FR2477033A1

FR2477033A1 - Gel polyacrylamidique pour emploi medical et biologique et procede de sa preparation

Info

Publication number: FR2477033A1
Application number: FR8103615A
Authority: FR
Inventors: Ivan Petrovich Bilko; Vladimir Vladislavov Gashinsky; Anatoly Mikhailovich Sokoljuk
Original assignee: KI MED I
Current assignee: KI MED I
Priority date: 1980-02-28
Filing date: 1981-02-24
Publication date: 1981-09-04
Also published as: IT8141535A0; IT8141535A1; IT1168485B; FR2477033B1

Abstract

L'INVENTION SE RAPPORTE A UN GEL POLYACRYLAMIDIQUE POUR EMPLOI MEDICAL ET BIOLOGIQUE ET AU PROCEDE DE SA PREPARATION. LE GEL POLYACRYLAMIDIQUE COMPREND DU POLYACRYLAMIDE ET DE LA SOLUTION PHYSIOLOGIQUE, LE POURCENTAGE EN POIDS DES COMPOSANTS ETANT LE SUIVANT: -POLYACRYAMIDE: 3,0 A 28,0 -SOLUTION PHYSIOLOGIQUE: 72,0 A 97,0 LE PROCEDE DE PREPARATION DU GEL POLYACRYLAMIDIQUE POUR UTILISATION DANS LA MEDECINE ET LA BIOLOGIE EST BASE SUR UNE POLYMERISATION DE L'ACRYLAMIDE ET DU METHYLENE-BIS-ACRYLAMIDE SUIVIE D'UN LAVAGE DU PRODUIT DESIRE DANS LE MILIEU D'UNE SOLUTION PHYSIOLOGIQUE. LE GEL POLYACRYLAMIDIQUE PEUT ETRE UTILISE EN TANT QUE BASE POUR DES MILIEUX NUTRITIFS, CRISTALLIN ARTIFICIEL, LENTILLE DE CONTACT SOUPLE.

Description

GEL POLYACRYLAMIDIQUE POUR EMPLOI MEDICAL
ET BIOLOGIQUE ET PROCEDE DE SA PREPARATION
L'invention se rapporte à un gel polyacrylamidique pour emploi médical et biologique et au procédé de sa préparation. L'invention est destinée à être utilisée dans le domaine de la médecine et de la biologie.

A present la pratique microbiologique connaît un large emploi de l'agar qui est un gel naturel. Cependant, il existe une necessité de remplacer des matériaux naturels par des matériaux synthétiques. Le gel polyacrylamidique, un des gels polymères, est connu depuis longtemps et est utilisé, grâce à ses qualités, à différentes fins. Cependant, les possibilités de son emploi dans la médecine et la biologie sont limitées par la présence, dans ce sel, de monomères de départ toxiques.Ainsi, on connaît un milieu synthétique destiné à la culture des microorganismes (voir le brevet d'invention des
Etats-Unis n" 3 046 201) et contenant de 3 à 20 parties en poids d'eau pour 1 partie du mélange de monomères soluble dans l'eau, ce mélange contenant, à son tour, de 0,01 à 0,25 partie d'un des alcoylène-bis-acrylamides pour 1 partie d'acrylamide.

Le gel polyacrylamidique susmentionné est une base à laquelle on additionne différentes substances minérales pour la nutrition des microorganismes. Ces substances peuvent être introduites dans la base en concentrations élevées pour assurer les besoins nutritionnels de certaines espèces de microorganismes.

Cependant, ce milieu synthetique contient également une certaine quantité de monomères de départ toxiques. De plus, la base synthétique ayant une réaction acide (pH de 3,5 à 4), on ne peut pas introduire n'importe quels substrats nutritifs dans la base. Pour cette raison la possibilité d'emploi de la base synthétique indiquée est limitée.

Un procédé de préparation d'un milieu nutritif pour la culture des microorganisnies (voir le certificat d'auteur de l'URSS n" 659 619, publié le 30.04.1979) prévoit l'obtention d'un gel polyacrylamidique, servant de base dense pour le milieu nutrition, suivie de son impregnation par un substrat nutritif avant ou après la stérilisation. Le procédé susmentionné comprend une polymérisation de l'acrylamide et du méthylène-bis-acrylamide dans un milieu aqueux suivie de lavage avec de l'eau afin d'éliminer des monomères de départ toxiques avant son impregnation par le substrat nutritif.La base préparée par le procéde indique ne contient pas de monomères de base toxiques n'ayant pas réagi ce qui élargit les possibilités de son emploi en microbiologie.

Pourtant, tout en pennettant d'éliminer des substances toxiques, le lavage du produit désiré par de l'eau n'assure pas un contact non nuisible du gel polyacrylamidique avec des cellules, tissus et organes des animaux et de l'homme. Les dimensions du gel polyacrylamidique entrant en contact avec les organismes vivants ne sont pas stables.

L'invention vise un gel polyacrylamidique dont les propriétés technologiques permettraient de procurer un caractère isotonique au gel polyacrylamidique et d'élargir le domaine de son emploi.

