immunoreactivity vis - with respect to said antibodies, identical or similar to those of the abovementioned polypeptides. 2. Polypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste en l'une quelconque des séquences peptidiques choisies parmi SEQ ID NO: 2 à2. Polypeptide according to claim 1, characterized in that it consists of any one of the peptide sequences chosen from SEQ ID NO: 2 to SEQ ID NO: 8.SEQ ID NO: 8. 3. Polypeptide selon la revendication 1 ou 2,  3. Polypeptide according to claim 1 or 2, caractérisé en ce qu'il est glycosylé.  characterized in that it is glycosylated. 4. Procédé pour détecter, dans un -échantillon biologique, tout ou partie de la protéine TrkA, sous une forme liée ou non au facteur de croissance nerveux (NGF), caractérisé en ce qu'on met en contact l'échantillon avec un anticorps dirigé contre au moins un fragment de la protéine TrkA, et on détecte le complexe immun formé entre ledit anticorps et ledit fragment, ledit anticorps étant choisi dans le groupe constitué des anticorps provoquant au moins l'une quelconque des phénomènes suivants: translocation cytoplasmique, périnucléaire ou nucléaire de tout ou partie du récepteur TrkA, suppression de la translocation nucléaire de TrkA, suppression du clivage protéolytique de TrkA et interférence dans la signalisation cellulaire telle que activité agoniste ou  4. Method for detecting, in a biological sample, all or part of the TrkA protein, in a form linked or not to the nerve growth factor (NGF), characterized in that the sample is brought into contact with an antibody raised against at least one fragment of the TrkA protein, and the immune complex formed between said antibody and said fragment is detected, said antibody being chosen from the group consisting of antibodies causing at least any one of the following phenomena: cytoplasmic translocation, perinuclear or nuclear of all or part of the TrkA receptor, suppression of the nuclear translocation of TrkA, suppression of the proteolytic cleavage of TrkA and interference in cellular signaling such as agonist activity or antagoniste.antagonist. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que les anticorps sont choisis parmi ceux interagissant spécifiquement avec au moins l'un quelconque des polypeptides suivants: le polypeptide 71-87, le5 polypeptide 99-118, le polypeptide 125-141, le polypeptide  5. Method according to claim 4, characterized in that the antibodies are chosen from those interacting specifically with at least any one of the following polypeptides: the polypeptide 71-87, the polypeptide 99-118, the polypeptide 125-141, the polypeptide 265-283, le polypeptide 379-392 et le polypeptide 382-417.  265-283, polypeptide 379-392 and polypeptide 382-417. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que les anticorps sont choisis parmi ceux  6. Method according to claim 5, characterized in that the antibodies are chosen from those interagissant spécifiquement avec au moins un polypeptide10 défini à la revendication 2 ou 3.  interacting specifically with at least one polypeptide10 defined in claim 2 or 3. 7. Procédé pour détecter, dans un échantillon biologique, un anticorps associé à une dérégulation du fonctionnement biologique du récepteur TrkA, procédé selon lequel on met l'échantillon biologique en contact avec un15 composé comprenant au moins un fragment immunoréactif, et on détecte la formation d'un complexe immun entre le composé et l'anticorps, ledit fragment immunoréactif consiste en un polypeptide tel que défini à l'une  7. Method for detecting, in a biological sample, an antibody associated with a deregulation of the biological functioning of the TrkA receptor, method according to which the biological sample is brought into contact with a compound comprising at least one immunoreactive fragment, and the formation is detected of an immune complex between the compound and the antibody, said immunoreactive fragment consists of a polypeptide as defined in one quelconque des revendications 1 à 3.  any of claims 1 to 3. 8. Procédé selon la revendication 5 ou 7, caractérisé en ce que l'échantillon biologique est choisi parmi le sérum, le liquide céphalo-rachidien, une biopsie  8. Method according to claim 5 or 7, characterized in that the biological sample is chosen from serum, cerebrospinal fluid, a biopsy de tissu, des cellules, un extrait cellulaire.  tissue, cells, cell extract. 9. Utilisation d'un polypeptide défini à l'une  9. Use of a polypeptide defined in one quelconque des revendications 1 à 3, pour obtenir une  any of claims 1 to 3, to obtain a composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état  diagnostic, prophylactic or therapeutic composition for detecting, preventing or treating a condition pathologique associé à une maladie neurodégénérative.  pathology associated with a neurodegenerative disease. 10. Utilisation d'un anticorps spécifique d'un polypeptide tel que défini à l'une quelconque des  10. Use of an antibody specific for a polypeptide as defined in any one of revendications 1 à 3, pour obtenir une composition  claims 1 to 3, to obtain a composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé  diagnostic, prophylactic or therapeutic intended to detect, prevent or treat an associated pathological condition à une maladie neurodégénérative.  neurodegenerative disease. 11. Utilisation d'un fragment nucléotidique, pour obtenir une composition diagnostique, prophylactique ou thérapeutique destinée à détecter, prévenir ou traiter un état pathologique associé à une maladie neurodégénérative, selon laquelle ledit fragment nucléotidique est choisi parmi les fragments qui codent pour un polypeptide tel que  11. Use of a nucleotide fragment, for obtaining a diagnostic, prophylactic or therapeutic composition intended for detecting, preventing or treating a pathological condition associated with a neurodegenerative disease, according to which said nucleotide fragment is chosen from the fragments which code for a polypeptide such than défini à l'une quelconque des revendications 1 à 3.  defined in any one of claims 1 to 3.
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