FR2514367A1 - Detection of pathogenic germs in drinking water, urine etc. - uses specific immuno-adsorbents e.g. polyacrylamide-agarose coupled with specific antibodies - Google Patents
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Abstract
Description
La présente invention concerne un procédé pour la détection de germes pathogènes dans des fluides par filtration sur des immunoadsorbants. Elle concerne plus particulièrement la recherche de bacteries et de particules virales dans l'eau, notamment en vue d'en déterminer la potabilité. The present invention relates to a method for the detection of pathogenic microorganisms in fluids by filtration on immunoadsorbents. It relates more particularly to the search for bacteria and viral particles in water, especially with a view to determining their potability.
La potabilité bactériologique d'une eau est fonction de la présence ou non de certains germes d'origine fécale. Pour l'organisation Mondiale de la Santé, une eau est considérée comme non dangereuse pour la santé Si elle ne contient pas de germes d'origine fécale. Il est bien évident qu'une eau sera d'autant moins dangereuse qu'elle ne contient pas de véritables germes pathogènes. The bacteriological potability of a water is a function of the presence or absence of certain fecal germs. For the World Health Organization, water is considered as not dangerous for health If it does not contain fecal germs. It is obvious that a water will be all the more dangerous that it does not contain true pathogenic germs.
Jusqu'à présent, pour déclarer une eau potable, le bactériologiste ne recherche pas les germes pathogènes, mais met en évidence les germes de contamination fécale. Until now, to declare a drinking water, the bacteriologist does not search for pathogenic germs, but highlights the germs of faecal contamination.
Selon la technique utilisée, il recherche les germes soit dans 1 ml, technique par dilution, soit dans 200 ml ou plus, par filtration sur membrane.Depending on the technique used, it looks for germs either in 1 ml, dilution technique, or in 200 ml or more, by membrane filtration.
La chance de rencontrer des germes pathogènes dans 1 ml est quasiment nulle. Elle augmente avec la quantité de liquide, mais est limitée par le fait que de nombreux autres germes seront présents sur la membrane, ne permettant plus un isolement des germes pathogènes ou des germes de contamination fécale. A titre de références bibliographiques dans ce domaine on peut citer:
Pratique du Laboratoire, Masson et Cie, 399-422.The chance of encountering pathogenic germs in 1 ml is almost nil. It increases with the amount of liquid, but is limited by the fact that many other germs will be present on the membrane, no longer allowing isolation of pathogenic germs or fecal contamination germs. As bibliographic references in this field we can mention:
Laboratory Practice, Masson et Cie, 399-422.
Report of the European Regional Study Group on the
developpment of international Standard of drinking
water quality and approved methods for the examina
tion of water OMS Genève, 1956.Report of the European Regional Study Group on the
development of international Standard of drinking
water quality and approved methods for the examina
tion of water WHO Geneva, 1956.
On a maintenant mis au point une technique simple permettant de rechercher directement, dans les fluides, par exemple les liquides biologiques, les principaux germes responsables de maladies d'origine fécale, tels que notamment Salmonella, Escherichia coli K 88 et E. Coli K 99 entéropathogènes, Vibrio cholerae biotype el Tor, sérotype
Ogawa, souche Mz et germes similaires.It has now been developed a simple technique to directly search, in fluids, for example biological fluids, the main germs responsible for fecal diseases, such as including Salmonella, Escherichia coli K 88 and E. Coli K 99 enteropathogens, Vibrio cholerae biotype el Tor, serotype
Ogawa, Mz strain and similar germs.
Le procédé de détection de germes pathogènes dans les fluides, selon l'invention, consiste:
1) à filtrer le fluide à analyser sur un immunoadsorbant spécifique du germe recherché;
2) à caractériser les germes retenus sur 1'immunoadsorbant.The method for detecting pathogenic germs in fluids, according to the invention, consists of:
1) filtering the fluid to be analyzed on an immunoadsorbent specific for the desired seed;
2) to characterize the seeds retained on the immunoadsorbent.
Dans la présente description, on désigne par "fluide" tout fluide susceptible de contenir des germes pathogènes, tel que par exemple l'eau ou les liquides biologiques provenant d'êtres vivants, par exemple l'urine. In the present description, the term "fluid" means any fluid likely to contain pathogens, such as for example water or body fluids from living beings, for example urine.
