FI95998B - t-PA solubilization - Google Patents
t-PA solubilization Download PDFInfo
- Publication number
- FI95998B FI95998B FI913907A FI913907A FI95998B FI 95998 B FI95998 B FI 95998B FI 913907 A FI913907 A FI 913907A FI 913907 A FI913907 A FI 913907A FI 95998 B FI95998 B FI 95998B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- mol
- naoh
- process according
- acid
- activity
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/49—Urokinase; Tissue plasminogen activator
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
- Oscillators With Electromechanical Resonators (AREA)
- Lubricants (AREA)
Abstract
Description
95998 t-PA-liuotus - t-PA-solubilisering95998 t-PA leaching - t-PA solubilization
Ihmisen plasminogeenin kudosaktivaattori t-PA on terapeut-5 tisesti erittäin merkittävä verihyytymien liuottamisessa kun kyseessä ovat esim. sydänveritulpat. t-PA vaikuttaa hyytymiskaskadiin aktivoimalla plasminogeeniä plasmiiniksi. Plasmiini puolestaan liuottaa fibriiniä, joka on hyytyneen veren pääasiallisin, tukirungon muodostava valkuaisaine.The tissue activator of human plasminogen, t-PA, is therapeutically very important in the dissolution of blood clots, for example in the case of cardiac thrombosis. t-PA affects the coagulation cascade by activating plasminogen to plasmin. Plasmin, in turn, dissolves fibrin, the major protein that forms the backbone of clotted blood.
1010
Luonnon t-PA muodostuu useasta funktionaalisesta alueesta: F, G, ΚΙ, K2 ja P. Alue P sisältää proteolyyttisesti aktiivisen keskuksen, joka vaikuttaa plasminogeenin jakautumiseen plasmiiniksi. t-PA:n tai erilaisten t-PA-muteii-15 nien, joista on deletoitunut jokin alueista F, G, K1 ja K2, valmistaminen geeniteknologian keinoin eukaryottisissa tai prokaryoottisissa soluissa on tunnettua. Toisin kuin luonnon t-PA:n ollessa kysessä, prokaryoottisoluissa valmistetut t-PA-johdannaiset ovat valmistuttuaan ei-glykosyloidus-20 sa muodossa.Natural t-PA consists of several functional regions: F, G, ΚΙ, K2, and P. Region P contains a proteolytically active center that affects the distribution of plasminogen into plasmin. The production of t-PA or various t-PA muteins with one of the regions F, G, K1 and K2 deleted by genetic engineering in eukaryotic or prokaryotic cells is known. In contrast to natural t-PA, t-PA derivatives prepared in prokaryotic cells are in a non-glycosylated form.
Proteiinit, joilla on t-PA-aktiivisuutta, liukenevat huonosti puskuriaineisiin, joita tavallisesti käytetään proteiinien liuottamiseen, esim 50 mmol/1 Na-sitraattia, 50 • 25 mmol/1 fosfaattia tai fysiologista NaCl-liuosta. Terapeut tisena aineena käytettävän t-PA-aktiivisen proteiinin entsyymiaktiivisuuden tulisi kuitenkin olla vähintään 0,25 MU/ml, esim. 0,25 - 10 MU/ml.Proteins with t-PA activity are poorly soluble in buffers commonly used to dissolve proteins, e.g. 50 mmol / l Na citrate, 50 • 25 mmol / l phosphate or physiological NaCl solution. However, the enzyme activity of the t-PA active protein used as a therapeutic agent should be at least 0.25 MU / ml, e.g. 0.25 to 10 MU / ml.
30 EP-A-0217379 tuo esiin menetelmän, jonka avulla t-PA:n liu- kenevuutta lisätään käyttämällä neutraaleja tai lievästi aikalisiä arginiinikoostumuksia. Menetelmän eräänä haittapuolena on kuitenkin voimakkaasti konsentroidun t-PA-liuos-ten huono stabiilisuus neutraaleissa tai lievästi alkali-35 sissa olosuhteissa.EP-A-0217379 discloses a method for increasing the solubility of t-PA using neutral or slightly temporal arginine compositions. However, one disadvantage of the process is the poor stability of highly concentrated t-PA solutions under neutral or slightly alkaline conditions.
