FR2527771A1

FR2527771A1 - DEVICE FOR THE HANDLING OF THIN CUTTINGS, ESPECIALLY CRYO-CUTTING, AND METHOD OF THERAPY OF THIN CUTTING

Info

Publication number: FR2527771A1
Application number: FR8308967A
Authority: FR
Inventors: Kare Tvedt; Guennar Kopstad; Olav Haugen
Original assignee: C Reichert Optische Werke AG
Current assignee: C Reichert Optische Werke AG
Priority date: 1982-06-01
Filing date: 1983-05-31
Publication date: 1983-12-02
Also published as: GB8314246D0; DE3220619C2; GB2121208A; GB2121208B; SE8303040D0; SE8303040L; JPS58215533A; DE3220619A1

Abstract

LE DISPOSITIF COMPREND UNE PLAQUE DE BASE 1 ET UNE PLAQUE COUVERCLE 2 SUSCEPTIBLES D'ETRE APPLIQUEES L'UNE CONTRE L'AUTRE ET DONT L'UNE AU MOINS PRESENTE UNE PLAQUE DE MAINTIEN 7 A LAQUELLE EST FIXEE A DEMEURE UNE GRILLE SUPPORT 9 ADAPTEE A RECEVOIR LA CRYO-COUPE 10. LA TAILLE DU DISPOSITIF EST TELLE QU'IL PEUT, A L'ETAT OUVERT, ETRE INTRODUIT DANS LA CHAMBRE FROIDE DE L'ULTRAMICROTOME ET RECEVOIR DIRECTEMENT LA CRYO-COUPE 10 ET, A L'ETAT FERME, ETRE MANIPULE SANS DIFFICULTE. PENDANT LA LYOPHILISATION, LA CRYO-COUPE 10 EST PRESSEE ENTRE LES PLAQUES 1 ET 2. LA PLAQUE DE MAINTIEN 7 EST AMOVIBLE ET ELLE PEUT ETRE INTRODUITE DIRECTEMENT DANS LE MICROSCOPE ELECTRONIQUE AVEC LA CRYO-COUPE QU'ELLE SUPPORTE.THE DEVICE INCLUDES A BASE PLATE 1 AND A COVER PLATE 2 THAT ARE LIKELY TO BE APPLIED ONE AGAINST ANOTHER AND OF WHICH AT LEAST ONE HAS A HOLDING PLATE 7 TO WHICH IS FIXED TO REMAIN A SUPPORT GRID 9 ADAPTED TO RECEIVE THE CRYO-COUPE 10. THE SIZE OF THE DEVICE IS SUCH THAT IT CAN, IN THE OPEN STATE, BE INSERTED INTO THE COLD CHAMBER OF THE ULTRAMICROTOME AND DIRECTLY RECEIVE THE CRYO-COUPE 10 AND, IN THE CLOSED STATE, TO BE HANDLED WITHOUT DIFFICULTY. DURING LYOPHILIZATION, THE CRYO-CUP 10 IS PRESSED BETWEEN THE PLATES 1 AND 2. THE HOLDING PLATE 7 IS REMOVABLE AND IT CAN BE INSERTED DIRECTLY INTO THE ELECTRONIC MICROSCOPE WITH THE CRYO-CUP THAT IT SUPPORTS.

Description

La présente invention concerne un dispositif pour la manipulation deThe present invention relates to a device for the manipulation of

coupes minces et, en particulier, de coupes congelées, dites "cryocoupes" L'invention a également pour objet un procédé pour la lyophilisation de coupes de cette nature. thin sections and, in particular, frozen sections, so-called "cryocoupes" The invention also relates to a process for lyophilization of sections of this nature.

Pour examiner, au microscope électronique, des prépara- To examine, under the electron microscope,

tions organiques sous la forme de coupes minces (cryo-coupes) qui sont conservées à de basses températures et obtenues au moyen d'ultramicrotomes, il est nécessaire de soumettre les cryo-coupes à un traitement préliminaire qui est conçu pour les rendre adaptées à l'examen Ce traitement préliminaire demande une opération de pressage, suivie d'une organic fractions in the form of thin sections (cryo-cuts) which are kept at low temperatures and obtained by means of ultramicrotomes, it is necessary to subject the cryo-cuts to a preliminary treatment which is designed to make them suitable for This preliminary treatment requires a pressing operation, followed by a

opération de lyophilisation et d'un réchauffement précau- freeze-drying operation and a precautionary warming

tionneux à la température ambiante A cette fin, les cryo-coupes doivent tout d'abord être transférées de la chambre froide de l'ultramicrotome dans une installation de pressage d'o elles sont ensuite évacuées vers une chambre de lyophilisation Après l'opération de lyophilisat Ion et de réchauffage à la température ambiante, elles sont ensuite reprises et fixées dans le microscope électronique au moyen d'un dispositif de maintien On utilise de petites grilles supports pour transporter les cryocoupes, lesquelles grilles sont faites de carbone ou de béryllium Les For this purpose, the cryo-sections must first be transferred from the ultramicrotome cold room to a pressing facility where they are then discharged to a lyophilization chamber. lyophilized and reheated to room temperature, they are then taken up and fixed in the electron microscope by means of a holding device. Small support grids are used to transport the cryocups, which grids are made of carbon or beryllium.

