FR2748491A1 - Meristem tissue culture medium - Google Patents

Meristem tissue culture medium Download PDF

Info

Publication number
FR2748491A1
FR2748491A1 FR9606024A FR9606024A FR2748491A1 FR 2748491 A1 FR2748491 A1 FR 2748491A1 FR 9606024 A FR9606024 A FR 9606024A FR 9606024 A FR9606024 A FR 9606024A FR 2748491 A1 FR2748491 A1 FR 2748491A1
Authority
FR
France
Prior art keywords
sep
active ingredient
medium according
medium
fungicidal
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
FR9606024A
Other languages
French (fr)
Other versions
FR2748491B1 (en
Inventor
Jean Marc Dupuis
Jean Louis Arnault
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer CropScience SA
Original Assignee
Rhone Poulenc Agrochimie SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rhone Poulenc Agrochimie SA filed Critical Rhone Poulenc Agrochimie SA
Priority to FR9606024A priority Critical patent/FR2748491B1/en
Publication of FR2748491A1 publication Critical patent/FR2748491A1/en
Application granted granted Critical
Publication of FR2748491B1 publication Critical patent/FR2748491B1/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • A01N43/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/002—Culture media for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids
    • A01N37/38—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids having at least one oxygen or sulfur atom attached to an aromatic ring system
    • A01N37/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids having at least one oxygen or sulfur atom attached to an aromatic ring system having at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and one oxygen or sulfur atom attached to the same aromatic ring system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • A01N43/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom six-membered rings
    • A01N43/42—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom six-membered rings condensed with carbocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/72—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with nitrogen atoms and oxygen or sulfur atoms as ring hetero atoms
    • A01N43/80—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with nitrogen atoms and oxygen or sulfur atoms as ring hetero atoms five-membered rings with one nitrogen atom and either one oxygen atom or one sulfur atom in positions 1,2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
    • A01N47/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having one or more single bonds to nitrogen atoms
    • A01N47/10—Carbamic acid derivatives, i.e. containing the group —O—CO—N<; Thio analogues thereof
    • A01N47/12—Carbamic acid derivatives, i.e. containing the group —O—CO—N<; Thio analogues thereof containing a —O—CO—N< group, or a thio analogue thereof, neither directly attached to a ring nor the nitrogen atom being a member of a heterocyclic ring
    • A01N47/14—Di-thio analogues thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
    • A01N47/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having one or more single bonds to nitrogen atoms
    • A01N47/10—Carbamic acid derivatives, i.e. containing the group —O—CO—N<; Thio analogues thereof
    • A01N47/26—Oxidation products of dithiocarbamic acid derivatives, e.g. thiuram sulfides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N47/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid
    • A01N47/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom not being member of a ring and having no bond to a carbon or hydrogen atom, e.g. derivatives of carbonic acid the carbon atom having one or more single bonds to nitrogen atoms
    • A01N47/28—Ureas or thioureas containing the groups >N—CO—N< or >N—CS—N<
    • A01N47/38—Ureas or thioureas containing the groups >N—CO—N< or >N—CS—N< containing the group >N—CO—N< where at least one nitrogen atom is part of a heterocyclic ring; Thio analogues thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N59/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing elements or inorganic compounds
    • A01N59/16—Heavy metals; Compounds thereof
    • A01N59/20—Copper
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N61/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing substances of unknown or undetermined composition, e.g. substances characterised only by the mode of action

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Meristem tissue culture medium for culturing unsterilised tissue comprises a sugar-based medium and a non-phytotoxic amount of an antimicrobial agent selected from plant-protecting fungicides and bactericides with residual activity.

Description

Milieu de culture pour tissus méristématiques et procédé de culture de ces tissus en condition non stériles
La présente invention concerne un milieu de culture pour tissus méristématiques, un procédé de culture de ces tissus en condition non stériles et les plantes obtenues à l'aide de ce procédé.Culture medium for meristematic tissues and method of culturing these tissues in non-sterile condition
The present invention relates to a culture medium for meristematic tissues, a method for culturing these tissues in non-sterile conditions and the plants obtained using this method.

Il est bien connu que la culture d'embryons somatiques de plantes et de jeunes plantes qui en sont issues nécessite l'utilisation d'un milieu de culture sucré. Cependant la présence de sucre attire les microorganimes tels que champignons, bactéries, algues, protozoaires et virus. Or une protection maximale est nécessaire pour assurer la culture, la croissance et l'obtention de plantules puis de plantes saines. Cet inconvénient est évité en effectuant la culture en conditions stériles, ce qui alourdit et complique l'expérimentation. Une autre voie serait d'ajouter des antibiotiques. Cette solution a été tentée par exemple pour la culture d'embryons de carotte cf Synseeds 1993 Ch; 15 F.Molle et coll.) mais s'est révélée inutilisable en raison d'une phytotoxicité inacceptable provoquant le blocage de la croissance des embryons. On a utilisé des fongicides à large spectre tels que le carbendazime ou le benomyl mais ils ne se sont révélés non phytotoxiques qu'à faibles doses, pour lesquelles leur action était tout à fait insuffisantes. Il en est de même avec certaines combinaisons de fongicides et d' antibiotiques de la littérature. It is well known that the culture of somatic embryos of plants and young plants derived therefrom requires the use of a sweet culture medium. However the presence of sugar attracts microorganisms such as fungi, bacteria, algae, protozoa and viruses. However, maximum protection is necessary to ensure the cultivation, growth and obtaining of seedlings and healthy plants. This disadvantage is avoided by performing the culture in sterile conditions, which increases and complicates the experiment. Another way would be to add antibiotics. This solution has been attempted, for example, for culturing carrot embryos cf Synseeds 1993 Ch; F.Molle et al.) But was found to be unusable due to unacceptable phytotoxicity causing the blockage of embryo growth. Broad-spectrum fungicides such as carbendazim or benomyl have been used, but they have been shown to be non-phytotoxic at low doses, for which their action was quite inadequate. It is the same with certain combinations of fungicides and antibiotics of the literature.

11 est donc connu que le problème d'une protection efficace des milieux de culture pour embryons somatiques dans des conditions non stériles reste entier et qu'il y a un besoin pour résoudre cette difficulté. Cette difficulté résulte d'une plus grande sensibilité, en conditions non stériles, des embryons par rapport aux graines, des embryons aux produits phytosanitaires et au fait qu'il faut également protégér ces embryons contre l'action de micro-organismes autres que les pathogènes. It is therefore known that the problem of effective protection of somatic embryo culture media under non-sterile conditions remains unresolved and that there is a need to resolve this difficulty. This difficulty results from the greater sensitivity, in non-sterile conditions, of embryos compared to seeds, from embryos to plant protection products and the fact that these embryos must also be protected against the action of microorganisms other than pathogens. .

La demanderesse a maintenant découvert un nouveau milieu de culture permettant de résoudre ce problème avec obtention d'une protection efficace par l'utilisation de matières actives protectrices particulières. Par protection efficace on entend une protection d'au moins 10% de la surface du milieu. The applicant has now discovered a new culture medium to solve this problem with obtaining effective protection by the use of specific protective active ingredients. Effective protection means protection of at least 10% of the surface of the medium.

Plus particulièrement l'invention concerne milieu de culture pour tissus méristématiques, en condition non stériles, comprenant un milieu sucré, caractérisé en ce qu'il contient en outre une quantité efficace et non phytotoxique d'au moins une matière active protectrice contre les micro-organismes choisie dans le groupe comprenant une matière active fongicide p' phytosanitaire et une matière active bactéricide rémanente.  More particularly, the invention relates to a culture medium for meristematic tissues, in non-sterile conditions, comprising a sweet medium, characterized in that it additionally contains an effective and non-phytotoxic amount of at least one protective active ingredient against microorganisms. organisms selected from the group consisting of a phytosanitary fungicidal active ingredient and a residual bactericidal active ingredient.

Au sens de la présente description, on entend par "tissu méristématique" tout tissu végétal, ou ensemble de cellules végétales, capable, lorsqu'il est mis dans des conditions convenables, de se développer jusqu'à former une plante entière ou partie de plante entière.  For the purposes of the present description, the term "meristematic tissue" any plant tissue, or set of plant cells, capable, when put under suitable conditions, to develop to form an entire plant or plant part whole.

