FR2767534A1 - Medium for culture and identification of different Candida species, especially C. albicans and C. tropicalis - Google Patents

Medium for culture and identification of different Candida species, especially C. albicans and C. tropicalis Download PDF

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Abstract

A medium for the culture and identification of specific yeasts contains a selective inhibitor for the hexosaminidase activity of Candida tropicalis and a chromogenic or fluorogenic substrate that is hydrolyzable by a hexosaminidase enzyme. An Independent claim is also included for a medium having two substrates, one as described above and the other being chromogenic or fluorogenic but hydrolyzable by a glucosidase enzyme, preferably with the marker for the first substrate being different from the marker for the second substrate.

Description

La présente invention concerne un milieu de culture et d'identification spécifique de levures et un procédé d'analyse microbiologique pour identifier spécifiquement les levures Candida albicans et Candida tropicalis et/ou différencier les levures C. albicans et
C. tropicalis. The present invention relates to a yeast-specific culture and identification medium and a microbiological analysis method for specifically identifying Candida albicans and Candida tropicalis yeasts and / or differentiating C. albicans yeasts and
C. tropicalis.

L'espèce C. albicans est la plus communément isolée à partir d'échantillons cliniques et provoque des infections plus ou moins importantes de la peau, des ongles et des muqueuses chez les individus présentant des défenses immunitaires normales et des infections très sérieuses chez les individus affaiblis et notamment ceux infectés par le
Virus de l'lmmunodéficience Humaine (VIH). Selon les études C. tropicalis est la deuxième ou troisième espèce en fréquence d'isolement dans les prélèvements d'origine humaine. II est donc essentiel non seulement de pouvoir détecter très rapidement la présence de ces levures dans des prélèvements, mais également de différencier celles appartenant à l'espèce
C. albicans, de celles de l'espèce C. tropicalis.The species C. albicans is most commonly isolated from clinical specimens and causes more or less important infections of the skin, nails and mucous membranes in individuals with normal immune defenses and very serious infections in individuals weakened and especially those infected by the
Human Immunodeficiency Virus (HIV). According to the studies, C. tropicalis is the second or third species in frequency of isolation in samples of human origin. It is therefore essential not only to be able to very quickly detect the presence of these yeasts in samples, but also to differentiate those belonging to the species
C. albicans, of those of the species C. tropicalis.

Pour cela, il a été proposé ces dernières années de nombreuses techniques pour identifier rapidement les levures C.albicans. Le plus grand nombre d'entre elles est basé sur la mise en évidence d'une activité hexosaminidase, c'est à dire d'enzymes ayant une activité N-acétyl-ss-D- glucosaminidase ou N-acétyl-ss-D-galactosaminidase ou N-acétyl-ss-D- mannosaminidase (FR-2 684 110, FR-2 659 982). Néanmoins ces procédés souffrent d'une spécificité réduite vis à vis des levures de l'espèce C. tropicalis. Les inventeurs de la présente invention ont découvert qu'en inhibant une activité enzymatique de l'espèce C.tropilasis, notamment l'activité hexosaminidase, il était possible de pallier aux inconvénients des tests précités et ainsi d'apporter un moyen d'identification et/ou de différenciation des levures, notamment de C. albicans et C. tropicalis, rapide et peu coûteux. For this, it has been proposed in recent years many techniques to quickly identify C.albicans yeasts. The largest number of them is based on the demonstration of a hexosaminidase activity, ie enzymes having N-acetyl-ss-D-glucosaminidase or N-acetyl-ss-D-activity. galactosaminidase or N-acetyl-s-D-mannosaminidase (FR-2,684,110, FR-2,659,982). Nevertheless, these processes suffer from a reduced specificity with respect to the yeasts of the C. tropicalis species. The inventors of the present invention have discovered that by inhibiting an enzymatic activity of the C.tropilasis species, in particular the hexosaminidase activity, it was possible to overcome the disadvantages of the aforementioned tests and thus to provide a means of identification and / or differentiation of yeasts, including C. albicans and C. tropicalis, fast and inexpensive.

L'objet de l'invention est un milieu de culture et d'identification spécifique de levures comprenant un substrat chromogène ou fluorigène, susceptible d'être hydrolysé par une enzyme du groupe des hexosaminidases, caractérisé en ce que le milieu comprend en outre au moins un composé sélectivement inhibiteur de l'activité hexosaminidase de
Candida tropicalis. The object of the invention is a yeast-specific culture and identification medium comprising a chromogenic or fluorogenic substrate, capable of being hydrolysed by an enzyme from the group of hexosaminidases, characterized in that the medium further comprises at least a compound selectively inhibiting the hexosaminidase activity of
Candida tropicalis.

Grâce à l'invention, le milieu de culture permet notamment l'identification spécifique des levures de l'espèce C. albicans et/ou
C. tropicalis. Thanks to the invention, the culture medium notably allows the specific identification of the yeasts of C. albicans species and / or
C. tropicalis.

Selon un mode de réalisation préférentiel de l'invention, le milieu de culture comprend en tant que composé sélective ment inhibiteur une amide de formule (
(I) R-(CO-NR'R")n
dans laquelle R, R' et R" sont, indépendamment les uns des autres:
- un atome d'hydrogène,
- une chaîne hydrocarbonée, saturée ou insaturée, aliphatique ou cyclique, comportant éventuellement au moins un hétéroatome,
ou bien chacun des R et/ou R' et/ou R" forment ensemble une chaîne hydrocarbonée cyclique, saturée ou insaturée, comportant éventuellement au moins un hétéroatome,
et n est nombre entier supérieur ou égal à 1.According to a preferred embodiment of the invention, the culture medium comprises, as selectively inhibiting compound, an amide of formula (
(I) R- (CO-NR'R ") n
in which R, R 'and R "are, independently of one another:
a hydrogen atom,
a hydrocarbon chain, saturated or unsaturated, aliphatic or cyclic, optionally comprising at least one heteroatom,
or each of R and / or R 'and / or R "together form a cyclic hydrocarbon chain, saturated or unsaturated, optionally comprising at least one heteroatom,
and n is an integer greater than or equal to 1.

Selon l'invention, par une chaîne hydrocarbonée " comportant au moins un hétéroatome on entend que la chaîne hydrocarbonée peut être substituée par au moins un substituant tel que notamment -NH2,
COOH, -SH, et un atome d'halogène, et/ou peut etre interrompue par au moins un hétéroatome tel que notamment O, S, et N.According to the invention, a hydrocarbon chain "comprising at least one heteroatom means that the hydrocarbon chain may be substituted by at least one substituent such as in particular -NH 2,
COOH, -SH, and a halogen atom, and / or may be interrupted by at least one heteroatom such as in particular O, S, and N.

