FR2531436A1 - Substituted pentasaccharides possessing biological properties, their preparation and their uses as medicaments - Google Patents

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FR2531436A1 FR8213804A FR8213804A FR2531436A1 FR 2531436 A1 FR2531436 A1 FR 2531436A1 FR 8213804 A FR8213804 A FR 8213804A FR 8213804 A FR8213804 A FR 8213804A FR 2531436 A1 FR2531436 A1 FR 2531436A1
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Jean Choay
Jean-Claude Jacquinet
Maurice Petitou
Pierre Sinay
Jean-Claude Lormeau
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Abstract

Pentasaccharides with a (D-glucosamine)-(glucuronic acid)- (D-glucosamine)-(L-iduronic acid)-(D-glucosamine) structure possessing high anti-Xa (Yin Wessler) activity. These products may be used, in particular, as antithrombotic medicaments.

Description

"Pentasaccharides substitués possédant des propriétés
biologiquest leur préparation etleurs applications en tant
que médicaments"
L'invention est relative à de nouveaux pentasaccharides possédant dcs propriétés biologiques leur permettant, notamment de ne contrôler que certaines étapes de la coagulation sanguine
Elle a également pour objet un procédé de synthèse de dérivés à structure pentasaccharidique.
"Substituted pentasaccharides having properties
biology is their preparation and their applications as
that drugs "
The invention relates to novel pentasaccharides having biological properties enabling them, in particular, to control only certain stages of blood coagulation.
It also relates to a process for the synthesis of pentasaccharide derivatives.

L'invention concerne en outre, l'application des pentasaccharides biologiquement actifs en question en tant que principes actifs de médicaments
Les recherches des inventeurs, qui ont amené à la mise au point de l'invention, portent sur l'obtention, par voie de synthèse,d'oligosaccharides comportant des motiffs constitutifs de channes hépariniques et présentant une activité anti-Xa (Yin-Wessler) plus élevée que celle de l'h@parine avec une activité anticoagulante globale (mesurée selon le test USP ou APTT) plus faible que celle de l'héparine.
The invention further relates to the application of the biologically active pentasaccharides in question as active ingredients of medicaments
The inventors' research, which led to the development of the invention, relates to obtaining, by way of synthesis, oligosaccharides comprising motifs constituting heparinic chants and exhibiting anti-Xa activity (Yin-Wessler). ) higher than that of h @ parine with an overall anticoagulant activity (measured according to the USP or APTT test) lower than that of heparin.

On rappelle que la détermination de l'activité anti-Xa selon le test de Yin-Wessler est rapportée nar ces auteurs dans J,La Cbim.Med. 1976, 81,298-300. It is recalled that the determination of the anti-Xa activity according to the Yin-Wessler test is reported by these authors in J, La Cbim.Med. 1976, 81, 298-300.

Le test USP est décrit dans "Pharmacopea O í7 the United States of America", pages 229-230 (voir également le deuxieme supplément USP-NFF,p.62 et le quatrième supplement USP~NF, p.90,respectivement intitulés "Drug substances" et "Dosage forms"). The USP test is described in "Pharmacopea ™ United States of America", pages 229-230 (see also USP-NFF Supplement No. 2, p. 62 and USP-NF Supplement No. 4, p.90, respectively, entitled "Drug". substances "and" Dosage forms ").

Le titre APTT est mcsuré selon la méthode de J. Caen et al, dans l'hémo@tase,Expansion scientifique française,
Paris, 1968, pages 1@3-135.
The title APTT is measured according to the method of J. Caen et al, in the hemo @ tase, French scientific expansion,
Paris, 1968, pages 1 to 3-135.

Les travaux effectués par les inventeurs ont montre qu'en réalisant la condensation de motifs saccharidiques substitués selon une stratégie donnée, il était possible d'obtonir des pentasaccharides d'un Intérêt tout particulier au regard de leurs propriétés anticoagulantes spécifiques.  The work done by the inventors has shown that by carrying out the condensation of substituted saccharide units according to a given strategy, it was possible to obtain pentasaccharides of particular interest with regard to their specific anticoagulant properties.

L'invention a donc pour but de fournir de nouveaux pentasaccharides dont la structure de base comporte des motifs constitutifs des chaines d'héparine. The object of the invention is therefore to provide new pentasaccharides whose basic structure comprises constituent units of the heparin chains.

Elle vise également un procédé d'obtention de composés à structure pentasaccharidique substituée par voie de synthèse, ce qui permet donc, selon un avantage essentiel de l'invention, d'élaborer de tels composés à l'échelle industrielle et avec un degre d pureté très élevé. It also relates to a process for obtaining compounds with pentasaccharide structure substituted by synthesis, which therefore allows, according to an essential advantage of the invention, to develop such compounds on an industrial scale and with a degree of purity. very high.

L'invention vise; en outre, à fournir des principes actifs @t les médicaments eux-mêmes, capables d'inhiber certains facteurs del coagulation et tout particulièrement le acteur Xa,quand ils sont présents dans le sang,avec un degré de sélectivité élevé vis-à-vis d'autres facteurs dont e facteur Il ce qui est lié à une très faible activité sur la coagulation globale. The invention aims; in addition, to provide active principles @t the drugs themselves, capable of inhibiting certain coagulation factors and especially the actor Xa, when they are present in the blood, with a high degree of selectivity vis-à-vis other factors including e factor II which is related to a very low activity on global coagulation.

Les pentasaccharides de l'invention répondent à la formule (I)

Figure img00020001

dans laquelle - les groupes R,identiques ou différents les uns des autres, représentent un atome d'hydrogène ou un '--radical, physiologiquement accep@able, type -R1R2, dans lequel R1 représente avantageusement un anion minéral, en particulier un groupe SO3 et R2 représente un cation métallique, notamment un metal alcalin tel que le sodium ou alcaiino-terreux, tel que le calcium ou le magnésium, ou un cation organique tel qu'un dérivé ae base organique azotée, et - les substituants A, identiques ou différents les uns des autres, représentent un atome d'hydrogène, ou encore un cation métallique ou un cation organique sels que définsi cidessus. The pentasaccharides of the invention correspond to formula (I)
Figure img00020001

in which - the groups R, identical to or different from each other, represent a physiologically acceptable hydrogen atom or a '--radical, type -R 1 R 2, in which R 1 advantageously represents a mineral anion, in particular a group SO3 and R2 represents a metal cation, in particular an alkali metal such as sodium or alkaline earth metal, such as calcium or magnesium, or an organic cation such as a nitrogen-based organic base derivative, and the identical substituents A, or different from each other, represent a hydrogen atom, or a metal cation or an organic cation salts as described above.

Dans des pentasaccharides préférés cours les groupes R sont identiques entre eux. Dans d'autres pentasaccharides, tous les groupes A sont, en outre, idontiques entre eux. In preferred pentasaccharides the R groups are identical to each other. In other pentasaccharides, all the groups A are, furthermore, idonetic with each other.

Un pentasaccharide de ce type, particulièrement préféré comporte comme substituants de type R, un groupe -S03Na et comme substituants A un groupe Na. A particularly preferred pentasaccharide of this type contains as substituents of type R, a group -SO 3 Na and as substituents A an Na group.

Ce pentasaccharide répond ainsi à la formule III) suivante

Figure img00030001
This pentasaccharide thus corresponds to the following formula III)
Figure img00030001

Les pentasaccharides de l'invention sont, en outre, caractérisés par des titres Yin-Wessler largement supérieurs à ceux de l'héparine. Plus spécialement, le pentasaccharide de formule Il est doté d'une activité anti-Xa (Yin-Wessler) égaie ou supérieure à 2000 u/mg,atteignant 2500 u/mg. In addition, the pentasaccharides of the invention are characterized by Yin-Wessler titers which are much higher than those of heparin. More particularly, the pentasaccharide of formula II has anti-Xa (Yin-Wessler) activity equal to or greater than 2000 u / mg, up to 2500 u / mg.

Dans un test utilisant un substrat chromogène, cette activité a meme été de 4000 unités anti Xa/mg (méthode de
TEIEN A.M. et LIE modifiée ; Thromboses Research No 10,1977, 388-410.)
Ce test consiste à utiliser le facteur Xa commercialisé par la Société SIGMA en solution à 8 u/ml dans du sérum physiologique, la concentration du substrat étant de 1,33 mM.
In a test using a chromogenic substrate, this activity was even 4000 units anti Xa / mg (method of
TEIEN AM and LIE modified; Thrombosis Research No 10,1977, 388-410.)
This test consists in using the factor Xa marketed by SIGMA Company in solution at 8 u / ml in physiological saline, the concentration of the substrate being 1.33 mM.

Pour effectuer ce test, on peut procéder de la façon suivante. To perform this test, you can proceed as follows.

On mélange 10 pl de solution à doser et 300 1 de plasma humain dilué avec du tampon Tris maléate 0,02 M, pH 5. 10 μl of solution to be assayed and 300 l of human plasma diluted with 0.02 M Tris maleate buffer, pH 5, are mixed.

On laisse incuber une minute à 37 OC.  Incubate for one minute at 37 OC.

On ajoute 100 1 du susdit facteur Xa (8 u/ml) et une minute après on injecte la solution obtenue dans le substrat. 100 μl of the aforesaid factor Xa (8 μl / ml) are added and after one minute the solution obtained is injected into the substrate.

L'activité anticoagulante qlobale de ces produits est très faible, 4 u/mg dans le test APTT. The overall anticoagulant activity of these products is very low, 4 u / mg in the APTT test.