Sous l'expression "tissu" on inclut toute sorte de tissus végétaux, notamment: le tissu somatique, les masses pro-embryogènes (connu en anglais sous le nom de proembryogenic masses, l'embryon somatique, le tissu zymotique, la graine, le germe, le bourgeon adventice, les pousses, le primordium de tige (connu en anglais sous le nom de shoot primordium), les analogues de protocorn (connus en anglais sous le nom de protocorn like body), le tissu connu en anglais sous le nom de green spot, les cellules germinales et semences naturelles (connues en anglais sous le nom de germ line), les jeunes plants.Under the term "tissue" are included all kinds of plant tissues, including: somatic tissue, pro-embryogenic masses (known in English as proembryogenic masses, somatic embryo, zymotic tissue, seed, germ, weed bud, shoots, stem primordium (known as shoot primordium), protocorn analogues (known in English as protocorn like body), tissue known in English as of green spot, germ cells and natural seeds (known in English as germ line), young plants.

Les végétaux concernés par l'invention sont de nature les plus diverses et incluent les cultures vivrières telles que le riz, le blé, I'orge, le maïs, le soja ; les cultures légumières telles que le céleri, le persil, la salade, le chou-fleur, la carotte, I'aubergine, la tomate,
I'oignon, l'ail, le gingembre, les fraises, les melons, I'asperge ; les cultures vivrières et/ou industrielles telles que le colza, la canne à sucre, la betterave à sucre, le tabac, le café; les cultures à but médical telles que la belladone, le ginseng; les cultures ornementales telles que les chrysanthèmes, les glaïeuls, les lys, les orchidées, les amaryllis, les géranium, les bégonia, les violettes du Cap, la poinsettia; des arbres ou espèces arborescentes ou arbustes telles que les résineux, les palmiers, les arbres fruitiers, la vigne, les arbres à feuilles caduques, et autres.The plants concerned by the invention are of the most diverse nature and include food crops such as rice, wheat, barley, corn, soybeans; vegetable crops such as celery, parsley, lettuce, cauliflower, carrots, eggplant, tomatoes,
Onion, garlic, ginger, strawberries, melons, asparagus; food and / or industrial crops such as canola, sugar cane, sugar beet, tobacco, coffee; cultures for medical purposes such as belladonna, ginseng; ornamental crops such as chrysanthemums, gladiolus, lilies, orchids, amaryllis, geraniums, begonia, Cape violets, poinsettia; trees or tree species or shrubs such as conifers, palms, fruit trees, vines, deciduous trees, and others.

Le tissu méristématique peut être sec, déshydraté ou sous forme hydratée jusqu'à 100% d'humidité. The meristematic fabric can be dry, dehydrated or hydrated form up to 100% moisture.

Au sens de la présente invention, on entend par "micro-organismes" ceux appartenant aux classes des champignons, bactéries, algues, virus et protozoaires. For the purposes of the present invention, the term "microorganisms" means those belonging to the classes of fungi, bacteria, algae, viruses and protozoa.

De meme, on entend par "milieu de culture" tout milieu, solide (par exemple milieu gélosé) ou liquide (solution nutritive), éventuellement adsorbés sur des substrats de culture tels que laine de roche, acétate de cellulose, fibres polyethylène, polyuréthannes, noix de coco, permettant la culture de tissus méristématiques, in vitro ou en serre, éventuellement avec relargage contrôlé des matières actives. Le milieu peut être statique, apporté une fois pour toutes ou renouvelé régulièrement sous forme, soit d'un flux continu, soit d'un flux discontinu (batch). Similarly, the term "culture medium" means any medium, solid (eg agar medium) or liquid (nutrient solution), optionally adsorbed on culture substrates such as rockwool, cellulose acetate, polyethylene fibers, polyurethanes, coconut, allowing the culture of meristematic tissues, in vitro or in greenhouse, possibly with controlled release of active ingredients. The medium can be static, provided once for all or regularly renewed in the form of either a continuous flow or a discontinuous flow (batch).

Le sucre est présent dans milieu selon l'invention à une concentration comprise en général entre 0,1 mu et 200 g/I et de préférence comprise entre 5 g/I et 200 g/I.  The sugar is present in a medium according to the invention at a concentration generally ranging from 0.1 to 200 g / l and preferably from 5 g / l to 200 g / l.

Par "matière active phytosanitaire", on entend essentiellement une matière active fongicide. Celle ci est de préférence choisie dans le groupe comprenant les dérivés du cuivre, les dérivés de l'oxyquinoléine, les dithiocarbamates, les dicarboximides, les phénylpyrroles, les triazoles. De manière particulièrement préférée, on utilise des fongicides choisis dans le groupe comprenant l'oxychlorure de cuivre, I'oxyquinoléine, l'oxyquinoléate de cuivre, le mancozèbe, le manèbe, le thirame, le fludioxonil, et l'iprodione.  By "phytosanitary active ingredient" is meant essentially a fungicidal active ingredient. This is preferably selected from the group consisting of copper derivatives, oxyquinoline derivatives, dithiocarbamates, dicarboximides, phenylpyrroles, triazoles. Particularly preferably, fungicides selected from the group consisting of copper oxychloride, oxyquinoline, copper oxyquinoleate, mancozeb, maneb, thiram, fludioxonil, and iprodione are used.

Dans la présente demande les noms de matières fongicides sont les noms communs (cf Pesticide Manual 1995). In the present application, the names of fungicidal substances are the common names (see Pesticide Manual 1995).

De manière particulièrement préférée, le milieu contient au moins deux fongicides. In a particularly preferred manner, the medium contains at least two fungicides.

Un autre aspect important de l'invention est que ces fongicides sont utilisés en quantité non phytotoxique pour le tissu méristématique, c'est à dire à des concentrations, qui peuvent être plus faibles que celles habituellement utilisées pour la protection des plantes entières. Plus précisément le milieu contient de 0,1 mu à 10go, et de préférence de 1 mg à I g/I de matière active fongicide. Another important aspect of the invention is that these fungicides are used in a non-phytotoxic amount for the meristematic tissue, that is to say at concentrations, which may be lower than those usually used for the protection of whole plants. More precisely, the medium contains from 0.1 to 10 g, and preferably from 1 mg to 1 g / l of fungicidal active ingredient.

Plus particulièrement et de préférence, la concentration est comprise entre:
- 0,1 et 10 mg/l pour les dérivés du cuivre,
- 0,1 et 10 mg/l pour les dérivés de l'oxyquinoléine,
- 0,1 et 10 mgA pour les dérivés dithiocarbamiques,
- 0,1 et 10 mg/l pour les dérivés phénylpyrroles,
- 0,1 et 1000 mgA pour les dérivés dicarboximides.More particularly and preferably, the concentration is between:
- 0.1 and 10 mg / l for copper derivatives,
0.1 and 10 mg / l for the oxyquinoline derivatives,
0.1 and 10 mgA for the dithiocarbamic derivatives,
0.1 and 10 mg / l for the phenylpyrrole derivatives,
- 0.1 and 1000 mgA for the dicarboximide derivatives.

Par "matière active bactéricide", on entend essentiellement une matière active bactéricide ou bactériostatique. Celle-ci peut appartenir à une famille quelconque, la préference étant donnée au dérivés de l'acide salicylique tel que par exemple l'acide salicylique, l'acide acétylsalicylique, les salicylates ou encore aux thiazolines, telle que par exemple la 1,2-benzisothiazoline-3-one, voire des antibiotiques. By "bactericidal active ingredient" is meant essentially a bactericidal or bacteriostatic active ingredient. This may belong to any family, the preference being given to salicylic acid derivatives such as for example salicylic acid, acetylsalicylic acid, salicylates or thiazolines, such as for example 1,2 benzisothiazolin-3-one, or even antibiotics.

Le milieu peut contenir plusieurs bactéricides. The medium may contain several bactericides.

