FI84186C - Foerfarande foer framstaellning av monoklonala antikroppar mot eimeria spp.-sporozoiter och merozoiter och foerfarande foer framstaellning av en antigen komposition. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av monoklonala antikroppar mot eimeria spp.-sporozoiter och merozoiter och foerfarande foer framstaellning av en antigen komposition. Download PDFInfo
- Publication number
- FI84186C FI84186C FI843143A FI843143A FI84186C FI 84186 C FI84186 C FI 84186C FI 843143 A FI843143 A FI 843143A FI 843143 A FI843143 A FI 843143A FI 84186 C FI84186 C FI 84186C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- atcc
- antigen
- monoclonal antibodies
- och
- merozoites
- Prior art date
Links
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 31
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 31
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 29
- 241000223924 Eimeria Species 0.000 title claims description 12
- 210000004215 spore Anatomy 0.000 claims description 32
- 210000003936 merozoite Anatomy 0.000 claims description 29
- 241000223932 Eimeria tenella Species 0.000 claims description 25
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 101710123661 Venom allergen 5 Proteins 0.000 claims 1
- 210000001742 aqueous humor Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 15
- 208000003495 Coccidiosis Diseases 0.000 description 12
- 206010023076 Isosporiasis Diseases 0.000 description 12
- 241000894007 species Species 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 7
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 7
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 6
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 6
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 5
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 241000223934 Eimeria maxima Species 0.000 description 2
- 241000499563 Eimeria necatrix Species 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 244000000040 protozoan parasite Species 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WONRDHPFOHAWOG-UHFFFAOYSA-N 2-chloronaphthalen-1-ol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=C(Cl)C=CC2=C1 WONRDHPFOHAWOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087765 Antipain Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000224483 Coccidia Species 0.000 description 1
- 108091026815 Competing endogenous RNA (CeRNA) Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000223931 Eimeria acervulina Species 0.000 description 1
- 241000499566 Eimeria brunetti Species 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- LFVLUOAHQIVABZ-UHFFFAOYSA-N Iodofenphos Chemical compound COP(=S)(OC)OC1=CC(Cl)=C(I)C=C1Cl LFVLUOAHQIVABZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 208000027954 Poultry disease Diseases 0.000 description 1
- 101710194807 Protective antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000473945 Theria <moth genus> Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N antipain Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N 0.000 description 1
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004534 cecum Anatomy 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000973 gametocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 238000005567 liquid scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/44—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from protozoa
- C07K14/455—Eimeria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/20—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans from protozoa
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Menetelmä Eimeria spp.-itiöiden ja merotsoiittien vastais ten monoklonaalisten vasta-aineiden valmistamiseksi ja me netelmä antigeenikoostumuksen valmistamiseksi 1 84186 5 Keksintö koskee menetelmää monoklonaalisten vasta- aineiden valmistamiseksi, jotka reagoivat Eimeria spp.-itiöiden tai merotsoiittien antigeenien kanssa.
Nämä monoklonaaliset vasta-aineet reagoivat spesifisesti Eimeria tenella'n itiöitä ja merotsoiittejä vas-10 taan. Kyseisiä vasta-aineita saadaan hybridoomatekniikal-la. Esitetään hybridooma-viljelmiä, jotka tuottavat vasta-aineita E. tenella'a vastaan. Merosoiitti-antigeenit identifioidaan ja karakterisoidaan.
Keksintö koskee myös menetelmää antigeenisen, immu-15 nogeenisen ja proteiinipitoisen koostumuksen valmistamiseksi, joka on liukoinen detergenttiä sisältävään puskuri-liuokseen, ja joka on Eimeria tenella'n merotsoiittien antigeeninä, ja joka on spesifisesti reaktiivinen merotso-iittivastaisten monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa.
20 Kyseiset antigeenit ja tietyt monoklonaaliset vas ta-aineet ovat tehokkaita kokkidioosin ennaltaehkäisyssä ja hoidossa. Antigeenit ovat hyödyllisiä rokotteina kokki-dioosia vastaan.
Taustatietona mainittakoon, että kokkidioosi on 25 alkueläimissä esiintyvä sairaus, jonka aiheuttaa joukko alkueläinparasiitteja. Linnuissa esiintyvä kokkidioosi on tuhoisa siipikarjan tauti, jonka aiheuttaa joukko Eimeria-lajeja. Kyseisellä taudilla on monimutkainen elinkierto, joka koostuu sekä suvuttomista että suvullisista vaiheis-30 ta. Kanat saavat alunperin tartunnan tautiin nieltyään vapaana eläviä munarakkuloita, joita yleensä esiintyy ulosteissa. Munarakkulat kehittyvät tauteja levittäviksi suvuttomiksi itiöiksi kanan ruoansulatuskanavassa. Itiöt tartuttavat epiteelisoluja ja kehittyvät monitumaisiksi 35 rakenteiksi, jotka tunnetaan halkioina. Jokainen halkio 2 g*tf,6 kehittyy ja lopulta vapauttaa useita tauteja levittäviä suvuttomia rakenteita, jotka tunnetaan merotsoiitteinä. Kyseiset merotsoiitit poistuvat tartunnan saaneista soluista ja tartuttavat muita epiteelisoluja. Itiöihin ja 5 merotsoiitteihin liittyvät useat tauteja levittävät suvut-tomat vaiheet muodostavat suurelta osin kokkidioosin patologian. Kokkidioosin suvullinen kierto alkaa, kun merotsoiitit erottuvat gametosyyteiksi. Hedelmöittyminen tapahtuu ja hedelmöittymistuotteet, jotka tunnetaan munarakkuloina, 10 vapautuvat ulosteisiin. Tällöin parasiitin elinkierto päättyy. Tyypillisen Eimeria tenella'n elinkierto kanoissa päättyy noin 7:ssä - 9:ssä päivässä.