2 95998 US-patentti 4777043 tuo esiin farmaseuttisen koostumuksen, joka sisältää ihmisen t-PA:ta ja farmaseuttisesti hyväksyttävää arginiumioneja sisältävää puskuriainetta, kloridi-ionien pitoisuus enimmillään 0,3 mol/1. EP-A-0156169, EP-5 A-0303351 ja EP-A-0297294 puolestaan käsittelevät mahdolli suutta edistää t-PA-aktiivisten proteiinien liukenevuutta puskuriaineissa käyttämällä aminohappoja, niiden suoloja, johdannaisia tai homologeja. t-PA:ta voidaan stabiloida myös käyttämällä gelatiinilisäystä (EP-A-0123304), albu-10 miinilisäystä (EP-A-0112940) tai lisäämällä jonkin sakka-ridin polyrikkihappoestereitä tai sulfatoituja sokereita (EP-A-0198321). PCT/US88/04402 tuo esiin menetelmän t-PA:n liukenevuuden lisäämiseen käyttämällä vesipitoista väliainetta ja emäksistä aminohappoa, erityisesti arginiinia, 15 pitoisuuden ollessa 0,02 - 0,2 mol/1 sekä jotain sit- ruunahapporyhmää, pitoisuutena 0,02 - 0,08 mol/1, pH-arvo 5-8.U.S. Patent No. 2,95,998 discloses a pharmaceutical composition comprising human t-PA and a pharmaceutically acceptable buffer containing arginium ions at a chloride ion content of up to 0.3 mol / L. EP-A-0156169, EP-5 A-0303351 and EP-A-0297294, in turn, discuss the possibility of promoting the solubility of t-PA active proteins in buffers by using amino acids, their salts, derivatives or homologues. t-PA can also be stabilized by the addition of gelatin (EP-A-0123304), the addition of Albu-10 (EP-A-0112940) or by the addition of polysulphuric acid esters or sulphated sugars of an saccharide (EP-A-0198321). PCT / US88 / 04402 discloses a method for increasing the solubility of t-PA using an aqueous medium and a basic amino acid, especially arginine, at a concentration of 0.02 to 0.2 mol / L and a citric acid group at a concentration of 0.02 to 0 .08 mol / l, pH 5-8.
Nämä erilaiset yhdistelmät eivät kuitenkaan sovi kaikille 20 valkuaisaineille, joilla ilmenee t-PA-aktiivisuutta. Erityisen selvää oli, että glykosyloimaton t-PA, glykolysoi-mattoman t-PA:n muteiinit ja glykosyloitu t-PA liukenevat kaikki hyvin eri tavoin.However, these different combinations are not suitable for all proteins that exhibit t-PA activity. It was particularly clear that unglycosylated t-PA, muteins of unglycolyzed t-PA, and glycosylated t-PA all dissolve in very different ways.
; 25 Keksinnön tarkoituksena oli saada aikaan farmaseuttinen valmiste, joka sisältää glykosyloitua ja glykosyloimatonta t-PA:ta tai t-PA-muteiineja, joiden aktiivisuus on yli 0,25 MU/ml, ja jossa t-PA pysyy stabiilina entistä pitemmän aikaa.; The object of the invention was to provide a pharmaceutical preparation containing glycosylated and non-glycosylated t-PA or t-PA muteins with an activity of more than 0.25 MU / ml and in which the t-PA remains stable for a longer period of time.
30 Tähän päästiin valmistamalla lääkekoostumus, joka sisältää t-PA-aktiivista proteiinia, pitoisuus vähintään 0,4 MU/ml pH-arvossa 4,5 - 9, ja ainetta, joka valitaan ryhmästä sitruunahappo, askorbiibihappo, 2-oksoglutaarihappo, fumaari-35 happo, Tris ja EDTA, joiden pitoisuus on vähintään 0,2 mol/1.This was achieved by preparing a pharmaceutical composition comprising t-PA active protein at a concentration of at least 0.4 MU / ml at pH 4.5 to 9 and a substance selected from the group consisting of citric acid, ascorbic acid, 2-oxoglutaric acid, fumaric acid , Tris and EDTA in a concentration of 0,2 mol / l or more.
<1 : IMI mil II ill 3 95998<1: IMI mil II ill 3 95998
Edullisesti tämän aineen pitoisuus saisi olla 0,2-1 mol/1, vielä edullisemmin 0,3-1 mol/1.Preferably the concentration of this substance should be 0.2-1 mol / l, even more preferably 0.3-1 mol / l.
