FR2632968A1 - Process for selecting exopolysaccharide-producing bacterial clones and producing clones obtained - Google Patents
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Abstract
Description
La présente~ invention concerne un procédé de sélection de clones bactériens producteurs d'exopolysaccharides, ainsi que des clones obtenus par ce procédé. The present invention relates to a method for selecting bacterial clones producing exopolysaccharides, as well as to the clones obtained by this method.
La production de polysaccharides exocellulaires existe chez de nombreuses- bactéries Gram+ et Gram-. Certains de ces polysaccharides ont été étudiés en détail en raison de leurs propriétés texturantes, telles que les xanthines de Xantomonas campestris ou de. leur implication dans des mécanismes de pathogénicité, notamment des polysaccharides de
Salmonella typhimurium ou dans des mécanismes cariogènes, notamment des polysaccharides de Streptococcus mu tans.The production of exocellular polysaccharides exists in many Gram + and Gram- bacteria. Some of these polysaccharides have been studied in detail due to their texturing properties, such as Xantomonas campestris or xanthines. their involvement in pathogenicity mechanisms, in particular polysaccharides of
Salmonella typhimurium or in cariogenic mechanisms, in particular polysaccharides from Streptococcus mu tans.
L'utilisation de souches mucoldes, c'est-à-dire productrice d'exopolysaccharide, dans l'industrie laitière, revêt un intérêt particulier puisque la production de polysaccharides par les ferments lactiques augmente la viscosité finale du produit. The use of mucoid strains, that is to say strains producing exopolysaccharide, in the dairy industry, is of particular interest since the production of polysaccharides by lactic ferments increases the final viscosity of the product.
La Demanderesse a décrit dans la demande due brevet N" 88 02405 un procédé d'épaissement de produits du type "lait fermenté", notamment de yaourt, caractérisé en ce qu'on ajoute audit produit un ou des polysaccharide(s) produit(s) à partir de bactérie(s) lactique(s) utilisée(s) pour la fermentation du lait, notamment de l'espèce Streptococcus thermophilus et/ou Lactobacillus bulgaricus. The Applicant has described in patent application N "88 02405 a process for thickening products of the" fermented milk "type, in particular yoghurt, characterized in that one or more polysaccharide (s) produced is added to said product. ) from lactic acid bacteria (s) used for the fermentation of milk, in particular of the species Streptococcus thermophilus and / or Lactobacillus bulgaricus.
En effet, les bactéries lactiques mises en culture produisent des polysaccharides exopolysaccharides excrétés dans le milieu. Et, il a été découvert que ces polysaccharides incorporés au yaourt lui confèrent une texture plus épaisse sans nuire à la qualité organoleptique. In fact, the lactic acid bacteria placed in culture produce exopolysaccharide polysaccharides excreted in the medium. And, it has been discovered that these polysaccharides incorporated in yogurt give it a thicker texture without adversely affecting the organoleptic quality.
Outre l'ajout de polysaccharides dans un lait comme agent épaississant endogène, la nature -thérapeutique du polysaccharide peut également amener à rechercher une production. de celui-ci à grande échelle sur milieu de fermentation. Besides the addition of polysaccharides in milk as an endogenous thickening agent, the therapeutic nature of the polysaccharide can also lead to an investigation of production. of it on a large scale on fermentation medium.
La mise en oeuvre d'un procédé de production optimum de polysaccharides à partir de bactéries lactiques nécessite au préalable la sélection des souches bactériennes les plus productrices de polysaccharides. The implementation of a process for the optimum production of polysaccharides from lactic acid bacteria first requires the selection of the bacterial strains which produce the most polysaccharides.
Tel est donc le but de la présente invention.This is therefore the aim of the present invention.
