FR2560046A1 - Dietetic product contg. bifidobacterium suis or infantis - Google Patents
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Abstract
Description
Produit diététique utile pour diminuer la concentration de laurée dans les liquides Physioloqiques et procédé pour sa préparation.Dietetic product useful for reducing the concentration of laurea in Physiological liquids and process for its preparation.
La présente invention concerne un produit diététique utile pour diminuer la concentration en urée des liquides physiologiques et un procédé pour sa préparation. The present invention relates to a dietetic product useful for reducing the urea concentration of physiological fluids and a process for its preparation.
Dans les cas de maladies rénales, de transplantations rénales et dans des cas analogues, le problème se pose d'éliminer l'urée de l'organisme. Normalement, 70% de l'urée formée dans le foie par dégradation des protéines sont excrétés par les reins, et une proportion pouvant aller jusqu'à 30% est également éliminée au travers de la paroi intestinale et détruite par des bactéries ; selon le pH régnant dans l'intestin, il y a fixation dans l'intestin et excrétion (aux pH acides) ou bien, en pH alcalin, il y a résorption et transport en retour de l'ammoniac toxique vers le foie. Dans les cas de maladies rénales, il fallait jusqu maintenant, pour éliminer l'excès d'urée non évacué par l'intestin, procéder à intervalles réguliers à une dialyse.Si l'on pouvait parvenir à éliminer une plus grande partie de l'urée par l'intermédiaire de l'intestin, on pourrait éventuellement diminuer la fréquence des dialyses ou même les supprimer totalement. In kidney disease, kidney transplants and the like, the problem arises of eliminating urea from the body. Normally, 70% of the urea formed in the liver by protein breakdown is excreted by the kidneys, and a proportion of up to 30% is also eliminated through the intestinal wall and destroyed by bacteria; depending on the pH prevailing in the intestine, there is fixation in the intestine and excretion (at acidic pH) or, at alkaline pH, there is resorption and return transport of the toxic ammonia to the liver. In cases of kidney disease, dialysis has been required until now to remove excess urea that is not released from the intestine, and if more can be eliminated, urea via the intestine, we could possibly decrease the frequency of dialysis or even eliminate them entirely.
Une condition préalable à cet égard serait que l'urée soit éliminée en continu de l'équilibre qui doit s'établir par l'intermédiaire de la paroi intestinale. Cette condition pourrait être remplie si on produisait dans l'intestin une flore microbienne possédant une forte activité de dégradation de l'urée. A prerequisite in this regard would be that urea is continuously eliminated from the balance which must be established through the intestinal wall. This condition could be fulfilled if a microbial flora with strong urea-degrading activity was produced in the intestine.
Setelae et collaborateurs de l'Université d'Helsinki ont déjà suggéré que les composés azotés résiduels des liquides physiologiques ne constituaient pas seulement des produits finals du métabolisme, devant être éliminés, mais, pour une partie d'entre eux, étaient utiles pour une nouvelle synthèse de protéines ou d'aminoacides, de sorte qu'ils ne devaient pas être éliminés complètement ; seul l'excès devrait etre éliminé. Pour parvenir à ce but, ils ont déjà proposé de modifier les conditions régnant dans l'intestin de manière à y accroitre la dégradation biologique de l'azote résiduel et à provoquer ainsi un déplacement de l'équilibre biologique dans l'intestin. Simultanément, le patient devrait être maintenu à un régime approprié.Dans ces conditions, pour modifier dans le sens voulu les conditions régnant dans l'intestin, on a utilisé des microorganismes du sol, des espèces Serratia, Pseudomonas et Rhizobium ou
Agrobacterium, sans autre précision, qui contiennent par adaptation des enzymes dégradant l'azote résiduel telles que des uréases, des créatinases et des enzymes analogues, et peuvent donc provoquer une dégradation accrue de l'azote résiduel, par exemple de l'urée, dans l'intestin (Kidney
International, volume 13, Suppl. 8 (1978), pages 194-202).Setelae and collaborators from the University of Helsinki have already suggested that the residual nitrogenous compounds of physiological fluids were not only end products of metabolism, to be eliminated, but, for some of them, were useful for a new synthesis of proteins or amino acids, so that they should not be eliminated completely; only the excess should be eliminated. To achieve this goal, they have already proposed to modify the conditions prevailing in the intestine so as to increase the biological degradation of the residual nitrogen therein and thus to cause a displacement of the biological balance in the intestine. Simultaneously, the patient should be kept on an appropriate diet. Under these conditions, to modify the conditions prevailing in the intestine in the desired manner, soil microorganisms, species Serratia, Pseudomonas and Rhizobium or
Agrobacterium, without further details, which contain, by adaptation, enzymes which degrade residual nitrogen such as ureases, creatinases and similar enzymes, and can therefore cause increased degradation of residual nitrogen, for example urea, in the gut (Kidney
International, volume 13, Suppl. 8 (1978), pages 194-202).