cryo-coupes, enlevées directement du couteau de l'ultrami- cryo-cuts, removed directly from the ultramini knife

crotome, par exemple, au moyen d'un cheveu, sont transférées sur ces grilles supports qui, en raison de leur petite taille, doivent être manipulées au moyen d'outils du type pince L'opération de pression des cryo-coupes contre les grilles supports est accomplie à l'aide de poids présentant crotoma, for example, by means of a hair, are transferred on these support grids which, because of their small size, must be manipulated by means of tools of the clamp type The operation of pressing the cryo-cuts against the grids supports is accomplished using weight presenting

des surfaces polies.polished surfaces.

Lorsque l'on emploie ce procédé connu, il est impos- When this known process is used, it is impossible to

sible, durant les diverses opérations, d'empêcher que des cryo-coupes soient perdues, deviennent inutilisables ou, tout au moins, qu'elles soient endommagées à un point tel que leur adaptation à l'examen au microscope électronique est limité Tout d'abord, pendant l'opération d'enlèvement de la grille support hors de la chambre froide du microtome, avec la cryo-coupe reposant sur cette grille, le danger existe que la cryo-coupe tombe de la grille support par suite du courant d'air accompagnant cette opération En outre, en raison de sa très faible masse, la grille support se réchauffe très rapidement au cours de son bref transport jusqu'à l'outil de pressage, par suite de quoi la cryo-coupe during the various operations, to prevent cryo-cuts from being lost, to become unusable or, at least, to be damaged to such an extent that their adaptation to the electron microscope examination is limited. firstly, during the operation of removing the support grid from the cold chamber of the microtome, with the cryo-cup resting on this grid, the danger exists that the cryo-cup falls from the support grid as a result of the current of air accompanying this operation In addition, because of its very low mass, the support grid heats up very quickly during its brief transport to the pressing tool, as a result of which the cryo-cut

se réchauffe prématurément et peut en être détérioriée. warms up prematurely and may be damaged.

Pendant l'opération de montage des grilles support dans le dispositif de pressage et, également plus tard dans le During the assembly operation of the support grids in the pressing device and also later in the

dispositif de fixation récepteur d'échantillons du micros- receiver receiving device of the micros-

cope électronique -opérations qui suivent la lyophilisation et le réchauffage-, le danger existe toujours que des produits contaminants atteignent la préparation par suite de la manipulation En outre, les outils de pressage doivent être maintenus scrupuleusement propres de manière qu'ils ne Electronic cope - operations that follow lyophilization and reheating - the danger still exists that contaminants reach the preparation as a result of handling. In addition, the pressing tools must be kept scrupulously clean so that they do not

contaminent pas les cryo-coupes et les rendent inutilisa- do not contaminate cryo-cuts and render them unusable

bles Enfin, pendant l'opération de séchage, il est pratiquement impossible d'empêcher que les cryo-coupes Lastly, during the drying process, it is practically impossible to prevent cryo-cuts

perdent leur forme initialement plate et se bombent. lose their initially flat shape and bulge.

Ces inconvénients débouchent sur le fait qu'en dépit de l'existence de très bons ultramicrotomes de fonctionnement facile, la préparation de cryo-coupes destinées à la microscopie électronique n'est pas encore devenue une opération de routine mais doit être confiée à du personnel hautement spécialisé et, même avec de tels spécialistes, le These drawbacks lead to the fact that despite the existence of very good ultramicrotomes of easy operation, the preparation of cryo-cuts for electron microscopy has not yet become a routine operation but must be entrusted to personnel highly specialized and, even with such specialists, the

taux de perte de cryo-coupes est relativement grand. Cryo-slice loss rate is relatively large.

En conséquence, la présente invention a pour objet d'apporter un dispositif grâce auquel la préparation des cryo-coupes pour examen au microscope électronique peut être effectuée d'une manière qui ne demande pas un soin exceptionnel. Un autre but de l'invention est de réduire le taux de perte tout à fait considérable des cryo-coupes et, d'une Accordingly, it is an object of the present invention to provide a device by which the preparation of cryo-slices for examination by an electron microscope can be performed in a manner that does not require exceptional care. Another object of the invention is to reduce the rate of loss quite considerable cryo-cuts and, a

manière générale, les préparations gâchées. In general, the preparations spoiled.