L'état de la technique ne fait que peu de référence à ce type de procédé de sélection de souches bactériennes productrices de polysaccharides
Les souches hyperproductrices de polysaccharides Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc dextranicum, Streptococcus mutans,
Streptococcus salivarius ont été identifiées par la morphologie des colonies et le toucher filant à l'anse de platine (Niven et al., 1940, 1941, 1946
Forsen et al., 1973).The state of the art makes little reference to this type of process for selecting bacterial strains producing polysaccharides.
Hyperproductive strains of polysaccharides Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc dextranicum, Streptococcus mutans,
Streptococcus salivarius were identified by colony morphology and spinning feel to the platinum loop (Niven et al., 1940, 1941, 1946
Forsen et al., 1973).
Toutefois, la production des souches bactériennes de certaines espèces, notamment de Streptococcus thermophilus n'est pas suffisante pour permettre la distinction des clones mucotdes des clones non mucoides par ces techniques. En particulier, I'état de la technique ne fait pas mention de procédé de sélection de souches productrices de polysaccharides en ce qui concerne l'espèce -Streptococcus thermophilus. However, the production of bacterial strains of certain species, in particular of Streptococcus thermophilus, is not sufficient to allow the distinction of the mucotid clones from the non-mucoid clones by these techniques. In particular, the state of the art does not mention a process for selecting polysaccharide-producing strains with regard to the species -Streptococcus thermophilus.
Il a été mis au point, selon la présente invention, un procédé suffisamment sensible pour détecter et sélectionner les clones bactériens producteurs d'exopolysaccharides même si celui-ci est produit en faible quantité. It has been developed, according to the present invention, a sufficiently sensitive method to detect and select the bacterial clones producing exopolysaccharides even if the latter is produced in small quantity.
La présente invention a en effet pour objet un procédé de sélection de clones bactériens producteurs d'exopolysaccharides ou clones Muc+, caractérisé en ce qu'on ajoute à un milieu de croissance d'une souche bactérienne donnée dont on veut sélectionner les clones producteurs d'exopolysaccharides, un colorant cationique qui provoque la coloration de tous les clones, les clones Muc+ étant révélés par masquage de la coloration par le polysaccharide produit ultérieurement. The subject of the present invention is in fact a process for selecting bacterial clones producing exopolysaccharides or Muc + clones, characterized in that one adds to a growth medium of a given bacterial strain from which it is desired to select the clones producing. exopolysaccharides, a cationic dye which causes the staining of all the clones, the Muc + clones being revealed by masking of the staining by the polysaccharide produced subsequently.
Les colorants cationiques présentent une affinité pour les polysaccharides anioniques et neutres car ceux-ci développent des interactions ioniques avec les anions organiques ou inorganiques du milieu environnant. Additionné au milieu de croissance, un colorant cationique se fixe sur le peptidoglycane de paroi de la bactérie de telle sorte que les colonies se colorent. La production de polysaccharides recouvre les colonies
Muc+ productrices et par masquage celles-ci apparaissent en blanc sur fond coloré et révèlent ainsi la présence des clones producteurs de polysaccharides.Cationic dyes exhibit an affinity for anionic and neutral polysaccharides because these develop ionic interactions with organic or inorganic anions in the surrounding medium. Added to the growth medium, a cationic dye binds to the bacteria wall peptidoglycan so that the colonies stain. The production of polysaccharides covers the colonies
Muc + producers and by masking these appear in white on a colored background and thus reveal the presence of the polysaccharide-producing clones.
On peut citer en-particulier comme colorant cationique le rouge de ruthénium qui, introduit dans le milieu de croissance, fait apparaître une coloration rose foncé. Les colonies Muc+ masquent petit à petit cette coloration et apparaissent en blanc ou rose très clair du fait de la production de mucus. Le phénotype clonal blanc est donc corrélé à des colonies productrices de polysaccharides, le phénotype rose foncé étant corrélé à une absence de polysaccharides. Mention may in particular be made, as cationic dye, of ruthenium red which, when introduced into the growth medium, gives rise to a dark pink coloration. Muc + colonies gradually mask this coloration and appear white or very light pink due to the production of mucus. The white clonal phenotype is therefore correlated with polysaccharide-producing colonies, the dark pink phenotype being correlated with an absence of polysaccharides.