Ces propriétés leur permettent de cont ler, de manière spécifique, certaines étapes de la coagulation sanguine. These properties allow them to contol, in a specific way, certain stages of blood coagulation.

L'étude de ces produits montre qu'iis scnt
capables d'exercer une activité antithrombotique puis
sante et que les risques dthémorragie sont avantageu
sement pratiquement éliminés en raison de leur faible
activité anticoagulante globale.
The study of these products shows that it is
able to perform antithrombotic activity then
health and that the risk of bleeding is
practically eliminated because of their low
overall anticoagulant activity.

Les pentasaccharides de l'invention sont, en
outre avantageusement dépourvus de toxic té.
The pentasaccharides of the invention are, in
In addition, they are advantageously free of toxicities.

Ces produits sont donc particulièrement précieux pour l'élaboration de médicaments utilisables, notamment, pour le traitement des thromboses. These products are therefore particularly valuable for the development of usable drugs, especially for the treatment of thromboses.

L'invention est donc relative à des préparations pharmaceutiques qui renferment lesdits pentasaccharides a activité anti-Xa élevée. The invention thus relates to pharmaceutical preparations which contain said pentasaccharides with high anti-Xa activity.

Elle est plus particulièrement relative à des préparations pharmaceutiques dépourvues desllbstances pyrogènes, contenant une quantité efficace deprincipes actifs en association avec des excipients pharmaceutiques. More particularly, it relates to pharmaceutical preparations lacking pyrogenic substances, containing an effective amount of active ingredients in combination with pharmaceutical excipients.

Elle concerne également les compositions dans lesquelles le véhicule pharmaceutique est approprié pour l'administration par voie orale. Des formes d'administration de l'invention appropriées pour l'administration par voie orale peuvent être avantageusement des gélules gastrorésistantec, des comprimés ou tablettes, des pilules, ou encore présentées sous forme de liposomes. It also relates to compositions in which the pharmaceutical carrier is suitable for oral administration. Forms of administration of the invention suitable for oral administration may advantageously be gastroresistant capsules, tablets or tablets, pills, or presented as liposomes.

D'autres compositions pharmaceutiques comprennent ces pentasaccharides en association avec les excipients appropriés pour l'administration par voie rectale. Des formes d'administration correspondantes sont constituées par des suppositoires. Other pharmaceutical compositions include these pentasaccharides in combination with excipients suitable for rectal administration. Corresponding dosage forms are suppositories.

D'autres formes d'administration de l'invention sont constituées par des aérosols ou despommades. Other forms of administration of the invention are aerosols or pomades.

L'invention concerne également dns compositions pharmaceutiques injectables, stériles ou stérilisables. The invention also relates to injectable, sterile or sterilizable pharmaceutical compositions.

pour administration tant par voie intraveineuse, qu'intra- musculaire ou sous cutanée.for intravenous, intramuscular or subcutaneous administration.

Ces solutions renferment avantageusement 1000 à 100 000 u (Yin-Wessler)/ml de pentasaccharides, de préférence de 5000 à 50 000, par exemple de 25 000 u/l, lorsque ces solutions sont destinées à l'injection par voie sous-cutanée. Elles peuvent contenir, par exemple, de 500 à 10 000, notamment 5000 u/ml de pentasaccharides lnrsu'clles sont destinées à l'injection par voie intraveineuse ou par perfusion
Avantageusement, de telles preparations pharmaceu- tiques sont présentées sous la forme de seringues non récupérables, prestes à l'emploi.
These solutions advantageously contain 1000 to 100,000 μ (Yin-Wessler) / ml of pentasaccharides, preferably 5,000 to 50,000, for example 25,000 μ / l, when these solutions are intended for subcutaneous injection. . They may contain, for example, from 500 to 10,000, in particular 5,000 u / ml of pentasaccharides, which are intended for intravenous injection or infusion.
Advantageously, such pharmaceutical preparations are presented in the form of non-recoverable syringes, ready for use.

L'invention concerne également les compositions pharmaceutiques contenant lesdits pentasaccharides en association avec un autre principe actif, utilisable en particulier pour la prophylaxie et le traitement de thrombose, tel qu'un agent veinotonique comme la dihydroergotamine, un sel d'acide nicotinique ou un agent thrombolytique comme l'urokinase. The invention also relates to pharmaceutical compositions containing said pentasaccharides in combination with another active ingredient, usable in particular for prophylaxis and treatment of thrombosis, such as a venotonic agent such as dihydroergotamine, a nicotinic acid salt or an agent thrombolytic as urokinase.

Les compositions pharmaceutiques de l'invention sont particulièrement adaptées pour le contrôle (préventif ou curatif) de certaines étapes de la coagulation du sana chez l'homme ou l'animal), notamment dans le cas où le patient est soumis à des risques d'hypercoagulabi- lité résultant notamment d'opérations chirurgicales, de processus atheromateux, de développement de tumeurs t a troubles de la coagulation par des activateurs bactériens ou enzymatiques etc..  The pharmaceutical compositions of the invention are particularly suitable for the control (preventive or curative) of certain stages of the coagulation of sana in humans or animals), particularly in the case where the patient is subject to risks of hypercoagulability resulting in particular from surgical operations, atheromatous processes, development of tumors and coagulation disorders by bacterial or enzymatic activators, etc.

Afin d'illustrer l'invention. on indique, ci-après,
un exemple de posologie utilisable chez l'homme
cette posologie comprend, par exemple, l'administration
au patient de 1000 à 25 000 u (Yin et Wecsler) par voie
sous-cutanée, une à trois fois par jour, selon le
niveau des risques d'hypercoagulabilité ou la condition
thrombotique du patient, ou de 1000 à 25000 u/2^ heures,
par voie intraveineuse, en administrations discontinues
à intervalles réguliers, ou continues par perfusion, ou
encore de 1000 à25 000 u (trois fois par semaine) par
voie intramusculaire ou sous-cutanée (ces titres sont
exprimés en unités Yin-Wessler).Ces doses peuvent
etre naturellement ajustées pour chaque patient en fonction des résultats et des analyses de sang effectuées auparavant, la nature des affections dont il souffre et, d'une manière générale, son état de santé.
To illustrate the invention. we indicate, below,
an example of a dosage that can be used in humans
this dosage includes, for example, the administration
to the patient from 1000 to 25 000 u (Yin and Wecsler) per
subcutaneously, one to three times daily, according to
risk level of hypercoagulability or the condition
thrombotic patient, or 1000 to 25000 u / 2 hours,
intravenous, in discontinuous administrations
at regular intervals, or continuous by infusion, or
still 1,000 to 25,000 u (three times a week) per
intramuscular or subcutaneous (these titles are
expressed in Yin-Wessler units). These doses may be
to be naturally adjusted for each patient according to the results and blood tests carried out beforehand, the nature of the affections from which he suffers and, in general, his state of health.

L'invention se rapporte également à l'application des pentasaccharides de l'invention, à la constitution de réactifs biologiques, utilisables en laboratoires, notamment comme élpments de comparaison pour l'étude d'autres substances dont on souhaite tester l'activité anticoagulante, notamment au niveau de l'inhibition du facteur Xa et du dosage de l'antithrombine III. The invention also relates to the application of the pentasaccharides of the invention, to the constitution of biological reagents, usable in laboratories, especially as comparative elements for the study of other substances whose anticoagulant activity is to be tested, especially at the level of factor Xa inhibition and antithrombin III assay.

Elle vise également l'application de ces pentasaccharides en médecine nucléaire, en tant que produits radiopharmaceutiques. Ces produits sont alors marqués par des traceurs choisis parmi ceux couramment utilisés dans ce domaine, et notamment à l'aide de technétium 99 m. It also applies to the application of these pentasaccharides in nuclear medicine as radiopharmaceuticals. These products are then labeled with tracers chosen from those commonly used in this field, and in particular using technetium 99 m.

A cet effet, on transforme le technétium 99 m obtenu à partir de générateurs du commerce, sous forme de pertechnétate desodium de valence 7 non réactif, en technétium réduit de valence 4 qui serait la forme la plus réactive du technétium. Cette transformation est effectuée grâce à un système réducteur réalisé à partir de sels d'étain (chlorure stanneux), de sels de fer (sulfate ferreux), de sels de titane (tri chlorure de titane) ou autres sels. For this purpose, the technetium 99 m obtained from commercial generators, in the form of non-reactive valence 7 pertechnetate desodium, is converted into reduced technetium of valence 4 which would be the most reactive form of technetium. This transformation is carried out by means of a reducing system made from tin salts (stannous chloride), iron salts (ferrous sulphate), titanium salts (tri-titanium chloride) or other salts.

La plupart du temps, cette simple rédu@tion du terhnétium suffit, dans des conditions de pH données, à réaliser la fixation du technétium sur la molécule considérée. Most of the time, this simple reduction of terhe- tium is sufficient, under given pH conditions, to achieve the fixation of technetium on the molecule in question.

On peut utilise les produits de l'invention, qui constituent en quelque sorte un support, à des doses de l'ordre de 100 à 200 u Yin-Wessler. The products of the invention, which constitute a kind of support, can be used at doses of the order of 100 to 200 μ Yin-Wessler.

Pour l'élaboration de ces réactifs radiopharmaceu- tiques, on peut opérer confor@ément à la méthode de P.V. KULKARNI et al. dans The Journal of Nuclear Médecine 21, No 2,. p. 117-121.  For the development of these radiopharmaceutical reagents, the method of P.V. KULKARNI et al. in The Journal of Nuclear Medicine 21, No. 2 ,. p. 117-121.

