FI83526B - FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV BIOLOGISKT AKTIVA HEPTAPEPTIDER. - Google Patents
FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV BIOLOGISKT AKTIVA HEPTAPEPTIDER. Download PDFInfo
- Publication number
- FI83526B FI83526B FI842739A FI842739A FI83526B FI 83526 B FI83526 B FI 83526B FI 842739 A FI842739 A FI 842739A FI 842739 A FI842739 A FI 842739A FI 83526 B FI83526 B FI 83526B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- pro
- group
- trp
- val
- compound
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/30—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for swines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Birds (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Abstract
Description
8352683526
MENETELMÄ BIOLOGISESTI AKTIIVISTEN HEPTAPEPTIDIEN VALMISTAMISEKSI - FÖRFARANDE FÖR FRAMSTÄLLNING AV BIOLOGISKT AKTIVA HEPTAPEPTIDERMETHOD FOR THE PREPARATION OF BIOLOGICALLY ACTIVE HEPTAPEPTIDES - FOR A PREPARATION OF BIOLOGICALLY ACTIVE HEPTAPEPTIDIDES
Keksintö kohdistuu menetelmään biologisesti aktiivisten peptidien, niiden farmaseuttisesti tai eläinlääketieteessä hyväksyttävien suolojen sekä aineseosten valmistamiseksi.The invention relates to a process for the preparation of biologically active peptides, their pharmaceutically or veterinarily acceptable salts and mixtures of substances.
Tässä selityksessä olevat merkinnät ja lyhenteet ovat yleisesti peptidikemiassa käytettäviä, ks. Biochemistry (1975) 14, 449.The notations and abbreviations in this specification are commonly used in peptide chemistry, cf. Biochemistry (1975) 14, 449.
Tarkemmin sanottuna keksintö kohdistuu sellaisten peptidien valmistukseen, joilla on yleinen kaava: X-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-A-Y (I) jossa X tarkoittaa vetyatomia, A tarkoittaa metionyyliä ja Y tarkoittaa hydroksiryhmää, aminoryhmää tai metoksiryhmää.More specifically, the invention relates to the preparation of peptides having the general formula: X-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-A-Y (I) wherein X represents a hydrogen atom, A represents methionyl and Y represents a hydroxy group, an amino group or a methoxy group.
Yleisen kaavan (I) mukaisten peptidien suolojen valmistus :*.· farmaseuttisesti ke 1 paavi en happojen tai emästen kanssa kuu- .· luu myös keksinnön piiriin. Tällaisia happoadditiosuoloja voidaan johtaa useista epäorgaanisista ja orgaanisista ha-‘ . poista, kuten rikki-, fosfori-, suola-, bromivety-, jodive-··* ty-, typpi-, sulfamidi-, sitruuna-, maito-, palorypäle-, ok-saali-, maleiini-, meripihka-, viini-, kaneli-, etikka-, tri-fluorietikka-, bentsoe-, salisyyli-, glukoni- sekä askorbii-nihapoista. Emäsadditiosuoloja voidaan johtaa erilaisista epäorgaanisista ja orgaanisista emäksistä, kuten natrium- ja ka 1 i umhydroks i di s ta , d i e tyy 1 i ami i n i s ta , tr i e tyy 1 i am i i ni s ta ja .'· disykloheksyyliamiinista.The preparation of salts of the peptides of the general formula (I): with pharmaceutically acceptable acids or bases is also within the scope of the invention. Such acid addition salts can be derived from a variety of inorganic and organic acids. remove such as sulfur, phosphorus, salt, hydrogen bromide, iodine ·· * nitrogen, nitrogen, sulfamide, lemon, milk, fir grape, oxalate, maleic, amber, wine , cinnamic, acetic, trifluoroacetic, benzoic, salicylic, gluconic and ascorbic acids. Base addition salts can be derived from various inorganic and organic bases, such as sodium and calcium hydroxide, diethylamine, trimethylamine and dicyclohexylamine.
Keksinnön mukaisten peptidien synteesi voidaan suorittaa klassillisilla menetelmillä. Synteesi käsittää pääasiassa ky-: symykseen tulevia peräkkäisiä suojattujen aminohappojen tai ."· pepsidien kondensaatioita. Kondensaatiot suoritetaan siten, 2 83526 että tuloksena olevilla peptideillä on haluttu seitsemän aminohappotähteen sarja. Aminohapoilla ja peptideillä, jotka on kondensoitu polypeptidikemiasta sinänsä tunnetuilla menetelmillä, on amino- ja karboksiryhmänsä, jotka eivät liity pep-tidisidoksen muodostumiseen, sopivan suojaryhmän estäminä. Suojaryhmät voidaan poistaa asidolyysillä, saippuoimisella ja hydrogenolyysillä. Seuraavia ryhmiä voidaan käyttää aminoryh-mien suojaukseen: bentsyylikarbonyyli, t-butoksikarbonyy1i, trityyli, formyyli, trifluoriasetyyli, o-nitrofenyyli-sulfenyyli, 4-metoksibentsyylioksikarbonyy1i, 9-fluorenyyli- metoksikarbonyyli, 3,5-dimetoksio<',CX, - d ime tyyli bent syy li ok-sikarbonyyli ja metyy1isulfonyy1ietoksikarbonyy1i. Seuraavia ryhmiä voidaan käyttää karboksiryhmän suojaamiseen: metyyli, etyyli, t-butyyli, bentsyyli, p-nitrobentsyy1i ja fluorenyy-1i metyy1i.The synthesis of the peptides of the invention can be performed by classical methods. The synthesis mainly comprises successive condensations of the protected amino acids or pepids in question. "The condensations are carried out in such a way that the resulting peptides have the desired series of seven amino acid residues. The following groups can be used to protect amino groups: benzylcarbonyl, t-butoxycarbonyl, o-phenyl, trifyl, formyl, formyl, formyl. 4-Methoxybenzyloxycarbonyl, 9-fluorenylmethoxycarbonyl, 3,5-dimethoxy <', CX, - dimethyl Benzyl oxycarbonyl and methylsulfonylethoxycarbonyl The following groups can be used to protect the carboxy group: methyl, ethyl, tb utyl, benzyl, p-nitrobenzyl and fluorenyl methyl.
Yhden molekyylin aminoryhmän ja toisen molekyylin karboksyy-liryhmän välinen kondensaatio peptidisidoksen muodostamiseksi voidaan suorittaa aktivoidun asyy1ijohdannaisen avulla, kuten anhydridiseoksen, atsidin tai aktivoidun esterin, taikka suoralla kondensaatiolla vapaan aminoryhmän ja vapaan karboksiryhmän välillä, kun läsnä on kondensointiainetta, esim. di-sykloheksyylikarbodi-imidiä yksinään tai yhdessä rasemisoitu-mista estävän aineen kanssa, esim. N-hydroksisukkinimidin tai 1-hydroksibentsotriatsolin. Kondensaatio voidaan suorittaa liuottimessa, kuten dimetyyliformamidissa, pyridiinissä, asetoni tr i i 1 i ssä , tetrahydrofuraanissa tai N-metyyli-2-pyrroli-donissa. Reaktiolämpötila voi olla välillä -30°C - ympäristön lämpötila. Reaktioaika on yleensä välillä 1-120 tuntia. Syn-teesikaava, suojaryhmät ja kondensointiaineet valitaan siten, että vältytään rasemisoitumisvaaralta.Condensation between the amino group of one molecule and the carboxyl group of another molecule to form a peptide bond can be performed by an activated acyl derivative such as an anhydride mixture, azide or activated ester, or by direct condensation between the free amino group and the free carboxy group alone in the presence of a condensing agent. or in combination with an anti-racemizing agent, e.g. N-hydroxysuccinimide or 1-hydroxybenzotriazole. The condensation can be performed in a solvent such as dimethylformamide, pyridine, acetone tril, tetrahydrofuran or N-methyl-2-pyrrolidone. The reaction temperature may range from -30 ° C to ambient temperature. The reaction time is usually 1 to 120 hours. The synthetic formula, protecting groups and condensing agents are chosen so as to avoid the risk of racemization.