Toutefois, on a constaté que ces microorganismes n'avaient plus les propriétés voulues dans l'intestin (Proceeding Eur.However, it has been found that these microorganisms no longer have the desired properties in the intestine (Proceeding Eur.
Soc for Artificial Organs (ESAO) volume V, Zürich, 6-8.11.1978).Soc for Artificial Organs (ESAO) volume V, Zürich, 6-8.11.1978).
En outre, pour que leurs uréases possèdent une bonne activité, ces microorganismes exigent un pH à peu près neutre. Cependant, dans ces conditions, l'ammoniac formé à la scission de l'urée est à nouveau résorbé et exerce des effets toxiques inacceptables sur le foie. C'est la raison pour laquelle les travaux de Setelae n'ont pas conduit aux résultats voulus.In addition, for their ureases to have good activity, these microorganisms require an almost neutral pH. However, under these conditions, the ammonia formed by the cleavage of urea is again absorbed and exerts unacceptable toxic effects on the liver. This is the reason why the work of Setelae did not lead to the desired results.
L'invention vise à résoudre ce problème. Elle est basée sur la recherche d'une flore intestinale produisant une uréase ayant une forte activité en pH acide et présentant si possible son activité maximale dans ces conditions. En outre, il doit s'agir d'une uréase formée par constitution et non d'une uréase formée par adaptation en raison de la présence de l'urée. The invention aims to solve this problem. It is based on the research of an intestinal flora producing a urease having a strong activity in acid pH and presenting if possible its maximum activity under these conditions. In addition, it must be a urease formed by constitution and not a urease formed by adaptation due to the presence of urea.
On sait que le bas pH recherché dans l'intestin pour l'élimination de l'ammoniac peut être provoqué par une flore de Bifidus. On a maintenant trouvé qu'il existait certaines souches de Bifidus qui, par constitution, forment une uréase à forte activité en pH acide, que cette uréase pouvait scinder en continu l'urée traversant la paroi intestinale et, par conséquent, l'éliminer de l'équilibre. We know that the low pH sought in the intestine for the elimination of ammonia can be caused by a Bifidus flora. It has now been found that there are certain strains of Bifidus which, by constitution, form a urease with high activity at acid pH, that this urease could continuously split urea crossing the intestinal wall and, consequently, eliminate it from the balance.
L'invention a en conséquence pour objet un produit diététique utile pour diminuer la concentration en urée des liquides physiologiques, ce produit se caractérisant en ee qu'il contient des bactéries du type Bifidus contenant ellesmêmes de l'uréase, de l'espèce Bifidobacterium suis et/ou
Bifidobacterium infantis.The subject of the invention is therefore a dietary product useful for reducing the urea concentration of physiological fluids, this product being characterized in that it contains bacteria of the Bifidus type themselves containing urease, of the species Bifidobacterium suis and or
Bifidobacterium infantis.
Les bactéries du type Bifidus à utiliser con formée ment à l'invention, de l'espèce Bifidobacterium suis, ont été trouvées chez les porcs. Jusqu'à maintenant, on n'en a pas trouvé chez les humains. De préférence, on utilise dans le cadre de l'invention, la souche Bifidobacterium suis DSM 20211. La souche préférée de l'espèce Bifidobacterium infantis est la souche DSM 2877. Celle-ci consiste n bâtonnets à gram positif, pléomorphes, anaérobies, qui forment de l'acétate et de l'acide lactique à partir du glucose. La muréine de la paroi cellulaire est du type Orn-Ser-Ala-Thr-Ala. Outre B. Bifidus type bacteria to be used according to the invention, of the species Bifidobacterium suis, have been found in pigs. To date, it has not been found in humans. Preferably, in the context of the invention, the strain Bifidobacterium suis DSM 20211 is used. The preferred strain of the species Bifidobacterium infantis is the strain DSM 2877. This consists of gram-positive, pleomorphic, anaerobic rods, which form acetate and lactic acid from glucose. The cell wall murine is of the Orn-Ser-Ala-Thr-Ala type. Besides B.
infantis, B. longum et B. suis contiennent également ce type de muréine. Ces trois types sont, par le génome, étroitement apparentés. La souche ne peut pas provoquer la fermentation de l'arabinose ni du mélézitose et diffère ainsi de B.infantis et B. longum/B. suis.infantis, B. longum and B. suis also contain this type of murine. These three types are, by the genome, closely related. The strain cannot cause the fermentation of arabinose or melezitose and thus differs from B. infantis and B. longum / B. am.
