FR2676847A1 - Process for counting reticulocytes and kits intended for this counting - Google Patents
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Abstract
Description
La présente invention concerne un procédé d'énumération des réticulocytes et les kits destinés à cette énumération. The present invention relates to a method of enumerating reticulocytes and the kits intended for this enumeration.
L'hématopoïèse des cellules sanguines, cellules précurseurs connues comme cellules souches pluripotentes, se déroule dans la moelle osseuse. Les cellules souches pluripotentes se différencient entre autres en cellules
CFUE (Erythrocyte Colony Forming Units), puis en érythroblastes, ensuite en réticulocytes et enfin en érythrocytes, transporteurs de l'oxygène. Ces dernières cellules vivent environ 100 jours dans le système sanguin périphérique ou dans la rate avant d'être détruites dans le foie.The hematopoiesis of blood cells, precursor cells known as pluripotent stem cells, takes place in the bone marrow. Pluripotent stem cells differentiate among other things into cells
CFUE (Erythrocyte Colony Forming Units), then in erythroblasts, then in reticulocytes and finally in erythrocytes, oxygen transporters. These latter cells live for about 100 days in the peripheral blood system or in the spleen before being destroyed in the liver.
Bien que le système de différenciation de la lignée érythrocytaire, jusqu'au stade réticulocytaire, se trouve dans la moelle osseuse, quelques réticulocytes se sont régulièrement trouvés dans le sang périphérique. Although the differentiation system of the erythrocyte line, up to the reticulocytic stage, is found in the bone marrow, some reticulocytes have been regularly found in peripheral blood.
Le nombre des réticulocytes du sang périphérique est une mesure de l'activité biologique de la moelle osseuse, indicateur important dans le diagnostic différentiel des anémies. The number of reticulocytes in peripheral blood is a measure of the biological activity of the bone marrow, an important indicator in the differential diagnosis of anemia.
Les réticulocytes et les érythrocytes sont des cellules anucléées : le principe, sur lequel reposent les méthodes d'énumération actuelles, est basé sur le repérage de l'appareil biosynthétique de réticulocytes. Cet appareil biosynthétique inclut la présence de ribosomes et de d'ARNm qui sont impliqués dans la synthèse de l'hémoglobine. Reticulocytes and erythrocytes are anucleated cells: the principle, on which the current enumeration methods are based, is based on the identification of the biosynthetic apparatus of reticulocytes. This biosynthetic device includes the presence of ribosomes and mRNA which are involved in the synthesis of hemoglobin.
On opère donc une coloration des ribosomes dans les réticulocytes, puis procède à une énumération des réticulocytes par microscopie. Ribosomes are then stained in the reticulocytes, then a microscopy of the reticulocytes is carried out.
Une autre méthode d'énumération des réticulocytes utilise un marqueur fluorescent d'ARN, le "Thiazole orange" et une analyse cytométrique. Cette méthode présente notamment l'inconvénient d'être peu fiable pour des échantillons renfermant un pourcentage de réticulocytes inférieur à 2% ; cet inconvénient est majeur car les valeurs normales de réticulocytes se situent à environ 1t. Another method of enumerating reticulocytes uses a fluorescent RNA marker, "Thiazole orange" and cytometric analysis. This method has the particular disadvantage of being unreliable for samples containing a percentage of reticulocytes of less than 2%; this drawback is major because the normal reticulocyte values are around 1 t.
De plus, cette méthode ne permet pas d'énumérer les réticulocytes dans certaines situations pathologiques ou les globules rouges sont parasités.In addition, this method does not make it possible to list the reticulocytes in certain pathological situations where the red blood cells are parasitized.
I1 serait souhaitable de disposer d'un procédé excluant une fausse énumération due à la présence dans le sang d'éléments qui ne soient pas d'origine érythrocytaire ou réticulocytaire. It would be desirable to have a process which excludes a false enumeration due to the presence in the blood of elements which are not of erythrocyte or reticulocytary origin.
Un tel procédé, de plus, devrait de même pouvoir permettre une énumération des réticulocytes fiable et précise même si les réticulocytes sont faiblement représentés dans l'échantillon. Such a method, moreover, should likewise allow a reliable and precise enumeration of the reticulocytes even if the reticulocytes are poorly represented in the sample.