Suojauksen poistoreaktiot suoritetaan polypeptidikemiasta sinänsä tunnetuilla menetelmillä. Kun valmistetaan esim. peptidejä, joissa Y tarkoittaa ryhmää OR, lähdetään sopivalla alkoholilla esteröidystä C-terminaali-amino-haposta. Peptidejä, joissa Y tarkoittaa ryhmää OH, voidaan valmistaa esim. hydrolysoimalla peptidejä, joissa Y tarkoittaa ryhmää OR. Peptide- 3 83526 jä, joissa Y tarkoittaa jotakin ryhmistä NH^» NHR, tai NR^t voidaan valmistaa ammonolyysillä vastaavista estereistä tai käyttämällä lähtöaineena sopivalla amiinilla amidoitua C-ter-minaali-aminohappoa. Keksinnön mukaisia hydratsido- tai subs-tituoituja hydratsido-johdannaisia valmistetaan kondensoimal-la N-suojattua peptidiä tai aminohappoa sopivalla substituoi-dulla hydratsiini1la, esim. bentsyylikarbatsaatilla, t-butyy-1ikarbatsaati1la, adamantyy1ikarbatsaati1la, fenyylihydrat-siinilla tai adamantyy1ihydratsiini 1la, taikka antamalla N-suojatun peptidin tai aminohappohydratsidin reagoida sopivan alkylointiaineen kanssa, esim. alkyylikloridin, tai sopivan asylointiaineen kanssa, kuten bentsyy1ikloroformiaatin, t-butyy1ikloroformiaatin, di-t-butyylidikarbonaatin tai ada-mantyylifluoriformiaatin.Deprotection reactions are performed by methods known per se from polypeptide chemistry. For example, when preparing peptides in which Y represents an OR group, the starting point is the C-terminal amino acid esterified with a suitable alcohol. Peptides in which Y represents an OH group can be prepared, e.g., by hydrolysis of peptides in which Y represents an OR group. Peptides 3,83526 in which Y represents one of the groups NH4 »NHR, or NR2s can be prepared by ammonolysis from the corresponding esters or using as starting material a C-terminal amino acid amidated with a suitable amine. The hydrazido or substituted hydrazido derivatives of the invention are prepared by condensing an N-protected peptide or amino acid with an appropriately substituted hydrazine, e.g. reacting the protected peptide or amino acid hydrazide with a suitable alkylating agent, e.g. an alkyl chloride, or a suitable acylating agent such as benzyl chloroformate, t-butyl chloroformate, di-t-butyl dicarbonate or adamantyl fluoroformate.
Lopullinen kondensointi valmistettaessa keksinnön mukaista peptidiä tapahtuu edullisesti kaavan II mukaisen yhdisteen: X-Val-Pro-Pro-OH sekä yhdisteen III: H-Leu-Gly-Trp-A-Y, jossa A, X ja Y tarkoittavat samaa kuin edellä paitsi että X ei tarkoita vetyatomia eikä Y tarkoita hydratsiiniryhmää, välillä, kun läsnä on kondensointiaine, esim. disykloheksyylikar-: bodi-imidi, yksin tai yhdessä rasemisoitumista estävän aineen : kanssa, tai anhydridiseos, kaavan II mukaisen yhdisteen akti voitu esteri taikka atsidi niinkuin edellä määritettiin.The final condensation in the preparation of the peptide of the invention preferably takes place between the compound of formula II: X-Val-Pro-Pro-OH and the compound III: H-Leu-Gly-Trp-AY, wherein A, X and Y have the same meaning as above except that X does not does not represent a hydrogen atom and Y does not represent a hydrazine group, in the presence of a condensing agent, e.g. dicyclohexylcarbodiimide, alone or in combination with an anti-racemizing agent, or an anhydride mixture, an active ester or azide of a compound of formula II as defined above.
Kasvua edistävien aineiden kohdalla ei ole mitään mainintaa heptapeptideistä, joka kuvailisi keksinnölle ominaista Trp ylijäämää 6-asemassa.For growth promoters, there is no mention of heptapeptides describing the Trp excess at the 6-position characteristic of the invention.
Yleisen kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on mielenkiintoinen kasvua edistävä vaikutus eläimiin, määritettynä sekä i.n_vivo-- in__^^_t_ro-mene telmi 1 lä maksakudoksen proteiinisynteesissä (selostaneet K. Kämmerer ja A. Dey-Hazra (1980) Vet. Med.The compounds of general formula (I) have an interesting growth-promoting effect in animals, as determined by both the i.n_vivo- __ ^^ _ t_ro method 1 in the protein synthesis of liver tissue (described by K. Kämmerer and A. Dey-Hazra (1980) Vet. Med.
: : Nachr. Nr. 2, 99-112) että annoksesta riippuvaisella painon kasvulla ja ra vi tsemus va i ku tuks e 11 a ihonalaisen tai suun kautta annetun annoksen jälkeen.:: Nachr. Nr. 2, 99-112) and dose-dependent weight gain and the effect of administration after subcutaneous or oral administration.
4 83526 ^n_y i y o -i n_yy t r o-k or_Pr o t e i ^n i sy n t e e s.i4 83526 ^ n_y i y o -i n_yy t r o-k or_Pr o t e i ^ n i sy n t e e s.i
Kasvukokeet suoritettiin 4 viikon jakson aikana käyttäen 6 urosrotan ryhmiä (Wistar, Hagemann, Extertal ) jaettuina kolmen rotan alaryhmiin Makrolon-häkeissä puulastut alustana.Growth experiments were performed over a 4-week period using groups of 6 male rats (Wistar, Hagemann, Extertal) divided into subgroups of three rats in macrolon cages as wood chips as a medium.
Vesi ja ravinto (Altromin 1321 standardi-dieetti, joka sisältää 19 % raakaproteiinia): mielin määrin.Water and nutrition (Altrom 1321 standard diet containing 19% crude protein): to your liking.
Yleisen kaavan I mukaisia peptidejä annostettiin liuoksessa ihonalaisesti päivittäin annoksen ollessa 10, 50 ja 100 ng/kg käyttäen laimennusaineena normaalisuolaliuosta (lähtien pe-rusliuoksesta 100 ng/ml).The peptides of general formula I were administered in solution subcutaneously daily at doses of 10, 50 and 100 ng / kg using normal saline as a diluent (starting from a stock solution of 100 ng / ml).
!SHd£snäytteiden_yalmistus! SHd £ snäytteiden_yalmistus
Homogenoidaan 3 g maksaa 9 ml:aan TKM puskuri-sakkaroosi1iuosta, jäähdytettynä jäillä Potter-homogenisoijassa 600 kierr/min 2 min. ajan; lingotaan 4°C:ssa ultrasentrifu-gissa 10 000 g:lla 20 min. ajan, dekantoidaan pinnalle nouseva neste = alkulimasoluneste.Homogenize 3 g of liver into 9 ml of TKM buffer-sucrose solution, cooled on ice in a Potter homogenizer at 600 rpm for 2 min. I drive; centrifuged at 10,000 g for 20 min at 4 ° C in an ultracentrifuge. time, decant the supernatant = initial mucosal cell fluid.
IX££k£!2££iZ!n£££££i!!!MIX ££ £ k! 2 ££ iZ! £££££ n i M !!!
Sen jälkeen kun alkulimasolunesteen proteiinimäärä oli laskettu biureettimeneteImi 1lä, proteiiniväkevyys säädettiin TKM-puskurin avulla arvoon 1 mg/ml. Tämän jälkeen laimennettiin kahdesti tislatulla vedellä niin että proteiinia oli 0,25 mg ml:ssa aiku1imaso1u1iuosta.After the amount of protozoal cell fluid protein was calculated by the biuret method, the protein concentration was adjusted to 1 mg / ml with TKM buffer. It was then diluted twice with distilled water to give 0.25 mg of protein per ml of adult solution.
Sen jälkeen 0,15 ml:n eriä reaktioainetta ja 0,05 ml:n 14 (50 mcg) pyruvaattikinaasiliuosta sekä 0,1 ml C-aminohappo-seosta (=1μ0ΐ) lisättiin. Seoksen tilavuus oli silloin 1 ml kussakin tapauksessa.Then 0.15 ml aliquots of the reaction agent and 0.05 ml of 14 (50 mcg) pyruvate kinase solution as well as 0.1 ml of C-amino acid mixture (= 1μ0ΐ) were added. The volume of the mixture was then 1 ml in each case.