L'invention vise aussi un procédé de préparation de ce gel en ajoutant au gel polyacrylamidique connu,contenant un polymère d'acrylamide et de méthylène-bis-acrylamide,une solution physiologique, le pourcentage en poids des composants étant le suivant:
.polyacrylamide: de 3,0 a 28,0
solution physiologique: de 72,0 a 97,0
Le gel polyacrylamidique susmentionné n'est pas toxique et se carac térise par une bonne porosité, un caractère hydrophile marqué, une bonne élas ticité, limpidité et thermostabilité.De plus, le gel polyacrylamidique est isotonique par rapport aux microorganismes, cellules, tissus et organes ce qui permet de stabiliser ses dimensions ainsi que de rendre plus importante sa saturation par des solutions de différentes substances. Tout cela permet d'assurer un contact non nuisible du gel polyacrylamidique avec des microorganismes vivants et, par conséquent, d'élargir considérablement le champ de son emploi dans la médecine et la biologie.

Pour élargir les possibilités d'emploi du gel polyacrylamidique dans la médecine et la biologie il est rationnel d'utiliser, en tant que solution physiologique, une solution aqueuse a 0,5~ de chlorure de sodium ou une solution aqueuse a 0,9% de chlorure de sodium ou bien la solution de Ringer
Lockort, ou la solution d'Earle ou la solution de Hanks, ou le milieu d'Eagle ou bien une solution aqueuse a 5Z de glucose.

Il est recommandé d'utiliser, en tant que solution physiologique, une solution aqueuse 5 o,5v.' de chlorure de sodium, le pourcentage en poids des composants étant le suivant:
.polyacrylamide: de 6,0 à 15,0
solution aqueuse a 0,5%
de chlorure de sodium: de 85,0 à 94,0
Cette formule du gel polyacrylamidique permet d'améliorer son caractère isotonique par rapport aux microorganismes et, de ce fait, de l'utiliser comme une base dense des milieux nutritifs pour la culture des microorganismes.

Il est possible que le gel polyacrylamidique contienne, en tant que solution physiologique, une solution aqueuse a 0,9% de chlorure de sodium, le pourcentage en poids des composants étant le suivant:
polyacryl ami de: de 5,0 a 18,0
solution aqueuse a 0,9%
de chlorure de sodium: de 82,0 a 95,0
La formule indiquée du gel polyacrylamidique permet, elle aussi, d'améliorer le caractère isotonique par rapport aux cellules des animaux et de l'homme et, de ce fait, d'utiliser ce gel comme porteur des substrats nutritifs pour des cultures de cellules.

Il est recommandé d'utiliser, en tant que solution physiologique, une solution aqueuse a 5% de glucose, le pourcentage en poids des composants étant le suivant:
.polyacrylamide: de 4,0 à 20,0
.solution aqueuse a 5,0 ;
de glucose: de 80,0 a 96,0
Cette formule du gel polyacrylamidique permet de la rendre le plus isotonique par rapport aux organismes vivants et est utilisée dans les cas où la présence du chlorure de sodium n'est pas désirable.

Le problème posé est également résolu en ce que, dans le procédé connu de préparation du gel polyacrylamidique pour emploi médical et biologique comprenant une polymérisation de l'acrylamide et du méthylène-bis-acrylamide suivie d'un lavage du produit désiré, selon l'invention,- on effectue la polymérisation de l'acrylamide et du méthylène-bis-acryl amide ainsi que le lavage du produit désiré au sein d'une solution physiologique.

Ce procédé permet d'obtenir un gel polyacrylamidique pouvant être utilisé comme une base dense pour la culture de pratiquement toutes les espèces de microorganismes et comme matière premiere pour la fabrication des cristallins artificiels et des lentilles'de contact..

Il est recommatnde d'utiliser, en tant que solution physiologique, une solution aqueuse 0,5% de chlorure de sodium ou une solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium, ou bien'la solution de Ringer-Lock, ou la solution d'Earle, ou la solution de Hanks, ou le milieu 199, ou le milieu d'Eagle ou bien une solution aqueuse à 5% de glucose.

Cette variante du procédé permet d'élargir le champ-d'application du gel polyacrylamidique dans la médecine et la biologie.

Il est rationnel d'effectuer la polymérisation de l'acrylamide et du méthylène-bis-acrylamide dans un réacteur dont la cavité intérieure simule la forme du cristallin artificiel, cette polymérisation étant suivie d'un lavage du produit désiré et effectuée, ainsi que le lavage, au sein d'une solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium.

Cette variante du procédé permet d'utiliser le gel polyacrylamidique pour la fabrication des cristallins artificiels. Dans ce cas le traumatisme des tissus de l'oeil diminue lors de l'implantation grâce à des coupures minimales et à la non réactivité complète des tuniqués de l'oeil.

Il est recommandé d'effectuer la polymérisation de l'acrylamide et du méthylène-bis-acrylamide dans un réacteur dont la cavité intérieure simule la forme de la lentille de contact, cette opération étant suivie d'un lavage du produit désire effectué, ainsi- que la polymérisation, au sein d'une solution aqueuse a 0,9 ,0 de chlorure de sodium.

