FR2485927A1

FR2485927A1 - Cosmetic compsns. contg. phosphodiesterase enzyme - for inhibiting hair growth

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Publication number: FR2485927A1
Application number: FR8015041A
Authority: FR
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1980-07-07
Filing date: 1980-07-07
Publication date: 1982-01-08

Abstract

New cosmetic compsns. comprises (a) an enzyme prepn. (I) capable of hydrolysing cyclic adenosine 3',5'-monophosphate, and (b) conventional topical excipients. (I) can be obtd. from fresh animal tissue (esp. brain tissue) as described in J.Biol.Chem., 237, 1244(1962). The freeze- dried prod. pref. has an activity of 0.1-0.4 micro/mg. The compsns. can be formulated as (i) solns. contg. 1-20(pref. 2-5)g/l of (I), pref. in an aq. buffer with a pH of 7-8, or (ii) creams or gels contg. 0.1-2% (I). The compsns. are useful for inhibiting growth of unwanted hair. They are more effective than trypsin-contg. compsns. and do not produce toxic or allergic side-effects.

Description

La présente invention a pour objet une composition cosmétique à base d'un complexe enzymatique à action hydrolysante sur 1'AIIIPc, et son utilisation notamment dans le contrôle de la pousse des poils.The present invention relates to a cosmetic composition based on an enzymatic complex with hydrolysing action on AIIIPc, and its use in particular in the control of hair growth.

I1 a été démontré ces dernières années le rôle régulateur de l'adénosine 3',5'-monophosphate cyclique (AMPc) dans le métabolisme cellulaire. Ce cyclophosphate se trouve dans oresque toutes les cellules animales. L'AMPc est formé dans la cellule à partir de I'adénosine triphosphate par l'adenyl-cyclase sous l'influence hormonale. L'AMPc est ensuite hydrolysé par un autre groupe d'enzymes de type phosphodiestérasique. I1 a été démontré que l'activité cellulaire dépend de la concentration de l'AMPc (1,Cyclic AMpll par R.W.Butcher et E.W.Sutherland,
Academic Press, New York, 1971).On a nu prouver que l'augmentation de la concentration de l'AMPc entraine l'augmentation des fonctions sépcifiques de la cellule tandis que la diminution de cette concentration freine ces mêmes fonctions.In recent years, the regulatory role of cyclic adenosine 3 ', 5'-monophosphate (cAMP) in cell metabolism has been demonstrated. This cyclophosphate is found in all animal cells. CAMP is formed in the cell from adenosine triphosphate by adenyl cyclase under hormonal influence. The cAMP is then hydrolysed by another group of phosphodiesterase-type enzymes. Cellular activity has been shown to be dependent on the concentration of cAMP (1, Cyclic AMpl1 by RWButcher and EWSutherland,
Academic Press, New York, 1971). It has not been proved that increasing the concentration of cAMP results in an increase in the specific functions of the cell while the decrease in this concentration hinders these same functions.

Plus récemment on a établi la présence dans la peau humaine et animale de l'adényl cyclase et de la phosphodiestérase (PDE) (Mier and Urselman, Br. J. Derm., 359,1970).More recently, the presence in human and animal skin of adenyl cyclase and phosphodiesterase (PDE) has been established (Mier and Urselman, Br. J. Derm., 359, 1970).

L'activité phosphodiestérasique a été trouvée dans presque tous les tissus animaux étudiés et dans certains tissus végétaux. Les essais de purification de cet enzyme se sont heurtés à l'observation de formes multiples selon le tissu ou la méthode utilisée ; d'autre part, lors de la purification,-le produit final perdait sa stabilité. Jusqu'à ce jour, il n'existe pas de preuve scientifique montrant si l'AMPc est impliqué dans le mécanisme de la pousse du poil.Phosphodiesterase activity was found in almost all animal tissues studied and in some plant tissues. The purification tests of this enzyme were met with the observation of multiple forms depending on the tissue or the method used; on the other hand, during the purification, the final product lost its stability. To date, there is no scientific evidence to show if cAMP is involved in the mechanism of hair growth.

On a maintenant trouvé qu'un complexe anzymatique ayant une action hydrolysante sur l'AMPc, obtenu par extraction du cerveau, lors de son application locale sur la peau, freine substantiellement la repousse du poil et peut être utilisé en cosmétique.It has now been found that an anzymatic complex having a hydrolysing action on cAMP, obtained by extraction from the brain during its local application to the skin, substantially curbs regrowth of the hair and can be used in cosmetics.

