FI84834C

FI84834C - Process for the preparation of therapeutically useful steroid derivatives of the androstancer series

Info

Publication number: FI84834C
Application number: FI860815A
Authority: FI
Inventors: Kira Nikolaevna Kurdjumova; Elizaveta Nikolae Shkodinskaya; Ljudmila Pavlovna Sushinina; Nina Dmitrievna Lagova; Zoya Petrovna Sofiina; Irina Mikhailovna Valueva; Leonid Fedorovich Larionov; Galina Nikolaevna Platonova; Lev Natanovich Volovelsky; Irina Mikhailovna Kuznetsova; Vladislav Grigorievich Degtyar
Original assignee: V Onkologichesky Nauchny Ts Ak; Kh Nii Endokrinologii I Khim G
Priority date: 1984-06-27
Filing date: 1986-02-25
Publication date: 1992-01-27
Also published as: JPH0240079B2; GB2169900B; DE3490728T1; WO1986000311A1; DE3490728C2; FI860815A0; FI84834B; CH666276A5; GB8602936D0; SE8600828L; SE8600828D0; JPS61502256A; FI860815A; GB2169900A; SE457535B

Description

1 848341 84834

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten androstaanisarjan steroidijohdannaisten valmistamiseksiA process for the preparation of therapeutically useful androstane series steroid derivatives

Keksinnön ala 5 Esillä oleva keksintö koskee bio-orgaanista kemiaa ja tarkemmin määriteltynä androstaanisarjan uusien steroidi johdannaisten (hormonisytostaattisten aineiden) valmistusta, joilla on sekä kasvaimia torjuvaa että hormonaalista aktiviteettia ja jotka ovat käyttökelpoisia lääketie-10 teessä syövän hoitoon ja hedelmöitystä ehkäisevinä aineina .FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to bioorganic chemistry and more particularly to the preparation of novel steroid derivatives (hormone cytostatic agents) of the androstane series having both antitumor and hormonal activity and useful in medicine for the treatment of cancer and for the prevention of fertilization.

Keksinnön tausta Tällä alalla tunnetaan eräs androstaanisarjan steroidi johdannainen 2[bis(2-kloorietyyli)aminometyleeni]- 15 5a-androstan-17ö-oli-3-oni-173-asetaatti (katso: S. Bur-stein, H. Ringold, J. Org. Chem., 26, s 3085, 1961) OAc 20 C1CH_CH» ί1 | | 2 2Χχ N c I I _ C1CH2CH2 ^ .: iBackground of the Invention A steroid derivative of the androstane series 2 [bis (2-chloroethyl) aminomethylene] -5α-androstan-17β-ol-3-one-173-acetate is known in the art (see: S. Bur-Stein, H. Ringold, J Org. Chem., 26, p. 3085, 1961) OAc 20 C1CH_CH »ί1 | | 2 2Χχ N c I I _ C1CH2CH2 ^.: I

25 H25 H

jossa alkyloiva ryhmä on kiinnittynyt hormonin molekyyliin, jolla on androgeenisiä ominaisuuksia. On todettu, että tämä yhdiste ei ole myrkyllinen tutkittuna hiirillä ‘30 6 päivää kestäneen lääkkeenannon jälkeen annosten ollessa 500 mg/kg päivää kohti. Sen kasvaimia torjuvaa vaikutusta ei ole tähän asti selostettu.wherein the alkylating group is attached to a hormone molecule having androgenic properties. This compound has been shown to be non-toxic in mice after 30 days of drug administration at doses of 500 mg / kg / day. Its antitumor effect has not been described so far.

Tällä alalla tunnetaan joukko androstaanisarjan steroidijohdannaisia, jotka osoittavat kasvaimia torjuvaa 35 ja hormonaalista aktiviteettia. Näistä johdannaisista voi- 2 84834 daan mainita esimerkkeinä p-di(2-kloorietyyli)aminofenyy-lietikkahapon (kloorifenasyyli) ja steroidi-alkoholien esterit - dehydroepiandrosteroni ja testosteroni. Nämä yhdisteet vaikuttavat kasvaimiin, jotka ovat erittäin 5 herkkiä alkylointiaineille (Walker'in karsinosarkooma Ca-755 hiirillä) sekä eräisiin rintasyöpiin hiirillä ja rotilla (HK, R-13762), jotka syöpäkasvaimet eivät ole oleellisesti herkkiä alkylointiaineille. Nämä yhdisteet ovat vähemmän myrkyllisiä kuin niihin sisältyvä kloorifenasyy-10 li. Vaikkakin kloorifenasyylin optimaaliset terapeuttiset annokset ovat 1-1,5 mg/kg hiirille 5-10 päivän pituisen lääkkeenantoajan, annetaan dehydroepiandrosteronin johdannaista (DEA-sinappi) 15-20 mg/kg suuruisina annoksina samanpituisen lääkitysajan. Yhdiste vaikuttaa kuitenkin myr-15 kyllisesti vaikutusta organismiin, mikä ilmenee neurotok-siteettina, veren imusoluniukkuutena ja kuolioiden aiheina maksassa ja munuaisissa (katso: Soph'ina Z.P., Lagova N.D., Valueva I.M., Kuz'mina Z.V., Shkodinskaya E.N., Khaletsky A.M. Proceedins of the 1st All-Union Conference 20 on Chemiotherapy of Malignant Tumors, Riika, 1968, s 441-443; M. Wall, G. Abernethy, F. Carrol, D. Taylor, J. Med. Chem., 1969, 12, 5, s 810-818; U. Schaeppi, J. Heyman, R. Fleishman, H. Rozenkrants, V. Glievski, R. Phelan, D. Cooney, R. Davis, Canc. Chem. rep., 1973, 3, 41 s 85-95; La-: 25 gova N.D. kirjassa: "Urgent Problems of the ExperimentalA number of steroid derivatives of the androstane series are known in the art to exhibit antitumor and hormonal activity. Examples of these derivatives are esters of p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetic acid (chlorophenyl) and steroid alcohols - dehydroepiandrosterone and testosterone. These compounds affect tumors that are highly sensitive to alkylating agents (Walker carcinoma of Ca-755 in mice) as well as some breast cancers in mice and rats (HK, R-13762), which are not substantially sensitive to alkylating agents. These compounds are less toxic than the chlorophenyl-10 li contained therein. Although the optimal therapeutic doses of chlorphenacyl are 1-1.5 mg / kg for mice for a drug administration period of 5-10 days, the dehydroepiandrosterone derivative (DEA mustard) is administered in doses of 15-20 mg / kg for the same duration of treatment. However, the compound has a sufficient effect on myr-15, manifested as neurotoxicity, blood lymphocyte depletion and necrosis in the liver and kidneys (see: Soph'ina ZP, Lagova ND, Valueva IM, Kuz'mina ZV, Shkodinskaya EN, Khaletsky AM Proceedins of the 1st All-Union Conference 20 on Chemiotherapy of Malignant Tumors, Riga, 1968, pp. 441-443, M. Wall, G. Abernethy, F. Carrol, D. Taylor, J. Med. Chem., 1969, 12, 5 , pp. 810-818, U. Schaeppi, J. Heyman, R. Fleishman, H. Rozenkrants, V. Glievski, R. Phelan, D. Cooney, R. Davis, Canc. Chem. rep., 1973, 3, 41 pp. 85-95; La-: 25 gova in ND book: “Urgent Problems of the Experimental

Chemiotherapy of Tumors", Chernogolovka, 1980, vol. I, sivut 222-225).Chemiotherapy of Tumors ", Chernogolovka, 1980, vol. I, pp. 222-225).

Keksinnön kuvatusDescription of the invention

Esillä olevan keksinnön tarkoituksena oli aikaan-30 saada uusia androstaanisarjan steroidijohdannaisia, joilla on kasvaimen vastainen ja hormonaalinen aktiviteetti, joka erityisesti keskittyy kohteena oleviin kudoksiin ja näissä kudoksissa alkunsa saaviin kasvaimiin.The object of the present invention was to provide novel steroid derivatives of the androstane series having antitumor and hormonal activity, with particular emphasis on the target tissues and tumors originating in these tissues.

Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistetut and-. 35 rostaanisarjän steroidijohdannaiset ovat uusia ja tähänas tisessa kirjallisuudessa tuntemattomia.And- prepared according to the present invention. The steroid derivatives of the 35 rostane series are new and unknown in the literature to date.

Il 3 84834Il 3 84834

Keksinnön kohteena on uusien steroidijohdannaisten valmistus, joiden yleinen kaava onThe invention relates to the preparation of new steroid derivatives of the general formula

HB

10 jossa R2 on -OCOCH2C6H4N( CH2CH2C1 )2; - OH, =0; R2 on -OCO(CH2)nC6H4N(CH2CH2X)2, jossa n on 1,3; X = Cl, Br, J; -OH; -OCOCHCH2C6H4N(CH2CH2Cl )2) ; NHCOCHj 15 R3 = -CH3; -H, sillä edellytyksellä, että R2 ja R2 eivät voi samanaikaisesti tarkoittaa hydroksiryhmää ja R2 ei voi olla oksoryhmä kun R2 on hydroksi ryhmä.Wherein R 2 is -OCOCH 2 C 6 H 4 N (CH 2 CH 2 Cl) 2; - OH, = 0; R 2 is -OCO (CH 2) n C 6 H 4 N (CH 2 CH 2 X) 2, where n is 1.3; X = Cl, Br, J; OH; -OCOCHCH2C6H4N (CH2CH2Cl) 2); NHCOCH 3 R 3 = -CH 3; -H, provided that R 2 and R 2 cannot simultaneously represent a hydroxy group and R 2 cannot be an oxo group when R 2 is a hydroxy group.

Esillä olevan keksinnön mukaiset androstaanisarjan steroidijohdannaiset (hormonisytostaatit) käsittävät ste- 20 roideina testosteronin metaboliitteja tai niiden synteettisiä analogeja ja ovat 5a-androstaanin estereitä, jotka on substituoitu 2-, 3- ja 17-asemassa.The steroid derivatives (hormone cytostats) of the androstane series of the present invention comprise testosterone metabolites or synthetic analogs thereof as steroids and are esters of 5α-androstane substituted at the 2-, 3- and 17-positions.

Keksinnön mukaiset yhdisteet käsittävät amorfisia tai hienokiteisiä jauhemaisia aineita, jotka ovat väril- 25 tään valkoisia tai keltaiseen vivahtavan valkoisia, ja liukoisia orgaanisiin liuottimiin. Yhdisteet ovat stabiileja varastoitaessa niitä pitkän ajan pimeässä lämpötilassa, joka on välillä +5 ja 0°C; valossa ne saavat keltaisen värin.The compounds of the invention comprise amorphous or finely crystalline powdery substances which are white or yellowish in color and soluble in organic solvents. The compounds are stable when stored for a long time at dark temperatures between +5 and 0 ° C; in light they turn yellow.

30 Esillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä ovat seuraavat: 17S-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-and-rostan-17B-oli-3-oni (I); 17Ö- [p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyylibutyraatti]-5a-and-- . 35 rostan-17B-oli-3-oni (II); 4 84834 176-[p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyyli-N-asetyylialanyyli]-5a-androstan-176-oli-3-oni (III); 176- [p-di( 2-kloorietyyli ) -aminofenyyli-N-asetyylialanyy-li]-2a-metyyli-5a-androstan-176-oli-3-oni (IV); 5 36-[p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyyliasetaatti] -5a-androst- andioli-38,176 (V); 176- [p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyyliasetaatti] -5a-andros-tandioli-36,176 (VI); 176-[p-di(2-bromietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-andros-10 tan-176-oli-3-oni (VII); 176-[p-di(2-jodietyyli)-aminofenyyliasetaatti]-5a-andros-tan-176-oli-3-oni (VIII).The compounds of the present invention are as follows: 17S- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-17β-ol-3-one (I); 17- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylbutyrate] -5a-and--. 35 rostan-17β-ol-3-one (II); 4,84834 176- [p-di (2-chloroethyl) aminophenyl-N-acetylalanyl] -5α-androstan-176-ol-3-one (III); 176- [p-di (2-chloroethyl) aminophenyl-N-acetylalanyl] -2a-methyl-5a-androstan-176-ol-3-one (IV); 36- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstanediol-38,176 (V); 176- [p-di (2-chloroethyl) aminophenyl acetate] -5α-androstanediol-36,176 (VI); 176- [p-di (2-bromoethyl) aminophenylacetate] -5a-Andros-10-tan-176-ol-3-one (VII); 176- [p-di (2-iodoethyl) aminophenylacetate] -5α-Androstan-176-ol-3-one (VIII).