Cette variante du procédé permet d'utiliser le gel polyacrylamidique pour la fabrication des lentilles de contact qui peuvent être portées continuellement pendant une longue période de temps pour correction, dans de larges limites, des anomalies de la réfraction.

Le gel polyacrylamidique est prépare par une polymérisation de l'acrylamide et du méthylène-bis-acrylamide ou bien-d'un autre alcoylène bi s-acryl ami de.

Le mélange réactionnel comprend nonnalement de 80 d 99,5% en poids de méthylène-bis-acrylamide ou d'un autre alcoylène-bis-acrylamide soluble dans l'eau. Les monomères de départ sont dissous dans une solution physiologique. En tant que solution physiologique peuvent être utilisées: une solution aqueuse à 0,5% de chlorure de sodium, ou une solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium, ou une solution aqueuse à 5% de glucose, ou des solutions de
Ringer-Lock, de Hanks, d'Earle, ou le milieu 199, ou le milieu d'Eagle. La modification des quantités de monomères de départ dans le mélange réactionnel permet de préparer des gels polyacrylamidiques de différentes densités et élasticités.

La polymérisation des monomères de base peut s'effectuer sans ou avec chauffage ainsi qu'avec l'addition d'agents d'amorçage et de catalyseurs.

La vitesse de la réaction de polymérisation augmente avec la température et est directement proportionnelle a la quantite du catalyseur et à l'intensité de l'irradiation. Les catalyseurs sont normalement introduits en quantité de 0,05 à 0,1% en poids de la quantité de monomères de base.

Le mélange réactionnel peut également être préparé par malaxage des monomères secs en poudre suivi de leur dissolution dans une solution physiologique. Afin d'accélérer la dissolution, la solution physiologique est soumise au chauffage. La polymérisation du mélange reactionnel peut être effectuée dans un volume de forme donnée, c'est-à-dire dans des recipients metalliques, céramiques ou en verre ainsi qu'en matières synthétiques. Le gel obtenu par la polymérisation prend la forme et les dimensions du récipient utilisé.

L'opération de polymérisation peut être effectuée dans des volumes simulant la forme des lentilles de contact connues ou bien la forme des cristallins artificiels monoblocs connus, ce qui permet d'utiliser le gel polyacrylamidique pour la fabrication des lentilles de contact souples ou des cristallins artificiels. Les conditions de polymérisation sont analogues à celles décrites plus haut. Après la polymérisation, le gel polyacrylamidique est lavé par des solutions physiologiques.

Le lavage du gel visant à éliminer les monomères de départ qui n'ont pas réagi pendant la polymérisation peut être effectué dans les conditions normales ainsi qu'à une temperature élevée. Qn dissout les monomères de depart n'ayant pas réagi dans une solution physiologique et ils passent du gel dans cette solution. En procédant au renouvellement de la solution physiologique on arrive à éliminer complètement les produits toxiques contenus dans le gel.

Généralement le renouvellement de la solution physiologique à trois reprises est suffisant. Le réchauffement accélère l'opération de lavage du gel. Le lavage du gel lors de la préparation des lentilles de contact souples ou des cristallins s'effectue de façon analogue à celle décrite plus haut. Le gel préparé peut être soumis au formage et à la coupe. Après le lavage et le formage le gel polyacrylamidique subit une stérilisation.

La stérilisation du gel peut être effectuee par des procedés thermiques ou chimiques ou bien par radiation. Le choix du procéde de stérilisation et de son régime dépend de la destination du gel préparé. Après la stérilisation le gel est apte à être utilisé en tant que base dense pour la préparation de milieux nutritifs de cultures de microorganisnles ou bien comme matière de départ pour la fabrication de cristallins artificiels ou lentilles de contact souples et peut être conservé jusqu'à sa mise en oeuvre.

La saturation du gel par les substrats servant à la nutrition des microorganismes et des cultures cellulasires peut être réalisée avant ou apres la stérilisation. Le choix du procédé de saturation dépend de la composition concrète du substrat nutritif. En cas de présence, dans le substrat nutritif, de composants thermolabiles, la saturation est effectuée après la sterilisa- tion. La composition des substrats nutritifs dépend des besoins nutritionnels des groupes ou espèces donnés de microorganismes et de cellules.Afin de saturer le gel polyacrylamidique préparé selon l'invention il est possible d'utiliser des substrats nutritifs, assurant les besoins nutritionnels de pratiquement toutes les espèces connues de microorganismes et de cellules, y compris les compositions de substrats naturelles, semi-synthétiques, synthétiques ainsi que leurs mélanges.

Pour déterminer la qualité des milieux nutritifs et étudier les pro priétés biologiques des microorganismes et des cellules des animaux et de l'homme on utilise les procédés d'étude connus.

Les propriétés optiques des lentilles de contact souples et des cristallins artificiels en gel polyacrylamidique contenant une solution physiologique sont également déterminées a l'aide des procédes connus.

