FR2615203A1 - INOCULUM IN WHICH THE MICROORGANISMS ARE PACKED IN THE FORM OF BIODEGRADABLE PELLETS, ITS PREPARATION PROCESS AND ITS APPLICATIONS - Google Patents

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Abstract

The structure for the inclusion of at least one active substance (microorganisms, cells or cell assemblies) is provided in the form of granules comprising a core (N) consisting of a matrix coating the active substance, said matrix being comprised of: (1) at least one coating agent; and (2) at least one hydroretention agent; and a porous protection envelope (E) comprised of (1) at least one film-forming agent susceptible of undergoing a biological degradation; and (2) at least one hydroretention agent, a hydrophilic protection skin (P) generally surrounding the envelope. Said structure in particular preserves elements included and immediately provides for an immediate multiplication of microorganisms followed by a progressive release of the inoculum since the first contacts with a hydrated medium, thereby producing a good colonization of the target (root system, soil, digestive system according to the particular application of the inoculum).

Description

TNOCULUM DANS LEOUEL LES MICRO-ORGANISMES SONT CONDITIONNES
SOUS LA FORME DE GRANULES BIODEGRADABLES. SON PROCèDE DE PREPARATION ET SES APPLICATIONS
La présente invention se rapporte d un inoculum dans lequel les micro-organismes sont conditionnés dans une formulation permettant leur très bonne conservation en milieu sec et leur libération en milieu humide.Celui-ci trouve son application notamment dans les domaines de l'agriculture, comme engrais microbiologiques et indirectement pour l'enrobage microbiologique des semences ; de l'horti- culture et du maraîchage, par incorporation dans des substrats naturels et artificiels et en cultures hors-sol de l'élevage, pour reconstituer la flore de l'appareil digestif des animaux ; et en alimentation animale, dans la fabrication des ensilages
Les inoculums constitués par des micro-organismes peuvent être conditionnés sous diverses formulations.TNOCULUM IN WHICH MICROORGANISMS ARE CONDITIONED
IN THE FORM OF BIODEGRADABLE GRANULES. ITS PREPARATION PROCESS AND APPLICATIONS
The present invention relates to an inoculum in which the microorganisms are packaged in a formulation allowing their very good conservation in a dry medium and their release in a humid environment.This one finds application particularly in the fields of agriculture, such as microbiological fertilizers and indirectly for the microbiological coating of seeds; horticulture and market gardening, by incorporation into natural and artificial substrates and off-ground crops, to reconstitute the flora of the digestive system of animals; and in animal feed, in the manufacture of silage
Microorganism inocula can be packaged in various formulations.

Cependant, dans la plupart des cas, le type de formulation choisi détermine en grande partie l'efficacité de l'inoculum: - Les formulations liquides sont les plus faciles à
réaliser, mais elles ne donnent pas toujours satisfac
tion. En effet, dans les milieux liquides, les micro
organismes se présentent nus et en ordre dispersé lors
de l'inoculation dans le sol ou dans les substrats.However, in most cases, the type of formulation chosen largely determines the effectiveness of the inoculum: - Liquid formulations are the easiest to
realize, but they do not always give satisfaction
tion. Indeed, in liquid media, micro
organisms appear naked and in a scattered
inoculation into soil or substrates.

Dans ces conditions, le rapport de force est souvent en
faveur de la flore résidente et les résultats de
l'inoculation peuvent etre d'autant plus décevants que
l'antagonisme de la flore nutochtone est puissant. On
sait que du reste que dans un gramme de sol fertile, on
peut trouver plus d'un milliard de bactéries.In these conditions, the balance of power is often
favor of resident flora and the results of
inoculation can be all the more disappointing as
the antagonism of the nutochtone flora is powerful. We
know that besides that in one gram of fertile soil, one
can find more than a billion bacteria.

- Les formulations solides, se présentant sous la forme
de poudres, donnent parfois de meilleurs résultats.- solid formulations, in the form
powders, sometimes give better results.

Dans ce cas, les micro-organismes sont plus ou moins
déshydratés, parfois même lyophilisés. L'adJonction d'un support protecteur inerte mais hydrophile, du type argile, est nécessaire pour obtenir une bonne efficacité L'un des problèmes est que les micro-organismes, avant d'entrer en activité, doivent etre réhydratés, ce qui provoque généralement une perte de viabilité par choc osmotique. De plus, les particules d'argile ne semblent pas offrir un rempart protecteur suffisant vis-à-vis de la multitude d'agresseurs telluriques résidents.In this case, the microorganisms are more or less
dehydrated, sometimes even freeze-dried. The addition of an inert but hydrophilic, clay-like protective support is necessary to obtain good efficacy. One of the problems is that the microorganisms, before entering into activity, must be rehydrated, which generally causes loss of viability by osmotic shock. In addition, clay particles do not appear to offer a sufficient protective bulwark against the multitude of resident telluric aggressors.

Afin d'éviter ces problèmes, on a utilisé des formulations gélifiées sous forme solide, dans lesquelles les micro-organismes sont immobilises et qui presentent l'intérêt de pouvoir être hydratées selon ce que l'on veut obtenir. Certains gels, constitués par des polymères tels que le polyuréthanne, les polysaccharides, comme le xanthane et les dérivés cellulosiques, ou encore les polyacrylamides, ont été proposés.In order to avoid these problems, gelled formulations in solid form have been used, in which the microorganisms are immobilized and which have the advantage of being able to be hydrated according to what one wants to obtain. Certain gels, consisting of polymers such as polyurethane, polysaccharides, such as xanthan and cellulose derivatives, or polyacrylamides, have been proposed.