Les produits ainsi marqués sont avantageusement utilisés dans des tests in vivo pour la détection et le diagnostic d'extension des thromboses et des états thrombotiques. The products thus labeled are advantageously used in in vivo tests for detecting and diagnosing the extension of thromboses and thrombotic states.

Les nouveaux pentasaccharides biologiquement actifs-de l'invention sont avantageusement obtenus par réaction d'un monosaccharide à structure D-glucosamine de formule (III)

Figure img00080001

avec un tétrasaccharide formé d'un enchalnement de motifs respectivement de structure (acide glucuronique)-(D-glucosamine)- (acide-L-iduroniquej-(D-glucosamine) répondant à la formule (Iv)
Figure img00080002
The novel biologically active pentasaccharides of the invention are advantageously obtained by reacting a monosaccharide with a D-glucosamine structure of formula (III)
Figure img00080001

with a tetrasaccharide formed by a chailling of motifs respectively structure (glucuronic acid) - (D-glucosamine) - (L-iduronic acid- (D-glucosamine) corresponding to the formula (Iv)
Figure img00080002

Dans ces formules -B1, B2 et A1 représentent des groupements de blocage des groupes -OH éliminables de manière à permettre d'introduire successivement les substituants désirés sur les motifs saccharidiques sans que les groupements de bloquage restant ne soient affectés, ou de libérer des groupes -OH donnes, - Z représente un groupement fonctionnel azoté, précurseur d'un groupement aminé, en particulier un groupe azido N3 ou un groupe benzyloxy carbonyl amino, - X représente un atome d'halogène, notamment, du brome ou du chlore. In these formulas -B1, B2 and A1 represent blocking groups of -OH groups that can be eliminated so as to allow the desired substituents to be successively introduced into the saccharide units without the remaining blocking groups being affected, or to release groups -OH data, - Z represents a nitrogen functional group, precursor of an amino group, in particular an azido group N3 or a benzyloxycarbonylamino group, - X represents a halogen atom, especially bromine or chlorine.

On remarquera que dans les produits de départ
(III) et (IV) toutes les positions sont bloquées, excepté "les positions réactives" ctest-à-dire celles qui doivent etre impliquées dans la réaction de glyco
sylation.
It will be noted that in the starting products
(III) and (IV) all positions are blocked, except "reactive positions" ie those which must be involved in the glyco reaction
sylation.

Ces positions réactives, sur chacun des produits de départ, sont alors substituées par des radicaux capables de réagir en permettant l'établissement d'une liaison glycosidique, et qui sont compatibles avec les groupements de blocage Dans les produits choisis, ces radicaux sont respectivement constitués par un halogène et un alcool. These reactive positions, on each of the starting materials, are then substituted by radicals capable of reacting by allowing the establishment of a glycosidic bond, and which are compatible with the blocking groups. In the products chosen, these radicals are respectively constituted by a halogen and an alcohol.

Les groupements de blocage sont choisis parmi les groupements inertes vis-à-vis de la réaction de glycosylation. The blocking groups are chosen from groups that are inert with respect to the glycosylation reaction.

il s'agit des groupements Z qui permettent le maintien durant tout le processus de synthèse d'un groupement azoté qui pourra ensuite être transformé en un dérivé fonctionnel aminé et avantageusement en un sel d'amine. these are Z groups which allow the maintenance throughout the process of synthesis of a nitrogen group which can then be converted into an amine functional derivative and preferably an amine salt.

Les autres groupements de blocage assurent la protection des groupes -OH des différents motifs saccharidiques des produits de départ. The other blocking groups protect the -OH groups of the various saccharide units of the starting materials.

Ces groupements sont choisis de manière à permettre d'introduire, de manière spécifique, des substituants donnés sur les motifs saccharidiques. These groups are chosen so as to introduce, in a specific manner, given substituents on the saccharide units.

On a alors avantageusement recours à des groupes de blocage différents, à savoir, B1, B2, A1, selon le substituant a introduire. It is then advantageous to use different blocking groups, namely, B1, B2, A1, depending on the substituent to be introduced.

Les groupes k , qui protègent des groupes OH destinés à être salifiés, en particulier sulfatés, sont avantageusement constitués par des groupes acyle, en particulier acétyle. Les groupes de blocage B2 qui doivent etre éliminés pour libérer les groupes -OH en fin deprocessus, sont choisis parmi des groupes inertes durant la réaction de sulfatation, et sont avantageusement constitués par des groupes benzyle. The groups k, which protect OH groups intended to be salified, in particular sulphated, are advantageously constituted by acyl groups, in particular acetyl groups. The B2 blocking groups that must be removed to liberate the -OH groups at the end of the process are selected from inert groups during the sulfation reaction, and are advantageously benzyl groups.

Les groupes A1 permettent le blocage des groupes carboxyle en position 6 tout au long des étapes mises en oeuvre pour l'introduction des divers substituants et sont éliminables pour permettre, en particulier, d'effectuer une réaction de salification des groupescarbo xyle. L'utilisation de radicaux alcoyle, en particulier, méthyle, s'avère à cet égard satisfaisante. The A1 groups allow the blocking of the carboxyl groups in the 6-position throughout the steps used for the introduction of the various substituents and are removable to allow, in particular, to carry out a salification reaction of carboxyl groups. The use of alkyl radicals, in particular methyl, is satisfactory in this respect.

La réaction de condensation mise en oeuvre dans l'invention est basée, comme indiqué ci-dessus, sur la réaction d'un halogénure et d'un alcool. The condensation reaction carried out in the invention is based, as indicated above, on the reaction of a halide and an alcohol.

Cette réaction est avantageusement réalisée en mi- lieu. solvant, en particulier dans un solvant organique du type du dichlorométhane, et en présence de cataly seurt tel que du triflate d'argent et également d'un accepteur de protons, tel que la sym-coliidine.  This reaction is advantageously carried out in the middle. solvent, especially in an organic solvent of the dichloromethane type, and in the presence of catalyst such as silver triflate and also a proton acceptor, such as sym-coliidine.

Les conditions réactionnelles, en particulier concernant la température, la durée, la concentration en réactifs, sont choisies de manière à réaliser la liaison de glycosylation sans alterer la structure et les substituants des différents motifs et seront aisément etablies par l'homme de l'art pour l'obtention d'un type donné de produits. The reaction conditions, in particular concerning the temperature, the duration, the concentration of reagents, are chosen so as to carry out the glycosylation bond without altering the structure and the substituents of the various units and will be easily established by those skilled in the art. for obtaining a given type of products.

Le pentasaccharide forme à l'issue de cette condensation est ensuite traité de manière à éliminer par séquence les groupements de blocage prèsents et pour. The pentasaccharide formed at the end of this condensation is then treated so as to eliminate in sequence the blocking groups present and for.

introduire successivement les groupements fonctionnels désirs et libérer les fonctions -OH dans des positions.successively introducing the desired functional groups and releasing the -OH functions in positions.

données.data.

On procède avantageusement dans une première étape a l'élimination des groupes B1, à l'aide, par exemple, de soude dans le cas de groupes acétyle; ce qui libére les positions -OH.correspondantes qui seront ensuite, au cours d'une deuxième étape, soumises à un traitement aux fins de sulfatation de ces seules positions. Advantageously, in a first step, the B1 groups are removed, for example using sodium hydroxide in the case of acetyl groups; which liberates the corresponding -OH positions which will then be subjected, during a second stage, to a treatment for the purpose of sulphation of these only positions.

Pour introduire un groupe sulfate, on-utilise avantageusement un agent de sulfatation tel qu'un complexe de triméthylamine/S03.In order to introduce a sulphate group, a sulphating agent such as a trimethylamine / SO 3 complex is advantageously used.

L'introduction du cation R2 désiré peut être notamment réalisée à l'aide d'une résine échangeuse d'ions comprenant ce cation, ou encore, après passage sous forme acide, par neutralisation avec la base du cation. The introduction of the desired cation R.sub.2 can in particular be carried out using an ion exchange resin comprising this cation, or alternatively, after passage in acid form, by neutralization with the base of the cation.

Après l'étape de sulfatation, on libère les'grou pes -OH de leurs substituants benzyl.iques et,en meme temps,on transforme le groupe Z en groupe anine par hydrogénetion,par exemple, sous courant d'hydrogène,en présence de catalyseur d'hydroge- nation,en opérant dans des conditions compatibles avec le maintien du groupe sulfate en position 6 des motifs D-glucosamine. After the sulphation step, the OH groups are liberated from their benzyl substituents and, at the same time, the Z group is converted to anin group by hydrogenation, for example, under a stream of hydrogen, in the presence of hydrogenation catalyst, operating under conditions compatible with the maintenance of the sulphate group at the 6-position of the D-glucosamine units.

Pour disposer de motifs glucosamine comportant en position 2 des groupes azotés fonctionnels, on soumet le pentasaccharide obtenu à l'issue de l'étape précédente à l'action d'un agent approprié. L'introduction de groupes sulfate est ainsi avantageusement réalisée avec l'agent de sulfatation triméthylamine/S03 indiqué ci-dessus. In order to have glucosamine units containing functional nitrogen groups in position 2, the pentasaccharide obtained at the end of the preceding stage is subjected to the action of a suitable agent. The introduction of sulfate groups is thus advantageously carried out with the sulphating agent trimethylamine / SO 3 indicated above.