La concentration en matière active bactéricide est de 0,1 à 100 mg/l, et de préférence de 0,1 à 100 et de préférence de 0,1 à 10 mg/l de matière active. The concentration of bactericidal active ingredient is from 0.1 to 100 mg / l, and preferably from 0.1 to 100 and preferably from 0.1 to 10 mg / l of active material.

Plus particulièrement et de préférence, la concentration est comprise entre:
- 0,1 et 10 mgA pour les dérivés de l'acide salicylique,
- 0,1 et 5 mg/l pour la 1,2-benzisothiazoline-3-one. More particularly and preferably, the concentration is between:
0.1 and 10 mgA for the salicylic acid derivatives,
0.1 and 5 mg / l for 1,2-benzisothiazolin-3-one.

Le milieu selon l'invention peut encore contenir d'autres matières actives ou adjuvants à condition que les quantités soient non phytotoxiques pour les tissus méristématiques. Pour la fabrication du milieu ci-dessus, il suffit de mélanger les ingrédients décrits avec la base du milieu. Si le milieu final est solide, le mélange se fait à chaud en phase liquide pour être ensuite versé dans des récipients de laboratoire tels que des boites de Petri ou Magenta. The medium according to the invention may also contain other active substances or adjuvants provided that the amounts are non-phytotoxic for the meristematic tissues. For the manufacture of the above medium, it is sufficient to mix the ingredients described with the base of the medium. If the final medium is solid, the mixture is hot in the liquid phase and then poured into laboratory containers such as Petri dishes or Magenta.

Les conditions de culture et les résultats seront mieux compris à l'aide des exemples suivants, sans que ceux-ci limitent la portée de l'invention. The culture conditions and the results will be better understood by means of the following examples, without these limiting the scope of the invention.

Exemple 1. Test de protection d'un milieu de culture
Différents milieux de culture sont fabriqués à partir de la solution nutritive de Heller (He 15) ,caractérisée par la présence de saccharose, qui est utilisée pour assurer la germination des embryons somatiques.. Cette solution est composée des macronutrients de
Heller (Ann. Sci. Nat. Bot. Biol. Veg. 14:1-223, 1953), des micronutrients de Murashige et Skoog (Physiol. Plant. 15: 473-497, 1962) et de 15 g/l de saccharose. Elle est gélifiée dans l'exemple par 6 g/l de gelrite, le pH étant maintenu à 5,6. Après fabrication et stérilisation par autoclavage d'environ 3,5 litres de solution nutritive gélosée de Heller (He 15), environ 250 ml des milieux de Heller suivants sont fabriqués.Example 1. Protection test of a culture medium
Different culture media are made from the nutrient solution of Heller (He 15), characterized by the presence of sucrose, which is used to ensure the germination of somatic embryos. This solution is composed of the macronutrients of
Heller (Ann Nat Sci Bot Biol Veg 14: 1-223, 1953), micronutrients from Murashige and Skoog (Physiol Plant 15: 473-497, 1962) and 15 g / l sucrose. . It is gelled in the example with 6 g / l of gelrite, the pH being maintained at 5.6. After making and sterilizing by autoclaving about 3.5 liters of Heller (He 15) nutrient solution, about 250 ml of the following Heller media are made.

1. Heller sans matière active
2. Heller + oxyquinoléine 1 mgn + thirame S mgA
3. Heller + mancozèbe 10 mg/l
4. Heller + oxyquinoléate de cuivre l mgA + mancozèbe 10 mg/l
5. Heller + oxyquinoléate de cuivre I mg/l + fludioxonil 10 mg/l
6. Heller + oxyquinoléate de cuivre 1 mg/l + iprodione 100 mgA
Les modalités de fabrication et de dilution des solutions mères de matières actives (m.a.)sont données dans le tableau 1 suivant:

Figure img00040001
1. Heller without active ingredient
2. Heller + oxyquinoline 1 mgn + thiram S mgA
3. Heller + mancozeb 10 mg / l
4. Heller + copper oxyquinoleate 1 mgA + mancozeb 10 mg / l
5. Heller + copper oxyquinoleate I mg / l + fludioxonil 10 mg / l
6. Heller + copper oxyquinoleate 1 mg / l + iprodione 100 mgA
The methods of manufacture and dilution of stock solutions of active ingredients (ma) are given in Table 1 below:
Figure img00040001

<tb> <SEP> Matière <SEP> active <SEP> formulation <SEP> Quantité <SEP> de <SEP> m.a. <SEP> volume <SEP> de
<tb> <SEP> par <SEP> solution <SEP> mère <SEP> par
<tb> <SEP> litre <SEP> de <SEP> solution <SEP> litre <SEP> de <SEP> milieu <SEP> de
<tb> <SEP> mère <SEP> culture
<tb> <SEP> oxyquinoléine <SEP> Cryptonol <SEP> 0,2 <SEP> 5
<tb> oxyquinoléate <SEP> de <SEP> ma. <SEP> technique <SEP> 1 <SEP> 1
<tb> <SEP> cuivre <SEP> 100%
<tb> <SEP> thirame <SEP> Pomarsol <SEP> 1 <SEP> 5
<tb> <SEP> mancozèbe <SEP> Dithane <SEP> M45 <SEP> 2 <SEP> 5
<tb> <SEP> fludioxonil <SEP> Saphire <SEP> 2 <SEP> 5
<tb> <SEP> iprodione <SEP> <SEP> Rovral <SEP> arqua <SEP> flo <SEP> 2 <SEP> 5
<tb>
La solution mère est fabriquée par dilution de la matière active, formulée ou non, dans un milieu de Heller dépourvu de saccharose . Le milieu de culture est fabriqué en ajoutant une fraction de la solution mère dans le milieu de base, qui contient 15 gn de saccharose.<tb><SEP> Material <SEP> active <SEP> formulation <SEP> Quantity <SEP> of <SEP> my <SEP> volume <SEP> of
<tb><SEP> by <SEP> solution <SEP> mother <SEP> by
<tb><SEP> liter <SEP> of <SEP> solution <SEP> liter <SEP> of <SEP> medium <SEP> of
<tb><SEP> mother <SEP> culture
<tb><SEP> oxyquinoline <SEP> Cryptonol <SEP> 0.2 <SEP> 5
<tb> oxyquinoleate <SEP> of <SEP> ma. <SEP> technique <SEP> 1 <SEP> 1
<tb><SEP> copper <SEP> 100%
<tb><SEP> thiram <SEP> Pomarsol <SEP> 1 <SEP> 5
<tb><SEP> mancozeb <SEP> Dithane <SEP> M45 <SEP> 2 <SEP> 5
<tb><SEP> fludioxonil <SEP> Sapphire <SEP> 2 <SEP> 5
<tb><SEP> iprodione <SEP><SEP> Rovral <SEP> arqua <SEP> flo <SEP> 2 <SEP> 5
<Tb>
The stock solution is made by diluting the active ingredient, formulated or not, in a Heller medium without saccharose. The culture medium is made by adding a fraction of the stock solution to the basal medium, which contains 15 g of sucrose.

Chaque solution nutritive gélosée est répartie dans des boîtes Magenta (Sigma, USA) à raison d'environ 40 ml par boîte. Les boîtes Magenta sont amenées en mini-serre qui sont ouvertes sans précautions particulières en conditions non stériles, à raison d'une boîte par milieu et par mini-serre. Each nutrient solution is distributed in Magenta boxes (Sigma, USA) at a rate of approximately 40 ml per box. The Magenta boxes are brought to the mini-greenhouse, which are opened without any particular precautions in non-sterile conditions, one box per medium and one mini-greenhouse.

La température est d'environ 20"C, avec une humidité relative modulable de 30 à 70% par système brouillard. Les serres permettent d'utiliser l'éclairage naturel mais, si celui-ci est trop faible, on utilise un éclairage d'appoint fixe à l'aide de lampes à vapeur de sodium haute pression de 400 watts. The temperature is about 20 ° C, with a relative humidity adjustable from 30 to 70% by fog system.The greenhouses allow to use the natural lighting but, if it is too weak, one uses a lighting of fixed booster using 400 watt high pressure sodium lamps.