Ce type de procédé de sélection de clones bactériens est particulièrement approprié pour sélectionner les clones producteurs d'exopolysaccharides de l'espèce Streptococcus thermophilus, celle-ci étant en effet faiblement productrice et nécessitant un procédé de sélection particulièrement sensible. This type of process for selecting bacterial clones is particularly suitable for selecting clones that produce exopolysaccharides of the species Streptococcus thermophilus, the latter in fact being low in production and requiring a particularly sensitive selection process.
Avantageusement, le milieu de sélection est un milieu solide constitué d'un lait gélosé supplémenté en extrait de levure, de préférence dans une concentration de 2,5- à 5 g/l et en présence de saccharose. Advantageously, the selection medium is a solid medium consisting of an agar milk supplemented with yeast extract, preferably in a concentration of 2.5-5 g / l and in the presence of sucrose.
De façon appropriée, le colorant cationique est-ajouté dans une concentration de 0,05 à 0,15 g/l. En particulier pour le rouge de ruthénium, une concentration de 0,08 g/l à 0,15 g/l est particulièrement adaptée. Suitably the cationic dye is added in a concentration of 0.05 to 0.15 g / l. In particular for ruthenium red, a concentration of 0.08 g / l to 0.15 g / l is particularly suitable.
L'addition de- sel de pyruvate, notamment de pyruvate de sodium, au milieu de sélection, facilite encore la distinction entre les clones Muc+ et les clones Muc-, le diamètre des clones Muc+ étant augmenté. The addition of pyruvate salt, in particular sodium pyruvate, to the selection medium, further facilitates the distinction between Muc + clones and Muc- clones, the diameter of the Muc + clones being increased.
Un objet particulier de la présente invention est donc la sélection de clones de Streptococcus thermophilus producteurs de polysaccharides, le milieu de sélection préconisé étant un lait gélosé additionné de 10 g/l de saccharose et 200 mg/l de pyruvate de sodium avec comme colorant cationique du rouge de ruthénium à 0,08 g/I
Bien entendu, les concentrations données sont des valeurs optimales pour une souche, non limitatives du cadre de protection de la présente invention.A particular object of the present invention is therefore the selection of Streptococcus thermophilus clones producing polysaccharides, the recommended selection medium being an agar milk supplemented with 10 g / l of sucrose and 200 mg / l of sodium pyruvate with cationic dye as a coloring agent. ruthenium red at 0.08 g / I
Of course, the concentrations given are optimum values for a strain, not limiting the scope of protection of the present invention.
D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention apparaîtront à la lumière de la description détaillée qui va suivre. Other characteristics and advantages of the present invention will become apparent in the light of the detailed description which follows.
La production de polysaccharides pour les souches de
Streptococcus thermophilus n'étant pas suffisante pour permettre la distinction des clones mucoldes et non mucoldes par les techniques connues, plusieurs indicateurs colorés susceptibles de révéler la présence de clones producteurs ou hyperproducteurs de polysaccharides ont tout d'abord été testés.The production of polysaccharides for strains of
Streptococcus thermophilus not being sufficient to allow the distinction of mucoid and non-mucoid clones by known techniques, several colored indicators capable of revealing the presence of clones producing or hyperproducing polysaccharides were first of all tested.
Dans un premier temps, on a en effet utilisé des colorants agissant comme indicateur de pH. La production d'acide lactique due à la croissance fait virer le milieu et les colonies se colorent de la même façon. In fact, dyes acting as a pH indicator were used initially. The production of lactic acid due to growth causes the medium to turn and the colonies stain similarly.