On suositeltavaa käyttää seuraavia androstaani-sarjan steroidijohdannaisia: 15 r'N-1-°C0CH2C6H4N(CH2CH2C1), e JCP^ c t 20 dIt is recommended to use the following steroid derivatives of the androstane series: 15 r'N-1- ° C0CH2C6H4N (CH2CH2C1), e JCP ^ c t 20 d

f —T~ 0Hf —T ~ 0H

iTY " (C1CH2CH2)2NC6H4CII20C0-(V)iTY "(C1CH2CH2) 2NC6H4CII20C0- (V)

HB

25 -1-OCOCH2C6H4N (CH2CH2C1) 2 (VI)25 -1-OCOCH2C6H4N (CH2CH2C1) 2 (VI)

"° H"° H

3030

Paras tapa keksinnön suorittamiseksi Esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet osoittavat huomattavaa kasvaimia torjuvaa ja hormonaalista (sekä androgeenistä että anabolista) aktiviteettia, jonka luonne 35 on riippuvainen näiden yhdisteiden molekyylin hormoniosanBest Mode for Carrying Out the Invention The compounds of the present invention exhibit significant antitumor and hormonal (both androgenic and anabolic) activity, the nature of which is dependent on the hormonal portion of the molecule of these compounds.

IIII

5 84834 rakenteesta samoin kuin alkyloivan ryhmän rakenteesta ja sen kiinnittymiskohdasta steroidiin.5,84834 structure as well as the structure of the alkylating group and its point of attachment to the steroid.

Esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä on eräänä etuna se, että niiden vaikutus keskittyy kohteena 5 oleviin kudoksiin ja niihin muodostuneisiin kasvaimiin, mikä antaa niiden kasvaimia torjuvan vaikutuksen vaikutus-spektrille erityisiä piirteitä verrattuna tunnettuihin hormonisytostaatteihin. Esillä olevan keksinnön mukaisten hormonisytostaattien parenteraalinen (hypodermaalinen) 10 lääkkeenantotapa takaa vähäisemmän myrkyllisyyden ja yhdisteiden biologisen vaikutuksen suuremman orientoitumisen verrattuna suun kautta tapahtuvaan lääkkeenantotapaan, koska tuloksena ei ole molekyylin hajoaminen hormonaalisiin ja erittäin myrkyllisiin alkylointiosiin.One advantage of the compounds of the present invention is that their action is concentrated on the target tissues and the tumors formed thereon, which gives the spectrum of action of their antitumor effect specific features compared to known hormone cytostats. The parenteral (hypodermal) mode of administration of the hormone cytostatics of the present invention provides less toxicity and greater orientation of the biological activity of the compounds compared to the oral route of administration, as it does not result in degradation of the molecule to hormonal and highly toxic alkylation moieties.

15 Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden kas vaimia torjuvaa aktiviteettia on tutkittu lukuisiin kudoksen siirrolla aiheutettujen kiinteiden kasvaimien ja Leukoosien kantoihin hiirillä ja rotilla: nisän adenokar-sinooma Ca-755, Lewis'in keuhkon adenokarsinooma (LL, koh-20 dunkaulakarsinooma SC-5, Walker'in karsinosarkooma W-256, munasarjakasvain OT ja lymfaattinen leukoosi L 1210.The antitumor activity of the compounds of the present invention has been studied in a number of strains of tissue transplant-induced solid tumors and leukosis in mice and rats: breast adenocarcinoma Ca-755, Lewis lung adenocarcinoma (LL, cervical carcinoma SC-5, Walk-neck carcinoma SC-5). carcinoma of the carcinoma W-256, ovarian tumor OT and lymphocytic leukemia L 1210.

Vertailun vuoksi on tutkittu esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden rinnalla seuraavia aineita: dihydrotestosteroni (5a-androstan-17B-oli-3-oni), dehyd- .....; 25 roepiandrosteroni ja kloorifenasyyli tai sarkolysiinival- miste (B-[p-di-(2-kloorietyyli)aminofenyyli]-a-alaniini-hydrokloridi), jotka sisältyvät useimpien esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden molekyyliin, samoin kuin tunnetut hormonisytostaatit: dehydroepiandrosteronin este-30 ri kloorifenasyylin kanssa (DEA-sinappi) sekä estrasyytti-valmiste (estra-1,3,5(10)-trieeni-3,176-dioli, 3N-[bis-(2-kloorietyyli)]karbamaatti-17-natriumfosfaatti).For comparison, the following substances have been studied alongside the compounds of the present invention: dihydrotestosterone (5α-androstan-17β-ol-3-one), dehyde .....; Roepiandrosterone and a chlorophenyl or sarcolysin preparation (B- [p-di- (2-chloroethyl) aminophenyl] -α-alanine hydrochloride) contained in the molecule of most of the compounds of the present invention, as well as known hormone cytostatics: dehydroepiandrosterone ester-30 with chlorophenacyl (DEA mustard) and an estracite preparation (estra-1,3,5 (10) -trien-3,176-diol, 3N- [bis- (2-chloroethyl)] carbamate-17-sodium phosphate).

Yhdisteitä annettiin eläimille hypodermisesti öljyssä, annoksina, jotka oli laskettu mg:oissa kiloa kohti -- 35 kehonpainoa, 5-10 päivän ajan aikavälein, jotka oli sovi- 6 84834 tettu kyseisten kasvainten tutkimusta silmälläpitäen (24 tai 28 tuntia kasvaimen kudoksensiirron jälkeen). Estra-syyttiä annettiin suunnilleen samalla tavalla NaCl:n 0,9-%:isessa liuoksessa.The compounds were administered to the animals hypodermically in oil, in doses calculated in mg per kilogram to 35 body weight, for 5-10 days at intervals adjusted for the examination of the tumors in question (24 or 28 hours after tumor tissue transplantation). Estra-cyt was administered in approximately the same manner in a 0.9% solution of NaCl.

5 Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden vai kutuksen suuntautuvuuden tutkimiseksi käytettiin spontaanisesti aiheutuneita ja/tai syöpätartunnan aiheuttamia kasvaimia hiirissä ja rotissa, jotka kasvaimet olivat saaneet alkunsa kohteena olevissa kudoksissa. Näissä tapauk-10 sissa käsittely aloitettiin sen jälkeen kun kasvaimet olivat saavuttaneet määrätyn koon, jolloin kasvainten spon-taanisen taantuman mahdollisuus on poissuljettu.To study the directionality of the compounds of the present invention, spontaneously induced and / or carcinogenic tumors were used in mice and rats which had originated in the target tissues. In these cases, treatment was started after the tumors had reached a certain size, thus ruling out the possibility of spontaneous tumor regression.

Kasvaimia torjuvan aktiviteetin kriteerit olivat seuraavat: eläimen elinajan piteneminen (EAL, %) ja kiin-15 teiden kasvainten kasvun estyminen (GIT, %).The criteria for antitumor activity were: prolongation of animal lifespan (EAL,%) and inhibition of solid tumor growth (GIT,%).

EAL % = — 100EAL% = - 100

CC

20 jossa T on käsiteltyjen eläimien keskimääräinen elinaika; C - kontrollieläinten keskimääräinen alinaika; GIT % = K~°- 10020 where T is the average lifespan of the treated animals; C - mean lower time of control animals; GIT% = K ~ ° - 100

KK

25 jossa O on kasvaimen keskimääräinen tilavuus (massa) käsiteltyjen eläinten ryhmässä; K on kasvaimen keskimääräinen tilavuus (massa) kontrollieläimissä.25 wherein O is the mean tumor volume (mass) in the group of treated animals; K is the mean tumor volume (mass) in control animals.

Kasvaimia torjuvan vaikutuksen kriteerit spontaani-30 sesti syntyneiden ja aiheutettujen kasvaimien käsittelys sä olivat seuraavat: eläinten tervehtyminen (%) ja muutos kasvaimen dimensioissa verrattuna niiden alkuperäisiin arvoihin (%).The criteria for antitumor effect in the treatment of spontaneously induced and induced tumors were as follows: recovery of the animals (%) and change in tumor dimensions compared to their initial values (%).

Tutkimukset suoritettiin on line-hiirille ja niiden 35 ensimmäisen sukupolven hybrideille.The studies were performed on on-line mice and their 35 first-generation hybrids.

I! 7 84834I! 7 84834

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden kasvaimia torjuvan aktiviteetin tutkimuksessa saadut tulokset muutamien kudoksensiirrolla aiheutettujen kasvainten osalta on esitetty seuraavassa taulukossa 1.The results obtained in the study of the antitumor activity of the compounds of the present invention for a few tissue transplant-induced tumors are shown in Table 1 below.

5 Taulukko 15 Table 1

Esillä olevan keksinnön mukaisten androstaanisar-jan steroidijohdannaisten kasvaimia torjuva aktiviteettiThe antitumor activity of the steroid derivatives of the androstane series of the present invention

Nro Yhdiste Annos Käsittelypäivät 10 mg/kg kasvaimen kudok- päivä sensiirron jälkeen _1_2_3_4_ 1 17S-[p-di(2-kloorietyyli)- 15 aminofenyyliasetaatti]-5a- androstan-173-oli-3-oni (I) 25-50 2-6 2 173-[p-di-(2-kloorietyyli)-aminofenyylibutyraatti]-5a- androstan-173-oli-3-oni (II) 30-50 2-6 20 3 173-[p-di(2-kloorietyyli)ami- nofenyyli-N-asetyylialanyyli]-5a-androstan-173-oli-3- oni (III) 10-100 2-6 4 173-[p-di(2-kloorietyyli)- 25 aminofenyyli-N-asetyyli- alanyyli]-2a-metyyli-5a- androstan-17S-oli-3-oni (IV) 10-100 2-6 5 33-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti] -5a-and- 30 rostandioli-33,173 (V) 5-30 2-6 6 173-[p-di(2-kloorietyyli)-aminofenyyliasetaatti]-5a- androstandioli-3S,173 (VI) 5-50 2-6 7 173-[p-di(2-bromietyyli)- 35 aminofenyyliasetaatti]-5a- androstan-173-oli-3-oni (VII) 10-50 2-6 8 84834 _1_2_3_4_ 8 176-[p-di(2-jodietyyli)amino- fenyyliasetaatti]-5a-andros- tan-17B-oli-3-oni (VIII) 25-100 2-6 5 9 Dihydrotestosteroni 10-15 2-6 10 Kloorifenasyyli 1,5-2 2-6 11 Sarkolysiini 2-3 2-6 7 2-6 12 DEA-sinappi 10-15 2-11 10 50 2-6 13 Estrasyytti 100 2-6No. Compound Dose Treatment days 10 mg / kg tumor tissue day after transplantation _1_2_3_4_ 1 17S- [p-di (2-chloroethyl) -15-aminophenylacetate] -5α-androstan-173-ol-3-one (I) 25-50 2 -6 2 173- [p-di- (2-chloroethyl) aminophenyl butyrate] -5α-androstan-173-ol-3-one (II) 30-50 2-6 20 3 173- [p-di (2- chloroethyl) aminophenyl-N-acetylalanyl] -5α-androstan-173-ol-3-one (III) 10-100 2-6 4,173- [p-di (2-chloroethyl) -25-aminophenyl-N-acetyl - alanyl] -2a-methyl-5α-androstan-17S-ol-3-one (IV) 10-100 2-6,533- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstanediol 33,173 (V) 5-30 2-6 6 173- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstandiol-3S, 173 (VI) 5-50 2-6 7 173- [p-di ( 2-bromoethyl) - 35 aminophenylacetate] -5α-androstan-173-ol-3-one (VII) 10-50 2-6,84834_1_2_3_4_8,176- [p-di (2-iodoethyl) aminophenylacetate] -5a -androstan-17β-ol-3-one (VIII) 25-100 2-6 5 9 Dihydrotestosterone 10-15 2-6 10 Chlorophenacyl 1,5-2 2-6 11 Sarcolysin i 2-3 2-6 7 2-6 12 DEA mustard 10-15 2-11 10 50 2-6 13 Estracyte 100 2-6