Toutefois, les techniques d'inclusion des microorganismes dans les gels de polymère apparaissent comme étant délicates. Ainsi, dans le brevet français n 2 501 229, on propose par exemple d'apporter un milieu de culture ensemencé avec le micro-organisme ou une suspension de micro-organismes obtenue par centrifugation ou filtration dudit milieu, dans une solution chauffée de polysaccharide, et de former le gel par refroidissement. Ce traitement thermique assurant la réticulation du gel peut être remplacé par l'action d'un sel métallique ou par traitement de synergie par un autre polymère. Dans le brevet français n 2 519 022, on préconise d'abaisser l'activité de l'eau dans l'inoculum en-dessous de sa valeur critique à une valeur inférieure a 0,5.A cet effet, on réalise un séchage par atomisation par flux d'air chaud et sec ou encore on utilise une solution saturée en un composé présentant l'activité de l'eau requise évoluant vers
l'équilibre avec l'inoculum. Par ailleurs, on peut
souligner que les polyacrylamides ne sont pas biodégra
dables et jouissent d'une très mauvaise réputation
concernant la toxicité.However, the inclusion techniques of microorganisms in the polymer gels appear to be delicate. Thus, in French Patent No. 2,501,229, it is proposed for example to provide a culture medium inoculated with the microorganism or a suspension of microorganisms obtained by centrifugation or filtration of said medium, in a heated solution of polysaccharide, and forming the gel by cooling. This heat treatment ensuring crosslinking of the gel can be replaced by the action of a metal salt or by synergistic treatment with another polymer. In French Patent No. 2 519 022, it is recommended to lower the activity of water in the inoculum below its critical value to a value of less than 0.5. For this purpose, drying is carried out by atomization by hot and dry air flow or a solution saturated with a compound having the activity of the required water evolving towards
balance with the inoculum. Moreover, we can
point out that polyacrylamides are not biodegradable
and have a very bad reputation
concerning toxicity.

La présente invention vise à remédier à l'ensemble de ces inconvenients. On a en effet recherché-å 8 assurer une bonne conservation de l'inoculum sélectionné dans des structures stables, faciles à fabriquer, à commercialiser et à utiliser dans les domaines précités, également à assurer une multiplication immédiate des micro-organismes et une libération progressive de l'inoculum dès les premiers contacts avec un milieu hydraté, et enfin à obtenir une bonne colonisation de la cible < système racinaire, sol, appareil digestif suivant l'application particulière de l'inoculum > et, en conséquence, les effets bénéfiques attendus. The present invention aims to remedy all of these drawbacks. It has indeed been sought to ensure a good preservation of the inoculum selected in stable structures, easy to manufacture, to market and use in the aforementioned fields, also to ensure an immediate multiplication of microorganisms and a gradual release. of the inoculum from the first contacts with a hydrated medium, and finally to obtain a good colonization of the target <root system, soil, digestive tract following the particular application of the inoculum> and, consequently, the expected beneficial effects .

L'inoculum selon l'invention, qui est formé de micro-organismes inclus dans un support et qui se présente sous la forme de granulés, répond à l'ensemble de ces objectifs. Cet inoculum est caractérisé par le fait que les granulés comprennent < a) un noyau consistant en une matrice nourricière enrobant
les micro-organismes a inoculer, ladite matrice
nourricière étant composée
< l) d'un extrait nutritif complet pour lesdits micro
organismes dans lequel ceux-ci sont enrobés ; et
< 2) d'au moins un agent hydrorétenteur ; et < b > une enveloppe protectrice poreuse entourant ledit noyau
< a) et composée
< i) d'au moins un agent filmogène susceptible de subir
une dégradation biologique ; et
< 2) d'au moins un agent hydrorétenteur.The inoculum according to the invention, which is formed of microorganisms included in a support and which is in the form of granules, meets all of these objectives. This inoculum is characterized in that the granules comprise <a) a core consisting of a coating feeder matrix
the microorganisms to be inoculated, said matrix
feeder being composed
<1) a complete nutrient extract for said micro
organisms in which they are coated; and
<2) at least one hydroretenting agent; and <b> a porous protective envelope surrounding said core
<a) and composed
<i) at least one film-forming agent liable to undergo
biological degradation; and
<2) at least one hydroretention agent.

De préférence, les granulés.de l'inoculum comportent selon l'invention en outre < c > une pellicule hydrophile protectrice entourant
l'enveloppe < b). Preferably, the granules of the inoculum further comprise, according to the invention, a protective hydrophilic film surrounding
the envelope <b).

Les micro-organismes sont apportes dans le noyau (a) de préférence sous la forme d'une suspension plus ou moins concentrée. La matrice nourricière peut constituer un milieu de culture desdits micro-organismes avant la formation des granulés, auquel cas l'inoculum résultant présente une concentration trés élevée en micro-organismes, par exemple, pour les bactéries, pouvant aller jusqu'a 3 x 1010 bactéries par ml. The microorganisms are introduced into the core (a) preferably in the form of a more or less concentrated suspension. The feeder matrix may constitute a culture medium for said microorganisms prior to the formation of the granules, in which case the resulting inoculum has a very high concentration of microorganisms, for example, for bacteria, up to 3 x 1010 bacteria per ml.

L'extrait nutritif complet < a1) peut être d'origine végétale ou d'origine animale. Dans le premier cas, ce -peut être un extrait base d'algues, lesquelles sont choisies notamment parmi les espèces Fucus, Lamjnarsa et Ascophyl Sum, ledit extrait étant amené à pH 7, par exemple par de l'oxyde de magnésium. The complete nutrient extract (a1) may be of vegetable origin or of animal origin. In the first case, it may be an extract based on algae, which are chosen in particular from the species Fucus, Lamjnarsa and Ascophyl Sum, said extract being brought to pH 7, for example by magnesium oxide.

Les agents hydrorétenteurs < a2) ou < b2) sont constitués avantageusement par des argiles, comme la bentonite, le kaolin, le talc ou la vermiculite. The hydroretenting agents (a2) or (b2) advantageously consist of clays, such as bentonite, kaolin, talc or vermiculite.

Quant aux agents filmogènes < bl), ils peuvent notamment être constitutés par des alginates, du chitosan ou d'autres bio-polymères. As for the film-forming agents (b1), they may in particular be constituted by alginates, chitosan or other biopolymers.