35 minuutin lämmityksen jälkeen 37°C:ssa vesihauteella suoritettiin proteiinin saostaminen lisäämällä 2 ml trikloorietik-kahappoa (10 %) . Saostuma pestiin useilla trikloorietikkahap- 5 83526 polisäyksi1lä ja sen jälkeen lingottiin (3600 g/5 min) kunnes yläpuolella oleva neste oli vapaa radioaktiivisuudesta.After heating for 35 minutes at 37 ° C in a water bath, precipitation of the protein was performed by adding 2 ml of trichloroacetic acid (10%). The precipitate was washed with several trichloroacetic acid polyads and then centrifuged (3600 g / 5 min) until the supernatant was free of radioactivity.
Jäännös liuotettiin 1,0 ml:aan Lumasolve'a ja jätettiin yöksi 37°C:een kunnes se oli kirkas.The residue was dissolved in 1.0 ml of Lumasolve and left overnight at 37 ° C until clear.
Valmisteen mittaaminen suoritettiin PRIAS nestetuikelaskimes-sa PL (1,0 ml + 5 ml neste).The preparation was measured in a PRIAS liquid scintillation counter PL (1.0 ml + 5 ml liquid).
Yksityiskohtaisesti menetelmä on selostettu edellämainitussa Kämmerer'in artikkelissa.The method is described in detail in Kämmerer's article mentioned above.
TAULUKK0_1^ - Tulokset urosrottien maksakudoksen proteiinisynteesin mittauksista 4 viikon käsittelyjakson jälkeen (päivittäinen ihonalainen ruiske).TABLE0_1 ^ - Results of measurements of protein synthesis in liver tissue of male rats after a treatment period of 4 weeks (daily subcutaneous injection).
[..........!.....' ................ I[..........! ..... '................ I
1 Käsittelyaine Annos j CPM I Vertailurottien ryhmä j | (ng/kg)' j Käsittelemätön Käsitelty j Esim. 1 i 10 14072 ! +17,7 +36,1 ... | i ' : | Yhdiste (TK7) | 50 j 15093 +26,2 +46,0 ; | I 100 ! 16180 +35,3 +56,51 Treatment agent Dose j CPM I Group of reference rats j | (ng / kg) 'j Untreated Treated j Eg 1 i 10 14072! +17.7 +36.1 ... | i ': | Compound (TK7) 50 j 15093 +26.2 +46.0; | I 100! 16180 +35.3 +56.5
Esim. 2 10 13377 +11,9 +29,4Ex. 2 10 13377 +11.9 +29.4
Yhdiste (TK7D) 50 j 14280 +19,4 +38,2 j 100 ; 16866 +41,0 +63,2 Käsittelmätön - j 11958 - - vertailuryhmä Käsitelty ver-, - 10366 ; -13,6 tailuryhmä ____ CPM= lukema minuutissa.Compound (TK7D) 50 j 14280 +19.4 +38.2 j 100; 16866 +41.0 +63.2 Untreated - j 11958 - - comparison group Treated ver-, - 10366; -13.6 tail group ____ CPM = reading per minute.
6 835266 83526
VertailuryhmäThe control group
Rotat, joita käsiteltiin antamalla ihon alle fysiologista natriumkloridiliuosta osoittavat, verrattaessa käsittelemättömään vertailuryhmään, proteiinisynteesivaikutuksen alenneen 13,6 %:11a.Rats treated by subcutaneous administration of physiological sodium chloride solution show a 13.6% reduction in the effect of protein synthesis compared to the untreated control group.
Tämä ero voidaan tilastollisesti varmistaa.This difference can be statistically confirmed.
Esimerkkien 1 ja 2 mukaisesti valmistettujen yhdisteiden mitatut proteiinisynteesiasteet ovat huomattavasti molemmista vertailuryhmistä poikkeavat.The measured degrees of protein synthesis of the compounds prepared according to Examples 1 and 2 differ significantly from both control groups.
Edelleen proteiinisynteesias te iden lisäys on suhteessa annoksiin.Furthermore, the increase in protein synthesis is proportional to the doses.
Yleisen kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on myös mielenkiintoisia umpieritysvaikutuksia, kuten vaikutus prolaktiinin ja keltarauhashormoonin erittymiseen. Lisäksi niillä on vaikutusta keskushermostoon, erityisesti rauhoitus-hypnoosiainei-na. Itse asiassa ne pystyvät aiheuttamaan rotissa synnynnäisen toimeliaisuuden alenemista sekä saamaan sen käyttäytymään unisesti.The compounds of general formula (I) also have interesting endocrine effects, such as an effect on the secretion of prolactin and luteinizing hormone. In addition, they have an effect on the central nervous system, especially as a sedative-hypnotic agent. In fact, they are able to cause a decrease in innate activity in rats as well as cause it to behave sleepily.
Tämän keksinnön toinen sovellutus on aikaansaada menetelmä eläinlääketieteessä käytettävien aineseosten valmistamiseksi annettavaksi eläimille ja vaikuttaen niiden kasvua lisäävästi ja niiden ravitsemustehoa parantavasti, mikä käsittää yleisen kaavan I mukaisen yhdisteen tai sen eläinlääketieteessä hyväksytyn suolan sekoittamisen eläinlääketieteessä kelpaavan laimennus- tai kantoaineen kanssa.Another embodiment of the present invention is to provide a method of preparing veterinary compositions for administration to animals and enhancing their growth and nutritional efficacy, comprising admixing a compound of general formula I or a veterinarily acceptable salt thereof with a veterinary diluent or carrier.
Eläinlääketieteessä kelpaava kantoaine tarkoittaa syötäväksi kelpaavaa ainetta, johon yleisen kaavan I mukaiset peptidit lisätään tällaisten peptidien tasaisen jakautumisen helpottamiseksi ravintoaineissa. Vaikuttava peptidi adsorboituu, im-pregnoituu tai joutuu syötävän aineksen pinnalle siten, että 7 83526 vaikuttava peptidi dispergoituu ja tulee fysikaalisesti kuljetetuksi .In veterinary medicine, a carrier is an edible substance to which the peptides of the general formula I are added in order to facilitate the uniform distribution of such peptides in the nutrients. The active peptide is adsorbed, impregnated, or enters the surface of the edible material so that 7,83526 active peptide is dispersed and physically transported.
Eläinlääketieteessä kelpaava kantoaine voi myös olla plastinen osanen, johon yleisen kaavan I mukaisia yhdisteitä lisätään ja josta vaikuttava aines hidastetusti vapautuu.A carrier suitable for veterinary use may also be a plastic particle to which the compounds of general formula I are added and from which the active ingredient is released in a delayed manner.
Tämän keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ja niitä sisältävät aineseokset ovat erityisen sopivia eläimille, joita kasvatetaan ravinnoksi, kuten siipikarjalle, märehtijöille, sioille ja kaniineille.The compounds of this invention and the compositions containing them are particularly suitable for animals raised for human consumption, such as poultry, ruminants, pigs and rabbits.
Vaikkakin kaikenlainen siipikarja - esim. kananpojat, kalkkunat, hanhet, ankat, helmikanat, fasaanit ja viiriäiset -osoittaa kasvunopeuden lisääntymistä ja entistä parempaa ravitsemuksen tehoa, menetelmä on erityisen käyttökelpoinen broilerikanoilla ja kalkkunoilla.Although all types of poultry — e.g., chickens, turkeys, geese, ducks, guinea fowl, pheasants, and quails — show an increase in growth rate and improved nutritional efficiency, the method is particularly useful in broiler chickens and turkeys.
Märehtijöistä, esim. naudat, lampaat ja vuohet, menetelmä soveltuu erityisesti naudoille, esim. nuorille härille.For ruminants, e.g. cattle, sheep and goats, the method is particularly suitable for cattle, e.g. young bulls.
Menetelmä keksinnön mukaisesti valmistetun yleisen kaavan I esittämän yhdisteen tai sitä sisältävän aineseoksen annosta-miseksi on sekoittaa sitä eläimille tarkoitettuun ravintoon noin 2-40 mcg/ton, edullisesti 4-20 mcg/ton.The method of administering a compound of general formula I or a mixture thereof containing the present invention according to the invention is mixed with about 2-40 mcg / ton, preferably 4-20 mcg / ton, of animal feed.