Selon un mode de réalisation préférentiel de l'invention, le milieu de culture comprend en tant que composé sélectivement inhibiteur une amide de formule (I):
(I) R-(CO-NR'R")n
dans laquelle R, R' et R" sont, indépendamment les uns des autres:
- un atome d'hydrogène,
- une chaîne hydrocarbonée, saturée ou insaturée, aliphatique ou cyclique, éventuellement interrompue par au moins un hétéroatome,
ou bien chacun des R et/ou R' et/ou R" forment ensemble une chaîne hydrocarbonée cyclique, saturée ou insaturée, comportant éventuellement au moins un hétéroatome,
et n est nombre entier supérieur ou égal à 1.According to a preferred embodiment of the invention, the culture medium comprises, as selectively inhibiting compound, an amide of formula (I):
(I) R- (CO-NR'R ") n
in which R, R 'and R "are, independently of one another:
a hydrogen atom,
a hydrocarbon chain, saturated or unsaturated, aliphatic or cyclic, optionally interrupted by at least one heteroatom,
or each of R and / or R 'and / or R "together form a cyclic hydrocarbon chain, saturated or unsaturated, optionally comprising at least one heteroatom,
and n is an integer greater than or equal to 1.

Selon un autre mode de réalisation préférentiel de l'invention, le milieu de culture comprend en tant que composé sélectivement inhibiteur une amide de formule (I):
(I) R-(CO-NR'R")n
dans laquelle R, R' et R" sont, indépendamment les uns des autres:
- un atome d'hydrogène,
- une chaîne hydrocarbonée aliphatique,
et n est égal à 1 ou 2.According to another preferred embodiment of the invention, the culture medium comprises, as selectively inhibiting compound, an amide of formula (I):
(I) R- (CO-NR'R ") n
in which R, R 'and R "are, independently of one another:
a hydrogen atom,
an aliphatic hydrocarbon chain,
and n is 1 or 2.

Selon un mode de réalisation très préférentiel de l'invention, le composé sélectivement inhibiteur est une acétamide. According to a very preferred embodiment of the invention, the selectively inhibiting compound is an acetamide.

Selon un autre mode de réalisation de l'invention, le milieu de culture comprend un activateur spécifique de l'enzyme hexosaminidase de
C. albicans.According to another embodiment of the invention, the culture medium comprises a specific activator of the hexosaminidase enzyme of
C. albicans.

Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, I'activateur spécifique de l'enzyme hexosaminidase est la N-acétyl-glucosamine. According to a preferred embodiment of the invention, the specific activator of the enzyme hexosaminidase is N-acetyl-glucosamine.

Selon un autre mode de réalisation de l'invention, le milieu de culture comprend un mélange de composés sélectivement inhibiteurs. According to another embodiment of the invention, the culture medium comprises a mixture of selectively inhibiting compounds.

Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le mélange de composés sélectivement inhibiteurs est constitué d'acétamide et de formamide. According to a preferred embodiment of the invention, the mixture of selectively inhibiting compounds consists of acetamide and formamide.

Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le milieu est liquide ou gélifié. According to a preferred embodiment of the invention, the medium is liquid or gelled.

Selon un mode de réalisation de l'invention, le milieu de culture est gélifié et comprend pour 1 litre
- peptones ou mélange de peptones 0,01-40 g
- extrait de levure 0,01-40 g
- glucose (source de carbone) 0-10 g
- tampon phosphate (pH entre 5 et 8,5) 2,5-100 mM
- 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N-acétyl ss-D-glucosaminide 20-600.1O-6M
- acétamide 0,01-209
- inhibiteur de bactéries 0-20g
- agar 11-20 g
Selon un autre mode de réalisation préféré de l'invention, le milieu de culture gélifié ou liquide décrit ci-dessus comprend de plus de la
N-acétyl-glucosamine à 1,0 g/l.According to one embodiment of the invention, the culture medium is gelled and comprises for 1 liter
- peptones or mixture of peptones 0.01-40 g
- yeast extract 0.01-40 g
- glucose (carbon source) 0-10 g
phosphate buffer (pH between 5 and 8.5) 2.5-100 mM
5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N-acetyl ss-D-glucosaminide 20-600.1O-6M
- acetamide 0.01-209
- 0-20g bacteria inhibitor
- agar 11-20 g
According to another preferred embodiment of the invention, the gelled or liquid culture medium described above also comprises
N-acetylglucosamine at 1.0 g / l.

Selon un autre mode de réalisation préféré de l'invention, le milieu de culture gélifié ou liquide décrit ci-desssus comprend de plus de la formamide à 0,5 g/l. According to another preferred embodiment of the invention, the gelled or liquid culture medium described above further comprises formamide at 0.5 g / l.

Un autre objet de l'invention est un procédé d'analyse microbiologique pour identifier sélectivement les levures C. albicans et/ou
C. tropicalis et/ou différencier les levures C. albicans et C. tropicalis, caractérisé en ce que l'on met directement l'échantillon à analyser au contact d'au moins un milieu d'identification décrit ci-dessus.Another subject of the invention is a microbiological analysis method for selectively identifying C. albicans yeasts and / or
C. tropicalis and / or differentiate yeasts C. albicans and C. tropicalis, characterized in that one directly puts the sample to be analyzed in contact with at least one identification medium described above.

Par "composé sélectivement inhibiteur de l'activité de l'hexosaminidase de C. tropical/s", on entend tout composé capable d'inhiber de manière sélective l'activité de l'hexosaminidase de
C. tropicalis. Par exemple, les composés de type amide de formule décrite ci-dessus ont la propriété d'inhiber spécifiquement l'activité hexosaminidase des C. tropicalis, sans affecter celle des C. albicans.By "selectively inhibitory compound of the activity of hexosaminidase of C. tropical / s" is meant any compound capable of selectively inhibiting the activity of hexosaminidase of
C. tropicalis. For example, the amide compounds of the formula described above have the property of specifically inhibiting the hexosaminidase activity of C. tropicalis, without affecting that of C. albicans.

Par "identification", on entend la détection et/ou la quantification. By "identification" is meant detection and / or quantification.

Par "échantillon ", on entend notamment tout prélèvement de type biologique, une souche ou un ensemble de souches de levure isolées par exemple après culture. By "sample" is meant in particular any biological sample, a strain or a set of yeast strains isolated for example after culture.