Yhdisteelle sopiva pH-arvo on 4,5 - 9, erityisen edullinen 5 on 6 - 7,5 .A suitable pH for the compound is 4.5 to 9, particularly preferred is 6 to 7.5.
Keksinnössä t-PA-aktiivisilla proteiineilla tarkoitetaan prokaryoottisistä tai eukaryoottisista organismeista saatavaa modifioimatonta t-PA:ta samoin kuin kaikkia t-PA-mute-10 iineja. Esimerkkejä t-PA-muteiineista kuvaa esimerkiksi Harris (Protein Engineering 1, 1987, 449-458).In the invention, t-PA-active proteins are meant unmodified t-PA from prokaryotic or eukaryotic organisms as well as all t-PA mute-10s. Examples of t-PA muteins are described, for example, by Harris (Protein Engineering 1, 1987, 449-458).
Edullisesti keksinnön mukainen koostumus saisi sisältää natiivia glykosyloitua t-PA:ta esim. CHO-soluista. Jos 15 keksinnön mukainen valmiste sisältää natiivia glykosyloitua t-PA:ta, sen entsymaattisen aktiivisuuden tulee edullisesti olla vähintään 1,4 MU/ml.Preferably, the composition of the invention should contain native glycosylated t-PA from e.g. CHO cells. If the preparation according to the invention contains native glycosylated t-PA, its enzymatic activity should preferably be at least 1.4 MU / ml.
Yksikkö U on määritelty t-PA-aktiivisuuden yksikkö (WHO, 20 National Institute for Biological Standards and Control).Unit U is a defined unit of t-PA activity (WHO, 20 National Institute for Biological Standards and Control).
Edelleen edullista on, että käytetään glykosyloimatonta prokaryoottista t-PA:ta (pro-t-PA), joka voidaan saada aikaan patentin DE-3537708 mukaisesti. Pro-t-PA:11a tarkoi-j 25 tetaan t-PA:ta, joka alkaa aminohaposta -3 (Gly) aminohappoon +1 (Ser), ja päättyy kohtaan 527 (Pro) (Harris, Protein Engineering 1, 1987, 449-458). Jos keksinnön mukainen valmiste sisältää pro-t-PA:ta, sen entsymaattisen aktiivisuuden tulee olla vähintään 0,25 MU/ml.It is further preferred to use non-glycosylated prokaryotic t-PA (pro-t-PA) which can be obtained according to DE-3537708. Pro-t-PA means t-PA starting from amino acid -3 (Gly) to amino acid +1 (Ser) and ending at 527 (Pro) (Harris, Protein Engineering 1, 1987, 449 -458). If the preparation according to the invention contains pro-t-PA, its enzymatic activity must be at least 0.25 MU / ml.
3030
Edelleen edullinen on glykosyloimaton t-PA-muteiini, jossa on alueet Kl, K2 ja P, ja jota merkitään pro-KlK2P (valmistus kuten DE—39233391.1). pro-KlK2P alkaa aminohapoista 85-92 ja päättyy kohtaan 527 (Pro). Jos keksinnön mukainen 35 valmiste sisältää pro-KlK2P:tä, sen entsymaattisen aktiivisuuden tulee olla vähintään 0,4 MU/ml.Further preferred is a non-glycosylated t-PA mutein having the regions K1, K2 and P, denoted pro-KlK2P (preparation as in DE-39233391.1). pro-KlK2P starts at amino acids 85-92 and ends at position 527 (Pro). If the preparation of the invention contains pro-KlK2P, its enzymatic activity should be at least 0.4 MU / ml.
95998 495998 4
Edullinen on myös glykosyloimaton t-PA-muteiini, jossa on alueet K2 ja P, ja jota merkitään pro-K2P (valmistus kuten EP-A-0382174). pro-K2P alkaa aminohapoista 174-179 päättyy kohtaan 527 (Pro). Sekä K2P että pro-KlK2P voivat sisältää 5 osittain tai kokonaan aminohapot -3 (Gly) aminohappoon +5 (Ile) (Harris, supra). Jos keksinnön mukainen valmiste sisältää pro-K2P:tä, sen entsymaattisen aktiivisuuden tulee olla vähintään 1,4 MU/ml. Kuitenkin kaikki muutkin proka-ryoottiset tai eukaryoottiset t-PA-muteiinit ovat sopivia.Also preferred is a non-glycosylated t-PA mutein with regions K2 and P, designated pro-K2P (preparation as in EP-A-0382174). pro-K2P starts at amino acids 174-179 and ends at position 527 (Pro). Both K2P and pro-KlK2P may contain 5 partially or completely amino acids -3 (Gly) to amino acid +5 (Ile) (Harris, supra). If the preparation according to the invention contains pro-K2P, its enzymatic activity must be at least 1.4 MU / ml. However, all other prokaryotic or eukaryotic t-PA muteins are suitable.