La première étape dru procédé de l'invention consiste en une filtration, sur un immunoadsorbant, du fluide à analyser. L'immunoadsorbant mis en oeuvre doit être spécifique du germe recherché. The first step in the process of the invention consists in a filtration, on an immunoadsorbent, of the fluid to be analyzed. The immunoadsorbent used must be specific for the desired seed.
L'immunoadsorbant mis en oeuvre selon l'invention est un support insoluble susceptible de constituer un élément de filtration pour un fluide et sur lequel sont fixés, par liaison chimique, des anticorps spécifiques du germe pathogène dont on souhaite déterminer la présence dans un fluide. The immunoadsorbent used according to the invention is an insoluble support capable of constituting a filtering element for a fluid and on which are fixed, by chemical bonding, specific antibodies of the pathogen which it is desired to determine the presence in a fluid.
Le procédé selon l'invention convient pour la détection de tout germe pathogène qui secrète des facteurs d'attachement spécifique de groupes antigéniques, lesquels provoquent, par immunisation d'un animai, tel que le lapin par exemple, des anticorps spécifiques. The method according to the invention is suitable for the detection of any pathogenic germ that secretes specific attachment factors of antigenic groups, which cause, by immunization of an animal, such as the rabbit for example, specific antibodies.
Le support de l'immunoadsorbant est en général un polymère insoluble, le plus souvent sous la forme d'un gel. A titre d'exemple de tels polymères on citera les polymères d'acrylamide, d'agarose, d'acrylamide-agarose
Le polymère connu sous a dénomination commerciale ULTROCEL
ACA 34 (Industrie Biologique Française), qui est un gel de polyacrylamide-agarose, est particulièrement approprié aux fins de l'invention. I1 s'agit d'un gel dont les caractéristiques sont les suivantes:
3% acrylamide, 4% agarose et 60 à 140 vm de
diamètre de particule.The carrier of the immunoadsorbent is generally an insoluble polymer, most often in the form of a gel. By way of example of such polymers, mention may be made of acrylamide, agarose and acrylamide-agarose polymers.
The polymer known under the trade name ULTROCEL
ACA 34 (French Biological Industry), which is a polyacrylamide-agarose gel, is particularly suitable for the purposes of the invention. It is a gel whose characteristics are as follows:
3% acrylamide, 4% agarose and 60 to 140 vm
particle diameter.
Le support insoluble couplé avec des anticorps spécifiques du germe recherché constitue l'immunoadsorbant mis en oeuvre selon l'invention. Le couplage des anticorps spécifiques sur le support soluble est effectué selon des techniques classiques de couplage, mettant en oeuvre des agents de couplage connus, tels que le glutaraldéhyde, la benzoquinone et autres agents similaires. Pour plus de détail sur les techniques de couplage pour la réalisation d'immunoadsorbants on pourra se référer à l'article ci-après: polyacrylamide beads for the preparation of effective immunoadsorbants - J. Immun. Meth., 1971, 11, 29-33. The insoluble support coupled with antibodies specific for the desired seed constitutes the immunoadsorbent used according to the invention. The coupling of the specific antibodies on the soluble support is carried out according to conventional coupling techniques, using known coupling agents, such as glutaraldehyde, benzoquinone and other similar agents. For more details on the coupling techniques for producing immunoadsorbents, reference may be made to the following article: polyacrylamide beads for the preparation of effective immunoadsorbents - J. Immun. Meth., 1971, 11, 29-33.
On indiquera ci-après le procédé de couplage au glutaraldéhyde. Ce procédé consiste à activer le support insoluble avec le glutaraldéhyde et à mettre ensuite en contact le gel ainsi activé avec une solution des anticorps spécifiques à fixer. The method of coupling with glutaraldehyde will be indicated below. This process consists in activating the insoluble support with glutaraldehyde and then bringing the gel thus activated into contact with a solution of the specific antibodies to be fixed.
Les anticorps spécifiques utilisés pour la fabrication des immunoadsorbants mis en oeuvre dans le procédé de l'invention sont obtenus par immunisation d'animaux, par exemple de lapin, avec un germe pathogène ou une fraction de celui-ci. L'isolement de l'anticorps spécifique à partir du sérum ainsi obtenu se fait par des méthodes classiques bien connues de l'homme de l'art. The specific antibodies used for the production of immunoadsorbents used in the process of the invention are obtained by immunizing animals, for example rabbit, with a pathogenic germ or a fraction thereof. The isolation of the specific antibody from the serum thus obtained is by conventional methods well known to those skilled in the art.