On expose ci-après, de manière générale la composition du milieu de culture, exprimée en g/l de milieu final. The composition of the culture medium, expressed in g / l of final medium, is generally described below.

Le milieu comprend une base nutritive nécessaire au développement des levures et des inhibiteurs spécifiques de l'hexosaminidase des C. tropicalis selon l'invention. The medium comprises a nutritional base necessary for the development of specific yeasts and inhibitors of C. tropicalis hexosaminidase according to the invention.

Les éléments constitutifs de la base nutritive comprennent
- des peptones de 0,01 à 40 g/l, telles que la peptone de viande, le produit commercialisé par la société bioMérieux sous la marque bioSoyase ou analogue, ou encore un mélange de peptones ; de préférence, la peptone ou le mélange de peptones est présent dans le milieu à environ 6 g/l + 0,5 g/l
- un extrait de levure de 0,01 à 40 g/l, de préférence environ 1,5 g/l, apportant des vitamines de croissance des levures
- une source de carbone, telle que le glucose, le glycérol, un acétate, un pyruvate, un lactate, I'arginine, un aminobutyrate, ou un mélange de ces composants, dans la proportion de O à 10 g/l ; la source de carbone est de préférence le glucose en une quantité de 1 g/l
- un tampon ajouté au milieu afin d'obtenir un pH favorable pour le développement de C. albicans, compris entre 5 et 8,5 ; le tampon est choisi parmi les tampons phosphates, Tris, Hépès (acide N-2 hydroxyéthyl-pipérazine-N '-2-éthasulfonique) et citrate dans la proportion de 2,5 à 100 mM ; de préférence, le tampon est un tampon phosphate 10 mM pour ajuster le pH du milieu à une valeur voisine de 7;
- de l'Agar de 11 à 20 g/l, de préférence de 15 g/l.The building blocks of the nutrient base include
peptones of 0.01 to 40 g / l, such as peptone of meat, the product marketed by bioMérieux under the trademark bioSoyase or the like, or a mixture of peptones; preferably, the peptone or peptone mixture is present in the medium at about 6 g / l + 0.5 g / l
a yeast extract of 0.01 to 40 g / l, preferably about 1.5 g / l, providing yeast growth vitamins
a carbon source, such as glucose, glycerol, an acetate, a pyruvate, a lactate, arginine, an aminobutyrate, or a mixture of these components, in the proportion of from 0 to 10 g / l; the carbon source is preferably glucose in an amount of 1 g / l
a buffer added to the medium in order to obtain a favorable pH for the development of C. albicans, of between 5 and 8.5; the buffer is chosen from phosphate buffers, Tris, Hepes (N-2-hydroxyethyl-piperazine-N '-2-ethasulfonic acid) and citrate in the proportion of 2.5 to 100 mM; preferably, the buffer is a 10 mM phosphate buffer to adjust the pH of the medium to a value close to 7;
- Agar of 11 to 20 g / l, preferably 15 g / l.

Le substrat chromogène ou fluorigène peut être tout substrat chromogène ou fluorigène hydrolysable par une hexosaminidase, telle qu'une galactosaminidase, glucosaminidase ou mannosaminidase, pour libérer un produit coloré ou fluorescent. De préférence, le substrat est choisi parmi ceux présentant une forte coloration ou fluorescence avec peu de molécules, et n'induisant pas de modification du métabolisme des microorganismes, excepté pour l'activité enzymatique recherchée. Ces substrats sont de préférence choisis, pour les substrats chromogènes, parmi ceux comprenant un groupement chromophore tel qu'un indolyle substitué ou non, et notamment parmi le 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N acétyl-ss-D-glucosaminide, le 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N-acétyl-ss-D- galactosaminide, 6-chloro-3-indolyl-N-acétyl-ss-D-glucosaminide ou le 5 Bromo-6-chloro-3-indolyl-N-acétyl-ss-D-glucosaminide de 20 à 600 mM, avantageusement le 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N-acétyl-ss-D-glucosaminide à 200 mM, et pour les substrats fluorigènes, parmi la 4-Méthylumbelliféryl N-acétyl-ss-D-galactosaminide, la 4-Méthylumbelliféryl-N-acétyl-ss-D- glucosaminide. The chromogenic or fluorogenic substrate may be any chromogenic or fluorogenic substrate hydrolyzable by a hexosaminidase, such as a galactosaminidase, glucosaminidase or mannosaminidase, to release a colored or fluorescent product. Preferably, the substrate is chosen from those having a strong coloration or fluorescence with few molecules, and not inducing any change in the metabolism of the microorganisms, except for the desired enzymatic activity. These substrates are preferably chosen, for the chromogenic substrates, from those comprising a chromophoric group such as a substituted or unsubstituted indolyl, and in particular from 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N acetyl-s-D- glucosaminide, 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N-acetyl-ss-D-galactosaminide, 6-chloro-3-indolyl-N-acetyl-ss-D-glucosaminide or Bromo-6-chloro 3-indolyl-N-acetyl-s-D-glucosaminide of 20 to 600 mM, advantageously 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N-acetyl-ss-D-glucosaminide at 200 mM, and for the Fluorogenic substrates, among 4-methylumbelliferyl N-acetyl-ss-D-galactosaminide, 4-methylumbelliferyl-N-acetyl-ss-D-glucosaminide.

L'inhibiteur spécifique de l'hexosaminidase des levures de l'espèce C. tropicalis est choisi préférentiellement dans le groupe des composés de type amide (I) ou leurs mélanges. II est notamment choisi parmi les amides telles que la formamide, I'acétamide, la propionamide, la glycinamide, la succinamide, et autres. La quantité du composé de type amide est comprise entre 0,01 et 20 g/l. De préférence l'inhibiteur choisi est l'acétamide à 1 g/l. The specific inhibitor of hexosaminidase of the yeasts of the C. tropicalis species is preferably selected from the group of amide compounds (I) or mixtures thereof. It is especially chosen from amides such as formamide, acetamide, propionamide, glycinamide, succinamide, and others. The amount of the amide compound is between 0.01 and 20 g / l. Preferably the selected inhibitor is acetamide at 1 g / l.