Il apparat approprié d'effectuer cette réaction à pH basique, d'environ 9 à 10. Pour obtenir le sel recherché, on utilise avantageusement une résine échangeuse d'ions contenant le cation que l'on souhaite introduire, ou encore, après passage sous forme acide, on neutralise avec la base du cation. It appears appropriate to carry out this reaction at basic pH, from about 9 to 10. To obtain the desired salt, an ion exchange resin containing the cation which it is desired to introduce is advantageously used, or else, after passing under acid form, neutralized with the base of the cation.

Au cours.d'une étape supplémentaire, les groupements protecteurs des groupes carboxyliques sont éliminés en vue de la salification des fonctions acide, par exemple, à l'aide d'un hydroxyde métallique. In a further step, the protecting groups of the carboxylic groups are removed for salification of the acid functions, for example with the aid of a metal hydroxide.

Les pentasaccharides intermédiaires sont des produits nouveaux et en tant que tels entrent également dans le cadre de l'invention. Intermediate pentasaccharides are novel products and as such are also within the scope of the invention.

Le tétrasaccharide de formule lV mis en-oeuvre dans la réaction de condensation évoquée ci-dessus est avantageusement obtenu à partir du produit correspondant, mais comportant en position réactive (à savoir sur le carbone en position 4 du motif à structure acide uronique) un groupe de blocage temporaire. On désigne par ce terme un groupe qui permet de protéger provisoirement un groupe - OH destiné à etre engagé durant le processus de synthèse dans une réaction de glycosylation et non un -groupe -OH destiné à être libéré ou fonctionnalisé. The tetrasaccharide of formula IV used in the condensation reaction mentioned above is advantageously obtained from the corresponding product, but comprising in the reactive position (namely on the carbon in position 4 of the uronic acid structure unit) a group temporary blocking. By this term is meant a group which temporarily protects an OH group intended to be engaged during the synthesis process in a glycosylation reaction and not an OH group intended to be released or functionalized.

Ce groupe doit etre choisi parmi ceux compatibles avec les autres groupements présents ainsi qu'avec les conditions mises en oeuvre dans le processus. de synthèse.This group must be chosen from among those compatible with the other groups present as well as with the conditions implemented in the process. of synthesis.

Un groupe approprié est, par exemple, du type monochloracétyle. Mais il est clair que d'autres groupements répondant aux exigences ci-dessus peuvent hêtre utilisés. An appropriate group is, for example, of the monochloroacetyl type. But it is clear that other groups meeting the above requirements may be used.

Selon un mode préféré de réalisation du procédé de l'invention, le tétrasaccharide comportant le groupement de blocage temporaire ci-dessus est avantageusement obtenu par réaction d'une part d'un disaccharide de structure (acide glucuronique) - (D-gluco samine) répondant à la formule (V)

Figure img00130001

avec un disaccharide de structure (D-glucosamine)-(acide L-iduronique) répondant à la formule (VI)
Figure img00130002
According to a preferred embodiment of the process of the invention, the tetrasaccharide comprising the above temporary blocking group is advantageously obtained by reaction on the one hand of a disaccharide structure (glucuronic acid) - (D-gluco-samine) having the formula (V)
Figure img00130001

with a disaccharide of structure (D-glucosamine) - (L-iduronic acid) having the formula (VI)
Figure img00130002

Dans ces formules, les substituants Al, s1,
B2, Z et X présentent les significations données ci-dessus et B3 un groupement de blocage temporaire tel que défini plus haut.
In these formulas, the substituents Al, s1,
B2, Z and X have the meanings given above and B3 a temporary blocking group as defined above.

La reaction de condensation entre ces deux disaccharides est avantageusement réalisée dans des conditions du type de celles utilisées pour la réaction du tétrasaccharide de formule (IV) avec le monosaccharide de formule (III).  The condensation reaction between these two disaccharides is advantageously carried out under conditions of the type used for the reaction of the tetrasaccharide of formula (IV) with the monosaccharide of formula (III).

Le disaccharide de formule (V) est a son tour avantageusement obtenu à partir d'un monosaccharide à structure acide uronique de formule (VII)

Figure img00130003

et d'un monosaccharide à structure D-glucosamine de formule (VIII)
Figure img00140001
The disaccharide of formula (V) is in turn advantageously obtained from a monosaccharide with a uronic acid structure of formula (VII)
Figure img00130003

and a monosaccharide with a D-glucosamine structure of formula (VIII)
Figure img00140001

dans lesquelles A1, 1 B3, X et Z présentent les signifi cations données ci-dessus. De manière préférée, les deux
substituants -O-B3 dans le dérivé de formule (VIII) forment
un pont 1,6-anhydro.
in which A1, B3, X and Z have the meanings given above. Preferably, both
substituents -O-B3 in the derivative of formula (VIII) form
a 1,6-anhydro bridge.

Le disaccharide résultant de la condensation
des monosaccharides VIIet viiiest traité, selon les
techniques habituelles, pour disposer d'une seule position
réactive, à savoir sur le carbone anomère,et introduire
donc un groupe X sur ce carbone.
The disaccharide resulting from the condensation
monosaccharides treated and treated, according to the
usual techniques, to have a single position
reactive, namely on the anomeric carbon, and introduce
so a group X on this carbon.

Le dérivé de formule (VIII)est avantageusement
obtenu à partir du dérivé ,décrit dans la demande de
brevet FR No 82 09392 du 28 mai 1982 au nom de la Demanderesse,qui
est alors traité selonles techniques classiques de manière
à introduire le groupe de blocage B3 et le groupe reactif X.
The derivative of formula (VIII) is advantageously
obtained from the derivative, described in the application for
patent FR No. 82 09392 of May 28, 1982 in the name of the Applicant, which
is then treated according to conventional techniques so
to introduce the blocking group B3 and the reactive group X.

Comme disaccharide de formule V -on utilise avantageusement un produit tel qu'obtenu selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR No 82 01575 du 1.02.1982, au nom de la Demanderesse. As disaccharide of formula V-advantageously uses a product as obtained according to the process described in the patent application FR No. 82 01575 of 1.02.1982, in the name of the Applicant.

D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaitront dans la description des exemples qui suivent et en se reportant aux figures 1 à 4 qui représentent l'exemple du schéma fractionnel correspondant aux synthèses décrites dans les exemples. Other features and advantages of the invention will appear in the description of the examples which follow and with reference to FIGS. 1 to 4 which represent the example of the fractional scheme corresponding to the syntheses described in the examples.

Les références numériques utilisées dans ces figures pour les composés sont reprises dans les exemples pour désigner les mêmes composés. The numerical references used in these figures for the compounds are repeated in the examples to designate the same compounds.

Les abréviations utilisées ont les significations suivantes
- Ac représente un groupe acétyle,
- B un groupe benzyle
- Me un groupe méthyle
- McAO un groupe monochloroacétyle, et
- Y un groupe -COoB.
The abbreviations used have the following meanings
Ac represents an acetyl group,
- B a benzyl group
- Me a methyl group
- McAO a monochloroacetyl group, and
- Y a -COoB group.

EXEMPLE 1
Synthèse du disaccharide 3 ou(l-bromo-3,6-di-O-acétvl-2- azido-4-0/2,3-di-0-benzyl-4-0-chloroacétyl-ss-D-glucopyranosyl) uronate de méthyle/-D-glucopyranose,
Cette synthèse comporte
A) la préparation du monosaccharide 14 ou (1-bromo-2,3-di-0-benzyl-4-0-chloroacétyl-α-D-glucopy- ranosyl)uronate de méthyle;
B)- la condensation du composé 14 avec le monosaccharide 15 conduisant au disaccharide 1;
C) l'acétolyse du composé 1 conduisant au disaccharide 2; et
D) la bromuration du disaccharide 2 pour donner le dérive 3
A) Préparation du monosaccharide 14
Cette synthèse est effectuée à partir du monosaccharide 16 ou (prop-l'-ényl 2,3-di-0-benzyl
-a-D-glucopyranoside) uronate de méthyle, (dont la synthèse est rapportée dans le demande de brevet FR 8209392)par
1 : chloroacétylation du composé 16en position d
2 : déblocage du carbone anomère;
3 : bromuration du carbone anomère 1 ehloroacétylation du composé 16 conduisant au compo
sé 17, à savoir le (prop-l'-ényl 2,3-di-0-benzyl-4
0-chloroacétyl-α-D-glucopyranoside)uronate de mé
thyle
On dissout 2,8 g du composé 16 dans 30 ml de pyridine (6,56 mmoles) . Après refroidissement à OOC, on ajoute goutte à goutte 10 mi d'une solution de 2 ml de chlorure de chloroacétyle dans 20 ml de aichlorométhane.
EXAMPLE 1
Synthesis of disaccharide 3 or (1-bromo-3,6-di-O-acetyl-2-azido-4-O-2,3-di-O-benzyl-4-chloroacetyl-s-D-glucopyranosyl) methyl uronate / -D-glucopyranose,
This synthesis includes
A) the preparation of monosaccharide 14 or methyl (1-bromo-2,3-di-O-benzyl-4-O-chloroacetyl-α-D-glucopyranosyl) uronate;
B) - the condensation of compound 14 with monosaccharide 15 leading to disaccharide 1;
C) acetolysis of compound 1 leading to disaccharide 2; and
D) bromination of the disaccharide 2 to give the drift 3
A) Preparation of the monosaccharide 14
This synthesis is carried out starting from the monosaccharide 16 or (prop-1'-enyl 2,3-di-O-benzyl
α-glucopyranoside) methyl uronate (the synthesis of which is reported in patent application FR 8209392) by
1: chloroacetylation of the compound 16 in position d
2: unblocking of the anomeric carbon;
3: bromination of the anomeric carbon 1 -hloroacetylation of the compound 16 leading to the compound
se 17, namely (prop-1'-enyl 2,3-di-O-benzyl-4
0-chloroacetyl-α-D-glucopyranoside) uronate
Thyle
2.8 g of compound 16 are dissolved in 30 ml of pyridine (6.56 mmol). After cooling to OOC, 10 ml of a solution of 2 ml of chloroacetyl chloride in 20 ml of dichloromethane is added dropwise.