La production secondaire de polysaccharides recouvre les colonies Muc et par masquage, celles-ci apparaissent en blanc sur fond coloré.The secondary production of polysaccharides covers the Muc colonies and by masking, these appear white on a colored background.
EXE.NIPLE I : Colorants indicateurs de pH
I) Bleu de bromothymol (BBT)
Les souches sont cultivées sur milieu .N117+Saccharose (\I 17
TERZAGHI et SANDINE, 1975) et incubées à leur température optimale de croissance de 30"C pour les leuconostocs et Streptococcus salivarius et 42"C pour les souches de Streptococcus thermophilus. On a réalisé à partir de la même culture un dosage du polysaccharide par méthode colorimétrique des oses au phénol sulfurique (DUBOIS et al. 1956) et une observation du phénotype des colonies sur le mileu coloré. Les souches de références productrices sont L. mesenteroîdes (Le 163, Le 164), L. dextranicum (Le 169) et L. salivarius (SA 121).EXE.NIPLE I: pH indicator dyes
I) Bromothymol blue (BBT)
The strains are cultured on .N117 + Sucrose medium (\ I 17
TERZAGHI and SANDINE, 1975) and incubated at their optimum growth temperature of 30 "C for leuconostocs and Streptococcus salivarius and 42" C for strains of Streptococcus thermophilus. An assay of the polysaccharide by the colorimetric method of sulfuric phenol oses (DUBOIS et al. 1956) and an observation of the phenotype of the colonies on the colored medium was carried out from the same culture. The production reference strains are L. mesenteroides (Le 163, Le 164), L. dextranicum (Le 169) and L. salivarius (SA 121).
Les souches de références non productrices sont L. cremoris (Le 161, Le 162) et S. thermophilus NCDO 1611 (CNRZ 160). The non-producing reference strains are L. cremoris (Le 161, Le 162) and S. thermophilus NCDO 1611 (CNRZ 160).
Les résultats du tableau 1 ci-après confirment l'hypothèse théorique sur les souches de références pour les espèces productrices une grande quantité de polysaccharides. Le test colqré n'est pas suffisamment sensible pour les souches des espèces qui, même hyperproductrices, ont un niveau de production faible. The results of Table 1 below confirm the theoretical hypothesis on the reference strains for the species producing a large amount of polysaccharides. The colqré test is not sufficiently sensitive for strains of species which, even hyperproductive, have a low level of production.
TABLEAU 1
Aspect des colonies sur milieu gélosé+BBT et production d'équivalents dextranes en milieu liquide.TABLE 1
Appearance of colonies on agar medium + BBT and production of dextran equivalents in liquid medium.
Production Aspect des
exprimée colonies
en équiva- (Phénotype
Souche Genre Phenotype lent dex- réel)
Espèce théorique trane (*)
Le 16l L. cremoris tluc- 615-670 g Jaunes
Le 162 630-597 g
Le 163 L, mesenteroïdes Muc+ 10 mg Blanches
Le 169 L. dextranicum iuc+ I0 mg Blanches
SA 121 S. salivarius Muc+ 3 mg Blanches
NCD01611 S. thermophilus Muc- 175i200Crg Jaunes
S22(3) S. thermophilus - Muc+ 273-300Cig Jaunes
266-207pg * La méthode de dosage au phénol-sulfurique est étalonnée par une
solution de dextrane-sulfate (Serva)-0 à 80 lig par échantillon-. Les
valeurs des dosages de polysaccharides de S. thermophilus à 490 nm sont
lues sur cette courbe étalon. Les résultats sont donc exprimés en pg de
dextrane.Le polysaccharide de S. thermophilus n'étant pas un dextrane,
on a adopté le terme "équivalent -dextrane" pour quantifier le dosage. Production Aspect of
expressed colonies
in equiva- (Phenotype
Strain Genus Slow dex- real phenotype)
Theoretical species trane (*)
The 16l L. cremoris tluc- 615-670 g Yolks
The 162 630-597 g
The 163 L, mesenteroids Muc + 10 mg White
169 L. dextranicum iuc + I0 mg White
SA 121 S. salivarius Muc + 3 mg White
NCD01611 S. thermophilus Muc- 175i200Crg Yellow
S22 (3) S. thermophilus - Muc + 273-300Cig Yellow
266-207pg * The phenol-sulfuric determination method is calibrated by a
dextran sulfate solution (Serva) -0 to 80 µl per sample-. The
S. thermophilus polysaccharide assay values at 490 nm are
read on this standard curve. The results are therefore expressed in pg of
dextran The polysaccharide of S. thermophilus is not a dextran,
the term "dextran equivalent" was adopted to quantify the assay.