Afin d'obtenir pour les levures de l'espèce C. albicans une activité intense et précoce, il peut avantageusement être ajouté au milieu de culture un activateur d'hexosaminidase tel que décrit dans le brevet FR2 684 110. De même un inhibiteur ou un mélange d'inhibiteurs des bactéries, permettant d'inhiber la croissance des bactéries à Gram positif et de celles à Gram négatif, sans affecter celle des levures, et si possible des champignons, peut être ajouté au milieu. De préférence, les inhibiteurs de bactéries sont choisis dans le groupe des antibiotiques tels que gentamicine, chloramphénicol, pénicilline, streptomycine, cycloheximide, néomycine, tétracycline, oxytétracycline ou un mélange d'antibiotiques, et/ou parmi la tellurite, un molybdate et analogues, ou leurs mélanges. In order to obtain an intense and early activity for yeasts of C. albicans species, a hexosaminidase activator can advantageously be added to the culture medium as described in patent FR 2 684 110. Likewise, an inhibitor or a A mixture of bacterial inhibitors, which inhibits the growth of gram-positive and gram-negative bacteria, without affecting the growth of yeasts, and if possible fungi, can be added to the medium. Preferably, the bacteria inhibitors are selected from the group of antibiotics such as gentamicin, chloramphenicol, penicillin, streptomycin, cycloheximide, neomycin, tetracycline, oxytetracycline or a mixture of antibiotics, and / or among tellurite, a molybdate and the like, or their mixtures.

Avantageusement, on choisit le chloramphénicol (0,5 g/l), ou un mélange de gentamicine (0,1 g/l) et de chloramphénicol (0,05 g/l). II est également possible d'inhiber la croissance des bactéries en diminuant le pH du milieu jusqu'à un pH acide.Advantageously, chloramphenicol (0.5 g / l) or a mixture of gentamicin (0.1 g / l) and chloramphenicol (0.05 g / l) are chosen. It is also possible to inhibit the growth of bacteria by lowering the pH of the medium to an acidic pH.

Comme cela est démontré par les exemples ci-après, la réaction d'hydrolyse enzymatique reste spécifique au delà de 24 heures d'incubation. As demonstrated by the examples below, the enzymatic hydrolysis reaction remains specific beyond 24 hours of incubation.

Exemple 1
Des essais ont été réalisés pour tester l'effet de l'acétamide sur l'activité hexosaminidase des levures.Example 1
Trials have been performed to test the effect of acetamide on yeast hexosaminidase activity.

Deux milieux ont été préparés selon les techniques habituelles. Two media were prepared according to the usual techniques.

Le premier milieu ci-après désigné Milieu I contient tous les éléments de la base nutritive, ainsi qu'un substrat chromogène d'une hexosaminidase et un mélange inhibiteur de bactéries.The first medium hereinafter referred to as Medium I contains all the elements of the nutrient base, as well as a chromogenic substrate of a hexosaminidase and a bacterial inhibiting mixture.

La composition du Milieu I pour un litre de milieu final est la suivante
- bioSoyase (bioMérieux).. .. ........ ....6,0 g
- extrait de levure (bioMérieux) ....... ....1,5 g
- glucose (Merck).. . ..... ..................... 1,0 g
- tampon phosphate (Merck)...................10,0 mM
- Mn2+ (Merck) .... . .................... . ....1,0 mM
- 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N-acétyl
ss-D-glucosaminide (Biosynth) ..................0,1 g
- gentamicine .....................0,1 g
- chloramphénicol...................0,05 g
- agar (bioMérieux).......... ...................15,0 g
Le pH du milieu a été ajusté aux environs de 7.The composition of Medium I for a liter of final medium is as follows
- bioSoyase (bioMérieux) .. .. ........ .... 6.0 g
- yeast extract (bioMérieux) ....... .... 1.5 g
- glucose (Merck) ... ..... ..................... 1.0 g
phosphate buffer (Merck) ................... 10.0 mM
- Mn2 + (Merck) ..... ..................... .... 1.0 mM
5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N-acetyl
ss-D-glucosaminide (Biosynth) .................. 0.1 g
- gentamicin ..................... 0,1 g
- chloramphenicol ................... 0.05 g
- agar (bioMérieux) .......... ................... 15.0 g
The pH of the medium was adjusted to around 7.

Le second milieu appelé Milieu II correspond au milieu selon l'invention et contient tous les éléments ci-dessus décrits pour le Milieu I, plus l'inhibiteur spécifique de l'hexosaminidase des C. tropicalis, c'est à dire un composé acétamide (Sigma) à 1,0 g. The second medium, called Medium II, corresponds to the medium according to the invention and contains all the elements described above for Medium I, plus the specific inhibitor of hexosaminidase of C. tropicalis, ie an acetamide compound ( Sigma) at 1.0 g.

Sur ces deux milieux, 12 souches de levures ont été directement cultivées en boîte de Pétri. Les souches provenant de la collection de la demanderesse, appartiennent aux espèces suivantes : C. albicans (3 souches), C. glabra ta (2 souches), C.krusei (1 souche), C.parapsilosis (1 souche), C. tropicalis (3 souches), Saccharomyces cerevisiae (1 souche),
Trichosporon spp. (1 souche). Les boîtes ont été incubées à 370C pendant 48 heures. Les colonies formées ont été examinées visuellement, respectivement après 24 et 48 heures d'incubation selon les interprétations suivantes
- les colonies bleues correspondent à des souches produisant la N-acétyl-ss-D-glucosaminidase appartenant a priori à l'espèce C. albicans
- les colonies blanches correspondent aux souches ne produisant pas l'enzyme précitée ou dont cette enzyme est inhibée par le composé de type amide, elles appartiennent donc à d'autres espèces de levures qui seront alors à identifier à l'aide des techniques habituelles.On these two media, 12 yeast strains were directly cultivated in Petri dishes. The strains from the applicant's collection belong to the following species: C. albicans (3 strains), C. glabra ta (2 strains), C. krusei (1 strain), C.parapsilosis (1 strain), C. tropicalis (3 strains), Saccharomyces cerevisiae (1 strain),
Trichosporon spp. (1 strain). The dishes were incubated at 370C for 48 hours. The colonies formed were examined visually, respectively after 24 and 48 hours of incubation according to the following interpretations
the blue colonies correspond to strains producing N-acetyl-s-D-glucosaminidase, a priori belonging to the species C. albicans
the white colonies correspond to the strains which do not produce the abovementioned enzyme or of which this enzyme is inhibited by the amide compound, and therefore belong to other yeast species which will then have to be identified using the usual techniques.