Taulukko 1 (jatkoa) 15 Nro Kasvaimen kasvun maksimiehkäisy % Elinajan piteneminen %Table 1 (continued) 15 No. Maximum Tumor Growth Prevention% Prolongation of Life%

Ca-755 LL W-256 Ca-755 L-1210 W-256 1 5_6_7_8_9_10 1 98 66 99 59 41 160 20 71 30 %:n parantuminen 47 3 98 71 122 82 4 96 58 79 82 5 95 66 31 28 25 6 95 60 32 25 7 97 54 8 65 47 9 16 +77 10 33 97 30 11 83 58 32 90 12 10 59 57 13 +6 29 4 35 Merkki "+" tarkoittaa kasvaimen kasvun kiihtymistä li 9 84834Ca-755 LL W-256 Ca-755 L-1210 W-256 1 5_6_7_8_9_10 1 98 66 99 59 41 160 20 71 30% improvement 47 3 98 71 122 82 4 96 58 79 82 5 95 66 31 28 25 6 95 60 32 25 7 97 54 8 65 47 9 16 +77 10 33 97 30 11 83 58 32 90 12 10 59 57 13 +6 29 4 35 The sign "+" indicates an acceleration of tumor growth li 9 84834

Kuten edellä olevasta taulukosta 1 ilmenee, esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä on voimakas kasvaimia torjuva vaikutus useisiin kudoksensiirrolla aiheutettuihin kasvaimiin nähden, mikä todetaan kasvaimen kas-5 vun huomattavana ehkäisynä - 58-99 %:lla ja/tai käsiteltyjen eläinten eliniän pitenemisenä 25-160 %:lla. Erityisen selvästi nähdään esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden edut kysymyksen ollessa tapauksesta Ca-755. Yhdisteet eivät ainoastaan ehkäise Ca-755:n kasvua 65-98 %:Ι-ΙΟ la, vaan myös ne pidentävät eläinten elinikää 31-122 %:1-la. Androstaanisarjan tunnettu hormonisytostaatti, nimittäin DEA-sinappi, samoinkuin estrasyytti eivät ole osoittaneet mitään aktiviteettia tämän kasvaimen suhteen.As shown in Table 1 above, the compounds of the present invention have potent antitumor activity against a variety of tissue transplant-induced tumors, as evidenced by significant inhibition of tumor growth by 58-99% and / or 25-160% prolongation of the lifespan of treated animals. :with. The advantages of the compounds of the present invention in the case of Ca-755 are particularly clear. The compounds not only inhibit the growth of Ca-755 by 65-98% Ι-ΙΟ la, but also prolong the lifespan of animals by 31-122%: la-la. The known hormone cytostat of the androstane series, namely DEA mustard, as well as the estrocyte, have shown no activity against this tumor.

Edellä olevasta taulukosta 1 nähdään myös, että 15 esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet eroavat niiden molekyyliin sisältyvistä alkylointiaineista kloori-fenasyylistä ja sarkolysiinistä kasvainten torjuntavai-kutuksen suuruudessa ja laajuudessa samoinkuin myrkyllisyydessä. Tällöin esillä olevan keksinnön mukaisten yh-20 disteiden terapeuttiset annokset vaihtelevat alueella 5-150 mg/kg annettaessa niitä päivittäin 5 päivän aikana, kun taas kloorifenasyylin ja sarkolysiinin siedettävät maksimiannokset samoissa käsittelyolosuhteissa ovat vastaavasti 1,5 ja 3 mg/kg.It can also be seen from Table 1 above that the compounds of the present invention differ from their alkylating agents chlorophenacyl and sarcolysin in their molecule in the magnitude and extent of their antitumor activity as well as their toxicity. In this case, the therapeutic doses of the compounds of the present invention range from 5 to 150 mg / kg when administered daily for 5 days, while the maximum tolerated doses of chlorphenacyl and sarcolysin under the same treatment conditions are 1.5 and 3 mg / kg, respectively.

25 Seuraavat yhdisteet: 176-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-and-rostan-178-oli-3-oni (I), 38-[p-di-(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-androstandioli-3B,178 (V) ja 30 178[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-and- rostandioli-36,178 (VI) ovat osoittaneet suurempaa suuntautuvuutta ja eroa tehossa kasvainten suhteen, jotka ovat saaneet alkunsa hormonista riippuvissa kudoksissa, ja joita ovat kudok-35 sensiirrolla aiheutetut kohdunkaulasyöpä CC-5, munasarjan kasvaimet OT samoinkuin aiheutetut ja spontaaniset muna- 10 84834 sarjan kasvaimet ja nisän kasvaimet hiirillä ja rotilla. Samanaikaisesti todettiin edellämainittujen yhdisteiden olevan vähemmän aktiivisia käsiteltäessä eläimiä, joilla oli leukoosi L-1210 (taulukko 1), mikä viittaa niiden vä-5 häisempään alkylointivaikutukseen. Taulukossa 2 olevista tuloksista nähdään, että yhdiste I vaikuttaa vain vähän munasarjakasvaimen OT kasvuun, kun taas yhdiste VI ja erityisesti yhdiste V aikaansaavat tämän kasvaimen kasvun voimakkaan ehkäisyn. Samasta taulukosta käy myös ilmi, 10 että CC-5 ja OT ovat vain vähäisessä määrin herkkiä tai kokonaan epäherkkiä dihydrotestosteronin ja kloorifena-syylin suhteen, samalla kun estrogenosytostaattinen estra-syytti jopa edistää CC-5:n kasvua. Taulukossa 3 esitetyistä tuloksista nähdään selvästi yhdisteiden I, III ja VI 15 edut aikaisemmin tunnettuun androgeeniseen aineeseen tes-tosteronipropionaattiin nähden mitä tulee niiden kasvaimia torjuvaan aktiviteettiin aiheutettuihin ja spontaanisiin munasarjan ja nisän kasvaimiin nähden hiirillä ja rotilla.The following compounds: 176- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-178-ol-3-one (I), 38- [p-di- (2-chloroethyl) aminophenylacetate] - 5α-androstandiol-3B, 178 (V) and 30 178 [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstandiol-36,178 (VI) have shown greater orientation and difference in potency against hormone-induced tumors in dependent tissues, and are tissue-35 transplant-induced cervical cancer CC-5, ovarian tumors OT as well as induced and spontaneous ovarian tumors and mammary tumors in mice and rats. At the same time, the above-mentioned compounds were found to be less active in the treatment of animals with leukosis L-1210 (Table 1), suggesting a lower alkylating effect. From the results in Table 2, it can be seen that Compound I has little effect on the growth of ovarian tumor OT, whereas Compound VI and especially Compound V provide a strong inhibition of this tumor growth. The same table also shows that CC-5 and OT are only slightly sensitive or completely insensitive to dihydrotestosterone and chlorophenyl, while the estrogenocytostatic estracite even promotes the growth of CC-5. The results shown in Table 3 clearly show the advantages of compounds I, III and VI over the previously known androgenic substance testosterone propionate in terms of their antitumor activity-induced and spontaneous ovarian and mammary tumors in mice and rats.

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden ylei-20 sen myrkkyvaikutuksen tutkimus on osoittanut, että näiden yhdisteiden myrkyllisyys on suhteellisen vähäinen. Hiiret sietävät näiden yhdisteiden 5-kertaisen antamisen annoksina, jotka ovat alueella 5-100 mg/kg. Pääosalla yhdisteitä on huomattava terapeuttisten annosten alue (taulukko 4). 25 Ne aikaansaavat tehokkaan kasvaimia torjuvan vaikutuksen annoksina, jotka eroavat suuruudeltaan 3-10 kertaisesti.A study of the general toxicity of the compounds of the present invention has shown that the toxicity of these compounds is relatively low. Mice tolerate 5-fold administration of these compounds at doses ranging from 5 to 100 mg / kg. The majority of compounds have a considerable range of therapeutic doses (Table 4). 25 They provide an effective antitumor effect in doses ranging from 3 to 10 times.

Il il 84834Il 84834

Taulukko 2Table 2

Androstaanlsarjan steroidijohdannaisten kasvaimia Torjuva aktiviteetti kasvaimiin nähden, jotka ovat saaneet alkunsa kohteena olevissa kudoksissa 5Tumors of steroid derivatives of the androstane series Anti-tumor activity against tumors originating in the target tissues 5

Yhdiste Kasvaimen kasvun ElinajanCompound Tumor Growth Lifetime

maksimiehkäisy % piteneminen % CC-5 OT OTmaximum prevention% prolongation% CC-5 OT OT

1_2_3_4_ 10 17Ö-[p-di(2-kloorietyyli)amino- fenyyliasetaatti]-5a-androstan- 176-oli-3-oni (I) 82 37 0 3B[p-di(2-kloorietyyli)aminofe-nyyliasetaatti]-5a-androstan- 15 3β,17β (V) 80 94 25 17β-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyliasetaatti]-5a-androstan- dioli-3B,17β (VI) 79 73 33 17β-[p-di(2-kloorietyyli)amino-20 fenyyli-N-asetyylialanyyli]-5a- androstan-17B-oli-3-oni (III) 87 97 57 17B-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyli-N-asetyylialanyyli-2a-me-tyyli-5a-androstan-17B-oli-3-oni 25 (IV) 99 92 371_2_3_4_ 10 17β- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-176-ol-3-one (I) 82 37 0 3B [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] - 5α-androstan-3β, 17β (V) 80 94 25 17β- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstanediol-3B, 17β (VI) 79 73 33 17β- [p- di (2-chloroethyl) amino-20-phenyl-N-acetylalanyl] -5α-androstan-17β-ol-3-one (III) 87 97 57 17β- [p-di (2-chloroethyl) amino-phenyl-N- acetylalanyl-2a-methyl-5α-androstan-17β-ol-3-one 25 (IV) 99 92 37

Dihydrostetosteroni 13 54 0Dihydrostetosterone 13 54 0

Kloorifenasyyli 35 25 0Chlorophenyl 35 25 0

Estrasyytti +322 29 0 i2 84834Estracyte +322 29 0 i2 84834

Taulukko 3Table 3

Androstaanisarjän steroidijohdannaisten kasvaimia torjuva vaikutus kohteena olevissa kudoksissa alkunsa saaneiden aiheutet-5 tujen ja spontaanisten kasvainten suhteenAntitumor effect of steroid derivatives of the androstane series on induced and spontaneous tumors originating in target tissues