Eimeria-lajien takia koituvien valtavien taloudellisten tappioiden johdosta siipikarjateollisuudelle, roko-15 te parasiittiä vastaan on erittäin toivottava. Kuitenkin parasiitin elinkierron monimutkaisuudesta ja jokaisessa elinvaiheessa olevien useiden antigeenien lukumäärän vaihtelevuudesta johtuen, on huomattu, että heikennetyt tai tapetut parasiitit eivät ole saaneet aikaan pysyvää immu-20 niteettiä. Eräs ratkaisu kyseiseen ongelmaan on eristää ja tunnistaa tietyt antigeenit parasiitistä ja antaa niitä riittävässä määrin, jotta ne voivat toimia immunisoivina aineina. Edullisesti kyseiset antigeenit suojaavat kaikkien tärkeiden lajien tartunnoilta.
25 On tunnettua, että useilla Eimeria-lajeilla sekä saman lajin elinkierron eri vaiheilla on sekä yhteisiä että spesifisiä antigeenejä [Z. Cerna: Folia Parasitologi-ca (Praha), 17 (1970), ss. 135 - 140; Davis et ai.: Immunol. 34 (1978), ss. 879 - 888; M. E. Rose: Immunol. 2 30 (1959), ss. 112 - 122; Rose et ai.: Immunol. 5 (1962), ss.
79 - 92; ja Tanelian et ai.: Acta parasitol. Yogosl. 7 (1976), ss. 79 - 84].
On myös tunnettua, että immuniteetin kehittyminen Eimeria'a vastaan on lajikohtaista; joillakin siipikarjan 35 lajeilla esiintyy huomattavaa kantakohtaista immuniteettiä 3 84186 [Τ. Κ. Jeffers, julkaisussa P. L. Long et al. (toim.): Avian Coccidiosis, ss. 57 - 125; Proc. 13th Poultry Sci. Symp. (1978); L. P. Joyner: Parasitol. 59 (1969), ss.
725 - 732; P. L. Long: Parasitol. 69 (1974), ss. 337 -5 347; ja Long et al.: Parasitol. 79 (1979), ss. 451 - 457] .
Tällä hetkellä Eimeria-lajin immunogeenejä, jotka voisivat synnyttää suojaavaa immuniteettiä linnuissa tai nisäkkäissä, ei vielä ole eristetty tai identifioitu. Ky-10 seisillä Eimeria-immunogeeneillä saadaan todennäköisesti aikaan onnistunut immunisointi kokkidioosia vastaan.
Lymfosyyttihybridoomatekniikan kehittyminen tarjoaa keinon, jolla voidaan tuottaa suhteellisen suuria määriä spesifisiä vasta-aineita lukuisia Eimeria-antigee-15 nejä vastaan. Fuusioimalla spesifiset vasta-ainetta tuottavat solut (pernasolut) myeloomakasvaimesta saatuihin soluihin, on mahdollista valmistaa hybridoomasoluja, jotka erittävät monoklonaalisia vasta-aineita, jotka spesifisesti kohdistuvat alkuperäistä herkistävää antigeeniä vas-20 taan [Köhler & Milstein: Nature (Lontoo) 256 (1975), ss. 495 - 497].
Jos saadaan parasiitin vastaisia vasta-aineita, voi olla mahdollista siirtää kyseiset vasta-aineet tartunnan saaneeseen tai altistuneeseen siipikarjaan ja täten ai-25 kaansaada isäntäorganismille määrätty passiivinen immuniteetti. Kun monoklonaalisia vasta-aineita tuottavia hybri-doomaviljelmiä on saatu, on mahdollista eri menetelmillä käyttää kyseisiä vasta-aineita spesifisten antigeenien eristämiseksi ja identifioimiseksi, joita antigeenejä puo-30 lestaan voitaisiin käyttää rokotteena, jotta isäntäorganismille saataisiin aktiivinen immuniteetti.
Tunnetaan lukuisia hybridoomaviljelmiin ja monoklo-naalisiin vasta-aineisiin liittyviä patenttijulkaisuja (ts. US-patenttijulkaisut 4 172 124; 4 196 265; 4 271 145; 35 4 361 549; 4 631 550; 4 364 932; 4 364 933; 4 364 934; 4 364 935; 4 364 936; 4 831 292 ja 4 381 295).
4 84186
Edellä esitetyn valossa kokkidioosin taloudellisista vaikutuksista karjanhoitoon ja erityisesti siipikarja-teollisuuteen, alkueläinparasiitin hallinta on hyvin toivottavaa .
5 Niinpä keksinnön tarkoituksena on saada aikaan uu sia ja käyttökelpoisia monoklonaalisia vasta-aineita E. tenella-parasiitin merotsoiittejä vastaan. Lisätarkoituk-sena on eristää ja identifioida spesifiset E. tenella-an-tigeenit, jotka ovat käyttökelpoisia rokotteina linnuissa 10 esiintyvän kokkidioosin hallitsemiseksi.
Keksinnön mukaisille menetelmille vasta-aineiden ja antigeenikoostumuksen valmistamiseksi on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksissa esitetään.