Après 30 minutes, on évapore à sec, on reprend le résidu par 200 ml de chloroforme, on lave avec une solution à 10 % de KH S04, puis avec de l'eau, on sèche et on concentre. Le sirop obtenu est chromatographié sur gel de silice (200 g; éluant ;AcOEt /hexane; 1/3; v/v). On obtient ainsi 2,7 g de composé 17 pur sous forme de sirop (rendement 80 %); [α]@20= + 2 (c = 1,5; chioroforme).After 30 minutes, the mixture is evaporated to dryness, the residue is taken up in 200 ml of chloroform, washed with a 10% solution of KHSO 4, then with water, dried and concentrated. The syrup obtained is chromatographed on silica gel (200 g, eluent, AcOEt / hexane, 1/3, v / v). 2.7 g of pure compound 17 are thus obtained in syrup form (80% yield); [α] @ 20 = + 2 (c = 1.5, chioroform).

L'analyse élémentaire et le spectre de RMN confirment la structure attendue. Elemental analysis and the NMR spectrum confirm the expected structure.

2) Déblo-cage du carbone anomère conduisant au composé
18 ou (2,3-di-0-benzyl-4-0-chloroacétyl-D-glucopyra
nose)uronate de méthyle
On dissout 2, 7 g (5,3 mmoles) du dérivé 17 dans 80 ml d'un mélange acétone/eau (5/1; v/vi. De l'oxyde mercurique (3,1 g) est ajouté suivi d'une solution de chlorure mercurique (3,9 g) dans l'acétone (27 ml). Après 5 minutes, les sels sont éliminés par filtration. Après concentration a sec, le résidu est repris par du chloroforme. La phase chloroformique est lavée avec une solution de KI a 10 % puis avec de l'eau.Après éva- poration, le produit est cristallisé dans un mélange acétate d1éthyle/hexane. On obtient 2 g d'un solide de pf 105-1070C; --20 = - 4,70 (eq, 1; chloroforme). L'analyse élémentaire et l'étude en RMN confirment la structure (rendement 80 %).
2) Anomeric carbon unblocking leading to the compound
18 or (2,3-di-O-benzyl-4-O-chloroacetyl-D-glucopyra
nose) methyl uronate
2.71 g (5.3 mmol) of the derivative 17 are dissolved in 80 ml of an acetone / water mixture (5/1, v / vi), mercuric oxide (3.1 g) is added followed by A solution of mercuric chloride (3.9 g) in acetone (27 ml) After 5 minutes, the salts are removed by filtration After concentration to dryness, the residue is taken up in chloroform The chloroform phase is washed with 10% KI solution and then with water.After evaporation, the product is crystallized from an ethyl acetate / hexane mixture to give 2 g of a solid of mp 105-1070 ° C; 4.70 (eq, 1, chloroform) Elemental analysis and NMR study confirm structure (80% yield).

3) Bromuration du carbone anomère conduisant au compose
14 ou (1-bromo-2,3-di-0-benzyl-4-0-chloroacétyl-α-D-
glucopyranosyl)uronate de méthyle
On dissout 2 g (4,30 mmoles) du compos 18 dans 50 ml de dichlorométhane. On ajoute 4,8 ml (34,4 mmoles) de sym-collidine à 0 C suivie de bromure de bjo- mométhylène diméthyl ammonium (17 mmoles) préparé selon
HEPBURN D.R. et HUDSON H.R.J. Chem Soc. Perkin I (1976) 754-757. Après 4 heures de réaction, le melange est dilué par 100 ml de dichlorométhane, puis versé dans de l'eau glacée. Après lavage avec de l'eau glacée; le solvant est évaporé. Après chromatographie sur gel de silice (20 g; éluant hexane/acétate d'éthyle, 2/l; v/v), on obtient 2,06 g de composé 14 sous forme d'un sirop (rendement 90 %) --20 = + 82,50 (c = 1,5; chloroforme).L'analyse élémentaire et l'étude en RMN confirment la structure.
3) Bromination of the anomeric carbon leading to the compound
14 or (1-bromo-2,3-di-O-benzyl-4-O-chloroacetyl-α-D-
methyl glucopyranosyl) uronate
2 g (4.30 mmol) of the compound 18 are dissolved in 50 ml of dichloromethane. 4.8 ml (34.4 mmoles) of sym-collidine is added at 0 ° C. followed by bimoumethylene dimethyl ammonium bromide (17 mmol) prepared according to
HEPBURN DR and HUDSON HRJ Chem Soc. Perkin I (1976) 754-757. After 4 hours of reaction, the mixture is diluted with 100 ml of dichloromethane and then poured into ice water. After washing with ice water; the solvent is evaporated. After chromatography on silica gel (20 g, eluent hexane / ethyl acetate, 2/1 v / v), 2.06 g of compound 14 is obtained in the form of a syrup (90% yield). = + 82.50 (c = 1.5, chloroform) .The elemental analysis and the NMR study confirm the structure.

B) Préparation du disaccharide 1 ou (3,0-acetyl-1,6- anhydro-Z-aziåo-4-0-/(2,3-di-0-benzyl-4-0-chloroacé-
tyl-ss-D-glucopyranosyl)uronate de méthyle/ss-D-gluco
pyranose.
B) Preparation of disaccharide 1 or (3, 6-acetyl-1,6-anhydro-2-azido-4-O - / (2,3-di-O-benzyl-4-chloroacetate)
methyl-ss-D-glucopyranosyl) methyl uronate / ss-D-gluco
pyranose.

Cette synthèse est basée sur la condensation des monosaccharides 14 et 15.  This synthesis is based on the condensation of monosaccharides 14 and 15.

A une solution de 870 mg (3,8 mmoles) de com-posé 15 dans le dichlorométhane, on ajoute 1 g de driérite (0,5 g de tamis moléculaires 4 A, en poudre et 0,525 g de carbonate d'argent fraîchement préparé. Après 2 heures d'agitation,on ajoute goutte à goutte, à OOC, 670 mg (1,3 mmoles) du composé 14. Après 6 jours, les solides sont éliminés par filtration. Le sirop obtenu après concentration est chromatographié sur gel de silice (50 g; éluant : chloroforme/acétate d'éthyle; 4/1, v/v). On obtient le disaccharide 1 sous forme de mousse (421 mg; 50 %). [α]D20 = - 17 (c = 1; chloroforme). L'analyse élémentaire confirme la structure. L'étude en RMN confirme la configuration ss de la liaison interglycosidique. To a solution of 870 mg (3.8 mmol) of dichloromethane was added 1 g of drierite (0.5 g of 4 A molecular sieves, powder and 0.525 g of freshly prepared silver carbonate. After stirring for 2 hours, 670 mg (1.3 mmol) of compound 14 are added dropwise to OOC, the solids are removed by filtration and the syrup obtained after concentration is chromatographed on silica gel. silica (50 g, eluent: chloroform / ethyl acetate, 4/1, v / v) to give the disaccharide 1 as a foam (421 mg, 50%). [& alpha] D20 = -17 (c = 1, chloroform) Elemental analysis confirms the structure The NMR study confirms the ss configuration of the interglycosidic bond.

C) Préparation des disaccharides de structure 2 par acé
tolyse du disaccharide 1
On prépare le disaccharide 2 en soumettant le disaccharide 1 à une réaction d'acétolyse comme suit.
C) Preparation of Disaccharides of Structure 2 by Ace
tolysis of disaccharide 1
The disaccharide 2 is prepared by subjecting the disaccharide 1 to an acetolysis reaction as follows.

300 mg du composé 1 sont dissous dans un mélange de 4 ml d'anhydride acétique et de 0,5 mi d'acide trifluoracétique fraîchement distillé. Le mélange réac- tionnel est soumis à agitation durant 18 h à 180C, puis évaporé à sec et co-évaporé avec du toluène. Le résidu est chromatographié sur une colonne de gel de silice (15 g). Par élution avec un mélange dichlorométhane, acétate d'éthyle (19/1, v/v). On récupère 282 mg d'un mélange d'acétates anomères de structure 2 sous forme d'un sirop incolore (rendement 86 %). Le rapport des formes α aux formes ss, déterminé par 'analyse par RNM, est de 4/1. 300 mg of compound 1 are dissolved in a mixture of 4 ml of acetic anhydride and 0.5 ml of freshly distilled trifluoroacetic acid. The reaction mixture is stirred at 180 ° C. for 18 h, then evaporated to dryness and coevaporated with toluene. The residue is chromatographed on a column of silica gel (15 g). Elution with dichloromethane, ethyl acetate (19/1, v / v). 282 mg of a mixture of anomeric acetates of structure 2 are recovered in the form of a colorless syrup (yield 86%). The ratio of forms α in the ss forms, determined by MNR analysis, is 4/1.