Après filtration du fluide à tester sur l'immunoadsorbant contenant l'anticorps spécifique du germe recherché, on procède à la caractérisation, ce qui constitue la seconde étape du procédé de l'invention, des facteurs antigéniques retenus par 1'immunoadsorbant, lesquels sont spécifiques du germe recherché. Cette caractérisation est effectuée par des moyens classiques, par exemple, par dilution du gel et, en milieu liquide sélectif, culture sur gélose, caractérisation biochimique et sérologique du germe (agglutination). After filtration of the fluid to be tested on the immunoadsorbent containing the antibody specific for the desired seed, the characterization is carried out, which constitutes the second step of the process of the invention, antigenic factors retained by the immunoadsorbent, which are specific. of the desired germ. This characterization is carried out by conventional means, for example, by dilution of the gel and, in a selective liquid medium, agar culture, biochemical and serological characterization of the germ (agglutination).
Le procédé convient en particulier pour la mise
en évidence dans l'eau de bactéries, telles qu'Escherichia
coli pathogène, Salmonella et Vibrio Cholerae, et de parti
cules virales, par exemple celles du virus de la poliomyé
lite ou du virus de l1encéphalo-myocardite. I1 permet donc
de déterminer aisément la potabilité d'une eau.The method is particularly suitable for
highlighted in the water of bacteria, such as Escherichia
Pathogenic E. coli, Salmonella and Vibrio Cholerae, and party
viruses, for example those of the poliomyelitis virus
lite or encephalo-myocarditis virus. I1 therefore allows
to easily determine the potability of a water.
On peut également déterminer, grâce au procédé
de l'inventionr d'une façon très rapide, si un sujet vivant
est porteur de germes pathogènes en filtrant un liquide
biologique de celui-ci sur un immunoadsorbant spécifique
du germe susceptible d'être présent chez ce sujet.We can also determine, thanks to the process
of invention in a very fast way, if a living subject
is a carrier of pathogenic germs by filtering a liquid
biological of it on a specific immunoadsorbent
germ likely to be present in this subject.
Le procédé de l'invention présente les avanta
ges ci-après par rapport aux techniques classiques: il
permet une recherche directe sélective du germe entérique
pathogène et non plus des germes témoins de décontamination
fécale.The process of the invention has the advantages
here below in relation to classical techniques:
allows a selective direct search of the enteric germ
pathogen and no longer germs control decontamination
fecal.
L'invention va être maintenant décrite par les
exemples non limitatifs ci-après.The invention will now be described by the
non-limiting examples below.
EXEMPLE 1
Analyse d'eauxcontaminées par des germes de
Vibrio Cholerae,Salmonella et Escherichia coli
Les expériences ci-après ont été réalisées avec des eaux contaminées artificiellement par des germes pathogènes ou avec des eaux brutes. Les souches bactériennes utilisées pour la contamination artificielle de l'eau et l'obtention des immunoadsorbants sont indiquées ci-après:
A. Souches bactériennes
Les souches utilisées provenaient de la collection de 1'Unité du Choléra / Institut pasteur, Paris . 7
Elles étaient toutes fraîchement isolées du sang du coeur de souris, après injection intrapéritonéale de la souche virulente. L'isolement et le repiquage pour chacun des germes ont été effectués sur gélose ordinaire, à l'étuve à 370C pendant 12 heures. EXAMPLE 1
Analysis of watercontaminated by germs of
Vibrio Cholerae, Salmonella and Escherichia coli
The following experiments were carried out with water contaminated artificially by pathogenic germs or with raw water. The bacterial strains used for artificial contamination of water and obtaining immunoadsorbents are indicated below:
A. Bacterial strains
The strains used came from the collection of Cholera Unit / Pasteur Institute, Paris. 7
They were all freshly isolated from the blood of mouse hearts after intraperitoneal injection of the virulent strain. The isolation and subculture for each of the seeds were carried out on ordinary agar, in an oven at 370 ° C. for 12 hours.