Eimeria tenella-laji, joka infektoi kananpoikien 15 umpisuolet, on erityisen tuhoisa parasiitti, joka aiheuttaa erityisen pahoja verisiä haavaumia tartunnan saaneissa eläimissä. E. tenella'lla on kaksi merotsoiitti-vaihetta elinkierrossaan, jotka vaiheet on nimetty ensimmäisen ja vastaavasti toisen sukupolven merotsoiiteiksi. Immunitee-20 tin E. tenella'a vastaan tiedetään kehittyvän sen elin-kierron suvuttomien merotsoiitti-vaiheiden aikana [P. L. Long (toim.): The Biology of the Coccidia, University Park Press, Baltimore, Md. (1982)].
E. tenella'n merotsoiitti-valmistetta käytetään 25 immunisoimaan hiiriä, jotta lopulta saataisiin monoklonaa lisia vasta-aineita jäljempänä esitetyllä menetelmällä. Monoklonaalisia vasta-aineita tutkitaan edelleen, jotta voitaisiin määrittää niiden kyky hillitä parasiitin kasvua in vivo. Antigeenit, jotka aikaansaavat monoklonaalisia 30 vasta-aineita, jotka reagoivat ainakin yhden Eimeria-lajin kanssa tai joko merotsoiittien tai itiöiden kanssa, ja jotka hillitsevät parasiitin kasvua, pidetään suojäävinä antigeeneinä. Suojaavia antigeenejä pidetään mahdollisina ehdokkaina linnuissa esiintyvää kokkidioosia vastaan käy-35 tettävän rokotteen kehittämiseksi.
5 84186
Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.
Esimerkki 1
Kvantitatiivinen radioimmunomääritys
Jotta voitaisiin arvioida vasta-aineiden laatua, 5 suoritettiin kvantitatiivinen radioimmunomääritys.
Glutaraldehydillä sidottuja itiöitä tai merotso-iittejä (yleensä 2 - 5 x 105/kuoppa) sentrifugoidaan 96-kuoppaisille polyvinyylikloridi- tai Removawell·®'-levyille (Dynatech) 1 400 x g 10 minuutin ajan, jotta organismi 10 kiinnittyisi kuoppien pohjiin.
Levyn pohjaan kiinnittyneet itiöt tai merotsoiitit saatetaan reagoimaan seeruminäytteiden kanssa, jotka on saatu parasiitillä immunisoiduista hiiristä, tai hybridoo-mien viljelyliuoksesta saadun monoklonaalisen vasta-aineen 15 kanssa.
Inkubointi vasta-aineen kanssa kesti 16 - 18 tuntia 4 °C:ssa tai 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Sitoutunut vasta-aine todettiin radioaktiivisesti leimatulla toisella vasta-aineella 187,1, joka on hiiren k-kevytketjulle spe-20 sifinen rotan monoklonaalinen vasta-aine. Anti-hiiri k-kevytketjuinen vasta-aine leimataan biosynteettisesti 35S-metioniinilla [D. E. Yelton et ai.: Hybridoma 1 (1982), ss. 5 - 11]. Radioaktiivisuus mitataan neste-tuikelasken-nalla. Radioimmunomääritysmenetelmää sovelletaan tämän 25 jälkeen E. tenella'n itiöistä saatuihin pintamembraanei- hin, jotta varmistetaan vasta-aineiden reaktiivisuus immuuneissa hiiriseerumeissa membraaniproteiinien kanssa.
Esimerkki 2
Hybridoomaviljelmien valmistus 30 Kanan munuaissolujen primääriset viljelmät infek- toidaan juuri munarakkuloista puhjenneilla itiöillä noudattaen menetelmiä, jotka ovat tunnettuja alalla.
5 päivää tartunnan jälkeen alustaan vapautuneet merotsoiitit kerätään sentrifugoimalla 350 x g 10 minuutin 35 ajan.
6 84116 18-viikkoiset BALB/c-naarashiiret immunisoidaan vatsaontelon sisäisesti (i.p.) 1 x 107:llä joko kokonaisilla tai E. tenella-merotsoiittien osilla Freund'in täydellisessä adjuvantissa. Eläimille annetaan i.p. 2 merotso-5 iitti-tehosteruisketta väliaineessa 199 (Gibco) 5 viikon välein alkuperäisen immunisoinnin jälkeen. 3 päivää jokaisen tehosteruiskeen jälkeen saatu seerumi tutkittiin E. tenella'n itiöitä vastaan muodostuneiden vasta-aineiden toteamiseksi epäsuoralla immunofluoresenssimäärityksellä 10 (IFA) ja radioimmunomäärityksellä (RIA). Kummatkin määri tykset suoritetaan glutaraldehydillä sidotuille parasiiteille.
Hybridoomat saadaan noudattaen tunnettuja menetelmiä [Kwan et ai.: (1980) Genetic Engineering; J. K. Setlow 15 ja A. Hollander (toim.), Plenum Publishing Corp., New
York, ss. 31 - 96]. E. tenella'n merotsoiiteillä immunisoidut kahden hiiren pernasolut yhdistetään P3-myelooman P3-x 83. Ag 8.653, erittämättömään klooniin, 30-%risen polyetyleeniglykolin (PEG 1 000, Baker Chemical) läsnäol-20 lessa 8 minuutin ajan. Fuusioidut solut levitetään 96- kuoppaisiin kudosviljelyastioihin (LINBRO) ja ylläpidetään HAT-selektio-alustassa [J. W. Littlefield: Science 145 (1964), ss. 709 - 710]. HAT-alusta valmistetaan Dulbecco'n modifioituun Eagle'n alustaan, jossa on 20 % sikiövasikan 25 seerumia (Gibco) ja 10 % NCTC 109:ää (Microbiological Associates). Hybridejä viljellään inkubaattorissa 37 °C:ssa ja 10-%:isessa C02:ssa.