Conformément a. une autre caractéristique intéressante de l'invention, l'enveloppe (b) peut renfermer en outre au moins une substance phytostimulanté choisie notamment parmi les nitrates, les substances de croissance, les sels minéraux divers, etc, et/ou une substance phytosanitaire, choisie notamment parmi les fongicides, les insecticides et les herbicides compatibles avec les microorganismes enrobés. Comme substances phytostimulantes, on peut mentionner l'acide indol acétique et la Cytokinine. A propos des substances phytosanitaires, on utilisera les fongicides et les insecticides dans le cas où les microorganismes enrobés sont des bactéries, et des bactéricides et insecticides lorsque les micro-organismes enrobés sont des champignons.  In accordance with. another interesting feature of the invention, the envelope (b) may further contain at least one phytostimulant substance chosen in particular from nitrates, growth substances, various mineral salts, etc., and / or a phytosanitary substance chosen especially among fungicides, insecticides and herbicides compatible with coated microorganisms. As phytostimulant substances indol acetic acid and Cytokinin may be mentioned. In the case of phytosanitary substances, fungicides and insecticides should be used in the case where the coated microorganisms are bacteria, and bactericides and insecticides when the coated microorganisms are fungi.

En ce qui concerne la pellicule < c), elle est constituée avantageusement par une argile très hydrophile, comme la bentonite. As regards the film (c), it is advantageously constituted by a very hydrophilic clay, such as bentonite.

Concernant les proportions des différents composants des granulés qui constituent l'inoculum selon l'invention < après déshydratation), on peut indiquer que la matrice nourricière < a > peut comprendre de 5 a 10 g de l'extrait (a1) et de 1 à 5 g du (ou des) agents hydrorêtenteur(s) Ca2), pour 10 à 15 ml d'eau, et que l'enveloppe < b) peut comprendre de l à 5 g du (ou des) agent < s > filmogène < s) < bl) et de 5 å 20 g du (ou des) agents hydrorétenteurCs) < b2 > , pour 10 à 15 ml d'eau.Ceci correspond A la formulation initiale suivante - pour la matrice nourricière < a > , 5 & 10 g de l'extrait
(a1) et de l a 5 g du (ou des) agents hydro
rétenteur(s) < a2) pour 100 ml d'eau, le (ou les) micro
organisme < s) étant présente(s) dans ladite matrice par
exemple a une concentration de l'ordre de 107 a. Concerning the proportions of the various components of the granules which constitute the inoculum according to the invention (after dehydration), it can be indicated that the feeder matrix <a> can comprise from 5 to 10 g of the extract (a1) and from 1 to 5 g of the (or) hydroretenting agent (s) Ca 2), for 10 to 15 ml of water, and that the envelope <b) can comprise from 1 to 5 g of the <or> film-forming agent <s> s) <b1) and from 5 to 20 g of the water-repellent agent (s) <b2>, for 10 to 15 ml of water.This corresponds to the following initial formulation - for the feeder matrix <a>, 5 & 10 g of the extract
(a1) and the 5 g of the hydro agent (s)
retender (s) <a2) per 100 ml of water, the microphone (s)
organism <s) being present in said matrix by
example has a concentration of the order of 107 a.

1010 bactéries par ml d'eau pour les bactéries, et de
l'ordre de 10 à 106 propagules par ml d'eau pour les
champignons - pour l'enveloppe (b), 1 à 5 g du (ou des) agent < s)
filmogène(s) (bol) et s à 20 g du (ou des) agent(s)
hydrorétenteur(s) (b2) pour 100 ml d'eau.1010 bacteria per ml of water for bacteria, and
the order of 10 to 106 propagules per ml of water for the
mushrooms - for the shell (b), 1 to 5 g of the agent (s)
film-forming agent (s) (bolus) and s at 20 g of the agent (s)
hydroretenteur (s) (b2) per 100 ml of water.

En particulier, les granulés peuvent se présenter sous la forme d'éléments parasphériques dont le noyau (a) présente un diamètre moyen compris entre 2 et 6 mm et dont l'épaisseur de l'enveloppe < b) est comprise entre 0,5 et 3 mm, la pellicule externe, lorsqu'elle est présente, pouvant avoir une épaisseur comprise entre 1 et 3 mm. In particular, the granules may be in the form of parasphere elements whose core (a) has a mean diameter of between 2 and 6 mm and whose thickness of the envelope (b) is between 0.5 and 3 mm, the outer film, when present, may have a thickness of between 1 and 3 mm.

il n'y a pas de limitation particulière quant aux micro-organismes que l'on peut introduire dans le noyau. On peut citer les bactéries comme les Rhizobactéries, et les champignons comme les Xycorhizes. Des exemples particuliers de ces bactéries seront donnés ci-après en référence aux applications de l'inoculum selon l'invention. there is no particular limitation on the microorganisms that can be introduced into the nucleus. We can mention bacteria such as Rhizobacteria, and fungi such as Xycorrhizae. Particular examples of these bacteria will be given below with reference to the applications of the inoculum according to the invention.

La présente invention concerne également un procédé de préparation de l'inoculum qui vient d'être défini, dans lequel on utilise un agent filmogéne capable de passer de l'état soluble å ltétat insoluble, caractérisé par le fait que < A) on associe entre eux, dans un milieu aqueux, les
composant du noyau (a) des granulés de façon a obtenir
un premier système de consistance pateuse < B) on associe entre eux, dans un milieu aqueux, les
composants de l'enveloppe tb), de façon à obtenir un
second système de consistance piteuse, dans lequel
l'agent filmogéne est à l'état soluble tC > on fait passer les premier et second système précités
dans deux ajutages coaxiaux, le premier système, dans
l'ajutage central, et le second système, dans l'espace
annulaire délimité par les deux ajutages précités, de
façon qu'a la sortie de ce double ajutage, on obtienne
des gouttes de la matière de noyau entourée de la
matière d'enveloppe (D > on fait tomber ces gouttes dans un second milieu aqueux
dans lequel l'agent filmogène passe a l'état insoluble,
de façon à obtenir, par suite du durcissement dudit
agent filmogène, des granulés dispersés dans ledit
milieu (E) on recueille lesdits granulés et, le cas échéant, on
les sèche ; et < F) si on le souhaite, on enrobe ces granulés dans de la
matière de pellicule.The present invention also relates to a process for the preparation of the inoculum which has just been defined, in which a film-forming agent capable of passing from the soluble state to the insoluble state, characterized by the fact that <A) is associated between they, in an aqueous medium, the
core component (a) granules so as to obtain
a first system of pasty consistency <B) is associated with them, in an aqueous medium, the
components of the envelope tb), so as to obtain a
second system of pitiful consistency, in which
the film-forming agent is in the soluble state tc> the above-mentioned first and second systems are passed through
in two coaxial nozzles, the first system, in
the central nozzle, and the second system, in space
ring delimited by the two aforementioned nozzles,
way that the exit of this double nozzle, one obtains
drops of the core material surrounded by the
envelope material (D> these drops are dropped in a second aqueous medium
in which the film-forming agent goes to the insoluble state,
so as to obtain, as a result of the hardening of said
film-forming agent, granules dispersed in said
medium (E), said granules are collected and, if appropriate,
dry them; and <F) if desired, these granules are coated in
film material.