Nro Kasvaimet Kasvaimen dimensioiden pienenemi nen tai sen kasvun kiihtyminen (+) verrattuna dimensioihin ennen 10 käsittelyn alkamista, % 17B-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyliasetaatti]-5a-androstan-17B-oli-3-oni (I) 15 _1_2_3_ 1 Biskindma'illa aiheutetut hiiren munasarjan kasvaimet Kasvun pysähtyminen 2 Biskindham'illa aiheutetut ro- 20 tan munasarjan kasvaimet 27 3 Spontaaniset hiiren nisän kas- Kasvun pysähtyminen vaimet 4 DMBA'lla aiheutetut nisän kasvaimet rotissa 60 25No. Tumors Decrease in tumor dimensions or acceleration of its growth (+) compared to dimensions before the start of treatment,% 17β- [p-di (2-chloroethyl) amino-phenylacetate] -5α-androstan-17β-ol-3-one (I ) 15 _1_2_3_ 1 Biskindma-induced mouse ovarian tumors Growth arrest 2 Biskindham-induced rat ovarian tumors 27 3 Spontaneous mouse mammary tumors Growth arrest tumors 4 DMBA-induced mammary tumors in rats 60 25

Kasvaimen dimensioiden pieneneminen tai sen kasvun kiihtyminen (+) verrattuna dimensioihin ennen käsittelyn alkamista, %Decrease in tumor dimensions or acceleration of its growth (+) compared to dimensions before treatment,%

IIII

i3 84834 3B-[p-di(2-kloori- 17β-[p-di(2-kloori- Testoste- Kont- etyyll)amlnofenyyll- etyyli)aminofenyyli- ronipro- rolli asetaatti]-5a-and- asetaatti]-5a-and- pionaatti rostan-17B-oli-3- rostan-17B-oli-3- 5 oni (V) oni (VI)i3 84834 3B- [p-di (2-chloro-17β- [p-di (2-chloro-Testoste-Containethyl) aminophenyl-ethyl) -aminophenyl-roneprol acetate] -5a-and-acetate] -5a -andpionate rostan-17β-ol-3-rostan-17β-ol-3-one (V) one (VI)

Nro 1_4_5_6_7_ 1 7 +256 +21 10 2 64 +32 3 35 24 +33 +88 4 Kasvun py- +280 sähtyminen 15 Taulukko 4No. 1_4_5_6_7_ 1 7 +256 +21 10 2 64 +32 3 35 24 +33 +88 4 Growth py- +280 flickering 15 Table 4

Andros taanisar jän steroidi johdannaisten siedettävät maksimiannokset (MBD) ja terapeuttisten annosten alue (hiiret, 5 kertaa tapahtuva annostus)Maximum tolerated doses (MBD) and therapeutic dose range of Androsanar steroid derivatives (mice, 5-fold dosing)

Yhdiste mg/kg Terapeutti- 20 MBD set annokset 17B-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyliasetaatti]-5a-androstan- 17-oli-3-oni (I) 25 20-25 25 17B-[p-di(2-kloorietyyli)amino- fenyylibutyraatti]-5a-androstan-17-oli-oni (II) 50 30 17β-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyli-N-asetyylialanyyli]- 30 5a-androstan-17B-oli-3-oni (III) 100 10-100 17β-[p-di-(2-kloorietyyli)-aminofenyyli-N-asetyyliala-nyyli]-2o-metyyli-5a-and- rostan-17B-oli-3-oni (IV) 100 10-100 l.i 35 3B-[p-di( 2-kloorietyyli )amino- fenyyliasetaatti]-5a-andros- tandioli-3B,17β (V) 30 5-30 i4 84834 (Taulukko 4, jatkoa)Compound mg / kg Therapeutic Doses of 20 MBD 17β- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-17-ol-3-one (I) 25 20-25 25 17B- [p- di (2-chloroethyl) aminophenylbutyrate] -5a-androstan-17-ol (II) 50 30 17β- [p-di (2-chloroethyl) aminophenyl-N-acetylalanyl] -30 5a-androstan- 17β-ol-3-one (III) 100 10-100 17β- [p-di- (2-chloroethyl) aminophenyl-N-acetylalanyl] -2o-methyl-5α-androstan-17β-ol 3-one (IV) 100 10-100 μl 3β- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstanediol-3β, 17β (V) 30 5-30 14484 (Table 4, continued)

Yhdiste mg/kg Terapeutti- MBD set annokset 5 176-[p-di(2-kloorietyyli)- aminofenyyliasetaatti]-5a- androstandioli-36,176 (VI) 50 10-30 176-[p-di(2-bromietyyli)-aminofenyyliasetaatti]-5a-and-10 rostan-176-oli-3-oni (VII) 50 10-50 176-[p-di(2-jodietyyli)amino-fenyyliasetaatti]-5a-androstan- 176-oli-3-oni (VIII) 100 25-100Compound mg / kg Therapeutic MBD doses 5,176- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstandiol-36,176 (VI) 50 10-30,176- [p-di (2-bromoethyl) aminophenyl acetate ] -5α-and-10 rostan-176-ol-3-one (VII) 50 10-50,176- [p-di (2-iodoethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-176-ol-3-one (VIII) 100 25-100

Kloorifenasyyli 3 1,5-2 15 Sarkolysiini 5 2-3Chlorophenyl 3 1,5-2 15 Sarcolysin 5 2-3

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden tehon suuntautuvuuden tutkimiseksi kohteena oleviin kudoksiin tutkittiin niiden hormonaaliset ominaisuudet biolo-20 gisten (androgeenisten ja anabolisten vaikutusten) sekä biokemiallisten (spesifinen sitoutuminen dihydrotestoste-ronin ja estradioli 176:n reseptoreihin) kokeiden avulla. Yhdisteiden androgeeninen ja anabolinen aktiviteetti määritettiin vastaavasti eturauhasen ja peräaukon kohottaja-. . 25 lihaksen massan muutoksen avulla kuohituilla nuorilla ro tilla ja ilmaistiin indekseillä (kyseisten elimien suhteellisen massan suhde käsittelyn jälkeen vastaavaan massaan vertailukohteessa, jonka massan oletettiin olevan arvoltaan 1). Dihydrotestosteronin spesifistä sitoutumista 30 reseptoreihin (vapaita kiinnittymiskohtia) tutkittiin normaalien ja etukäteen (2 viikkoa aikaisemmin) kuohittujen rottien ventraalisessa prostatassa, joita rottia oli käsitelty valmisteilla terapeuttisen käsittelyn kuluessa. Dihydrotestosteronin ja estradioli 176:n spesifisen sitoutu-35 misen määritys suoritettiin kudoksen sytosolifraktioissa seostamalla proteiinit protaminosulfaatilla sen jälkeen kun sytosoleja oli inkuboitu [3H]-dihydrotestosteronin ja is 84834 [3H]-estradioli 176:n kyllästyskonsentraatioilla 0°C:n lämpötilassa. Nukleaariset reseptorit määritettiin puhdistettujen ytimien fraktiosta, joka oli etukäteen uutettu 0,4N KCl:lla saostamalla hormonireseptorikompleksi protamino-5 sulfaatilla.In order to investigate the orientation of the potency of the compounds of the present invention in the target tissues, their hormonal properties were examined by biological (androgenic and anabolic) and biochemical (specific binding to dihydrotestosterone and estradiol 176 receptors) experiments. The androgenic and anabolic activity of the compounds were determined by prostate and anal enhancer, respectively. . 25 muscle mass change in castrated juvenile rats and expressed as indices (ratio of the relative mass of these organs after treatment to the corresponding mass in the control, which was assumed to be 1). The specific binding of dihydrotestosterone to 30 receptors (free attachment sites) was studied in the ventral prostate of normal and previously (2 weeks earlier) castrated rats treated with the preparations during therapeutic treatment. The determination of the specific binding of dihydrotestosterone and estradiol 176 was performed on tissue cytosolic fractions by doping the proteins with protamine sulfate after incubation of the cytosols at the saturation temperature of [3H] -dihydrotestosterone and is 84834 [3H] -estradiol 176. Nuclear receptors were determined from a fraction of purified nuclei pre-extracted with 0.4N KCl by precipitation of the hormone receptor complex with protamino-5 sulfate.

Tulokset, jotka valaisevat esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden androgeenisiä ja anabolisia vaikutuksia esitetään jälempänä taulukossa 5.The results illustrating the androgenic and anabolic effects of the compounds of the present invention are shown in Table 5 below.

Taulukosta 5 nähdään, että pääosalla esillä olevan 10 keksinnön mukaisista androstaanisarjän steroidijohdannaisista on alhainen anabolinen aktiviteetti. Niiden andro-geeninen aktiviteetti riippuu suuressa määrässä yhdisteen hormonaalisen osan rakenteesta. Androgeenisinä aineina ovat yhdisteet I ja III voimakkaampia muihin verrattuna. 15 Yhdisteet I ja III osoittavat myös pisintä androgeenisen vaikutuksen kestoaikaa. Yhdisteen I androgeeninen aktiviteetti on kuitenkin oleellisesti alhaisempi kuin testo-steronipropionaatin (eräs tunnettu androgeeninen aine).It can be seen from Table 5 that the majority of the steroid derivatives of the androstane series of the present invention have low anabolic activity. Their androgenic activity depends to a large extent on the structure of the hormonal part of the compound. As androgenic substances, compounds I and III are more potent than the others. Compounds I and III also show the longest duration of androgenic action. However, the androgenic activity of Compound I is substantially lower than that of testo-sterone propionate (a known androgenic substance).

On huomattu, että esillä olevan keksinnön mukaiset 20 androstaanisarjän steroidijohdannaiset sitoutuvat spesifi sesti vastaavien hormonien reseptoreihin. Niinpä yhdiste I sitoutuu dihydrostestosteronin sytoplasmareseptoreihin, jota seuraa keskinäinen vuorovaikutus kromatiinin vastaavien akseptorivyöhykkeiden kanssa sekä normaaleissa ku-25 doksissa (rottien ventraalinen prostata ja kohtu) sekä eläinten että ihmisten kasvaimissa, jotka ovat saaneet alkunsa androgeeneille kohteena olevissa kudoksissa (nisän rauhanen).It has been found that the steroid derivatives of the 20 andostane series of the present invention bind specifically to receptors for the corresponding hormones. Thus, Compound I binds to cytoplasmic receptors for dihydrostestosterone, followed by interaction with the corresponding acceptor zones of chromatin in both normal tissues (rat ventral prostate and uterus) in both animal and human tumors originating in androgen-target glands.

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden, ni-30 mittäin yhdisteiden I, V ja VI hormonaaliset ominaisuudet on myös selvästi osoitettu tehossa estradioli 176:n reseptioon ventraalisen prostatan kudoksessa. Tällöin on osoitettu eroavaisuus yhdisteiden välillä. Esimerkiksi koskemattomissa rotissa suureni yhdisteen V antamisen jälkeen 35 [3H]-estradioli 176:n spesifinen sitoutuminen sytosoliin 5- kertaiseksi, kun taas yhdisteen I antamisen jälkeen 10-kertaiseksi. Yhdisteen VI antamisen jälkeen ei havaittu ie 84834 minkäänlaista [3H]-estradioli 176:n spesifistä sitoutumista sytosoliin (se estyi täydellisesti). Näin ollen esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet ovat huomattavasti muuttaneet eläinten herkkyyttä estrogeeneihin nähden.The hormonal properties of the compounds of the present invention, namely compounds I, V and VI, have also been clearly demonstrated to be effective in the reception of estradiol 176 in ventral prostate tissue. In this case, the difference between the compounds has been shown. For example, in intact rats, after specific administration of Compound V, the specific binding of 35 [3H] -estradiol 176 to cytosol increased 5-fold, whereas after administration of Compound I, 10-fold. After administration of Compound VI, no specific binding of [3H] -estradiol 176 to the cytosol was observed (it was completely inhibited). Thus, the compounds of the present invention have significantly altered the susceptibility of animals to estrogens.

