FR2728587A1 - Non-selective gel culture medium - Google Patents
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Abstract
Description
L'invention concerne un milieu de culture non sélectif permettant la numération et l'identification de germes présents dans un échantillon biologique, notamment d'urine. The invention relates to a nonselective culture medium for counting and identifying germs present in a biological sample, including urine.
Parmi les germes urinaires les plus fréquemment isolés, on rencontre Escherichia ccli, Proteus et Streptocoques du groupe D. Among the most frequently isolated urinary germs are Escherichia coli, Proteus and Group D Streptococci.
Les procédés classiques d'isolement et de numération des germes responsables d'infections urinaires consistent à ensemencer à l'rose calibrée un milieu gélosé réparti en boîtes de Petri comprenant les éléments nutritifs permettant la croissance des germes potentiellement responsables d'infections urinaires, à incuber ces boîtes pendant une durée de 18 à 24 heures à une température de 37- C et à déterminer ensuite le nombre de germes initialement présents dans l'échantillon d'urine en comparant la densité des colonies présentes sur les boîtes à celles d'étalons obtenus avec des concentrations connues de germes. The standard methods of isolating and counting the germs responsible for urinary tract infections consist in calibrating a calibrated rose medium in Petri dishes comprising the nutrients that allow the growth of the germs potentially responsible for urinary tract infections to be incubated. these boxes for a period of 18 to 24 hours at a temperature of 37 ° C. and then to determine the number of seeds initially present in the urine sample by comparing the density of the colonies present on the dishes with those of standards obtained with known concentrations of germs.
On considère généralement qu'une numération inférieure à 104 germes/ml correspond le plus souvent à une contamination, ce résultat devant toutefois être interprété en fonction de la leucocyturie et du contexte clinique. It is generally considered that a count of less than 104 germs / ml is most often a contamination, but this result should be interpreted according to leukocytury and the clinical context.
Une numération comprise entre 104 et 105 germes/ml a une signification douteuse. II est recommandé dans ce cas de renouveler l'examen sur un nouveau prélèvement. A count of between 104 and 105 cells / ml has dubious significance. In this case it is recommended to repeat the examination on a new sample.
Une numération supérieure à 105 germes/ml correspond généralement à une infection. A count greater than 105 germs / ml is usually an infection.
En outre, il est connu d'ajouter au milieu de culture gélosé des substrats chromogènes qui permettront l'identification des germes responsables de l'infection urinaire le cas échéant en fonction de la couleur des colonies imputable à la présence d'enzymes caractéristiques de l'espèce. In addition, it is known to add chromogenic substrates to the agar culture medium which will make it possible to identify the germs responsible for the urinary infection, if any, as a function of the colony color due to the presence of enzymes characteristic of the 'species.
On connaît ainsi un milieu gélosé, commercialisé par la
Société BIO-MERIEUX sous le nom CPS lD2, ayant la composition suivante en 9/1 d'eau distillée - extrait coeur-cervelle 5 - bio-soyase 5 - L-tryptophane 0,75 - tampon Tris 1 - phosphate monopotassique 1 - mélange chromogène 0,30 - agar 17,5.An agaric medium, marketed by the
BIO-MERIEUX company under the name CPS lD2, having the following composition in 9/1 distilled water - heart-brain extract 5 - bio-soyase 5 - L-tryptophan 0.75 - Tris buffer 1 - monopotassium phosphate 1 - mixture chromogen 0.30 - agar 17.5.
Ce milieu contient aussi 5 ml de sérum de chevalilitre d'eau distillée et son pH est 7,3. This medium also contains 5 ml of horse iron serum of distilled water and its pH is 7.3.