2) Autres colorants
Pour replacer S. thermophilus dans un milieu plus proche de son milieu naturel, nous avons recherché les colonies .Nluc sur un lait gélosé supplémenté en extrait de ~ levure (2,5 ou 5g/l) en ajoutant les colorants à 0,08 g/l. Le pourpre de bromocrésol (BCP), le rouge de phénol et le BBT développent une coloration jaune en milieu acide.2) Other dyes
To replace S. thermophilus in a medium closer to its natural environment, we looked for the .Nluc colonies on an agar milk supplemented with yeast extract (2.5 or 5g / l) by adding the dyes to 0.08 g / l. Bromocresol purple (BCP), phenol red and BBT develop a yellow color in acidic conditions.
- La souche Le 169 apparaît blanche en présence de colorants essayés aux 2 taux d'extraits de levure. - The strain Le 169 appears white in the presence of dyes tested at the 2 levels of yeast extracts.
- La souche S22 reste colorée en jaune sur BBT et BCP ou transparente sur milieu au rouge de phénol. Ces colorants ajoutés dans un lait gélosé ne permettent pas la mise en évidence de secrétion chez la souche thermophile. - The S22 strain remains colored yellow on BBT and BCP or transparent on phenol red medium. These dyes added in agar milk do not allow the detection of secretion in the thermophilic strain.
Exemple 2 : Colorants cationiques : Rouge de ruthénium
I) Etude de concentration
Le test est réalisé sur lait gélosé à 2,5 g/l d'extrait de levure, en présence de saccharose (10 g/l). Le colorant est ajouté en concentrations variables de 0,01 à 0,08 g/l ( rouge de ruthénium (Fluka) réf. S;571). Example 2: Cationic dyes: Ruthenium red
I) Concentration study
The test is carried out on agar milk containing 2.5 g / l of yeast extract, in the presence of sucrose (10 g / l). The dye is added in varying concentrations from 0.01 to 0.08 g / l (ruthenium red (Fluka) ref. S; 571).
Après incubation une nuit à 30"C et stockage 24 h à 100C, les colonies de la souche Le 169 décolorent le milieu. Le colorant à rJ,rj8 g/l fortement dilué dans le mucus donne un aspectlegèrement rosé aux clones. After incubation overnight at 30 ° C. and storage for 24 h at 100 ° C., the colonies of the Le 169 strain decolorize the medium. The dye at rJ, rj8 g / l strongly diluted in the mucus gives a slightly pink appearance to the clones.
De 0,01 à 0,04 g/l, les colonies du S. thermophilus S22 (déposé à la Collection de l'Institut Pasteur CNCM I-735) apparaissent rose pâle. From 0.01 to 0.04 g / l, the colonies of S. thermophilus S22 (deposited in the Collection of the Institut Pasteur CNCM I-735) appear pale pink.