Les souches ci-après ont été utilisées:
Vibrio cholerae el tor souches Marquez Ogawa
Vibrio cholerae el tor souches 9292 Inaba
Salmonella typhimurium souche C5
Escherichia coli K88 Oudjine
Escherichia coli K99 V5.The following strains were used:
Vibrio cholerae el tor strains Ogawa
Vibrio cholerae el tor strains 9292 Inaba
Salmonella typhimurium strain C5
Escherichia coli K88 Oudjine
Escherichia coli K99 V5.
B. Préparation des anticorps spécifiques pour la fabrica
de 1 'immunoadsorbant
Les anticorps ont été obtenus à partir de sérums de lapins immunisés avec l'une des souches ci-dessus.B. Preparation of specific antibodies for the manufacture
of the immunoadsorbent
Antibodies were obtained from rabbit sera immunized with one of the above strains.
a. le sérum anti-vibrio cholerae a été obtenu par immunisation de lapin avec la fraction Ch 1+2 (........ at. anti-vibrio cholerae serum was obtained by rabbit immunization with the Ch 1 + 2 fraction (........
provenant de la souche Marquez el tor Ogawa. L'anti-sérum obtenu avait un pouvoir vibriocide de 1/40180 et agglutinant de 1/5120. En diffusion en gélose, il n'apparaissait qu'une bande de précipité antigène-anticorps, les ultra-sonats complets de toutes les souches de V. cholérique agglutinables par le sérum polyvalent anticholérique el tor ou classique.from the strain Marquez el tor Ogawa. The anti-serum obtained had a vibriocidal power of 1/40180 and agglutinating 1/5120. In agar diffusion, only an antigen-antibody precipitate band appeared, the complete ultrasound of all strains of V. cholera agglutinable by the eluent or conventional anti-cholera serum.
L'antisérum n'agglutinait pas les vibrions Nag et halophiles. The antiserum did not agglutinate the Nag and halophilic vibrios.
b. les antisérums anti-Salmonella typhimurium
C5, anti-Escherichia coli K88 et K99 ont été obtenus en injectant au lapin les fractions Tm 1+2 Ec 1+2 K88 Ec 1+2
K99. La spécificité de ces antisérums a été testée par agglutination immunofluorescence et diffusion en gélose.b. anti-Salmonella typhimurium antisera
C5, anti-Escherichia coli K88 and K99 were obtained by injecting the rabbit fractions Tm 1 + 2 Ec 1 + 2 K88 Ec 1 + 2
K99. The specificity of these antisera was tested by immunofluorescence agglutination and agar diffusion.
C. Préparation des immunoadsorbants
Les anticorps ont été isolés des sérums par précipitation au sulfate d'ammonium (408). Les anticorps ont été ensuite couplés à des gels de polyacrylamideagarose ACA 34 activés au glutaraldéhyde. La méthode de couplage était la suivante: "1' Ultrogel ACA 34" (Industrie
Biologique Française) a été lavé avec de l'eau distillée par décantations successives, jusqu'à ce que le surnageant soit complètement clair. Le gel a été ensuite incubé une nuit dans un tampon phosphate 0,1 M pH 7,4 contenant 5% de glutaraldéfiyde (Merck, Darmstadt, RFA), puis lavé avec de l'eau distillée par décantation ou centrifugations successives jusqu'à ce qu'une odeur de glutaraldéhyde soit décelable et que la densité optique à 280 nm du surnageant soit 0.Le gel activé a été mis en contact avec une solution de 5 mg/ml d'anticorps dans du PBS (1 volume de gel pour 1 volume de la solution d'anticorps) et laissé sous agitation rotative pendant une nuit à température du laboratoire. Le lendemain, le gel a été lavé à 40C par centrifugations successives dans du PBS jusqu'à ce que la densité optique à 280 nm soit 0. I1 a ensuite été remis en suspension (volume à volume) dans une solution de lysine 0,1 M pH 7,4 et laissé sous agitation rotative pendant 24 heures à température du laboratoire ou 24 heures à 40C.C. Preparation of immunoadsorbents
The antibodies were isolated from the sera by ammonium sulfate precipitation (408). Antibodies were then coupled to glutaraldehyde activated ACA 34 polyacrylamideagarose gels. The coupling method was as follows: "1 'Ultrogel ACA 34" (Industry
Biologique Française) was washed with distilled water by successive decantations, until the supernatant was completely clear. The gel was then incubated overnight in 0.1 M phosphate buffer pH 7.4 containing 5% glutaraldehyde (Merck, Darmstadt, FRG), then washed with distilled water by decantation or successive centrifugations until that a glutaraldehyde odor is detectable and that the optical density at 280 nm of the supernatant is 0.The activated gel was brought into contact with a solution of 5 mg / ml of antibody in PBS (1 volume of gel for 1 volume of the antibody solution) and allowed to stir overnight during laboratory temperature. The next day, the gel was washed at 40C by successive centrifugations in PBS until the optical density at 280 nm was 0. It was then resuspended (volume to volume) in 0.1 lysine solution. M pH 7.4 and allowed to stir for 24 hours at laboratory temperature or 24 hours at 40C.