L'invention sera mieux comprise et d'autres buts, détails et avantages de celle-ci apparaîtront mieux à la lumière de la description explicative qui va suivre de différents modes de réalisation donnés uniquement à titre d'exemple non limitatifs.

Dans ces exemples, le terme polyacrylamide comprend les copolyméres de l'acrylamide avec une alcoylène-bis-acrylamide.

Exemple 1
Un gel polyacrylamidique conforme à l'invention contenant (% en poids): . polyacrylamide: ami de: 11%
solution aqueu-se à 0,5%
de chlorure de sodium: 89% est preparé de la maniere suivante. Trois solutions (A, B, C) ont été préalablement préparées par le procédé suivant (les quantités de composants de base sont indiquées pour 1000 ml de solution basique): pour préparer la solution A, 5 ml de tétraméthyléthyl enediami ne ont été dissous dans 995 ml de solution aqueuse de chlorure de sodium, le tout étant conserve sans être exposé à la lumière à la température de Ç"C jusqu'à l'utilisation (la durée normale de conservation est de 5 a 6 mois); pour préparer la solution 5, 7,35 g de méthylène-bis-acrylamide ont été dissous dans 350 ml de solution aqueuse a 0,5% de chlorure de sodium chauffé à la température de 60"C avec l'addition ultérieure de 280 g d'acrylamide qui a été malaxé jusqu'à sa dissolution complète.La solution préparée est filtrée à l'aide d'un filtre de coton et de gaze, ensuite la solution aqueuse à 0,5% de chlorure de sodium est ajoutéeà cette dernière de manière à obtenir un volume de 1000 ml, la solution B étant conservée, sans être exposée à la lumière, à la température de 4"C dans un réfrigérant jusqu'à s-on utilisation (la durée normale de conservation est de 6 à 8 mois); pour préparer la solution C, 1,4 g de persulfate d'ammonium ont été dissous dans 1000 ml de la solution aqueuse à 0,5% de chlorure de sodium et la solution préparée est conservée jusqu'à son utilisation sans être exposée à la lumière (durée normale de conservation de 4 à 6 semaines).

Les solutions préparées (A, B, C) ont servi à préparer un melange réactionnel. A cet effet, on ajoute à 1 volume de la solution At2 volumes de la solution B et 4 volumes de la solution C.

On verse le mélange réactionnel dans une fente formée par deux plaques en verre parallèles épaisses de 3 m. L'opération de polymérisation dure 15 minutes. On separe les plaques en verre pour-enlever la plaque du gel polyacrylamidique fournée. Cette plaque de gel sert pour estamper des disques de 70 mm de diamètre. Les disques fabriqués sont placés dans un récipient rempli ensuite d'une solution aqueuse à 0,5% de chlorure de sodium à raison de 20 ml de solution par disque. Ensuite, les disques sont trempés dans la solution aqueuse à 0,5% de chlorure de sodium pendant 12 heures, cette solution étant renouvelée toutes les 4 heures. Au bout de 12 heures la solution a été évacuée.

Le gel polyacrylamidique obtenu n'est pas toxique et se caractérise par une bonne porosité, élasticité, limpidité et thermostabilité et un bon caractère hydrophile.

Les cellules de différentes espèces de microorganismes placées sur le gel ont conserve leurs formels, dimensions et vitalité pendant une longue période (3 mois et davantage) ce qui prouve que le gel indiqué est isotonique aux cellules des microorganismes.

Le gel s'adapte facilement à la saturation par des substrats destinés à la nutrition des microorganismes (par exemple, le bouillon de boeuf peptonisé) et, de ce fait, il est utilisé en tant que base dense pour la préparation des milieux nutritifs destinés à la culture des différents groupes de microorganismes (Escherichia, Salmonella, Shigella, Proteus, Staphylococcus et autres).

Pour sa-turer les disques lavés, on les place dans un bouillon de
Hottinger, comprenant une quantité de 300 mg % d'azote aminé, à raison de 10 ml de bouillon par disques et on stérilise, ensuite, à la température de 1200C pendant 30 minutes. Pendant ce temps les disques ont été saturés de bouillon et stérilisés. On place les disques stérilisés saturés de bouillon, tout en respectant les conditions de stérilité, dans des boîtes de Petri stériles, ensuite on les sèche et on les ensemence d'Escherichia coli. On soumet ensuite les microorganismes a l'incubation pendant 24 heures à la température de 37"C. Ce temps a suffi pour la croissance de la culture d'Escherichia coli sous forme de colonies à.la surface des disques.

Lors de la croissance sur le gel, les microorganismes ont conservé leurs propriétés biologiques: caractères de croissance et de reproduction, formes des cellules et des colonies, propriétés tinctoriales, culturales, biochimiques et sérologiques, structure antigénique, capacité de phagolyse.

Dans ce cas la biomasse des microorganismes développés a dépassé celle des mêmes microorganismes développés dans l'agar de boeuf peptonisé, la dose d'ensemencement étant identique dans les deux cas.

En outre, on a déterminé la survie des espèces étudiees de microorganismes sur le gel polyacrylamidique selon l'invention et sur un gel connu.