Ces buts sont atteints selon l'invention en ce sens qu'elle apporte un dispositif pour la manipulation de coupes minces, comprenant une grille support adaptée à recevoir une coupe mince et un dispositif de maintien pour la grille support, ledit dispositif de maintien comprenant une plaque de base, une plaque couvercle guidée qui peut être amenée sur ladite plaque de base et des moyens pour serrer la plaque couvercle contre la plaque de base et donc contre une These objects are achieved according to the invention in that it provides a device for the manipulation of thin sections, comprising a support grid adapted to receive a thin section and a holding device for the support grid, said holding device comprising a base plate, a guided cover plate which can be fed to said base plate and means for clamping the cover plate against the base plate and thus against a

coupe mince présente sur la grille support. thin cut on the support grid.

Le dispositif peut être mis en place dans la chambre froide de l'ultramicrotome dans laquelle une cryo-coupe est produite, de manière que la cryo-coupe qui adhère au-couteau de l'ultramicrotome puisse être transférée directement sur la grille support La plaque couvercle est alors guidée contre la plaque de base et maintenue contre cette dernière de sorte que la cryo-coupe qui est présente sur la grille support y est fermement pressée Le dispositif, à l'état fermé, peut ensuite être enlevé de la chambre froide, The device can be put in place in the cold chamber of the ultramicrotome in which a cryo-cut is produced, so that the cryo-cup which adheres to the knife of the ultramicrotome can be transferred directly to the support grid. The cover is then guided against the base plate and held against the latter so that the cryo-cut that is present on the support grid is firmly pressed. The device, in the closed state, can then be removed from the cold room.

éliminant ainsi tout risque de perte de la cryo-coupe. eliminating any risk of cryo-cutting loss.

Par suite du serrage de la plaque couvercle sur la plaque de base, la cryo-coupe est déjà pressée à plat de sorte qu'il devient inutile de la transférer dans un dispositif de pressage séparé Au contraire, la coupe mince As a result of the clamping of the cover plate on the base plate, the cryo-cut is already pressed flat so that it becomes unnecessary to transfer it to a separate pressing device. On the contrary, the thin cut

peut être immédiatement placée dans une chambre de lyophili- can be immediately placed in a freeze-dried chamber

sation Pour cette raison, et du fait que le dispositif de maintien, comparé à la grille support, possède une capacité thermique considérablement supérieure, il ne se produit aucun réchauffement nuisible de la coupe mince car la grille support est substantiellement protégée des effets de la For this reason, and because the holding device, compared to the support grid, has a considerably higher heat capacity, no harmful reheating of the thin section occurs because the support grid is substantially protected from the effects of

température ambiante.ambient temperature.

Une caractéristique importante et indépendante de l'invention est que, dans le dispositif de maintien selon l'invention, l'opération de lyophilisation de la cryo-coupe est effectuée tandis que celle-ci est à l'état pressé Du fait qu'il est comparativement facile de stocker le support complet dans la chambre de lyophilisation d'une manière telle que le transfert thermique ne se fasse que très lentement, il est possible de régler l'élévation de température de la cryo-coupe d'une manière qui ne produise aucun effet nuisible De plus, pour cette raison, la cryo-coupe conserve sa forme plate, même après que la plaque couvercle ait été enlevée de sorte que l'examen au An important and independent feature of the invention is that, in the holding device according to the invention, the freeze-drying operation of the cryo-cup is carried out while the latter is in the pressed state. It is comparatively easy to store the complete support in the lyophilization chamber in such a way that the heat transfer takes place only very slowly, it is possible to adjust the temperature rise of the cryo-cup in a way that In addition, for this reason, the cryo-cup retains its flat shape, even after the cover plate has been removed so that

microscope électronique n'est pas gêné. electron microscope is not hindered.

