FI81116C - METHOD FOER TILLVERKNING AV CYKLODEXTRINER INNEHAOLLANDE MALTODEXTRINER, STAERKELSE- OCH MALTOSSIRAPER. - Google Patents
METHOD FOER TILLVERKNING AV CYKLODEXTRINER INNEHAOLLANDE MALTODEXTRINER, STAERKELSE- OCH MALTOSSIRAPER. Download PDFInfo
- Publication number
- FI81116C FI81116C FI884287A FI884287A FI81116C FI 81116 C FI81116 C FI 81116C FI 884287 A FI884287 A FI 884287A FI 884287 A FI884287 A FI 884287A FI 81116 C FI81116 C FI 81116C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- starch
- cgtase
- cds
- alpha
- gamma
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
- C12Y204/01019—Cyclomaltodextrin glucanotransferase (2.4.1.19)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/30—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols, e.g. xylitol; containing starch hydrolysates, e.g. dextrin
- A23L29/35—Degradation products of starch, e.g. hydrolysates, dextrins; Enzymatically modified starches
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/18—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a glycosyl transferase, e.g. alpha-, beta- or gamma-cyclodextrins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C13—SUGAR INDUSTRY
- C13K—SACCHARIDES OBTAINED FROM NATURAL SOURCES OR BY HYDROLYSIS OF NATURALLY OCCURRING DISACCHARIDES, OLIGOSACCHARIDES OR POLYSACCHARIDES
- C13K7/00—Maltose
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
1 811161 81116
Menetelmä syklodekstriinejä sisältävien maltodekstriinien ja tärkkelys- ja maltoosisiirappien valmistamiseksiProcess for the preparation of cyclodextrin-containing maltodextrins and starch and maltose syrups
Keksinnön kohteena on syklodekstriinejä (CD) sisältävien 5 maltodekstriinien ja tärkkelys- ja maltoosisiirappien valmistusmenetelmä. Keksinnön mukaisessa valmistusmenetelmässä immobilisoidun syklomaltodekstriiniglukanotransferaasin (CGTaasi; E.C. 2.4.1.19) annetaan vaikuttaa esiprosessoituun (esimerkiksi happohydrolyysillä tai entsyymeillä pilkottuun) tärkkelykseen, 10 mahdollisesti etanolin läsnäollessa, jolloin muodostuu sokerikoostumukseltaan ainutlaatuista, CD:jä sisältävää maltodekstriiniä, tärkkelys- tai maltoosisiirappia.The invention relates to a process for the preparation of maltodextrins and starch and maltose syrups containing cyclodextrins (CD). In the production process according to the invention, the immobilized cyclomaltodextrin glucanotransferase (CGTase; E.C. 2.4.1.19) is allowed to act on preprocessed (for example digested by acid hydrolysis or enzymes) starch.
CD:t ovat rengasmaisen molekyylirakenteen omaavia useista glukoosiyksiköistä muodostuneita sokereita. Kuten japanilaisissa 15 patenttijulkaisuissa J2 20,373. 75 63,189 ja 75 88,290 ja Hans Benderin julkaisussa (1977) Arch. Microbiol., Ill, 271-282 on esitetty CGTaasia tuottavat sekä Bacillus -suvun bakteerit, kuten Bacillus macerans. Bacillus megaterium. Bacillus circulans, Bacillus polymyxa ja Bacillus stearothermophilus että Klebsiella -suvun bakteerit, kuten Klebsiella 20 pneumoniae. Entsyymin vaikuttaessa tärkkelykseen muodostuu rengaskooltaan erilaisia CD:jä, joita nimitetään alfa-, beta- ja gammamuodoiksi sisältämiensä 6, 7 ja 8 glukoosiyksikön perusteella.CDs are sugars formed from several glucose units with an annular molecular structure. As in Japanese Patent Laid-Open No. J2 20,373. 75 63,189 and 75 88,290 and in Hans Bender (1977) Arch. Microbiol., Ill., 271-282 discloses CGTase-producing as well as bacteria of the genus Bacillus, such as Bacillus macerans. Bacillus megaterium. Bacillus circulans, Bacillus polymyxa and Bacillus stearothermophilus and bacteria of the genus Klebsiella, such as Klebsiella 20 pneumoniae. When the enzyme acts on the starch, CDs of different ring sizes are formed, which are named alpha, beta and gamma forms based on the 6, 7 and 8 glucose units they contain.