1010
Seuraavassa muutamia keksinnön mukaisten valmisteiden erityisen edullisia koostumuksia.The following are some particularly preferred compositions of the preparations of the invention.
Eräs niistä sisältää 300 mmol/1 sitruunahappoa/NaOH, pH 6.One of them contains 300 mmol / l citric acid / NaOH, pH 6.
15 Eräs toinen sisältää 300 mmol/1 askorbiibihappoa, pH 6.Another contains 300 mmol / l ascorbic acid, pH 6.
Eräs sisältää 300 mmol/1 2-oksoglutaarihappoa, pH 6. Eräs sisältää 300 mmol/1 EDTA, pH 6. Eräs sisältää 300 mmol/1 fumaarihappoa/NaOH, pH 6. Eräs sisältää 1 mol/1 Tris/HCl, pH 7,2.One contains 300 mmol / l 2-oxoglutaric acid, pH 6. One contains 300 mmol / l EDTA, pH 6. One contains 300 mmol / l fumaric acid / NaOH, pH 6. One contains 1 mol / l Tris / HCl, pH 7, 2.
2020
Vielä eräs keksinnön kohteista on lääkeaine, joka perustuu t-PA-aktiiviseen proteiiniin vaikuttavana aineena liuoksessa tai lyofilisaattina vaikuttavien aineiden kanssa, mahdollisesti lisänä muita sopivia farmaseuttisesti hyväksyt-: 25 täviä lisä-, apu-, kantaja- ja täyteaineita.Another object of the invention is a medicament based on the t-PA active protein as active ingredient in solution or as a lyophilisate with active ingredients, optionally in addition to other suitable pharmaceutically acceptable excipients, auxiliaries, carriers and excipients.
Keksinnön mukaisia farmaseuttisia valmisteita voidaan käyttää esimerkiksi injektio- tai infuusioliuoksissa. Tämä voidaan toteuttaa valmistamalla ruiskutusvalmis liuos, joka 30 sisältää keksinnön mukaisen koostumuksen. On kuitenkin mahdollista käyttää keksinnön mukaista koostumusta lyofi-lisaattien muodossa. Ne puolestaan voidaan rekonstruoida tunnettuja injektointiin sopivia väliaineita tai liuoksia käyttäen. Injektointiväliaineista edullisin on vesi, joka 35 sisältää muitakin tavallisia lisäaineita kuten stabilisoin-tiaineita, liuotinväliaineita, puskurlaineita ja isotonisia 5 95998 lisäaineita (esim. fysiologinen NaCl-konsentraatti). Tällaisia lisäaineita ovat esimerkiksi manniitti, tartraatti-tai sitraattipuskuri, etanoli, kompleksinmuodostajat kuten etyleenidiamiinitetraetikkahappo ja niiden ei-toksiset suo-5 lat, esim. suurimolekulääriset polymeerit kuten nestemäinen polyetyleenioksidi viskositeetin säätelyssä. Injektoinnis-sa käytettävien nestemäisten kantoaineiden tulee olla steriilejä, ja edullisesti ne saisivat olla ampulleihin suljettuja.The pharmaceutical preparations according to the invention can be used, for example, in solutions for injection or infusion. This can be accomplished by preparing a ready-to-inject solution containing a composition of the invention. However, it is possible to use the composition according to the invention in the form of lyophilisates. They, in turn, can be reconstructed using known injection media or solutions. Of the injection media, the most preferred is water, which also contains other common additives such as stabilizers, solvent media, buffers and isotonic additives (e.g. physiological NaCl concentrate). Such additives include, for example, mannitol, tartrate or citrate buffer, ethanol, complexing agents such as ethylenediaminetetraacetic acid and their non-toxic salts, e.g. high molecular weight polymers such as liquid polyethylene oxide for viscosity control. Liquid carriers for injection should be sterile and should preferably be enclosed in ampoules.