Le mélange chromogène est constitué par deux substrats: - un substrat de la ss-glucosidase qui, après métabolisation, permettra d'obtenir des colonies de couleur bleue, dont le diagnostic sera orienté soit vers les Streptocoques du groupe D soit vers les bactéries du groupe
K.E.S. (Klebsiella, Enterobacter, Serratia) par une coloration de Gram; - un substrat de la ss-glucuronidase qui, métabolisé par Escheridtia coli, permettra son identification par l'obtention des colonies de couleur rose bordeaux.Compte tenu des différentes caractéristiques physico-chimiques et de l'activité enzymatique mises en évidence, ce substrat a été identifié comme étant un sel du Schloro 3-indolyl-ss-D-glucuronide utilisé probablement à une concentration comprise entre 200 et 250 mg/l. The chromogenic mixture consists of two substrates: - a substrate of ß-glucosidase which, after metabolization, will produce blue-colored colonies, the diagnosis of which will be directed towards either Group D Streptococci or bacteria of the group
KES (Klebsiella, Enterobacter, Serratia) by a Gram stain; a substrate of ss-glucuronidase which, metabolized by Escheridtia coli, will allow its identification by obtaining colonies of burgundy pink color. Given the various physicochemical characteristics and the enzymatic activity demonstrated, this substrate has was identified as a salt of Schloro 3-indolyl-s-D-glucuronide probably used at a concentration between 200 and 250 mg / l.
Le diagnostic d'Escherichia coli est confirmé par l'addition de diméthylaminocinnamaldéhyde (D.M.C.A.) à 1 % pour la recherche de l'indole (lorsque la souche possède une tryptophanase). The diagnosis of Escherichia coli is confirmed by the addition of 1% dimethylaminocinnamaldehyde (DMAC) for indole (when the strain has a tryptophanase).
La présence de L-tryptophane permet également de rechercher la tryptophane désaminase (TDA) pour l'identification des
Proteus.The presence of L-tryptophan also makes it possible to search for tryptophan deaminase (TDA) for the identification of
Proteus.
La présence de la tryptophane désaminase est en outre confirmée par l'addition sur les colonies de perchlorure de fer (FeCI3) à 10 % qui conduit à une coloration brun-vert du réactif pour les colonies TDA'. The presence of tryptophan deaminase is further confirmed by the addition on the colonies of 10% iron perchloride (FeCl 3) which leads to a brown-green color of the reagent for TDA 'colonies.
Pour les colonies TDA-, le réactif utilisé ne change pas de couleur et reste de couleur jaune.For TDA- colonies, the reagent used does not change color and remains yellow.
On connaît également de EP-282 733 un groupe de composés indoxyl-B-D-glucuronides éventuellement substitués sur le noyau indolyle notamment par des atomes d'halogène, qui sont des substrats chromogènes de la P-glucuronidase. pour l'identification d'Escherichia coli dans un échantillon d'eau ou d'eaux d'égoûts. Also known from EP-282 733 is a group of indoxyl-B-D-glucuronide compounds optionally substituted on the indolyl ring, especially with halogen atoms, which are chromogenic substrates for β-glucuronidase. for the identification of Escherichia coli in a sample of water or sewage.
Cependant. ce document ne comporte aucune indication particulière qui permettrait à l'homme du métier de sélectionner en particulier le composé selon l'invention. However. this document does not include any particular indication that would enable the person skilled in the art to select in particular the compound according to the invention.
Selon la présente invention, on a découvert à présent qu'en utilisant comme substrat chromogène de la-D-glucurnnidase, le 5-bromo Schloro 3-indolyl-ss-D-glucuronide, de préférence sous la forme de son sel de cyclohexylammonium, il était possible d'identifier de façon nette les colonies d'Eschenchia coli grâce à la coloration pourpre-violette intense qui était obtenue en n'utilisant que des quantités du substrat chromogène inférieures à celle utilisée pour le milieu connu décrit ci-dessus. According to the present invention, it has now been found that by using as the chromogenic substrate 1'-D-glucurnidase, 5-bromo Schloro-3-indolyl-ss-D-glucuronide, preferably in the form of its cyclohexylammonium salt, Eschenchia coli colonies could be clearly identified by intense violet-purple coloring which was obtained using only lower amounts of the chromogenic substrate than that used for the known medium described above.