La présente invention a donc pour objet l'application en cosmétique d'un complexe enzymatique à action hydrolysante sur l'MPc, et en particulier son utilisation dans le contrôle de la pousse des poils.The present invention therefore relates to the application in cosmetics of an enzymatic complex with hydrolysing action on MPc, and in particular its use in the control of hair growth.

Ce complexe enzymatique, doué d'activité phosphodiestérasique, existe en trés faible quantité dans la plupart des tissus animaux et végétaux, la concentration la plus élevée se trouvant dans le cerveau des mammiferes.This enzymatic complex, endowed with phosphodiesterase activity, exists in very small quantities in most animal and plant tissues, the highest concentration being in the mammalian brain.

Son extraction neut être effectuée de manière connue, par exemple à partir de tissus d'animaux selon la méthode de R.W.Its extraction can be carried out in a known manner, for example from animal tissues according to the method of R.W.

Butcher et E.WSutherland (J.Biol.Chem. vol 237, nb4, avril 1962, P. 1244-50). Cette méthode consiste à broyer à basse température dans une solution tampon un tissu animal fraîchement prélevé, filtrer, centrifuger , filtrer à nouveau, et précipiter le filtrat par une solution de sulfate d'ammonium saturée. Les opérations de filtration et de précipitation peuvent être répétées et le précipité peut être soumis à d'autres purifications habituelles des protéines, puis lyophilisé.Butcher and E.WSutherland (J. Biol.Chem, Vol 237, No. 4, April 1962, P. 1244-50). This method involves grinding a freshly harvested animal tissue in a buffer solution at low temperature, filtering, centrifuging, filtering again, and precipitating the filtrate with saturated ammonium sulfate solution. The filtration and precipitation operations can be repeated and the precipitate can be subjected to other usual purifications of the proteins and then freeze-dried.

Le meilleur rendement est obtenu à partir du cerveau de boeuf ou de mouton. Le complexe enzymatique peut aussi être isolé des végétaux, notamment des algues, mais avec un faible rendement (Razzel W.E., Biochem. Biophys. Res. Comm. 22, 243, 1966 et Harvey C., Coll Biochem. 6, 3689, 1967).The best yield is obtained from the brain of beef or mutton. The enzymatic complex can also be isolated from plants, including algae, but with low yield (Razzel WE, Biochem Biophys Res., 22, 243, 1966 and Harvey C., Coll Biochem 6, 3689, 1967). .

Le complexe enzymatique utilisable selon l'invention, est caractérisable par son activité phosphodiestérasique hydrolysante sur l'AMPc qui peut être dosée par la méthode de Cheung (Biochim.The enzymatic complex that can be used according to the invention can be characterized by its cAMP-hydrolysing phosphodiesterase activity which can be assayed by the Cheung method (Biochim.

Biophys. Acta, 191, 1969, p.303). L'unité enzymatique est définie comme la quantité provoquant la destruction d'un micromole d'AMPc par minute à 300. L'activité du complexe enzymatique obtenu sous forme lyophilisée est de l'ordre de 0,1 à 0,4 unités par mg.Biophys. Acta, 191, 1969, p.303). The enzymatic unit is defined as the amount causing the destruction of one micromole of cAMP per minute at 300. The activity of the enzymatic complex obtained in freeze-dried form is of the order of 0.1 to 0.4 units per mg. .

L'exemple suivant illustre une méthode d'obtention du complexe enzymatique à action phosphodiestérasique hydrolysante sur 1'AMPc. The following example illustrates a method for obtaining the enzymatic complex with phosphodiesterase action hydrolysing on the cAMP.

Exemple de préparation 150 g de tissu du cerveau de mouton fraichement prélevé après nettoyage est broyé à basse température (4 C) avec un broyeur du type mixer dans 300 ml d'une solution tampon a base de trométhamine ("Tris") de pur7,5 (Tris, HC1 pH 7,5 20mM, Mg C12 1mM,2-mercapto-éthanol 3mM, EGTA 0,1mM).(EGTA = éthylèneglycol bis-(2-aminoéthylester) NN'tétraacétic acid).PREPARATION EXAMPLE 150 g of sheep brain tissue freshly collected after cleaning is milled at low temperature (4 ° C.) with a mixer-type mill in 300 ml of a tromethamine ("Tris") pur7 buffer solution. (Tris, HCI pH 7.5 20mM, 1mM Mg C12, 3mM 2-mercaptoethanol, 0.1mM EGTA) (EGTA = ethylene glycol bis- (2-aminoethyl ester) N, nonetraacetic acid).