CD:ien merkitys perustuu niiden kykyyn muodostaa nk. inkluusiokomplekseja pienimolekyylisten yhdisteiden kanssa. 25 Pienimolekyyliset yhdisteet tulevat näin "paketoiduksi" sokerin sisälle ja suojatuiksi mm. ei-toivotuilta kemiallisilta reaktioilta. Tämän erityisominaisuutensa ansiosta CD:ien käyttösovellutukset ovat leviämässä useille eri aloille kattaen mm. elintarvike-, lääke-, väriaine-, saniteetti-, paperi- ja maatalouskemian teollisuudet. Näistä 30 elintarviketeollisuutta voidaan pitää yhtenä merkittävimmistä osa- alueista, sillä CD:t soveltuvat esimerkiksi suojaamaan aromeja tai vitamiineja valon, hapen tai lämmön vaikutukselta, estämään haihtumista, poistamaan haitallisia yhdisteitä tuotteista (paha haju tai maku) tai vähentämään tuotteen hygroskooppisuutta. CD:jä voidaan hyväksyttävästi 35 käyttää elintarvikkeissa Japanissa ja lainsäädäntö on kehittymässä 2 81116 siihen suuntaan, että ne sallittaisiin myös muissa maissa (Cyclodextrin News (1986), 1, (2), 2).The significance of CDs is based on their ability to form so-called inclusion complexes with small molecule compounds. 25 Small molecule compounds thus become "packaged" inside the sugar and protected e.g. from unwanted chemical reactions. Thanks to this special feature, the applications of CDs are spreading to several different fields, covering e.g. food, pharmaceutical, dye, sanitary, paper and agrochemical industries. Of these, the food industry can be considered as one of the most important components, as CDs are suitable, for example, for protecting aromas or vitamins from light, oxygen or heat, preventing evaporation, removing harmful compounds from products (bad smell or taste) or reducing product hygroscopicity. CDs can be acceptably 35 used in food in Japan and legislation is evolving 2 81116 to allow them to be allowed in other countries as well (Cyclodextrin News (1986), 1, (2), 2).
CD:ien valmistuksen yhteydessä syntyy CD:jä sisältäviä sokeriseoksia, joiden makeus ja sokerikoostumus ovat erilaisia kuin 5 keksinnön kohteena olevassa menetelmässä. Näiden valmistus on esitetty J. Szejtli'n toimittamassa kirjassa Proceedings of the First International Symposium on Cyclodextrins (1982), Akademiai Kiadö, Budapest, 25~40. Menetelmä perustuu tärkkelyksen pilkkomiseen liukoisella CGT-aasilla. Beta-CD:n kiteytyksen jälkeen saadaan 10 sokeriseos, joka sisältää lähinnä glukoosia, maltoosia sekä CD:jä.In connection with the production of CDs, sugar mixtures containing CDs are formed, the sweetness and sugar composition of which are different from those of the process according to the invention. The preparation of these is described in J. Szejtli, Proceedings of the First International Symposium on Cyclodextrins (1982), Akademiai Kiadö, Budapest, 25-40. The method is based on the cleavage of starch by soluble CGTase. After crystallization of the beta-CD, a sugar mixture is obtained, containing mainly glucose, maltose and CDs.