5 Tarkastelun alaisena olevat yhdisteet I, V ja VI5 Compounds I, V and VI under consideration

eroavat myös metabolismin osalta kohteena olevissa kudoksissa androgeenien suhteen. Nämä eroavaisuudet ilmenevät jo andorgeenimetabolismin pääasiallisen entsyymin -5a-re-duktaasin tasolla, samoinkuin 36,3α,6a,7a-hydroksylaasien 10 tasolla.also differ in metabolism in the target tissues with respect to androgens. These differences are already evident at the level of -5α-reductase, the major enzyme in andorgenic metabolism, as well as at the level of 36,3α, 6α, 7α-hydroxylases.

Mitä tulee kasvaimia torjuvan vaikutuksen, yleisen myrkky- ja hormonivaikutusten laajuuteen samoinkuin meta-bolismiin kohteena olevissa kudoksissa, niin tällöin esillä olevan keksinnön mukaiset androstaanisarjan steroidi-15 johdannaiset eroavat toinen toisistaan. Jokaiselle näistä yhdisteistä on tunnusomaista erittäin yksilölliset biologisen vaikutuksen erityisominaisuudet, minkä vuoksi ne ovat jokainen toisista riippumatta kiinnostavia.In terms of the extent of the antitumor effect, the general toxic and hormonal effects as well as the metabolism in the target tissues, the steroid-15 derivatives of the androstane series of the present invention differ from each other. Each of these compounds is characterized by very unique specific properties of the biological effect, which is why they are of independent interest to each other.

Il i7 84 834Il i7 84 834

Taulukko 5Table 5

Hormonisytostaattien - androstaanisarjan steroidi-johdannaisten androgeenisiä ja anabolisia ominaisuuksia 5Androgenic and anabolic properties of hormone cytostatics - steroid derivatives of the androstane series 5

Nro Yhdiste Annos, mg/kg/aikaväli (h) x antokertojen lu- _kumäärä_ 1 178-[p-di(2-kloorietyyli)- 10 aminofenyyliasetaatti]-5a- androstan-178-oli-3-oni (I) 25/24 x 10 2 38-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyliasetaatti]-5a-androstan- 15 dioli-38,178 (V) 20/24 x 10 3 178-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyliasetaatti]-5a-androstan- dioli-38,178 (VI) 20/24 x 10 20 - 4 178-[p-di(2-kloorietyyli)amino- fenyyli-N-asetyylialanyyli]-5a-androstan-17B-oli-3-oni (III) 25/24 x 10 50/24 x 10 25 - 5 17B-[p-di(2-kloorietyyli)amino- fenyyli-N-asetyylialanyyli]-2a-metyyli-5a-androstan-17B-oli-3- 25/24 x 10 oni (IV) 50/24 x 10 30 - 6 DEA-sinappi 5/24 x 10 10/24 x 10 7 Dihydrostestosteroni 15/24 x 10 35 - 8 Dehydroepiandrosteroni 0,5/24 x 10 1/24 x 10 9 Testosteronipropionaatti 15/24 x 10 40 - • - 10 Sarkolysiini 2/24 x 10 11 Kloorifenasyyli 1/2 x 10 45 is 84834 (Taulukko 5, jatkoa)No. Compound Dose, mg / kg / time interval (h) x number of administrations_1 178- [p-di (2-chloroethyl) -10-aminophenylacetate] -5α-androstan-178-ol-3-one (I) 25 / 24 x 10 2 38- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5a-androstanediol-38,178 (V) 20/24 x 10 3 178- [p-di (2-chloroethyl) amino] phenylacetate] -5α-androstanediol-38,178 (VI) 20/24 x 10 20 - 418- [p-di (2-chloroethyl) aminophenyl-N-acetylalanyl] -5α-androstan-17β-ol-3 -one (III) 25/24 x 10 50/24 x 10 25 - 5 17β- [p-di (2-chloroethyl) aminophenyl-N-acetylalanyl] -2α-methyl-5α-androstan-17β-ol 3- 25/24 x 10 oni (IV) 50/24 x 10 30 - 6 DEA mustard 5/24 x 10 10/24 x 10 7 Dihydrostestosterone 15/24 x 10 35 - 8 Dehydroepiandrosterone 0.5 / 24 x 10 1/24 x 10 9 Testosterone propionate 15/24 x 10 40 - • - 10 Sarcolysin 2/24 x 10 11 Chlorophenyl 1/2 x 10 45 is 84834 (Table 5, continued)

Nro Päiviä käsit- Anabolinen Androgeeninen _telyn jälkeen_indeksi_indeksi_ 14 5 6 5 1 1 2,4 8,5 10 1,3 5,2 2 1 0,9 2,5 10 1,3 2,4 3 1 1,2 2,6 10 10 1,4 1,3 4 1 1,7 2,0 10 1,2 1,1 5 1 2,1 6,2 10 1,3 4,5 15 1 1,7 1,6 10 1,2 0,8 1 2,3 1,5 10 1,6 1,8 6 1 1,3 1,4 20 1 1,2 2,2 7 1 1,6 1,1 10 1,1 0,9 8 1 1,5 1,2 1 1>1 . 25 9 1 2,7 23,9 10 2,1 8,2 10 1 0,8 1,6 11 1 1,0 0,9 30 176-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]- 5a-androstan-176-oli-3-onin (I) hormonaalisen tehon kinetiikan tutkimuksessa on havaittu kiintoisaa säännöllisyyttä: kohteena olevien elinten (eturauhanen, kives, siemen-nesterakkulat) stimuloitumisjakson korvautuminen 1,5 kuu-35 kauden jälkeen niiden voimakkaan estymisen jaksolla, kun taas niissä eläimissä, joille annettiin ainoastaan dihyd-rotestosteronia, palautui edellämainittujen elinten massaNo. Days by hand- Anabolic Androgenic _after_treatment_index_index_ 14 5 6 5 1 1 2.4 8.5 10 1.3 5.2 2 1 0.9 2.5 10 1.3 2.4 3 1 1.2 2.6 10 10 1.4 1.3 4 1 1.7 2.0 10 1.2 1.1 5 1 2.1 6.2 10 1.3 4.5 15 1 1.7 1.6 10 1.2 0.8 1 2.3 1.5 10 1.6 1.8 6 1 1.3 1.4 20 1 1.2 2.2 7 1 1.6 1.1 10 1.1 0.9 8 1 1.5 1.2 1 1> 1. 25 9 1 2.7 23.9 10 2.1 8.2 10 1 0.8 1.6 11 1 1.0 0.9 30 176- [p-di (2-chloroethyl) aminophenyl acetate] -5α-androstane A study of the kinetics of the hormonal action of -176-ol-3-one (I) has shown an interesting regularity: replacement of the stimulation period of the target organs (prostate, testis, seminal vesicles) after 1.5 months to 35 months with a period of their severe inhibition, whereas in animals given dihydrotestosterone alone, the mass of the above organs was restored

IIII

I» 84834 normaaliksi tämän jakson päättyessä. Myöskin todettiin yhdisteen I pitkäaikainen ehkäisevä vaikutus kilpirauhaseen urospuolisissa ja naaraspuolisissa rotissa (samalla tavoin dihydrotestosteronin vaikutus), samoinkuin kohtuun ja mu-5 nasarjoihin, niin että näiden elinten massa ei palautunut normaaliksi edes 3 kuukauden kuluttua valmisteen antamisen keskeyttämisen jälkeen. Yhdisteen I aiheuttama tilapäisen "kemiallisen kastraation" vaikutus todettiin naaraspuolisissa rotissa, joilla oli estrogenoaktiivisia munasarja-10 rakkulakasvaimia. Yhdistettä I käyttäen suoritetun terapeuttisen käsittelyn jälkeen rotille luontainen jatkuva naaraan kiima lakkasi. Vatsan avaus ja munasarjojen histo-loginen tutkimus ovat osoittaneet, että kiiman keskeytys tapahtuu tuloksena munasarjojen rakkuloiden umpaankasvusta 15 ja munasarjojen välikudoksen surkastumisesta, mikä on est-rogenoaktiivinen rotissa. "Kemiallisen kastraation" vaikutus on havaittu myös maidonerityksessä rotilla, jotka terapeuttisen käsittelyn jälkeen käytettäessä 17B-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-androstan-176-oli-20 3-onia (I) menettivät lisääntymiskykynsä 5-7 kuukaudeksi. Nämä tulokset kuvaavat tämän yhdisteen hedelmöitystä ehkäiseviä ominaisuuksia.I »84834 normal at the end of this period. The long-term inhibitory effect of compound I on the thyroid gland in male and female rats (similarly the effect of dihydrotestosterone), as well as on the uterus and ovaries, was also observed, so that the mass of these organs did not return to normal even 3 months after discontinuation. The effect of compound "transient" chemical castration "was observed in female rats with estrogenoactive ovarian-10 vesicular tumors. After therapeutic treatment with Compound I, the continuous female mite inherent in rats ceased. Abdominal opening and ovarian histology have shown that rupture of the heat occurs as a result of ovarian vesicle occlusion 15 and atrophy of the ovarian interstitial tissue, which is estrogenoactive in rats. The effect of "chemical castration" has also been observed in milk secretion in rats which, after therapeutic treatment with 17β- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-176-ol-20 3-one (I), lost their reproductive capacity 5-7 months. These results describe the contraceptive properties of this compound.

On myös osoitettu, että yhdisteellä I on sitäpaitsi alkyloivia ominaisuuksia. Se häiritsee RNA’n transkriptio-25 ja siirtoprosesseja, aiheuttaa DNA'n rakennevikoja, jotka kuitenkin parantuvat nopeammin normaaleissa soluissa (perna) kuin kasvainten soluissa (sarkooma S-37). Viimemainitut seikat viittaavat kasvaimia torjuvan vaikutuksen se-lektiivisyyteen.It has also been shown that Compound I also has alkylating properties. It interferes with RNA transcription-25 and transfer processes, causing structural defects in DNA that, however, heal faster in normal cells (spleen) than in tumor cells (sarcoma S-37). The latter points to the selectivity of the antitumor effect.

30 Käyttäen yhdistettä I esimerkkinä on tällöin osoi tettu, että hormonisytostaatei11a - esillä olevan keksinnön mukaisilla androstaanisarjan steroidijohdannaisilla on kaksinainen biologinen vaikutusmekanismi. Niillä on sekä alkyloiva että hormonaalinen vaikutus.Using Compound I as an example, it has been shown that the hormone cytostatics and the steroid derivatives of the androstane series of the present invention have a dual biological mechanism of action. They have both alkylating and hormonal effects.

35 Keksinnöllisyyden perustelemiseksi FI-patentista 57 114 tunnettujen andosteeniesterijohdannaisten suhteen 20 8 4 8 34 on lisäksi osoitettu, että dihydrotestosteroni ja 5a-and-rostaanidioli-3B,17B (lyhennettynä 3B-dioli), joista syntetisoimat uudet yhdisteet 17B-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyliasetaatti-5a-androstan-17B-oli-3-oni (yhdiste I), 5 3B- [p-di( 2-kloorietyyliaminofenyyliasetaatti] -5a-andros- taanidioli-3B,17B (yhdiste V) ja 17B-[p-di(2-kloorietyy-li)aminofenyyliasetaatti]-5a-androstaanidioli-3B,17B (yhdiste VI) rakentuvat, vaikuttavat eri tavalla 1) androgee-nisiin ja anabolisiin ominaisuuksiin (Taulukko 6); 2) vai-10 kutuksen biokemialliseen mekanismiin - vaikutus DHT:n ja estradioli 17B:n reseptoreihin sitoutumiseen elimessä (Taulukko 7); sekä 3) kasvaimenvastaiseen aktiviteettiin hiiren hormonista riippuvaan munasarjakasvaimeen ja maksa-metastaattiseen nisäsyöpään (Taulukko 8).35 In order to justify the inventive step with respect to the andostenene ester derivatives known from FI patent 57,114, it has further been shown that dihydrotestosterone and 5α-androstanediol-3B, 17B (abbreviated as 3B-diol), from which the new compounds 17B- [p-di ( 2-chloroethyl) amino-phenylacetate-5α-androstan-17β-ol-3-one (Compound I), 5β- [p-di (2-chloroethylaminophenylacetate] -5α-androstanediol-3B, 17B (Compound V) and 17β- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstanediol-3β, 17B (Compound VI) are constructed to have different effects on 1) androgenic and anabolic properties (Table 6); 2) effect on the biochemical mechanism - effect on the binding of DHT and estradiol 17B receptors in the organ (Table 7); and 3) antitumor activity in mouse hormone-dependent ovarian tumor and liver metastatic breast cancer (Table 8).