Selon une forme d'exécution particulièrement avantageu- According to a particularly advantageous embodiment

se de l'invention, la grille support, ou les grilles supports, sont fixées à demeure à la plaque de maintien qui est logée de manière amovible dans un évidement de la plaque de base Cette plaque de maintien correspond, de préférence, en ce qui concerne ses dimensions et sa forme, au dispositif de fixation récepteur du support de specimen du microscope électronique, de telle manière qu'elle puisse être insérée directement dans ce dispositif En conséquence, il est inutile, à la suite de la lyophilisation et du réchauffage, de manipuler la petite grille support sur laquelle repose la cryo-coupe Dans le passé, cette manipulation a donné lieu à des difficultés et fréquemment à des contaminations Selon l'invention, il est possible de monter la plaque support comparativement grande directement sur le dispositif de In accordance with the invention, the support grid, or the support grids, are permanently attached to the holding plate which is removably housed in a recess in the base plate. This holding plate preferably corresponds to dimensions and shape, to the receptor binding device of the specimen holder of the electron microscope, so that it can be inserted directly into this device. As a result, it is unnecessary, following freeze-drying and reheating, to manipulate the small support grid on which the cryo-cup rests In the past, this manipulation gave rise to difficulties and frequently to contaminations According to the invention, it is possible to mount the comparatively large support plate directly on the device.

fixation récepteur du microscope électronique sans manipula- receptor fixation of the electron microscope without manipulation

tion de la grille support ou de la cryo-coupe qui y repose. the support grid or the cryo-section that rests on it.

Au cours de la mise en oeuvre du procédé connu, il se produit souvent des pertes de cryo-coupes du fait qu'elles During the implementation of the known process, cryo-slice losses often occur because they

ne sont pas restées sur la grille support pendant l'opéra- did not stay on the support grid during the opera-

tion ayant pour objet de les presser à plat mais ont adhéré à l'outil de pressage et, soit elles sont ensuite tombées de cet outil, soit elles ont été endommagées tandis qu'on les to press them flat but have adhered to the pressing tool and either they have fallen from the tool or they have been damaged while

en détachait.detached.

Selon une autre forme d'exécution de l'invention, il According to another embodiment of the invention,

est également possible d'éliminer cette source de perte. It is also possible to eliminate this source of loss.

Cela est obtenu par un dispositif grâce auquel une plaque de maintien identique munie à demeure d'une grille support est disposée dans la plaque couvercle du dispositif de telle manière que, lorsque ce dernier est à l'état fermé, la coupe mince est maintenue entre deux grilles supports Le dispositif presse donc la coupe mince à plat, entre les-deux grilles, de sorte qu'il importe peu sur laquelle de ces deux grilles la coupe mince demeure car, leur configuration étant identique, il est possible d'insérer, dans le microscope électronique, celle des deux plaques de maintien qui comporte la grille support sur laquelle adhère la coupe mince. Selon une forme d'exécution spéciale, la grille support est fixée, par exemple, au moyen d'un adhésif sur une ouverture qui s'étend au travers de la plaque de maintien et un.élément de pression est disposé dans un évidement prévu dans la plaque de base La plaque de maintien peut être prévue dans l'évidement et l'élément de pression se projette dans une ouverture et est en contact avec la surface inférieure de la grille support Cette configuration favorise la lyophilisation du fait que la coupe mince est en communication avec le milieu ambiant au travers de la grille support Si, en outre, la hauteur de l'élément de pression est réglable, comme cela est prévu selon une autre forme d'exécution, il est possible de déterminer une pression optimale définie pour l'opération de pressage à plat de la This is achieved by a device whereby an identical holding plate permanently provided with a support grid is disposed in the cover plate of the device such that when the latter is in the closed state, the thin section is maintained between The device thus presses the thin cut flat between the two grids, so that it matters little on which of these two grids the thin cut remains because, their configuration being identical, it is possible to insert, in the electron microscope, that of the two holding plates which comprises the support grid on which adheres the thin section. According to a special embodiment, the support grid is fixed, for example, by means of an adhesive on an opening which extends through the holding plate and a pressure element is arranged in a recess provided in the base plate The holding plate may be provided in the recess and the pressure element projects into an opening and is in contact with the lower surface of the support grid. This configuration promotes lyophilization because the thin section is in communication with the ambient medium through the support grid If, in addition, the height of the pressure element is adjustable, as provided in another embodiment, it is possible to determine an optimum pressure defined for the flat pressing operation of the

coupe minice.short cut.

L'invention apporte également un neédé de lyophilisa- The invention also provides a neede lyophilisa-

tion de coupe mince qui consiste à produire une coupe mince à l'aide d'un microtome, à transférer cette coupe sur une grille support, à presser à plat ladite coupe, à transférer ladite coupe et ladite grille support dans une chambre de lyophilisation et à lyophiliser ladite coupe dans ladite chambre. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention thin section, which consists of producing a thin section using a microtome, transferring this section to a support grid, pressing said section flat, transferring said section and said support grid into a freeze-drying chamber and freeze-drying said cup in said chamber. Other advantages and characteristics of the invention

ressortiront de la description qui va suivre faite en will emerge from the following description made in