Quatorze jours après la mise en place, la surface du milieu de culture contaminée par les micro-organismes est mesurée dans chaque boîte ainsi que le nombre de colonies qui se sont développées. Fourteen days after the establishment, the surface of the culture medium contaminated by the microorganisms is measured in each box and the number of colonies that have developed.

Les résultats sont donnés dans le tableau 2 suivant:

Figure img00050001
The results are given in Table 2 below:
Figure img00050001

<tb> <SEP> Matière <SEP> actives <SEP> Nombre <SEP> Surface <SEP> contaminée
<tb> <SEP> de
<tb> <SEP> foyers
<tb> <SEP> mm2 <SEP> % <SEP> de <SEP> la <SEP> surface <SEP> % <SEP> de <SEP> la <SEP> surface
<tb> <SEP> totale <SEP> témoin
<tb> <SEP> 0 <SEP> 108 <SEP> 17906 <SEP> 86 <SEP> 100
<tb> <SEP> mancozèbelOm <SEP> 1 <SEP> 104 <SEP> 0,5 <SEP> 0,6
<tb> Oxyquinoléine <SEP> l <SEP> mgfl <SEP> 5 <SEP> 766 <SEP> 4 <SEP> 4
<tb> <SEP> + <SEP> thirame <SEP> 5 <SEP> mg/l <SEP>
<tb> <SEP> Oxyquinolate <SEP> de <SEP> O <SEP> O <SEP> O <SEP> <SEP> O <SEP>
<tb> <SEP> cuivre <SEP> 1 <SEP> mgfll <SEP>
<tb> <SEP> + <SEP> mancozèbe <SEP> 10 <SEP> m <SEP>
<tb> <SEP> oxyquinoleate <SEP> de <SEP> 38 <SEP> 1763 <SEP> 8 <SEP> 10
<tb> <SEP> cuivre <SEP> 1 <SEP> mg'l <SEP>
<tb> <SEP> + <SEP> iprodione <SEP> 100 <SEP> mgA <SEP>
<tb>
Le critère d'activité est que la protection soit telle que moins de 10% de la surface totale soit contaminée.<tb><SEP> Material <SEP> Active <SEP> Number <SEP> Surface <SEP> Contaminated
<tb><SEP> of
<tb><SEP> homes
<tb><SEP> mm2 <SEP>% <SEP> of <SEP> the <SEP> surface <SEP>% <SEP> of <SEP> the <SEP> surface
<tb><SEP> total <SEP> control
<tb><SEP> 0 <SEP> 108 <SEP> 17906 <SEP> 86 <SEP> 100
<tb><SEP> mancozèbelOm <SEP> 1 <SEP> 104 <SEP> 0.5 <SEP> 0.6
<tb> Oxyquinoline <SEP> 1 <SEP> mgfl <SEP> 5 <SEP> 766 <SEP> 4 <SEP> 4
<tb><SEP> + <SEP> thiram <SEP> 5 <SEP> mg / l <SEP>
<tb><SEP> Oxyquinolate <SEP> from <SEP> O <SEP> O <SEP> O <SEP><SEP> O <SEP>
<tb><SEP> Copper <SEP> 1 <SEP> mgfll <SEP>
<tb><SEP> + <SEP> mancozeb <SEP> 10 <SEP> m <SEP>
<tb><SEP> oxyquinoleate <SEP> from <SEP> 38 <SEP> 1763 <SEP> 8 <SEP> 10
<tb><SEP> Copper <SEP> 1 <SEP>mg'l<SEP>
<tb><SEP> + <SEP> iprodione <SEP> 100 <SEP> mgA <SEP>
<Tb>
The activity criterion is that the protection is such that less than 10% of the total surface is contaminated.

Dans ces conditions on observe que tous les produits testés apportent une excellente protection. In these conditions we observe that all products tested provide excellent protection.

Exemple 2. Test de protection d'un milieu de culture
En procédant selon le même protocole que celui décrit à l'exemple 1, mais avec les milieux de Heller suivants:
7. Heller sans matière active
8. Heller + oxyquinoléate de cuivre 10 mg/l
9. Heller + oxyquinoléate de cuivre I mgA + thirame 5 mg/l
on obtient les résultats donnés dans le tableau 3 suivant:

Figure img00060001
Example 2. Protection test of a culture medium
By proceeding according to the same protocol as that described in Example 1, but with the following Heller media:
7. Heller without active ingredient
8. Heller + copper oxyquinoleate 10 mg / l
9. Heller + copper oxyquinoleate I mgA + thiram 5 mg / l
the results given in the following Table 3 are obtained:
Figure img00060001

<tb> <SEP> Matière <SEP> actives <SEP> Nombre <SEP> Surface
<tb> <SEP> de <SEP> foyers <SEP> contaminée
<tb> <SEP> mm <SEP> % <SEP> de <SEP> la <SEP> surface <SEP> % <SEP> de <SEP> la <SEP> surface
<tb> <SEP> totale <SEP> témoin
<tb> <SEP> 0 <SEP> 18 <SEP> 4574 <SEP> 22 <SEP> 100
<tb> Oxyquinoléate <SEP> de <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> 0,0 <SEP> 0,0
<tb> <SEP> cuivre <SEP> 10 <SEP> mg/l <SEP>
<tb> Oxyquinoléate <SEP> de <SEP> 3 <SEP> 129 <SEP> 0,6 <SEP> 3
<tb> <SEP> cuivre <SEP> I <SEP> mg/l <SEP>
<tb> <SEP> +thirame5m <SEP>
<tb>
Exemple 3. Test de protection d'un milieu de culture
En procédant selon le même protocole que celui décrit à l'exemple 1, mais avec les milieux de Heller suivants:
10. Heller sans matière active
11. Heller + oxyquinoléate de cuivre I mg/l
12. Heller + thirame 10 mg/l
13. Heller + acide salicylique 10 mg/l
14. Heller + 1 ,2-benzisothiazoline-3-one 10 mg/l
15. Heller + oxyquinoléate de cuivre 1 mg/l + thirame 5 mg/l
16. Heller + oxyquinoléate de cuivre 1 mg/l + thirame 5 mg/l + acide salicylique Imgn
17. Heller + thirame 5 mg/l + acide salicylique 1 mg/l
18. Heller + thirame 5 mgll + i,2-benzisothiazoline-3-one 10 mg/l
Ces milieux de culture gélosés sont fabriqués à partir de lasolution nutritive de Heller (He 15), dont la composition est décrite dans le tableau n de l'exemple 1.<tb><SEP> Material <SEP> active <SEP> Number <SEP> Surface
<tb><SEP> of <SEP> contaminated <SEP> outbreaks
<tb><SEP> mm <SEP>% <SEP> of <SEP> the <SEP> surface <SEP>% <SEP> of <SEP> the <SEP> surface
<tb><SEP> total <SEP> control
<tb><SEP> 0 <SEP> 18 <SEP> 4574 <SEP> 22 <SEP> 100
<tb> Oxyquinoleate <SEP> of <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> 0.0 <SEP> 0.0
<tb><SEP> copper <SEP> 10 <SEP> mg / l <SEP>
<tb> Oxyquinoleate <SEP> of <SEP> 3 <SEP> 129 <SEP> 0.6 <SEP> 3
<tb><SEP> Copper <SEP> I <SEP> mg / l <SEP>
<tb><SEP> + thiram5m <SEP>
<Tb>
Example 3. Protection test of a culture medium
By proceeding according to the same protocol as that described in Example 1, but with the following Heller media:
10. Heller without active ingredient
11. Heller + copper oxyquinoleate I mg / l
12. Heller + thiram 10 mg / l
13. Heller + salicylic acid 10 mg / l
14. Heller + 1, 2-benzisothiazolin-3-one 10 mg / l
15. Heller + copper oxyquinoleate 1 mg / l + thiram 5 mg / l
16. Heller + copper oxyquinoleate 1 mg / l + thiram 5 mg / l + salicylic acid Imgn
17. Heller + thiram 5 mg / l + salicylic acid 1 mg / l
18. Heller + thiram 5 mg / l, 2-benzisothiazolin-3-one 10 mg / l
These agar culture media are made from the Heller nutrient solution (He 15), the composition of which is described in Table n of Example 1.