En outre, l'utilisation du substrat chromogène de la p- glucuronidase selon l'invention, permet la caractérisation directe d'Escheri- chia coli la confirmation étant apportée par la mise en évidence de l'activité tryptophanase en présence du réactif de Kovacs (dépôt d'une goutte de réactif sur une colonie). La présence d'indole est attestée par la formation d'une coloration rouge instantanée et intense, alors que lorsqu'on utilise le milieu connu de l'état de la technique, il est nécessaire de déposer la colonie (colorée grâce au sel du Schloro-3-indolyl-ss-D-glucuronide) sur un disque de papier et d'ajouter une goutte de diméthylaminocinnamaldéhyde, ce qui constitue une manipulation supplémentaire. In addition, the use of the chromogenic substrate of the p-glucuronidase according to the invention allows the direct characterization of Escherichia coli, the confirmation being provided by the demonstration of the tryptophanase activity in the presence of the Kovacs reagent ( deposit of a drop of reagent on a colony). The presence of indole is attested by the formation of an intense and instant red color, whereas when using the medium known from the state of the art, it is necessary to deposit the colony (colored with Schloro salt). -3-indolyl-ss-D-glucuronide) on a paper disk and add a drop of dimethylaminocinnamaldehyde, which is an additional manipulation.
L'invention a pour objet un milieu de culture non sélectif pour l'identification directe de germes dans un échantillon biologique, notamment de germes responsables d'infections urinaires, comprenant: - des éléments nutritifs permettant la croissance de tous les germes potentiellement responsables d'infections urinaires; - un substrat chromogène de la ss-D-glucuronidase consistant en le S bromo Schloro 3-indolyl ss-D-glucuronide ou l'un de ses sels; et - un substrat chromogène de la ss-glucosidase. The subject of the invention is a non-selective culture medium for the direct identification of seeds in a biological sample, in particular of germs responsible for urinary infections, comprising: nutrients allowing the growth of all the germs potentially responsible for urinary tract infections; a chromogenic substrate of ss-D-glucuronidase, consisting of S-bromo-Schloro-3-indolyl ss-D-glucuronide or one of its salts; and a chromogenic substrate for β-glucosidase.
De préférence, le 5-bromo Schloro 3-indolyl ss-D- glucuronide est présent sous la forme du sel de cyclohexylammonium (Magenta-glucuronide), commercialisé par BIOSYNTH AG,
BIOCHEMICA AND SYNTHtTICA, Suisse, sous la référence B-735. Preferably, 5-bromo Schloro 3-indolyl ss-D-glucuronide is present in the form of the cyclohexylammonium salt (Magenta-glucuronide), marketed by BIOSYNTH AG,
BIOCHEMICA AND SYNTHtTICA, Switzerland, under the reference B-735.
La concentration de ce substrat varie avantageusement entre 0,05 et 0,20 g/litre de milieu de culture, la concentration préférée étant de 0,05 g/litre à 0,1 g/litre, plus spécialement de 0,1 g/litre. The concentration of this substrate advantageously varies between 0.05 and 0.20 g / liter of culture medium, the preferred concentration being from 0.05 g / liter to 0.1 g / liter, more preferably 0.1 g / liter liter.
Le substrat chromogène de la P-glucosidase est de manière préférée le 5-bromo 4-chloro 3-indolyl p-D-glucopyranoside (BCI glucopyranoside). Celui-ci est commercialisé par BIOSYNTH AG,
BIOCHEMICA AND SYNTHETICA, Suisse, sous la référence B-725. The chromogenic substrate of β-glucosidase is preferably 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucopyranoside (BCI glucopyranoside). This is marketed by BIOSYNTH AG,
BIOCHEMICA AND SYNTHETICA, Switzerland, under the reference B-725.
De manière avantageuse, le milieu de culture selon l'invention comprend également du tryptophane. Advantageously, the culture medium according to the invention also comprises tryptophan.