C'est pourquoi la présente demande a également pour objet un procédé d'énumération des réticulocytes caractérisé en ce que l'on fait réagir un échantillon sanguin humain avec
- un composé caractérisé par une longueur d'onde LO1 à affinité spécifique pour l'ensemble des cellules anucléées de la lignée érythocytaire, et avec
- un composé caractérisé par une longueur d'onde L02 à affinité spécifique restreinte aux seuls réticulocytes,
puis soumet ledit échantillon à une détection desdites longueurs d'ondes.This is why the present application also relates to a process for enumerating reticulocytes, characterized in that a human blood sample is reacted with
- a compound characterized by a LO1 wavelength with specific affinity for all of the anucleated cells of the erythocytic line, and with
- a compound characterized by a wavelength L02 with specific affinity restricted to reticulocytes only,
then subjecting said sample to detection of said wavelengths.
Le composé à affinité spécifique pour l'ensemble des cellules anucléées de la lignée érythocytaire peut être, par exemple, un anticorps, notamment un composé ayant une relation spécifique avec un élément présent chez les seules cellules anucléées de la lignée érythrocytaire, plus particulièrement avec la glycophorine A. The compound with specific affinity for all of the anucleated cells of the erythrocyte line can be, for example, an antibody, in particular a compound having a specific relationship with an element present only in the anucleated cells of the erythrocytic line, more particularly with the glycophorin A.
On retient tout particulièrement les anticorps anti-glycophorine A, et tout particulièrement, l'anticorps monoclonal de souris anti-glycophorine A humaine commercialisé par la société IMMUNOTECH (France) produit par l'hybridome D 2.10. On peut citer aussi les anticorps antiglyphorine A humaine commercialisés par Sigma Diagnostics, P.O. Box 14508 St Louis MO 63178 US, sous la référence Anti Glycophorin, MC-27 ou par DAKOPATTS A/S
Productionsveg 42 P.O. Box 1359 DK-2600 Glostrup, Danemark, sous la référence MO Anti-Hu Glycophorin A, M819.The anti-glycophorin A antibodies are used in particular, and very particularly the mouse anti-glycophorin A mouse monoclonal antibody marketed by the company IMMUNOTECH (France) produced by the hybridoma D 2.10. Mention may also be made of the human antiglyphorin A antibodies marketed by Sigma Diagnostics, PO Box 14508 St Louis MO 63178 US, under the reference Anti Glycophorin, MC-27 or by DAKOPATTS A / S
Productionsveg 42 PO Box 1359 DK-2600 Glostrup, Denmark, under the reference MO Anti-Hu Glycophorin A, M819.
Le composé ci-dessus peut être par lui-même doué d'une capacité d'absorption et/ou d'émission de la longueur d'onde Lol, éventuellement après avoir reçu un rayonnement d'excitation. Toutefois, il s'agira de préférence d'un dérivé ayant une affinité spécifique pour l'ensemble des cellules anucléées de la lignée érythocytaire modifié, par exemple par couplage avec un fluorochrome, pour le rendre capable d'une telle émission ou d'une telle absorption. The above compound can by itself be endowed with an absorption and / or emission capacity of the wavelength Lol, possibly after having received an excitation radiation. However, it will preferably be a derivative having a specific affinity for all of the anucleated cells of the erythocytic line modified, for example by coupling with a fluorochrome, to make it capable of such emission or of a such absorption.
Comme fluorochromes on peut citer par exemple des colorants pour laser (laser dyes), notamment la phycoérythrine et la Fluoroscéine isothiocyanate (FITC) ou les couples de fluorochromes capables d'utiliser le même rayonnement excitateur. Examples of fluorochromes include laser dyes (laser dyes), in particular phycoerythrin and Fluoroscéine isothiocyanate (FITC) or pairs of fluorochromes capable of using the same excitation radiation.
Par "fluorochrome" l'on entend un dérivé capable d'absorber spécifiquement un rayonnement excitateur de longueur d'onde spécifique en reémettant un rayonnnement de moindre énergie. On retient en particulier les dérivés de la fluorescéine, notamment leurs isocyanates ou isothiocyanates, capables de réagir avec les fonctions amino libres, par exemple d'un anticorps. By "fluorochrome" is meant a derivative capable of specifically absorbing excitation radiation of specific wavelength by reemitting radiation of lower energy. In particular, fluorescein derivatives are retained, in particular their isocyanates or isothiocyanates, capable of reacting with the free amino functions, for example of an antibody.