Menetelmän haittapuolena on se, että entsyymit joudutaan poistamaan tuotteesta aktiivihiilikäsittelyn ja ioninvaihtimien avulla, joten prosessi on varsin työläs ja epätaloudellinen,The disadvantage of this method is that the enzymes have to be removed from the product by means of activated carbon treatment and ion exchangers, so that the process is quite laborious and uneconomical,
Immobilisoidun CGTaasin käyttöä CD:ien valmistamiseen on kuvattu 15 sekä patenttijulkaisuissa (japanilaiset patentit no:t 71 09.223 ja 80 124,494 ja saksalainen patentti no. 3.330.571) että tieteellisissä aikakauslehdissä (Nakamura N. ja Horikoshi K. (1977). Biotechnol. Bioeng., lf), 87_99; Ivony K., Szajäni B. ja Seres G. (1983). J. Appi. Biochem., 158-164; Kato T. ja Horikoshi K. (1983). Biotechnol. 20 Bioeng., 26, 595-598). Teknisten vaikeuksien, kuten viskositeetti- ja diffuusioesteiden vuoksi on käytetty yleensä suhteellisen alhaisia tärkkelyskonsentraatioita (2-4 %) ja viskositeettia on joissakin tapauksissa alennettu esihydrolyysillä alhaiseen DE-lukuun (S.P. Crump ja J.D. Rozzell, esitelmä kongressissa 4th International Symposium on 25 Cyclodextrins, 20-22.4.1988, Mlinchen, Saksan Liittotasavalta).The use of immobilized CGTase for the preparation of CDs has been described both in Patent Publications (Japanese Patent Nos. 71 09,223 and 80,124,494 and German Patent No. 3,330,571) and in scientific journals (Nakamura N. and Horikoshi K. (1977). Biotechnol. Bioeng ., lf), 87_99; Ivony K., Szajäni B. and Seres G. (1983). J. Appl. Biochem., 158-164; Kato T. and Horikoshi K. (1983). Biotechnol. 20 Bioeng., 26, 595-598). Due to technical difficulties such as viscosity and diffusion barriers, relatively low starch concentrations (2-4%) have generally been used and in some cases the viscosity has been reduced by prehydrolysis to a low DE (SP Crump and JD Rozzell, presentation at Congress 4th International Symposium on 25 Cyclodex 22.4.1988, Mlinchen, Federal Republic of Germany).
Immobilisoidun CGTaasin käyttöä keksinnön kohteena olevan menetelmän tavoin ts. korkean DE-luvun omaavien tärkkelyssiirappien käyttämistä reaktion lähtöaineena ei ole aikaisemmin kuvattu. Käsittelyn tuloksena saadaan CD:jä sisältäviä korkean DE-luvun siirappeja.The use of immobilized CGTase as in the process of the invention, i.e. the use of high DE starch syrups as a reaction starting material, has not been previously described. The treatment results in high DE syrups containing CDs.
30 Edellä mainituista syistä on päädytty hakemuksen mukaiseen keksintöön, jolle on tunnusomaista päävaatimuksessa esitetyt seikat.30 For the reasons set out above, the invention has been concluded, which is characterized by the elements set out in the main claim.
Keksinnön perusajatuksen muodostaa se, että immobilisoidun CGTaasin on havaittu muodostavan esiprosessoidusta tärkkelyksestä (maltodekstriineistä, tärkkelys- ja maltoosisiirapeista DE-luvultaan 35 5-60) sopivissa olosuhteissa CD: jä sisältäviä sokeriliuoksia. Keksinnön mukaisessa menetelmässä on mahdollisuus jatkuvaan prosessiin ja se 3 81116 voidaan lisätä jatkokäsittelyvaiheeksi ennestään käytettyihin sokerisiirappien valmistusprosesseihin. Menetelmän avulla säästetään entsyymin käyttökustannuksissa ja kyetään lisäämään CD:ien määrää tuotteessa. Menetelmän etuna on myös se, että entsyymiproteiini ei jää 5 tuotteeseen, joten ylimääräisiä puhdistusvaiheita ei tarvita. Erilaisten parametrien, kuten lämpötilan, immobilisaatioasteen, substraattiliuoksen ja siinä olevan etanolin konsentraation DE-luvun ja virtausnopeuden sopivalla säätelyllä voidaan ohjata muodostuvan tuotteen koostumusta. Lisäksi saadaan aikaan uudenlaisia tuotteita, joita ei kyetä 10 valmistamaan lisäämällä CD:jä jälkikäteen tärkkelys- tai maltoosisiirappeihin, sillä CGTaasi muuttaa samalla esiprosessoidun tärkkelyksen koostumusta tyypillisesti siten, että DP-lukua 10 suurempien polysakkaridien osuus vähenee ja toisaalta alle DP-luvun 10 olevien sokerien väliset konsentraatioerot tasaantuvat. Vaikutukset 15 tuotteen makeuteen ja pelkistävien sokerien määrään ovat vähäiset.The basic idea of the invention is that immobilized CGTase has been found to form sugar solutions containing CDs from preprocessed starch (maltodextrins, starch and maltose syrups DE 35-60) under suitable conditions. The process according to the invention has the possibility of a continuous process and can be added as a further processing step to the sugar syrup production processes already used. The method saves on the cost of using the enzyme and is able to increase the number of CDs in the product. Another advantage of the method is that the enzyme protein does not remain in the 5 products, so no additional purification steps are required. By appropriate control of various parameters such as temperature, degree of immobilization, substrate solution and the concentration of ethanol in it, and the flow rate, the composition of the product formed can be controlled. In addition, novel products are obtained which cannot be prepared by adding CDs to starch or maltose syrups afterwards, since CGTase at the same time typically changes the composition of preprocessed starch so that the proportion of polysaccharides higher than DP 10 is reduced and between sugars below DP 10. concentration differences level off. The effects on the sweetness and reducing sugars of the 15 products are minor.