Les modalités de fabrication et de dilution des solutions mères sont données das les exemples précédents. Dans le cas de l'acide salicylique et de la 1,2-benzisothiazoline-3one, ces modalités sont données dans le tableau 4 suivant:

Figure img00060002
The methods of manufacture and dilution of the stock solutions are given in the previous examples. In the case of salicylic acid and 1,2-benzisothiazolinone, these modalities are given in Table 4 below:
Figure img00060002

<tb> <SEP> Matière <SEP> active <SEP> Formulation <SEP> Quantité <SEP> en <SEP> g <SEP> de <SEP> Volume <SEP> en <SEP> ml <SEP> de
<tb> en <SEP> g <SEP> aa <SEP> par <SEP> litre <SEP> de <SEP> m.a. <SEP> par <SEP> litre <SEP> de <SEP> solution <SEP> mère <SEP> par
<tb> <SEP> milieu <SEP> de <SEP> culture <SEP> solution <SEP> mère <SEP> litre <SEP> de <SEP> milieu <SEP> de
<tb> <SEP> culture
<tb>

Figure img00070001
<tb><SEP> Material <SEP> active <SEP> Formulation <SEP> Quantity <SEP> in <SEP> g <SEP> of <SEP> Volume <SEP> in <SEP> ml <SEP> of
<tb> in <SEP> g <SEP> yy <SEP> by <SEP> liter <SEP> of <SEP> ma <SEP> by <SEP> liter <SEP> of <SEP> solution <SEP> mother <SEP > by
<tb><SEP> medium <SEP> of <SEP> culture <SEP> solution <SEP> mother <SEP> liter <SEP> of <SEP> middle <SEP> of
<tb><SEP> culture
<Tb>
Figure img00070001

<tb> acide <SEP> salicylique: <SEP> Sygma <SEP> réf. <SEP> 10
<tb> <SEP> togil <SEP> S <SEP> 3007, <SEP> USA
<tb> <SEP> 1g/1 <SEP> I <SEP> I
<tb> 1,2-benziso <SEP> thiazo <SEP> formulation
<tb> line-3-one: <SEP> 10 <SEP> Il <SEP> liquide <SEP> à <SEP> 20% <SEP> 1 <SEP> 10
<tb>
On obtient les résultats donnés dans le tableau 5 suivant

Figure img00070002
<tb>SEP> salicylic acid: <SEP> Sygma <SEP> ref. <SEP> 10
<tb><SEP> togil <SEP> S <SEP> 3007, <SEP> USA
<tb><SEP> 1g / 1 <SEP> I <SEP> I
<tb> 1,2-benziso <SEP> thiazo <SEP> formulation
<tb> line-3-one: <SEP> 10 <SEP> It <SEP> liquid <SEP> to <SEP> 20% <SEP> 1 <SEP> 10
<Tb>
The results given in the following Table 5 are obtained
Figure img00070002

<tb> <SEP> Matière <SEP> actives <SEP> Nombre <SEP> Surface
<tb> <SEP> de <SEP> foyers <SEP> contaminée
<tb> <SEP> mm2 <SEP> % <SEP> de <SEP> la <SEP> surface <SEP> % <SEP> de <SEP> la <SEP> surface
<tb> <SEP> totale <SEP> témoin
<tb> <SEP> 0 <SEP> 92 <SEP> 19249 <SEP> 92 <SEP> 100
<tb> <SEP> oxyquinoléate <SEP> de <SEP> 35 <SEP> 5393 <SEP> 26 <SEP> 28
<tb> <SEP> cuivre <SEP> 1 <SEP> m <SEP>
<tb> <SEP> thirame <SEP> 10 <SEP> mg/l <SEP> 2 <SEP> 69 <SEP> 0,3 <SEP> 0,3
<tb> <SEP> acide <SEP> salicylique <SEP> 90 <SEP> 18518 <SEP> 89 <SEP> 96
<tb> <SEP> 10 <SEP> mua <SEP>
<tb> 1,2-benzisotbiazoline- <SEP> 7 <SEP> 1042 <SEP> 5 <SEP> 5
<tb> <SEP> 3-one <SEP> 10 <SEP> mg!l <SEP>
<tb> <SEP> Oxyquinoléate <SEP> de <SEP> 6 <SEP> 1635
<tb> <SEP> cuivre <SEP> 1 <SEP> mg/l
<tb> <SEP> + <SEP> thirame <SEP> 5 <SEP> mg/l
<tb> <SEP> Oxyquinoléate <SEP> de <SEP> 5 <SEP> 590 <SEP> 3 <SEP> 3
<tb> <SEP> cuivre <SEP> 1 <SEP> mg/l
<tb> <SEP> + <SEP> thirame <SEP> 5 <SEP> mg/l <SEP>
<tb> <SEP> + <SEP> acide <SEP> salicylique
<tb> <SEP> 1 <SEP> mg/l <SEP>
<tb> <SEP> thirame <SEP> 5 <SEP> mg/l <SEP> 4 <SEP> 1392 <SEP> 7
<tb> <SEP> + <SEP> acide <SEP> salicylique
<tb> <SEP> 1 <SEP> mg/l
<tb> <SEP> thirame <SEP> 5 <SEP> mg/l <SEP> 2 <SEP> 869 <SEP> 4 <SEP> 5
<tb> <SEP> + <SEP> 1,2
<tb> benzisothiazoline-3
<tb> <SEP> one <SEP> 10 <SEP> mg/l <SEP>
<tb>
Dans ces conditions on observe que le thirame, la benzisothiazoline-3-one ainsi que des mélanges à base d'oxyquinoléate de cuivre et d'acétylsalicylique et/ ou de thirame, à des doses où ces produits seuls sont inefficaces apportent une excellente protection, de sorte que moins de 10% de la surface totale est contaminée.<tb><SEP> Material <SEP> active <SEP> Number <SEP> Surface
<tb><SEP> of <SEP> contaminated <SEP> outbreaks
<tb><SEP> mm2 <SEP>% <SEP> of <SEP> the <SEP> surface <SEP>% <SEP> of <SEP> the <SEP> surface
<tb><SEP> total <SEP> control
<tb><SEP> 0 <SEP> 92 <SEP> 19249 <SE> 92 <SEP> 100
<tb><SEP> oxyquinoleate <SEP> of <SEP> 35 <SEQ> 5393 <SEP> 26 <SEP> 28
<tb><SEP> copper <SEP> 1 <SEP> m <SEP>
<tb><SEP> thiram <SEP> 10 <SEP> mg / l <SEP> 2 <SEP> 69 <SEP> 0.3 <SEP> 0.3
<tb><SEP> acid <SEP> salicylic acid <SEP> 90 <SEQ> 18518 <SEP> 89 <SEP> 96
<tb><SEP> 10 <SEP> mua <SEP>
<tb> 1,2-Benzisotbiazoline- <SEP> 7 <SEP> 1042 <SEP> 5 <SEP> 5
<tb><SEP> 3-one <SEP> 10 <SEP> mg! l <SEP>
<tb><SEP> Oxyquinoleate <SEP> from <SEP> 6 <SEP> 1635
<tb><SEP> copper <SEP> 1 <SEP> mg / l
<tb><SEP> + <SEP> thiram <SEP> 5 <SEP> mg / l
<tb><SEP> Oxyquinoleate <SEP> of <SEP> 5 <SEP> 590 <SEP> 3 <SEP> 3
<tb><SEP> copper <SEP> 1 <SEP> mg / l
<tb><SEP> + <SEP> thiram <SEP> 5 <SEP> mg / l <SEP>
<tb><SEP> + <SEP> salicylic acid <SEP>
<tb><SEP> 1 <SEP> mg / l <SEP>
<tb><SEP> thiram <SEP> 5 <SEP> mg / l <SEP> 4 <SEQ> 1392 <SEP> 7
<tb><SEP> + <SEP> salicylic acid <SEP>
<tb><SEP> 1 <SEP> mg / l
<tb><SEP> thiram <SEP> 5 <SEP> mg / l <SEP> 2 <SEQ> 869 <SEP> 4 <SEP> 5
<tb><SEP> + <SEP> 1,2
<tb> benzisothiazoline-3
<tb><SEP> one <SEP> 10 <SEP> mg / l <SEP>
<Tb>
Under these conditions it is observed that thiram, benzisothiazolin-3-one and mixtures based on copper oxyquinoleate and acetylsalicylic acid and / or thiram, at doses where these products alone are ineffective provide excellent protection, so that less than 10% of the total area is contaminated.