10 Tämän keksinnön kohteena on vielä glykosyloitujen t-PA-ak-tiivisten proteiinien käyttö keksinnön mukaisten farmaseuttisten valmisteiden valmistukseen.The present invention further relates to the use of glycosylated t-PA active proteins for the preparation of the pharmaceutical preparations according to the invention.
15 Seuraavat esimerkit selventävät keksinnön konkreettista toteutusta.The following examples illustrate the concrete implementation of the invention.
Esimerkki 1Example 1
Erilaisten aineiden vaikutus glykosyloimattomien t-PA-mute-20 iinien (aluekoostumus K2P) liukoisuuteenEffect of different substances on the solubility of non-glycosylated t-PA mute-20ins (regional composition K2P)
Esimerkissä kuvataan pro-K2P:n (valmistus kuten EP-A-0382174) liukenevuutta erilaisiin puskuriaineisiin. Kuten taulukosta 1 voidaan nähdä, pro-K2P liukenee kokeiltuihin : 25 puskuriliuoksiin aktiviteetilla, joka on selvästi suurempi kuin 1,4 MU/ml.The example describes the solubility of pro-K2P (preparation as in EP-A-0382174) in various buffers. As can be seen from Table 1, pro-K2P is soluble in the tested: 25 buffer solutions with an activity well above 1.4 MU / ml.
170 ml puhdistettua pro-K2P:ta (liuotettuna, 0,5 mol/1 ar-giniini/fosforihappo, pH 7,2) ultrasuodatettiin , konsent-30 roinnissa käytettiin Amicon YM-10-kalvoa. 1 ml konsent- raattia dialysoitiin vasten jokaista taulukossa 1 mainittua puskurlainetta. Koe-erien sentrifugoinnin jälkeen mitattiin kirkkaan pinnalle jäävän osan entsymaattinen aktiivisuus.170 ml of purified pro-K2P (dissolved, 0.5 mol / l arginine / phosphoric acid, pH 7.2) was ultrafiltered, using an Amicon YM-10 membrane for concentration. 1 ml of concentrate was dialyzed against each of the buffer waves listed in Table 1. After centrifugation of the test batches, the enzymatic activity of the clear surface was measured.
35 6 9599835 6 95998
Entsymaattinen aktiivisuus on ilmoitettu tilavuusaktivi-teettina MU/ml ja kokonaisaktiviteettina MU.Enzymatic activity is expressed as volume activity MU / ml and total activity MU.
t-PA-aktiivisuus voidaan mitata tavalliseen tapaan hajotta-5 maila käyttäen kromogeenistä substraattia (H. Lill, ZGIMAL 42, (1987), 478-486). Yksikkö U on määritelty t-PA:n aktiviteetti (WHO, National Institute for Biological Standards and control).t-PA activity can be measured in the usual manner by degrading 5 using a chromogenic substrate (H. Lill, ZGIMAL 42, (1987), 478-486). Unit U is defined as t-PA activity (WHO, National Institute for Biological Standards and Control).
10 TAULUKKO 110 TABLE 1
Puskuriaine AktiviteettiBuffer Agent Activity
MU/ml MUMU / ml MU
15 _ 0,3 mol/1 sitruunahappo/NaOH, pH 6 2,23 2,05 0,3 mol/1 askorbiinihappo/NaOH, pH 6 1,68 1,95 1 mol/1 Tris/HCl, pH 7,2 8,76 5,8 0,3 mol/1 EDTA/NaOH, pH 6 1,95 1,95 20 0,3 mol/1 2-oksoglutaarihappo, pH 6 2,64 3,17 0,3 mol/1 fumaarihappo/NaOH, pH 6 1,85 4,0815 _ 0.3 mol / l citric acid / NaOH, pH 6 2.23 2.05 0.3 mol / l ascorbic acid / NaOH, pH 6 1.68 1.95 1 mol / l Tris / HCl, pH 7.2 8.76 5.8 0.3 mol / l EDTA / NaOH, pH 6 1.95 1.95 20 0.3 mol / l 2-oxoglutaric acid, pH 6 2.64 3.17 0.3 mol / l fumaric acid / NaOH, pH 6 1.85 4.08
Esimerkki 2 j 25 pro-KlK2P:n liukenevuusExample 2 Solubility of 25-KLC2P
Puhdistettua pro-KlK2P:ta (liuotettuna, 0,5 mol/1 arginii-ni/H3P04, pH 7,2) ultrasuodatettiin, konsentroinnissa käytettiin Amicon YM-10-kalvoa. 1 ml konsentraattia (aktivi-30 teetti 3,5 MU/ml) dialysoitiin vasten jokaista taulukossa 2 t mainittua puskuriainetta. Koe-erien sentrifugoinnin jälkeen mitattiin kirkkaan pinnalle jäävän osan entsymaattinen aktiivisuus.Purified pro-KLC2P (dissolved, 0.5 M arginine / H 3 PO 4, pH 7.2) was ultrafiltered using an Amicon YM-10 membrane. 1 ml of concentrate (activity 3.5 MU / ml) was dialyzed against each of the buffers listed in Table 2 t. After centrifugation of the test batches, the enzymatic activity of the clear surface was measured.