Le produit diététique selon l'invention peut contenir la souche de Bifidus contenant de l'uréase du genre suis ou infantis seule mais de préférence cependant il contient une combinaison avec d'autres souches de Bifidus; qui présentent principalement une capacité considérable à former de l'acidité. Parmi ces souches de Bifidus, on citera par exemple Bifidobacterium adolescentis DSM 20083, 20086,
20087 et 20098 ; Bifidobacterium bifidum DSM 20082, 20215 et 20496 ; Bifidobacterium breve DSM 20091, 20213
Bifidobacterium catenulatum DSM 20103 ; Bifidobacterium infantis DSM 20088, 20090 et 20223 ; Bifidobacterium longum
DSM 20097 et 20219 ; Bifidobacterium sp DSM 20093.The dietetic product according to the invention may contain the strain of Bifidus containing urease of the genus suis or infantis alone but preferably however it contains a combination with other strains of Bifidus; which mainly have a considerable capacity to form acidity. Among these strains of Bifidus, there may be mentioned for example Bifidobacterium adolescentis DSM 20083, 20086,
20087 and 20098; Bifidobacterium bifidum DSM 20082, 20215 and 20496; Bifidobacterium breve DSM 20091, 20213
Bifidobacterium catenulatum DSM 20103; Bifidobacterium infantis DSM 20088, 20090 and 20223; Bifidobacterium longum
DSM 20097 and 20219; Bifidobacterium sp DSM 20093.
En dehors des souches de Bifidus mentionnées, le produit diététique selon l'invention peut encore contenir des additifs usuels tels que des substances aromatisantes, des colorants, des diluants et des substances analogues. Apart from the Bifidus strains mentioned, the dietetic product according to the invention can also contain usual additives such as flavoring substances, colorings, diluents and similar substances.
De préférence, le produit contient en outre des constituants du milieu de culture, c'est-à-dire des matières solides contenues dans le milieu de culture dans lequel on a produit les bactéries. En particulier donc, le produit diététique contient des constituants lactés ou des matières solides de lait de soja et éventuellement encore de la peptone et/ou de l'extrait de levure.Preferably, the product also contains constituents of the culture medium, that is to say solid materials contained in the culture medium in which the bacteria have been produced. In particular, therefore, the dietetic product contains milk constituents or soya milk solids and possibly also peptone and / or yeast extract.
Le produit diététique selon l'invention peut être mis sous une forme quelconque appropriée à l'administration orale. De préférence, il est à l'état lyophilisé, et il est dispersé avant administration par addition d'un liquide potable tel que l'eau, le lait, le thé ou un liquide analoque jusqu'à consistance appropriée, Puis bu. Toutefois, on peut également administrer sous d'autres formes, par exemple dans des capsules de qélatine. The dietetic product according to the invention can be put into any form suitable for oral administration. Preferably, it is in the lyophilized state, and it is dispersed before administration by the addition of a drinking liquid such as water, milk, tea or a liquid similar to an appropriate consistency, then drunk. However, it can also be administered in other forms, for example in gelatin capsules.
L'invention a également pour objet un procédé préféré pour préparer le produit diététique selon l'invention. The invention also relates to a preferred process for preparing the dietetic product according to the invention.
Selon ce mode de réalisation préféré, on cultive au moins une souche Bifidobacterium suis ou infantis et le cas échéant une autre souche de Bifidobacterium dans un milieu nutritif approprié et on lyophilise la culture obtenue.According to this preferred embodiment, at least one Bifidobacterium suis or infantis strain and, if appropriate, another Bifidobacterium strain are cultivated in an appropriate nutritive medium and the culture obtained is lyophilized.
Les milieux nutritifs qui conviennent sont toutes les solutions nutritives convenant du point de vue physiologique, diététique et gustatif, de préférence des produits lactés, par exemple le lait de soja qui est préféré, ou bien le petit-lait et plus particulièrement le lait écrémé. The nutritive media which are suitable are all the nutritive solutions which are suitable from the physiological, dietetic and gustatory point of view, preferably milk products, for example soy milk which is preferred, or else whey and more particularly skimmed milk.
On peut introduire dans les milieux nutritifs d'autres additifs, par exemple l'extrait de levureet/ou des peptones et/ou d'autres substances favorisant la digestion, de préférence en quantité de 1 à 10 g/l par rapport au milieu nutritif fini. En particulier, lorsqu'on utilise du lait écrémé préparé habituellement à partir de poudre de lait écrémé et d'eau, il est recommandé d'ajouter de l'extrait de levure et/ou de la peptone. On peut également utiliser un mélange de deux ou plusieurs des milieux nutritifs appropriés mentionnés ci-dessus. De préférence, on ajoute 0,4 à 0,5% en poids d'extrait de levure et 0,4 à 0,6% en poids de peptone, par rapport au volume de la solution.Other additives can be introduced into the nutrient media, for example yeast extract and / or peptones and / or other substances promoting digestion, preferably in an amount of 1 to 10 g / l relative to the nutrient medium. finished. In particular, when using skim milk usually prepared from skim milk powder and water, it is recommended to add yeast extract and / or peptone. It is also possible to use a mixture of two or more of the suitable nutrient media mentioned above. Preferably, 0.4 to 0.5% by weight of yeast extract and 0.4 to 0.6% by weight of peptone are added, relative to the volume of the solution.