Exemple 4: test de culture d'embryons somatiques de carottes
A) Suspension cellulaire:
Les embryons somatiques sont obtenus selon la méthode décrite dans Cryo-Lett. 12: 319-328, 1991, si ce n'est que l'embryogénèse est obtenue en présence de 0,2 % en poids de charbon actif, et déshydratés selon la méthode décrite dans C.R. Acad. Sci. Paris, Sér.Example 4: Somatic embryo culture test of carrots
A) Cell suspension:
Somatic embryos are obtained according to the method described in Cryo-Lett. 12: 319-328, 1991, except that embryogenesis is obtained in the presence of 0.2% by weight of activated charcoal, and dehydrated according to the method described in CR Acad. Sci. Paris, Ser.

ffi, 314, 423, 1992. Les embryons ainsi obtenus ont une teneur en eau inférieure à 0,35 grammes d'eau par gramme de matière sèche. ffi, 314, 423, 1992. The resulting embryos have a water content of less than 0.35 grams of water per gram of dry matter.

B) Germination des embryons:
Les boîtes de Petri contenant les embryons posés sur papier filtre sont placées pendant 3 jours dans l'obscurité à 4"C dans des dessiccateurs où l'humidité relative est maintenue à 96% par une solution sursaturée de nitrate de potassium. Ensuite les papiers filtres sont transférés dans l'obscurité à 4"C sur milieu de Heller à 145 g /1 de saccharose.B) Germination of embryos:
The Petri dishes containing the embryos placed on filter paper are placed for 3 days in the dark at 4 ° C. in desiccators where the relative humidity is maintained at 96% by a supersaturated solution of potassium nitrate. are transferred in the dark at 4 ° C on Heller medium to 145 g / 1 sucrose.

Au bout d'un jour, ils sont de nouveau déplacés sur milieu de Heller à 80 g 11 de saccharose, à la lumière et à 25"C. Au bout d'un jour, on peut disposer des embryons.After one day, they are again moved on Heller's medium to 80 g of sucrose, light and 25 ° C. After one day, the embryos can be disposed of.

Les embryons somatiques sont placés en germination en chambre de culture à 25"C sous une photopériode de 16 h de jour et 8 h de nuit et une intensité lumineuse de 15 pEIm21s. Le milieu de germination est un milieu gélosé de Heller contenant 15 g/l de saccharose, additionné ou non de matières actives. Les milieux sont répartis dans des boîtes
Magenta à raison de 30 ml de milieu par boîte. Les embryons somatiques sont répartis sur les différents milieux à raison de 60 embryons par milieu et de 10 embryons par boîte, en conditions aseptiques.The somatic embryos are germinated in a culture chamber at 25 ° C. under a photoperiod of 16 hours of day and 8 hours of night and a luminous intensity of 15 μEl.sub.21.The germination medium is a Heller agar medium containing 15 g / ml. 1 of sucrose, with or without active ingredients.
Magenta at the rate of 30 ml of medium per box. The somatic embryos are distributed on different media at the rate of 60 embryos per medium and 10 embryos per box under aseptic conditions.

Les différents milieux de Heller contiennent les mélanges de matières actives suivantes préparés comme aux exemples précédents:
19. Heller sans matière active
11. Heller + oxyquinoléate de cuivre i mg/l + mancozèbe 10 mg/l
5. Heller + oxyquinoléate de cuivre 1 mg/I + fludioxonil 10 mg/l
6. Heller + oxyquinoléate de cuivre 1 mg/l + iprodione 100 mg/l
20. Heller + oxyquinoléine de cuivre 1 mg/l + thirame 5 mg/l
16. Heller + oxyquinoléate de cuivre 1 mg/l + thirame 5 mg/l + acide salicylique
1 g/l
18. Heller + thirame 5 mg/l + 1,2-benzisothiazoline-3-one I mg/l
21. Heller +oxyquinoléate de cuivre 1 mgA + fenpiclonil 1 m/gl
Les taux de conversion des embryons sont mesurés environ 5 semaines après les semis et définis comme étant le nombre d'embryons présentant la première paire de feuilles vraies rapporté au nombre total d'embryons.The different Heller media contain the following mixtures of active ingredients prepared as in the previous examples:
19. Heller without active ingredient
11. Heller + copper oxyquinoleate i mg / l + mancozeb 10 mg / l
5. Heller + copper oxyquinoleate 1 mg / I + fludioxonil 10 mg / l
6. Heller + copper oxyquinoleate 1 mg / l + iprodione 100 mg / l
20. Heller + copper oxyquinoline 1 mg / l + thiram 5 mg / l
16. Heller + copper oxyquinoleate 1 mg / l + thiram 5 mg / l + salicylic acid
1 g / l
18. Heller + thiram 5 mg / l + 1,2-benzisothiazolin-3-one I mg / l
21. Heller + copper oxyquinoleate 1 mgA + fenpiclonil 1m / gl
Embryo conversion rates are measured approximately 5 weeks after planting and defined as the number of embryos with the first pair of true leaves in relation to the total number of embryos.

Le poids frais de la partie aérienne de la jeune plante (au dessus du collet ) est mesuré à la balance de précision. Le poids frais est le marqueur de développement des plantes. The fresh weight of the aerial part of the young plant (above the collar) is measured with precision balance. Fresh weight is the marker of plant development.

Le taux de conversion et le poids frais sont indiqués dans le tableau 6 suivant.

Figure img00090001
The conversion rate and the fresh weight are indicated in the following Table 6.
Figure img00090001