35 Entsymaattinen aktiivisuus on ilmoitettu tilavuusaktivi-teettina MU/ml ja kokonaisaktiviteettina MU.35 Enzymatic activity is expressed as volume activity MU / ml and total activity MU.
7 95998 t-PA-aktiivisuus voidaan mitata tavalliseen tapaan hajottamalla käyttäen kromogeenistä substraattia (H. Lill, ZGIMAL 42, (1987), 478-486). Yksikkö U on määritelty t-PA:n aktiviteetti (WHO, National Institute for Biological Standards 5 and control).7 95998 t-PA activity can be measured in the usual manner by digestion using a chromogenic substrate (H. Lill, ZGIMAL 42, (1987), 478-486). Unit U is the defined activity of t-PA (WHO, National Institute for Biological Standards 5 and control).
TAULUKKO 2 10 Puskuriaine AktiviteettiTABLE 2 10 Buffer Agent Activity
MU/ml MUMU / ml MU
1 mol/1 Tris/HCl, pH 7,2 1,65 1,07 151 mol / l Tris / HCl, pH 7.2 1.65 1.07 15
Esimerkki 3 pro-tPA:n liukenevuusExample 3 Solubility of pro-tPA
Puhdistettua pro-tPA:ta (liuotettuna, 0,5 mol/1 arginii-20 ni/H3P04) ultrasuodatettiin, konsentroinnissa käytettiinPurified pro-tPA (dissolved, 0.5 mol / L arginine-20 μl / H 3 PO 4) was ultrafiltered, concentrated using
Amicon YM-10-kalvoa. 1 ml konsentraattia (aktiviteetti 2,4 MU/ml) dialysoitiin vasten jokaista taulukossa 3 mainittua puskurlainetta. Koe-erien sentrifugoinnin jälkeen mitattiin kirkkaan pinnalle jäävän osan entsymaattinen aktiivi-25 suus.Amicon YM-10 film. 1 ml of concentrate (activity 2.4 MU / ml) was dialyzed against each of the buffer waves listed in Table 3. After centrifugation of the test batches, the enzymatic activity of the clear surface was measured.
Entsymaattinen aktiivisuus on ilmoitettu tilavuusaktivi-teettina MU/ml ja kokonaisaktiviteettina MU.Enzymatic activity is expressed as volume activity MU / ml and total activity MU.
30 t-PA-aktiivisuus voidaan mitata tavalliseen tapaan hajotta-- : maila käyttäen kromogeenistä substraattia (H. Lill, ZGIMAL30 t-PA activity can be measured in the usual manner by degradation using a chromogenic substrate (H. Lill, ZGIMAL
42, (1987), 478-486). Yksikkö U on määritelty t-PA:n aktiviteetti (WHO, National Institute for Biological Standards and control).42, (1987), 478-486). Unit U is defined as t-PA activity (WHO, National Institute for Biological Standards and Control).
