FR2672494A1 - PROPHYLACTIC FERMENTS PROMOTING PREVENTION OF DENTAL CARIES. - Google Patents

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Abstract

Prophylactic ferments for combatting dental caries on account of their competitive ecological properties in relation to possible cariogenic strains and agro-food properties enabling them to be used in industry. The prophylactic ferments consist of different bacteria capable of entering into competition with other oral flora bacteria, such as avirulent strains of Streptococcus, Lactobacillus and Stomatococcus, or any other avirulent bacterial or mutant species corresponding to the oral health. Said prophylactic ferments can be used alone, or preferably in association, for example, as coferments in the manufacture of yoghurts, kefirs and other fermented milk-based products, or as lyophilizing products in the form of tablets. The prophylactic ferments according to the invention are for use especially in the agro-food, healthfoods and pharmaceutical industries.

Description

FERMENTS PROPHYLACTIQUES FAVORISANT LA PREVENTION A A ~A s  :F
DENTAIRE
La présente invention concerne des ferments prophylactiques qui favorisent la
prévention de la carie dentaire grâce à des propriétés bactériologiques compétitives
vis-à-vis d'éventuelles flores cariogènes et à des propriétés agro-alimentaires
permettant leur utilisation industrielle. Ces ferments sont particulièrement adaptés aux
industries alimentaires et diététiques, par exemple associés aux ferments lactiques pour
la fabrication de yaourts et autres produits à base de laits fermentés, ainsi qu'à l'industrie
pharmaceutique, par exemple sous forme de comprimés lyophilisés.
PROPHYLACTIC FERMENTS PROMOTING AA PREVENTION ~ A s Â: F
DENTAL
The present invention relates to prophylactic enzymes which promote the
prevention of tooth decay thanks to competitive bacteriological properties
vis-à-vis possible cariogenic flora and food-processing properties
allowing their industrial use. These ferments are particularly suitable for
food and dietetic industries, for example associated with lactic ferments for
the manufacture of yoghurts and other fermented milk products, as well as in industry
pharmaceutical, for example in the form of lyophilized tablets.

La carie dentaire est une maladie infectieuse transmissible largement répandue dont
le principal responsable est Streptococcus mutans, une bactérie capable de détruire l'émail et la dentine en libérant des acides dans le milieu buccal lors de la dégradation des
hydrates de carbones. Selon la nomenclature en vigueur (Bergey's Manual 8éme édition,
1984 et 1986) I'espèce S. mutans est en fait formée de huit sérotypes dénommés de a à h
S. mufans proprement dit (sérotypes c, e, f), S. rattus (sérotype a), S. cricetus
(sérotype b) et S. sobrinus (sérotypes d, g, h). Les espèces cariogènes de ce groupe (S.
Tooth decay is a widely spread infectious disease including
the main culprit is Streptococcus mutans, a bacterium capable of destroying enamel and dentin by releasing acids in the oral environment during the degradation of
carbohydrates. According to the nomenclature in force (Bergey's Manual 8th edition,
1984 and 1986) the species S. mutans is in fact formed by eight serotypes named from a to h
S. mufans proper (serotypes c, e, f), S. rattus (serotype a), S. cricetus
(serotype b) and S. sobrinus (serotypes d, g, h). The cariogenic species of this group (S.

mutans c et f, S. sobrinus d et g) sont caractérisées en particulier par leur aptitude à
coloniser les tissus mous grâce à des adhésines spécifiques, à coloniser les tissus durs par
des polysaccharides extra-cellulaires (dextrane ou glucanes), à coaggréger avec les
autres bactéries orales, à former rapidement des acides à partir des sucres et à survivre à
des pH très bas. D'autres bactéries orales peuvent potentialiser ce pouvoir cariogène dans
les lésions carieuses débutantes ou établies, en particulier d'autres espèces de genre
Streptococcus et certaines espèces des genres Actinomyces (A. naeslundii et A.
mutans c and f, S. sobrinus d and g) are characterized in particular by their ability to
colonize soft tissue with specific adhesins, colonize hard tissue by
extra-cellular polysaccharides (dextran or glucans), to coaggregate with
other oral bacteria, quickly form acids from sugars and survive
very low pH. Other oral bacteria can potentiate this cariogenic power in
early or established carious lesions, in particular other species of the genus
Streptococcus and certain species of the genera Actinomyces (A. naeslundii and A.