référence aux dessins annexés dans lesquels la figure I représente une première forme d'exécution d'un dispositif de manipulation selon l'invention, à l'état ouvert, prête à recevoir une cryo-coupe; la figure 2 représente une plaque de maintien à l'état isolé; la figure 3 représente le dispositif de manipulation de la figure 1 dans l'état o il agit comme dispositif de pressage; la figure 4 montre une plaque de maintien, à l'état isolé, qui est montée dans un microscope électronique, cette figure montrant l'accessibilité améliorée d'une coupe mince présente sur la plaque de maintien, par comparaison au procédé connu; et les figures 5 et 6 représentent une seconde et une troisième formes d'exécution du dispositif de manipulation reference to the accompanying drawings in which Figure I shows a first embodiment of a handling device according to the invention, in the open state, ready to receive cryo-cut; Figure 2 shows a holding plate in the isolated state; Figure 3 shows the handling device of Figure 1 in the state where it acts as a pressing device; Fig. 4 shows a holding plate, in the isolated state, which is mounted in an electron microscope, this figure showing the improved accessibility of a thin section on the holding plate, as compared to the known method; and Figures 5 and 6 show second and third embodiments of the handling device

selon l'invention.according to the invention.

La première forme d'exécution du dispositif de manipu- The first embodiment of the handling device

lation selon l'invention, représentée aux figures 1 à 3, comprend essentiellement une plaque de base 1 et une plaque couvercle 2 qui sont couplées au moyen d'une charnière 3 pour former un ensemble ressemblant à une paire de mâchoires Les deux plaques 1 et 2 sont essentiellement symétriques par rapport à leurs surfaces supérieures qui se font face, ont une forme rectangulaire allongée (dirigée perpendiculairement au plan du dessin) et ont, sur leurs deux faces d'extrémités opposées, des vis de serrage 4 qui According to the invention, shown in Figures 1 to 3, essentially comprises a base plate 1 and a cover plate 2 which are coupled by means of a hinge 3 to form an assembly resembling a pair of jaws. 2 are essentially symmetrical with respect to their facing upper surfaces, have an elongated rectangular shape (directed perpendicular to the plane of the drawing) and have, on their two faces of opposite ends, clamping screws 4 which

permettent de les serrer l'une contre l'autre. allow to tighten them against each other.

Chacune des deux plaques L et 2 possède un évidement rectangulaire, respectivement, 5 et 6 dans lequel est fixée une plaque de maintien 7 d'une manière permettant son détachement facile Des vis peuvent être employées pour fixer les plaques de maintien 7 ou elles peuvent être immobilisées en les introduisant à force derrière des ressorts (non représentés) qui se projettent à partir des Each of the two plates L and 2 has a rectangular recess, respectively, 5 and 6 in which is fixed a holding plate 7 in a manner allowing its easy detachment. Screws can be used to fix the holding plates 7 or they can be immobilized by forcing them behind springs (not shown) that project from the

parois latérales des évidements 5 et 6. side walls of the recesses 5 and 6.

Chacune des plaques de maintien 7 comporte, au centre, au moins une ouverture 8 qui s'étend au travers de la plaque de maintien et s'élargit en direction du fond de l'évidement associé 5, 6 Chaque ouverture S est recouverte à son extrémité supérieure par une grille support 9 en carbone ou béryllium La grille support 9 est collée sur la surface supérieure de la plaque de maintien L'épaisseur de la plaque de maintien 7 est choisie, par rapport aux évidements associés 5 et 6, de telle sorte que les grilles de support 9 viennent précisémment en contact l'une avec l'autre lorsque le dispositif est à l'état fermé (voir figure 3) et portent l'une contre l'autre sous une pression prédéterminée On préfère utiliser du graphite spectroscopiquement pur comme Each of the holding plates 7 has, in the center, at least one opening 8 which extends through the holding plate and widens towards the bottom of the associated recess 5, 6 Each opening S is covered with its upper end by a support grid 9 of carbon or beryllium The support grid 9 is bonded to the upper surface of the holding plate The thickness of the holding plate 7 is chosen, relative to the associated recesses 5 and 6, so that that the support grids 9 come into precise contact with each other when the device is in the closed state (see FIG. 3) and bear against each other under a predetermined pressure. It is preferable to use graphite spectroscopically pure as

matériau pour la réalisation de la plaque de maintien 7. material for producing the holding plate 7.

Le dispositif représenté aux figures 1 à 3 est utilisé The device represented in FIGS. 1 to 3 is used

comme suit.as following.