35 95998 8 TAULUKKO 3 5 Puskurianne Aktiviteetti35 95998 8 TABLE 3 5 Your Buffering Activity
MU/ml MUMU / ml MU
0,3 mol/1 sitruunahappo/NaOH, pH 6 0,29 0,16 1 mol/1 Tris/HCl, pH 7,2 2,15 1,07 100.3 mol / l citric acid / NaOH, pH 6 0.29 0.16 1 mol / l Tris / HCl, pH 7.2 2.15 1.07 10
Esimerkki 4 CHO-tPA:n liukenevuus 15Example 4 Solubility of CHO-tPA 15
Puhdistettua CHO-tPA:ta (liuotettuna, 0,5 mol/1 arginii-ni/H3P0«) ultrasuodatettiin, konsentroinnissa käytettiin Amicon YM-10-kalvoa. 1 ml konsentraattia (aktiviteetti 6,6 MU/ml) dialysoitiin vasten jokaista taulukossa 3 mainittua 20 puskurlainetta. Koe-erien sentrifugoinnin jälkeen mitattiin kirkkaan pinnalle jäävän osan entsymaattinen aktiivisuus.Purified CHO-tPA (dissolved, 0.5 mol / L arginine / H 3 PO 3) was ultrafiltered, using an Amicon YM-10 membrane for concentration. 1 ml of concentrate (activity 6.6 MU / ml) was dialyzed against each of the 20 buffer waves listed in Table 3. After centrifugation of the test batches, the enzymatic activity of the clear surface was measured.
Entsymaattinen aktiivisuus on ilmoitettu tilavuusaktivi-25 teettina MU/ml ja kokonaisaktiviteettina MU.Enzymatic activity is expressed as volume activity MU / ml and total activity MU.
t-PA-aktiivisuus voidaan mitata tavalliseen tapaan hajottamalla käyttäen kromogeenistä substraattia (H. Lill, ZGIMAL 42, (1987), 478-486). Yksikkö U on määritelty t-PA:n akti-30 viteetti (WHO, National Institute for Biological Standards and control).t-PA activity can be measured in the usual manner by degradation using a chromogenic substrate (H. Lill, ZGIMAL 42, (1987), 478-486). Unit U is defined as t-PA Akti-30 activity (WHO, National Institute for Biological Standards and Control).
il : m i mu 1.1 x αι 35 9 95998 TAULUKKO 4il: m i mu 1.1 x αι 35 9 95998 TABLE 4
Puskuriaine AktiviteettiBuffer Agent Activity
5 MU/ml MU5 MU / ml MU
1 mol/1 Tris/HCl, pH 7,2 6,16 6,49 0,3 mol/1 sitruunahappo/NaOH, pH 6 4,44 4,441 mol / l Tris / HCl, pH 7.2 6.16 6.49 0.3 mol / l citric acid / NaOH, pH 6 4.44 4.44
Claims (15)
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3942145 | 1989-12-20 | ||
DE3942145A DE3942145A1 (en) | 1989-12-20 | 1989-12-20 | T-PA SOLUBILIZATION |
EP9002249 | 1990-12-19 | ||
PCT/EP1990/002249 WO1991008764A1 (en) | 1989-12-20 | 1990-12-19 | SOLUBILIZATION OF t-PA |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI913907A0 FI913907A0 (en) | 1991-08-19 |
FI95998B true FI95998B (en) | 1996-01-15 |
FI95998C FI95998C (en) | 1996-04-25 |
Family
ID=6395928
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI913907A FI95998C (en) | 1989-12-20 | 1991-08-19 | t-PA-leaching |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0458929B1 (en) |
JP (1) | JPH0657660B2 (en) |
KR (1) | KR920700683A (en) |
AT (1) | ATE102046T1 (en) |
AU (1) | AU625831B2 (en) |
CA (1) | CA2046598C (en) |
DE (2) | DE3942145A1 (en) |
FI (1) | FI95998C (en) |
HU (2) | HUT60133A (en) |
NO (1) | NO305582B1 (en) |
WO (1) | WO1991008764A1 (en) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3942141A1 (en) * | 1989-12-20 | 1991-06-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | K2P PRO STABILIZATION |
JP4601627B2 (en) | 2004-01-16 | 2010-12-22 | バイオデル, インコーポレイテッド | Sublingual drug delivery device |
US20080090753A1 (en) | 2004-03-12 | 2008-04-17 | Biodel, Inc. | Rapid Acting Injectable Insulin Compositions |
US9060927B2 (en) | 2009-03-03 | 2015-06-23 | Biodel Inc. | Insulin formulations for rapid uptake |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ZW14486A1 (en) * | 1985-07-29 | 1986-10-22 | Smithkline Beckman Corp | Pharmaceutical dosage unit |
US4777043A (en) * | 1985-12-17 | 1988-10-11 | Genentech, Inc. | Stabilized human tissue plasminogen activator compositions |
GB8612868D0 (en) * | 1986-05-27 | 1986-07-02 | Mars G B Ltd | Beverage packages |
US4830853A (en) * | 1986-10-20 | 1989-05-16 | Warner-Lambert Company | Drug compositions stabilized against oxidation |