Eläinten annetaan syödä vapaasti kasvuaikana.Animals are allowed to eat freely during the growing season.
Eri eläinlajeja varten on erilaisia ravinneannoksia. Keksinnön mukaisesti valmistettuja yleisen kaavan (I) tarkoittamia yhdisteitä tai aineseoksia voidaan käyttää kaikenlaisten tunnettujen ravinneannosten yhteydessä.There are different nutrient doses for different animal species. The compounds or mixtures of the general formula (I) prepared according to the invention can be used in connection with all known known doses of nutrients.
Käsitteellä "ravinneannos" tarkoitetaan eläimille annettavaa ravintoa eikä sillä ole tarkoitus rajoittaa keksintöä. Edullisesti yleisen kaavan I mukainen yhdiste tai sitä sisältävä aineseos sekoitetaan perinpohjaisesti ravinneannokseen niin, että sitä on tasaisesti dispergoituneena kauttaaltaan. Mitä 8 83526 tahansa tunnettuja ravinneannoksia voidaan käyttää tätä keksintöä sovellettaessa eikä ole tarkoitus, että annosmuoto rajoittaisi keksintöä. Ravinneannokset muodostetaan siten, että eläimet, joille ne on tarkoitettu, saavat ne pääravinteensa, mineraalien, vitamiinien, täyterehun jne. mukana. Näiden annosten valmistus on ravitsemusasiantuntijoille tavanomaista.The term "nutrient intake" refers to food administered to animals and is not intended to limit the invention. Preferably, the compound of general formula I or a mixture containing it is mixed thoroughly with the nutrient dose so that it is uniformly dispersed throughout. Any of the known nutrient doses can be used in the practice of this invention and is not intended to limit the invention. Nutrient doses are formulated so that the animals for which they are intended receive them with their main nutrients, minerals, vitamins, supplementary feed, etc. The preparation of these doses is customary for nutritionists.
Toinen menetelmä yleisen kaavan I mukaisten yhdisteiden an-nostamiseksi on ihonalainen pelletti, esim. tämän keksinnön mukaisen peptidin ruiskuttaminen pelletin muodossa eläimeen, jolloin ainetta vapautuu päivittäin 1-100 ng/kg, edullisesti 10-50 ng/kg.Another method of administering the compounds of general formula I is a subcutaneous pellet, e.g. by injecting a peptide of the present invention in the form of a pellet into an animal, the substance being released daily at 1-100 ng / kg, preferably 10-50 ng / kg.
Keksintöä ei siis ole tarkoitettu rajoitettavaksi mihinkään erityiseen annostustapaan.Thus, the invention is not intended to be limited to any particular mode of administration.
Edullisia keksinnön mukaisesti valmistettuja peptidejä ovat seuraavat:Preferred peptides according to the invention are the following:
H-Val-Pro-Pro-Ley-Gly-Trp-Met-OHH-Val-Pro-Pro-Ley-Gly-Trp-Met-OH
H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OMe H-Val-Pro-Pro-Ley-Gly-Trp-Met-NH2H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OMe H-Val-Pro-Pro-Ley-Gly-Trp-Met-NH2
Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä. Vertailuarvot määritettiin esipäällystetyillä silikageeli 60 F K (Merck)-le-vyillä, jolloin levyn paksuus oli 0,25 mm, pituus 20 cm, käyttäen seuraavia kehitysmenetelmiä:The following examples illustrate the invention. Benchmarks were determined on precoated silica gel 60 F K (Merck) plates with a plate thickness of 0.25 mm and a length of 20 cm using the following development methods:
Systeemi A: bentseeni/bensiini (60-80)/etyyliasetaatti = 70/10/40 tilavuusosaaSystem A: benzene / petrol (60-80) / ethyl acetate = 70/10/40 parts by volume
Systeemi B: bentseeni/etyyliasetaatti/etikkahappo/vesi = 100/100/20/10 tilavuusosaa (ylempi faasi)System B: benzene / ethyl acetate / acetic acid / water = 100/100/20/10 volumes (upper phase)
Systeemi C: bentseeni/etyyliasetaatti/etikkahappo/vesi = 100/100/40/15 tilavuusosaa (ylempi faasi)System C: benzene / ethyl acetate / acetic acid / water = 100/100/40/15 parts by volume (upper phase)
Systeemi D: n-butanoli/etikkahappo/vesi = 4/1/1 tilavuusosaa. "E. Merck" on tavaramerkki 9 83526 TLC-analyysit suoritettiin lämpötilavälillä 18-25°C: R^-arvot voivat siksi vaihdella + 5 %. Sulamispisteet määritettiin avoimissa kapilaareissa Tottolin laitteella ja ovat korjaamattomia. Suurin osa johdannaisista pehmenee ja hajoaa ennen sulamista. Liuottimet kiteytettäessä, saostettaessa tai jauhettaessa on ilmoitettu suluissa.System D: n-butanol / acetic acid / water = 4/1/1 parts by volume. "E. Merck" is a trademark of 9,83526 TLC analyzes were performed at a temperature between 18-25 ° C: Rf values can therefore vary by + 5%. Melting points were determined in open capillaries on a Tottol apparatus and are uncorrected. Most derivatives soften and decompose before melting. Solvents for crystallization, precipitation or grinding are indicated in parentheses.
Suurjännite-paperielektroforeesi suoritetaan Pherograph-Ori-ginal-Frankfurt Type 64-laitteella Schleicher et Schiill-pape-rilla no. 2317 pH:n ollessa 1,2 (muurahaishappo:etikkahap-po:vesi = 123:100:177 ti1avuusosaa) 1600 voltin jännitteellä (40 V/cm), sekä pH:ssa 5,8 (pyridiini:etikkahappo:vesi = 450:50:4500 ti1avuusosaa) jännitteellä 1400 V (32,5 V/cm). Tuotteille oli tunnusomaista niiden vaihtelevuus Glu:n suhteen pH:ssa 1,2 (E, _) ja pH:ssa 5,8 (E_ _). Seuraavissa esi- 1.2 b . o merkeissä käytetään ai1amainittuja symboleja ja lyhenteitä.High-voltage paper electrophoresis is performed on a Pherograph-Original-Frankfurt Type 64 apparatus with Schleicher et Schiill paper no. 2317 at pH 1.2 (formic acid: acetic acid: water = 123: 100: 177 parts by volume) at 1600 volts (40 V / cm), and at pH 5.8 (pyridine: acetic acid: water = 450: 50: 4500 parts by volume) at a voltage of 1400 V (32.5 V / cm). The products were characterized by their variability in Glu at pH 1.2 (E_ _) and pH 5.8 (E_ _). In the following 1.2- b. o The symbols and abbreviations mentioned above are used in the characters.
AcOEt, etyyliasetaatti; B0C t-butoksikarbonyyli; Bzl, bent-syyli; d, hajoaminen; DMF, dimetyyliformamidi; Et20, dietyy-lieetteri; Hcl/THF, kloorivety tetrahydrofuraanissa; iPr20, di-isopropyylieetteri; iPrOH, isopropanoli; Me, metyyli; MeOH, metanoli; NMH, N-metyylimorfoliini; PE, petrolieetteri; THF, tetrahydrofuraani; TLC, ohutkerroskromatografia.AcOEt, ethyl acetate; BOCC t-butoxycarbonyl; Bzl, benzyl; d, decomposition; DMF, dimethylformamide; Et 2 O, diethyl ether; HCl / THF, hydrogen chloride in tetrahydrofuran; iPr 2 O, diisopropyl ether; iPrOH, isopropanol; Me, methyl; MeOH, methanol; NMH, N-methylmorpholine; PE, petroleum ether; THF, tetrahydrofuran; TLC, thin layer chromatography.