odonfolyticus) et Lactobacillus (L. casei et L. fermentum). La carie entraîne une
destruction progressive et irréversible de la dent atteinte qui,
non soignée, peut être à l'origine d'infections localisées ou généralisées. Les techniques
préventives actuelles reposent sur une hygiène bucco-dentaire correcte, une
consommation raisonnée d'hydrates de carbone et l'utilisation de produits d'hygiène et de
soins dentaires fluorés. Ces méthodes bien qu'efficaces nécessitent une coopération
individuelle active qui est loin d'être systématiquement observée, surtout chez les enfants,
si bien que la carie reste encore un problème majeur de santé publique.
odonfolyticus) and Lactobacillus (L. casei and L. fermentum). Caries leads to
progressive and irreversible destruction of the affected tooth which,
if left untreated, can cause localized or generalized infections. The techniques
preventive measures are based on correct oral hygiene,
reasoned consumption of carbohydrates and the use of hygiene and
fluoridated dental care. These methods, although effective, require cooperation
active individual which is far from being systematically observed, especially in children,
so much so that cavities are still a major public health problem.

Le dispositif selon l'invention repose sur le principe de compétition
interbactérienne et d'équilibre écologique au sein de la flore orale : il permet de favoriser
la prévention de la carie dentaire par un apport exogène répété, au niveau de la plaque
dentaire, de petites quantités de ferments prophylactiques non virulents susceptibles de
s'opposer à la colonisation des surfaces dentaires par une éventuelle flore cariogène
dominée par des souches pathogènes de S. mutans.En effet, la plaque précoce qui recolonise
l'émail chez les sujets indemnes de caries actives est dominée par des bactéries de type
cocci Gram positif, immobiles, aérotolérants et/ou capsulés, en particulier S. sanguis
(sérotype 1: S. gordonli, sérotype 2 : S. mitiorou S. oralis), S. mimis (sérotypes 1 et 2) et Stomatococcus mucilaginosus, un commensal capsulé non cariogène de la flore orale. Ces différentes espèces se retrouvent en proportions variables selon les individus, la localisation et l'ancienneté des dépôts. Les espèces entrant dans la constitution des ferments prophylactiques sont donc choisies: - parmi toutes les souches non virulentes de bactéries compatibles avec le maintien de l'intégrité bucco-dentaire, - parmi les colonisateurs précoces de la plaque mentionnés ci-dessus en particulier S.
The device according to the invention is based on the principle of competition
interbacterial and ecological balance within the oral flora: it promotes
prevention of tooth decay by repeated exogenous supply, at the level of the plaque
dental, small amounts of non-virulent prophylactic ferments likely to
oppose the colonization of dental surfaces by a possible cariogenic flora
dominated by pathogenic strains of S. mutans. Indeed, the early plaque that recolonizes
enamel in subjects free from active caries is dominated by bacteria of the type
cocci Gram positive, immobile, aerotolerant and / or encapsulated, in particular S. sanguis
(serotype 1: S. gordonli, serotype 2: S. mitiorou S. oralis), S. mimis (serotypes 1 and 2) and Stomatococcus mucilaginosus, a non-cariogenic encapsulated commensal of the oral flora. These different species are found in variable proportions depending on the individuals, the location and the age of the deposits. The species entering into the constitution of the prophylactic ferments are therefore chosen: - from all the non-virulent strains of bacteria compatible with the maintenance of oral integrity, - from the early colonizers of the plaque mentioned above in particular S.