Le couplage du fluorochrome peut être réalisé selon les méthodes connues en elle-mêmes et notamment par le brevet US N 4.520.110, pour la phycoérythrine par exemple. The coupling of the fluorochrome can be carried out according to the methods known in themselves and in particular by US patent N 4,520,110, for phycoerythrin for example.
Le composé caractérisé par une longueur d'onde
LO2 à affinité spécifique aux seuls réticulocytes, répondra à des caractéristiques analogues au composé ci-dessus décrit.The compound characterized by a wavelength
LO2 with specific affinity to reticulocytes only, will respond to characteristics analogous to the compound described above.
I1 en diffèrera par sa spécificité qui sera dirigée vers les seuls réticulocytes, notamment vis-à-vis du récepteur de la transferrine, absent chez les érythrocytes. Il en diffèrera encore par sa longueur d'onde LO2 différente de la longueur d'onde Loi ci-dessus. I1 will differ by its specificity which will be directed only to reticulocytes, in particular with respect to the transferrin receptor, absent in erythrocytes. It will still differ from it by its wavelength LO2 different from the wavelength Loi above.
Dans la présente demande, par "affinité spécifique restreinte aux seuls réticulocytes" l'on entend que ledit composé a une affinité pour les seuls réticulocytes vis-à-vis des érythrocytes, étant entendu qu'il peut avoir une affinité pour d'autres composants de l'organisme humain. In the present application, by "specific affinity restricted to reticulocytes only" is meant that said compound has an affinity for reticulocytes only vis-à-vis erythrocytes, it being understood that it may have an affinity for other components of the human body.
Comme tels composés, on peut citer en particulier les anticorps anti-récepteur de la transferrine, notamment les anticorps IgG1 de souris anti-récepteur de la transferrine humaine, comme l'anticorps commercialisé par
Immunotech, référence 0482, ou celui commercialisé par
DAKOPATTS A/S, référence Mo Anti-Hu transferrin receptor CD71, M734.As such compounds, mention may be made in particular of anti-transferrin receptor antibodies, in particular mouse IgG1 antibodies against human transferrin receptor, such as the antibody marketed by
Immunotech, reference 0482, or the one marketed by
DAKOPATTS A / S, reference Mo Anti-Hu transferrin receptor CD71, M734.
Les longueurs d'onde LO1 et LO2 utilisées pourront se trouver tant dans le spectre visible que dans le spectre invisible. Elles seront de préférence capables d'être mesurées à l'aide de cytomètre de flux, permettant l'analyse différentielle d'une grande quantité de cellules dans un temps très court. The wavelengths LO1 and LO2 used can be found both in the visible spectrum and in the invisible spectrum. They will preferably be able to be measured using a flow cytometer, allowing differential analysis of a large quantity of cells in a very short time.
Le procédé selon l'invention permet ainsi de déterminer d'une part la quantité de cellules anucléées et d'autre part parmi celles-ci les seuls réticulocytes. The method according to the invention thus makes it possible to determine on the one hand the quantity of anucleated cells and on the other hand among them the only reticulocytes.
Dans le cas où l'on met en oeuvre des anticorps à titre de composés à affinité spécifique, ceux-ci peuvent être l'objet d'une fixation non-spécifique. C'est pourquoi, l'on fait réagir de préférence en outre un second échantillon sanguin identique au précédent, avec une immunoglobuline ne reconnaissant aucun élément humain, de préférence une IgG1, d'une sous-classe identique à celle des anticorps avec spécificité pour les réticulocytes, comme l'anticorps de contrôle IgG1 commercialisé par
Immunotech, référence 0571, ou par Becton Dickinson, P.O.In the case where antibodies are used as compounds with specific affinity, these can be the subject of non-specific fixation. This is why, preferably, a second blood sample identical to the previous one is preferably reacted with an immunoglobulin recognizing no human element, preferably an IgG1, of a subclass identical to that of the antibodies with specificity for reticulocytes, such as the IgG1 control antibody marketed by
Immunotech, reference 0571, or by Becton Dickinson, PO
Box 7375 Mountain View, CA 34039 US, sous la référence
Control Mouse IgGl Catalog No 9040.Box 7375 Mountain View, CA 34039 US, under reference
Control Mouse IgGl Catalog No 9040.