US4898826A (en) * | 1987-12-10 | 1990-02-06 | Invitron Corporation | Method to solubilize tissue plasminogen activator |
US4980165A (en) * | 1989-01-27 | 1990-12-25 | Genetics Institute, Inc. | Pharmaceutical formulations of plasminogen activator proteins |
DE3942142A1 (en) * | 1989-12-20 | 1991-06-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | STABILIZATION OF GLYCOSYLATED T-PA |
-
1989
- 1989-12-20 DE DE3942145A patent/DE3942145A1/en not_active Withdrawn
-
1990
- 1990-12-19 HU HU912740A patent/HUT60133A/en unknown
- 1990-12-19 CA CA002046598A patent/CA2046598C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 KR KR1019910700927A patent/KR920700683A/en not_active Application Discontinuation
- 1990-12-19 AU AU69149/91A patent/AU625831B2/en not_active Ceased
- 1990-12-19 WO PCT/EP1990/002249 patent/WO1991008764A1/en active IP Right Grant
- 1990-12-19 DE DE91900785T patent/DE59004814D1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 JP JP3501251A patent/JPH0657660B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-19 HU HU912740A patent/HU208630B/en unknown
-
1991
- 1991-07-12 AT AT91900785T patent/ATE102046T1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-07-12 EP EP91900785A patent/EP0458929B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-15 NO NO912775A patent/NO305582B1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-08-19 FI FI913907A patent/FI95998C/en active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HUT60133A (en) | 1992-08-28 |
NO305582B1 (en) | 1999-06-28 |
WO1991008764A1 (en) | 1991-06-27 |
ATE102046T1 (en) | 1994-03-15 |
DE59004814D1 (en) | 1994-04-07 |
AU625831B2 (en) | 1992-07-16 |
DE3942145A1 (en) | 1991-06-27 |
FI913907A0 (en) | 1991-08-19 |
JPH04503680A (en) | 1992-07-02 |
EP0458929B1 (en) | 1994-03-02 |
CA2046598A1 (en) | 1991-06-21 |
HU208630B (en) | 1993-12-28 |
JPH0657660B2 (en) | 1994-08-03 |
CA2046598C (en) | 1997-01-14 |
NO912775D0 (en) | 1991-07-15 |
FI95998C (en) | 1996-04-25 |
KR920700683A (en) | 1992-08-10 |
HU912740D0 (en) | 1992-01-28 |
NO912775L (en) | 1991-07-15 |
AU6914991A (en) | 1991-07-18 |
EP0458929A1 (en) | 1991-12-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5770700A (en) | Liquid factor IX formulations | |
US5834028A (en) | Soluble thrombomodulin-containing composition | |
FI85335C (en) | Process for Preparation of Lyophilized Pharmaceutical Tissue Plasma Minogen Activator (t-PA) Composition | |
IE60310B1 (en) | Stabilised human protein preparations | |
JPH0672105B2 (en) | Thrombolytic agent and manufacturing method thereof | |
JP2690944B2 (en) | High concentration solution of protein having tissue plasminogen activator activity | |
US4980165A (en) | Pharmaceutical formulations of plasminogen activator proteins | |
US5747030A (en) | Pharmaceutical preparation containing plasminogen activators | |
FI95998B (en) | t-PA solubilization | |
US5352452A (en) | Stabilized compositions containing non-glysylated human tissue type plasminogen activator derivative K2P pro | |
US5409699A (en) | Compositions containing glycosylated molecules having human tissue type plasminogen activator enzymatic activity | |
US5366730A (en) | Stabilized compositions having human tissue type plasminogen activator enzymatic activity | |
US5352453A (en) | Compositions containing non-glycosylated human tissue type plasminogen activator | |
FI98601C (en) | A process for preparing a pharmaceutical preparation of a non-glycosylated t-PA derivative K1K2P | |
JPH0418032A (en) | Fibrinolytic agent containing tissue plasminogen activator or derivative thereof | |
JPH0597703A (en) | Modified tissue plasminogen-activating factor-containing composition | |
JPH0369332B2 (en) | ||
JP2001081040A (en) | Tissue plasminogen activator-containing composition | |
JPS6259221A (en) | Composition containing tissue plasminogen activating factor |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
BB | Publication of examined application |