mitis (ATCC 15 909, ATCC 15 912), S. salivarius (ATCC 9758, ATCC 13 419, ATCC 27 945), et Stomatococcus mucilaginosus (ATCC 25 296, CCM 2417, NCTC 10 663), - parmi les souches non virulentes de S. mutans, L. casei (en paticulier L. casei subsp.mitis (ATCC 15 909, ATCC 15 912), S. salivarius (ATCC 9758, ATCC 13 419, ATCC 27 945), and Stomatococcus mucilaginosus (ATCC 25 296, CCM 2417, NCTC 10 663), - among non-virulent strains of S. mutans, L. casei (in particular L. casei subsp.

rhamnosus ATCC 7469, DSM 20 012, DSM 20 021, DSM 20 022, DSM 20 023, DSM 20 245, DSM 20 247), et L, fermentum, - parmi les souches non virulentes de L. acidophilus (ATCG 4356), L. crispatus (ATCC 33 820, VPI 3199), L. gasseri (DSM 20 243) et L. salivarius (L. salivarlus sali va rius
ATCC 1 1 741, L. salivarius salicinus ATCC 11 742) qui ont le double avantage de présenter un tropisme pour le milieu buccal et d'appartenir au groupe des lactobacilles thermophiles directement utilisables comme ferments lactiques.
rhamnosus ATCC 7469, DSM 20 012, DSM 20 021, DSM 20 022, DSM 20 023, DSM 20 245, DSM 20 247), and L, fermentum, - among non-virulent strains of L. acidophilus (ATCG 4356), L . crispatus (ATCC 33 820, VPI 3199), L. gasseri (DSM 20 243) and L. salivarius (L. salivarlus sali va rius
ATCC 1 1,741, L. salivarius salicinus ATCC 11,742) which have the double advantage of presenting a tropism for the oral environment and of belonging to the group of thermophilic lactobacilli directly usable as lactic ferments.

- parmi tous les mutants avirulents dérivés de toutes les espèces mentionnées ci-dessus, - parmi tous les mutants avirulents dérivés d'autres espèces bactériennes et présentant des caractères nouveaux leur permettant d'entrer en compétition écologique avec d'éventuelles flores orales cariogènes, comme par exemple des souches utilisées dans l'industrie laitière (telles que Lactobaclllus bulgaricus et Streptococcus thermophilus) et modifiées de façon à présenter des phénomènes d'adhérence et de coagrégation spécifiques (pili, fimbriae, adhésines) etlou non spécifiques (glycocalyx, capsules, polysaccharides extra-cellulaires de type glucane/dextrane ou fructane/lévane) dans le milieu buccal.- among all avirulent mutants derived from all the species mentioned above, - among all avirulent mutants derived from other bacterial species and having new characteristics allowing them to enter into ecological competition with possible cariogenic oral flora, such as for example strains used in the dairy industry (such as Lactobaclllus bulgaricus and Streptococcus thermophilus) and modified so as to exhibit specific adhesion and coaggregation phenomena (pili, fimbriae, adhesins) and / or non-specific (glycocalyx, capsules, polysaccharides extracellular glucan / dextran or fructan / levane type) in the oral environment.

Cette liste n'est en aucune façon limitative et elle est susceptible d'évoluer en fonction des progrès réalisés dans la connaissance de la flore orale et de l'actualisation taxonomique des espèces en cours ou à venir. Les ferments prophylactiques sont formés de l'une, ou mieux, de plusieurs des espèces mentionnées ci-dessus associées par exemple dans des rapports de 1/1, et peuvent être conservés congelés dans l'azote liquide ou lyophilisés en fonction des objectifs industriels recherchés. II est à noter que ces ferments prophylactiques sont également très différents des flores associées aux parodontopathies, ce qui n'exclut pas un éventuel effet prophylactique supplémentaire dans le cadre des maladies parodontales. This list is in no way limitative and it is likely to evolve according to the progress made in the knowledge of the oral flora and the taxonomic update of the current or future species. The prophylactic ferments are formed from one, or better, of several of the species mentioned above combined for example in ratios of 1/1, and can be stored frozen in liquid nitrogen or lyophilized according to the industrial objectives sought. . It should be noted that these prophylactic enzymes are also very different from the flora associated with periodontopathies, which does not exclude a possible additional prophylactic effect in the context of periodontal diseases.