I: 21 84834I: 21 84834

Taulukko 6Table 6

Androstaani sarjan steroidi johdannaisten androgeeniset ja anaboliset ominaisuudetAndrogenic and anabolic properties of steroid derivatives of the androstane series

Yhdiste Annos (mg/kg) Päiviä Anabolinen Androgeeni- aikaväli (h) käsitte- indeksi nen indeksi x antokertojen lyn jäl- lukumäärä keen 176-[p-di(2-kloorietyyli)-aminofenyyli-asetaatti]-5a- androstaani-178- 1 2,4 8,5 oli-3-oni (I) 25/24 x 10 10 1,3 5,2 3B-[p-di(2- kloorietyyli)- aminofenyyli- asetaatti]-5a- androstaanidi- 1 0,9 2,5 oli-38,178 (V) 20/24 x 10 10 1,3 2,4 178-[p-di(2-kloorietyyli)-aminofenyyli-' -äsetaatti ] - 5a- androstaanidioli- 1 1,2 2,6 .:.38,178 (VI) 20/24 x 10 10 1,4 1,3Compound Dose (mg / kg) Days Anabolic Androgen interval (h) Conceptual index x Number of administrations 176- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstane-178- 1,2,4 8,5-ol-3-one (I) 25/24 x 10 10 1,3 5,2 3β- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstane .9 2.5 ol-38,178 (V) 20/24 x 10 10 1,3 2,4 178- [p-di (2-chloroethyl) aminophenyl'-acetate] -5α-androstanediol-1,2 2.6: 38.378 (VI) 20/24 x 10 10 1.4 1.3

Androgeeninen ja anabolinen indeksi määritettiin vastaavasti ••-eturauhasen ja peräaukon kohottajaiihaksen massan muutoksesta kastroiduilla nuorilla rotilla (kyseisten elimien suhteellisen massan suhde käsittelyn jälkeen vertailueläimen vastaavaan massaan, jolloin vertailueläimen oletettiin olevan arvoltaan 1).The androgenic and anabolic index were determined from the change in •• prostate and anal lift muscle mass in castrated young rats, respectively (ratio of the relative mass of these organs after treatment to that of the control animal, assuming a reference animal value of 1).

22 8483422 84834

Taulukko 7Table 7

Androstaanisarjan stereoidijohdannaisten vaikutus DHT:n ja estradioli 17B:n [E2] reseptoreihin sitoutumiseen rotan eturauhasessa annos (mg/kg) DHT:n reseptorit E2:n reseptorit aikaväli (h) (mol/kg prot. )_(mol/mg prot.) x antokertojen sytoplas- tumai- sytoplas- tumai- lukumäärä maattiset set_maattiset setEffect of androstane series stereoid derivatives on binding of DHT and estradiol 17B [E2] receptors in rat prostate dose (mg / kg) DHT receptors E2 receptors time interval (h) (mol / kg prot.) _ (Mol / mg prot. ) x number of administrations cytoplast- number of cytoplasts matic set_matical set

Ix CX I C I C I CIx CX I C I C I C

Kontrolli-eläimet (ei vaikutusta) 84 0 46 0 25 0 0 0 kloorifenasyyli 1,5/24x5 87 94 61 0 0 531 496 318Control animals (no effect) 84 0 46 0 25 0 0 0 chlorophenyl 1.5 / 24x5 87 94 61 0 0 531 496 318

Dihydrotesto- steroni 10/24x5 0 0 0 0 0 74 0 99 yhdiste I 25/24x5 32 51 00 257 353 0 339 36-dioliXX 10/24x5 55 37 210 117 0 134 84 52 yhdiste V 20/24x5 0 71 0 0 137 67 0 114 yhdiste VI 20/25 0 0 0 0 0 483 0 133 x I kastroimattomat eläimet C kastroidut eläimet xx 5a-androstaanidioli-3B,178Dihydrotestosterone 10 / 24x5 0 0 0 0 0 74 0 99 compound I 25 / 24x5 32 51 00 257 353 0 339 36-diolXX 10 / 24x5 55 37 210 117 0 134 84 52 compound V 20 / 24x5 0 71 0 0 137 67 0 114 compound VI 20/25 0 0 0 0 0 483 0 133 x I uncastrated animals C castrated animals xx 5α-androstanediol-3B, 178

Taulukko 8 : ; Kloorifenasyyliesterin (DHT) [yhdiste I] ja 3B-diolin [yhdiste V, VI] kasvaimen vastainen vaikutus hormonista riippuviin kasvaimiin .Yhdiste Kasvaimen maksimiesto (eliniän piteneminen) %Table 8:; Antitumor activity of chlorophenyl ester (DHT) [Compound I] and 3B-diol [Compound V, VI] on hormone-dependent tumors. Compound Maximum tumor prevention (prolongation of life)%

Ca - 755 SC - 5 LMMC OTCa - 755 SC - 5 LMMC OT

: I 98(59) 82 41 37 - V 95(32) 80 97 98(25) VI 95(31) 79 81 73(83) li 23 84834: I 98 (59) 82 41 37 - V 95 (32) 80 97 98 (25) VI 95 (31) 79 81 73 (83) li 23 84834

Taulukon 6 mukaan yhdisteiden V ja VI androgeeninen ominaisuus on heikompi kuin yhdisteen I vastaava ominaisuus (androgeeniset indeksit käsittelyn jälkeen 2,5; 2,6; 8,5 vastaavasti.According to Table 6, the androgenic property of compounds V and VI is weaker than that of compound I (androgenic indices after treatment 2.5, 2.6, 8.5, respectively).

5 Yhdisteen VI androgeeninen vaikutus on lyhytaikai nen, kun taas yhdisteen I ja V vaikutus ilmenee selvästi jopa 10 päivän kuluttua käsittelystä. Yhdisteillä V ja VI ei käytännöllisesti katsoen ole anabolista vaikutusta (indeksi 0,9 vastaavasti 1,2), kun taas yhdisteen I ko. in-10 deksi on 2,4.5 The androgenic effect of compound VI is short-lived, while the effect of compounds I and V is clearly evident up to 10 days after treatment. Compounds V and VI have virtually no anabolic effect (index 0.9 and 1.2, respectively), while compound I. the in-10 index is 2.4.

Taulukosta 7 havaitaan yhdisteiden I, V ja VI vaikutuserot DHT:n ja E2:n reseptoreihin tutkituille yhdisteillä käsiteltyjen eläinten eturauhasen sytosoleissa ja tumauutteissa. Kastroimattomilla eläimillä esim. yhdisteet 15 I ja 3B-dioli alentavat 3H-sitoutumisen noin puoleen - noin kolmasosaan ja yhdisteillä V ja VI arvoon O kontrollieläi-miin verrattuna. Ero E2-reseptoreissa on vielä suurempi: annettaessa yhdistettä I kastroimattomille eläimille kasvaa spesifinen sitoutuminen 3HE2-reseptoreihin 10 kertaa 20 kontrollieläimiin verrattuna; annettaessa yhdistettä V on kasvu 5-kertainen ja annettaessa yhdistettä VI on kasvu täysin estynyt. Kysymyksen ollessa kastroiduista eläimistä käyttäytyvät yhdisteet toisella tavalla. Todettiin spesifistä sitoutumista 3H DHT-reseptoreihin annettaessa koe-25 eläimille yhdisteitä I, V, 38-dioli ja kloorifenasyyli, kun taas yhdisteet VI ja DHT estivät sitoutumisen. Kaikki yhdisteet kohottivat voimakkaasti 3HE2:n spesifistä sitoutumista, uusista yhdisteistä varsinkin yhdiste VI. Määritettäessä 3H DHT:n ja 3HE2:n spesifinen sitoutuminen oli 30 uusien androgeeniyhdisten välinen ero vähemmän huomattava, vaikkakin 3HE2:n sitoutumisessa kastroidun rotan prostata-tumauutteessa oli kvantitatiivinen ero. Näin ollen jokainen uusi yhdiste I, V ja VI vaikuttaa spesifisesti 3H DHT:n 3HE2:n sitoutumiseen ja vaikutus riippuu lisäksi sii-35 tä ovatko eläimet kastroituja vai kastroimattomia.Table 7 shows the differences in the action of compounds I, V and VI on DHT and E2 receptors in the prostate cytosols and nuclear extracts of compounds treated with the compounds studied. In uncastrated animals, e.g., compounds 15 I and 3B-diol reduce 3 H binding by about half to about one-third and compounds V and VI to O compared to control animals. The difference in E2 receptors is even greater: administration of Compound I to uncastrated animals increases specific binding to 3HE2 receptors 10-fold compared to 20 control animals; administration of compound V results in a 5-fold increase and administration of compound VI results in complete inhibition of growth. In the case of castrated animals, the compounds behave differently. Specific binding to 3 H DHT receptors was observed upon administration of I, V, 38-diol and chlorophenyl to experimental animals, whereas compounds VI and DHT inhibited binding. All compounds strongly increased the specific binding of 3HE2, of which the new compounds were especially compound VI. In determining the specific binding of 3H DHT and 3HE2, the difference between the 30 new androgenic compounds was less significant, although there was a quantitative difference in the binding of 3HE2 in the prostate nucleus extract of castrated rat. Thus, each of the new compounds I, V and VI has a specific effect on the binding of 3H DHT to 3HE2, and the effect also depends on whether the animals are castrated or uncastrated.

24 8 4 8 3424 8 4 8 34

Taulukosta 7 ilmenee, että yhdisteiden I, V ja VI kasvaimenvastainen vaikutus hormonista riippuviin kasvaimiin on erilainen: yhdisteet V ja VI ovat paljon aktiivisempi kuin yhdiste I munasarjakasvainta vastaan ja yhdiste 5 V on parempi kuin yhdiste V maksametastaattista nisäsyöpää vastaan.Table 7 shows that the antitumor effect of compounds I, V and VI on hormone-dependent tumors is different: compounds V and VI are much more active than compound I against ovarian tumor and compound 5 V is better than compound V against hepatic metastatic breast cancer.

Edellä esitetyn perusteella uusien yhdisteiden kasvaimen vastainen aktiviteetti riippuu niiden steroidiosan - DHT:n ja 3B-diolin rakenteesta. Tämä on osoitettu ohei-10 sissa taulukoissa tutkimalla yhdisteiden androgeenisiä ja anabolisia ominaisuuksia sekä myös biokemiallisin kokein.Based on the above, the antitumor activity of the new compounds depends on the structure of their steroid moiety - DHT and 3B-diol. This has been demonstrated in the tables below by examining the androgenic and anabolic properties of the compounds as well as by biochemical experiments.

Menetelmä androstaanisarjan steroidijohdannaisten valmistamiseksi on yksinkertainen.The method for preparing steroid derivatives of the androstane series is simple.

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden syn-15 teesi suoritetaan noudattaen tunnettua menetelmää saattamalla substituoitu 38,17B-2a-androstaani reagoimaan sy-totoksisen fenyylialkaanihappokloridin kanssa aproottises-sa liuottimessa orgaanisen emäksen läsnäollessa liuottimen kiehumispisteessä 8-24 tunnin ajan ja eristämällä toivot-20 tu tuote preparatiivisen pylväskromatografiamenetelmän avulla tai suorittamalla myöhempi halogeenien substituutio reaktiotuotteessa Br:llä tai J:llä, tai suorittamalla myöhempi ketoryhmän pelkistys reaktiotuotteessa.The synthesis of the compounds of the present invention is carried out according to a known method by reacting substituted 38,17B-2a-androstane with cytotoxic phenylalkanoic acid chloride in an aprotic solvent in the presence of an organic base at the boiling point of the solvent for 8-24 hours and isolating the desired product. by column chromatography or by carrying out a subsequent substitution of halogens in the reaction product with Br or J, or by carrying out a subsequent reduction of the keto group in the reaction product.