A la suite de l'opération au cours de laquelle une cryo-coupe est tranchée par un ultramicrotome dans un bloc de préparation solide, la cryo-coupe est transférée du Following the operation in which a cryo-cut is sliced by an ultramicrotome into a solid preparation block, cryo-cutting is transferred from the

couteau de l'ultramicrotome sur le dispositif selon l'inven- knife of the ultramicrotome on the device according to the invention.

tion qui est immédiatement placé à côté de l'ultramicrotome. which is immediately placed next to the ultramicrotome.

Plus précisément, la cryo-coupe est transférée sur la grille support 9 de la plaque de base 1, cette opération de transfert étant effectuée, par exemple, à l'aide d'un cheveu ou de tout autre moyen connu A la figure 2, la cryo-coupe est indiquée par 10 Ensuite, la plaque couvercle 2 est pivotée vers le bas autour de la charnière 3 de sorte que la grille support supérieure 9 est pressée contre la cryo-coupe qui se trouve emprisonnée entre les deux grilles supports 9 En resserrant les vis 4, qui sont supportées par les plaques 1 et 2, le cas échéant au moyen de ressorts non représentés, il est possible de créer une force de serrage qui exerce une pression définie sur la cryo-coupe 10 entre les grilles support 9 Il est possible de resserrer ces vis 4 tandis que le dispositif est encore à l'intérieur de la chambre froide de l'ultramicrotome ou, en variante, une fois qu'il a été enlevé de cette chambre Il est maintenant possible d'introduire le dispositif, avec la cryo-coupe, dans la chambre de lyophilisation sans élévation nuisible de la température La cryo-coupe, à l'état pressé à l'intérieur More specifically, the cryo-cut is transferred to the support grid 9 of the base plate 1, this transfer operation being carried out, for example, using a hair or any other known means in FIG. the cryo-cup is indicated by 10 Then, the cover plate 2 is pivoted downwardly around the hinge 3 so that the upper support grid 9 is pressed against the cryo-cup which is trapped between the two support grids 9 En tightening the screws 4, which are supported by the plates 1 and 2, where appropriate by means of not shown springs, it is possible to create a clamping force which exerts a pressure defined on the cryo-cut 10 between the support grids 9 It is possible to tighten these screws 4 while the device is still inside the cold room of the ultramicrotome or, alternatively, once it has been removed from this chamber It is now possible to introduce the device, with the cryo-cup, in the lyophilization chamber without harmful temperature rise Cryo-cup, in the pressed state inside

du dispositif, est lyophilisée dans la chambre de lyophili- of the device, is lyophilized in the freeze-dried chamber.

sation et réchauffée à la température ambiante selon une courbe définie température/temps dont les détails bien connus de l'homme de métier ne seront pas donnés ici A la suite de l'opération de lyophilisation, le dispositif est réouvert en relevant la plaque couvercle 2 de la plaque de base 1 et la plaque de maintien 7 dont la grille support 9 q The device is reopened by raising the cover plate 2 and heated to room temperature according to a defined temperature / time curve, the details of which are well known to those skilled in the art will not be given here. of the base plate 1 and the holding plate 7 whose support grid 9 q

porte La coupe 10 est enlevée duit dispositif. The cup 10 is removed from this device.

Du fait que, comme on l'a indiqué pluis haut, la plaque de maintien 7 correspond, en ce qui concerne tes formes et ses dimensions, au dispositif de maintien de specimen du microscope électronique d'une manière qui permet de la fixer directement dans ce support, il n'est pas besoin d'enlever la cryo-coupe 10 des grilles de support 9 Au contraire, la plaque de maintien 7 est elle-même transférée directement sur le dispositif de maintien de specimen du microscope Because, as indicated above, the holding plate 7 corresponds, with respect to shapes and dimensions, to the specimen holding device of the electron microscope in a manner which allows it to be fixed directly into the microscope. this support, it is not necessary to remove the cryo-cup 10 of the support grids 9 On the contrary, the holding plate 7 is itself transferred directly to the specimen holding device of the microscope

électronique.electronic.

A la suite de cette opération, on constate que, pratiquement dans tous les cas, la cryo-coupe 10 est plate du fait que l'opération de lyophilisation a été effectuée tandis que la cryo-coupe était à l'état pressé La possibilité d'effets nuisibles résultant de la déformation du fond, ou de l'obstruction du rayonnement X par des parties de la préparation qui se sont bombées, est ainsi évitée. Le procédé de manipulation décrit ci-dessus montre que le dispositif selon l'invention est un dispositif multi-fonctionnel qui transfère, comprime et maintient la cryo-coupe D'un côté, le dispositif possède des dimensions qui permettent sa mise en place à l'intérieur de la chambre froide de l'ultramicrotome, au voisinage du couteau, de manière à recevoir la cryo- coupe tombant dudit couteau D'un autre côté, ses dimensions sont telles qu'il peut être As a result of this operation, it can be seen that, in almost all cases, the cryo-cup 10 is flat because the freeze-drying operation was carried out while the cryo-cup was in the pressed state. harmful effects resulting from deformation of the bottom, or obstruction of X-radiation by parts of the preparation which have bowed, is thus avoided. The handling method described above shows that the device according to the invention is a multi-functional device that transfers, compresses and maintains the cryo-cut. On one side, the device has dimensions that allow it to be placed in place. inside the cold chamber of the ultramicrotome, in the vicinity of the knife, so as to receive the falling cryocut of said knife On the other hand, its dimensions are such that it can be

directement manipulé à la main et sans soin particulier. directly handled by hand and without special care.