En particulier, à l'étape (B), on utilise comme agent filmogène, un alginate sous forme d'alginate de sodium dans de l'eau pure, et qu'a l'étape < D), on utilise, comme milieu aqueux de formation des granulés, un bain de sel de calcium, comme le succinate ou le gluconate, de façon à réaliser le déplacement des ions Na par les ions Ca
Les applications envisagées pour les inoculume selon l'invention sont les suivantes Introduction dans les substrats et dans les sols de
populations bénéfiques pour les plantes telles que des
bactéries (RhizobactEries, Rhizobium, Agrobacterfum
"K84", etc.) ou des champignons (Hycorhizes,
Trichoderma, etc.), entre autres pour régénérer des
sols "fatigués" et, corrélativement, constituer des
sols ou substrats résistant aux agents pathogènes.In particular, in step (B), an alginate in the form of sodium alginate in pure water is used as film-forming agent, and in step (D) the aqueous medium is used. forming granules, a calcium salt bath, such as succinate or gluconate, so as to effect the displacement of Na ions by Ca ions
The applications envisaged for the inoculum according to the invention are the following: Introduction in substrates and in soils of
beneficial populations for plants such as
bacteria (Rhizobacteria, Rhizobium, Agrobacterium
"K84", etc.) or fungi (Hycorhizes,
Trichoderma, etc.), among other things to regenerate
"tired" soils and, correspondingly, constituting
pathogen-resistant soils or substrates.

- Inoculation de sols et de substrats à l'aide de
bactéries pathogènes (Pseudomona solanacearum,
Agrobacterlum tumefaciens, Erwlnia carotova .) ou de
champignons pathogènes (Fusarium, Phytophthora,
Verticillium, Fytium > utiles dans les études de
résistance variétale par exemple.- Inoculation of soils and substrates with the aid of
pathogenic bacteria (Pseudomona solanacearum,
Agrobacterium tumefaciens, Erwlnia carotova.) Or
pathogenic fungi (Fusarium, Phytophthora,
Verticillium, Fytium> useful in studies of
varietal resistance for example.

- Inoculation de bactéries fermentatives dans les
ensilages afind'accélêrer les processus de
fermentation.- Inoculation of fermentative bacteria in
silage in order to speed up the process of
fermentation.

- Introduction de bactéries et/ou de levures dans
différents types de milieux agro-alimentaires
reconstitution de microflores des appareils digestifs
par incorporation dans les aliments (très bonne
compatibilité et facile biodégradabilité) ou par
ingestion directe, les inoculums de l'invention ayant,
par un choix judicieux de ses composants, une très
bonne compatibilité avec les aliments et étant
facilement biodégradables.- Introduction of bacteria and / or yeasts
different types of agri-food environment
reconstitution of microflora of digestive tract
by incorporation in food (very good
compatibility and easy biodegradability) or by
direct ingestion, the inocula of the invention having,
by a judicious choice of its components, a very
good compatibility with food and being
easily biodegradable.

Conformément à une autre application de l'invention, l'extrait nutritif,dans lequel les.microorganismes sont enrobés, peut également servir d'enrobage h des semences. In accordance with another application of the invention, the nutrient extract, in which the microorganisms are coated, can also be used for coating seeds.

Pour mieux illustrer l'objet de la présente invention, on décrira ci-après, de façon plus détaillée, la préparation d'un inoculum selon l'invention.  To better illustrate the object of the present invention, will be described below, in more detail, the preparation of an inoculum according to the invention.

I - Préparation de la matrice nourricière chargée de micro
organismes.I - Preparation of the feeder matrix loaded with micro
organizations.

A l'aide d'eau distillée stérile, on prépare une p & e à base de crème stérilisée d'algues Selon les algues utilisées, on obtient des crèmes- possédant des propriétés différentes. On peut également utiliser des poudres d'algues existant déjà dans le commerce. On ajuste le pH à 7 par de l'oxyde de magnésium. Sterile distilled water is used to prepare a sterile seaweed cream pie. Depending on the algae used, creams with different properties are obtained. It is also possible to use commercially available algae powders. The pH is adjusted to 7 with magnesium oxide.

Parallèlement, on prépare une suspension concentrée de micro-organismes, à laquelle on ajoute un peu de bentonite stérile. In parallel, a concentrated suspension of micro-organisms is prepared, to which a little sterile bentonite is added.

On mélange ces deux préparations durant plusieurs heures dans les proportions suivantes - crème d'algues à pH 7 . ........................ 90 g - bentonite . . ...... .................. 10 g - suspension concentrée de micro-organismes ....... 1000 ml
A l'état hydraté, ce milieu assure une excellente multiplication des micro-organismes. A l'état déshydraté (10 à 20% d'humidité résiduelle > , il permet une très bonne survie des micro-organismes. De plus, il se rèhydrate facilement et, lors de la rèhydratation, les microorganismes y trouvent.tous les ingrédients nécessaires à leur multiplication.Si l'on veut obtenir une matrice très concentrée en micro-organismes, il est possible de cultiver ceux-ci dans ce milieu en agitation et à une température optimale (25 à 28 C par exemple pour les bactéries du sol). These two preparations are mixed for several hours in the following proportions - seaweed cream at pH 7. ........................ 90 g - bentonite. . ...... .................. 10 g - concentrated suspension of micro-organisms ....... 1000 ml
In the hydrated state, this medium ensures excellent multiplication of microorganisms. In the dehydrated state (10 to 20% residual humidity), it allows a very good survival of the microorganisms, it also rehydrates easily and, during the rehydration, the microorganisms find all the necessary ingredients. multiplication.If we want to obtain a highly concentrated matrix of microorganisms, it is possible to cultivate them in this medium in agitation and at an optimal temperature (25 to 28 C for example for soil bacteria) .