Viljelmiä analysoidaan ajoittain IFA- ja RIA-mene-telmillä E. tenella'n itiöiden kanssa reagoivien vasta-30 aineiden toteamiseksi. Positiiviset viljelmät siirretään 24-kuoppaisiin kudosviljelmä-astioihin alustassa, jossa ei ole hypoksantiinia, aminopteriiniä eikä tymidiiniä. Hybridoomat kloonataan pehmeässä agaroosissa rotan alkion fib-roblastisyöttökerroksen päällä [Coffins et ai.: J. Cell 35 Physiol. 79 (1972), ss. 429 - 440]. Positiiviset hybridoo- 7 84186 makloonit nimetään alaklooninumeroilla (ts. klooni 15,84,4 on hybrodooma 15,84 alaklooni 4). Hyvin karakterisoitujen alakloonien erittämien immunoglobuliinien luokka ja alaluokka määritetään agar-kaksoisdiffuusiomenetelmällä. De-5 tergenttiin (NP-40) liukoisia hybridoomauutteita käytetään kanin anti-hiiri-vasta-ainereagenssien kanssa (Meloy). Esimerkki 3
Anti-merotsoiitti-monoklonaalisten vasta-aineiden karakteri sointi 10 8:n anti-merotsoiitti-monoklonaalisen vasta-aineen ominaisuudet on esitetty taulukossa I. Suurin osa monoklo-naalisista vasta-aineista reagoi merotsoiittien ja itiöiden kanssa sekä IFArlla että RlA:11a analysoituna. Monoklonaaliset vasta-aineet 1,90 ja 4,76 eivät reagoineet 15 itiöiden kanssa ja sattumalta RIA:ssa [katso (* taulukossa I], Monoklonaalinen vasta-aine 15,84 ei reagoinut merotsoiittien kanssa IFArssa, mutta reagoi yhtä hyvin sekä itiöiden että merotsoiittien kanssa RIA:ssa. Taulukkoon I kerätyt tiedot osoittavat, että kaikki anti-merotsoiitti-20 fuusiosta johdetut monoklonaaliset vasta-aineet ovat ris- ti-reaktiivisia sekä E. tenella'n itiöiden että merotsoiittien kanssa.
Taulukko I
25 Anti-merotsoiitti-monoklonaalisten vasta-aineiden identi fiointi
Monoklonaalinen IFA RIA
vasta-aine_Mero Itiö_Mero Itiö 30 Ml (1,90 + - + (* M2 (4,76) + - + (* M3 (2,03) + + + + M4 (13,90) + + + + M5 (10,08) + + + + 35 M6 (10,84) + + + + M7 (8,03) + + + + M8 (15,84)____+ + + 8 84186
Esimerkki 4
Anti-merotsoiitti-monoklonaalisten vasta-aineiden reaktiivisuus eri lajien itiöitä vastaan
Monoklonaaliset vasta-aineet analysoidaan IFArlla 5 5:stä taloudellisesti tärkeästä lintu-parasiitti kokkidi-oosilajista johdettuja itiöitä vastaan. Tiedot kokeista on esitetty taulukossa II. 6:tta monoklonaalista vasta-ainetta, jotka reagoivat IFA:ssa E. tenella'sta johdettujen itiöiden kanssa käytetään tutkittaessa lajien ristireak-10 tiivisuutta. Tulokset osoittavat, että 5 monoklonaalista vasta-ainetta reagoi ristiin E. necatrix'sta ja E. maxima ' sta johdettujen itiöiden kanssa ja 1 monoklonaalinen vasta-aine (15,84) reagoi kaikkien viiden kokeessa olleen Eimeria-lajin kanssa.
15
Taulukko II
Anti-merotsoiitti-monoklonaalisten vasta-aineiden reaktiivisuus eri lajien itiöitä vastaan 20 Mono- E. te- E.neca- E. acer- E. maxi- E. bru- klonaali- neliä trix vulina ma netti nen vasta- aine_ M 3 (2,03) + + - + 25 M 4 (13,90) + + + M 5 (10,08) + + + M 6 (10,84) + + +/- M 7 (8,03) + + - + M 8 (15,84) + + + + + 30 _
Esimerkki 5
In vivo-neutralointianalyysi
In vivo-menetelmää monoklonaalisten vasta-aineiden 35 analysoimiseksi käytetään arvioimaan monoklonaalisia vas- 9 84186 ta-aineita. 3 monoklonaalista vasta-ainetta, jotka reagoivat E. tenella'n itiöiden kanssa, analysoidaan tällä tavalla. Juuri eristettyjä itiöitä inkuboidaan steriileissä olosuhteissa lämpö-inaktivoidulla askiites-nesteellä, joka 5 on johdettu kolmesta eri hybridoomasta. Inkubointiaika on 1 tunti huoneen lämpötilassa. Itiöt istutetaan 3 viikon ikäisten kananpoikien umpisuoliin kirurgisesti. Parasiitin kehityksen annetaan tapahtua 5 päivää istutuksen jälkeen. Tämän ajan lopussa haavaumat lasketaan, jotta voitaisiin 10 arvioida tartunnan laajuus. Kokeiden tulokset on esitetty taulukossa III monoklonaalisten vasta-aineiden tarjoamana suojausprosenttina. Tiedot osoittavat, että jokainen vasta-aine on ainakin osittain suojaava joissakin koejärjestelmän olosuhteissa.