Les résultats sont donnés dans-le tableau 1 ci-dessous.

EXEMPLE 2
Le gel polyacrylamidique conforme à l'invention comprenant (% en poids):
polyacrylamide: 8,0
solution physiologique: 92,0 a été préparé comme dans l'exemple 1. En tant que solution physiologique on a utilisé une solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium.

Le gel polyacrylamidique préparé n'est pas toxique et est caractérisé par une bonne porosité, un bon caractère hydrophile, une bonne elasticité, une bonne limpidité et une bonne thermostabilité. Le gel se sature facilement par des substrats destinés à la nutrition des microorganismes, cellules des animaux et de l'homme. Une suspension à 2,v d'érythrocytes de belier (0,2 ml) appliquee à la surface du gel n'a pas subi d'hémolyse tandis que les fibroblastes ainsi- que les cellules HeLa et KB ont conservé leurs formes, leurs dimensions et leur vitalité pendant 2 jours à la température de 4"C. Les dimensions initiales des plaques de gel préparé n'ont pas été modifiées 5 jours après leur implantation intrapéritonéale aux souris blanches, ces dimensions étant de 1 cm xl cm xO,3 cm.Les plaques ont gardé leur limpidité, n'ont pas provoque de changements réactifs des organes et des tissus avoisinants et ont été bien supportées par les animaux même dans le cas d'implantation de 2 à 3 plaques à la fois à un animal.

<SEP> Dose <SEP> d'ensemence- <SEP> Quantité <SEP> moyenne <SEP> des
<tb> Espèce <SEP> et <SEP> souche <SEP> ment <SEP> des <SEP> unités <SEP> colonies <SEP> développées <SEP> Quantité <SEP> moyenne <SEP> des
<tb> de <SEP> micnoorganisme <SEP> formant <SEP> colonies <SEP> (gel <SEP> polyacrylamidi- <SEP> colonies <SEP> développées
<tb> <SEP> que <SEP> selon <SEP> l'invention) <SEP> (milieu <SEP> nutritif <SEP> connu)
<tb> Staphylococcus
<tb> dureus <SEP> 209p <SEP> 100 <SEP> 94 <SEP> 82
<tb> E. <SEP> coli <SEP> M-17 <SEP> 100 <SEP> 96 <SEP> 80
<tb> E. <SEP> coli <SEP> K-12 <SEP> 100 <SEP> 92 <SEP> 84
<tb> 8. <SEP> cereus <SEP> 8035 <SEP> 100 <SEP> 88 <SEP> 72
<tb> 8. <SEP> mesentericus <SEP> 100 <SEP> 94 <SEP> 82
<tb> 1027
<tb> B. <SEP> subtilis <SEP> 83 <SEP> 100 <SEP> 92 <SEP> 76
<tb> 8. <SEP> megaterium <SEP> 654 <SEP> 100 <SEP> 89 <SEP> 81
<tb> Sh. <SEP> sonnei <SEP> 100 <SEP> 76 <SEP> 71
<tb> Sh. <SEP> flexneri <SEP> 100 <SEP> 84 <SEP> 92
<tb> Pseudomonas
<tb> aeruginosa <SEP> 165 <SEP> 100 <SEP> 92 <SEP> 86
<tb>

TABLEAU 1.

EXEMPLE 3
Le gel polyacrylamidique conforme à l'invention comprenant (% en poids):
polyacrylamide: 3,0
solution physiologique: 97,0 a été préparé comme dans l'exemple 1. En tant que solution physiologique on a utilisé la solution de Ringer-Lock.

Les proprietés du gel polyacrylamiaSque obtenu sont analogues à celles décrites dans l'exemple 2.

La forme, les dimensions et la vitalite des fibroblastes et des cellules HeLa et KB n'ont pas été altérées pendant à peu près 4 jours a la bempérature de 4 C
EXEMPLE 4
Le gel polyacrylamidique conforme à l'invention comprenant (% en poids):
polyacrylamide: 11,0
solution physiologique: 89,0 a été prépare comme dans l'exemple 1. En tant que solution physiologique on a utilisé la solution de Hanks.

Les propriétés du gel polyacrylamidique obtenu ont été identiques à celles décrites dans l'exemple 2.

Les plaques de gel ont été colorées en rose, les fibroblastes et les cellules HeLa et KB ont conserve leurs formes, dimensions et vitalité pendant 6 jours à peu près a la température de 40C.

Les plaques de gel obtenues ont été saturées d'un milieu de croissance des cellules comprenant 60% de milieu 199, 20% d'hydrolysat de lactalbumine, 20% de sérum de bovins et ont été utilisées pour la culture de cellules HeLa. Les cellules HeLa se sont développées à la surface du gel sous forme d'une monocouche type dans les délais normaux.

EXEMPLE 5
Le gel polyacrylamidique conforme à l'invention comprenant (% en poids): polyacryl ami de: 20,0
solution physiologique: 80,0 a été préparé comme dans 1 'exemple 1.

En tant que solution physiologique on a utilisé la solution de
Earle.