Spectre RMN (90 MHz, CDC13) # : 7,35 (m, 10 H, 2 Ph); 6,28 (d, H9 Jî,2 = 3,5 Hz);
5,56 (d, H1ss, J1,2 = 8,5 Hz);
5,50 (d.de d., H3ss, J2,3 = gHz, J3,4 = 8,5 Hz);
5,15 (d.de d., H@α J2,3 : 9 Hz, J3,4 = 8,5 Hz);
4,43 (d, 1H, H'1, J1,2. 8 8 Hz);
3,80 (système AB, 2H, Cl-CH2-CO); 3,75 (s, 3H,COOMe);
3,60 (d.de d., H2ss, J1,2 : 8 Hz, J2,3 9 Hz);
3,57 (d.de d., H2α, J1,2 = 35 Hz, J2,3 = 9 Hz);
2,25; 2,10; 2,09 (3s', 9 H, 30Ac)
D) Préparation du disaccharide 3 par bromuration des di
saccharides 2
On soumet le mélange d'acétates de structure 2 à l'action de-TiBr4:On soumet à agitation une solution de 140 mg du mélange d'acétates 2 dans un mélange de 3 mi de dichiorométhane et de 0,3 ml d'acétate d'éthyle à 17-18 C, sous atmosphère d'argon sec, en présence de 140 mg de TiBr4 (# 2 équivalents) pendant 20 heures.
NMR Spectrum (90 MHz, CDCl3) υ: 7.35 (m, 10H, 2 Ph); 6.28 (d, H 9 JI, 2 = 3.5 Hz);
5.56 (d, H19, J1.2 = 8.5 Hz);
5.50 (dd, H3ss, J2.3 = gHz, J3.4 = 8.5 Hz);
5.15 (dd, H 2, J 2, 9.3 Hz, J 3.4 = 8.5 Hz);
4.43 (d, 1H, 1H, J1.2, 8.8 Hz);
3.80 (AB system, 2H, Cl-CH 2 -CO); 3.75 (s, 3H, COOMe);
3.60 (dd, H2ss, J1.2: 8Hz, J2.39Hz);
3.57 (dd, H2 α J1.2 = 35Hz, J2.3 = 9Hz);
2.25; 2.10; 2.09 (3s, 9H, 30Ac)
D) Preparation of the disaccharide 3 by bromination of the di
saccharides 2
The mixture of acetates of structure 2 was subjected to the action of TiBr 4: A solution of 140 mg of the mixture of acetates 2 in a mixture of 3 ml of dichloromethane and 0.3 ml of acetate was stirred with stirring. of ethyl at 17-18 ° C., under a dry argon atmosphere, in the presence of 140 mg of TiBr4 (# 2 equivalents) for 20 hours.

Après refroidissement à 00C et dilution avec 30 ml de dichlorométhane, le mélange est lavé avec de l'eau glacee, puis avec une solution aqueuse à 5 % de bromure de potassium et ensuite avec de l'eau et séché sur du sulfate de sodium, filtré et évaporé. Le résidu est chromatographié sur une colonne de gel de silice (10 g).Par élution avec un mélange dichlorométhane - acétate d'é- thyle (19 : 1, v/v),on récupère, par ordre d'élution
- le bromure 3 (74 mg; rendement 50 %) sous forme d'un sirop incolore, instable (immédiatement engagé dans la réaction suivante); spectre RMN (90 MHz, CDCl3) # : 7,35 (m, 10H, 2Ph); 6,38 (d, 1H, H1, J1,2 = 3,5 Hz);
5,55 (d.de d., 1H, H3, J2 3 = 10 Hz, J3 4 = 8,5 Hz);
5,15 (t, 1H, H4', J3',4'=J4',5' = 9 Hz);
4,80 (système AB + ls, 4H, 2 OCH2 Ph);
4,42 (d, 1H, H1' , J1,',2' = 7 Hz); 3,79 (système AB,
2H, Cl-CH2-CO);
3,75 (s, 3H, COOMe); 2,24; 2,10 (2s, 6E, 20Ac)
- une fraction (28 mg; rendement 20 %) correspondant au produit de départ qui n'a pas réagi,
- une fraction migrant peu correspondant à des produits de 0-débenzylation partielle.
After cooling to 00.degree. C. and diluting with 30 ml of dichloromethane, the mixture is washed with ice-water and then with a 5% aqueous solution of potassium bromide and then with water and dried over sodium sulfate. filtered and evaporated. The residue is chromatographed on a column of silica gel (10 g). Elution with dichloromethane-ethyl acetate (19: 1, v / v) is carried out in order of elution.
bromide 3 (74 mg, yield 50%) in the form of a colorless, unstable syrup (immediately engaged in the next reaction); NMR spectrum (90 MHz, CDCl 3): 7.35 (m, 10H, 2Ph); 6.38 (d, 1H, H1, J1.2 = 3.5 Hz);
5.55 (dd, 1H, H3, J2 3 = 10 Hz, J3 4 = 8.5 Hz);
5.15 (t, 1H, H4 ', J3', 4 '= J4', 5 '= 9 Hz);
4.80 (AB + ls system, 4H, 2 OCH2 Ph);
4.42 (d, 1H, H1 ', J1,', 2 '= 7 Hz); 3.79 (AB system,
2H, Cl-CH2-CO);
3.75 (s, 3H, COOMe); 2.24; 2.10 (2s, 6E, 20Ac)
a fraction (28 mg, yield 20%) corresponding to the unreacted starting material,
a fraction migrating little corresponding to products of 0-partial debenzylation.

EXEMPLE 2
synthèse du tétrasaccharide 6
On prépare le tétrasaccharide 6 en effectuant dans l'étape a) la condensation des disaccharides 3 et 4, en soumettant au cours de l'étape b) le tétrasaccharide 5 formé à une réaction sélective de -0-démonochloroacéty- lation en position 4.Ie dérivé 4 est préparé selon la demande FR 82 01575. a) Réaction de condensation
Un mélange de 64 mg (80 M) du bromure 3 fraîchement préparé, de 51 mg (60 uM) du composé 4 et de 80 mg de tamis moléculaire 4 A en poudre dans 1,5 ml de dichloroéthane anhydre est soumis à agitation durant une demi heure à la température ambiante, sous atmosphère d'argon sec, puis est refroidi à - 200C.On ajoute successivement 20 ml (150 PM > de-sym-collidine et 31 mg (120 um) de triflate d'argent. Le melange réactionnel est soumis 1h. à agitation à - 200C, puis on laisse la température remonter vers la température ambiante pendant 15 h. Après dilution avec 50 ml de dichiorométhane, les solides sont essorés et le filtrat est lavé avec une solution aqueuse glacée d'acide chlorhydrique 1 M puis avec de l'eau (deux fois). On le sèche ensuite sur du sulfate de sodium, on le filtre puis on évapore.
EXAMPLE 2
synthesis of the tetrasaccharide 6
The tetrasaccharide 6 is prepared by carrying out the condensation of the disaccharides 3 and 4 in step a) by subjecting the tetrasaccharide 5 formed in step b) to a selective reaction of -O-demonochloroacetylation at the 4-position. Derivative 4 is prepared according to application FR 82 01575. a) Condensation reaction
A mixture of 64 mg (80 M) of freshly prepared bromide 3, 51 mg (60 μM) of compound 4 and 80 mg of powdered 4 A molecular sieve in 1.5 ml of anhydrous dichloroethane is stirred for a period of one hour. half an hour at room temperature, under a dry argon atmosphere, and then cooled to -200 ° C. 20 ml (150 μM of de-sym-collidine and 31 mg (120 μM) of silver triflate are successively added. The reaction mixture is stirred for 1 hour at -200 ° C. and then the temperature is allowed to rise to room temperature for 15 hours.When the mixture is diluted with 50 ml of dichloromethane, the solids are filtered off and the filtrate is washed with an ice-cold aqueous solution of acid. 1 M hydrochloric acid and then with water (twice), then dried over sodium sulfate, filtered and evaporated.

Le résidu est chromatographié sur une colonne de gel de silice (8 g, gel 230-400 mesh). L'élution par le mélange hexane-acétate d'éthyle (4:3, v/v) permet de récupérer 37 mg de tétrasaccharide 5 (rendement 39 %) sous forme d'un verre incolore. [α]D20= + 56 (c 0,6; CHCl3); spectre RMN (90 MHz, CDCl3) 6: 7,30 (m, 30H, 6Ph); 5,41 (d.de d., 1H, H3, J2"3" =
10 Hz, J3,,4, = 9 Hz);
5,05 (d.de d., 1H, H"'4, J3"',4"' = 9,5 Hz;J4"',5"'
8,5 Hz);
5,00 (d, H1", J1",2" faible,recouvrementavec d'autres
protons);
3,72 (système AB + Is, 5H, Cl-CH2CO et COOMe);
3,63 (s, '3P, COOMe), 3,20 (d.de d., 1H, H2", J1",2"
3,5 Hz, J2",3" : 10 Hz)
2,20; 2,11, 2,00 (3s, 12H, 40Ac).
The residue is chromatographed on a column of silica gel (8 g, 230-400 mesh gel). Elution with hexane-ethyl acetate (4: 3, v / v) makes it possible to recover 37 mg of tetrasaccharide (yield 39%) in the form of a colorless glass. [α] D20 = + 56 (c 0.6, CHCl3); NMR spectrum (90 MHz, CDCl 3) δ: 7.30 (m, 30H, 6Ph); 5.41 (d.degree., 1H, H3, J2 "3" =
10 Hz, J3, 4, = 9 Hz);
5.05 (dd, 1H, H ", 4, J3", 4 "= 9.5 Hz, J4", 5 "
8.5 Hz);
5.00 (d, H1 ", J1", 2 "low, overlap with others
protons);
3.72 (AB + Is system, 5H, Cl-CH2CO and COOMe);
3.63 (s, 3P, COOMe), 3.20 (dd, 1H, H2 ", J1", 2 ").
3.5 Hz, J2 ", 3": 10 Hz)
2.20; 2.11, 2.00 (3s, 12H, 40Ac).