Après filtration, le filtrat est centrifugé deux heures à 20.000 tours et le surnageant est de nouveau filtré sur laine de verre. Le filtrat est ensuite précipité lentement dans une solution de sulfate d'ammonium saturé (1:1) à pH 7,5.After filtration, the filtrate is centrifuged for two hours at 20,000 rpm and the supernatant is filtered again on glass wool. The filtrate is then slowly precipitated in a solution of saturated ammonium sulfate (1: 1) at pH 7.5.

Après agitation pendant trente minutes, il est de nouveau soumis à la centrifugation pendant trente minutes à 20.000 tours minute. Le précipité est ensuite redissous dans le tampon trométhamine (Tris) et dialysé deux fois (huit heures) contre deux litres de tampon. Après congélation, le dyalisat est soumis à la lyophilisation. Le lyophilisat ainsi obtenu reste stable pendant plusieurs mois à -200C.After stirring for thirty minutes, it is again subjected to centrifugation for thirty minutes at 20,000 rpm. The precipitate is then redissolved in tromethamine buffer (Tris) and dialyzed twice (eight hours) against two liters of buffer. After freezing, the dyalisat is subjected to lyophilization. The lyophilisate thus obtained remains stable for several months at -200C.

Le dosage de l'activité phosphodiestérasique de ce lyophilisat sur l'AMPc par la méthode de Cheung a montré que cette activité était de 0,3 unité par mg.Assaying the phosphodiesterase activity of this lyophilisate on cAMP by Cheung's method showed that this activity was 0.3 units per mg.

On obtient 150 mg de produit lyophilisé.150 mg of freeze-dried product is obtained.

Le complexe enzymatique hydrolysant l'AMPc (ci-après CEH) a été soumis à une étude expérimentale sur l'animal puis sur la femme.The cAMP-hydrolysing enzyme complex (hereinafter CEH) was subjected to an experimental study on the animal then on the woman.

Expérimentation sur les rats et les lapins.Experimentation on rats and rabbits.

Plusieurs séries d'expériences ont été entreprises sur 36 rats mâles et 56 femelles ainsi que sur 8 lapins.Several series of experiments were carried out on 36 male and 56 female rats as well as on 8 rabbits.

La technique a été la suivante
On effectue une épilation à la cire symétriquement sur les deux côtés de l'animal, un côté servant de témoin et l'autre à tester les différents produits utilisés qui pénétrent par ionisation grâce à une électrode à rouleau en éponge branchée sur un appareil galvanique.The technique was as follows
Waxing is carried out symmetrically on both sides of the animal, one side serving as a control and the other testing the various products used which penetrate by ionization through a sponge roll electrode connected to a galvanic device.

Cette éponge est humectée avec le produit à tester.This sponge is moistened with the product to be tested.

Ampérage : 1 milliampère.Amperage: 1 milliamperes.

Temps de ionisation : 1 minute.Ionization time: 1 minute.

Les produits appliqués ont été successivement 1. Complexe enzymatique hydrolysant (CEH) dans une solution
tampon à pH 7,2.The applied products were successively 1. Hydrolysing enzyme complex (HEC) in a solution
pH 7.2 buffer.

2. Trypsine pure (lmg/n) à titre de comparaison.2. Pure trypsin (lmg / n) for comparison.

3. Trypsine pure (îmg/ml). 3. Pure trypsin (1 mg / ml).

4. CEH (5mg/ml) + trypsine (lmg/ml). 4. CEH (5mg / ml) + trypsin (1mg / ml).

5. CEH (2mgfml) + imidazole (2mg/ml).5. CEH (2mgfml) + imidazole (2mg / ml).

Pour déterminer l'action de ces différents produits sur la repousse du poil, nous avons a) examiné tous les 2 jours la repousse des poils des 2 côtés et fait des photographies au 8ème et au 14ème jours après épilation.To determine the action of these different products on regrowth of the hair, we a) examined every 2 days the regrowth of hair on both sides and made photographs at the 8th and 14th days after hair removal.