A la concentration de 0,08 g/l une hétérogénéité existe dans la population : certains clones sont rose fonçé, les autres très clair ou rose clair bordé de blanc. Cette différenciation met en évidence des colonies
Muc- (rose fonçé) et deys colonies Muc+ (rose clair). L'homogénéité constatée sur les autres boîtes était due à une concentration trop faible de colorant dans le milieu, le test n'est distinctif qu'à partir de 0,08 g/l. At a concentration of 0.08 g / l, there is heterogeneity in the population: some clones are dark pink, the others very light or light pink bordered with white. This differentiation reveals colonies
Muc- (dark pink) and deys colonies Muc + (light pink). The homogeneity observed on the other dishes was due to a too low concentration of dye in the medium, the test is only distinctive from 0.08 g / l.
I) Production clonale sur boîte
Plusieurs souches de Streptococcus thermophilus testées sur ce milieu montrent un comportement clonal différent. La souche KA68 est homogène, tous ses clones sont Muc+. La souche S22 est constituée de 2 types de clones dont la stabilité phénotypique est différente, le clone
S22-17 estde type Muc+ stable au cours des sous-clonages. Le clone 522-14 ségrège en clones Muc+ et en clones Muc- sans qu'il soit possible d-e stabiliser l'un ou l'autre des phénotypes. Les colonies Muc+ sont circulaires, blanches, légèrement bombées, de diamètre I à 1,5 mm. Les colonies Mucsont rose foncé, circulaires, de diamètre inférieur à -l mm.I) Clonal production on a dish
Several strains of Streptococcus thermophilus tested on this medium show different clonal behavior. The KA68 strain is homogeneous, all of its clones are Muc +. The S22 strain consists of 2 types of clones with different phenotypic stability, the clone
S22-17 is of the Muc + type stable during subcloning. Clone 522-14 segregates into Muc + clones and Muc- clones without it being possible to stabilize one or the other of the phenotypes. Muc + colonies are circular, white, slightly domed, with a diameter of I to 1.5 mm. Muc colonies are dark pink, circular, less than -l mm in diameter.
10 colonies de chacune des souches et types clonaux ont été prélevées et reprises en mélange dans de l'eau distillée. Ce surnageant a été traité et- dosé par colorimétrie. 10 colonies of each of the strains and clonal types were taken and taken up as a mixture in distilled water. This supernatant was treated and assayed by colorimetry.
Les résultats de la production clonale sont donnés au tableau 2 ci-apres (on entend par production clona, la production moyenne des 10 colonies d'un même type de clone). The results of the clonal production are given in Table 2 below (by clona production is meant the average production of the 10 colonies of the same type of clone).
Tableau 2
Production clonale de polysaccharides, exprimée en équivalent dextrane de bactéries récoltées sur un milieu solide.
Clonal production of polysaccharides, expressed as dextran equivalent of bacteria harvested on a solid medium.
<tb><tb>
<SEP> ombre <SEP> de <SEP> Production <SEP> pour
<tb> <SEP> bactéries/ml <SEP> i <SEP> O7 <SEP> cellules
<tb> <SEP> X <SEP> 107
<tb> S22-14R <SEP> 1,96 <SEP> 2,55 <SEP> - <SEP> 7,65
<tb> S22-14B <SEP> 1,96 <SEP> 2,55 <SEP> - <SEP> 7,65
<tb> S22-14B <SEP> 1,78 <SEP> 5,16 <SEP> - <SEP> 15,73
<tb> S22-17 <SEP> 2,93 <SEP> 7,10 <SEP> - <SEP> 30,06
<tb> KA68 <SEP> 1,64 <SEP> 7,19- <SEP> 0,24
<tb>
S22-14R: Clones rose foncé de la souche S22-14
S22-14B : Clones blanc de la souche S22-14
S22-17 . Clones blancs homogènes de la souche S22-17-
KA68 :Clones blancs homogènes de la souche KA68