Par élution de la colonne avec le mélange acétate d'éthyle - hexane (2:1, v/v), on récupère 23 mg du produit de départ 4 (rendement 44 %). Elution of the column with ethyl acetate-hexane (2: 1, v / v) yields 23 mg of starting material 4 (44% yield).

b) Réaction de -0-déchloroacétylation
Une solution de 36 mg (23 M) du tétrasaccharide S dans 1,25 ml d'un mélange de pyridine et 0,25 ml d'éthanol absolu est chauffée à 1000C en présence de 7 mg (100 M) de thiourée pendant 20 mn. Après refroidissement et évaporation à sec, le résidu solide est repris avec 20 ml d'eau et extrait avec du chloroforme (5 fois 5 ml). Les phases organiques sont lavees avec une solution aqueuse à 10 % d'hydrogénosulfate de sodium, avec de l'eau, séchées sur du sulfate de sodium, filtrées et évaporées. Le résidu est chromatographie sur une colonne de gel de silice (3 g). Par élution avec un mélange acétate d'éthyle - hexane (3:2, v/v) on obtient 27 mg du dérivé 6 (rendement 80 %) sous forme d'un verre incolore; [α]D20= + 61 (c = 0,8; chloroforme); spectre RMN (90 MHz, CDCl3, puis D20) #: 7,30 (m, 30 H, 6 Ph); 5,45 (d.de d., 1H, H3"' J2",3"=
10 Hz, J3"4"=9Hz);
3,83 (s, 3H, COOMe); 3,67 (s, 3H, COOMe);
3,25 (d.de d.) 1H, H2'" J1",2"' 3,5 Hz, J2",3": 10 Hz);
2,75 (1H, OH, échangé par D20, OH en 4,du motif acide uronique.
b) Reaction of -O-dechloroacetylation
A solution of 36 mg (23 M) of the tetrasaccharide S in 1.25 ml of a mixture of pyridine and 0.25 ml of absolute ethanol is heated at 1000C in the presence of 7 mg (100 M) of thiourea for 20 minutes. . After cooling and evaporation to dryness, the solid residue is taken up with 20 ml of water and extracted with chloroform (5 times 5 ml). The organic phases are washed with a 10% aqueous solution of sodium hydrogen sulphate, with water, dried over sodium sulphate, filtered and evaporated. The residue is chromatographed on a column of silica gel (3 g). Elution with ethyl acetate-hexane (3: 2, v / v) gives 27 mg of derivative 6 (80% yield) as a colorless glass; [α] D20 = + 61 (c = 0.8, chloroform); NMR spectrum (90 MHz, CDCl 3 then D 2 O): 7.30 (m, 30H, 6 Ph); 5.45 (d.degree., 1H, H3 "J2", 3 "=
10 Hz, J3 "4" = 9 Hz);
3.83 (s, 3H, COOMe); 3.67 (s, 3H, COOMe);
3.25 (dd) 1H, H2 "J1", 2 "3.5 Hz, J2", 3 ": 10 Hz);
2.75 (1H, OH, exchanged with D20, OH at 4, uronic acid unit.

2,15; 2,04 (25, 12H, 4 OAc) EXEMPLE 3
Synthèse du pentasaccharide 8 ou
1) On effectue une réaction de condensation entre le tétrasaccharide 6 et le monosaccharide z, ce qui conduit au pentasaccharide 8.
2.15; 2.04 (25, 12H, 4 OAc) EXAMPLE 3
Synthesis of pentasaccharide 8 or
1) A condensation reaction is carried out between the tetrasaccharide 6 and the monosaccharide z, which leads to the pentasaccharide 8.

Un mélange de 27 mg (54 M) de bromure 7 préparé selon H. PAULSEN und W. STENZEL, Chem. Ber., 111 (1978) 2334-2347, de 26 mg (18 M) du tétrasaccharide 6 et de 50 mg de tamis moléculaire 4 en poudre dans 0,8 ml de dichloroéthane est soumis à agitation durant 1/2 h à la température ambiante sous atmosphère d'argon sec, puis refroidi à - 200C. 16 ml (120 pM) de svm-collidine et 26 mg (100 M) de triflate d'argent sont ajoutés successivement et le mélange réactionnel est soumis à agitation pendant 18h en laissant la température remonter lentement vers la température ambiante. A mixture of 27 mg (54 M) bromide 7 prepared according to H. PAULSEN and W. STENZEL, Chem. Ber., 111 (1978) 2334-2347, 26 mg (18 M) of the tetrasaccharide 6 and 50 mg of powdered molecular sieve 4 in 0.8 ml of dichloroethane is stirred for 1/2 hour at room temperature. under dry argon atmosphere, then cooled to -200C. 16 ml (120 μM) of svm-collidine and 26 mg (100 M) of silver triflate are added successively and the reaction mixture is stirred for 18 h allowing the temperature to rise slowly to room temperature.

Après traitement identique à celui décrit pour la préparation de 5, le résidu est chromatographié sur une colonne de gel de silice (5g, gel 230-400 mesh). After treatment identical to that described for the preparation of 5, the residue is chromatographed on a column of silica gel (5 g, 230-400 mesh gel).

Par solution avec un mélange hexane-acétate d'éthyle (4:3, v/v), on récupère 30 mg de pentasaccharide 3 sous forme d'un verre incolore (rendement 90 %). [α]D20= + 670 (c 1; chloroforme).By solution with a hexane-ethyl acetate mixture (4: 3, v / v), 30 mg of pentasaccharide 3 are recovered in the form of a colorless glass (yield 90%). [α] D20 = + 670 (c 1, chloroform).

Spectre RMN (90 MHz, CDCl3).NMR spectrum (90 MHz, CDCl3).

#: 7,30 (m, 40 H, 8 Ph); 5,53 (d, 1H, H1"", J1"",2""=
3,5 Hz);
5,40 (d.de d.1H,H3'" J211,3 : 10 Hz, J3",4"= 9 Hz);
3,76 (s, 3H, COOMe); 3,61 (5, 34, cooMe);
3,30-3,10 (2 d.de d. recouvrement, 2H, H2" et H'21,
J = 3,5 et 10 Hz);
2,10; 2,03; 2,00 (3s, 15 H, 50Ac
EXEMPLE 4
Préparation du pentasaccharide 13
On a recours aux étapes suivantes
a) d'élimination des groupes acétyle (pentasaccharide 9)
b) de sulfatation des groupes -OH ainsi libérés (pentasaccharide 10)
c) d'hydrogénation pour libérer les groupes -OH protegés par des groupes benzyle et pour trans
former le groupe -N3 en groupe -NH2 (pentasaccharide 11)
d) de sulfatation des groupes NH2(pentasaccha rïde (12) nuis saponification des groupes
-COOMe en position 6 (pentasaccharide 13).
#: 7.30 (m, 40H, 8 Ph); 5.53 (d, 1H, H1 "", J1 "", 2 "" =
3.5 Hz);
5.40 (d = 1H, H +, J211.3: 10Hz, J3 +, 4 "= 9Hz);
3.76 (s, 3H, COOMe); 3.61 (5, 34, cooMe);
3.30-3.10 (2 dd of recovery, 2H, H2 "and H'21,
J = 3.5 and 10 Hz);
2.10; 2.03; 2.00 (3s, 15H, 50Ac
EXAMPLE 4
Preparation of pentasaccharide 13
The following steps are used
a) elimination of acetyl groups (pentasaccharide 9)
b) sulfation of the -OH groups thus released (pentasaccharide 10)
c) Hydrogenation to liberate -OH groups protected by benzyl groups and for trans
form the group -N3 in group -NH2 (pentasaccharide 11)
d) Sulfation of NH 2 groups (pentasaccha ryde (12) harmful saponification groups
-COOMe in position 6 (pentasaccharide 13).

Ces étapes sont réalisées comme suit
a)-- élimination des groupes acétyle du
dérivé 8
Une solution de 28 mg du pentasaccharide 8
dans un mélange de 2,5 ml de 1,2-diméthoxyéthane et de 0,8 ml de méthanol est refroidie à 0 C sous agitation.
These steps are performed as follows
a) - removal of acetyl groups from
derivative 8
A solution of 28 mg pentasaccharide 8
in a mixture of 2.5 ml of 1,2-dimethoxyethane and 0.8 ml of methanol is cooled to 0 ° C. with stirring.

On ajoute alors 1 ml d'une solution îM de soude, goutte
à goutte, en 10 mn. Le mélange réactionnel est soumis à agitation 1 h à 0 C, puis 12h à la tempe rature ambiante.
1 ml of a 1M solution of sodium hydroxide, dropwise, is then added.
drop by drop, in 10 minutes. The reaction mixture is stirred for 1 h at 0 ° C., then 12 h at room temperature.

Après refroidissement à OOC, on ajoute 3 ml d'acide chlorhydrique 1M et le mélange laiteux est immediatement extrait avec du chloroforme (5 fois 5 ml). Les phases organiques sont lavées avec de l'eau, séchées sur du sulfate de sodium, filtrées et évaporées. Le résidu est repris dans 2 ml de méthanol et traité par une solution éthérée de diazométhane (excès jusqu'à persistance de la coloration jaune) pendant une demi-heure.After cooling to OOC, 3 ml of 1 M hydrochloric acid are added and the milk mixture is immediately extracted with chloroform (5 x 5 ml). The organic phases are washed with water, dried over sodium sulfate, filtered and evaporated. The residue is taken up in 2 ml of methanol and treated with an ethereal solution of diazomethane (excess until persistence of the yellow color) for half an hour.