Les yaourts, khéfirs et autres produits à base de laits fermentés constituent un excellent support pour ce type de prévention puisque les ferments lactiques habituels utilisés pour leur fabrication appartiennent précisément aux genres Lactobaclllus et
Streptococcus. Ces produits laitiers conviennent donc parfaitement à la culture et à la survie des ferments prophylactiques en permettant simultanément un apport de germes vivants immédiatement compétitifs au niveau de la plaque dentaire, et un apport de calcium qui favorise la reminéralisation des fronts carieux déminéralisés.Dans ce cas, les ferments prophylactiques peuvent être utilisés en complément des ferments lactiques habituels à une concentration optimale compte-tenu des impératifs biologiques, techniques et gastronomiques recherchés, par exemple dans une fourchette de concentrations finales allant de 1/106 à 1/1010 par rapport aux ferments lactiques. Ils sont utilisés soit à titre de coferments s'ils supportent les procédés de fabrication et en particulier les contraintes thermiques (par exemple l'association L. salivarius, L acidophilus et L. casei subsp. rhamnosus en proportion 1/1/1), soit par simple addition comme par brassage en fin de fabrication (par exemple l'association L. salivarius, S. salivarius et S.
Yoghurts, khefirs and other products based on fermented milk constitute an excellent support for this type of prevention since the usual lactic ferments used for their manufacture belong precisely to the genera Lactobaclllus and
Streptococcus. These dairy products are therefore perfectly suited to the culture and survival of prophylactic enzymes by simultaneously allowing a supply of immediately competitive live germs at the level of dental plaque, and a supply of calcium which promotes the remineralization of demineralized carious fronts. , the prophylactic ferments can be used in addition to the usual lactic ferments at an optimal concentration taking into account the biological, technical and gastronomic imperatives sought, for example in a range of final concentrations going from 1/106 to 1/1010 compared to ferments lactic. They are used either as co-ferments if they support the manufacturing processes and in particular the thermal constraints (for example the association L. salivarius, L acidophilus and L. casei subsp. Rhamnosus in 1/1/1 proportion), either by simple addition as by stirring at the end of manufacture (for example the association L. salivarius, S. salivarius and S.

mucilaginosus en proportion 1/1/1). Ces ferments prophylactiques sont également intéressants lyophilisés, et distribués par exemple par 1 à 2 millions d'unités sous forme de comprimés pharmaceutiques à sucer lentement avec un excipient approprié tel qu'un hydrate de carbone non fermentescible. En effet, le milieu buccal est un milieu favorable à la rétention (coagrégation bactérienne) puis à la croissance des bactéries lyophilisées (température, pH, humidité, présence de nutriments et de facteurs de croissance, synergie bactérienne, etc...). Ces exemples d'utilisation des ferments prophylactiques ne sont pas limitatifs, et ils peuvent être utilisés sous quelque autre forme que ce soit, en particulier associés à tous les composés chimiques réputés pour avoir un effet préventif contre la carie dentaire, comme par exemple les composés fluorés ou les hydrates de carbones non fermentescibles.mucilaginosus in proportion 1/1/1). These prophylactic ferments are also interesting lyophilized, and distributed for example by 1 to 2 million units in the form of pharmaceutical tablets to be sucked slowly with an appropriate excipient such as a non-fermentable carbohydrate. Indeed, the oral environment is a favorable environment for retention (bacterial coaggregation) and then for the growth of lyophilized bacteria (temperature, pH, humidity, presence of nutrients and growth factors, bacterial synergy, etc.). These examples of use of the prophylactic ferments are not limiting, and they can be used in any other form whatsoever, in particular associated with all the chemical compounds reputed to have a preventive effect against dental caries, such as for example the compounds fluorinated or non-fermentable carbohydrates.