Il - Préparation de l'enveloppe protectrice
On prépare par ailleurs un mélange stérile d'alginate de sodium et de kaolin dans les proportions suivantes - alginate de sodium .............................. 15 g - kaolin , 100 g - eau distillée ................................. 1000 ml
III - Obtention des granulés frais
On utilise le dispositif représenté sur la figure 1. Ce dispositif comprend deux récipients 1, 2 destinés à renfermer respectivement la matière de noyau et la matière d'enveloppe.Chacun de ces récipients l et 2, doté d'un dispositif d'agitation magnétlque, respectivement lç et 2p, est relié par une canalisation, respectivement 3 et 4, d un dispositif d'injection 5 qui sera décrit ci-apres et qui pénètre dans le col d'un récipient 6 destiné à recevoir les granulés formés. Sur chacune des canalisation 3 et 4 sont disposées des pompes péristaltiques respectivement 7 et 8 qui amènent les matières correspondantes dans le dispositif d'injection 5.Celui-ci est constitué par un double ajutage, le premier ajutage < 5)' étant formé ar l'extrémité d'un tube relié å la canalisation .4, et le second ( coaxial au premier étant relié à la canalisation 3.He - Preparation of the protective envelope
A sterile mixture of sodium alginate and kaolin is prepared in the following proportions - sodium alginate ........................... ... 15 g - kaolin, 100 g - distilled water ................................. 1000 ml
III - Obtaining fresh pellets
The device shown in FIG. 1 is used. This device comprises two containers 1, 2 intended to contain respectively the core material and the covering material. Each of these containers 1 and 2, equipped with a magnetic stirring device. respectively lc and 2p, is connected by a pipe, respectively 3 and 4, d an injection device 5 which will be described below and which enters the neck of a container 6 for receiving the granules formed. On each of the lines 3 and 4 are arranged peristaltic pumps respectively 7 and 8 which bring the corresponding materials into the injection device 5.This is constituted by a double nozzle, the first nozzle <5) being formed by end of a tube connected to the pipe .4, and the second (coaxial with the first being connected to the pipe 3.

En fonctionnement, la matière de noyau et la matière d'enveloppe parviennent dans le dispositif d'injection 5, de façon que la première soit entourée par la seconde. L'ensemble sort à la base du dispositif d'injection 5 sous la forme de gouttes 9, lesquelles tombent dans un bain 10 de succinate ou de gluconate de calcium (concentration 0, in) contenu dans le récipient 6. In operation, the core material and the shell material reach the injection device 5, so that the first is surrounded by the second. The assembly exits at the base of the injection device 5 in the form of drops 9, which fall into a bath 10 of succinate or calcium gluconate (concentration 0, in) contained in the container 6.

L'alginate de sodium entrant dans la formulation de la matière d'enveloppe, qui est une substance soluble dans l'eau, est alors transformé en alginate de calcium, insoluble dans l'eau, constituant, avec le kaolin qui compose également l'enveloppe, une couche résistante.The sodium alginate used in the formulation of the shell material, which is a water-soluble substance, is then converted into calcium alginate, which is insoluble in water, constituting, with the kaolin which also forms the envelope, a resistant layer.

Plus le temps de séjour des billes obtenues dans le sel de calcium est long, plus l'enveloppe est chargée en ions Ca++ et sera solide.  The longer the residence time of the beads obtained in the calcium salt, the more the envelope is loaded with Ca ++ ions and will be solid.

IV - Pelliculage des granulés
A la sortie du bain, on laisse ressuyer quelques heures les granulés a la température ambiante. Puis, on les roule dans une argile très hydrophile comme la bentonite, de manière a former une pellicule autour de chaque granulé.IV - Pellet coating
On leaving the bath, the granules are allowed to stand for a few hours at room temperature. Then, they are rolled in a very hydrophilic clay such as bentonite, so as to form a film around each granule.

Cette opération permet de conserver une humidité résiduelle et amortit l'écrasement à l'intérieur de la matrice, lequel pourrait être provoqué par une brutale déshydratation.This operation preserves residual moisture and dampens the crushing inside the matrix, which could be caused by a sudden dehydration.

La figure 2 illustre la libération des microorganismes dans le milieu inoculé. Figure 2 illustrates the release of microorganisms in the inoculated medium.

On introduit les granulés secs < figure 2A) dans un milieu humide (sol, substrat, appareil digestif, etc. > . Au contact de ce milieu, la pellicule P des granulés absorbe l'eau disponible, laquelle passe ensuite à travers l'enveloppe poreuse E. La réhydratation de la matrice, puis des micra-organismes du noyau N < figure 2B > se fait alors lentement et progressivement. Ensuite, l'enveloppe E se déchire sous la pression de la matrice et le contenu du granulé est libéré dans le milieu < figure 3C > . Dans un premier temps, les micro-organismes réhydratés absorbent les éléments nutritifs de la matrice qui sont à proximité, puis ils acquièrent leur autonomie et se dispersent dans le milieu. The dry granules (FIG. 2A) are introduced into a humid medium (soil, substrate, digestive system, etc.) In contact with this medium, the film P of the granules absorbs the available water, which then passes through the envelope. porous E. The rehydration of the matrix, then the micra-organisms of nucleus N <Figure 2B> is then slowly and progressively, then the envelope E tears under the pressure of the matrix and the contents of the granule are released in the medium <Figure 3C> Firstly, the rehydrated micro-organisms absorb the nutrients from the matrix that are nearby, then they acquire their autonomy and disperse in the medium.