Après lavage dans du tampon phosphate (PBS), le gel a été traité avec un tampon HC1 - glycine pH 2,8, pendant 15 mn à 40C, puis neutralisé avec une solution de K2M PO4 0,2 M et à nouveau lavé. A ce stade, l'immunoadsorbant a pu être conservé dans du PBS contenant 0,02% d'azide de sodium.After washing in phosphate buffer (PBS), the gel was treated with pH 2.8 HC1-glycine buffer for 15 minutes at 40C, then neutralized with 0.2M K2M PO4 solution and washed again. At this stage, the immunoadsorbent could be stored in PBS containing 0.02% sodium azide.
Les différents immunoadsorbants ont été introduits dans des colonnes en plastique de 0,8 x 3 cm. Ces colonnes ont été, avant l'expérience, stérilisées en passant sur les colonnes de l'eau physiologique contenant des radicaux libres (mélange acide ascorbique-sulfate de cuivre). The various immunoadsorbents were introduced into plastic columns of 0.8 x 3 cm. These columns were, before the experiment, sterilized by passing on the columns of physiological water containing free radicals (ascorbic acid-copper sulphate mixture).
D. Analyse et résultats
Les expériences ont été réalisées en filtrant sur ces colonnes 500 ml d'eaux contaminées, soit des eaux brutes de l'Oise, soit de l'eau physiologique (tamponée à pH 7,2 par un tampon phosphate), artificiellement contaminée par les mêmes germes. La vitesse de filtration était d'environ 100 ml/heure. Après filtration, les colonnes ont été lavées par passage de 100 ml d'eau physiologique. Dans une première série d'expériences, on a filtre des eaux "non contaminées" par environ 103V. cholerae, Salmonella typhimurium, E. coli K 88 ou E. coli K99, respectivement sur colonne Ch 1+2 (gels couplés aux anticorps anti-Ch 1+2), colonne Tm 1+2, colonne Ec 1+2 K88 et colonne Ec 1+2 K99. Dans une deuxième série d'expériences, on a filtré sur chaque colonne de l'eau contenant un mélange des 4 germes (103 environ de chaque germe).D. Analysis and results
The experiments were carried out by filtering on these columns 500 ml of contaminated water, either raw water from the Oise, or physiological water (buffered to pH 7.2 by a phosphate buffer), artificially contaminated by the same germs. The filtration rate was about 100 ml / hour. After filtration, the columns were washed by passing 100 ml of physiological saline. In a first series of experiments, "uncontaminated" water was filtered by about 103V. cholerae, Salmonella typhimurium, E. coli K 88 or E. coli K99, respectively on column Ch 1 + 2 (gels coupled to anti-Ch 1 + 2 antibodies), column Tm 1 + 2, column Ec 1 + 2 K88 and column Ec 1 + 2 K99. In a second series of experiments, water containing a mixture of the 4 seeds (about 103 of each seed) was filtered on each column.