Les résultats sont présentés dans le tableau I ci-après
TABLEAU I

Figure img00080001
The results are shown in Table I below
TABLE I
Figure img00080001

<tb> <SEP> Coloration
<tb> <SEP> à <SEP> 24 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 48 <SEP> heures
<tb> Espèces <SEP> Milieu <SEP> Forte <SEP> Faible <SEP> Nulle <SEP> Forte <SEP> Faible <SEP> Nulle
<tb> C. <SEP> albicans <SEP> I <SEP> 1 <SEP> * <SEP> 2 <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP>
<tb> <SEP> Il <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> C. <SEP> labrata <SEP> I <SEP> - <SEP> - <SEP> <SEP> 2 <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP>
<tb> <SEP> II <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> 2 <SEP>
<tb> C. <SEP> krusei <SEP> lll <SEP> <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb> <SEP> Il <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP> 1
<tb> C. <SEP> parapsilosis <SEP> I <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb> <SEP> Il <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb> C. <SEP> tropicalis <SEP> I <SEP> - <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> <SEP> Il <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> 1 <SEP> 2
<tb> S. <SEP> cerevisiae <SEP> I <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb> <SEP> il <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 1
<tb> Trichos <SEP> oron <SEP> I <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> <SEP> Il <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> - <SEP> * : nombre de souches, "-" = 0
Comme cela ressort du tableau I ci-dessus, I'apport du composé de type amide permet une détection spécifique des souches de
C. albicans. En effet, seules les souches de C. albicans, ainsi qu'une souche de Trichosporon après 48 heures d'incubation uniquement, produisent des colonies colorées sur le milieu selon l'invention. Les colonies de C. tropicales qui sont sur le Milieu I donnent des colonies incolores sur le Milieu II, sauf une très faiblement colorée après 48 heures d'incubation.<tb><SEP> Coloring
<tb><SEP> to <SEP> 24 <SEP> hours <SEP> to <SEP> 48 <SEP> hours
<tb> Species <SEP> Medium <SEP> Strong <SEP> Low <SEP> None <SEP> Strong <SEP> Low <SEP> None
<tb> C. <SEP> albicans <SEP> I <SEP> 1 <SEP> * <SEP> 2 <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP>
<tb><SEP> It <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> C. <SEP> labrata <SEP> I <SEP> - <SEP> - <SEP><SEP> 2 <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP>
<tb><SEP> II <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> 2 <SEP>
<tb> C <SEP> krusei <SEP> l <SEP><SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb><SEP> It <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP> 1
<tb> C. <SEP> parapsilosis <SEP> I <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb><SEP> It <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb> C. <SEP> tropicalis <SEP> I <SEP> - <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP><SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb><SEP> It <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> 1 <SEP> 2
<tb> S. <SEP> cerevisiae <SEP> I <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb><SEP> it <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 1
<tb> Trichos <SEP> oron <SEP> I <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb><SEP> It <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> - <SEP> *: number of strains, "-" = 0
As is apparent from Table I above, the addition of the amide compound allows specific detection of
C. albicans. Indeed, only strains of C. albicans, as well as a strain of Trichosporon after 48 hours of incubation only, produce colored colonies on the medium according to the invention. The colonies of C. tropical that are on Medium I give colorless colonies on Medium II, except a very weakly stained after 48 hours of incubation.

Exemple 2:
L'expérience de l'exemple 1 a été reproduite mais en utilisant des milieux liquides au lieu de milieux gélifiés. Les milieux III et IV correspondent donc aux milieux I et II de l'exemple 1 mais sont dépourvus d'agar. Par ailleurs, la concentration du 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N acétyl-ss-D-glucosaminide est de 150 mg/l de milieu final pour une utilisation en milieu liquide. Les milieux ont été répartis en ampoules en verre, à raison de 3 ml par ampoule. Les souches étudiées sont les mêmes que dans l'exemple 1. Une suspension étalonnée à 2 MacFarland à l'aide d'un néphélomètre a été effectuée pour chacune des souches directement dans les ampoules contenant les milieux. Les ampoules ainsi inoculées ont été incubées 48 heures à 370C. Elles ont été examinées après respectivement 24 et 48 heures selon les interprétations de l'exemple 1.Example 2
The experiment of Example 1 was repeated but using liquid media instead of gelled media. The media III and IV therefore correspond to the media I and II of Example 1 but are devoid of agar. Moreover, the concentration of 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N acetyl-s-D-glucosaminide is 150 mg / l of final medium for use in a liquid medium. The media were divided into glass ampoules at the rate of 3 ml per ampoule. The strains studied are the same as in Example 1. A suspension calibrated at 2 MacFarland using a nephelometer was carried out for each of the strains directly in the ampoules containing the media. The ampoules thus inoculated were incubated for 48 hours at 370 ° C. They were examined after 24 and 48 hours respectively according to the interpretations of Example 1.

Les résultats sont présentés dans le tableau II ci-après
TABLEAU II

Figure img00090001
The results are shown in Table II below
TABLE II
Figure img00090001

<tb> <SEP> Coloration
<tb> <SEP> à <SEP> 24 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 48 <SEP> heures
<tb> Espèces <SEP> Milieu <SEP> Forte <SEP> Faible <SEP> Nulle <SEP> Forte <SEP> Faible <SEP> Nulle
<tb> C. <SEP> albicans <SEP> III <SEP> 1 <SEP> * <SEP> 2 <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> <SEP> f <SEP>
<tb> <SEP> IV <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> C. <SEP> glabrata <SEP> III <SEP> l <SEP> l <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP>
<tb> <SEP> IV <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> - <SEP> 2
<tb> C. <SEP> krusei <SEP> III <SEP> l <SEP> l <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> 1
<tb> <SEP> IV <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb> C. <SEP> parapsilosis <SEP> III <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb> <SEP> IV <SEP> - <SEP> - <SEP> <SEP> 1 <SEP> - <SEP> <SEP> 1
<tb> C. <SEP> tropicalis <SEP> III <SEP> l <SEP> <SEP> 2 <SEP> 1 <SEP> 3
<tb> <SEP> IV <SEP> - <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> 2 <SEP> 1
<tb> S. <SEP> cerevisiae <SEP> III <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb> <SEP> IV <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb> Trichosporon <SEP> III <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb> <SEP> IV <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 1 <SEP> *: nombre de souches, "-" = 0
Comme cela ressort du tableau II ci-dessus, I'apport du composé amidé permet une détection spécifique des souches de C. albicans. En effet après 24 heures d'incubation, seules les souches de C. albicans donnent des tubes colorés en bleu dans le milieu selon l'invention. Les souches de C. tropicalis qui donnent des tubes colorés dans le Milieu III donnent des tubes incolores dans le Milieu IV. Après 48 heures d'incubation la coloration des tubes comportant des souches de
C. tropicalis est également inhibée ou au moins très fortement réduite. <tb><SEP> Coloring
<tb><SEP> to <SEP> 24 <SEP> hours <SEP> to <SEP> 48 <SEP> hours
<tb> Species <SEP> Medium <SEP> Strong <SEP> Low <SEP> None <SEP> Strong <SEP> Low <SEP> None
<tb> C. <SEP> albicans <SEP> III <SEP> 1 <SEP> * <SEP> 2 <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP><SEP> f <SEP>
<tb><SEP> IV <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> C. <SEP> glabrata <SEP> III <SEP> l <SEP> l <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP>
<tb><SEP> IV <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> - <SEP> 2
<tb> C. <SEP> krusei <SEP> III <SEP> l <SEP> l <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> 1
<tb><SEP> IV <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP><SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb> C. <SEP> parapsilosis <SEP> III <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb><SEP> IV <SEP> - <SEP> - <SEP><SEP> 1 <SEP> - <SEP><SEP> 1
<tb> C. <SEP> tropicalis <SEP> III <SEP> 1 <SEP><SEP> 2 <SEP> 1 <SEP> 3
<tb><SEP> IV <SEP> - <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> 2 <SEP> 1
<tb> S. <SEP> cerevisiae <SEP> III <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb><SEP> IV <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 1 <SEP>
<tb> Trichosporon <SEP> III <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb><SEP> IV <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 1 <SEP> *: number of strains, "-" = 0
As shown in Table II above, the addition of the amide compound allows specific detection of C. albicans strains. Indeed after 24 hours of incubation, only strains of C. albicans give blue colored tubes in the medium according to the invention. Strains of C. tropicalis that give colored tubes in Medium III give colorless tubes in Medium IV. After 48 hours of incubation, the staining of the tubes containing strains of
C. tropicalis is also inhibited or at least greatly reduced.