Les colonies rose foncé du clone S22-14 (S22-14R) ne sont pas productrices de polysaccharide. Si on fixe ce niveau à 1, on voit que les clones blancs S22-14 Muc+, S22-17 et KA68 produisent respectivement 3,5 5,8 et 7,ru7 fois le niveau basal.<SEP> shadow <SEP> of <SEP> Production <SEP> for
<tb><SEP> bacteria / ml <SEP> i <SEP> O7 <SEP> cells
<tb><SEP> X <SEP> 107
<tb> S22-14R <SEP> 1.96 <SEP> 2.55 <SEP> - <SEP> 7.65
<tb> S22-14B <SEP> 1.96 <SEP> 2.55 <SEP> - <SEP> 7.65
<tb> S22-14B <SEP> 1.78 <SEP> 5.16 <SEP> - <SEP> 15.73
<tb> S22-17 <SEP> 2.93 <SEP> 7.10 <SEP> - <SEP> 30.06
<tb> KA68 <SEP> 1.64 <SEP> 7.19- <SEP> 0.24
<tb>
S22-14R: Dark pink clones of strain S22-14
S22-14B: White clones of strain S22-14
S22-17. Homogeneous white clones of strain S22-17-
KA68: Homogeneous white clones of the KA68 strain
Dark pink colonies of clone S22-14 (S22-14R) do not produce polysaccharide. If we set this level to 1, we see that the white clones S22-14 Muc +, S22-17 and KA68 produce 3.5, 5.8 and 7, ru7 times the basal level, respectively.
Le phénotype blanc sur milieu au rouge de ruthénium est donc corrélé à une production de polysaccharide et le phénotype rose foncé à une absence de production. The white phenotype on ruthenium red medium is therefore correlated with a production of polysaccharide and the dark pink phenotype with an absence of production.
Les clones KA68, S22-17 et S22-14 tous blancs ne se distinguent par aucun caractère colonial (forme, diamètre, couleur). The KA68, S22-17 and S22-14 clones, all white, are not distinguished by any colonial character (shape, diameter, color).
3) Nature du milieu solide et phénotype clonal
On a cherché à adapter le milieu solide aux conditions optimales de production en milieu liquide, en ajoutant de l'acide lactique (20mu/1) ou du pyruvate de sodium (200 mg/l) au milieu de base (lait gélosé+Sac+rouge de ruthénium). Les souches ont été cultivées 6 h à 42"C sur milieu ST1 Lac (GANCEL, 1988) puis étalées par inondation sur les 3 milieux.3) Nature of the solid medium and clonal phenotype
We tried to adapt the solid medium to the optimal production conditions in a liquid medium, by adding lactic acid (20mu / 1) or sodium pyruvate (200 mg / l) to the base medium (agar milk + Sac + ruthenium red). The strains were cultured for 6 h at 42 ° C. on ST1 Lac medium (GANCEL, 1988) then spread by flooding on the 3 media.
Le pourcentage des différents phénotypes obtenus est donné dans le tableau 3 ci-après
- Les clones S22-17 et KA68 sont stables du point de vue de leurs phénotypes sur les 3 milieux.The percentage of the different phenotypes obtained is given in Table 3 below.
- The S22-17 and KA68 clones are stable from the point of view of their phenotypes on the 3 media.
- Les clones S22-14 blanc et S22-14 rose ségrègent sur le milieu de base et sur le milieu au pyruvate. L'addition de 20 mM/I d;acide lactique permet de stabiliser le phénotype en clones Muc+. - The white S22-14 and pink S22-14 clones segregate on the base medium and on the pyruvate medium. The addition of 20 mM / L of lactic acid makes it possible to stabilize the phenotype in Muc + clones.
Le pyruvate et l'acide lactique affectent la croissance des colonies de façon inverse. L'acide lactique réduit le diamètre à celui d'une tête d'épingle alors que le pyruvate permet d'obtenir des colonies de 2 mm lorsqu'elles sont de type Muc+, le diamètre des colonies- Muc- restant inchangé. Pyruvate and lactic acid affect colony growth inversely. Lactic acid reduces the diameter to that of a pinhead while pyruvate makes it possible to obtain colonies of 2 mm when they are of the Muc + type, the diameter of the Muc- colonies remaining unchanged.