Taulukossa I on esitetty maltodekstriinin (DE 20) ja tärkkelyssiirapin (DE 30) koostumus natiivina ja reagoituaan immobilisoidun CGTaasin kanssa. Valmisteiden koostumukset määritettiin nestekromatografisesti. Menetelmällä kyetään mittaamaan alle DP-luvun 8 omaavien sokerien ja 20 CD:ien pitoisuudet. Tuotteeseen muodostuvat CD-määrät (1-10 %) ovat samaa luokkaa kuin elintarvikkeiden yhteydessä normaalisti käytetään (kirjassa Cyclodextrins and Their Inclusion Complexes (1982), J. Szejtli (toim.), Akad6miai Kiadö, Budapest, s. 236-255)·Table I shows the composition of maltodextrin (DE 20) and starch syrup (DE 30) native and after reaction with immobilized CGTase. The compositions of the preparations were determined by liquid chromatography. The method is able to measure the concentrations of sugars and 20 CDs with a DP number of less than 8. The amounts of CD formed in the product (1-10%) are in the same range as those normally used in food (in Cyclodextrins and Their Inclusion Complexes (1982), J. Szejtli (ed.), Akad6miai Kiadö, Budapest, pp. 236-255) ·
Keksinnössä tarvittavaa CGTaasia tuotetaan kasvattamalla kyseistä 25 entsyymiä muodostavaa mikro-organismia, esimerkiksi tiettyjä Bacillus- tai Klebsiella -sukuisia bakteereja kasvuliuoksessa, joka sisältää hiili- ja typpilähteen, mineraaleja ja vitamiineja. Muodostuva CGTaasi otetaan talteen käyttäen tunnettuja menetelmiä, kuten kasvuliuoksen sentrifugointi tai suodatus. Näin taltioitu raakaentsyymi voidaan 30 puhdistaa ja konsentroida esimerkiksi ulossuolauksella, dialyysillä, adsorptiolla ja desorptiolla tärkkelykseen, geelisuodatuksella ja/tai ioninvaihtokromatografisesti tai affiniteettikromatografisesti.The CGTase required in the invention is produced by growing the microorganism which forms the enzyme in question, for example certain bacteria of the genus Bacillus or Klebsiella, in a growth solution containing a source of carbon and nitrogen, minerals and vitamins. The CGTase formed is recovered using known methods such as centrifugation or filtration of the growth medium. The crude enzyme thus stored can be purified and concentrated, for example, by desalting, dialysis, adsorption and desorption to starch, gel filtration and / or ion exchange chromatography or affinity chromatography.
Raakaentsyymi tai suositeltavimmin puhdistettu ja konsentroitu CGTaasi voidaan immobilisoida käyttäen olemassaolevia menetelmiä, kuten 35 sitomalla entsyymi kiinteään kantajaan, esimerkiksi kovalenttisesti, adsorptiolla tai ioninvaihtovoimin. Kiinteiksi kantajiksi soveltuvat 4 81116 erilaiset luonnossa esiintyvät tai synteettisesti valmistetut orgaaniset makromolekyylit, kuten selluloosa, agaroosi, polyakryyliamidi, polyetyleeniglykoli ja polystyreeni tai epäorgaaniset yhdisteet, kuten piimää ja lasi. Immobilisointi voidaan suorittaa olosuhteissa, joissa 5 CGTaasin efektiivinen aktiivisuus reaktion jälkeen säilyy, esimerkiksi pH-alueella 4-10 ja lämpötila-alueella < 90°C.The crude enzyme or, preferably, the purified and concentrated CGTase can be immobilized using existing methods, such as by binding the enzyme to a solid support, for example, covalently, by adsorption, or by ion exchange forces. Suitable solid carriers are 4,81116 various naturally occurring or synthetically prepared organic macromolecules, such as cellulose, agarose, polyacrylamide, polyethylene glycol and polystyrene, or inorganic compounds, such as diatomaceous earth and glass. Immobilization can be performed under conditions in which the effective activity of 5 CGTase is maintained after the reaction, for example, in the pH range of 4-10 and in the temperature range of <90 ° C.