L'utilisation d'un tel réactif de contrôle, doté de la longueur d'onde LO2 ci-dessus, par exemple par conjugaison avec le même fluorochrome que celui utilisé pour l'anticorps caractéristique des réticulocytes, par exemple un anticorps anti-récepteur de la transferrine, permet l'énumération différentielle des cellules ayant une fluorescence non-spécifique, vis-à-vis des cellules ayant une fluorescence spécifique pour les réticulocytes et donc de corriger les mesures pour obtenir le nombre exacte de réticulocytes. The use of such a control reagent, provided with the wavelength LO2 above, for example by conjugation with the same fluorochrome as that used for the antibody characteristic of reticulocytes, for example an anti-receptor antibody transferrin, allows the differential enumeration of cells having a non-specific fluorescence, vis-à-vis cells having a specific fluorescence for reticulocytes and therefore to correct the measurements to obtain the exact number of reticulocytes.
C'est pourquoi la présente demande a également pour objet le procédé défini ci-dessus, dans lequel l'on met en oeuvre des anticorps spécifiques de l'ensemble des cellules anucléées de la lignée érythocytaire d'une part, et spécifiques des seuls érythrocytes d'autre part, caractérisé en ce qu'en outre, l'on fait réagir un échantillon sanguin identique à celui ci-dessus avec une immunoglobuline ne reconnaissant aucun élément humain de manière spécifique, de préférence une IgG1 appartenant notamment à la même sous-classe que l'anticorps antirécepteur de la transferrine, particulièrement de souris. This is why the present application also relates to the process defined above, in which one implements antibodies specific for all the anucleated cells of the erythocytic line on the one hand, and specific only for erythrocytes on the other hand, characterized in that, in addition, a blood sample identical to that above is reacted with an immunoglobulin not recognizing any human element in a specific manner, preferably an IgG1 belonging in particular to the same sub- class as the transferrin receptor antibody, particularly from mice.
La présente demande a enfin pour objet les kits destinés à l'énumération ci-dessus caractérisés en ce qu'ils renferment
- un composé caractérisé par une longueur d'onde LOI à affinité spécifique pour l'ensemble des cellules anucléées de la lignée érythocytaire, et
- un composé caractérisé par une longueur d'onde LO2 à affinité spécifique pour les seuls réticulocytes.The present application finally relates to the kits intended for the above enumeration characterized in that they contain
- a compound characterized by an LOI wavelength with specific affinity for all the anucleated cells of the erythocytic line, and
- a compound characterized by a LO2 wavelength with specific affinity for reticulocytes only.
Le composé, caractérisé par une longueur d'onde
LO1 à affinité spécifique pour l'ensemble des cellules anucléées de la lignée érythrocytaire, comprend de préférence un anticorps anti-glycophorine A humaine. La longueur d'onde LO1 est de préférence fournie par couplage avec la phycoérythrine ou le FITC.The compound, characterized by a wavelength
LO1 with specific affinity for all of the anucleated cells of the erythrocyte line, preferably comprises an anti-human glycophorin A antibody. The LO1 wavelength is preferably provided by coupling with phycoerythrin or FITC.
Le composé caractérisé par une longueur d'onde
LO2 à affinité spécifique pour les seuls réticulocytes comprend de préférence un anticorps anti-récepteur de la transferrine humaine, de préférence un anticorps de souris.The compound characterized by a wavelength
LO2 with specific affinity for reticulocytes only preferably comprises an anti-human transferrin receptor antibody, preferably a mouse antibody.
La longueur d'onde LO2 sera de préférence procurée par le
FITC (Fluoresceine isothiocyanate) ou la phycoérythrine.The LO2 wavelength will preferably be provided by the
FITC (Fluoresceine isothiocyanate) or phycoerythrin.