Les propriétés du gel de polyacrylamidique obtenu sont les mêmes que celles décrites dans les exemples 2 et 4.

EXEMPLE 6
Le gel polyacrylamidique conforme a l'invention comprenant (% en poids):
polyacrylamide: 5,0
solution physiologique: 95,0 a été préparé comme dans l'exemple 1.

En tant que solution physiologique on a utilisé le milieu 199.

Les propriétés du gel polyacrylamidique obtenu sont analogues à celles décrites dans les exemples 2 et 4.

Les fibroblastes, les cellules HeLa et KB ont conserve leurs formes, leurs dimensions et leur vitalité sur le gel susmentionné pendant 8 a 10 jours à la température de 4 C
Les cellules développées sur les plaques de gel ont été bien fixées au gel, ce qui a permis de transporter des blocs de gel, découpés dans les plaques, portant les cellules et de les étudier au microscope et d'introduire lesdits blocs dans des microchambres.

EXEMPLE 7
Le gel polyacrylamidique conforme à l'invention comprenant (% en poids):
polyacrylaniide: 15,0
solution physiologique: 85,0 a été prépare comme décrit dans l'exemple 1.

En tant que solution physiologique on a utilisé le milieu 199.

Les proprietés du gel polyacrylamidique obtenu sont identiques à celles décrites dans les exemples 2 et 4. La monocouche de cellules développées sur les plaques de gel a été délavée facilement, ce qui a permis d'accumuler un biomasse de cellules.

EXEMPLE 8
Le gel polyacrylamidique conforme à l'invention comprenant (% en poids):
polyacrylamide: 7,0
solution physiologique: 93;0 a été préparé comme décrit dans l'exemple 1.

En tant que solution physiologique on a utilisé le milieu d'Eagle.

Les propriétés du gel polyacrylamidique obtenu sont identiques à celles décrites dans les exemples 2 et 7.

Les plaques de gel saturées d'un milieu de croissance ont été utilisées pour la culture des souches cellulaires. La croissance des cellules diploides a été bonne.

EXEMPLE 9
Le gel polyacrylamidique conforme à l'invention comprenant (% en poids):
polyacrylamide: 10,0
. solution physiologique: 90,0 a été prépare comme decrit dans l'exemple 1. En tant que solution physiologique on utilise une solution aqueuse à 5% de glucose.

Les propriétés dù gel polyacrylamidique obtenu sont identiques à celles décrites dans l'exemple 2.

En outre, les fibroblastes et les cellules HeLa et KB ont conservé leurs formes, leurs dimensions et leur vitalité sur le gel susmentionné pendant 3 jours à peu pres à la température de 4"C.

En outre, le gel en question est caractérisé par une accélération de la croissance et par une augmentation de la biomasse des microorganismes contenant des enzymes saccharolytiques. L'absence de chlorure de sodium dans le gel a considérablement simplifié la détermination de la quantité de chlorure de sodium dans les cellules des microorganismes.

EXEMPLE 10
Le gel polyacrylamidique conforme à l'invention comprenant (% en poids): . polyacrylamide: 11,0 de: 11,0
solution aqueuse à 0,9%
de chlorure de sodium: 89-,0 a été préparé de manière suivante. Trois solutions basiques (A,B,C) ont été préparées au préalable. Ci-dessous sont indiquées les quantités de composants de base pour 1000 ml de solution. Préparation de la solution A: 5 ml de tètraméthylethylènediamine ont été dissous dans 995 ml de la solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium.Préparation de la solution B: 7,35 g de methylène-bis-acryl amide ont été dissous dans 350 ml de la solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium chauffée à la température de 600C et additionnés de 280 g d'acrylamide, le mélange obtenu a été malaxé, filtre et additionné de la solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium de manière à obtenir un volume total de 1000 ml. Préparation de la solution C: 1,4 g de persulfate d'ammonium ont été dissous dans 1000 nil de solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium.

Les solutions basiques ont servi à préparer un melange réactionnel de manière à obtenir un rapport A/B/C de 1/2/4.

Le rapport volumétrique des solutions basiques au sein du mélange reactionnel peut être modifié en fonction du degré désiré d'elasticite du cristallin artificiel.

Une quantité de 0,5 nil de mélange réactionnel a été versé dans un réacteur dont la cavité intérieure simule la partie optique et la partie d'appui du cristallin. La durée de la polymérisation du mélange réactionnel a été de 3 minutes à la température de 20 C. Après cette periode de temps le moules été démonté pour extraire le cristallin artificiel ainsi fabriqué
Le cristallin artificiel se caractérise par les paramètres suivants: rayon de courbure de la surface avant: 27,22 mm, surface arrière - plate, diamètre de la partie optique: 6 mm, réfraction: + 18,0D.

Après son extraction le cristallin a été lavé dans 20 ml de solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium pendant 24 heures, le renouvellement de la solution étant effectue à trois reprises. Le cristallin a été stérilisé par ébullition pendant 40 minutes dans une solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium et conserve dans cette même solution, dans un recipient étanche, jusqu'à son utilisation.