-f- Es i merkk ^1 H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH:HC1:n (XIII) valmistus Vaihe_l^ B0C-Trp-Met-OMe (I)-f- Es i mark ^ 1 H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH: Preparation of HCl (XIII) Step_1 ^ BCC-Trp-Met-OMe (I)
Liuokseen, joka sisälsi 30,43 g (100 mmoolia) B0C-Trp-0H:a 200 ml:ssa vedetöntä THF:a, lisättiin 11,2 ml (100 mmoolia) :V; NMH:a ja 9,9 ml etyylikloroformiaattia peräkkäin lämpötilassa '· -12°C. Kun oli tässä lämpötilassa sekoitettu 2 minuutin ajan, lisättiin kylmä liuos, joka sisälsi 19.96 g (100 mmoolia) HC1.H-Met-OMe:a |C.A. Dekker at ai., J.Biol. Chem. 180, 155 (1949)| ja 11,2 ml NMM:a (100 mmoolia) 150 ml:ssa DMF:a. Reaktioseosta sekoitettiin 45 minuutin ajan -12°C:ssa ja 90 10 83526 minuutin ajan 0-15°C.ssa, poistettiin sitten suodattamalla suolat ja haihdutettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja pestiin useita kertoja peräkkäin IM sitruuna-hapon kyllästetyllä natriumkloridi1iuoksella , IM natriumbikarbonaatilla ja vedellä orgaaninen kerros kuivatettiin vedettömän natriumsulfaatin yläpuolella ja liuotin poistettiin tyhjössä.To a solution of 30.43 g (100 mmol) of BOC-Trp-OH in 200 mL of anhydrous THF was added 11.2 mL (100 mmol) of V; NMH and 9.9 mL of ethyl chloroformate sequentially at -12 ° C. After stirring at this temperature for 2 minutes, a cold solution containing 19.96 g (100 mmol) of HCl.H-Met-OMe was added. Dekker et al., J. Biol. Chem. 180, 155 (1949) and 11.2 mL of NMM (100 mmol) in 150 mL of DMF. The reaction mixture was stirred for 45 minutes at -12 ° C and 90-103526 minutes at 0-15 ° C, then the salts were removed by filtration and evaporated in vacuo. The residue was dissolved in ethyl acetate and washed several times successively with 1M saturated sodium chloride solution of citric acid, 1M sodium bicarbonate and water, the organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate and the solvent was removed in vacuo.
Yhdistettä I saatiin 39,12 g (87 %:n saanto)Compound I was obtained 39.12 g (87% yield)
POPO
iProH/iPr20/PE:stä; mp. 95-97°C, [©Ο D = -25,1° (c=l,iPrOH / iPr20 / from PE; mp. 95-97 ° C, [α] D = -25.1 ° (c = 1,
MeOH); Rf 0,73; Rf 0,76.MeOH); Rf 0.73; Rf 0.76.
A DA D
Vaihe_2^ HC1.Η-Trp-Met-Ome (II) 39,00 g (86,75 mmoolia) BOC-Trp-Met-OMe: a (I) liuotettiin 390 ml:aan muurahaishappoa huoneen lämpötilassa. Kun BOC oli täysin poistunut (TLC-tarkkailu) liuotin haihdutettiin tyhjössä 30°C:ssa. Jäännös liuotettiin 0°C:een jäähdytettyyn me-tanoliin ja lisättiin 34,7 ml (104,1 mmoolia) 3M HCl/THF-liu-osta. Liuottimet poistettiin tyhjössä ja saatiin kvantitatiivinen määrä 33,48 g yhdistettä II öljymäisenä. Rfp 0,71,Step 2 HCl-Trp-Met-OMe (II) 39.00 g (86.75 mmol) of BOC-Trp-Met-OMe (I) were dissolved in 390 ml of formic acid at room temperature. After complete removal of BOC (TLC monitoring) the solvent was evaporated in vacuo at 30 ° C. The residue was dissolved in methanol cooled to 0 ° C and 34.7 mL (104.1 mmol) of 3M HCl / THF-Liu was added. The solvents were removed in vacuo to give a quantitative amount of 33.48 g of compound II as an oil. Rfp 0.71,
El,2 °’28El, 2 ° '28
Vaihe_3_L BOC-Gly-Trp-Met-OMe (III) Lähtien 15,20 g:sta (86,75 mmoolia) BOC-Gly-OH:a ja 33,48 g:sta (86,75 mmoolia) HC1.H-Trp-Met-OMe: a (II) sekä toimimalla samalla tavalla kuin vaiheessa 1 paitsi että käytettiin kloroformia etyyliasetaatin sijasta tuotteen eristämiseen, saatiin 26,27 g (60 % teor.) yhdistettä III seoksesta AC0Et/Et20/iPr20: sp. 140-145°C; [c*J = -30° (c=l, MeOH);Step_3_L BOC-Gly-Trp-Met-OMe (III) Starting from 15.20 g (86.75 mmol) of BOC-Gly-OH and 33.48 g (86.75 mmol) of HCl. Trp-Met-OMe (II) and acting in the same manner as in Step 1 except that chloroform was used instead of ethyl acetate to isolate the product gave 26.27 g (60% of theory) of compound III from ACOEt / Et 2 O / iPr 2 O: m.p. 140-145 ° C; [α] D = -30 ° (c = 1, MeOH);
Rf. 0,27; Rf 0,56; Rf„ 0,77.Rf. 0.27; Rf 0.56; Rf 0.77.
ABCABC
Vaihe_4^ HC1.H-Gly-Trp-Met-OMe (IV) Lähtien 26.20 g:sta (51,71 mmoolia) BOC-Gly-Trp-Met-OMe:aStep_4 ^ HC1.H-Gly-Trp-Met-OMe (IV) From 26.20 g (51.71 mmol) of BOC-Gly-Trp-Met-OMe
(III) ja toimimalla vaiheen 2 yhteydessä selostetulla tavalla, saatiin 21,76 g (95 % teor.) yhdistettä IV(III) and proceeding as described in Step 2, 21.76 g (95% of theory) of compound IV were obtained.
11 83526 iPrOH/ iPr^Orsta; sp. 195°C (d); l_°Q2° D = ~12.9°C (c = l,11 83526 iPrOH / iPr ^ Orsta; mp. 195 ° C (d); l_ ° Q2 ° D = ~ 12.9 ° C (c = 1,
MeOH); Rf 0,49 E 0,84.MeOH); Rf 0.49 E 0.84.
Vaihe_5^ BOC-Leu-Gly-Trp-Met-OMe (V)Step_5 ^ BOC-Leu-Gly-Trp-Met-OMe (V)
Liuoksen, joka sisälsi 12,16 g (48,76 mmoolia) BOC-Leu-OH:a 120 ml:ssa vedetöntä THF:a, lisättiin peräkkäin 5,5 ml (48,76 mmoolia) NMM: a ja 4,8 ml. (48,76 mmoolia) etyy1ikloroformi- aattia lämpötilassa -12°C. Kun oli sekoitettu tässä lämpötilassa 2 minuutin ajan, lisättiin kylmää liuosta, joka sisälsi 21,6 g (48,76 mmoolia) HC1.H-Gly-Trp-Met-OMe: a (IV) sekä 5,5 ml (48,76 mmoolia) NMM:a 100 ml:ssa DMF:a. Reaktioseosta sekoitettiin 1 tunnin ajan -12°C:ssa sekä 2 tunnin ajan lämpötilassa 0-15°C:ssa, erotettiin sitten suodattamalla suoloista ja haihdutettiin tyhjössä. Raakatuote puhdistettiin py1väskromatografiällä piigeelillä (Merck) 0,040-0,063 mm eluoimalla Ac0Et:llä. AcOEt/Et 0/PE:stä saatiin 18,13 g (60 %To a solution of 12.16 g (48.76 mmol) of BOC-Leu-OH in 120 mL of anhydrous THF was added sequentially 5.5 mL (48.76 mmol) of NMM and 4.8 mL of . (48.76 mmol) ethyl chloroformate at -12 ° C. After stirring at this temperature for 2 minutes, a cold solution containing 21.6 g (48.76 mmol) of HCl.H-Gly-Trp-Met-OMe (IV) and 5.5 ml (48.76 mmol) of mmol) of NMM in 100 ml of DMF. The reaction mixture was stirred for 1 hour at -12 ° C and for 2 hours at 0-15 ° C, then filtered off from the salts and evaporated in vacuo. The crude product was purified by flash chromatography on silica gel (Merck) 0.040-0.063 mm eluting with AcOEt. 18.13 g (60%) of AcOEt / Et 0 / PE were obtained.