Exemole 3
Des essais ont été réalisés pour tester l'effet de l'acétamide sur l'activité hexosaminidase des levures en présence d'un activateur spécifique de cette enzyme.Exemole 3
Attempts have been made to test the effect of acetamide on the yeast hexosaminidase activity in the presence of a specific activator of this enzyme.

L'expérience de l'exemple 1 a été reproduite mais en ajoutant au milieu de la N-Acétyl-glucosamine. Les milieux V et VI correspondent donc aux milieux I et II de l'exemple 1 auxquels on a ajouté de la N-Acétylglucosamine à 1,0 g/l de milieu final. Les souches étudiées sont les mêmes que dans l'exemple 1. Elles ont été directement cultivées en boîte de Pétri. The experiment of Example 1 was repeated but adding in the middle of N-acetyl-glucosamine. The media V and VI therefore correspond to the media I and II of Example 1 to which N-acetylglucosamine was added to 1.0 g / l of final medium. The strains studied are the same as in Example 1. They were directly grown in Petri dishes.

Les boîtes ont été incubées à 370C pendant 48 heures. Les colonies formées ont été examinées visuellement, respectivement après 24 et 48 heures d'incubation selon les interprétations de l'exemple 1.The dishes were incubated at 370C for 48 hours. The colonies formed were examined visually, respectively after 24 and 48 hours of incubation according to the interpretations of Example 1.

Les résultats sont présentés dans le tableau III ci-après
TABLEAU III

Figure img00100001
The results are shown in Table III below.
TABLE III
Figure img00100001

<tb> <SEP> Coloration
<tb> <SEP> à <SEP> 24 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 48 <SEP> heures
<tb> Espèces <SEP> Milieu <SEP> Forte <SEP> Faible <SEP> Nulle <SEP> Forte <SEP> Faible <SEP> Nulle
<tb> C. <SEP> albicans <SEP> V <SEP> 2* <SEP> 1 <SEP> - <SEP> <SEP> 3 <SEP> <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> <SEP> VI <SEP> 2 <SEP> i <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP>
<tb> C. <SEP> glabrata <SEP> V <SEP> <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> 2 <SEP>
<tb> <SEP> VI <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> - <SEP> 2
<tb> C. <SEP> krusei <SEP> V <SEP> <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP>
<tb> <SEP> VI <SEP> 1 <SEP> <SEP> 1 <SEP>
<tb> C. <SEP> parapsilosis <SEP> V <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> <SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb> <SEP> VI <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> i <SEP> - <SEP> i
<tb> C. <SEP> tropicalis <SEP> V <SEP> - <SEP> - <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> - <SEP>
<tb> <SEP> VI <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> - <SEP> 3
<tb> S. <SEP> cerevisiae <SEP> V <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> <SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb> <SEP> VI <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> <SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb> Trichosporon <SEP> V <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> i <SEP> i <SEP>
<tb> <SEP> VI <SEP> - <SEP> 1 <SEP> <SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> * : nombre de souches, "-" = 0
Comme cela ressort du tableau III ci-dessus, I'apport du composé de type amide permet une détection spécifique des souches de
C. albicans. En effet, seules les souches de C. albicans, ainsi qu'une souche de Trichosporon après 48 heures d'incubation uniquement, produisent des colonies colorées sur le milieu selon l'invention. Les souches de C. tropicalis qui sont sur le Milieu V donnent des colonies incolores sur le Milieu VI. L'ensemble de ces deux milieux permet donc également une identification spécifique des levures de l'espèce
C. tropicalis puisqu'après 48 heures d'incubation, elles sont les seules à être positives sur le milieu V et négatives sur le milieu VI.<tb><SEP> Coloring
<tb><SEP> to <SEP> 24 <SEP> hours <SEP> to <SEP> 48 <SEP> hours
<tb> Species <SEP> Medium <SEP> Strong <SEP> Low <SEP> None <SEP> Strong <SEP> Low <SEP> None
<tb> C. <SEP> albicans <SEP> V <SEP> 2 * <SEP> 1 <SEP> - <SEP><SEP> 3 <SEP><SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb><SEP> VI <SEP> 2 <SEP> i <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP>
<tb> C. <SEP> glabrata <SEP> V <SEP><SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> 2 <SEP>
<tb><SEP> VI <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> - <SEP> 2
<tb> C <SEP> krusei <SEP> V <SEP><SEP> 1 <SEP> 1 <SEP>
<tb><SEP> VI <SEP> 1 <SEP><SEP> 1 <SEP>
<tb> C. <SEP> parapsilosis <SEP> V <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP><SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb><SEP> VI <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> i <SEP> - <SEP> i
<tb> C. <SEP> tropicalis <SEP> V <SEP> - <SEP> - <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> - <SEP>
<tb><SEP> VI <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> - <SEP> 3
<tb> S. <SEP> cerevisiae <SEP> V <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP><SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb><SEP> VI <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP><SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb> Trichosporon <SEP> V <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> i <SEP> i <SEP>
<tb><SEP> VI <SEP> - <SEP> 1 <SEP><SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> *: number of strains, "-" = 0
As is apparent from Table III above, the addition of the amide compound allows a specific detection of the strains of
C. albicans. Indeed, only strains of C. albicans, as well as a strain of Trichosporon after 48 hours of incubation only, produce colored colonies on the medium according to the invention. Strains of C. tropicalis that are on Medium V give colorless colonies on Medium VI. All of these two media therefore also allows a specific identification of the yeasts of the species
C. tropicalis since after 48 hours of incubation, they are the only ones to be positive on medium V and negative on medium VI.