Dans la forme d'exécution représentée, les plaques de In the embodiment shown, the plates of

maintien 7 sont introduites dans des évidements corres- 7 are introduced into corresponding recesses.

pondant 5, o des plaques 1, 2 d'une manière telle qu'un élément de pression 11 ou 12 se projette à partir du fond de l'évidement correspondant dans l'ouverture conique 8 La hauteur de cet élément de pression 11, 12 est choisie de telle sorte que sa surface supérieure porte directement contre la surface inférieure de la grille support 9 Durant l'opération de pressage, chacune des deux grilles support 9 est, en conséquence, supportée contre l'élément de pression associé de sorte qu'une pression définie est exercée sur la cryo-coupe 10 emprisonnée entre elles Dans la forme d'exécution représentée, les éléments de pression 11, 12 5, o of the plates 1, 2 in such a way that a pressure element 11 or 12 projects from the bottom of the corresponding recess in the conical opening 8 The height of this pressure element 11, 12 is chosen so that its upper surface bears directly against the lower surface of the support grid 9 During the pressing operation, each of the two support grids 9 is consequently supported against the associated pressure element so that a defined pressure is exerted on the cryo-cut 10 trapped between them In the embodiment shown, the pressure elements 11, 12

sont pressés fixement dans les plaques associées 1, 2. are pressed firmly into the associated plates 1, 2.

Cependant, au lieu de ces éléments 11, 12, on pourrait utiliser des vis de règlage Les vis de règlage pourraient être manoeuvrées de l'extérieur permettant ainsi d'effectuer However, instead of these elements 11, 12, it could be possible to use adjusting screws. The adjustment screws could be operated from the outside thus making it possible to carry out

un règlage.a trimming.

La figure 4 montre la disposition d'une plaque de maintien 7 dans le microscope électronique Au cours d'une analyse aux rayons X dans le microscope électronique, il se produit des ombres par suite de la disposition latérales du détecteur de rayons X et du dispositif spécial 13 de maintien de la grille support, ce dispositif, qui est Fig. 4 shows the arrangement of a holding plate 7 in the electron microscope. During X-ray analysis in the electron microscope, shadows occur as a result of the lateral arrangement of the X-ray detector and the device. 13 of the support grid, this device, which is

nécessaire jusqu'à présent, étant représenté comme il- necessary so far, being represented as he-

lustration de la technique antérieure en trait tiretés Par suite de cette formation d'ombres, il a été nécessaire jusqu'à présent de décaler le dispositif pour maintenir la cryo-coupe selon un angle qui correspond à la ligne brisée 14 Selon l'invention, le dispositif 13 de maintien de la grille support devient inutile Grâce à cela, l'angle de As a result of this shadowing, it has been necessary up to now to shift the device to maintain the cryo-cut at an angle corresponding to the broken line. According to the invention, the device 13 for holding the support grid becomes useless Thanks to this, the angle of

décalage qui est nécessaire pour obtenir un signal convena- which is necessary to obtain a suitable signal.

ble s'avère considérablement plus petit et correspond à la is considerably smaller and corresponds to the

ligne brisée 15.broken line 15.

Les figures 5 et 6 montrent des formes d'exécution modifiées du dispositif selon l'invention dans lequel la charnière 3, entre les plaques 1 et 2, est supprimée, la plaque couvercle 2 ' étant montée coulissante sur la surface externe de la plaque de base 1 ' (figure 5) ou, en variante, au moyen d'une liaison à goupilles et trous, dans laquelle des goupilles de positionnement 16 pénètrent dans des trous de positionnement 17 pendant le mouvement de fermeture Le guidage positif des plaques l'une vers l'autre élimine tout mouvement relatif excessif parallèle de la grille support 9 pendant l'opération de pressage, un tel mouvement étant susceptible d'endommagenr la cryo-coupe 10 portée par la Figures 5 and 6 show modified embodiments of the device according to the invention in which the hinge 3, between the plates 1 and 2, is removed, the cover plate 2 'being slidably mounted on the outer surface of the plate of base 1 '(FIG. 5) or, alternatively, by means of a pin and hole connection, in which positioning pins 16 penetrate into positioning holes 17 during the closing movement Positive guidance of the plates one towards the other eliminates any excessive parallel relative movement of the support grid 9 during the pressing operation, such a movement being liable to damage the cryo-cut 10 carried by the

grille support.support grid.