b) épilé à la main 50-100 poils des côtés traités et 50-100 poils du côté témoin, et pesé les poils aux 13ème, et 31ème jours après épilation.b) manually shaved 50-100 hairs from the treated sides and 50-100 hairs from the control side, and weighed the hair at the 13th and 31st days after hair removal.

c) pratiqué des biopsies suivies de coupes histologiques examinées au microscope optique et certaines au microscope électronique
Le tableau suivant (N0 1) rapporte les résultats obtenus par la méthode de mesure du poids du poil après application du
CEH ou d'autres enzymes comme la trypsine (avec ou sans imidazole). c) performed biopsies followed by histological sections examined under an optical microscope and some under the electron microscope
The following table (No. 1) reports the results obtained by the method of measuring the weight of the hair after application of the
CEH or other enzymes such as trypsin (with or without imidazole).

TABLEAU N 1

TABLE N 1

EX.N <SEP> Traitement <SEP> Nombre <SEP> Poids <SEP> de <SEP> 100 <SEP> %rapport <SEP> Remarques <SEP> Observations
<tb> <SEP> rats <SEP> poids <SEP> (en <SEP> mg <SEP> #) <SEP> témoin
<tb> N 1 <SEP> Témoins <SEP> 4 <SEP> 0,825 <SEP> # <SEP> 0,125 <SEP> - <SEP> z <SEP> applications <SEP> Nette <SEP> diminution
<tb> <SEP> CEH <SEP> (5mg/ml) <SEP> 4 <SEP> 0,475 <SEP> # <SEP> 0,025 <SEP> 578 <SEP> à <SEP> 9 <SEP> jours <SEP> d'in- <SEP> du <SEP> nombre <SEP> de <SEP> poils
<tb> <SEP> tervalle <SEP> mesuré <SEP> par <SEP> surface.
<tb>EX.N <SEP> Treatment <SEP> Number <SEP> Weight <SEP> of <SEP> 100 <SEP>% report <SEP> Remarks <SEP> Observations
<tb><SEP> rats <SEP> weight <SEP> (in <SEP> mg <SEP>#)<SEP> control
<tb> N 1 <SEP> Controls <SEP> 4 <SEP> 0.825 <SEP>#<SEP> 0.125 <SEP> - <SEP> z <SEP> applications <SEP> Net <SEP> decrease
<tb><SEP> CEH <SEP> (5mg / ml) <SEP> 4 <SEP> 0.475 <SEP>#<SEP> 0.025 <SEP> 578 <SEP> to <SEP> 9 <SEP> days <SEP> of <SEP><SEP> number <SEP> of <SEP> hairs
<tb><SEP> terval <SEP> measured <SEP> by <SEP> surface.
<Tb>

N 2 <SEP> Témoins <SEP> 2 <SEP> 0,70 <SEP> # <SEP> 0,10 <SEP> - <SEP> Pesée <SEP> le <SEP> 13ème <SEP> pas <SEP> d'effet.
<tb>N 2 <SEP> Controls <SEP> 2 <SEP> 0.70 <SEP>#<SEP> 0.10 <SEP> - <SEP> Weighing <SEP> on <SEP> 13th <SEP> not <SEP> d 'effect.
<Tb>

<SEP> Trypsine <SEP> (1mg/ml) <SEP> 2 <SEP> 0,70 <SEP> # <SEP> 0,12 <SEP> 100% <SEP> jour.
<tb><SEP> Trypsin <SEP> (1mg / ml) <SEP> 2 <SEP> 0.70 <SEP>#<SEP> 0.12 <SEP> 100% <SEP> day.
<Tb>

N 3 <SEP> Témoins <SEP> 2 <SEP> 1,75 <SEP> # <SEP> 0,12 <SEP> - <SEP> pesée <SEP> le <SEP> 13ème <SEP> Faible <SEP> effet <SEP> sans
<tb> <SEP> Trypsine <SEP> (1mg/ml) <SEP> 2 <SEP> 1,30 <SEP> + <SEP> 0,1 <SEP> 74% <SEP> jour. <SEP> modification <SEP> nota
<SEP> ble <SEP> du <SEP> nombre <SEP> de
<tb> <SEP> poils <SEP> par <SEP> surface.
<tb>N 3 <SEP> Controls <SEP> 2 <SEP> 1.75 <SEP>#<SEP> 0.12 <SEP> - <SEP> Weighing <SEP> the <SEP> 13th <SEP> Low <SEP> Effect <SEP> without
<tb><SEP> Trypsin <SEP> (1mg / ml) <SEP> 2 <SEP> 1.30 <SEP> + <SEP> 0.1 <SEP> 74% <SEP> day. <SEP> modification <SEP> nota
<SEP> ble <SEP> of <SEP> number <SEP> of
<tb><SEP> bristles <SEP> by <SEP> surface.
<Tb>