Après évaporation à sec, le résidu est chromatographié sur une colonne de gel de silice (2 g, gel 230-400 mesh). L'élution par le mélange dichlorométhaneméthanol (15:1, v/v) permet de récupérer 18 mg du pentasaccharide 9 (rendement 72 %) sous forme d'un verre in colore. [α]D20= + 570 (c = 1; chloroforme);
Spectre RMN (90 MHz, CDCl3, puis D20): 6: 7,30 (m, 40 H, 8 Ph); 5,50 (d, 1H, J1,2 = 3,5 Hz, H1
d'une unité 2-azido); 3,78 (s, 3H, cooMe);
3,28 (s, 3H-, COOMe); absence de signaux OAc dans la
zone 1,50 < 5 c 2,50
b) sulfatation des groupes -OH
A une solution du composé 9 (22 mg) dans le diméthylforma- mide (0,5 ml), on ajoute du complexe triméthylamine/S03 (22 mg, 2,5 éq/OH) . Le mélange réactionnel est chauffé à 500C durant environ 14 h.On ajoute alors à nouveau du complexe triméthylamine/S03 (10 mg) et laisse la réaction évoluer durant 24 heures On ajoute au mélange réactionnel du méthanol (0,5 ml) et du chloroforme (0,5 ml) .La solution est introduite au sommet d'une colonne de séphadex LH20 équili brée dans un mélange CHCl3/CH3OH (1/1 ; v/v). Les fractions con tenant le produit sulfaté sont regroupées et le solvant est évaporé. On obtient ainsi un verre (30 mg) .
After evaporation to dryness, the residue is chromatographed on a column of silica gel (2 g, 230-400 mesh gel). Elution with dichloromethanemethanol (15: 1, v / v) makes it possible to recover 18 mg of pentasaccharide 9 (yield 72%) in the form of an in-color glass. [&alpha;] D20 = + 570 (c = 1, chloroform);
NMR Spectrum (90 MHz, CDCl3 then D20): 6: 7.30 (m, 40H, 8 Ph); 5.50 (d, 1H, J1.2 = 3.5 Hz, H1
a 2-azido unit); 3.78 (s, 3H, cooMe);
3.28 (s, 3H-, COOMe); absence of OAc signals in the
zone 1.50 <5 c 2.50
b) sulfation of -OH groups
To a solution of compound 9 (22 mg) in dimethylformamide (0.5 ml) is added trimethylamine / SO 3 complex (22 mg, 2.5 eq / OH). The reaction mixture is heated at 500 ° C. for about 14 hours. The trimethylamine / SO 3 complex (10 mg) is then added again and the reaction is allowed to proceed for 24 hours. Methanol (0.5 ml) and chloroform are added to the reaction mixture. (0.5 ml). The solution is introduced at the top of an equilibrated LH20 Sephadex column in CHCl3 / CH3OH (1/1, v / v). Fractions containing the sulfated product are pooled and the solvent is evaporated. This gives a glass (30 mg).

Ce verre est ensuite chromatographié sur gel de silice (10 g) dans un solvant constitué de 3 parties du mélange
acétate d'éthylènc/pyridine acide acétique/eau,
(6/2/0, 6/1, v/v/v/v) et de 2 parties du mélange acétate
d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau, (5/b/1/3, v/v/v/v) parties du mélange acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau, 5/5/1/3, v/v/v/v.
This glass is then chromatographed on silica gel (10 g) in a solvent consisting of 3 parts of the mixture
ethyl acetate / pyridine acetic acid / water,
(6/2/0, 6/1, v / v / v / v) and 2 parts of the acetate mixture
ethyl / pyridine / acetic acid / water, (5 / b / 1/3, v / v / v / v) parts of the mixture ethyl acetate / pyridine / acetic acid / water, 5/5/1/3 , v / v / v / v.

Les fractions contenant le produit désiré sont rassemblées et concentrées. Après évaporation des solvants, le résidu obtenu est dissous dans du méthanol additionnéd'eau, puis passé au travers d'une colonne de Dowex 50 W x 4,Na+, équilibrée dans un mélange méthanol/eau (50/50, v/v).Fractions containing the desired product are pooled and concentrated. After evaporation of the solvents, the residue obtained is dissolved in methanol added to water and then passed through a column of Dowex 50 W x 4, Na +, equilibrated in a mixture of methanol / water (50/50, v / v). .

On obtient ainsi le sel de sodium; c) hydrogénation
Le produit obtenu ci-dessus est dissous dans du méthanol (3,7 ml) additioné d'eau (0,3 ml).
The sodium salt is thus obtained; c) hydrogenation
The product obtained above is dissolved in methanol (3.7 ml) added with water (0.3 ml).

A cette solution, on ajoute le catalyseur (Pd/c,5%,40 mg) et on agite sous atmosphère d'hydrogère pendant 5 jours.To this solution, the catalyst (Pd / c, 5%, 40 mg) is added and stirred under a hydrogen atmosphere for 5 days.

Après élimination du catalyseur nar filtration, l'analyse du spectre U.V de la solution obtenue montre Ja disparition totale de l'absorption due auxgroupesbenzyle. Le solvant est alors évaporé, laissant un résidu, à savoir le composé 11. After removal of the catalyst by filtration, the analysis of the U.V spectrum of the solution obtained shows the complete disappearance of the absorption due to the benzyl groups. The solvent is then evaporated, leaving a residue, namely compound 11.

d) sulfatation des groupes -NH2, puis saponification des groupes carboxyle. d) sulfation of the -NH2 groups, followed by saponification of the carboxyl groups.

Le composé est dissous dans l'eau (4ml). Le pH est ensuite ajusté à 9,5 puis on ajoute à la solution du complexe triméthylamine/S03(54 mg). Le pH est maintenu à 9,5 pendant toute la durée de la réaction par addition de soude O,lN.The compound is dissolved in water (4ml). The pH is then adjusted to 9.5 and then the trimethylamine / SO 3 complex (54 mg) is added to the solution. The pH is maintained at 9.5 throughout the duration of the reaction by addition of 0.1N sodium hydroxide.

Après une nuit, on procède à une nouvelle addition d'agent de sulfatation (27 mg). Une dernière additionest effectuée après 24 h.After one night, a further addition of sulphating agent (27 mg) is carried out. A final addition is made after 24 hours.

Après 48 h, on ajoute de la soude (3M, 34 ml) au composé 12 formé, puis la solution est sounlise à agitation pendant 3 heures à température ambiante de manière à hydrclyser les méthylesters des motifs de type acide uronique.After 48 hours, sodium hydroxide (3M, 34 ml) is added to the compound 12 formed, and the solution is then stirred for 3 hours at room temperature so as to hydrolyse the methyl esters of the uronic acid type units.

Le mélange réactionnel est ensuite neutr@licé puis concentré jusqu'à un volume d'environ 2 ml.The reaction mixture is then neutralized and then concentrated to a volume of about 2 ml.

La solution ainsi obtenueest déposée au soumet d'une colonne de Séphadex G 25 (100 ml) éluée avec de l'eau. The solution thus obtained is deposited by a column of Sephadex G (100 ml) eluted with water.

Les fractions collectéessont analysées par absorption Uv (206 nm) zt en polarométrie,(265 4nm). Les fractions présentant une activité optique sont regroupées, le solvant est éliminé et le résidu repris par environ 2 ml d'eau et lyophilisé.The collected fractions were analyzed by UV absorption (206 nm) and polarometry (265 nm). The fractions having optical activity are pooled, the solvent is removed and the residue taken up in about 2 ml of water and lyophilized.

On obtient ainsi le dérivé 13 sous forme de poudre blanche (5,6 mg, 25% par rapport au produit 9).The derivative 13 is thus obtained in the form of a white powder (5.6 mg, 25% relative to the product 9).

L' étude en RNN confirme la structure attendue.  The RNN study confirms the expected structure.

Claims (1)

- REVENDICATION  - CLAIM Pentasaccharides caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule (i) suivante Pentasaccharides characterized in that they correspond to the following formula (i)
Figure img00260001
Figure img00260001
dans laquelle - les groupes R,identiques ou différents les uns des autres, représentent un atome d'hydrogène ou un radi cal physiologiquement acceplable,de type -R1R2, dans lequel P*1 représente avantageusement un sel minéral, en particulier un groupe S03 et R2 représente un cation métallique, notamment un métal alcalin tel que le sodium ou alcalino-terreux, tel que le calcium ou le magnésium, ou un cation organique tel qu'un dérivé de base organique azotée, et in which - the groups R, identical or different from each other, represent a hydrogen atom or a physiologically acceptable radi cal, of the type -R 1 R 2, in which P * 1 advantageously represents a mineral salt, in particular a group SO 3 and R2 represents a metal cation, in particular an alkali metal such as sodium or alkaline earth metal, such as calcium or magnesium, or an organic cation such as a nitrogenous organic base derivative, and - les substituants A, identiques ou différents les the substituents A, which are identical or different from uns des autres, représenteut un atome d'hydrogène, ou each other, represents a hydrogen atom, or encore un cation métallique ou un cation organique @els  still a metal cation or an organic cation que définsi ci-dessus.  as above.
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