Les germes. cholerae retenus sur les colonnes ont été caractérisés en diluant 1 ml de gel dans 9 ml d'eau peptonée hypersalée. Après agitation soigneuse au Vortex, ce mélange a été dilué en série et chaque dilution étalée sur botes de Petri. Pour caractériser les germes S. Germs. cholerae retained on the columns were characterized by diluting 1 ml of gel in 9 ml of hypersaline peptone water. After thorough Vortex stirring, this mixture was diluted in series and each dilution spread on Petri dishes. To characterize S. germs
typhimurium, E. coli K88 et K99, 1 ml de gel a été dilué dans 9 ml d'eau physiologique tamponnée, agité soigneusement au Vortex et dilué en série comme précédemment, avant étalement sur la gélose. Les résultats sont résumés dans le tableau I ci-après. Les différents germes n'ont eté retenus que sur leur propre gel. L'analyse quantitative a été difficile, compte tenu de la grande vitesse de division-des germes. Néanmoins, l'analyse et la caractérisation des germes contenus dans l'eau après filtration sur les colonnes a montré que la plupart des 103 germes étaient retenus et retrouvés après passage sur leur propre gel, c'est-à-dire le gel spécifique dudit germe.typhimurium, E. coli K88 and K99, 1 ml of gel was diluted in 9 ml of buffered saline, vortexed well and serially diluted as before, before spreading on the agar plate. The results are summarized in Table I below. The different germs were only retained on their own gel. Quantitative analysis was difficult, given the high speed of division-germs. Nevertheless, the analysis and characterization of the germs contained in the water after filtration on the columns showed that most of the 103 seeds were retained and found after passage on their own gel, ie the specific gel of said germ.
TABLEAU I
<tb> <SEP> Germes <SEP> retrouvés <SEP> Colonnes
<tb> <SEP> Ch <SEP> 1+2 <SEP> Tm <SEP> 1+2 <SEP> Eu <SEP> 1+2 <SEP> Ec <SEP> 1+2
<tb> V. <SEP> cholerae <SEP> +
<tb> S. <SEP> typhimurium <SEP> - <SEP> <SEP> + <SEP> i <SEP> <SEP> - <SEP>
<tb> E. <SEP> coli <SEP> K88 <SEP> - <SEP> <SEP> + <SEP> * <SEP>
<tb> E. <SEP> coli <SEP> K99 <SEP> ~ <SEP> ~ <SEP> ~ <SEP> + <SEP>
<tb>
EXEMPLE 2
Analyse d'eaux contaminées par des particules virales du virus de la poliomyélite (type II) et du virus de l'encéphalomyocardite (EMC)
Cet exemple montre que le procédé de l'invention est applicable aux particules virales.<tb><SEP> Germs <SEP> found <SEP> Columns
<tb><SEP> Ch <SEP> 1 + 2 <SEP> Tm <SEP> 1 + 2 <SEP> Eu <SEP> 1 + 2 <SEP> Ec <SEP> 1 + 2
<tb> V. <SEP> cholerae <SEP> +
<tb> S. <SEP> typhimurium <SEP> - <SEP><SEP> + <SEP> i <SEP><SEP> - <SEP>
<tb> E. <SEP> coli <SEP> K88 <SEP> - <SEP><SEP> + <SEP> * <SEP>
<tb> E. <SEP> coli <SEP> K99 <SEP> ~ <SEP> ~ <SEP> ~ <SEP> + <SEP>
<Tb>
EXAMPLE 2
Analysis of waters contaminated with viral particles of poliomyelitis virus (type II) and encephalomyocarditis virus (EMC)
This example shows that the process of the invention is applicable to viral particles.
A. Préparation des immunoadsorbants
On a opéré sensiblement selon le mode opératoire défini à l'exemple 1 en utilisant des anticorps anti-Polio II isolés d'un lapin hyperimmunisé avec le virus Polio II. A. Preparation of immunoadsorbents
It was carried out substantially according to the procedure defined in Example 1 using anti-Polio II antibodies isolated from a rabbit hyperimmunized with the Polio II virus.
L'immunisation des lapins a été réalisée par injections intraveineuse et intrapéritonéale qui permettent d'obtenir un taux élevé d'anticorps.Immunization of the rabbits was performed by intravenous and intraperitoneal injections which allowed to obtain a high level of antibodies.
Le titre de l'antisérum en séro-neutralisation était de 1/12 800 contre 103 DL 50 de virus. On a ainsi obtenu un immunoadsorbant anti-Polio II. The serum neutralization antiserum titre was 1/12 800 against 103 LD 50 of virus. An anti-Polio II immunoadsorbent was thus obtained.
De même on a préparé un immunoadsorbant anti-S4C en utilisant sensiblement le même mode opératoire que cidessus et des anticorps anti-EMC isolés d'une ascite de souris immunisée contre le virus EMC par injection intrapéritonéale chez la souris. Similarly, an anti-S4C immunoadsorbent was prepared using substantially the same procedure as above and anti-EMC antibodies isolated from mouse ascites immunized against EMC virus by intraperitoneal injection in mice.