Pourcentage des phénotypes clonaux sur différents milieux au rouge de ruthénium (%) . Diamètre moyen des colonies sur ces différents milieux (d).
<SEP> S22,-14R <SEP> S22-14 <SEP> B <SEP> S22-17 <SEP> KA68
<tb> base <SEP> % <SEP> 43 <SEP> % <SEP> 57% <SEP> 37% <SEP> 63 <SEP> % <SEP> 100% <SEP> 100%
<tb> Base <SEP> + <SEP> % <SEP> 37-96 <SEP> 63% <SEP> 73% <SEP> 27% <SEP> 100% <SEP> 10096 <SEP>
<tb> pyruvate <SEP> <SEP> 1-1,5 <SEP> 2mm <SEP> 1-1,5 <SEP> Zmm <SEP> 2mm <SEP> 2mm <SEP>
<tb> Base <SEP> + <SEP> % <SEP> 0 <SEP> 100% <SEP> 0 <SEP> 100% <SEP> 100% <SEP> 100% <SEP>
<tb> lactate <SEP> # <SEP> <SEP> Tête <SEP> d' <SEP> épingle
<tb>
L'addition de pyruvate au milieu de base facilite donc la distinction entre les clones Muc+ et les clones Muc-.<SEP> S22, -14R <SEP> S22-14 <SEP> B <SEP> S22-17 <SEP> KA68
<tb> base <SEP>% <SEP> 43 <SEP>% <SEP> 57% <SEP> 37% <SEP> 63 <SEP>% <SEP> 100% <SEP> 100%
<tb> Base <SEP> + <SEP>% <SEP> 37-96 <SEP> 63% <SEP> 73% <SEP> 27% <SEP> 100% <SEP> 10096 <SEP>
<tb> pyruvate <SEP><SEP> 1-1.5 <SEP> 2mm <SEP> 1-1.5 <SEP> Zmm <SEP> 2mm <SEP> 2mm <SEP>
<tb> Base <SEP> + <SEP>% <SEP> 0 <SEP> 100% <SEP> 0 <SEP> 100% <SEP> 100% <SEP> 100% <SEP>
<tb> lactate <SEP>#<SEP><SEP> Head <SEP> of <SEP> pin
<tb>
The addition of pyruvate to the base medium therefore facilitates the distinction between Muc + clones and Muc- clones.
4) Nature du sucre et phénotype
Un certain nombre de clones analysés pour lueur spectre de croissance ont montré que le phénotype coloré dépendait de la nature de la source de carbone (lactose, saccharose, glucose, fructose).4) Nature of the sugar and phenotype
A number of clones analyzed for glow growth spectrum showed that the colored phenotype depended on the nature of the carbon source (lactose, sucrose, glucose, fructose).
5) Conclusions
Un clone de S. thermophilus producteur de polysaccharide peut être détecté spécifiquement sur milieu au rouge de ruthénium. La nature du milieu gélosé utilisé, la source de carbone ainsi que la concentration du colorant influent sur le phénotype des colonies. Un milieu que l'on peut préconiser pour un crible est
- lait gélosé
- saccharose 10 g/l
- +pyruvate de sodium 200 mg/l
- +rouge de ruthénium 0,08 g/l. 5) Conclusions
A polysaccharide-producing S. thermophilus clone can be detected specifically on ruthenium red medium. The nature of the agar medium used, the carbon source as well as the concentration of the dye influence the phenotype of the colonies. A medium that can be recommended for a sieve is
- agar milk
- sucrose 10 g / l
- + sodium pyruvate 200 mg / l
- + ruthenium red 0.08 g / l.
Bibliographie
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| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR2632968B1 (en) |
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- 1988-06-15 FR FR8808009A patent/FR2632968B1/en not_active Expired - Lifetime
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2632968B1 (en) | 1991-11-29 |
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|---|---|---|---|
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