L'oeil aphaque dont la capsule arrière du cristallin est intacte a été coupé dans la zone cornéosclerale ou cornéale, la longueur de la cour pure atteignant 4,5 mn. Le cristallin plié a été introduit dans l'orifice formé à l'aide d'une pince, ensuite, le cristallin a été avancé à travers le colobome ou la pupille dans la chambre arrière. Après l'enlèvement de la pince le cristallin s'est redressé grâce à son élasticité tandis que les parties d'appui se sont appuyées contre l'équateur de la bourse, ce qui a contribué au centrage de la lentille et à sa bonne fixation étant donné que les parties d'appui font ressort. L'utilisation du cristallin propose est possible pour des procédés traditionnels d'extraction extracapsulaire de la cataracte mis en oeuvre en une seule étape ou en deux etapes ainsi que pour 1 'emploi de la phacoémulsification .

<tb> <SEP> Cristallin <SEP> arti
<tb> <SEP> Cristallin <SEP> arti- <SEP> ficiel <SEP> connu <SEP> en
<tb> <SEP> Indice <SEP> ficiel <SEP> selon <SEP> polythacrylate <SEP> de
<tb> <SEP> I'invention <SEP> méthyle
<tb> Longueur <SEP> de <SEP> la
<tb> coupure, <SEP> mm <SEP> 4,5 <SEP> 6
<tb>

Pendant la période postopératoire on a note une conjonctive modérée du globe de l'oeil comparable a celle du témoin. Après 3 à 4 semaines l'in flammation disparait graduellement avec l'utilisation intense des antibiotiques, des préparations hormonales et des mydriatiques. Les resultats des interventions opératoires ont été observés pendant 24 mois. On a noté l'absence d'inflammation chronique, une bonne fixation des implants, une capacité de réfraction stable.

EXEMPLE 11
Le gel polyacrylamidique conforme à l'invention comprenant (% en poids):
polyacrylamide: 5.0
solution physiologique: 95,0 a été préparé selon l'exemple 10. En tant que solution physiologique on a utilisé une solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium. La polymérisation a été effectuee dans un réacteur dont la cavité intérieure simule la forme d'une lentille de contact connue.

La lentille de contact souple ainsi fabriquée possède les parame- tres suivants:
rayon de courbure de la surface arrière: 7,7 mm
rayon de courbure de la surface avant 8,2 mm
diamètre: 14,5 mm
refraction: 1,75 D
On a effectué une série d'essais sur des animaux (10 lapins) visant à placer, pour une période de 2 a 4 semaines, les lentilles de contact souples sur la cornée.

On a contrôlé les paramètres suivants: déplacement, état de l'épi- thélium de la cornée (a l'aide de biomicroscopie avec de la fluoresceine), réaction de la conjonctive du globe de l'oeil et des paupières. Le déplace- ment des lentilles est modéré et ne dépasse pas 1 mm, aucun phénomère d'allergisation ni d'irritation de la conjonctive, aucun oedème ni érosion de l'épithélium de la cornée n'ont été signalés.

Lors d'une expérience sur les inventeurs qui ont porté les lentilles de contact souples continuellement pendant une longue période (de 1 à 1,5 mois) on a noté une adaptation rapide aux lentilles et l'absence de sensations désagréables. On a constaté une absence complète de réactivité de la conjonctive du globe de l'oeil et des paupières, des phénomènes d'oedème ou d'éro- sion de l'épithélium de la cornée n'ont pas été signales. Le déplacement des lentilles de contact souples n'a pas dépassé 1 mm.

EXEMPLE 12
Le gel polyacrylamidique conforme à l'invention comprenan-t (% en poids):
polyacrylamide: 5,0
solution physiologique: 95,0 a ete préparé comme dans l'exemple 10. En tant que solution physiologique on a utilisé une solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium. La polymérisation a été effectuée dans un réacteur dont la cavité intérieure simule la forme d'une lentille de contact connue.

La lentille de contact souple de réfraction nulle dont l'épaisseur est de 0,4 mm et le diamètre de 15 mm est extraite du réacteur indiqué, lavée de manière decrite dans l'exemple 10 et placée dans une solution aqueuse à 1% d'atropine pendant 40 minutes. Après être extraite de la solution la lentille a été placée sur l'oeil d'un animal. La dilatation pupillaire a été signalée 16 minutes après (début), l'effet maximal aété signalé 40 minutes apres eta été observé pendant 5 jours.

EXEMPLE 13 (comparatif)
Le gel polyacrylamidique comprenant (% en poids): . polyacrylamide: 2,0 de: 2,0
solution physiologique: 98,0 a été prépare de manière décrite dans l'exemple 1. En tant que solution physiologique on a utilisé une solution aqueuse à 0,5% de chlorure de sodium.

Semi-fluide, le gel polyacrylamidique obtenu ne permet pas de fabriquer des plaques, ni de réaliser un lavage et une saturation par des substrats-pour la nutrition des microorganismes et des cellules des animaux et de l'homme, ni l'ensemencement par les microorganismes et par les cellules.