N 4 <SEP> Témoins <SEP> 1 <SEP> 1,85 <SEP> - <SEP> Pesée <SEP> le <SEP> 13ème <SEP> Même <SEP> résultat <SEP> que
<tb> <SEP> CEH <SEP> + <SEP> Trypsine <SEP> 1 <SEP> 1,05 <SEP> 57% <SEP> jour. <SEP> dans <SEP> ex. <SEP> N 1
<tb> <SEP> (5mg <SEP> + <SEP> 1mg)
<tb> N 5 <SEP> Témoins
<tb> <SEP> CEH <SEP> + <SEP> imidazole <SEP> 6 <SEP> 5,32 <SEP> # <SEP> 0,27 <SEP> - <SEP> Pesée <SEP> le <SEP> 31ème <SEP> Même <SEP> résultat <SEP> que
<tb> <SEP> (2mg <SEP> + <SEP> 2 <SEP> mg) <SEP> 6 <SEP> 3,15 <SEP> # <SEP> 0,40 <SEP> 39% <SEP> jour. <SEP> dans <SEP> ex. <SEP> N 1
<tb>
Comme on peut constater d'après ce tableau, le CEH a une action freinatrice nette sur la repousse du poil.N 4 <SEP> Controls <SEP> 1 <SEP> 1.85 <SEP> - <SEP> Weighing <SEP> the <SEP> 13th <SEP> Same <SEP> result <SEP> as
<tb><SEP> CEH <SEP> + <SEP> Trypsin <SEP> 1 <SEP> 1.05 <SEP> 57% <SEP> day. <SEP> in <SEP> ex. <SEP> N 1
<tb><SEP> (5mg <SEP> + <SEP> 1mg)
<tb> N 5 <SEP> Witnesses
<tb><SEP> CEH <SEP> + <SEP> imidazole <SEP> 6 <SEP> 5.32 <SEP>#<SEP> 0.27 <SEP> - <SEP> Weighing <SEP><SEP> 31st <SEP> Same <SEP> result <SEP> as
<tb><SEP> (2mg <SEP> + <SEP> 2 <SEP> mg) <SEP> 6 <SEP> 3.15 <SEP>#<SEP> 0.40 <SEP> 39% <SEP> day . <SEP> in <SEP> ex. <SEP> N 1
<Tb>
As can be seen from this table, the CEH has a clear damaging action on hair regrowth.

La repousse est d'abord retardée, le poil est plus petit (50 à 60% par rapport aux témoins) et le nombre de poils par surface a nettement diminué.The regrowth is first delayed, the hair is smaller (50 to 60% compared to controls) and the number of hairs per area has significantly decreased.

L'autre enzyme utilisé, la trypsine n'a pas cette action freinatrice et son addition n'augmente pas l'action de CEH.The other enzyme used, trypsin does not have this damaging action and its addition does not increase the action of CEH.

Dans aucune des expériences on n'a constaté des effets toxiques ou allergisants.In none of the experiments were toxic or allergenic effects noted.

Compte-rendu des coupes histologiques.Report of histological sections.

Coupe de la peau des rats témoins 4 jours après épilation
Coupe nO 1 : La coupe histologique montre un certain nombre
de follicules pileux en activité avec image de
croissance des poils ; certains d'entre eux
atteignant l'épithélium malpighien.Cut of the skin of control rats 4 days after hair removal
Section 1: Histological section shows a number
of hair follicles in activity with image of
hair growth; some of them
reaching the squamous epithelium.

Coupe nO 3 (grossissement plus fort) : Cette coupe montre des
images de croissance pilaire avec glandes séba
cees bien développées appendues à la gaine du
poil.Cut # 3 (higher magnification): This cut shows
hair growth images with sebaceous glands
these well-developed appendages to the sheath of
hair.

L'un des poils a presqu'atteint l'épithélium
malpighien. One of the hairs has almost reached the epithelium
squamous.