Pour illustrer la bonne conservation dé l'inoculum selon l'invention, on a fabriqué, par le procédé qui vient d'être décrit ci-dessus, des granulés bactériens à base de
Pseudomonas f2 uorescens. To illustrate the good preservation of the inoculum according to the invention, it has been manufactured, by the process just described above, bacterial granules based on
Pseudomonas f2 uorescens.

Durant la fabrication, la viabilité des cellules de Fseudomonas fluorescens descend Jusqu'à environ 50 000 a 100 000 cellules viables par granulé sec lorsque l'on utilise une concentration de départ de l09 bactéries par millilitre . C'est ce qui est illustré par la figure 3 qui est la courbe de viabilité a 25*Ci2-C de ces cellules (souche L 26-l), les granulés ayant été dissous d +4*C dans du tampon phosphate 0,02M ; pH 6,4. During manufacture, the viability of Feudomonas fluorescens cells decreases to about 50,000 to 100,000 viable cells per dry granule when a starting concentration of 10 bacteria per milliliter is used. This is illustrated by FIG. 3, which is the 25 * Ci2-C viability curve of these cells (strain L 26-1), the granules having been dissolved at 4 ° C. in phosphate buffer 0, 02M; pH 6.4.

Légende de la figure 3
A : avant mélange
B : après mélange
C . après formation des billes
(noyau + enveloppe > ; et
D : après pelliculage et séchage.Legend of Figure 3
A: before mixing
B: after mixing
C. after formation of the beads
(core + envelope> and
D: after filming and drying.

Par la suite, la conservation de l'inoculum apparaît être satisfaisante puisqu'au 60ème jour, à la température du laboratoire 25-Cf2*C, le nombre de bactéries par granulé étant encore de 5000 à 10 000, suivant ce qui est illustré par la figure 4, les granulés étant dans les mêmes conditions que dans le cas de la figure 3. Subsequently, the conservation of the inoculum appears to be satisfactory since, on the 60th day, at the laboratory temperature 25 ° C.sub.2 ° C., the number of bacteria per granule is still 5000 to 10,000, as illustrated by FIG. FIG. 4, the granules being in the same conditions as in the case of FIG.

Certaines souches de Rhizobactéries (groupe Pseudomonas fluorescens - P. putida > ont un effet stimulateur de la croissance et de la protection des plantes. Lorsque l'on bactérie le système racinaire de la laitue par exemple, on peut obtenir un gain important de croissance et de rendement.L'ensemble des résultats obtenus pour diverses plantes expérimentées est indiqué dans le tableau
TABLEAU
BACTERISATION DES SUBSTRATS
Amélloration des rendements en fonction de l'age de la plante
PLANTE SUBSTRAT* % GAIN AGE
MAX./TEMOIN (jours)
PELARGONIUM
Poids frais de la plante T66% + S33 16,0 100
Nombre de boutures id 31,4 100
Nombre de boutures T20'h + E60 t HF20% 47,4 100
LAITUE
Poids frais de la feuille T100% 21,0 45
Poids frais de la feuille Te 50h + Tr 50% 19,0 53
Précocité de la pommaison id 113,0 53 CHRYSANTHEXE
Hauteur de la plante E45% + t 35% + T20% 30,4 36
Nombre de feuilles étalées id 26,9 36
POMMIER (Malus x 'Evereste' >
Hauteur de la plante T 75% + S 25% 44,0 45
Hauteur de la plante id 73,0 102
Hauteur de la plante id 12,0 480
Nombre de ramifications 20,4 480
POMMIER 'Golden Smothee'
Poids de fruits sol naturel 11,5 1460 t LEGENDE : T : Tourbe brune E : Ecorce de pin
S : Sable de Loire t : Tourbe blonde
Te : Terreau maraicher HF : Fibre de bois ("Hortifibre")
Tr : Terre franche. Certain strains of Rhizobacteria (group Pseudomonas fluorescens - P. putida> have a stimulating effect on the growth and protection of plants.When bacteria root system lettuce for example, we can obtain a significant gain in growth and The results obtained for various experimental plants are indicated in the table.
BOARD
BACTERIZATION OF SUBSTRATES
Improved yields according to the age of the plant
SUBSTRATE PLANT *% GAIN AGE
MAX./TEMOIN (days)
PELARGONIUM
Fresh weight of the plant T66% + S33 16.0 100
Number of cuttings id 31,4 100
Number of cuttings T20'h + E60 t HF20% 47,4 100
LETTUCE
Fresh weight of the sheet T100% 21.0 45
Fresh weight of the sheet Te 50h + Tr 50% 19,0 53
Precocity of the apple head id 113,0 53 CHRYSANTHEXE
Height of the plant E45% + t 35% + T20% 30.4 36
Number of leaves spread id 26,9 36
APPLE (Malus x 'Evereste'>
Plant height T 75% + S 25% 44.0 45
Height of the plant id 73,0 102
Height of the plant id 12,0 480
Number of branches 20.4 480
APPLE 'Golden Smothee'
Fruit weight natural soil 11.5 1460 t LEGEND: T: Brown peat E: Pine bark
S: Loire sand t: Blonde peat
Te: Terra maraicher HF: Wood fiber ("Hortifibre")
Tr: Frank earth.

Claims (23)