Après addition de substrats nutritifs liquides le gel se dissout dans ces derniers, sa structure de gel étant détruite.

EXEMPLE 14 (comparatif)
Le gel polyacrylamidique conforme à l'invention comprenant (% en poids):
polyacrylamide: 29,0
solution physiologique: 71,0 a été préparé de la manière décrite dans l'exemple 1.

En tant que solution physiologique on a utilisé une solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium. La consistance du gel polyacrylamidique obtenu a été très rigide et, le gel cassait au pliage. Le lavage des plaques de gel visant à éliminer les composants de base n'a pas été efficace et a exigé beaucoup de temps (15 jours et davantage). La saturation du gel par les substrats pour la nutrition des microorganismes et des cultures cellulaires a été faible, le gel a vite seché avec formation de fissures à la température de 37"C et s'est mal fixé dans les boites de Pétri.

Bien entendu, l'invention n'est nullement limitée aux modes de réalisation décrits qui n'ont été donnes qu'à titre d'exemples. En particulier, elle comprend tous les moyens constituant des équivalents des moyens décrits ainsi que leurs combinaisons, si celles-ci sont exécutées suivant son esprit et mises en oeuvre dans le cadre des revendications qui suivent.

Claims

REVENDICATIONS

1. Gel polyacrylamidique pour emploi médical et biologique comprenant un polymère de l'acrylamide et du méthylène-bis-acrylamide, caractérisé en ce qu'il comprend, en outre, une solution physiologique, le pourcentage en poids des composants étant le suivant:

polyacrylaiiiide: 3,0 à 28,0

solution physiologique: 72,0 à 97,0

2. Gel polyacrylamidique pour emploi-medical et biologique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'en tant que solution physiologique sont utilisés: une solution aqueuse à 0,5% de chlorure de sodium ou une solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium, ou la solution de Riger-Lock, ou la solution de Earle, ou la solution de Hanks, ou le milieu 199, ou le milieu de Eagle, ou une solution aqueuse à 5% de glucose.

3. Gel polyacrylaiiiidique pour emploi médical et biologique selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'en tant que solution physiologique il comprend une solution aqueuse à 0,5% de chlorure de sodium, le pourcentage en poids étant le suivant:

polyacrylaiiiide: 6,0 a 15,0

solution aqueuse à 0,5%

de chlorure de sodium: 85,0 à 94,0

4.Gel polyacrylamidique pour emploi médical et biologique selon la revendication 2. caractértsè en ce qu'en tant que solution physiologique il comprend la solution aqueuse a 0,9% de chlorure de sodium, le pourcentage en poids des composants étant le suivant:

polyacrylaiiiide: 5,0 à 18,0

solution aqueuse à 0,9%

de chlorure de sodium: 82,0 à 95,0

5. Gel polyacrylamidique pour emploi médical et biologique selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'en tant que solution physiologique il comprend la solution aqueuse à 5% de glucose, le pourcentage en poids des composants étant le suivant: . polyacrylamide: 4,0 de: 4,0 a 20,0

solution aqueuse à 5%

de glucose: 80,0 à 96,0

6.Gel polyacrylamidique selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il est constitué par un copolymère de 0,5 a 20 d'acrylamide et de 99,5 à 80% d'un alcoylène-bis-acrylamide.

7. Procédé de. préparation de gel polyacrylamidique pour emploi médical et biologique selon la revendication 1 consistant dans la polymérisation de l'acrylamide et du méthylène-bis-acrylamide suivie d'un lavage du produit désiré, caractérisé en ce que la polymérisation de l'acrylamide et du méthylène-bis-acrylamide ainsi que le lavage du produit désiré sont effectués en sein d'une solution physiologique.

8. Procédé de préparation de gel polyacrylamidique pour emploi médical et biologique selon la revendication 7, caractérisé en ce qu en tant que solution physiologique sont utilisés: une solution aqueuse à 0,5% de chlorure de sodium ou une solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium, ou une solution de Ringer-Lockart, ou une solution de Earle, ou une solution de

Hanks, ou le milieu 199, ou le milieu de Eagle, ou une solution aqueuse 5% de glucose.

9. Procédé de préparation de gel polyacrylamidique pour emploi médical et biologique selon la revendication 7, caractérise en ce que la polymérisation de l'acrylamide et du mèthylène-bis-acrylamide est effectuée dans un réacteur dont la cavité intérieure simule la forme du cristallin artificiel, cette opération étant suivie du lavage du produit désiré effectue, ainsi que la polymérisation au sein d'une solution aqueuse à 0,9% de chlorure de sodium.

10. Procéde de préparation de gel polyacrylamidique pour emploi médical et biologique selon la revendication 7, caractérisé en ce que la polymérisation de l'acrylamide et du méthylène-bis-acrylamide est effectuée dans un réacteur dont la cavité intérieure simule la forme de la lentille de contact, cette opération étant suivie du lavage du produit désiré effectué, ainsi que la polymérisation au sein d'une solution aqueuse à 0,9% de chlorure- de sodium.