15
Taulukko III
In vivo-neutralointianalyysi E. tenella'n itiöillä ja an-ti-merotsoiitti-monoklonaalisilla vasta-aineilla 20 Eläinten _Suojaus-%_ Käsittely luku- Ei Osittain Täysin _määrä_yhtään_ I. Kevyt tartunta (200 itiötä/eläin) 25 Kontrolli 14 65 35 M 6 (10,84) 13 15 85 M 8 (15,84) 18 5 17 78 II. Vakava tartunta 30 (1000 itiötä/eläin)
Kontrolli 7 100 M 4 (13,90) 9 89 11 M 6 (10,84) 8 75 25 M 8 (15,84) 9 33 44 23 35 (jatkuu...) 10 841 86
Taulukko III (jatkoa)
Eläinten _Suojaus-%_ Käsittely luku- Ei Osittain Täysin 5__määrä_yhtään_ III. Vakava tartunta (3000 itiötä/eläin)
Kontrolli 7 100 M 6 (10,84) 7 86 14 10 M 8 (15,84) 4 100
Esimerkki 6
Antigeenien karakterisointi 15 Monoklonaalisilla vasta-aineilla karakterisoidut E. tenella-antigeenit identifioitiin SDS-polyakryyliamidi-geelielektroforeesilla (PAGE), jota seurasi nitroselluloo-sa-blottins-menetelmä [Towbin et ai.: Proc. Natl. Acad. Sei. (USA) 76, ss. 4 350 - 4 354 (1979)].
20 E. tenella'n itiöitä ja merotsoiitteja hajotetaan ja uutetaan l-%:isella Nonidet P-40:llä (Betsheda Research Laboratory) 10 mM:ssä Tris-puskurissa (pH 7,5), jossa on 155 mM NH4Cl:a, 1,5 mM MgAc2:a proteaasi-inhibiittoreiden, leupeptiinin ja antipainin 30 pg/ml kanssa, 4 mM fenyyli-25 metyyli-sulfonyylifluoridia ja aprotiinia (2 trypsiini- inhiboivaa yksikköä/ml). Hajotusmenetelmään kuuluu inku-bointi 30 minuutin ajan 0 °C:ssa, jota seuraa sentrifugoin-ti 2 000 x g:ssä 30 minuutin ajan. Pelletti heitetään pois ja liuennut materiaali käytetään geelieletroforeesiin.
30 Suoritetaan SDS-polyakryyliamidigeelielektroforee- si näytteille, jotka on pelkistetty 2-merkaptoetanolilla epäjatkuvassa Tris-glysiinisysteemissä käyttäen 7 -15-%:isiä polyakryyliamidigradienttigeelejä.
SDS-PAGE:lla erotetut proteiinit siirretään nitro-35 selluloosasuodattimeen elektroforeettisesti 45 minuutin 1X 84186 ajan. Nitroselluloosasuodatin saatetaan sitten reagoimaan joko askiites-nesteen (laimennettu 1:100) tai hybridoomil-le käytetyn elätusnesteen kanssa 1-18 tunnin ajan 4 °C:ssa. Tavallista kanin seerumia lisättiin 10 %:n konsent-5 raatiossa kaikkiin vasta-aineiden kanssa tapahtuviin inku-baatioihin. Sidottu monoklonaalinen vasta-aine havaitaan saattamalla se reagoimaan 125I-leimatulla kanin anti-hiiri-IgG-vasta-aineella (New England Nuclear). Reaktio toisen vasta-aineen kanssa kestää yleensä 3-5 tuntia huoneen 10 lämpötilassa. Sitoutumaton toinen vapaa vasta-aine poistetaan pesemällä. Nitroselluloosasuodattimet kuvataan Kodak-röntgenfilmillä XAR-5 tai SB-5.
Vaihtoehtoisesti täplät kehitetään ELISA-menetel-mällä käyttäen piparjuuriperoksidaasiin sidottua kanin 15 anti-hiiri-IgG:tä (Miles) ja kloorinaftolia (Aldrich) ja H202:a (Baker) substraatteina. Proteiiniantigeenien mole-kyylipainot määritetään suhteessa molekyylipainostandar-deihin.
Monoklonaalisella vasta-aineella 15,84 karakteri-20 soidut antigeenit ovat kuvaavia. Monoklonaalinen vasta-aine 15,84 reagoi kaksoismuodon kanssa, jonka molekyyli-paino on noin 130 ± 20 kd. Kuitenkin 100 kd:n suuruusluokan proteiinien molekyylipainojen arviointi vaihtelee riippuen käytettävistä molekyylipainostandardeista. 130 ± 25 20 kd-lajien lisäksi 15,84 reagoi myös vyöhykkeen kanssa, jonka näennäinen molekyylipaino on 300 ± 50 kd. Suuremman molekyylipainon omaavaan vyöhykkeeseen kuuluu 15 - 20 % antigeenistä ja se on ehkä joko aggregaatti tai 130 ± 20 kd-lajin polymeerinen muoto.