Comme on l'a déjà signalé, on peut ajouter au produit diététique selon l'invention d'autres additifs usuels, en particulier des additifs convenant pour les applications diététiques, par exemple du glucose, du bêta-lactose et du lactulose. A l'état lyophilisé, le produit contient de préférence de 106 à 1010, plus particulièrement de 108 à cellules bactériennes vivantes de Bifidum par gramme. As already mentioned, other usual additives can be added to the dietetic product according to the invention, in particular additives suitable for dietetic applications, for example glucose, beta-lactose and lactulose. In the lyophilized state, the product preferably contains from 106 to 1010, more particularly from 108 to live Bifidum bacterial cells per gram.
Les microorganismes sont cultivés de la manière connue et habituelle. The microorganisms are cultivated in the known and usual manner.
La durée de culture dépend de la température. The culture time depends on the temperature.
De préférence, on cultive pendant 15 à 30 h à une température de 15 à 450C et plus particulièrement pendant 24 h à une température de 37 + 20C. Pendant la culture, on maintient de préférence un pH de 5,7 à 5,9, de préférence au moyen d'un alcali. Le lait de chaux (solution d'hydroxyde de calcium) qu'on ajoute en général 2 à 4 fois au cours de la culture, convient tout particulièrement.Preferably, it is cultivated for 15 to 30 h at a temperature of 15 to 450C and more particularly for 24 h at a temperature of 37 + 20C. During cultivation, a pH of 5.7 to 5.9 is preferably maintained, preferably by means of an alkali. Lime milk (calcium hydroxide solution), which is generally added 2 to 4 times during cultivation, is particularly suitable.
Le produit diététique selon l'invention permet de diminuer-la quantité d'urée des liquides physiologiques beaucoup plus fortement que par l'élimination intestinale normale. On peut alors, même dans le cas de défaillance rénale, diminuer la teneur en urée au point que les quantités résiduelles soient inoffensives ou puissent être éliminées sans traitement de dialyse ou par un plus petit nombre de traitements, de sorte qu'on peut prolonger considérablement la période séparant les dialyses individuelles. The dietetic product according to the invention makes it possible to decrease the amount of urea of physiological fluids much more strongly than by normal intestinal elimination. One can then, even in the case of renal failure, reduce the urea content to the point that the residual amounts are harmless or can be eliminated without dialysis treatment or by a smaller number of treatments, so that one can prolong considerably the period between individual dialysis.
Naturellement, le malade en ressent un grand soulagement mais en outre, on évite une élimination excessive des composés azotés nécessaires pour les nouvelles synthèses dans l'organisme.Naturally, the patient feels great relief, but in addition, it avoids excessive elimination of the nitrogen compounds necessary for new syntheses in the body.
L'exemple qui suit illustre l'invention sans toutefois en limiter son cadre. The example which follows illustrates the invention without however limiting its scope.
Exemple
On inocule par une culture pure de Bifidobacterium infantis DSM 2877 une solution nutritive préparée à partir de poudre de lait de soja et d'eau, à laquelle on a ajouté, par rapport à la solution nutritive finie, 0,5 en poids d'extrait de levure et 0,5S en poids de peptone. On cultive pendant 24 h à une température de 370 C. A intervalles réguliers d'environ 8 h, on règle le pH à 5,8 - 5,9 par addition de la quantité nécessaire de lait de chaux. On refroidit ensuite la culture et on lyophilise. Le lyophilisat ainsi obtenu est conservé au froid. Pour l'administration, on délaie le produit dans de l'eau tiède (environ 1 cuillère à thé pour 1/4 de litre d'eau) et on boit immédiatement la suspension obtenue.Example
A pure solution of Bifidobacterium infantis DSM 2877 is inoculated with a nutritive solution prepared from powdered soy milk and water, to which was added, with respect to the finished nutritive solution, 0.5 by weight of extract. yeast and 0.5% by weight of peptone. Cultivation is carried out for 24 h at a temperature of 370 C. At regular intervals of approximately 8 h, the pH is adjusted to 5.8 - 5.9 by adding the necessary quantity of lime milk. The culture is then cooled and lyophilized. The lyophilisate thus obtained is kept cold. For administration, dilute the product in lukewarm water (about 1 teaspoon for 1/4 liter of water) and immediately drink the suspension obtained.
A la place du lait de soja, on peut utiliser du lait écrémé ou du petit-lait. Instead of soy milk, skim milk or whey can be used.
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