Coupe de la peau des rats traités 4 jours après épilation (traitement avec CEH)
Coupe nO 2 : La coupe montre quelques follicules pileux peu
développés, situés profondément dans le derme et
sans image de croissance pilaire. Les follicules
pileux et l'épithélium malpighien sont séparés
par une "zone vide". Cut of the skin of the rats treated 4 days after hair removal (treatment with CEH)
Cup nO 2: The cut shows a few hair follicles
developed deep in the dermis and
without image of hair growth. Follicles
hair and squamous epithelium are separated
by an "empty zone".

Coupe nO 4 : (grossissement plus fort) : On observe 2 folli
cules pileux situés profondément dans le derme
sans connection avec l'épithélium malpighien.Cup nO 4: (stronger magnification): We observe 2 folli
hairy cules located deep in the dermis
without connection to the squamous epithelium.

On voit une section oblique de poil amorçant à
peine sa croissance.We see an oblique section of hair priming at
hardly grow.

En résumé, retard important de la pousse par rapport au témoin.In summary, significant delay of the shoot compared to the control.

Coupe de la peau des lapins témoins 4 jours après épilation
Coupe nO L1 : Présence de follicules pileux actifs avec poils
atteignant la surface épithéliale.Cutting of the skin of control rabbits 4 days after hair removal
Cup nO L1: Presence of active hair follicles with hair
reaching the epithelial surface.

Rares glandes sébacées. Rare sebaceous glands.

Coupe de la peau des lapins traités 4 jours après épilation (traitement avec CEH)
Coupe nO L2 : Les follicules pileux montrent par place des
zones claires évoquant une vacuité de la gaine
du poil.Skin section of rabbits treated 4 days after hair removal (treatment with CEH)
Section L2: The hair follicles show
clear areas evoking an emptiness of the sheath
hair.

Ces zones claires sont évidentes dans les 3
éléments observés.These clear areas are evident in the 3
observed elements.

On remarque la présence de cellules adipeuses
nombreuses et situées assez haut dans le derme.We notice the presence of fat cells
many and located high enough in the dermis.

(Ces cellules sont ordinairement situées plus
profondément dans l'hypoderme).(These cells are usually located more
deep in the hypodermis).

On peut émettre l'hypothèse d'une dégénerescence
graisseuse des cellules des follicules pileux.We can hypothesize degeneration
fat cells of hair follicles.

Coupe nO L3 : Même aspect.Cup nO L3: Same aspect.

Avec cellules adipeuses. With fat cells.

Coupe de la peau du lapin traité avec CEH au microscope électronique.Cut of rabbit skin treated with CEH under the electron microscope.

Coupe MEI : La coupe représente un poil dans sa gaine coupée
longitudinalement.MEI cut: The cut represents a hair in its cut sheath
longitudinally.

La partie périphérique du poil entourant la moël
le apparaît homogène et foncée.The peripheral part of the hair surrounding the moel
it appears homogeneous and dark.

Coupe ME2 : L'image représente des cellules de la gaine du
poil adjacente à un poil dont on voit la partie
périphérique à droite. (On reconnait cette partie
périphérique en se reportant à ME1). Cut ME2: The image represents cells of the sheath of the
hair adjacent to a hair of which we see the part
device on the right. (We recognize this part
peripheral by referring to ME1).

On observe dans la cytoplasme des cellules de
nombreuses inclusions lipidiques (22 dans le champ)
évoquant une dégénérescence graisseuse.In the cytoplasm cells of
many lipid inclusions (22 in the field)
evoking a fatty degeneration.

Coupe ME3 : On observe un macrophage situé à proximité d'un
poil. Ce macrophage d'aspect actif et inhabituel
à cet endroit présente de nombreuses microvillosi
tés à sa surface et à l'intérieur de nombreuses
inclusions lipidiques (14).Cut ME3: There is a macrophage located near a
hair. This macrophage of active and unusual aspect
at this place presents many microvillosi
on its surface and inside many
lipid inclusions (14).

Cet aspect indique une activité macrophagique
intense au dépend du matériel lipidique.This aspect indicates a macrophage activity
intense at the expense of lipidic material.

I1 est vrais semblable que ces lipides proviennent
de la dégénérescence graisseuse des cellules de
la gaine du poil voisin.It is true that these lipids come from
of fatty degeneration of the cells of
the sheath of the neighboring hair.