Un autre objet de l'invention consiste en l'utilisation du milieu décrit ci-dessus pour la numération et l'identification dans un échantillon d'urine des bactéries suivantes: Escherichia cdi, les Streptocoques du groupe D et les Proteus, notamment Proteus mirabilis, lorsque le milieu comprend du tryptophane. Par ailleurs, l'utilisation du milieu permet aussi l'identification des Entérobactéries du groupe K.E.S.C. Another subject of the invention is the use of the medium described above for the counting and identification in a urine sample of the following bacteria: Escherichia cdi, Group D Streptococci and Proteus, in particular Proteus mirabilis when the medium comprises tryptophan. Furthermore, the use of the medium also allows the identification of Enterobacteriaceae of the K.E.S.C.
Klebsiella, Enterobacter et Serratia). Klebsiella, Enterobacter and Serratia).
La numération et l'identification sont réalisées avantageusement par ensemencement du milieu de culture sur des boites de Petri. The counting and the identification are advantageously carried out by seeding the culture medium on Petri dishes.
La numération est réalisée comme décrit précédemment en comparant la densité des colonies obtenues à celles d'étalons correspondant à des concentrations connues des germes.The count is carried out as described above by comparing the density of the colonies obtained with those of standards corresponding to known concentrations of the seeds.
Par identification au sens de la présente invention on entend dans le cas d'Escherichia coli, une identification spécifique par l'expression de ses caractères ss-glucuronidase et tryptophanase positifs. By identification within the meaning of the present invention is meant in the case of Escherichia coli, a specific identification by the expression of its positive characters ss-glucuronidase and tryptophanase.
La caractérisation d'Eschenchia coli est réalisée après métabolisation du substrat chromogène selon l'invention par l'obtention de colonies de couleur pourpre-violet d'un diamètre généralement compris entre 1,5 et 2,5 mm après 24 heures d'incubation à 37- C. La réaction de confirmation est réalisée par la mise en évidence de la production d'indole à l'aide du réactif de Kovacs se traduisant par un virage instantané au rose du réactif. The characterization of Eschenchia coli is carried out after metabolizing the chromogenic substrate according to the invention by obtaining purple-purple colonies of a diameter generally of between 1.5 and 2.5 mm after 24 hours of incubation at 37- C. The confirmation reaction is carried out by demonstrating the production of indole using the Kovacs reagent resulting in an instant pink turn of the reagent.
Cette identification est avantageusement réalisée en déposant une goutte de réactif de Kovacs sur une colonie présumée d'Escherichia coli, sans qu'il soit nécessaire de repiquer la colonie pour la déposer soit sur un disque de papier préalablement imprégné de réactif de
Kovacs, soit sur un disque "sec" de papier en additionnant par la suite une goutte de réactif de Kovacs.This identification is advantageously carried out by depositing a drop of Kovacs reagent on an alleged colony of Escherichia coli, without it being necessary to transplant the colony to deposit it either on a disk of paper previously impregnated with reagent of
Kovacs, either on a "dry" paper disc by adding a drop of Kovacs reagent.
Toutefois, selon l'invention, il est aussi possible en cas de mélange polymicrobien, de déposer une colonie sur un disque sec", puis d'additionner une goutte de réactif de Kovacs. However, according to the invention, it is also possible in the case of a polymicrobial mixture, to deposit a colony on a dry disk ", then to add a drop of Kovacs reagent.
Cependant, certaines souches d'Escherichia coline peuvent être identifiées par ces deux caractères; il s'agit des souches ss-glucuroni- dase négative et/ou tryptophanase négative représentant de 3 à 5 % de la population des Escherichia coli. However, some strains of Escherichia coline can be identified by these two characters; these are ss-glucuronidase negative and / or tryptophanase negative strains representing 3 to 5% of the Escherichia coli population.
II est alors souhaitable d'identifier ces souches à l'aide des méthodes classiques. It is then desirable to identify these strains using conventional methods.