Menetelmässä voidaan käyttää alkuperältään erilaisia tärkkelysmateriaaleja esimerkiksi viljaperäisiä, kuten ohra- ja vehnätärkkelystä tai juuresperäisiä, kuten perunatärkkelystä. Tärkkelys 10 esiprosessoidaan esimerkiksi happohydrolyysillä ja/tai entsymaattisesti TAULUKKO I: Maltodekstriinin (DE 20) ja tärkkelyssiirapin (DE 30) koostumus natiivina ja reagoituaan immobilisoidun CGTaasin kanssa (*) 15 määritettynä nestekromatografisesti. MD 20* kuvaa esimerkin 4 ja TS 30* esimerkin 5 mukaisesti valmistetun sokeriliuoksen koostumusta, kun substraattiliuos ei sisällä etanolia.In the process, starch materials of different origins can be used, for example, cereal-derived, such as barley and wheat starch, or root-derived, such as potato starch. The starch 10 is pretreated, for example, by acid hydrolysis and / or enzymatically. TABLE I: Composition of maltodextrin (DE 20) and starch syrup (DE 30) native and after reaction with immobilized CGTase (*) 15 as determined by liquid chromatography. MD 20 * describes the composition of the sugar solution prepared according to Example 4 and TS 30 * according to Example 5 when the substrate solution does not contain ethanol.
MD 20 MD 20* TS 30 TS 30* 20 _ _ SOKERIEN MÄÄRÄ {%) glukoosi 5.2 4.1 3*9 6.9 maltoosi 4.7 5.8 10.4 9-2 25 maltotrioosi 4.8 6.1 11.4 8.9 maltotetraoosi 4.6 6.0 7·0 8.1 maltopentaoosi 4.3 5*3 10.2 7.0 maltoheksaoosi 3*8 4.2 14.4 5*5 maltoheptaoosi 3*2 3-7 3*2 3-7 30 alfa-CD - 0.8 - 0.4 beta-CD - 3.1 - 1.7 gamma-CD - 0.7 “ 0.3 siten, että muodostuvan nesteytetyn tärkkelyksen dekstroosiekvivalentti 35 on alueella 5“60.MD 20 MD 20 * TS 30 TS 30 * 20 _ _ AMOUNT OF SUGAR {%) glucose 5.2 4.1 3 * 9 6.9 maltose 4.7 5.8 10.4 9-2 25 maltotriose 4.8 6.1 11.4 8.9 maltotetraose 4.6 6.0 7 · 0 8.1 maltopentaose 4.3 5 * 3 10.2 7.0 maltohexaose 3 * 8 4.2 14.4 5 * 5 maltoheptaose 3 * 2 3-7 3 * 2 3-7 30 alpha-CD - 0.8 - 0.4 beta-CD - 3.1 - 1.7 gamma CD - 0.7 “0.3 so that the resulting the dextrose equivalent 35 of the liquefied starch is in the range of 5 to 60.
Immobilisoidun CGTaasin kanssa reagoivan esiprosessoidun tärkkelyksen konsentraatio tulee olla alueella 5_1*0 %. Substraatti 5 81116 voidaan liuottaa joko veteen tai puskuriin, esimerkiksi 100 mM imidatsolipuskuriin pH 6.8, johon on lisätty 5 ®M CaCl2. Annettaessa substraatin reagoida ioninvaihtimiin adsorboidun CGTaasin kanssa ei puskureita tule yleensä käyttää. Reaktio voidaan suorittaa 20-70°C:ssa.The concentration of preprocessed starch reactive with immobilized CGTase should be in the range of 5_1 * 0%. Substrate 5 81116 can be dissolved in either water or a buffer, for example 100 mM imidazole buffer pH 6.8 supplemented with 5 ®M CaCl 2. When allowing the substrate to react with the CGTase adsorbed on the ion exchangers, buffers should generally not be used. The reaction can be carried out at 20-70 ° C.