Conclusion.Conclusion.

L'étude histologique de la coupe des peaux des rats et des lapins montre un net retard de la croissance du poil.The histological study of the cut of the skins of the rats and the rabbits shows a clear delay of the growth of the hair.

L'observation des signes d'une dégénérescence graisseuse des cellules des follicules pileux, confirmée par l'étude au microscope électronique, pourrait être mise en relation avec le retard observé dans la repousse du poil. The observation of signs of fatty degeneration of hair follicle cells, confirmed by the electron microscopic study, could be related to the delay observed in regrowth of the hair.

Etude expérimentale sur la peau de la Femme.Experimental study on the skin of the Woman.

L'étude expérimentale de l'effet de CEH en comparaison avec la trypsine a été faite sur dix femmes. Ces patientes ont été choisies parmi celles qui n'ont pas réagi aux autres traitements connus.The experimental study of the effect of CEH in comparison with trypsin was done on ten women. These patients were selected from those who did not respond to other known treatments.

Après épilation à la cire, les substances utilisées étaient diluées dans une solution tampon à pH 7,8 et appliquées sur la peau en ionisation avec une électrode à rouleau reliée au pôle négatif de l'appareil galvanique.After waxing, the substances used were diluted in a buffer solution at pH 7.8 and applied to the skin in ionization with a roller electrode connected to the negative pole of the galvanic apparatus.

Cet appareil produit un courant continu au maximum de 2 milliampères avec toutes les 10 secondes une inversion du courant de 1 seconde permettant la dépolarisation et de ce fait une meilleure pénétration des substances.This device produces a continuous current of not more than 2 milliamperes with every 10 seconds a reversal of the current of 1 second allowing the depolarization and thus a better penetration of the substances.

Les substances utilisées étaient les suivantes
CEH (10 mg) + imidazole (10 mg) (dans 10 ml)
CEH (10 mg)/10 ml
CEH (20 mg)/10 ml
trypsine à 15 mg/10 ml (comparaison)
trypsine à 50 mg/10 ml (comparaison)
Alors que l'on n'a observé aucune action de la trypsine, on a pu constater que le CEH à 10 mg/10 ml a retardé la repousse du poil. L'effet du CER à 20 mg était plus fort.The substances used were the following
CEH (10 mg) + imidazole (10 mg) (in 10 ml)
CEH (10 mg) / 10 ml
CEH (20 mg) / 10 ml
trypsin 15 mg / 10 ml (comparison)
trypsin 50 mg / 10 ml (comparison)
While no action of trypsin was observed, it was found that the 10 mg / 10 ml CEH delayed regrowth of the hair. The effect of 20 mg CER was stronger.

Les poils repoussent plus fins et disparaissent dans certaines zones. Après trois séances, on a observé une amélioration de 50%. Le retard de repousse du poil était tel que les séances ont pu être espacées de 1 mois à 2 mois. Dans certains cas d'hirsutisme généralisé, on a observé une disparition de poils, sur les jambes ou sur la lèvre supérieure. Aucune manifestation toxique ni allergique n'a été constatée.The hairs grow thinner and disappear in certain areas. After three sessions, an improvement of 50% was observed. The delay of regrowth of the hair was such that the sessions could be spaced from 1 month to 2 months. In some cases of generalized hirsutism, there has been a loss of hair on the legs or upper lip. No toxic or allergic manifestations were found.

Compte tenu des études expérimentales relatées ci-dessus, le complexe enzymatique à activité hydrolysante sur l'AMPc (CEH) peut être utilisée en cosmétique, en composition avec les excipients topiques usuels, notamment pour empécher ou retar der la pousse des poils.Given the experimental studies mentioned above, the enzymatic complex with hydrolysing activity on cAMP (CEH) can be used in cosmetics, in composition with the usual topical excipients, especially to prevent or retard hair growth.

Le CEH sera appliqué après épilation, de préférence à l'aide d'un appareil à ionisation, sous forme d'une solution aqueuse, en particulier une solution tampon ayant un pH 7 à 8, à des concentrations allant de 1 à 20 g/l, surtout de 2 à 5 g/l (basées sur un CEH lyophilisé ayant une activité d'environ 0,3 unité enzymatique tel que définie plus haut).The CEH will be applied after depilation, preferably with the aid of an ionization apparatus, in the form of an aqueous solution, in particular a buffer solution having a pH of 7 to 8, at concentrations ranging from 1 to 20 g / l, especially from 2 to 5 g / l (based on a freeze-dried CEH having an activity of about 0.3 enzymatic unit as defined above).