30 Kontrollikoetta monoklonaalisella vasta-aineella, josta tiedetään, ettei se reagoi proteiiniantigeenien kanssa, käytetään todistamaan antimerotsoiitti-vasta-ai-neiden spesifisyyttä. Lisäksi muut kontrollit osoittavat, että monoklonaaliset vasta-aineet ovat parasiittispesifi-35 siä, eivät reagoi isäntäspesifisen parasiitin kanssa.
12 841 86
Yhteenveto eri vasta-aineilla karakterisoitujen geenien molekyylipainotiedoista on esitetty taulukossa IV. Merkittävä piirre on immunogeenisten antigeenien, joiden molekyylipaino on alueella joko < 20 kd tai > 100 kd, 5 esiintyminen E. tenella'n merotsoiiteissä.
Taulukko IV
Molekyylipainotietojen yhteenveto 10 Anti-merotsoiitti- Antigeenin likimääräinen monoklonaalinen vasta-aine molekyylipaino_ M 1 (1,90) M 2 (4,76) 300 ± 50 kd M 6 (10,84) 15 M 8 (15,84) 130 ± 20 kd M 3 (2,03) M 4 (13,90) 18 ± 3 kd M 5 (10,08) M 7 (8,03) 20 _
Monoklonaalista vasta-ainetta 15,84 pidetään neutraloivana vasta-aineena ja karakterisoitua antigeeniä pidetään suojaavana antigeeninä. Lisäksi 15,84 vasta-aine on 25 risti-reaktiivinen E. tenella'n merotsoiittien ja itiöiden kanssa, samoin kuin itiöiden kanssa, jotka on eristetty E. maxima'sta, E. necatrix'sta, E. acervulina'sta ja E. bru-netti'sta.
Uudet monoklonaaliset vasta-aineet 1,90, 15,84, 30 13,90, 10,84, 8,03 ja 2,03, jotka on eristetty kuten edel lä on esitetty, ovat talletettuina American Culture Type Collection'iin (ATCC) (Rockville, Maryland, USA), ja ne on lisätty sen pysyviin kokoelmiin. Numerolle 1,90 on annettu n:o HB8336; numerolle 15,84 on annettu n:o HB8335; nume-35 rolle 13,90 on annettu n:o HB8337; numerolle 10,84 on an- i3 841 86 nettu n:o HB8387; numerolle 8,03 on annettu n:o HB8388; ja numerolle 2,03 on annettu n:o HB8389. Vasta-aineisiin pääsee tutustumaan patenttihakemuksen ollessa käsittelyn alaisena henkilö, josta päättää patentti- ja tavaramerk-5 kien tarkastaja, ja joka on siihen oikeutettu 37 C.F.R. l,14:n ja 35 U.S.C. 122:n nojalla; ja kaikki rajoitukset HB8335:n, HB8336:n, HB8337:n, HB8387:n, HB8388:n ja HB8389:n saatavuuden suhteen yleisölle tullaan peruuttamattomasti poistamaan, kun patenttihakemukselle on myön-10 netty patentti.
Numerot 1,90, HB8336; 15,87, HB8335; ja 13,90, HB8337 talletettiin ATCCriin 16. elokuuta 1983.
Numerot 10,84, HB8387; 8,03, HB8388; ja 2,03, HB8389 talletettiin ATCCiiin 20. lokakuuta 1983.
Claims (2)
1. Menetelmä monoklonaalisten vasta-aineiden valmistamiseksi, jotka reagoivat Eimeria spp.-itiöiden tai 5 merotsoiittien antigeenien kanssa, tunnettu siitä, että viljellään klooni-n:o 1,90 (ATCC n:o HB8336) 2,03 (ATCC n:o HB8389), 13,90 (ATCC n:o HB8337), 10,84 (ATCC n:o HB8387), 8,03 (ATCC n:o HB8388) tai 15,84 (ATCC n:o 10 HB8335) sopivassa ravintoalustassa ja vasta-aine otetaan talteen yllä mainitun hybridoomaviljelmän supernatantista; tai että hiireen injektoidaan hybridoomaviljelmä, jolle on annettu klooni-n:o 1,90 (ATCC n:o HB8336), 2,03 (ATCC n:o HB8389), 13,90 (ATCC n:o HB8337), 10,84 (ATCC 15 n: o HB8387), 8,03 (ATCC n:o HB8388) tai 15,84 (ATCC n:o HB8335) ja vasta-aine otetaan talteen hiiren vesivatsasta tai seerumista.