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden syn-25 teesiä tällä menetelmällä voidaan esittää seuraavan kaavion avulla: ·· ,3-pXlj 2The synthesis of the compounds of the present invention by this method can be illustrated by the following scheme: ··, 3-pXlj 2

·" » V*/V H B· "» V * / V H B

A &/ / HA & / / H

: : - £/ W:: - £ / W

"y'y

: 35 n-TV: 35 n-TV

cc

HB

11 25 84834 A. V on -OH; =0-; R2’ = =0-; R3' on -CH3, -H; jolloin Rx’ ja R2' eivät voi samanaikaisesti olla -OH.11 25 84834 A. V is -OH; = 0; R2 '= = O-; R3 'is -CH3, -H; wherein Rx 'and R2' cannot simultaneously be -OH.

B. Rx on -OH; =0-; -OCOCH2C6H4N(CH2CH2Cl )2; R2 = -OH, -0C0(CH2)nC6H4 -N(CH2CH2C1)2; jossa n on 1 tai 3, 5 -OCOCHCH2C6H4N(CH2CH2Cl)2; R3 on CH3, -H, jolloin R, ja R2 NHCOCH3B. Rx is -OH; = 0; -OCOCH2C6H4N (CH2CH2Cl) 2; R 2 = -OH, -OCO (CH 2) n C 6 H 4 -N (CH 2 CH 2 Cl) 2; wherein n is 1 or 3,5 -OCOCHCH 2 C 6 H 4 N (CH 2 CH 2 Cl) 2; R 3 is CH 3, -H, wherein R 1 and R 2 are NHCOCH 3

eivät samanaikaisesti voi olla -OH ja kun Rx ei voi olla =0 kun R2 on -OHcannot simultaneously be -OH and when Rx cannot be = O when R2 is -OH

C. Ri" on -OH, =0, -OCOCH2C6H4N(CH2CH2Cl)2; R2" = -OH, 10 OCO(CH2)nC6H4-N(CH2CH2X)2; jossa n on 1 tai 3; X on Cl, Br, J; -OCOCHCH2C6H4N(CH2CH2Cl)2; R3 on CH3, -H, jolloin R/’ ja NHCOCHj R2" eivät samanaikaisesti voi olla -OH ja Rx ei voi olla =0 kun R2 on -OH.C. R 1 "is -OH, = O, -OCOCH 2 C 6 H 4 N (CH 2 CH 2 Cl) 2; R 2" = -OH, OCO (CH 2) n C 6 H 4 -N (CH 2 CH 2 X) 2; wherein n is 1 or 3; X is Cl, Br, J; -OCOCHCH2C6H4N (CH2CH2Cl) 2; R 3 is CH 3, -H, wherein R 1 'and NHCOCH 2 R 2' simultaneously cannot be -OH and R x cannot be = O when R 2 is -OH.

15 Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden syn teesi suoritetaan saattamalla p-di(2-kloorietyyli)aminofe-nyylietikkahappokloridi reagoimaan 5a-androstäänin kanssa, joka on substituoitu 36- tai 176 - tai 2a-asemassa, minkä jälkeen esteröintituotteet pelkistetään natriumboorihyd-20 ridillä tai kloori korvataan bromilla tai jodilla.The synthesis of the compounds of the present invention is carried out by reacting p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetic acid chloride with 5α-androstane substituted at the 36- or 176- or 2a-position, followed by reduction of the esterification products with sodium borohydride or chlorine. replaced by bromine or iodine.

Esillä olevan keksinnön ymmärtämiseksi paremmin esitetään seuraavassa joitakin erityisesimerkkejä asian - r'; valaisemiseksi.For a better understanding of the present invention, some specific examples are set forth below; to illuminate.

Esimerkki 1 25 176-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]- 5a-androstan-176-oli-3-oni (I)Example 1 176- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-176-ol-3-one (I)

Suspensioon, joka sisältää 30,0 g (0,10 mmol) 5a-androstan-176-oli-3-onia 500 mlrssa kuivaa bentseeniä, lisätään laskettu määrä trietyyliamiinia ja 38,0 g (0,11 30 mmol) p-di(2-kloorietyyli)aminofenyylietikkahappoklori- dia. Saatua seosta sekoitetaan 80°C:n lämpötilassa 24 tuntia ja trietyyliamiinihydrokloridi erotetaan. Bentseeni-liuos pestään KHC03:n vesiliuoksella, H20:lla ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan bentseeniin, lisätään 35 pylvääseen, joka on täytetty Al203:lla, ja eluoidaan bent- 26 84834 seenillä. Bentseenieluaatti haihdutetaan, öljymäisen tuotteen muodossa oleva jäännös kiteytetään eetteristä. Tuotteen saanto on 27,8 g (49,2 % laskettuna lähtöaineena käytetystä hormonista), sp 99-101°C (eetteri).To a suspension of 30.0 g (0.10 mmol) of 5α-androstan-176-ol-3-one in 500 mL of dry benzene is added a calculated amount of triethylamine and 38.0 g (0.11-30 mmol) of p-di ( 2-chloroethyl) aminophenylacetic acid chloride. The resulting mixture is stirred at 80 ° C for 24 hours and the triethylamine hydrochloride is separated. The benzene solution is washed with aqueous KHCO 3, H 2 O and evaporated to dryness. The residue is dissolved in benzene, applied to 35 columns packed with Al 2 O 3 and eluted with benzene. The benzene eluate is evaporated, the residue in the form of an oily product is crystallized from ether. The yield of the product is 27.8 g (49.2% calculated on the starting hormone), mp 99-101 ° C (ether).

5 Saadut arvot %: C 67,85, H 7,89, Cl 12,96. C31H43N03C12. Lasketut arvot %: C 67,89, H 7,84, Cl 12,95.Found:% 67.85, H 7.89, Cl 12.96. C31H43N03C12. Calculated values%: C 67.89, H 7.84, Cl 12.95.

Esimerkki 2 176- [p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyylibutyraatti] - 5a-androstan-176-oli-3-oni (II) 10 Tämän yhdisteen valmistus suoritetaan samalla ta valla kuin edellisessä esimerkissä 1 kuvatun yhdisteen synteesi.Example 2 176- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylbutyrate] -5α-androstan-176-ol-3-one (II) This compound is prepared in the same manner as the synthesis of the compound described in Example 1 above.

Esteröintireaktioon osallistuvat: 5a-androstaani- 176-oli-3-oni ja p-di-(2-kloorietyyliJaminofenyylivoihap-15 pokloridi. Reaktioseosta sekoitetaan 80°C:n lämpötilassa 17 tuntia. Seuraavat käsittelyt suoritetaan edellä esimerkissä 1 kuvatulla tavalla.The esterification reaction involves: 5α-androstan-176-ol-3-one and p-di- (2-chloroethylaminophenylbutyric acid-15-chloride) The reaction mixture is stirred at 80 [deg.] C. for 17 hours The following treatments are carried out as described in Example 1 above.

Tuotteen saanto on 45,5 % laskettuna lähtöaineena käytetystä hormonista, sulamispiste on 100-102°C.The yield of the product is 45.5%, calculated on the starting hormone, melting point 100-102 ° C.

20 Saadut arvot %: C 68,65, H 8,15, Cl 11,98. C33H47C12N03. Lasketut arvot %: C 68,77, H 8,16, Cl 12,32.Found:% 68.65, H 8.15, Cl 11.98. C33H47C12N03. Calculated values%: C 68.77, H 8.16, Cl 12.32.

Esimerkki 3 176-[p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyyli-N-asetyyli- alanyyli]-5a-androstan-176-oli-3-oni (III) 25 Tämän yhdisteen synteesi suoritetaan samalla taval la kuin edellä esimerkissä 1 on selostettu. Esteröintireaktioon osallistuvat 5a-androstan-176-oli-3-oni ja a-N-asetyyliamino-6- [p-di( 2-kloorietyyli ) -amino] fenyylialanii-ni happokloridimetyleenikloridissa.Example 3 176- [p-di (2-chloroethyl) aminophenyl-N-acetylalanyl] -5α-androstan-176-ol-3-one (III) The synthesis of this compound is carried out in the same manner as described in Example 1 above. . The esterification reaction involves 5α-androstan-176-ol-3-one and α-N-acetylamino-6- [β-di (2-chloroethyl) amino] phenylalanine in acid chloride methylene chloride.

30 Reaktioseosta sekoitetaan 40°C:n lämpötilassa 9 tun tia.The reaction mixture is stirred at 40 ° C for 9 hours.

Seuraavat käsittelyt suoritetaan esimerkissä 1 kuvatulla tavalla.The following treatments are performed as described in Example 1.

Esteröintituote kromatografoidaan piihappogeelillä 35 täytetyssä pylväässä käyttäen eluenttina bentseeni/etyyli- 27 8 4 834 asetaatti (1:1)-seosta. Tuotteen saanto on 14,5 % laskettuna lähtöaineena käytetystä hormonista.The esterification product is chromatographed on a column packed with silica gel 35 using a benzene / ethyl acetate (1: 1) mixture as eluent. The yield of the product is 14.5%, calculated on the hormone used as starting material.

Saadut arvot %: C 65,87, H 7,72, Cl 11,11. C34H48C12N204. Lasketut arvot %: C 65,94, H 7,75, Cl 11,47.Found:% 65.87, H 7.72, Cl 11.11. C34H48C12N204. Calculated values%: C 65.94, H 7.75, Cl 11.47.

5 Esimerkki 4 176- [p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyyli-N-asetyyli-alanyyli]-2a-metyyli-5a-androstan-176-oli-3-oni (IV) Tämän yhdisteen valmistus suoritetaan samalla ta-10 valla kuin edellä esimerkissä 1 on selostettu.Example 4 176- [p-di (2-chloroethyl) aminophenyl-N-acetylalanyl] -2a-methyl-5a-androstan-176-ol-3-one (IV) This compound is prepared in the same manner as in as described in Example 1 above.

Esteröintireaktioon osallistuvat 2a-metyyli-5a-and-rostan-176-oli-3-oni ja a-N-asetyyliamino-8-[p-di(2-kloorietyyli )amino]fenyylialaniinihappokloridimetyleeniklori-dissa. Reaktioseosta sekoitetaan 40°C:n lämpötilassa 9 tun-15 tia.The esterification reaction involves 2α-methyl-5α-androstan-176-ol-3-one and α-N-acetylamino-8- [β-di (2-chloroethyl) amino] phenylalanine acid chloride in methylene chloride. The reaction mixture is stirred at 40 ° C for 9 hours to 15 hours.

Esteröintituote kromatografoidaan piihappogeelillä täytetyssä pylväässä käyttäen eluenttina bentseeni/etyyli-20 asetaatti (1:1)-seosta. Tuotteen saanto on 30 % laskettuna lähtöaineena käytetystä hormonista.The esterification product is chromatographed on a column packed with silica gel using a benzene / ethyl acetate (1: 1) mixture as eluent. The yield of the product is 30%, calculated on the hormone used as starting material.

Saadut arvot %: C 66,41, H 7,96, Cl 10,91. C35H50Cl2N2O4. Lasketut arvot %: C 66,34, H 7,96, Cl 11,2.Found:% 66.41, H 7.96, Cl 10.91. C35H50Cl2N2O4. Calculated values%: C 66.34, H 7.96, Cl 11.2.