Les kits ci-dessus renfermeront de préférence en outre un anticorps de contrôle IgGl incapable de reconnaître des éléments humains de manière spécifique, avantageusement un anticorps IgGl de souris. L'anticorps de contrôle se verra avantageusement conférer la longueur d'onde LO2 par le même fluorochrome que celui ci-dessus, notamment par le FITC ou la phycoérythrine. The above kits will preferably further contain an IgG1 control antibody incapable of specifically recognizing human elements, preferably a mouse IgG1 antibody. The control antibody will advantageously be given the LO2 wavelength by the same fluorochrome as above, in particular by FITC or phycoerythrin.
tes kits renfermeront de préférence l'anticorps de contrôle à la même concentration en immunoglobuline, notamment de souris, que la préparation d'anticorps à affinité spécifique pour les seuls réticulocytes, notamment anti-récepteurs de la transferrine. your kits will preferably contain the control antibody at the same concentration of immunoglobulin, in particular of mice, as the preparation of antibodies with specific affinity for reticulocytes only, in particular anti-transferrin receptors.
Les anticorps éventuellement mis en oeuvre dans le cadre de la présente invention seront de préférence monoclonaux. Ils seront de plus avantageusement d'origine murine. The antibodies optionally used in the context of the present invention will preferably be monoclonal. They will more advantageously be of murine origin.
Les exemples qui suivent illustrent la présente sans toutefois la limiter. The examples which follow illustrate the present without limiting it.
EXEMPLE 1
A titre d'exemple, on a effectué des énumérations de réticulocytes avec un anticorps monoclonal de souris anti-glycophorine A humaine (Immunotech, clone
D2.10) couplé à la phycoérythrine et un anticorps monoclonal IgG1 de souris anti-récepteur de la transferrine humaine (Immunotech, clone YDJ.122) ainsi qu'un anticorps de contrôle IgGl couplé au FITC.EXAMPLE 1
As an example, enumerations of reticulocytes were carried out with a mouse anti-glycophorin A mouse monoclonal antibody (Immunotech, clone
D2.10) coupled to phycoerythrin and a mouse IgG1 monoclonal antibody anti-human transferrin receptor (Immunotech, clone YDJ.122) as well as an IgG1 control antibody coupled to FITC.
Le couplage de l'anticorps antiglycophorine A à la phycoérythrine a été effectué selon la technique décrite par Stryer et al, US Patent 4.520.110. Après la procédure de couplage telle que décrite, le produit couplé a été purifié par filtration sur gel. Une quantité de 20% de l'anticorps a été retrouvée sous la forme de conjugué. The coupling of the anti-glycophorin A antibody to phycoerythrin was carried out according to the technique described by Stryer et al, US Patent 4,520,110. After the coupling procedure as described, the coupled product was purified by gel filtration. 20% of the antibody was found in the form of a conjugate.
Une préparation standard (réf. IOT 0773) de 1' anticorps anti-glycophorine A a été calibrée par cytométrie de flux avec des globules rouges du sang normal. A standard preparation (ref. IOT 0773) of the anti-glycophorin A antibody was calibrated by flow cytometry with normal red blood cells.
On a dilué la préparation de telle sorte que la quantité de 0,0025 ml de préparation a été suffisante pour saturer les molécules de glycophorine de surface des érythrocytes d'une quantité de 0,1 ml de sang dilué ou 1/100ème (environ 5.106 érythrocytes). Le produit a été stabilisé par 0,2 mg/ml d'albumine de serum de veau.The preparation was diluted so that the amount of 0.0025 ml of preparation was sufficient to saturate the surface glycophorin molecules of the erythrocytes with an amount of 0.1 ml of diluted blood or 1 / 100th (approximately 5.106 erythrocytes). The product was stabilized with 0.2 mg / ml of bovine serum albumin.
Un couplage au FITC de l'anticorps antirécepteur de la transferrine a été effectué selon les méthodes classiques (voir par exemple L. Hudson and F.C. Coupling to the FITC of the transferrin receptor antibody was carried out according to conventional methods (see for example L. Hudson and F.C.
Hay, Practical Immunology, Blackwell Scientific Publications).Hay, Practical Immunology, Blackwell Scientific Publications).