D'autres souches pourront également apparaître sous la forme de colonies pourpres ou rosées (C. freundii, S. sonnei, S. xylosus,
S. haemolyticus, S. agalactiae). La différenciation se fera alors par le caractère indole négatif de ces souches. Other strains may also appear in the form of purple or pink colonies (C. freundii, S. sonnei, S. xylosus,
S. haemolyticus, S. agalactiae). The differentiation will then be by the indole negative character of these strains.
Les Streptocoques du groupe D et les Entérobactéries du groupe K.E.S. sont identifiés par l'expression de leur caractère Pglucosi- dase positif. La métabolisation du substrat chromogène fait apparaître les colonies de Streptocoques du groupe D et d'Enterobactéries du groupe
K.E.S. en couleur bleue ou bleu-vert dans le cas du BCI-glucopyranosiide, la différenciation entre Streptocoques du groupe D et Entérobactéries étant réalisée par un examen microscopique en fonction de la forme des bactéries : cocci Gram pour les Streptocoques du groupe D et bacilles gram pour les Entérobactéries du groupe K.E.S ou encore par la présence de colonies muqueuses caractéristiques des Entérobactéries, d'une coloration bleu-vert moins intense que les Streptocoques du groupe D et d'une taille allant de 2 à 4 mm de diamètre après une incubation de 24 heures à 37e C (les colonies de Streptocoques du groupe D ayant un diamètre d'environ 1 mm et étant de couleur bleu intense).La différenciation au sein des Entérobactéries du groupe K.E.S. peut être obtenue par une technique classique.Group D Streptococci and Enterobacteriaceae of the KES group are identified by the expression of their positive Pglucosidase character. Metabolism of the chromogenic substrate reveals the Group D Streptococci and Enterobacteriaceae colonies
KES in blue or blue-green color in the case of BCI-glucopyranoside, the differentiation between Group D streptococci and Enterobacteriaceae being carried out by microscopic examination according to the form of the bacteria: Gram cocci for Group D streptococci and Gram bacilli for Enterobacteriaceae of the KES group or also by the presence of mucosal colonies characteristic of Enterobacteria, of a less intense blue-green coloration than Group D streptococci and of a size ranging from 2 to 4 mm in diameter after incubation of 24 hours at 37 ° C (Group D Streptococci colonies having a diameter of about 1 mm and being deep blue in color). Differentiation within Enterobacteriaceae of the KES group can be achieved by a conventional technique.
Les Proteus sont caractérisés après 24 heures d'incubation à 37- C, par des colonies de couleur brun-orangé (réaction TDA positive) avec ou sans coloration brune de la gélose. La confirmation éventuelle des bactéries du genre Proteus est effectuée par addition de perchlorure de fer et observation du virage du réactif au brun-vert. Le Proteus mirabilis est identifié directement par son activité TDA positive et par son caractère indole négatif par dépôt d'une goutte de réactif de Kovacs sur une colonie TDA+, aucun virage du réactif n'étant observé. Proteus are characterized after 24 hours of incubation at 37 ° C., by brown-orange colonies (positive TDA reaction) with or without brown agar. Potential confirmation of Proteus bacteria is achieved by addition of iron perchloride and observation of the brown-green reagent turn. Proteus mirabilis is directly identified by its positive TDA activity and by its indole negative character by depositing a drop of Kovacs reagent on a TDA + colony, with no change in the reagent being observed.
On donnera ci-après un exemple de milieu selon l'invention ainsi que les résultats obtenus grâce à ce milieu sur différents germes responsables d'infections urinaires. An example of a medium according to the invention and the results obtained with this medium on various germs responsible for urinary infections will be given below.
Exemple
On a préparé un milieu ayant la composition suivante pour
un litre d'eau osmosée (en g/litre) - tryptone 8 - extrait de levure 5
- extrait de viande 5 - L-tryptophane 1 - Magenta-glucuronide 0,1 - BCI-glucopyranoside 0,05 - agar B 12.Example
A medium having the following composition was prepared for
one liter of osmosis water (in g / liter) - tryptone 8 - yeast extract 5
- meat extract 5 - L-tryptophan 1 - Magenta-glucuronide 0.1 - BCI-glucopyranoside 0.05 - agar B 12.
Le milieu est préparé de la manière suivante : 0,05 g de
BCI-glucopyranoside sont dissous à froid dans 5 ml de diméthyltôrmamide (DMF), dans un erlen propre et sec, en verre.The medium is prepared as follows: 0.05 g of
BCI-glucopyranoside are dissolved cold in 5 ml of dimethylformamide (DMF) in a clean, dry glass flask.