Exemple 4
Des essais ont été réalisés pour tester l'effet d'un mélange de composés amidés sur l'activité hexosaminidase des levures en présence d'un activateur spécifique de cette enzyme.Example 4
Attempts were made to test the effect of a mixture of amidated compounds on the yeast hexosaminidase activity in the presence of an activator specific for this enzyme.

L'expérience de l'exemple 3 a été reproduite mais en ajoutant au milieu VI de la formamide à 0,5 g/l de milieu final (milieu VIII), le milieu VII étant identique au milieu V de l'exemple 3. Les souches étudiées sont les mêmes que dans l'exemple 3. Elles ont été directement cultivées en boîte de Pétri. Les boîtes ont été incubées à 370C pendant 48 heures. Les colonies formées ont été examinées visuellement, respectivement après 24 et 48 heures d'incubation selon les interprétations de l'exemple 1. The experiment of Example 3 was repeated but adding to the medium VI of the formamide to 0.5 g / l of final medium (medium VIII), the medium VII being identical to the medium V of Example 3. strains studied are the same as in Example 3. They were directly grown in Petri dishes. The dishes were incubated at 370C for 48 hours. The colonies formed were examined visually, respectively after 24 and 48 hours of incubation according to the interpretations of Example 1.

Les résultats sont présentés dans le tableau IV ci-après
TABLEAU IV

Figure img00120001
The results are shown in Table IV below.
TABLE IV
Figure img00120001

<tb> <SEP> Coloration
<tb> <SEP> à <SEP> 24 <SEP> heures <SEP> à <SEP> 48 <SEP> heures
<tb> Espèces <SEP> Milieu <SEP> Forte <SEP> Faible <SEP> Nulle <SEP> Forte <SEP> Faible <SEP> Nulle
<tb> C. <SEP> albicans <SEP> VII <SEP> 2 <SEP> * <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb> <SEP> VIII <SEP> 2 <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> - <SEP>
<tb> C. <SEP> glabrata <SEP> VII <SEP> l <SEP> <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> - <SEP> 2
<tb> <SEP> VIII <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP>
<tb> C. <SEP> krusei <SEP> VII <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> i
<tb> <SEP> VIII <SEP> - <SEP> - <SEP> <SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb> C. <SEP> parapsilosis <SEP> VII <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> <SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb> <SEP> VIII <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb> C. <SEP> tropicalis <SEP> VII <SEP> - <SEP> - <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> - <SEP>
<tb> <SEP> VIII <SEP> - <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> 3
<tb> S. <SEP> cerevisiae <SEP> VII <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> <SEP> 1 <SEP>
<tb> <SEP> VIII <SEP> 1 <SEP> <SEP> 1 <SEP>
<tb> Trichos <SEP> oron <SEP> VII <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> <SEP> 1 <SEP>
<tb> <SEP> VIII <SEP> - <SEP> 1- <SEP> 1 <SEP> - <SEP>
<tb> *: nombre de souches, "-" = 0
Comme cela ressort du tableau IV ci-dessus, I'apport d'un second composé de type amide permet une détection encore plus spécifique des souches de C. albicans. En effet, seules les souches de
C. albicans produisent des colonies significativement colorées sur le milieu selon l'invention. Les souches de C. tropicalis qui sont sur le Milieu VII donnent des colonies incolores sur le Milieu VIII et la souche de
Trichosporon fortement colorée après 48 heures d'incubation sur le milieu
VII ne l'est plus que très faiblement sur le milieu VIII. <tb><SEP> Coloring
<tb><SEP> to <SEP> 24 <SEP> hours <SEP> to <SEP> 48 <SEP> hours
<tb> Species <SEP> Medium <SEP> Strong <SEP> Low <SEP> None <SEP> Strong <SEP> Low <SEP> None
<tb> C. <SEP> albicans <SEP> VII <SEP> 2 <SEP> * <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> - <SEP>
<tb><SEP> VIII <SEP> 2 <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> - <SEP>
<tb> C. <SEP> glabrata <SEP> VII <SEP> l <SEP><SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> - <SEP> 2
<tb><SEP> VIII <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP> - <SEP> - <SEP> 2 <SEP>
<tb> C. <SEP> krusei <SEP> VII <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP> - <SEP> i
<tb><SEP> VIII <SEP> - <SEP> - <SEP><SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb> C. <SEP> parapsilosis <SEP> VII <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP><SEP> i <SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb><SEP> VIII <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP><SEP> - <SEP> - <SEP> i <SEP>
<tb> C. <SEP> tropicalis <SEP> VII <SEP> - <SEP> - <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> - <SEP>
<tb><SEP> VIII <SEP> - <SEP> - <SEP> 3 <SEP> - <SEP> 3
<tb> S. <SEP> cerevisiae <SEP> VII <SEP> - <SEP> - <SEP> 1 <SEP> - <SEP><SEP> 1 <SEP>
<tb><SEP> VIII <SEP> 1 <SEP><SEP> 1 <SEP>
<tb> Trichos <SEP> oron <SEP> VII <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP><SEP> 1 <SEP>
<tb><SEP> VIII <SEP> - <SEP> 1- <SEP> 1 <SEP> - <SEP>
<tb> *: number of strains, "-" = 0
As is apparent from Table IV above, the addition of a second amide compound allows even more specific detection of C. albicans strains. Indeed, only the strains of
C. albicans produce significantly colored colonies on the medium according to the invention. Strains of C. tropicalis that are on Medium VII give colorless colonies on Medium VIII and the strain of
Trichosporon strongly stained after 48 hours of incubation on the medium
VII is only weakly on middle VIII.