2. Menetelmä antigeenisen, immunogeenisen ja pro-teiinipitoisen koostumuksen valmistamiseksi, joka on liu- 20 koinen detergenttiä sisältävään puskuriliuokseen, ja joka on Eimeria tenella'n merotsoiittien antigeeninä, ja joka on spesifisesti reaktiivinen hybridoomakloonin 1,90 (ATCC n:o HB8336) erittämien merotsoiittivastaisten monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa, antigeenin keskimääräisen 25 molekyylipainon ollessa 300 ± 50 kd; on spesifisesti reaktiivinen hybridoomakloonien 10,84 (ATCC n:o HB8387) ja 15,84 (ATCC n:o HB8335) erittämien merotsoiittivastaisten monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa, antigeenin keskimääräisen molekyylipainon ollessa 130 ± 20 kd; tai on eri-30 tyisen reaktiivinen hybridoomakloonien 8,03 (ATCC n:o HB8388), 2,03 (ATCC n:o HB8389) ja 13,90 (ATCC nro HB8337) erittämien merotsoiittivastaisten monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa, antigeenin keskimääräisen molekyylipainon ollessa 18 ± 3 kd; tunnettu siitä, että 15 841 86 a) E. tenella'n itiöitä ja/tai merotsoiittejä hajotetaan ja tehdään liukoisiksi uuttamalla ne detergentillä sisältävällä puskurilla tavanomaiseen tapaan; b) liuennut aine erotetaan puhdistetun antigeenin 5 saamiseksi. 16 841 86
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US52495383A | 1983-08-19 | 1983-08-19 | |
US52495383 | 1983-08-19 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI843143A0 FI843143A0 (fi) | 1984-08-09 |
FI843143A FI843143A (fi) | 1985-02-20 |
FI84186B FI84186B (fi) | 1991-07-15 |
FI84186C true FI84186C (fi) | 1991-10-25 |
Family
ID=24091317
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI843143A FI84186C (fi) | 1983-08-19 | 1984-08-09 | Foerfarande foer framstaellning av monoklonala antikroppar mot eimeria spp.-sporozoiter och merozoiter och foerfarande foer framstaellning av en antigen komposition. |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0135073A3 (fi) |
JP (2) | JPS6072827A (fi) |
KR (1) | KR850001698A (fi) |
AU (1) | AU571249B2 (fi) |
CA (1) | CA1241924A (fi) |
DK (2) | DK163062C (fi) |
ES (4) | ES8701786A1 (fi) |
FI (1) | FI84186C (fi) |
IL (1) | IL72629A (fi) |
NO (1) | NO162797C (fi) |
NZ (1) | NZ209076A (fi) |
PT (1) | PT79076A (fi) |
ZA (1) | ZA846436B (fi) |
Families Citing this family (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0135712A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of eimeria spp. |
US4639372A (en) * | 1984-06-29 | 1987-01-27 | Merck & Co., Inc. | Coccidiosis vaccine |
US5273901A (en) * | 1984-07-05 | 1993-12-28 | Enzon Corp. | Genetically engineered coccidiosis sporozoite 21.5 Kb antigen, ac-6b |
US5279960A (en) * | 1984-07-05 | 1994-01-18 | Enzon Corp. | 25 KD coccidial antigen of eimeria tenella |
US4724145A (en) * | 1985-11-18 | 1988-02-09 | Merck & Co., Inc. | Eimeria acervulina immunogens |
EP0453055B1 (en) | 1985-12-03 | 1997-09-03 | Dimminaco Ag/Sa/Ltd. | Antigenic proteins and vaccines containing them for prevention of coccidiosis |
CA1340838C (en) | 1986-08-14 | 1999-12-07 | Michael Wallach | Coccidiosis vacine |
US5824656A (en) * | 1988-01-15 | 1998-10-20 | Merck & Co., Inc. | Recombinant and native group B eimeria tenella immunogens useful as coccidiosis vaccines |
NZ227597A (en) * | 1988-01-15 | 1991-11-26 | Merck & Co Inc | Eimeria tenella group b immunogens and their production |
ZA889230B (en) * | 1988-02-12 | 1989-08-30 | Us Agriculture | Cloned genes coding for avian coccidiosis antigens which induce a cell-mediated immune response and method of producing the same |
US5122471A (en) * | 1988-02-12 | 1992-06-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Cloned genes coding for avian coccidiosis antigens which induce a cell-mediated immune response |
ZA893740B (en) * | 1988-06-03 | 1990-02-28 | Hoffmann La Roche | Recombinant coccidiosis vaccines |
ZA894726B (en) * | 1988-06-27 | 1990-03-28 | Akzo Nv | Coccidiosis vaccine |
ZA902147B (en) * | 1989-03-28 | 1990-12-28 | Akzo Nv | Coccidiosis vaccine |
ZA9010461B (en) * | 1990-01-26 | 1991-10-30 | Hoffmann La Roche | Recombinant coccidiosis vaccines-5-7 eimeria surface antigen |
US5403581A (en) * | 1991-07-12 | 1995-04-04 | Hoffmann-La Roche Inc. | Coccidiosis vaccines |
US6008342A (en) * | 1991-07-12 | 1999-12-28 | Roche Vitamins Inc. | DNA encoding eimeria antigen |
JP3995541B2 (ja) * | 2002-06-28 | 2007-10-24 | 株式会社ゲン・コーポレーション | 抗鶏コクシジウム症組成物 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5649323A (en) * | 1979-09-29 | 1981-05-02 | Nisshin Flour Milling Co Ltd | Coccidiostat |
EP0135712A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of eimeria spp. |
-
1984
- 1984-07-27 EP EP84108926A patent/EP0135073A3/en not_active Ceased
- 1984-07-31 AU AU31333/84A patent/AU571249B2/en not_active Ceased
- 1984-08-01 NZ NZ209076A patent/NZ209076A/xx unknown
- 1984-08-09 FI FI843143A patent/FI84186C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-08-09 IL IL72629A patent/IL72629A/xx not_active IP Right Cessation
- 1984-08-13 PT PT79076A patent/PT79076A/pt not_active IP Right Cessation