Lors de la dissolution, le DMF est ajouté par petites quantités en agitant manuellement jusqu'à atteindre la dissolution complète du produit. During dissolution, the DMF is added in small amounts with manual stirring until complete dissolution of the product is achieved.
Les autres composants sont pesés, ajoutés à 995 ml d'eau osmosée et dissous par chauffage. Ensuite, les 5 ml de BCI-glucopyranoside dans le DMF sont ajoutés. The other components are weighed, added to 995 ml of osmosis water and dissolved by heating. Next, the 5 ml of BCI-glucopyranoside in DMF are added.
Le vrac obtenu est alors porté à ébullition en agitant Le PH est mesuré et ajusté à 7,3 + 0,1 par addition d'HCI ou de NaOH, si nécessaire. Le vrac est autoclavé pendant 15 minutes à 121- C puis réparti dans des boites de Petri à raison de 18 ml/boite. The bulk obtained is then boiled with stirring. The pH is measured and adjusted to 7.3 ± 0.1 by addition of HCl or NaOH, if necessary. The bulk is autoclaved for 15 minutes at 121 ° C. and then distributed in Petri dishes at a rate of 18 ml / dish.
Différentes souches sont testées par ensemencement des milieux et incubation. Different strains are tested by medium seeding and incubation.
Chaque souche est repiquée la veille du contrôle dans un bouillon T. C. S. et incubée à 37' C. Each strain is transplanted the day before control in a T.C. broth and incubated at 37 ° C.
Avant l'ensemencement des boites de Petri, chaque souche est diluée au 1/10ème dans un bouillon tryptone-sel. 10p1 de cette dilution sont ensemencés à l'aide d'une ose calibrée, par la technique d'isolement en stries. Les boites sont incubées à 37' C pendant 24 heures. Les résultats sont rapportés au tableau suivant:
Colonies <SEP> Caractères
<tb> Souches
<tb> Diamètre <SEP> Couleur <SEP> des <SEP> bêta- <SEP> bêta- <SEP> Indole* <SEP> T.D.A.
<tb> glucuronidase <SEP> glucosidase
<tb> colonies
<tb> E. <SEP> coli <SEP> K. <SEP> CIP <SEP> 54.8 <SEP> 1,5 <SEP> à <SEP> 2,5 <SEP> mm <SEP> Pourpre <SEP> + <SEP> Positif <SEP> Négatif <SEP> Positif <SEP> Négatif
<tb> E. <SEP> coli <SEP> 1,5 <SEP> à <SEP> 2,5 <SEP> Pourpre(+) <SEP> Positif <SEP> Négatif <SEP> Positif <SEP> Négatif
<tb> S.<SEP> sonnel <SEP> ATCC <SEP> 25931 <SEP> Pourpre <SEP> Positif <SEP> Négatif <SEP> Négatif <SEP> Négatif
<tb> 2 <SEP> à <SEP> 3 <SEP> mm <SEP> Bleue <SEP> Négatif <SEP> Positif <SEP> Négatif <SEP> Négatif
<tb> E. <SEP> faecalis <SEP> ATCC <SEP> 29212