Le titre de l'ascite était de 1/25 600 contre 103 DL 50 de virus. The title of ascites was 1/25 600 against 103 LD 50 of virus.
B. Analyse
De 20 à 100 ml d'eau physiologique contenant des particules virales ont été filtrés sur les colonnes d'immunoadsorbants anti-Polio II et anti-EMC.B. Analysis
20 to 100 ml of physiological saline containing viral particles were filtered on the anti-Polio II and anti-EMC immunoadsorbent columns.
La spécificité des colonnes a été testée en passant sur les colonnes anti-Polio II de l'eau contenant un mélange Polio I et Polio II et sur les colonnes anti-EMC un mélange EMC et Poxvirus. The specificity of the columns was tested by passing on the anti-Polio II columns of the water containing a Polio I and Polio II mixture and on the anti-EMC columns an EMC and Poxvirus mixture.
Comme les virus Polio II et EMC résistent bien à une exposition courte à pH acides, la récupération des particules virales accrochées sur les colonnes a été réalisée par élution avec un tampon HC1 pH 2,2. Since the Polio II and EMC viruses are resistant to short exposure to acidic pH, the recovery of the viral particles hung on the columns was carried out by elution with pH 2.2 HCl buffer.
Les résultats sont résumes dans le tableau II. TABLEAU II
Poliovirus <SEP> II <SEP> $Poliovirus <SEP> I
<tb> Colonnes <SEP> Virus <SEP> Titre <SEP> % <SEP> Titre <SEP> %
<tb> Anti- <SEP> ajouté <SEP> 5,9.10+6 <SEP> 100 <SEP> 5,5.106 <SEP> 100
<tb> Polio <SEP> II <SEP> Après <SEP> filtration <SEP> 103 <SEP> < <SEP> 1 <SEP> 5,4.106 <SEP> # <SEP> 100
<tb> Elution <SEP> de <SEP> la <SEP> 5,5.106 <SEP> 92 <SEP> < <SEP> 10 <SEP> < <SEP> 10
<tb> colonne
<tb> EMC <SEP> Pox <SEP> virus
<tb> nombre <SEP> de <SEP> particules <SEP> virales <SEP> % <SEP> nombre <SEP> de <SEP> particules <SEP> virales <SEP> %
<tb> Ajouté <SEP> 1,2.106 <SEP> 100 <SEP> 106 <SEP> 100
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|---|---|---|---|
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1986002160A1 (en) * | 1984-09-26 | 1986-04-10 | Jan Peter Andersson | Device and method for trapping and analyzing particles |
| WO1987007726A1 (en) * | 1986-06-10 | 1987-12-17 | Jan Peter Andersson | Detection of organic particles, particularly viruses, with enrichment technique |
| WO1988000345A1 (en) * | 1985-03-25 | 1988-01-14 | Fassl Ab | Method and apparatus for qualitative and/or quantitative analysis of antigens, antibodies, mircroorganisms or other cells |
| EP0330688A1 (en) * | 1987-07-28 | 1989-09-06 | Biotechnology Australia Pty. Ltd. | Detection methods |
| US6004766A (en) * | 1987-07-28 | 1999-12-21 | Biotechnology Australia Pty Limited | Method for detecting low levels of microorganisms |
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| FR1604982A (en) * | 1968-03-29 | 1972-06-26 | Active protein product - with polymeric carrier | |
| FR2382461A1 (en) * | 1977-03-01 | 1978-09-29 | Abbott Lab | RUBELLA VIRUS ANTIGEN, PURIFIES, ITS MANUFACTURING PROCESS AND ITS APPLICATION TO DETECTION OF RUBELLA VIRUS ANTIBODIES |
| FR2403386A1 (en) * | 1977-09-19 | 1979-04-13 | Hoffmann La Roche | PROCESS FOR PREPARING AN IMMUNOLOGICAL REAGENT CONTAINING A LATEX POLYMER |
-
1981
- 1981-10-08 FR FR8118985A patent/FR2514367A1/en active Granted
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
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| US6004766A (en) * | 1987-07-28 | 1999-12-21 | Biotechnology Australia Pty Limited | Method for detecting low levels of microorganisms |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2514367B1 (en) | 1984-07-20 |
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