^ PO^ PO
teor.) yhdistettä V: sp. 110°C [c*J = -31,6° (c=l, MeOH);theor.) compound V: m.p. 110 ° C [α] D = -31.6 ° (c = 1, MeOH);
Rf 0,14; RfB 0,54.Rf 0.14; RfB 0.54.
Vaihe_6_L HC 1 . H-Leu-G ly-Trp-Me t-OMe (VI) 18 g (29,04 mmoolia) BOC-Leu-Gly-Trp-Met-OMe: a (V) liuotettiin 290 ml:aan kyllästettyä k 1oorivety1iuosta jääetikassa, ...: mihin lisättiin 18 ml anisolia ja 9 ml 2-merkaptoetanolia.Step_6_L HC 1. H-Leu-G ly-Trp-Met-OMe (VI) 18 g (29.04 mmol) of BOC-Leu-Gly-Trp-Met-OMe (V) were dissolved in 290 ml of a saturated solution of hydrogen chloride in glacial acetic acid, ... to which were added 18 ml of anisole and 9 ml of 2-mercaptoethanol.
Kun oli pidetty 30 minuuttia huoneen lämpötilassa BOC oli poistunut täysin ja liuotin poistettiin tyhjössä 30°C:n lämpötilassa. Raakatuote puhdistettiin pylväskromatografial la piigeelillä (Merck) 0,040-0,063 mm eluoimalla kloroformi:me- . tanolilla = 8:2. Saatiin iPrOH/iPrO:sta 12,44 g (77 % teor.After 30 minutes at room temperature, the BOC was completely removed and the solvent was removed in vacuo at 30 ° C. The crude product was purified by column chromatography on silica gel (Merck) 0.040-0.063 mm eluting with chloroform: me-. tanolilla = 8: 2. 12.44 g (77% of theory) of iPrOH / iPrO were obtained.
* * ^ 20 määrästä) yhdistettä VI: sp. 170°C; Qcy] ^ = -9,9° ( c = 1 ,* * ^ 20) of compound VI: m.p. 170 ° C; Qcy] ^ = -9.9 ° (c = 1,
MeOH) ; Rf ^ 0,62; E 0,71.MeOH); Rf ^ 0.62; E 0.71.
BOC-Pro-Pro-OBzl (VII)BOC-Pro-Pro-OBzl (VII)
Liuokseen, joka sisälsi 21,52 g (100 mmoolia) BOC-ProOH:a 200 ml : ssa vedetöntä THF:a, lisättiin peräkkäin 11,2 ml NMM:a ja 13,3 ml isobutyy1ifloroformiaattia -10°C:n lämpötilassa.To a solution of 21.52 g (100 mmol) of BOC-ProOH in 200 mL of anhydrous THF were sequentially added 11.2 mL of NMM and 13.3 mL of isobutyl fluoroformate at -10 ° C.
8352683526
Kun oli tässä lämpötilassa sekoitettu 3 minuutin ajan, lisättiin kylmää liuosta, joka sisälsi 24,17 g (100 mmoolia) HC1.H-Pro-OBz1 (J. Ramachandran and C. H. Li, J. Org. Chem. (1963) 28, 173) sekä 11,2 ml (100 mmoolia) NMM:a 150 ML:ssa DMF:a. Reaktioseosta sekoitettiin 1 tunnin ajan -10°C:ssa ja 2 tunnin ajan 0-15°C:ssa, erotettiin sitten suoloista suodattamalla sekä haihdutettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja pestiin useita kertoja peräkkäin IM sitruunahapon kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, IM natriumbikarbonaatilla ja vedellä. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömän natriumsu1 faatin yläpuolella ja liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin 34,21 g (85 % teor.) yhdistettä VII öljynä. Rf 0,62.After stirring at this temperature for 3 minutes, a cold solution containing 24.17 g (100 mmol) of HCl. H-Pro-OBz1 (J. Ramachandran and CH Li, J. Org. Chem. (1963) 28, 173) was added. ) and 11.2 ml (100 mmol) of NMM in 150 ML of DMF. The reaction mixture was stirred for 1 hour at -10 ° C and for 2 hours at 0-15 ° C, then separated from the salts by filtration and evaporated in vacuo. The residue was dissolved in ethyl acetate and washed several times successively with 1M saturated sodium chloride solution of citric acid, 1M sodium bicarbonate and water. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate and the solvent was removed in vacuo to give 34.21 g (85% of theory) of compound VII as an oil. Rf 0.62.
33
Vaihe_8_;_ HC1. H-Pro-Pro-OBzl (VIII) 34,21 g (85 mmoolia) BOC-Pro-Pro-OBzl: a (VII) liuotettiin 342 ml:aan kyllästettyä kloorivetyliuosta etikkahapossa huoneen lämpötilassa. 30 minuutin kuluttua BOC oli täysin poistunut ja liuotin poistettiin tyhjössä. Saatiin iPrOH/AcOE:sta 21,60 g (75 % teor.) yhdistettä VIII; RfD 0,32, E 2 1,12.Step_8 _; _ HCl. H-Pro-Pro-OBzl (VIII) 34.21 g (85 mmol) of BOC-Pro-Pro-OBzl (VII) were dissolved in 342 ml of saturated hydrogen chloride solution in acetic acid at room temperature. After 30 minutes, the BOC was completely removed and the solvent was removed in vacuo. 21.60 g (75% of theory) of compound VIII were obtained from iPrOH / AcOE; RfD 0.32, E 2 1.12.
Vaihe_SK BOC-Val-Pro-Pro-OBzl (IX)Step_SK BOC-Val-Pro-Pro-OBzl (IX)
Kun lähdettiin 13,79 g:sta (63,45 mmoolia) B0C-Val-0H:a ja 21,5 g:sta (63,45 mmoolia) HC1.H-Pro-Pro-OBzl: a (VIII) ja toimimalla vaiheessa 7 esitetyllä tavalla, saatiin 22,28 g (70 % teor.) yhdistettä IX öljynä, kun oli puhdistettu pyl-väskromatografiällä piigeelillä (Merck) 0,040-0,063 mm eluoi-malla ety1iasetaattimetanoli1la =98:2.Starting from 13.79 g (63.45 mmol) of BOC-Val-OH and 21.5 g (63.45 mmol) of HCl. H-Pro-Pro-OBzl (VIII) and acting as shown in step 7, 22.28 g (70% of theory) of compound IX were obtained as an oil after purification by column chromatography on silica gel (Merck) 0.040-0.063 mm eluting with ethyl acetate-methanol = 98: 2.
Vaihe_lCK BOC-Val-Pro-Pro-OH (X) 22,28 g (44,42 mmoolia) BOC-Val-Pro-Pro-OBzl : a (IX) liuotettuna 150 mlraan metanolia hydrattiin huoneen lämpötilassa ja ympäröivän ilman paineessa, kun läsnä oli 4,46 g 10 painopro-senttista palladium-hiiltä. Katalysaattori poistettiin suodattamalla ja liuos väkevöitiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin 13 83526 etyyliasetaattiin ja väkevöitiin tyhjössä. Laimentamalla di- etyy1ieetteri 1lä saatiin 10,98 g (60 % teor.) yhdistettä X: sp. 184-1900 C P*J = -149,9° (c = l, MeOH); Rf 0.24; RfStep_lCK BOC-Val-Pro-Pro-OH (X) 22.28 g (44.42 mmol) of BOC-Val-Pro-Pro-OBzl (IX) dissolved in 150 ml of methanol were hydrogenated at room temperature and at ambient pressure when 4.46 g of 10% palladium on carbon were present. The catalyst was removed by filtration and the solution was concentrated in vacuo. The residue was dissolved in 13,83526 ethyl acetate and concentrated in vacuo. Dilution with diethyl ether gave 10.98 g (60% of theory) of compound X: m.p. 184-1900 ° C * J = -149.9 ° (c = 1, MeOH); Rf 0.24; rf
U ECU EC
0.53; E _ 0,51.0.53; E _ 0.51.