<tb> 1 <SEP> mm <SEP> Bleue <SEP> Négatif <SEP> Positif <SEP> Négatif <SEP> Négatif
<tb> E. <SEP> faecium <SEP> CIP <SEP> 5432
<tb> 1 <SEP> mm <SEP> Bleue <SEP> Négatif <SEP> Positif <SEP> Positif <SEP> Négatif
<tb> K. <SEP> oxytoca
<tb> 3 <SEP> mm <SEP> Orange <SEP> Négatif <SEP> Négatif <SEP> Négatif <SEP> Positif
<tb> P. <SEP> mirabilis <SEP> ATCC <SEP> 25933 <SEP> 2 <SEP> mm <SEP> Orange <SEP> Négatif <SEP> Négatif <SEP> Positif <SEP> Positif
<tb> P. <SEP> Stuartii <SEP> 2 <SEP> mm <SEP> Blanche <SEP> Négatif <SEP> Négatif <SEP> Négatif <SEP> Négatif
<tb> 1 <SEP> à <SEP> 2 <SEP> mm
<tb> S. <SEP> aureus <SEP> ATCC <SEP> 25933
<tb> Colonies <SEP> Characters
<tb> Strains
<tb> Diameter <SEP> Color <SEP> of <SEP> beta- <SEP> beta- <SEP> Indole * <SEP> TDA
<tb> glucuronidase <SEP> glucosidase
<tb> colonies
<tb> E. <SEP> coli <SEP> K. <SEP> CIP <SEP> 54.8 <SEP> 1.5 <SEP> to <SEP> 2.5 <SE> mm <SEP> Purple <SEP> + <SEP> Positive <SEP> Negative <SEP> Positive <SEP> Negative
<tb> E. <SEP> coli <SEP> 1.5 <SEP> to <SEP> 2.5 <SEP> Purple (+) <SEP> Positive <SEP> Negative <SEP> Positive <SEP> Negative
<tb> S. <SEP> sonnel <SEP> ATCC <SEP> 25931 <SEP> Purple <SEP> Positive <SEP> Negative <SEP> Negative <SEP> Negative
<tb> 2 <SEP> to <SEP> 3 <SEP> mm <SEP> Blue <SEP> Negative <SEP> Positive <SEP> Negative <SEP> Negative
<tb> E. <SEP> faecalis <SEP> ATCC <SEP> 29212
<tb> 1 <SEP> mm <SEP> Blue <SEP> Negative <SEP> Positive <SEP> Negative <SEP> Negative
<tb> E. <SEP> faecium <SEP> CIP <SEP> 5432
<tb> 1 <SEP> mm <SEP> Blue <SEP> Negative <SEP> Positive <SEP> Positive <SEP> Negative
<tb> K. <SEP> oxytoca
<tb> 3 <SEP> mm <SEP> Orange <SEP> Negative <SEP> Negative <SEP> Negative <SEP> Positive
<tb> P. <SEP> mirabilis <SEP> ATCC <SEP> 25933 <SEP> 2 <SEP> mm <SEP> Orange <SEP> Negative <SEP> Negative <SEP> Positive <SEP> Positive
<tb> P. <SEP> Stuarti <SEP> 2 <SEP> mm <SEP> White <SEP> Negative <SEP> Negative <SEP> Negative <SEP> Negative
<tb> 1 <SEP> to <SEP> 2 <SEP> mm
<tb> S. <SEP> aureus <SEP> ATCC <SEP> 25933
<Tb>
* : la révélation du caractère indole s'effectue en déposant 1 goutte de réactif de Kovacs sur une colonie isolée : - caractère indole + : virage rapide du réactif au rouge - caractère indole - : pas de virage du réactif. *: the revelation of the indole character is carried out by depositing 1 drop of Kovacs reagent on an isolated colony: - indole + character: rapid turn of the reagent to red - indole character -: no change in the reagent.