Une préparation standard (réf. IOT 0483) d'anticorps anti-récepteur de la transferrine a été calibrée par cytométrie de flux avec la quantité de 0,1 ml d'une suspension de cellules d d'une lignée T leucémique humaine HPB ALL. 0,01 ml de préparation a été suffisant pour saturer les sites du récepteur de la transferrine sur la surface de 5.105 cellules HPB ALL. A standard preparation (ref. IOT 0483) of antibodies to the transferrin receptor was calibrated by flow cytometry with the quantity of 0.1 ml of a suspension of cells d of a human leukemic T line HPB ALL. 0.01 ml of preparation was sufficient to saturate the transferrin receptor sites on the surface of 5.105 HPB ALL cells.
L'anticorps de contrôle IgGl de souris a été dilué de manière à se trouver en isoconcentration d'IgGl de souris avec la préparation d'anticorps antirécepteur de la transferrine. The mouse IgG1 control antibody was diluted so as to be in isoconcentration of mouse IgGl with the preparation of transferrin anti-receptor antibody.
Des prises de sang ont été effectuées à l'aide d'un dispositif contenant de 1'EDTA comme anticoagulant pour prélever le sang (seringue standard pour comptage de sang total). Dans un délai de 0 à 6 heures, une quantité de 0,01 ml de sang en EDTA a été diluée au 1/100 dans un tube
Balcon 2063 par adjonction de 1 ml de PBS-Dulbecco. Des aliquots de 0,1 ml de sang dilué ont été redistribués dans des tubes Falcon 2063 et mis à 4 C.Blood samples were taken using a device containing EDTA as an anticoagulant for drawing blood (standard syringe for whole blood counting). Within 0 to 6 hours, 0.01 ml of EDTA blood was diluted 1/100 in a tube
Balcony 2063 by adding 1 ml of PBS-Dulbecco. Aliquots of 0.1 ml of diluted blood were redistributed in Falcon 2063 tubes and brought to 4 C.
Une quantité de 0,005 ml de la "préparation standard" de l'anti-glycophorine A conjuguée à la phycoérythrine et une quantité de 0,015 ml de la "préparation standard" de l'anti-récepteur de la transferrine ont été pipettés dans un tube marqué "cl71". Une quantité de 0,005 ml de la préparation standard de l'anti-glycophorine A conjuguée à la phycoérythrine et de 0,015 ml de la "préparation standard" de l'anticorps de contrôle IgGl couplé au FITC ont été pipettés dans un deuxième tube marqué "contrôle". 0.005 ml of "standard preparation" of anti-glycophorin A conjugated with phycoerythrin and 0.015 ml of "standard preparation" of transferrin anti-receptor were pipetted into a labeled tube "cl71". 0.005 ml of the standard preparation of anti-glycophorin A conjugated with phycoerythrin and 0.015 ml of the "standard preparation" of the IgG1 control antibody coupled to FITC were pipetted into a second tube marked "control ".
Les deux tubes ont été agités par vortex et gardés à 4" C pendant 21 minutes pour effectuer le marquage des cellules. Les tubes ont été agités toutes les 7 minutes. A la fin de la réaction, 4 ml de PBS-Dulbecco ont été rajoutés à chaque tube et les tubes centrifugés à 200 G pendant 3 minutes. The two tubes were shaken by vortex and kept at 4 "C for 21 minutes to carry out labeling of the cells. The tubes were shaken every 7 minutes. At the end of the reaction, 4 ml of PBS-Dulbecco were added to each tube and the tubes centrifuged at 200 G for 3 minutes.
Le surnageant limpide a été aspiré et les cellules resuspendues dans 300 ,ul de PBS-Dulbecco. Ensuite les cellules sont conservées à 4" C et analysées par cytomêtrie de flux dans un délai de 6 heures. The clear supernatant was aspirated and the cells resuspended in 300 µl PBS-Dulbecco. Then the cells are stored at 4 "C and analyzed by flow cytometry within 6 hours.
L'analyse cytométrique a été effectuée sur un appareil Facscan (Becton Dickinson, Mountain View). Side
Scatter et Forward Scatter Gains sont en échelle logarithmique avec un détecteur de E00 pour Forward Scatter et un détecteur de 360 pour Side Scatter.Cytometric analysis was performed on a Facscan device (Becton Dickinson, Mountain View). Side
Scatter and Forward Scatter Gains are on a logarithmic scale with an E00 detector for Forward Scatter and a 360 detector for Side Scatter.