D i OD i O
Vaihe_l1^ BOC-Val-Pro-Pro-Ley-Gly-Trp-Met-OMe (XI) Lähtemällä 9,10 g:sta (22,12 mmoolia) BOC-Val-Pro-Pro-OH:a (X) ja 12.30 g:sta (22,12 mmoolia) HC1.H-Leu-Gly-Trp-Met-0Me:a (VI) sekä toimimalla vaiheen 5 yhteydessä selostetulla tavalla, mutta käyttäen eluoimiseen etyyliasetaattia, joka sisälsi enenevän määrän metanolia 5 prosentista 30 prosenttiin kromatografisen puhdistuksen aikana, saatiin 16,16 g (80 % teor.) yhdistettä XI iPrOH/iPr 0:sta sp. 184-190°C 20 OO = -98,9° (c = l, MeOH); Rf0 0,13; Rfc 0.58.Step_111 BOC-Val-Pro-Pro-Ley-Gly-Trp-Met-OMe (XI) Starting from 9.10 g (22.12 mmol) of BOC-Val-Pro-Pro-OH (X) and 12.30 g (22.12 mmol) of HCl. H-Leu-Gly-Trp-Met-OMe (VI) and acting as described in step 5, but eluting with ethyl acetate containing an increasing amount of methanol from 5% to 30% during chromatographic purification, 16.16 g (80% of theory) of compound XI iPrOH / iPr 0 were obtained, m.p. 184-190 ° C 20 O = -98.9 ° (c = 1.0, MeOH); Rf 0 0.13; Rfc 0.58.
Vaihe_l2_^ BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH (XII) 5,00 g (5,48 mmoolia) BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OMe:a .·: (XI) liuotettiin 20 ml: aan metanolia ja saippuoitiin ... 10 ml:lla IM natriumhydroksidia 2 tunnin ajan huoneen lämpö tilassa. Liuos laimenettiin vedellä, osittain väkevöitiin tyhjössä, jäähdytettiin 0°C:een, tehtiin happamaksi (pH 2) 5M suolahapon vesiliuoksella ja uutettiin sitten useita kertoja etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros pestiin neutraaliksi kyllästetyllä natriumk1oridin vesiliuoksella sekä kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin yläpuolella. Kun liuotin oli poistettu, saatiin 3,99 g (81 % teor.) yhdistettä XII: sp.Step_l2_ ^ BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH (XII) 5.00 g (5.48 mmol) BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OMe: a. ·: (XI) was dissolved in 20 ml of methanol and saponified with ... 10 ml of 1M sodium hydroxide for 2 hours at room temperature. The solution was diluted with water, partially concentrated in vacuo, cooled to 0 ° C, acidified (pH 2) with 5M aqueous hydrochloric acid and then extracted several times with ethyl acetate. The organic layer was washed with neutral saturated aqueous sodium chloride solution and dried over anhydrous sodium sulfate. After removal of the solvent, 3.99 g (81% of theory) of compound XII were obtained: m.p.
20 194-2000 C (d): [c*j = -102,9° (c = l, MeOH); Rfc 0,34; E5 0,18 Glu .194-2000 ° C (d): [α] D = -102.9 ° (c = 1.0, MeOH); Rfc 0.34; E5 0.18 Glu.
H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH.HCl (XIII) Lähtemällä 3,85 g:sta (4,28 mmoolia) BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH: a (XII) ja toimimalla vaiheen 6 yhteydessä selostetulla tavalla saatiin 3,05 g yhdistettä XIII raakatuot-teena iPrOH/iPr^O:sta. Raakatuote puhdistettiin sitten DEAE-Sephadex A-25:lla (tavaramerkki) käyttäen eluenttina ammoni- i4 83526 umasetaatin 0,02M liuosta pH:ssa 6,7. Kun oli lyofiloitu etikkahaposta, tuote liuotettiin uudelleen etikkahappoon ja sitä käsiteltiin 6 ml:lla suolahapon kyllästettyä liuosta etikkahapossa. Liuos kaadettiin di etyy1ieetteriin. Saatiin 2,57 g (72 % teor.) yhdistettä XIII: sp. 150°C; D>]20 = -90,5° (c=l, MeOH); Rf 0.30; E 058 Glu.H-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met-OH.HCl (XIII) Starting from 3.85 g (4.28 mmol) BOC-Val-Pro-Pro-Leu-Gly-Trp-Met -OH (XII) and acting as described in step 6 gave 3.05 g of compound XIII as a crude product from iPrOH / iPr 2 O. The crude product was then purified on DEAE-Sephadex A-25 (trademark) using a 0.02M solution of ammonium acetate in pH 6.7 as eluent. After lyophilization from acetic acid, the product was redissolved in acetic acid and treated with 6 ml of a saturated solution of hydrochloric acid in acetic acid. The solution was poured into diethyl ether. 2.57 g (72% of theory) of compound XIII were obtained: m.p. 150 ° C; D>] 20 = -90.5 ° (c = 1, MeOH); Rf 0.30; E 058 Glu.
E s i^merkk i _4E s i ^ merkk i _4
Kasvukoe sioillaGrowth test in pigs
Kasvukoe suoritettiin 4 viikon jaksona, käyttäen 7 kastroidun urossian (hybridien) ryhmä, jotka oli jaettu alaryhmiin ja sijoitettu häkkeihin, joissa oli tasainen pohja. Sikoja syötettiin koko kokeen ajan kasvuravinteella (Höveler, normaali-tyyppinen, ilman lisäravinteita), 1 kg päivässä. Vettä annettiin vapaasti. Painot merkittiin muistiin viikottain. Koetulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.The growth experiment was performed over a period of 4 weeks, using a group of 7 castrated male (hybrids) divided into subgroups and placed in cages with a flat bottom. Pigs were fed growth medium (Höveler, normal-type, without supplements), 1 kg per day, throughout the experiment. Water was given freely. Weights were recorded weekly. The test results are shown in the following table.
Ryhmä Eläinten Käsittelyaine Annostus Parametrit _______lukumäärä____________________________________ __ 1_________2______________-_____________-_________5ΗΗ!ΠίίΕ_Ε®ίΕ2 2 2 NaCl fysiol. 0,1 ml/kg Ravinnon ku- __________________________________________1 u t us________ 3 3 TK-7 (esim.l) 50 ng/kg Ravinnon teho (r.p.) (ng ravintoa/ kg painon li- ________________________________________________säy s t ä]_______ i5 83526Group Animal treatment agent Dosage Parameters _______ number ______________________________________ __ 1 _________ 2 ______________-_____________-_________ 5ΗΗ! ΠίίΕ_Ε®ίΕ2 2 2 2 NaCl physiol. 0.1 ml / kg Food intake __________________________________________1 u t us________ 3 3 TK-7 (e.g. l) 50 ng / kg Food efficacy (r.p.) (ng food / kg weight gain ______________________________________________ _______ i5 83526
TuloksetScore
Ryhmä 12 3 Käsittely - NaCl fysiol. TK-7 (Esim.l)Group 12 3 Treatment - NaCl physiol. TK-7 (Example 1)
Annos tus_^ng/kgX________2__________2________________-________Dose tus_ ^ ng / kgX ________ 2 __________ 2 ________________-________
Alkupaino (kg) 12,5 14,8 11,7Initial weight (kg) 12.5 14.8 11.7
Paino 1 viikon kuluttua 14,0 16,3 15,2Weight after 1 week 14.0 16.3 15.2
Paino 2 viikon kuluttua 16,0 18,5 17,8Weight after 2 weeks 16.0 18.5 17.8
Paino 3 viikon kuluttua______________19a3_______20±5_____________20^7_______Weight after 3 weeks ______________ 19a3 _______ 20 ± 5 _____________ 20 ^ 7 _______
Paino lisäystä kg 6,8 5,7 9,0Weight gain kg 6.8 5.7 9.0
Painon lisäys, % 54,4 38,5 76,9 vertailuryhmästä_____________- 16z2____________+ 32^4_______Weight gain,% 54.4 38.5 76.9 from comparison group _____________- 16z2 ____________ + 32 ^ 4 _______
Kulutus (kg) 21 21 21Consumption (kg)
Ravinnon teho 3,09 3,68 2,33 4^_£®££§iiH£Zi2E!M££M_____________+19^1____________-24^6_______ Päivittäinen fysiologinen keittosuolan ruiske aikaansai pai-nonlisäyksen alenemisen verrattaessa käsittelemättömään ryhmään. Ruiskeen aiheuttamasta rasituksesta johtuvan kasvun --- alenemisen sijaan eläimet, jotka saivat päivittäin ruiskeen TK-7:a osoittivat selvää painon kasvua. Ravinnon vaikutus esittää painonkasvutuloksia.Dietary Efficacy 3.09 3.68 2.33 4 ^ _ £ ® ££ §iiH £ Zi2E! M ££ M _____________ + 19 ^ 1 ____________- 24 ^ 6 _______ Daily physiological saline injection produced a reduction in weight gain compared to the untreated group. Instead of a decrease in growth due to injection stress, animals receiving daily injection of TK-7 showed a clear increase in weight. The effect of diet shows weight gain results.