<tb><Tb>

<SEP> Matières <SEP> actives <SEP> Taux <SEP> de <SEP> Poids <SEP> frais <SEP> moyen <SEP> des
<tb> <SEP> conversion <SEP> (%) <SEP> plantes <SEP> (mg)
<tb> <SEP> sans <SEP> 95 <SEP> 1l78 <SEP>
<tb> oxyquinoléate <SEP> de <SEP> cuivre <SEP> 1 <SEP> mg/l <SEP> 83 <SEP> 124 <SEP> # <SEP> 15 <SEP>
<tb> <SEP> +mancozèbe <SEP> 10 <SEP> mg
<tb> oxyquinoléate <SEP> de <SEP> cuivre <SEP> 1 <SEP> mgZl <SEP> 95 <SEP> 115 <SEP> # <SEP> 12 <SEP>
<tb> <SEP> + <SEP> fludioxonil <SEP> 10
<tb> oxyquinoléine <SEP> de <SEP> cuivre <SEP> 1 <SEP> mg/l <SEP> 95 <SEP> 115 <SEP> # <SEP> 12 <SEP>
<tb> <SEP> + <SEP> thirame <SEP> 5 <SEP> mg/l <SEP>
<tb> oxyquinoléate <SEP> de <SEP> cuivre <SEP> 1 <SEP> mg/l <SEP> 98 <SEP> 126 <SEP> + <SEP> 13
<tb> <SEP> + <SEP> iprodione <SEP> 100 <SEP> mgn <SEP>
<tb> oxyquinoléate <SEP> de <SEP> cuivre <SEP> 1 <SEP> mgA <SEP> 90 <SEP> 104 <SEP> + <SEP> 17
<tb> <SEP> + <SEP> thirame <SEP> 5 <SEP> mg/l <SEP> + <SEP> acide <SEP>
<tb> <SEP> salicylique <SEP> 1 <SEP> m <SEP>
<tb> <SEP> thirame <SEP> 5 <SEP> mg/l <SEP> + <SEP> 1,2- <SEP> 98 <SEP> 142 <SEP> i <SEP> 10
<tb> benzisothiazoline-3-one <SEP> 1 <SEP> mg/l <SEP>
<tb> oxyquinoléate <SEP> de <SEP> cuivre <SEP> 1 <SEP> m & /l <SEP> 95 <SEP> 114 <SEP> # <SEP> <SEP> 15
<tb> <SEP> + <SEP> fenpiclonil <SEP> 1 <SEP> m/gl
<tb>
Ce tableau montre que tous les taux de conversion en plantes sont supérieurs à la valeur acceptable de 80% et même pour la plupart au moins égaux à 95%. Ceci montre l'excellente propriété des matières actives selon l'invention de ne pas altérer le développement en plantes des embryons somatiques. <SEP> Active <SEP> Materials <SEP><SEP><SEP><SEP> Fresh <SEP> Average <SEP> Rates of
<tb><SEP> conversion <SEP> (%) <SEP> plants <SEP> (mg)
<tb><SEP> without <SEP> 95 <SEP> 1l78 <SEP>
<tb> oxyquinoleate <SEP> of <SEP> copper <SEP> 1 <SEP> mg / l <SEP> 83 <SEP> 124 <SEP>#<SEP> 15 <SEP>
<tb><SEP> + mancozeb <SEP> 10 <SEP> mg
<tb> oxyquinoleate <SEP> of <SEP> copper <SEP> 1 <SEP> mgZl <SEP> 95 <SEP> 115 <SEP>#<SEP> 12 <SEP>
<tb><SEP> + <SEP> fludioxonil <SEP> 10
<tb> oxyquinoline <SEP> of <SEP> copper <SEP> 1 <SEP> mg / l <SEP> 95 <SEP> 115 <SEP>#<SEP> 12 <SEP>
<tb><SEP> + <SEP> thiram <SEP> 5 <SEP> mg / l <SEP>
<tb> oxyquinoleate <SEP> of <SEP> copper <SEP> 1 <SEP> mg / l <SEP> 98 <SEP> 126 <SEP> + <SEP> 13
<tb><SEP> + <SEP> iprodione <SEP> 100 <SEP> mgn <SEP>
<tb> oxyquinoleate <SEP> of <SEP> copper <SEP> 1 <SEP> mgA <SEP> 90 <SEP> 104 <SEP> + <SEP> 17
<tb><SEP> + <SEP> thiram <SEP> 5 <SEP> mg / l <SEP> + <SEP> acid <SEP>
<tb><SEP> Salicylic <SEP> 1 <SEP><SEP>
<tb><SEP> thiram <SEP> 5 <SEP> mg / l <SEP> + <SEP> 1,2- <SEP> 98 <SEP> 142 <SEP> i <SEP> 10
<tb> benzisothiazolin-3-one <SEP> 1 <SEP> mg / l <SEP>
<tb> oxyquinoleate <SEP> of <SEP> copper <SEP> 1 <SEP> m & l <SEP> 95 <SEP> 114 <SEP>#<SEP><SEP> 15
<tb><SEP> + <SEP> Fenpiclonil <SEP> 1 <SEP> m / gl
<Tb>
This table shows that all conversion rates to plants are above the acceptable value of 80% and even for the most part at least 95%. This shows the excellent property of the active ingredients according to the invention not to alter the development of somatic embryos in plants.

Claims (21)

Revendicationsclaims 1. Milieu de culture pour tissus méristématiques, en condition non stériles, comprenant un1. Culture medium for meristematic tissues, in non-sterile conditions, comprising a milieu sucré, caractérisé en ce qutil contient en outre une quantité efficace et non sweet medium, characterized in that it also contains an effective amount and not phytotoxique d'au moins une matière active protectrice contre les micro-organismes phytotoxic of at least one protective active ingredient against microorganisms choisie dans le groupe comprenant une matière active fongicide phytosanitaire et une selected from the group consisting of an active ingredient phytosanitary fungicide and a matière active bactéricide rémanente. bactericidal active ingredient. 2. Milieu selon la revendication 1, caractérisé en ce que la matière active protectrice est2. Medium according to claim 1, characterized in that the protective active ingredient is une matière active fongicide. a fungicidal active ingredient. 3. Milieu selon la revendication 2, caractérisé en ce que la matière active fongicide est un3. Medium according to claim 2, characterized in that the fungicidal active ingredient is a dérivé du cuivre. derived from copper. 4. Milieu selon la revendication 3, caractérisé en ce que la matière active fongicide est4. Medium according to claim 3, characterized in that the fungicidal active ingredient is l'oxychlorure de cuivre. copper oxychloride. 5. Milieu selon la revendication 2, caractérisé en ce que la matière active fongicide est un5. Medium according to claim 2, characterized in that the fungicidal active ingredient is a dérivé de l'oxyquinoléine. derived from oxyquinoline. 6. Milieu selon la revendication 5, caractérisé en ce que la matière active fongicide est6. Medium according to claim 5, characterized in that the fungicidal active ingredient is l'oxyquinoléate de cuivre. copper oxyquinoleate. 7. Milieu selon la revendication 2, caractérisé en ce que la matière active fongicide est un7. Medium according to claim 2, characterized in that the fungicidal active ingredient is a dithiocarbamate. dithiocarbamate. 8. Milieu selon la revendication 7, caractérisé en ce que la matière active fongicide est le8. Medium according to claim 7, characterized in that the fungicidal active ingredient is the mancozèbe. mancozeb. 9. Milieu selon la revendication 7, caractérisé en ce que la matière active fongicide est le9. Medium according to claim 7, characterized in that the fungicidal active ingredient is the thirame.  thiram. 10. Milieu selon la revendication 2, caractérisé en ce que la matière active fongicide est un10. Medium according to claim 2, characterized in that the fungicidal active ingredient is a dérivé des phénylpyrroles. derived from phenylpyrroles. Il. Milieu selon la revendication 10, caractérisé en ce que la matière active fongicide est He. Medium according to claim 10, characterized in that the fungicidal active ingredient is le fluodioxonil. fluodioxonil. 12. Milieu selon la revendication 2, caractérisé en ce que la matière active fongicide est un12. Medium according to claim 2, characterized in that the fungicidal active ingredient is a dicarboximide. dicarboximide. 13. Milieu selon la revendication 12, caractérisé en ce que la matière active fongicide est13. Medium according to claim 12, characterized in that the fungicidal active ingredient is l'iprodione 14. Milieu selon l'une des revendications 2 à 13, caractérisé en ce que le milieu contient au Iprodione 14. Medium according to one of Claims 2 to 13, characterized in that the medium contains at least moins deux fongicides. minus two fungicides. 15. Milieu selon la revendication 14, caractérisé en ce que l'un des deux fongicides est un15. Medium according to claim 14, characterized in that one of the two fungicides is a dérivé de l'oxyquinoléine ou un dithiocarbamate. derived from oxyquinoline or a dithiocarbamate. 16. Milieu selon l'une des revendications 2 à 15, caractérisé en ce que le milieu contient de16. Medium according to one of claims 2 to 15, characterized in that the medium contains 0,1 à 1000 mg/l, de préférence de 0,1 à 10 mg/l de matière active fongicide. 0.1 to 1000 mg / l, preferably from 0.1 to 10 mg / l of active fungicidal material. 17. Milieu selon la revendication 1, caractérisé en ce que la matière active protectrice est17. Medium according to claim 1, characterized in that the protective active ingredient is une matière active bactéricide rémanente. a bactericidal active ingredient remanent. 18. Milieu selon la revendication 17, caractérisé en ce que la matière active bactéricide est18. Medium according to claim 17, characterized in that the bactericidal active ingredient is un salicylate. a salicylate. 19. Milieu selon la revendication 17, caractérisé en ce que la matière active bactéricide est19. Medium according to claim 17, characterized in that the bactericidal active ingredient is la 1,2 benzisothiazoline. 1,2 benzisothiazoline. 20. Milieu selon l'une des revendications 17 à 19, caractérisé en ce que le milieu contient20. Medium according to one of claims 17 to 19, characterized in that the medium contains de 0,1 à 100 mg/l, de préference de 0,1 à 10 mg/l de matière active bactéricide. from 0.1 to 100 mg / l, preferably from 0.1 to 10 mg / l of bactericidal active ingredient. 21. Milieu selon l'une des revendications 1 à.20, caractérisé en ce que le milieu contient au moins une matière active fongicide et au moins une matière active bactéricide.21. Medium according to one of claims 1 to 20, characterized in that the medium contains at least one fungicidal active ingredient and at least one bactericidal active ingredient. 22 Milieu selon la revendication 1, caractérisé en ce que la concentration en sucre est au Medium according to claim 1, characterized in that the sugar concentration is at moins égale à lgll .  less than lgll. 23. Milieu selon l'une des revdications 1 à 22, caractérisé en ce qu'il comprend une phase23. Medium according to one of the claims 1 to 22, characterized in that it comprises a phase fibreuse pour le relargage contrôlé des matières actives. fibrous membrane for the controlled release of active ingredients. 24. Procédé de culture d'un tissu méristématique en condition non stériles, caractérisé en ce24. A method of culturing a meristematic tissue in non-sterile conditions, characterized in that qu on utilise un milieu selon l'une des revendications 1 à 23.  that a medium according to one of claims 1 to 23 is used.
FR9606024A 1996-05-09 1996-05-09 CULTURE MEDIUM FOR MERISTEMATIC FABRICS AND METHOD FOR CULTURING SUCH FABRICS IN NON-STERILE CONDITIONS Expired - Fee Related FR2748491B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9606024A FR2748491B1 (en) 1996-05-09 1996-05-09 CULTURE MEDIUM FOR MERISTEMATIC FABRICS AND METHOD FOR CULTURING SUCH FABRICS IN NON-STERILE CONDITIONS