- 1984-08-16 ES ES535202A patent/ES8701786A1/es not_active Expired
- 1984-08-17 CA CA000461243A patent/CA1241924A/en not_active Expired
- 1984-08-17 JP JP59170519A patent/JPS6072827A/ja active Pending
- 1984-08-17 DK DK396884A patent/DK163062C/da not_active IP Right Cessation
- 1984-08-17 NO NO843294A patent/NO162797C/no unknown
- 1984-08-17 ZA ZA846436A patent/ZA846436B/xx unknown
- 1984-08-18 KR KR1019840004995A patent/KR850001698A/ko not_active Application Discontinuation
-
1985
- 1985-07-26 ES ES545606A patent/ES8606900A1/es not_active Expired
-
1986
- 1986-01-31 ES ES551495A patent/ES8900150A1/es not_active Expired
- 1986-01-31 ES ES551494A patent/ES8802163A1/es not_active Expired
-
1990
- 1990-12-21 DK DK304490A patent/DK162170C/da not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-07-14 JP JP4208553A patent/JPH05284993A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NO162797B (no) | 1989-11-13 |
EP0135073A3 (en) | 1987-05-27 |
ES535202A0 (es) | 1986-12-16 |
NZ209076A (en) | 1989-01-06 |
ES545606A0 (es) | 1986-05-16 |
DK304490A (da) | 1990-12-21 |
DK163062B (da) | 1992-01-13 |
AU3133384A (en) | 1985-02-21 |
PT79076A (en) | 1984-09-01 |
NO843294L (no) | 1985-02-20 |
EP0135073A2 (en) | 1985-03-27 |
IL72629A0 (en) | 1984-11-30 |
ES8701786A1 (es) | 1986-12-16 |
ES551494A0 (es) | 1988-04-01 |
FI843143A0 (fi) | 1984-08-09 |
DK304490D0 (da) | 1990-12-21 |
KR850001698A (ko) | 1985-04-01 |
DK396884D0 (da) | 1984-08-17 |
ZA846436B (en) | 1985-04-24 |
DK163062C (da) | 1992-06-15 |
CA1241924A (en) | 1988-09-13 |
IL72629A (en) | 1989-02-28 |
NO162797C (no) | 1990-02-21 |
AU571249B2 (en) | 1988-04-14 |
ES8802163A1 (es) | 1988-04-01 |
FI84186B (fi) | 1991-07-15 |
JPH05284993A (ja) | 1993-11-02 |
FI843143A (fi) | 1985-02-20 |
DK162170B (da) | 1991-09-23 |
DK162170C (da) | 1992-03-16 |
JPS6072827A (ja) | 1985-04-24 |
CA1261286C (fi) | 1989-09-26 |
DK396884A (da) | 1985-02-20 |
ES551495A0 (es) | 1989-03-16 |
ES8900150A1 (es) | 1989-03-16 |
ES8606900A1 (es) | 1986-05-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI84186C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av monoklonala antikroppar mot eimeria spp.-sporozoiter och merozoiter och foerfarande foer framstaellning av en antigen komposition. | |
US4650676A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozoites of Eimeria spp. | |
FI83667B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av monoklonala antikroppar mot sporozoiter av eimeria tenella och foerfarande foer framstaellning av e.tenella-vaccin. | |
US5001225A (en) | Monoclonal antibodies to a pan-malarial antigen | |
US4710377A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of Eimeria spp. | |
Kovacs et al. | Monoclonal antibodies to Pneumocystis carinii: identification of specific antigens and characterization of antigenic differences between rat and human isolates | |
DANFORTH et al. | Specificity and crossreactivity of immune serum and hybridoma antibodies to various species of avian coccidia | |
US5028694A (en) | Antigenic proteins and vaccines containing them for prevention of coccidiosis caused by eimeria Eimeria necatrix and Eimeria tenella | |
US5496550A (en) | Method of reducing the output of Eimeria oocysts from a newborn chick | |
US5677438A (en) | Coccidiosis vaccine | |
Harrison et al. | Passive protection against Taenia saginata infection in cattle by a mouse monoclonal antibody reactive with the surface of the invasive oncosphere | |
EP0256536B1 (en) | Coccidiosis vaccine | |
Hernández-Sánchez et al. | Giardia duodenalis: adhesion-deficient clones have reduced ability to establish infection in Mongolian gerbils | |
US4707442A (en) | Hybrid cell line producing monoclonal antibody cytolytic to Trichomonas vaginalis | |
CN110205303A (zh) | 一株利福平单克隆抗体杂交瘤细胞株nlc及其应用 | |
CA1233134A (en) | Hybrid cell lines producing monoclonal antibodies directed against trichomonas vaginalis determinants | |
Taylor et al. | Use of a two-sited monoclonal antibody assay to detect a heat-stable malarial antigen in the sera of mice infected with Plasmodium yoelii | |
CA1261286A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozoites of eimeria spp | |
Crandall et al. | Plasmodium falciparum: naturally occurring rabbit immunoglobulins recognize human band 3 peptide motifs and malaria-infected red cells | |
EP0241139A2 (en) | Anti-idiotypic vaccine for coccidiosis | |
Fruit et al. | Trypanosoma cruzi: location of a specific antigen on the surface of bloodstream trypomastigote and culture epimastigote forms | |
CA1261285A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of eimeria spp | |
WILLIAMS et al. | Characterization and Quantitation of Membrane Antigens of New World Leishmania Species by Using Monoclonal Antibodies in Western Blot and Flow Microfluorometric Assays 1 | |
US4746612A (en) | Aotus interspecies hybridomas and monoclonal receptors produced thereby | |
NZ271219A (en) | Eimeria antibodies and antigens, diagnosis and lats |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM | Patent lapsed | ||
MM | Patent lapsed |
Owner name: AMERICAN CYANAMID COMPANY |