5 Lisäämällä substraattiliuokseen etanolia, kunnes sen pitoisuus on korkeintaan 50 tilavuus-#, CD:ien määrä tuotteessa nousee olennaisesti. Samalla eri CD-muotojen välinen tasapaino muuttuu. Kun etanolin määrä on riittävän suuri, on muodostuva tuote steriili, ollen näin vähemmän herkkä mikrobikontaminaatioille. Etanolin läsnäollessa tuotettuja CD: jä 10 sisältäviä tärkkelys- ja maltoosisiirappeja voidaan suoraan lisätä joihinkin tuotteisiin, esimerkiksi likööreihin. Keksinnön mukaisella menetelmällä saadaan uusi maltodekstriini-, tärkkelys- tai maltoosisiirappi, joka edullisesti sisältöä syklodekstriinejä 2.0-16 % ja lyhyitä malto-oligosokereita 30-60 %.5 By adding ethanol to the substrate solution until its concentration does not exceed 50% by volume, the amount of CDs in the product substantially increases. At the same time, the balance between different CD formats changes. When the amount of ethanol is large enough, the resulting product is sterile, thus being less sensitive to microbial contamination. Starch and maltose syrups containing CDs produced in the presence of ethanol can be added directly to some products, for example liqueurs. The process according to the invention gives a novel maltodextrin, starch or maltose syrup, which preferably contains 2.0-16% of cyclodextrins and 30-60% of short malto-oligosugars.
15 Keksinnön mukaiset koostumukset on selostettu tarkemmin seuraavissa taulukoissa II-VI.The compositions of the invention are described in more detail in the following Tables II-VI.
6 81116 TAULUKKO II. Maltodekstriinin (DE 20; 100 g/i) ja tärkkelyssiirapin (DE 30; 100 g/1) koostumukset natiivina (1) ja reagoituaan Sepharose 4B geeliin immobilisoidun CGTaasin ilman etanolia (2) ja kun reaktioseokseen oli lisätty 15 t-% etanolia (3). Sokerien (alle DP-luvun 5 8) pitoisuudet määritettiin nestekromatografisesti (kts. esimerkit 4 ja 5).6 81116 TABLE II. Compositions of maltodextrin (DE 20; 100 g / l) and starch syrup (DE 30; 100 g / l) as native (1) and after reaction with Sepharose 4B gel-immobilized CGTase without ethanol (2) and after the addition of 15% by weight of ethanol (3 ). Concentrations of sugars (below DP 5 5) were determined by liquid chromatography (see Examples 4 and 5).
MD 20 TS 30 SOKERI (g/1) _ ___ 10 12 3 12 3 glukoosi 5*2 4.1 4.6 3*9 6.9 6.9 maltoosi 4.7 5-8 6.2 10.4 9-2 10.0 maltotrioosi 4.8 6.1 6.0 11.4 8.9 9*1 15 maltotetraoosi 4.6 6.0 5*5 7*0 8.1 7-7 maltopentaoosi 4.3 5·3 4.7 10.2 7*0 6.4 maltoheksaoosi 3*8 4.2 4.4 14.4 5-5 4.9 maltoheptaoosi 3*2 3·7 3·2 3·2 3·7 3·! alfa-CD 0.0 0.8 0.2 0.0 0.4 0.1 20 beta-CD 0.0 3-1 9-5 0.0 1.7 4.9 gamma-CD 0.0 0.7 1.0 0.0 0.3 0.3 7 81116 TAULUKKO III. Maltodekstriinin (DE 20; 100 g/1) ja