Esimerkki 5 25 36-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a- androstandioli-36,176 (V) 4,2 g 36-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaat-ti]-5a-androstan-17-onia sekoitetaan 90 ml:n kanssa kuivaa metanolia ja joukkoon lisätään +5°C:n lämpötilassa 0,4 g 30 natriumboorihydridiä, seosta sekoitetaan tunnin ajan, se tehdään happameksi etikkahapolla pH-arvoon 6; liuos haihdutetaan kuiviin, jäännös pestään vedellä ja kuivataan natriumsulfaatin avulla. Bentseeniliuoksesta saadaan 4,0 g amorfista jauhetta. Tuotteen saanto on 95 % (laskettuna 35 lähtöaineena käytetystä ketoyhdisteestä).Example 5 36- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstanediol-36,176 (V) 4.2 g of 36- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-17 -one is mixed with 90 ml of dry methanol and 0.4 g of sodium borohydride are added at + 5 ° C, the mixture is stirred for one hour, acidified with acetic acid to pH 6; the solution is evaporated to dryness, the residue is washed with water and dried over sodium sulfate. 4.0 g of an amorphous powder are obtained from the benzene solution. The yield of the product is 95% (based on 35 keto compounds used as starting materials).

28 8 4 8 3428 8 4 8 34

Saadut arvot %: C 67,59, H 8,25, Cl 12,88. C31H45C12N03. Lasketut arvot %: C 67,90, H 8,16, Cl 12,95.Found:% 67.59, H 8.25, Cl 12.88. C31H45C12N03. Calculated values%: C 67.90, H 8.16, Cl 12.95.

Esimerkki 6 173-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5 5a-androstandioli-33,173 (VI) Tämän yhdisteen valmistus suoritetaan samalla tavalla kuin edellä esimerkissä 5 on selostettu.Example 6 173- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5,5a-androstanediol-33,173 (VI) The preparation of this compound is carried out in the same manner as described in Example 5 above.

Pelkistysreaktioon käytetään 173-[p-di(2-kloori-etyyli)-aminofenyyliasetaatti]-5a-androstan-3-onia. Seu-10 raavat käsittelyt suoritetaan esimerkissä 5 kuvatulla tavalla .173- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-3-one is used for the reduction reaction. The subsequent treatments are performed as described in Example 5.

Pelkistystuote kromatografoidaan piihappogeelillä täytetyssä pylväässä (bentseeni/etyyliasetaatti (4:1)-seos) kokoamalla fraktiot, jotka sisältävät 3a-0H-isomee-15 riä (Rf 0,41) ja 3B-0H-isomeeriä (Rf 0,33). Toivotun 3-iso-meerin saanto on 67 % laskettuna lähtöaineena käytetystä 3-ketoyhdisteestä.The reduction product is chromatographed on a column packed with silica gel (benzene / ethyl acetate (4: 1)) by collecting fractions containing 3a-OH isomer (Rf 0.41) and 3B-OH isomer (Rf 0.33). The yield of the desired 3-isomer is 67%, calculated on the 3-keto compound used as starting material.

Saadut arvot %: C 67,54, H 8,26, Cl 13,03. C31H45C12N03. Lasketut arvot %: C 67,59, H 8,25, Cl 12,88.Found:% 67.54, H 8.26, Cl 13.03. C31H45C12N03. Calculated values%: C 67.59, H 8.25, Cl 12.88.

20 Esimerkki 7 173-[p-di(2-bromietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-androstan-17B-oli-3-oni (VII)Example 7 173- [p-di (2-bromoethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-17β-ol-3-one (VII)

Liuokseen, joka sisältää 3,0 g 173-[p-di(2-kloorietyyli ) aminofenyyliasetaatti] -5a-androstan-173-oli-3-onia 25 40 ml:ssa metyylietyyliketonia, lisätään 5,7 g litiumbro- midia (noin 7-kertainen ylimäärä) ja reaktioseosta kuumennetaan 80°C:n lämpötilassa 35 tuntia. Liuotin haihdutetaan pois ja jäännös liuotetaan bentseeniin. Bentseeniliuos kromatografoidaan alumiinioksidilla täytetyssä pylväässä 30 ja toivottu tuote eristetään öljynä, joka helposti kiteytyy eetteristä. Tuotteen sulamispiste on 106-108°C. Tuotteen saanto on 54 % laskettuna lähtöyhdisteestä. Saadut arvot %: C 58,28, H 6,79, Br 25,09. C31H43Br2N03. Lasketut arvot %: C 58,38, H 6,80, Br 25,08.To a solution of 3.0 g of 173- [p-di (2-chloroethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-173-ol-3-one in 40 ml of methyl ethyl ketone is added 5.7 g of lithium bromide (ca. 7-fold excess) and the reaction mixture is heated at 80 ° C for 35 hours. The solvent is evaporated off and the residue is dissolved in benzene. The benzene solution is chromatographed on an alumina packed column 30 and the desired product is isolated as an oil which readily crystallizes from ether. The melting point of the product is 106-108 ° C. The yield of the product is 54% based on the starting compound. Found:% 58.28, H 6.79, Br 25.09. C31H43Br2N03. Calculated values%: C 58.38, H 6.80, Br 25.08.

11 29 8 4 8 3411 29 8 4 8 34

Esimerkki 8 173- [p-di( 2-jodietyyli )aminofenyyliasetaatti] -5a-androstan-17fi-oli-3-oni (VIII)Example 8 173- [p-di (2-iodoethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-17β-ol-3-one (VIII)

Liuokseen, joka sisältää 5 g 17B-[p-di(2-kloori-5 etyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-androstan-17B-oli-3-onia 50 mlrssa metyylietyyliketonia, lisätään 7,5 g natriumjo-didia (noin 6 kertainen ylimäärä) ja reaktioseosta kuumennetaan liuottimen kiehumispisteessä 72°C:ssa (79,5-80°C). Liuottimen haihdutuksen jälkeen jäännös uutetaan bentsee-10 nillä ja kromatografoidaan alumiinioksidilla täytetyssä pylväässä käyttäen eluenttina bentseeniä. Bentseenieluaa- tista otetaan talteen kiinteä tuote, joka kiteytetään eetteristä. Tuotteen saanto on 3,29 g (48,5 % laskettuna lähtöaineena käytetystä hormonista), sulamispiste on 110-15 112°C.To a solution of 5 g of 17β- [p-di (2-chloro-5-ethyl) aminophenylacetate] -5α-androstan-17β-ol-3-one in 50 ml of methyl ethyl ketone is added 7.5 g of sodium iodide (about 6 times excess) and the reaction mixture is heated to the boiling point of the solvent at 72 ° C (79.5-80 ° C). After evaporation of the solvent, the residue is extracted with benzene and chromatographed on a column packed with alumina using benzene as eluent. A solid product is recovered from the benzene eluate which is crystallized from ether. The yield of the product is 3.29 g (48.5% calculated on the starting hormone), melting point 110-1512 ° C.

Saadut arvot %: C 50,70, H 5,87, J 34,07. C31H43J2N03. Lasketut arvot %: C 50,90, H 5,88, J 34,74.Found:% 50.70, H 5.87, J 34.07. C31H43J2N03. Calculated values%: C 50.90, H 5.88, J 34.74.

Teollinen soveltuvuusIndustrial suitability

Androstaanisarjan steroidi johdannaiset ovat käyttö-20 kelpoisia lääketieteen eri aloilla, kuten gynekologiassa ja onkologiassa kasvaimia torjuvina ja hedelmöitystä ehkäisevinä aineina.The steroid derivatives of the androstane series are useful in various fields of medicine, such as gynecology and oncology as antitumor and contraceptive agents.

Claims

A process for the preparation of therapeutically useful steroid derivatives of the Androstane series having the general formula r- · J R2 10 »rCO (U) H 15 wherein Rx is -OCOCH2C6H4N (CH2CH2Cl) 2; - OH or, = O; R 2 is -OH -OCOCHCH 2 C 6 H 4 N (CH 2 CH 2 Cl) 2; NHCOCH 3 -OCO (CH 2) n C 6 H 4 N (CH 2 CH 2 X) 2, where n is 1 or 3, and X is Cl, Br, J; and R 3 is -CH 3 or -H, provided that R x 20 and R 2 cannot simultaneously represent a hydroxy group and R 3 cannot be oxo when R 2 is a hydroxy group, characterized in that a) to obtain a compound of formula (i) wherein R 1 is -OCOCH 2 C 6 H 4 N (CH 2 CH 2 Cl 2) 2 and R 2 is = O, reacting a compound of formula 30 (2) 1. H 35 wherein R 3 is as defined above with an acid chloride of formula III 84834 ° II RC-Cl (3) wherein R is 5-CH2- (C1CH2CH2) 2N-10 or b) for obtaining a compound of formula (1) wherein Rx is = O and R2 is -OCO (CH2) nC6H4N (CH2CH2Cl) 2, reacting a compound of the formula 20 n-r ° HH where R3 is as defined above with an acid chloride of the formula 30 [^> - <c "2> n- (c1ch2ch2> 2n - 35: wherein n is the same as above, or 32 8 4 8 3 4 c) to obtain a compound of formula (1) wherein R 2 is -OCOCHCH 2 C 6 H 4 N (CH 2 CH 2 Cl) 2 NHCOCH 3 Compound of (a) (4) for reacting with αN-acyl-5-aminoamino-β- [p-di (2-chloroethyl) amino] phenylalanine acid chloride of the formula NHCOCH 3 (f) j -CH 2 CH-C-Cl (C 1 CH 2 CH 2) 2N-O (5) 15 then in the compound thus obtained the oxo group is reduced, if necessary, with sodium borohydride, and / or when in the formula (1) the radical R2 is -OCO (CH2) nC6H4N (CH2CH2C1) 2, chlorine is optionally replaced by bromine or iodine. Il 33 84834 Förfarande för framställning av therapeutiskt an-vändbara steroider av androstanserien, vilka har formeln 5

10 H color R3 is -OCOCH2C6H4N (CH2CH2Cl) 2; - OH or = 0; R 2 is -OH, -OCOCHCH 2 C 6 H 4 N (CH 2 CH 2 Cl) 2; NHCOCH 2 -OCO (CH 2) n C 6 H 4 N (CH 2 CH 2 X) 2, color n is 1 or 3, and X is Cl, Br or J; and R3 is -CH3 or -H, under the same conditions as R3 and R2 are also selected from the group consisting of hydroxyl groups and 20 Rx are selected from the group consisting of oxo of R2 and the hydroxyl group, the same number being used to form a group of compounds (1), color Rx is -OCOCH2C6H4N (CH2CH2Cl) 2 and R2 is = 0, given in the formulation of 25 s »30» i ..... H color R3 in the form of anhydrous formulation, with syrachloride of 35 forms 34 84834? RC-Cl (3) color R is 5 (c2H2) 2s-10 or 10) b) is used for the preparation of formula (1), 15 color R3 is = 0, and R2 is -0CO (CH2) nC6H4N (CH2CH2C1) 2 , orasätts en förening med formuleln ... ri H 25 color R3 is an anhydrous betydelse, an en syrachloride is given by a formula 30 r ^ T <CH2> n- (C1CH2CH2) 2N— color n is an anhydrous betydelse; or 35 to 35 84834 c) for the preparation of the formula (1), color R2 and -OCOCHCH2C6H4N (CH2CH2Cl) 2 NHCOCH and to the preparation of the formula (4) with N-acetylamino-5β- [2-di (2) -chlorethyl) amino] phenylalanine synachloride with NHCOCH3

10 P 2 H 2 -f-Cl (cyclo 2 O 2) 2n-0 15 oxy groups are optionally obtained by reduction with sodium borohydride, and / or with radicals R 2 in the form of (1) betecnar -OCO (CH 2) n C 6 H 4 N (CH 2 CH 2 Cl) 2 times the chlorine content of the bromine or iodine.