REVENDICATIONS 1 - Inoculum qui est formé de micro-organismes inclus dans un support et qui se présente sous la forme de granulés, caractérisé par le fait que les granulés comprennent < a) un noyau consistant en une matrice nourricière enrobant 1 - Inoculum which is formed of microorganisms included in a support and which is in the form of granules, characterized in that the granules comprise <a) a core consisting of a coating feeder matrix les micro-organismes a inoculer, ladite matrice the microorganisms to be inoculated, said matrix nourricière étant composée feeder being composed < 1) d'un extrait nutritif complet pour lesdits micro  <1) a complete nutrient extract for said micro organismes dans lequel ceux-ci sont enrobés ; et organisms in which they are coated; and < 2) d'au moins un agent hydrorétenteur ; et < b) une enveloppe protectrice poreuse entourant ledit noyau  <2) at least one hydroretenting agent; and <b) a porous protective envelope surrounding said core < a) et composée  <a) and composed < 1) d'au moins un agent filmogène susceptible de subir <1) at least one film-forming agent liable to undergo une dégradation biologique ; et biological degradation; and (2 > d'au moins un agent hydrorétenteur. (2> at least one hydroretenting agent. 2 - Inoculum selon la revendication 1, caractérisé par le fait que les granulés comportent en outre (c > une pellicule hydrophile protectrice entourant 2 - Inoculum according to claim 1, characterized in that the granules further comprise (c> a protective hydrophilic film surrounding l'enveloppe < b > .  the envelope <b>. 3 - Inoculum selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé par le fait que les micro-organismes sont apportés dans le noyau < a > sous la forme d'une suspension. 3 - Inoculum according to one of claims 1 and 2, characterized in that the microorganisms are brought into the core <a> in the form of a suspension. 4 - Inoculum selon l'une des revendications l à 3 présentant une concentration très élevée en microorganismes, caractérisé par le fait que la matricenourricière a constitué un milieu de culture desdites micro-organismes avant la formation des granulés. 4 - Inoculum according to one of claims 1 to 3 having a very high concentration of microorganisms, characterized in that the matricenourricière has formed a culture medium of said microorganisms before the formation of granules. 5 - Inoculum selon l'une des revendications l a 4, caractérisé par le fait que l'extrait nutritif complet < al) est d'origine végétale. 5 - Inoculum according to one of claims l to 4, characterized in that the complete nutrient extract (al) is of plant origin. 6 - Inoculum selon la revendication 5, caractérisé par le fait que l'extrait nutritif complet < al > est un extrait à base d'algues, lesquelles sont choisies notamment parmi les espèces Fucus, Laminarla et Ascopbyllum, ledit extrait étant amené å pH 7.  6 - Inoculum according to claim 5, characterized in that the complete nutrient extract "al" is an extract based on algae, which are chosen in particular from the species Fucus, Laminarla and Ascopbyllum, said extract being brought to pH 7 . 7 - Inoculum selon l'une des revendications 1 a 4, caractérisé par le fait que l'extrait nutritif complet < ai > est un extrait d'origine animale. 7 - Inoculum according to one of claims 1 to 4, characterized in that the complete nutrient extract <ai> is an extract of animal origin. 8 - Inoculum selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé par le fait que les agents hydrorétenteurs (a2) et < b2 > sont constitué par des argiles, comme la bentonite, le kaolin, le talc et la vermiculite. 8 - Inoculum according to one of claims 1 to 7, characterized in that the hydrorétenteurs agents (a2) and <b2> consist of clays, such as bentonite, kaolin, talc and vermiculite. 9 - Inoculum selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé par le fait que les agents filmogènes (b1) sont choisis parmi les alginates, le chitosan et d'autres biopolyméries. 9 - Inoculum according to one of claims 1 to 8, characterized in that the film-forming agents (b1) are chosen from alginates, chitosan and other biopolymeries. 10 - Inoculum selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé par le fait que l'enveloppe < b) renferme en outre au moins une substance phytostimulante et/ou au moins une substance phytosanitaire compatible avec les microorganismes présents dans le noyau (a).  10 - Inoculum according to one of claims 1 to 9, characterized in that the envelope <b) further contains at least one phytostimulant substance and / or at least one phytosanitary substance compatible with the microorganisms present in the nucleus (a ). 11 - Inoculum selon l'une des revendications 2 à 10, caractérisé par le fait que la pellicule (c > est constituée par une argile très hydrophile, comme la bentonite. 11 - Inoculum according to one of claims 2 to 10, characterized in that the film (c> is constituted by a very hydrophilic clay, such as bentonite. 12 - Inoculum selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisé par le fait que dans les granulés, après déshydratation, la matrice nourricière comprend de 5 à 10 g de l'extrait (a1) et de 1 à 5 g du (ou des) agent hydrorétenteur(s) (a2), pour 10 à 15 ml d'eau, et que l'enveloppe < b) comprend de 1 à 5 g du (ou des) agent(s) filmogène < s > (b1) et de 5 à 20 g du < ou des) des) agent(s) hydro rétenteur(s) (b2), pour 10 à 15 ml d'eau. 12 - Inoculum according to one of claims 1 to 11, characterized in that in the granules, after dehydration, the feeder matrix comprises 5 to 10 g of the extract (a1) and 1 to 5 g of (or a) hydroretentering agent (s) (a2), for 10 to 15 ml of water, and that the envelope <b) comprises from 1 to 5 g of the film-forming agent (s) <s> (b1) and from 5 to 20 g of the hydro-retaining agent (s) (b2) for 10 to 15 ml of water. 13 - Inoculum selon la revendication 12, caractérisé par le fait que sa formulation initiale est la suivante - pour la matrice nourricière < a), 5 à 10 g de l'extrait 13 - Inoculum according to claim 12, characterized in that its initial formulation is as follows - for the feeder matrix <a), 5 to 10 g of the extract (a1) et 1 à 5 g du (ou des) agent(s) hydrorétenteur(s) (a1) and 1 to 5 g of the agent (s) hydrorétenteureur (s) (a2) pour 100 ml d'eau, les micro-organismes étant (a2) per 100 ml of water, the micro-organisms being présents dans ladite matrice notamment à une present in said matrix, in particular at a concentration de l'ordre de 107 à 1010 bactéries par ml  concentration in the range of 107 to 1010 bacteria per ml d'veau pour les bactéries, et de l'ordre de 103 S  of veal for bacteria, and of the order of 103 S 106 propagules par ml d'eau pour les champignons - pour l'enveloppe < b > , 1-à 5 g du (ou des) agent (s) Propagules per ml of water for fungi - for the <b> shell, 1 to 5 g of the agent (s) filmogène(s) (b1) et 5 à 20 g du (ou des > agent(s)  film-forming agent (s) (b1) and 5 to 20 g of the agent (s) hydrorétenteur(s) < b2) pour 100 ml d'eau. hydroretenteur (s) <b2) per 100 ml of water. 