On peut aussi l'utiliser sous d'autres formes, par exemple sous forme de crèmes ou de gels contenant de 0,1 à 2% de CEH, par exemple 0,2% , ainsi que les excipients usuels, ou en pulvérisation sous pression.It can also be used in other forms, for example in the form of creams or gels containing from 0.1 to 2% of CEH, for example 0.2%, as well as the usual excipients, or by spraying under pressure. .

L'application se fera par exemple en ionisation par séances mensuelles ou tous les 2 ou 3 mois, suivie d'une ap21ication de crème, ou de gel ou de pulvérisation immédiatement après épilation (au cours des 2 ou 3 jours suivants), selon les besoins.The application will be done for example in ionization by monthly sessions or every 2 or 3 months, followed by application of cream, or gel or spraying immediately after hair removal (during the following 2 or 3 days), according to the needs.

Exemple de Gel
CEH 0,2 0,2 g
"Carbopol 930" (carboxyméthylène) . 3 g
Triéthanolamine ............ 3 g
Palmitate d'isopropyle ......... 5 g
Conservateur ................... 0,3 g Gluconate de magnésium * ou 0,1 g
Gluconate de calcium o 0,1 g
Parfum ........................ 0,3 g
Eau qsp .....................100 g
Exemple de Crème
Stéarine + 4 g
Stéarate de glycérol ........ 4 g
Alcool cétylique ............. 1 g
Huile minérale ............. 10 g
Huile d'amandes douces 5 g
Palmitate d'isopropyle ............. 10 g
Lecithine soja ..................... 1 g
Lanoline ........................... 1 g
Triéthanolamine ................... 3 g
Antioxydant (BHA (R)) 0,1 g
Conservateur ... 0,3 g
Parfum ................. 0,2 g
Gluconate de Mg ................. 0,1 g
Gluconate de Ca.................0,1 g
Eau qsp ..................... 100 g Example of Gel
CEH 0.2 0.2 g
"Carbopol 930" (carboxymethylene). 3 g
Triethanolamine ............ 3 g
Isopropyl palmitate ......... 5 g
Preservative ................... 0.3 g Magnesium Gluconate * or 0.1 g
Calcium gluconate o 0.1 g
Perfume ........................ 0.3 g
Water qs ..................... 100 g
Cream Example
Stearin + 4 g
Glycerol stearate ........ 4 g
Cetyl alcohol ............. 1 g
Mineral oil ............. 10 g
Sweet almond oil 5 g
Isopropyl palmitate ............. 10 g
Soy Lecithin ..................... 1 g
Lanolin ........................... 1 g
Triethanolamine ................... 3 g
Antioxidant (BHA (R)) 0.1 g
Preservative ... 0.3 g
Perfume ................. 0.2 g
Gluconate of Mg ................. 0,1 g
Ca gluconate ................. 0.1 g
Water qs ..................... 100 g

Claims

1. Cosmetic composition based on an enzymatic complex with hydrolysing action on cAMP and topical excipients.

2. Cosmetic composition according to claim 1, characterized in that the enzyme complex has been extracted from freshly collected animal tissues by grinding, filtration, centrifugation, new filtration and precipitation with a saturated ammonium sulfate solution, the filtration operations. and precipitation which can be repeated, and lyophilization of the product obtained.

3. Cosmetic composition according to claim 1 or claim 2, characterized in that the enzyme complex with hydrolysing action in the lyophilized state has an enzymatic activity on the cAMP of the order of 0.1 to 0.4 units. by mg.

4. Cosmetic composition according to any one of claims 1 to 3, characterized in that it is in the form of an aqueous solution containing 1 to 20 g / l of enzymatic complex.

5. Cosmetic composition according to claim 4, characterized in that the solution is a buffer solution having a pH of 7 to S.

6. Cosmetic composition according to claim 5, characterized in that the solution contains from 2 to 5 g / l of enzymatic complex having an activity of about 0.3 enzymatic unit.

7. Cosmetic composition according to any one of claims 1 to 3, characterized in that it is in the form of cream or gel containing from 0.1 to 2% of enzyme complex.

8. Cosmetic composition according to claim 7, characterized in that it contains about 0.2% of enzyme complex.