tärkkelyssiirapin (DE 30; 100 g/1) koostumukset natiivina (1) ja reagoituaan Serdolit AW-14 geeliin immobilisoidun CGTaasin kanssa ilman etanolia (2) ja kun reaktioseokseen oli lisätty 15 t-% etanolia (3) · Sokerien (alle DP-luvun 5 8) pitoisuudet määritettiin nestekromatografisesti (kts. esimerkki 7)· MD 20 TS 30 SOKERI (g/1) _ _ 12 3 12 3 10____ glukoosi 5*2 4.3 4.7 3*9 6.2 5.8 maltoosi 4.7 5*6 5*8 10.4 10.4 10.0 maltotrioosi 4.8 5·7 5·6 11.4 10.0 9-4 maltotetraoosi 4.6 5*3 5*1 7-0 9.2 7.8 15 maltopentaoosi 4.3 4.9 4.5 10.2 8.4 8.1 maltoheksaoosi 3·8 3·8 3·7 14.4 6.6 7-0 maltoheptaoosi 3·2 3·0 2.8 3-2 4.1 3-9 alfa-CD 0.0 0.2 0.1 0.0 0.2 0.0 beta-CD 0.0 2.3 3-3 0.0 1.6 2.2 20 gamma-CD 0.0 0.6 0.4 0.0 0.4 0.2 e 81116 TAULUKKO IV: Maltodekstriinin (DE 20) konsentraation vaikutus muodostuvan syklodekstriinituotteen koostumukseen. Substraattiliuoksen annettiin reagoida Sepharose 4B geeliin immobilisoidun CGTaasin kanssa (esimerkki 2). Virtausnopeus 60 ml/h, 25°C, reaktiopylvään halkaisijan 5 suhde korkeuteen 1:6.5· Sokerien (alle DP-luvun 8) pitoisuudet määritettiin nestekromatografisesti.MD 20 TS 30 SUGAR (g / l) _ ___ 10 12 3 12 3 glucose 5 * 2 4.1 4.6 3 * 9 6.9 6.9 maltose 4.7 5-8 6.2 10.4 9-2 10.0 maltotriose 4.8 6.1 6.0 11.4 8.9 9 * 1 15 maltotetraose 4.6 6.0 5 * 5 7 * 0 8.1 7-7 maltopentaose 4.3 5 · 3 4.7 10.2 7 * 0 6.4 maltohexaose 3 * 8 4.2 4.4 14.4 5-5 4.9 maltoheptaose 3 * 2 3 · 7 3 · 2 3 · 2 3 · 7 3 ·! alpha-CD 0.0 0.8 0.2 0.0 0.4 0.1 20 beta-CD 0.0 3-1 9-5 0.0 1.7 4.9 gamma-CD 0.0 0.7 1.0 0.0 0.3 0.3 7 81116 TABLE III. Compositions of maltodextrin (DE 20; 100 g / l) and starch syrup (DE 30; 100 g / l) native (1) and after reacting with Serdolit AW-14 gel immobilized CGTase without ethanol (2) and after adding 15% by weight to the reaction mixture ethanol (3) · Concentrations of sugars (below DP 5 5) were determined by liquid chromatography (see Example 7) · MD 20 TS 30 SUGAR (g / l) _ _ 12 3 12 3 10____ glucose 5 * 2 4.3 4.7 3 * 9 6.2 5.8 maltose 4.7 5 * 6 5 * 8 10.4 10.4 10.0 maltotriose 4.8 5 · 7 5 · 6 11.4 10.0 9-4 maltotetraose 4.6 5 * 3 5 * 1 7-0 9.2 7.8 15 maltopentaose 4.3 4.9 4.5 10.2 8.4 8.1 malttohexaose 3 · 8 3 · 8 3 · 7 14.4 6.6 7-0 maltoheptaosis 3 · 2 3 · 0 2.8 3-2 4.1 3-9 alpha-CD 0.0 0.2 0.1 0.0 0.2 0.0 beta-CD 0.0 2.3 3-3 0.0 1.6 2.2 20 gamma- CD 0.0 0.6 0.4 0.0 0.4 0.2 e 81116 TABLE IV: Effect of maltodextrin (DE 20) concentration on the composition of the cyclodextrin product formed. The substrate solution was reacted with CGTase immobilized on a Sepharose 4B gel (Example 2). Flow rate 60 ml / h, 25 ° C, ratio of reaction column diameter 5 to height 1: 6.5 · Concentrations of sugars (below DP number 8) were determined by liquid chromatography.