14 - Inoculum selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé par le fait que les granulés se présentent sous forme d'éléments parasphériques dont le diamètre moyen du noyau < a > est compris entre 2 et 6 mm et dont l'épaisseur de l'enveloppe < b) est comprise entre 0,5 et 3 mm, la pellicule externe, lorsqu'elle est présente, ayant une épaisseur comprise entre 1 et 3 mm. 14 - Inoculum according to one of claims 1 to 13, characterized in that the granules are in the form of parasphere elements whose average core diameter <a> is between 2 and 6 mm and the thickness of which the envelope <b) is between 0.5 and 3 mm, the outer film, when present, having a thickness of between 1 and 3 mm. 15 - Inoculum selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisé par le fait que les micro-organismes sont choisis parmi les bactéries, comme Rhizobactéries, et les champignons,comme les Mycorhizes. 15 - Inoculum according to one of claims 1 to 14, characterized in that the microorganisms are selected from bacteria, such as Rhizobacteria, and fungi, such as Mycorrhizae. 16 - Inoculum selon l'une des revendications 1 à 15, caractérisé par le fait que l'extrait nutritif dans lequel les micro-organismes sont enrobés, sert également d' enrobage à des semences. 16 - Inoculum according to one of claims 1 to 15, characterized in that the nutrient extract in which the microorganisms are coated, also serves as a coating to seeds. 17 - Procédé de préparation de l'inoculum tel que défini à l'une des revendications 1 à 16, dans lequel on utilise un agent filmogene capable de passer de l'état soluble a l'état insoluble, caractérisé par le fait que (A) on associe entre eux, dans un milieux aqueux, les 17 - Process for preparing the inoculum as defined in one of Claims 1 to 16, in which a film-forming agent capable of passing from the soluble state to the insoluble state, characterized by the fact that (A ) in an aqueous medium, the composants du noyau < a > des granulés de façon & obtenir core components <a> way pellet & get un premier système de consistance pateuse < B > on associe entre eux, dans un milieu aqueux, les a first system of pasty consistency <B> is associated with each other, in an aqueous medium, the composants de l'enveloppe < b > , de façon å obtenir un components of the <b> envelope, so as to obtain a second système de consistance pâteuse, dans lequel second system of pasty consistency, in which l'agent filmogène est å l'état soluble (C) on fait passer les premier et second système précités the film-forming agent is in the soluble state (C) the first and second systems mentioned above are passed through dans deux ajutages coaxiaux, le premier système, dans in two coaxial nozzles, the first system, in l'ajutage central, et le second système, dans l'espace the central nozzle, and the second system, in space annulaire délimité par les deux ajutages précités, de  ring delimited by the two aforementioned nozzles, façon qu'à la sortie de ce double ajutage, on obtienne way that at the exit of this double nozzle, we get des gouttes de la matière de noyau entourée de la drops of the core material surrounded by the matière d'enveloppe CD > on fait tomber ces gouttes dans un milieu aqueux dans CD casing material> these drops are dropped into an aqueous medium in lequel l'agent filmogène passe à l'état insoluble, de the film-forming agent goes into the insoluble state, façon à obtenir, par suite du durcissement dudit agent to obtain, as a result of the hardening of said agent filmogène, des granulés dispersés dans ledit milieu < E) on recueille lesdits granulés et, le cas échéant, on les sèche ; et < F > si on le souhaite, on enrobe ces granulés dans de la film-forming, granules dispersed in said medium (E) said granules are collected and, if appropriate, dried; and <F> if desired, these pellets are coated in matière de pellicule. film material. 18 - Procédé selon la revendications 17, caractérisé par le fait qu'à l'étape < B), on utilise,. comme agent filmogène, un alginate sous forme d'alginate de sodium dans de l'eau pure, et qu'a l'étape (D), on utilise, comme milieu aqueux de formation des granulés, un bain d'un sel de calcium, comme le succinate ou le gluconate, de façon à réaliser le déplacement des ions Na par les ions Ca 18 - Process according to claim 17, characterized in that in step <B), is used ,. as the film-forming agent, an alginate in the form of sodium alginate in pure water, and that in step (D), a granular bath of a calcium salt is used as an aqueous medium for granule formation. , as succinate or gluconate, so as to carry out the displacement of Na ions by Ca ions 19 - Procédé selon l'une des revendications 17 et 18, caractérisé par le fait qu'avant de réaliser l'association de l'étape < A), on cultive les microorganismes dans le milieu constitué par l'extrait nutritif (al), en agitation, et à une température optimale pour les micro-organismes considérés. 19 - Method according to one of claims 17 and 18, characterized in that before carrying out the combination of step <A), the microorganisms are cultured in the medium consisting of the nutrient extract (a1), in agitation, and at an optimum temperature for the microorganisms considered. 20 - Utilisation de l'inoculum tel que défini à l'une des revendications 1 à 15, pour introduire dans les substrats et dans les sols, notamment pour les régénérer, des bactéries et champignons bénéfiques pour les plantes. 20 - Use of the inoculum as defined in one of claims 1 to 15, for introducing into the substrates and in the soil, in particular to regenerate, bacteria and fungi beneficial for plants. 21 - Utilisation de l'inoculum tel que défini à l'une des revendications 1 à 15, pour inoculer des sols et des substrats à l'aide de bactéries ou de champignons pathogènes, par exemple pour étudier la résistance variétale. 21 - Use of the inoculum as defined in one of claims 1 to 15, for inoculating soil and substrates with pathogenic bacteria or fungi, for example to study varietal resistance. 22 - Utilisation de l'inoculum tel que défini a l'une des revendications 1 à 15, pour inoculer des bactéries fermentatives dans les ensilages afin d'accélérer les processus de fermentation. 22 - Use of the inoculum as defined in one of claims 1 to 15 for inoculating fermentative bacteria in the silage to accelerate the fermentation process. 23 - Utilisation de l'inoculum tel que défini a l'une des revendications 1 à 15, pour introduire des bactéries ou des levures dans des milieux agro-alimentaires ou pour reconstituer des microflores des appareils digestifs par incorporation dans les aliments ou par ingestion directe.  23 - Use of the inoculum as defined in one of claims 1 to 15, for introducing bacteria or yeasts into agri-food environments or for reconstituting microflora of the digestive tract by incorporation into food or by direct ingestion .
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