Les fluorescences 1 et 2 sont en échelle logarithmique avec un détecteur FL1 à 660 V et un détecteur
FL2 à 555 V.Fluorescences 1 and 2 are on a logarithmic scale with a FL1 detector at 660 V and a detector
FL2 at 555 V.
Le "Scatter Live Gate" a été placé de telle façon que les débris cellulaires et les plaquettes sont exclus de l'analyse, 20 000 évènements ont été analysés et les données accumulées en "list mode". The "Scatter Live Gate" was placed in such a way that cellular debris and platelets were excluded from the analysis, 20,000 events were analyzed and the data accumulated in "list mode".
Les données ont été évaluées à l'aide d'une fenêtre d'analyse orthogonale sur FL1 et FL2 dot plot. Le réglage de la fenêtre à l'aide du tube contrôle est fait de telle sorte que 0,2t des évènements de la préparation contrôle montrent un marquage simultané en double couleur (voir fig. 1). The data were evaluated using an orthogonal analysis window on FL1 and FL2 dot plot. The window is adjusted using the control tube so that 0.2t of the events of the control preparation show simultaneous marking in double color (see fig. 1).
La figure 1 représente l'analyse cytométrique des réticulocytes dans une population de 20 000 évènements érythrocytes de quatre individus différents (A, B, C et D) après marquage par un mélange d'anticorps anti-glycophorine
A couplé à la phycoérythrine et un anticorps IgG1 contrôle couplé à la FITC (I) ou un anticorps anti-récepteur de la transferrine (II). FIG. 1 represents the cytometric analysis of reticulocytes in a population of 20,000 erythrocyte events from four different individuals (A, B, C and D) after labeling with a mixture of anti-glycophorin antibodies
Has coupled to phycoerythrin and a control IgG1 antibody coupled to FITC (I) or an anti-transferrin receptor (II) antibody.
Dans les fenêtres rectangulaires R1 se trouvent les évènements correspondant aux réticulocytes : la valeur indiquée sous la fenêtre indique pour chaque individu A, B,
C et D le pourcentage de réticulocytes par rapport à la population totale de cellules anucléées de la série érythrocytaire, à savoir réticulocytes et érythrocytes.In the rectangular windows R1 are the events corresponding to the reticulocytes: the value indicated under the window indicates for each individual A, B,
C and D the percentage of reticulocytes in relation to the total population of anucleated cells of the erythrocyte series, namely reticulocytes and erythrocytes.
Dans la colonne de gauche (I) on trouve pour chaque individu sur la même ligne la valeur de la fixation non spécifique qui permet donc la correction précise de la valeur obtenue dans la colonne (II). In the left column (I) we find for each individual on the same line the value of the non-specific fixation which therefore allows the precise correction of the value obtained in column (II).
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|---|---|---|---|
| FR9106365A FR2676847A1 (en) | 1991-05-22 | 1991-05-22 | Process for counting reticulocytes and kits intended for this counting |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2676847A1 true FR2676847A1 (en) | 1992-11-27 |
Family
ID=9413168
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR9106365A Withdrawn FR2676847A1 (en) | 1991-05-22 | 1991-05-22 | Process for counting reticulocytes and kits intended for this counting |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR2676847A1 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1981002930A1 (en) * | 1980-04-09 | 1981-10-15 | University Patents Inc | Immunoassay for measurement of reticulocytes |
| EP0219309A1 (en) * | 1985-10-11 | 1987-04-22 | Smithkline Beecham Corporation | Methods and reagents for performing analyses of subpopulations of particles |
| EP0317156A1 (en) * | 1987-11-09 | 1989-05-24 | Becton, Dickinson and Company | Method for analysis of hematopoietic cells in a sample |
-
1991
- 1991-05-22 FR FR9106365A patent/FR2676847A1/en not_active Withdrawn
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1981002930A1 (en) * | 1980-04-09 | 1981-10-15 | University Patents Inc | Immunoassay for measurement of reticulocytes |
| EP0219309A1 (en) * | 1985-10-11 | 1987-04-22 | Smithkline Beecham Corporation | Methods and reagents for performing analyses of subpopulations of particles |
| EP0317156A1 (en) * | 1987-11-09 | 1989-05-24 | Becton, Dickinson and Company | Method for analysis of hematopoietic cells in a sample |
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