Le dispositif selon l'invention est particulièrement destiné aux industries diététiques, pharmaceutiques et surtout agro-alimentaires en raison de la consommation largement répandue de yaourts et autres produits à base de laits fermentés, notamment chez les enfants pour lesquels la prévention de la carie dentaire est une préoccupation majeure.  The device according to the invention is particularly intended for the dietetic, pharmaceutical and especially agrifood industries due to the widespread consumption of yogurts and other products based on fermented milks, in particular in children for whom the prevention of dental caries is a major concern.

Claims (9)

REVENDICATIONS 1) Ferments prophylactiques caractérisés en ce qu'ils favorisent la prévention de la carie dentaire grâce à des propriétés bactériologiques compétitives vis-à-vis d'éventuelles flores cariogènes et à des propriétés agro-alimentaires permettant leur utilisation industrielle sous quelque forme que ce soit. 1) Prophylactic ferments characterized in that they promote the prevention of dental caries thanks to competitive bacteriological properties vis-à-vis possible cariogenic flora and to food-processing properties allowing their industrial use in any form . 2) Ferments selon la revendication 1 caractérisés en ce que les espèces bactériennes entrant dans leur constitution sont choisies, seules ou en association, parmi les souches non virulentes de bactéries compatibles avec le maintien de l'intégrité bucco-dentaire comme par exemple certains Streptococcus tels que S. sanguis (sérotype 1: S. gordonXi, sérotype 2 : S. mitior ou S. oralis), S. mitis (sérotypes 1 et 2) et S. 2) Ferments according to claim 1 characterized in that the bacterial species entering into their constitution are chosen, alone or in combination, from non-virulent strains of bacteria compatible with the maintenance of oral integrity such as for example certain Streptococcus such than S. sanguis (serotype 1: S. gordonXi, serotype 2: S. mitior or S. oralis), S. mitis (serotypes 1 and 2) and S. salivarius, certains Lactobacfflus tels que L. acidophitus, L. crispa tus, L. gasseri et L. salivarius, certain Lactobacfflus such as L. acidophitus, L. crispa tus, L. gasseri and L. salivarius ou Stomatococcus mucilaginosus. salivarius or Stomatococcus mucilaginosus. 3) Ferments selon les revendications 1 et 2 caractérisés en ce que les espèces entrant dans leur constitution sont choisies, seules ou en association, parmi les souches non virulentes de bactéries réputées cariogènes telles que S. mutans, L. casei (en particulier L. casei subsp. rhamnosus) ou L. fermentum. 3) Ferments according to claims 1 and 2 characterized in that the species forming part of their constitution are chosen, alone or in combination, from non-virulent strains of bacteria reputed to be cariogenic such as S. mutans, L. casei (in particular L. casei subsp. rhamnosus) or L. fermentum. 4) Ferments selon les revendications 1, 2 et 3 caractérisés en ce que les espèces entrant dans leur constitution sont choisies, seules ou en association, parmi tous les éventuels mutants avirulents dérivés des espèces mentionnées ci-dessus. 4) Ferments according to claims 1, 2 and 3 characterized in that the species entering into their constitution are chosen, alone or in combination, from all possible avirulent mutants derived from the species mentioned above. 5) Ferments selon les revendications 1 et 2 caractérisés en ce que les espèces entrant dans leur constitution sont choisies, seules ou en association, parmi tous les éventuels mutants avirulents dérivés d'autres espèces bactériennes, telles que des ferments lactiques modifiés de façon à présenter des caractères nouveaux leur permettant d'entrer en compétition écologique avec d'éventuelles flores orales cariogènes. 5) Ferments according to claims 1 and 2 characterized in that the species entering into their constitution are chosen, alone or in combination, from all possible avirulent mutants derived from other bacterial species, such as lactic ferments modified so as to present new characters allowing them to enter into ecological competition with possible cariogenic oral flora. 6) Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que les ferments prophylactiques sont formés de l'une, ou de préférence de plusieurs des espèces bactériennes mentionnées ci-dessus associées par exemple dans des rapports de 1/1 et conservées de préférence congelées dans l'azote liquide ou lyophilisées, cette liste n'étant en aucune façon limitative et étant susceptible d'évoluer en fonction des progrès réalisés dans la connaissance de la flore orale et de l'actualisation taxonomique des espèces en cours ou à venir. 6) Device according to any one of the preceding claims, characterized in that the prophylactic ferments are formed from one, or preferably from several of the bacterial species mentioned above associated for example in ratios of 1/1 and preserved from preferably frozen in liquid nitrogen or freeze-dried, this list not being in any way limiting and being likely to evolve according to the progress made in the knowledge of the oral flora and the taxonomic update of the current or future species . 7) Ferments prophylactiques selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisés en ce qu'ils sont particulièrement destinés à être utilisés dans la fabrication des yaourts, khéfirs et autres produits à base de laits fermentés en complément des ferments lactiques habituels. Les ferments prophylactiques peuvent être utilisés soit à titre de coferments s'ils supportent les procédés de fabrication, et en particulier les contraintes thermiques (par exemple l'association L. salivarius, L acidophilus et L. casei subsp. rhamnosus en proportion 1/1/1), soit par simple addition par brassage en fin de fabrication (par exemple l'association L. salivarius, S, salivarius et S. mucilaginosus en proportion 1/1/1).La concentration finale optimale se situe par exemple dans une fourchette de 1/106 à 1/1010 par rapport aux ferments lactiques compte-tenu des impératifs biologiques, techniques et gastronomiques recherchés. 7) Prophylactic ferments according to any one of the preceding claims, characterized in that they are particularly intended for use in the manufacture of yogurts, khefirs and other products based on fermented milks in addition to the usual lactic ferments. The prophylactic ferments can be used either as co-ferments if they support the manufacturing processes, and in particular the thermal constraints (for example the association L. salivarius, L acidophilus and L. casei subsp. Rhamnosus in proportion 1/1 / 1), either by simple addition by stirring at the end of manufacture (for example the association L. salivarius, S, salivarius and S. mucilaginosus in 1/1/1 proportion) .The optimal final concentration is for example in a range from 1/106 to 1/1010 compared to lactic ferments taking into account the biological, technical and gastronomic imperatives sought. 8) Ferments prophylactiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisés en ce qu'ils sont destinés à être utilisés lyophilisés, et distribués par exemple par 1 à 2 millions d'unités sous forme de comprimés pharmaceutiques à sucer lentement avec un excipient approprié tel qu'un hydrate de carbone non fermentescible. 8) Prophylactic ferments according to any one of claims 1 to 6 characterized in that they are intended to be used lyophilized, and distributed for example by 1 to 2 million units in the form of pharmaceutical tablets to be sucked slowly with an excipient suitable such as a non-fermentable carbohydrate. 9) Ferments prophylactiques selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisés en ce qu'ils peuvent être utilisés pour favoriser la prévention de la carie dentaire sous quelque autre forme que ce soit, en particulier associés à tous les composés chimiques réputés pour avoir un effet préventif contre la carie dentaire, comme par exemple les composés fluorés ou les hydrates de carbones non fermentescibles.  9) Prophylactic ferments according to any one of the preceding claims, characterized in that they can be used to promote the prevention of dental caries in any other form whatsoever, in particular associated with all the chemical compounds known to have an effect. preventive against dental caries, such as fluorinated compounds or non-fermentable carbohydrates.
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