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996040980A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Idexx Laboratories, Inc. | Method and composition for detecting bacterial contamination in food products |
| FR2767535A1 (en) * | 1997-08-20 | 1999-02-26 | Bio Merieux | Medium for culture and identification of different Candida species, especially C. albicans and C. tropicalis |
| WO2004063392A2 (en) | 2003-01-10 | 2004-07-29 | Centro Nacional De Biopreparados | Selective culture medium for the isolation and/or detection of species in the streptococcus genus |
| EP2465939A3 (en) * | 2005-02-10 | 2012-09-12 | bioMérieux | Medium for the specific detection of resistant organisms |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3870601A (en) * | 1973-05-04 | 1975-03-11 | Schering Corp | Novel diagnostic system for differentiation of enterobacteriaceae |
| GB2050418A (en) * | 1979-05-25 | 1981-01-07 | Api Labor | Detecting salmonella and serratia and distinguishing them from proteus and providencia |
| EP0282733A2 (en) * | 1987-03-17 | 1988-09-21 | HER MAJESTY THE QUEEN in right of the Province of Ontario, | Method of enumerating escherichia coli |
| DE3735824C1 (en) * | 1987-07-02 | 1988-10-27 | Schoeller Lebensmittel | Method for the quantitative determination of coli bacteria using a rapid test |
| WO1992012259A1 (en) * | 1990-12-28 | 1992-07-23 | Bio Merieux | METHOD AND MEDIUM FOR DETECTING $i(SALMONELLA) |
| US5210022A (en) * | 1990-04-20 | 1993-05-11 | Rcr Scientific, Inc. | Method test media and chromogenic compounds for identifying and differentiating general coliforms and Escherichia coli bacteria |
| WO1994008043A1 (en) * | 1992-10-07 | 1994-04-14 | Alain Rambach | Novel culture medium for the enumeration of e. coli and method of use |
| WO1995003424A1 (en) * | 1993-07-21 | 1995-02-02 | Merck Patent Gmbh | Culture medium for the simultaneous detection of coliform bacteria and escherichia coli |
-
1994
- 1994-12-22 FR FR9415516A patent/FR2728587B1/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3870601A (en) * | 1973-05-04 | 1975-03-11 | Schering Corp | Novel diagnostic system for differentiation of enterobacteriaceae |
| GB2050418A (en) * | 1979-05-25 | 1981-01-07 | Api Labor | Detecting salmonella and serratia and distinguishing them from proteus and providencia |
| EP0282733A2 (en) * | 1987-03-17 | 1988-09-21 | HER MAJESTY THE QUEEN in right of the Province of Ontario, | Method of enumerating escherichia coli |
| DE3735824C1 (en) * | 1987-07-02 | 1988-10-27 | Schoeller Lebensmittel | Method for the quantitative determination of coli bacteria using a rapid test |
| US5210022A (en) * | 1990-04-20 | 1993-05-11 | Rcr Scientific, Inc. | Method test media and chromogenic compounds for identifying and differentiating general coliforms and Escherichia coli bacteria |
| WO1992012259A1 (en) * | 1990-12-28 | 1992-07-23 | Bio Merieux | METHOD AND MEDIUM FOR DETECTING $i(SALMONELLA) |
| WO1994008043A1 (en) * | 1992-10-07 | 1994-04-14 | Alain Rambach | Novel culture medium for the enumeration of e. coli and method of use |
| WO1995003424A1 (en) * | 1993-07-21 | 1995-02-02 | Merck Patent Gmbh | Culture medium for the simultaneous detection of coliform bacteria and escherichia coli |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996040980A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Idexx Laboratories, Inc. | Method and composition for detecting bacterial contamination in food products |
| US6472167B1 (en) | 1995-06-07 | 2002-10-29 | Biocontrol Systems, Inc. | Method and composition for detecting bacterial contamination in food products |
| FR2767535A1 (en) * | 1997-08-20 | 1999-02-26 | Bio Merieux | Medium for culture and identification of different Candida species, especially C. albicans and C. tropicalis |
| EP1536018A3 (en) * | 1997-08-20 | 2005-08-24 | bioMérieux | Culture and specific identification media for different species of Candida and analysis methods |
| WO2004063392A2 (en) | 2003-01-10 | 2004-07-29 | Centro Nacional De Biopreparados | Selective culture medium for the isolation and/or detection of species in the streptococcus genus |
| WO2004063392A3 (en) * | 2003-01-10 | 2004-09-16 | Ct Nac Biopreparados | Selective culture medium for the isolation and/or detection of species in the streptococcus genus |
| EP2465939A3 (en) * | 2005-02-10 | 2012-09-12 | bioMérieux | Medium for the specific detection of resistant organisms |
| US10494658B2 (en) | 2005-02-10 | 2019-12-03 | Biomerieux Sa | Medium for the specific detection of resistant microorganisms |
| US11111518B2 (en) | 2005-02-10 | 2021-09-07 | Biomerieux | Medium for the specific detection of resistant microorganisms |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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