Le dispositif selon la présente invention présente, en The device according to the present invention has, in

conséquence, non seulement l'avantage de permettre l'accom- consequence, not only the advantage of allowing the accom-

plissement de la préparation de cryo-coupes pour examen au microscope électronique simplement et sans qu'il soit-besoin d'y apporter un soin excessif mais également permet d'augmenter considérablement le nombre de cryo-coupes pouvant être utilisées pour l'examen du fait qu'il n'y a pas folding the preparation of cryo-sections for examination under the electron microscope simply and without it being necessary to take excessive care but also allows to considerably increase the number of cryo-cuts that can be used for the examination of the fact that there is no

de danger que les grilles support délicates soient endomma- danger that delicate support grids are damaged

gées ou contaminées et que le réchauffement des cryo-coupes à la température ambiante peut se faire de manière contrôlée pendant l'opération de lyophilisation depuis une température qui est par exemple de -1200 C Cela est effectué, par exemple, en montant la plaque de base 1 sur des pointes qui réduisent au minimum le contact thermique avec le support et empêchent que des changements gênants se produisent dans les The temperature can be controlled in a controlled manner during the freeze-drying operation from a temperature of, for example, -1200.degree. C. This is done, for example, by mounting the heating plate. base 1 on spikes that minimize thermal contact with the support and prevent annoying changes in the

cryo-coupes par suite d'un réchauffage excessivement rapide. cryo-cuts due to excessively rapid reheating.

Au lieu de moyens de serrage directement mis en place sur les plaques 1 et 2, et qui génèrent la pression de contact sur la cryo-coupe 10, il est également possible d'insérer les plaques 1 et 2, en particulier celles selon les figures 5 et 6, dans un dispositif de serrage séparé et Instead of clamping means directly placed on the plates 1 and 2, and which generate the contact pressure on the cryo-cut 10, it is also possible to insert the plates 1 and 2, in particular those according to the figures 5 and 6, in a separate clamping device and

de les presser l'une contre l'autre. to press them against each other.

ilhe

Claims

Apparatus for handling thin sections comprising a support grid adapted to receive a thin section and a holding device for said support grid, characterized in that said holding device comprises a base plate (1), a guided cover plate ( 2) which can be fed to said base plate (1), and means (4) for clamping said cover plate (2) against said base plate (1), thus against a cut

thin (10) present on said support grid (9).

2 Device according to claim 1, characterized in that said holding device further comprises a holding plate (7) removably housed in a recess (5) provided in said base plate (1), said support grid (9) being permanently attached to said plate of

maintenance (7).

3 Device according to claim 1, characterized in that said holding device further comprises a first holding plate (7) removably housed in a recess (5) provided in said base plate (1), said grid support (9) being fixedly attached to said first holding plate (7), and a second holding plate (7) to which is fixed, permanently, a second support grid (9), said second holding plate (7) ) being disposed in said cover plate (2) such that when said holding device is in the closed state, the thin cut (10) is held between said

first and second support grids (9).

4 Device according to claim 2, characterized in that said support grid (9) is fixed above an opening (8) which extends through said holding plate (7), and in that a pressure element (11) is arranged in the recess (5) of said base plate (1), said pressure element (11) projecting into said opening (8) and being in contact with the lower surface

of said support grid (9).

Device according to claim 4 characterized in that the pressure element (11) comprises adjustment means for adjusting the height of said element of

pressure (11) with respect to said base plate (1).

Device according to claim 2, characterized in that said holding plate (7) is dimensioned and arranged so that it can be received in the device

sample receiver of an electron microscope.

7 Device according to claim 2, characterized in that said holding plate - (7) is graphite of

high purity.

8 Device according to claim 1, characterized in that it comprises a hinge (3) joining together

said base plate (1) and said cover plate (2).

9 Device according to claim 1, characterized in that it further comprises guide means for allowing the sliding guide of said plate (1) by

relative to said cover plate (2).

Process for the freeze-drying of thin sections, characterized in that it consists in producing a thin section with the aid of an ultramicrotome, transferring said section to a support grid (9), pressing said section flat, transferring it with the support grid (9) in a freeze-drying chamber and lyophilizing said cup in said

bedroom.

11. The method of claim 10, characterized in that it further comprises heating said lyophilized cut.