Claims (3)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB8319174 | 1983-07-13 | ||
GB838319174A GB8319174D0 (en) | 1983-07-15 | 1983-07-15 | Biologically active heptapeptides |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI842739A0 FI842739A0 (en) | 1984-07-09 |
FI842739A FI842739A (en) | 1985-01-14 |
FI83526B true FI83526B (en) | 1991-04-15 |
FI83526C FI83526C (en) | 1991-07-25 |
Family
ID=10545772
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI842739A FI83526C (en) | 1983-07-15 | 1984-07-09 | Process for Preparation of Biologically Active Heptapeptides |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4567162A (en) |
EP (1) | EP0134986B1 (en) |
JP (1) | JPS6038400A (en) |
AT (1) | ATE49004T1 (en) |
AU (1) | AU561132B2 (en) |
CA (1) | CA1254700A (en) |
DE (1) | DE3480841D1 (en) |
DK (1) | DK342984A (en) |
ES (1) | ES8607991A1 (en) |
FI (1) | FI83526C (en) |
GB (1) | GB8319174D0 (en) |
GR (1) | GR81501B (en) |
HU (1) | HU193291B (en) |
IL (1) | IL72347A (en) |
NZ (1) | NZ208836A (en) |
ZA (1) | ZA845400B (en) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8430255D0 (en) * | 1984-11-30 | 1985-01-09 | Erba Farmitalia | Biologically active oligopeptides |
EP0188841B2 (en) * | 1984-12-21 | 1992-01-15 | Catalysts & Chemicals Industries Co., Ltd. | Hydrocarbon catalytic cracking catalyst compositions and method therefor |
DE3601398A1 (en) * | 1986-01-18 | 1987-07-23 | Fresenius Ag | USE OF OLIGOPEPTIDES FOR THE TREATMENT OF CEREBRAL DISORDERS |
US5079366A (en) * | 1987-04-07 | 1992-01-07 | University Of Florida | Quarternary pyridinium salts |
US4888427A (en) * | 1987-04-07 | 1989-12-19 | University Of Florida | Amino acids containing dihydropyridine ring systems for site-specific delivery of peptides to the brain |
NZ233071A (en) * | 1989-03-30 | 1993-02-25 | Sumitomo Pharma | Neurotrophic peptides, extraction from mammalian hippocampal tissue and pharmaceutical compositions thereof |
AU2007238186B2 (en) * | 2006-04-10 | 2014-01-09 | Genentech, Inc. | Disheveled PDZ modulators |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4474765A (en) * | 1982-04-13 | 1984-10-02 | Farmitalia Carlo Erba S.P.A. | Biologically active peptides |
GB2130590B (en) * | 1982-11-10 | 1986-01-08 | Erba Farmitalia | Peptides |
-
1983
- 1983-07-15 GB GB838319174A patent/GB8319174D0/en active Pending
-
1984
- 1984-06-26 US US06/624,820 patent/US4567162A/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-07-06 ES ES534111A patent/ES8607991A1/en not_active Expired
- 1984-07-09 DE DE8484108009T patent/DE3480841D1/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-07-09 IL IL72347A patent/IL72347A/en unknown
- 1984-07-09 NZ NZ208836A patent/NZ208836A/en unknown
- 1984-07-09 AU AU30417/84A patent/AU561132B2/en not_active Ceased
- 1984-07-09 GR GR75246A patent/GR81501B/el unknown
- 1984-07-09 FI FI842739A patent/FI83526C/en not_active IP Right Cessation
- 1984-07-09 AT AT84108009T patent/ATE49004T1/en not_active IP Right Cessation
- 1984-07-09 EP EP84108009A patent/EP0134986B1/en not_active Expired
- 1984-07-12 DK DK342984A patent/DK342984A/en not_active Application Discontinuation
- 1984-07-12 JP JP59143395A patent/JPS6038400A/en active Pending
- 1984-07-12 ZA ZA845400A patent/ZA845400B/en unknown
- 1984-07-12 HU HU842727A patent/HU193291B/en not_active IP Right Cessation
- 1984-07-12 CA CA000458778A patent/CA1254700A/en not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU3041784A (en) | 1985-01-17 |
JPS6038400A (en) | 1985-02-27 |
FI842739A (en) | 1985-01-14 |
DK342984D0 (en) | 1984-07-12 |
ES8607991A1 (en) | 1986-06-01 |
EP0134986A2 (en) | 1985-03-27 |
DK342984A (en) | 1985-01-14 |
EP0134986B1 (en) | 1989-12-27 |
HUT34765A (en) | 1985-04-28 |
GB8319174D0 (en) | 1983-08-17 |
IL72347A0 (en) | 1984-11-30 |
EP0134986A3 (en) | 1987-04-15 |
IL72347A (en) | 1987-12-31 |
CA1254700A (en) | 1989-05-23 |
FI83526C (en) | 1991-07-25 |
FI842739A0 (en) | 1984-07-09 |
NZ208836A (en) | 1988-10-28 |
AU561132B2 (en) | 1987-04-30 |
DE3480841D1 (en) | 1990-02-01 |
ZA845400B (en) | 1985-02-27 |
US4567162A (en) | 1986-01-28 |
GR81501B (en) | 1984-12-11 |
HU193291B (en) | 1987-09-28 |
ATE49004T1 (en) | 1990-01-15 |
ES534111A0 (en) | 1986-06-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0144230B1 (en) | Growth promotants for animals | |
JPS58124720A (en) | Method of increasing production of milk of cow | |
EP0112656A2 (en) | Peptide compounds | |
FI83526B (en) | FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV BIOLOGISKT AKTIVA HEPTAPEPTIDER. | |
JP5744844B2 (en) | Short peptides as parathyroid hormone (PTH) receptor agonists | |
EP0225020A2 (en) | Peptides comprising, in sequence, units selected from the amino-acid residues 17 to 24 of ViP | |
EP0353565B1 (en) | Immunostimulating peptides, a process for their preparation and pharmaceutical commpositions containing them | |
EP0301785A2 (en) | Carboxamide derivatives of glycopeptides | |
BRPI0306644B1 (en) | METHOD FOR PRODUCING A MODIFIED PEPTIDE | |
US4405607A (en) | Novel pentapeptides, processes for their production, pharmaceutical compositions comprising said pentapeptides and their use | |
Bergel et al. | 728. Cyto-active amino-acids and peptides. Part VIII. N α-acyl, amide, ester and peptide derivatives of melphalan | |
US6051685A (en) | Peptide derivatives | |
NO854788L (en) | ANIMAL GROWTH PROMOTION FOR ANIMALS. | |
EP0755942B1 (en) | N-amidino dermorphin derivative | |
AU718320B2 (en) | Peptide derivatives | |
US20050220801A1 (en) | Immunopotentiators | |
SU939440A1 (en) | Heptapeptide as prolonged action memory stimulator | |
US4493828A (en) | Use of thyrotropin releasing hormone and related peptides as poultry growth promotants | |
US5225400A (en) | Immunostimulating peptides, a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
CA2231174A1 (en) | Peptide derivatives | |
CN107530401A (en) | Skin as the therapeutic agent of metabolic disorder connects albumen | |
KR100359713B1 (en) | Peptides to Inhibit Pepsin Release | |
EP0914342B1 (en) | Polymeric somatostatin derivatives useful for promoting body growth | |
DE3876240T2 (en) | SORBINE AND DERIVED PEPTIDES THAT INCREASE ABSORPTION BY THE MUCOSA. | |
GEIGER et al. | Central and peripheral action of enkephalin analogues |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM | Patent lapsed | ||
MM | Patent lapsed |
Owner name: FARMITALIA CARLO ERBA S.R.L |