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9606024A FR2748491B1 (en) 1996-05-09 1996-05-09 CULTURE MEDIUM FOR MERISTEMATIC FABRICS AND METHOD FOR CULTURING SUCH FABRICS IN NON-STERILE CONDITIONS

Publications (2)

Publication Number Publication Date
FR2748491A1 true FR2748491A1 (en) 1997-11-14
FR2748491B1 FR2748491B1 (en) 1998-06-12

Family

ID=9492142

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FR9606024A Expired - Fee Related FR2748491B1 (en) 1996-05-09 1996-05-09 CULTURE MEDIUM FOR MERISTEMATIC FABRICS AND METHOD FOR CULTURING SUCH FABRICS IN NON-STERILE CONDITIONS

Country Status (1)

Country Link
FR (1) FR2748491B1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999065291A2 (en) * 1998-06-12 1999-12-23 Silvagen Inc. A process for ex vitro sowing and germination of plant somatic embryos
US6946295B2 (en) 1998-06-12 2005-09-20 Cellfor, Inc. Process for ex vitro sowing and germination of plant somatic embryos
US7795029B2 (en) 2003-12-04 2010-09-14 Cellfor Inc. Method of ex vitro sowing, germination, growth and conversion of plant somatic embryos or germinants

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0010630A1 (en) * 1978-10-05 1980-05-14 Sarea A.G. Coating of plant seeds
JPS6140708A (en) * 1984-07-31 1986-02-27 ライオン株式会社 Artificial seed
US4583320A (en) * 1982-10-12 1986-04-22 Plant Genetics, Inc. Delivery system for meristematic tissue
US4753035A (en) * 1987-02-04 1988-06-28 Dow Corning Corporation Crosslinked silicone coatings for botanical seeds
JPH04311326A (en) * 1990-12-26 1992-11-04 Hokko Chem Ind Co Ltd Method for culturing tissue of cyclamen
WO1995023500A1 (en) * 1994-03-02 1995-09-08 Rhone Poulenc Agrochimie Fibrous cellulose-based culture substrate

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0010630A1 (en) * 1978-10-05 1980-05-14 Sarea A.G. Coating of plant seeds
US4583320A (en) * 1982-10-12 1986-04-22 Plant Genetics, Inc. Delivery system for meristematic tissue
JPS6140708A (en) * 1984-07-31 1986-02-27 ライオン株式会社 Artificial seed
US4753035A (en) * 1987-02-04 1988-06-28 Dow Corning Corporation Crosslinked silicone coatings for botanical seeds
JPH04311326A (en) * 1990-12-26 1992-11-04 Hokko Chem Ind Co Ltd Method for culturing tissue of cyclamen
WO1995023500A1 (en) * 1994-03-02 1995-09-08 Rhone Poulenc Agrochimie Fibrous cellulose-based culture substrate

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE WPI Section Ch Week 8615, Derwent World Patents Index; Class A97, AN 86-096744, XP002025082 *
DATABASE WPI Section Ch Week 9251, Derwent World Patents Index; Class C02, AN 92-418057, XP002025083 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999065291A2 (en) * 1998-06-12 1999-12-23 Silvagen Inc. A process for ex vitro sowing and germination of plant somatic embryos
WO1999065291A3 (en) * 1998-06-12 2001-10-11 Silvagen Inc A process for ex vitro sowing and germination of plant somatic embryos
US6946295B2 (en) 1998-06-12 2005-09-20 Cellfor, Inc. Process for ex vitro sowing and germination of plant somatic embryos
US7795029B2 (en) 2003-12-04 2010-09-14 Cellfor Inc. Method of ex vitro sowing, germination, growth and conversion of plant somatic embryos or germinants

Also Published As

Publication number Publication date
FR2748491B1 (en) 1998-06-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Aighewi et al. Improved propagation methods to raise the productivity of yam (Dioscorea rotundata Poir.)
Ramgareeb et al. Elimination of virus and rapid propagation of disease-free sugarcane (Saccharum spp. cultivar NCo376) using apical meristem culture
Viñas et al. In vitro propagation of purple pitahaya (Hylocereus costaricensis [FAC Weber] Britton & Rose) cv. Cebra
Cardoso Silver nitrate enhances in vitro development and quality of shoots of Anthurium andraeanum
Probst et al. Cylindrocarpon black foot in nurseries—two factors that can increase infection
Hashim et al. Oil palm (Elaeis guineensis Jacq.) somatic embryogenesis
Vlachou et al. Studies on seed germination and micropropagation of Clinopodium nepeta: A medicinal and aromatic plant
Park et al. Common protocols in orchid micropropagation
Atak et al. Micropropagation of Anthurium spp
Abul-Soad et al. Date palm somatic embryogenesis from inflorescence explant
Arce-Montoya et al. Micropropagation and field performance of Yucca valida
Setiaji et al. In vitro propagation of Vanda orchid: a review
JPH08501277A (en) Uses of plant bioregulatory compositions and (substituted benzyl) trialkylamine ether compounds
FR2748491A1 (en) Meristem tissue culture medium
JP4278183B2 (en) Sugarcane production
Zheng et al. Isolated microspore culture in maize (Zea mays L.), production of doubled-haploids via induced androgenesis
Dewir et al. Micropropagation to conserve the endangered Gabal Elba dragon tree (Dracaena ombet Heuglin ex Kotschy & Peyr)
Jeyaram et al. Conservation attempts of woody medicinal plants of India by biotechnological tools
Corozo Quiñonez et al. Effect of Auxins, Cytokinin and Activated Charcoal on In Vitro Propagation of Plantains Barraganete and Curare (Musa AAB)
Seydi et al. Plant regeneration by organogenesis from bulbous explants in Fritillaria imperialis L., a wild rare ornamental species at the risk of extinction
Fitch et al. Micropropagation of hermaphrodite papayas: increased root induction and plant survival during acclimatization
WO1999020101A1 (en) Milieu de culture pour tissus meristematiques et procede de culture de ces tissus en condition non steriles
Singh et al. Improved plant regeneration method of Artocarpus lakoocha Roxb. from immature seeds
Nguyen et al. Rooting media and growth regulators affect propagation from stem cuttings of Carica papaya LCv ‘Tainung No. 2’and ‘Red Lady’
RU2824883C1 (en) Method of growing cloudberries (rubus chamaemorus linnaeus)

Legal Events

Date Code Title Description
ST Notification of lapse