Claims (9)

REVENDICATIONS 1/ Milieu de culture et d'identification spécifique de levures comprenant un substrat chromogène ou fluorigène, susceptible d'être hydrolysé par une enzyme du groupe des hexosaminidases, caractérisé en ce que le milieu comprend en outre au moins un composé sélectivement inhibiteur de l'activité hexosaminidase de C. tropicalis.  1 / Yeast-specific culture and identification medium comprising a chromogenic or fluorogenic substrate, capable of being hydrolysed by an enzyme from the group of hexosaminidases, characterized in that the medium further comprises at least one selectively inhibiting compound of the hexosaminidase activity of C. tropicalis. 2/ Milieu selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé sélectivement inhibiteur est une amide de formule (I): 2 / Medium according to claim 1, characterized in that the selectively inhibiting compound is an amide of formula (I): (I) R-(CO-NR'R")n  (I) R- (CO-NR'R ") n dans laquelle R, R' et R" sont, indépendamment les uns des autres: in which R, R 'and R "are, independently of one another: - un atome d'hydrogène, a hydrogen atom, - une chaîne hydrocarbonée, saturée ou insaturée, aliphatique ou cyclique, comportant éventuellement au moins un hétéroatome, a hydrocarbon chain, saturated or unsaturated, aliphatic or cyclic, optionally comprising at least one heteroatom, ou bien chacun des R et/ou R' et/ou R" forment ensemble une chaîne hydrocarbonée cyclique, saturée ou insaturée, comportant éventuellement au moins un hétéroatome, or each of R and / or R 'and / or R "together form a cyclic hydrocarbon chain, saturated or unsaturated, optionally comprising at least one heteroatom, et n est nombre entier supérieur ou égal à 1. and n is an integer greater than or equal to 1. 3/ Milieu selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé sélectivement inhibiteur est une amide de formule (I): 3 / A medium according to claim 1, characterized in that the selectively inhibiting compound is an amide of formula (I): (I) R- < CO-NR'R")n  (I) R- <CO-NR'R ") n dans laquelle R, R' et R" sont, indépendamment les uns des autres: in which R, R 'and R "are, independently of one another: - un atome d'hydrogène, a hydrogen atom, - une chaîne hydrocarbonée, saturée ou insaturée, aliphatique ou cyclique, éventuellement interrompue par au moins un hétéroatome, a hydrocarbon chain, saturated or unsaturated, aliphatic or cyclic, optionally interrupted by at least one heteroatom, ou bien chacun des R et/ou R' et/ou R" forment ensemble une chaîne hydrocarbonée cyclique, saturée ou insaturée, comportant éventuellement au moins un hétéroatome, or each of R and / or R 'and / or R "together form a cyclic hydrocarbon chain, saturated or unsaturated, optionally comprising at least one heteroatom, et n est nombre entier supérieur ou égal à 1. and n is an integer greater than or equal to 1. 4/ Milieu selon les revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le composé sélectivement inhibiteur est une amide de formule (I): (I) R-(CO-NR'R"),  4 / Medium according to claims 1 to 3, characterized in that the selectively inhibiting compound is an amide of formula (I): (I) R- (CO-NR'R "), dans laquelle R, R' et R" sont, indépendamment les uns des autres: in which R, R 'and R "are, independently of one another: - un atome d'hydrogène, a hydrogen atom, - une chaîne hydrocarbonée aliphatique, an aliphatic hydrocarbon chain, et n est égal à 1 ou 2. and n is 1 or 2. 5/ Milieu selon les revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le composé sélectivement inhibiteur est une acétamide. 5 / A medium according to claims 1 to 4, characterized in that the selectively inhibiting compound is an acetamide. 6/ Milieu selon les revendications 1 à 5 caractérisé en ce qu'il comprend un activateur spécifique de l'enzyme hexosaminidase de C. albicans.  6 / medium according to claims 1 to 5 characterized in that it comprises a specific activator of the enzyme hexosaminidase C. albicans. 7/ Milieu selon la revendication 6 caractérisé en ce que l'activateur spécifique de l'enzyme hexosaminidase est la N-acétylglucosamine. 7 / medium according to claim 6 characterized in that the specific activator of the enzyme hexosaminidase is N-acetylglucosamine. 81 Milieu selon les revendications précédentes caractérisé en ce qu'il comprend un mélange de composés sélectivement inhibiteurs. Medium according to the preceding claims, characterized in that it comprises a mixture of selectively inhibiting compounds. 9/ Milieu selon la revendication 8 caractérisé en ce que le mélange de composés sélectivement inhibiteurs est constitué d'acétamide et de formamide. 9 / A medium according to claim 8 characterized in that the mixture of selectively inhibiting compounds consists of acetamide and formamide. 10/ Milieu selon la revendications 1 caractérisé en ce que le milieu est liquide ou gélifié. 10 / medium according to claim 1 characterized in that the medium is liquid or gelled. 11/ Milieu selon les revendications 1 et 10 caractérisé en ce que le milieu est gélifié et comprend pour 1 litre 11 / medium according to claims 1 and 10 characterized in that the medium is gelled and comprises for 1 liter - peptones ou mélange de peptones 0,01-40 g - peptones or mixture of peptones 0.01-40 g - extrait de levure 0,01-40 g - yeast extract 0.01-40 g - glucose (source de carbone) 0-10 g - glucose (carbon source) 0-10 g - tampon phosphate (pH entre 5 et 8,5),2,5-100 mM phosphate buffer (pH between 5 and 8.5), 2.5-100 mM - 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N-acétyl 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-N-acetyl ss-D-glucosaminide (Biosynth) 20-600.10-6M  ss-D-glucosaminide (Biosynth) 20-600.10-6M - acétamide (Sigma) 0,01-2Og  - acetamide (Sigma) 0.01-2Og - inhibiteur de bactéries 0-20g - 0-20g bacteria inhibitor - agar 11-20 g - agar 11-20 g 12/ Milieu selon les revendications 10 et 11 comprenant de plus de la N-acétyl-glucosamine à 1,0 g/l.  12. The medium of claims 10 and 11 further comprising N-acetylglucosamine at 1.0 g / l. 131 Milieu selon les revendications 10 et 12 comprenant de plus de la formamide à 0,5 g/l. The medium of claims 10 and 12 further comprising formamide at 0.5 g / l. 14/ Procédé d'analyse microbiologique pour identifier sélectivement la levure C. albicans et/ou C. tropicalis et/ou différencier les levures C. albicans et C. tropicalis, caractérisé en ce que l'on met directement l'échantillon à analyser au contact d'au moins un milieu d'identification selon l'une quelconque des revendications 1 à 13.  14 / Microbiological analysis method for selectively identifying yeast C. albicans and / or C. tropicalis and / or differentiating yeasts C. albicans and C. tropicalis, characterized in that the sample to be analyzed is directly contact of at least one identification medium according to any one of claims 1 to 13.
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