SOKERI md 20 (%) {% totaalisokeri- _ 10 pitoisuudesta) 5 10 15 glukoosi 4.6 4.6 4.7 maltoosi 6.6 6.9 6.9 maltotrioosi 6.6 7·1 7-3 15 maltotetraoosi 6.4 6.9 7-4 maltopentaoosi 5·6 5·9 6.8 maltoheksaoosi 5·0 5·5 6.1 maltoheptaoosi 3*4 4.1 4.5 alfa-CD 2.0 0.7 0.7 20 beta-CD 4.2 2.9 2.5 gamma-CD 1.2 0.6 0.3 i 9 81116 TAULUKKO V: Syklodekstriinisiirapin koostumus annettaessa maltodekstriinin (DE 20; 50 g/1) reagoida Sepharose 4B geeliin immobilisoidun CGTaasin (esimerkki 2) kanssa lämpötila-alueella 25-70°C. Reaktiopylvään halkaisijan suhde korkeuteen 1:6.5, virtausnopeus 60 5 ml/h. Sokerien (alle DP-luvun 8) pitoisuudet määritettiin nestekromatografisesti.SUGAR md 20 (%) {% of total sugar content) 10 10 15 glucose 4.6 4.6 4.7 maltose 6.6 6.9 6.9 maltotriose 6.6 7 · 1 7-3 15 maltotetraose 6.4 6.9 7-4 maltopentaose 5 · 6 5 · 9 6.8 malttohexaose 5 · 0 5 · 5 6.1 maltoheptaose 3 * 4 4.1 4.5 alpha-CD 2.0 0.7 0.7 20 beta-CD 4.2 2.9 2.5 gamma-CD 1.2 0.6 0.3 i 9 81116 TABLE V: Cyclodextrin syrup composition for administration of maltodextrin (DE 20; 50 g / l) react with CGTase immobilized on a Sepharose 4B gel (Example 2) at a temperature in the range of 25-70 ° C. Reaction column diameter to height ratio 1: 6.5, flow rate 60 5 ml / h. The concentrations of sugars (below DP number 8) were determined by liquid chromatography.
LÄMPÖTILA (°C) SOKERI (g/1) _ 10 25 40 50 60 70 glukoosi 2.5 2.3 2.2 2.3 4.1TEMPERATURE (° C) SUGAR (g / l) _ 10 25 40 50 60 70 glucose 2.5 2.3 2.2 2.3 4.1
maltoosi 3.3 3.1 3.0 3-1 Mmaltose 3.3 3.1 3.0 3-1 M
maltotrioosi 3*3 3*1 3-1 3.1 4.3 15 maltotetraoosi 3-5 3*5 2.9 2.9 4.2 maltopentaoosi 3*1 3*0 3.0 2.8 4.0 maltoheksaoosi 2.6 2.3 2.1 2.1 3*6 maltoheptaoosi 1.8 1.2 1.4 1.5 2.9 alfa-CD 0.4 0.6 0.8 0.8 0.2 20 beta-CD 3.1 3.2 3.1 3.3 2.6 gamma-CD 0.6 0.7 0.7 0.7 0.6 10 81116 TAULUKKO VI: Etanolikonsentraation vaikutus maltodekstriinistä (MD 20; 100 g/1) muodostuvan syklodekstriinisiirapin koostumukseen.maltotriose 3 * 3 3 * 1 3-1 3.1 4.3 15 maltotetraose 3-5 3 * 5 2.9 2.9 4.2 maltopentaose 3 * 1 3 * 0 3.0 2.8 4.0 maltohexaose 2.6 2.3 2.1 2.1 3 * 6 maltoheptaose 1.8 1.2 1.4 1.5 2.9 alpha-CD 0.4 0.6 0.8 0.8 0.2 20 beta-CD 3.1 3.2 3.1 3.3 2.6 gamma-CD 0.6 0.7 0.7 0.7 0.6 10 81116 TABLE VI: Effect of ethanol concentration on the composition of cyclodextrin syrup consisting of maltodextrin (MD 20; 100 g / l).
Substraattiliuoksen annettiin reagoida Sepharose 4B geeliin immobilisoidun CGTaasin kanssa (esimerkki 2). Virtausnopeus 60 ml/h, 5 25°C, reaktiopylväön halkaisijan suhde korkeuteen 1:6.5· Sokerien (alle DP-luvun 8) pitoisuudet määritettiin nestekromatografisesti.The substrate solution was reacted with CGTase immobilized on a Sepharose 4B gel (Example 2). Flow rate 60 ml / h, 5 25 ° C, reaction column diameter to height ratio 1: 6.5 · Concentrations of sugars (below DP number 8) were determined by liquid chromatography.
ETANOLI {t-%) SOKERI _ 10 (g/1) 5 10 15 glukoosi 4.2 4.6 4.8 maltoosi 6.2 6.3 6.3 maltotrioosi 6.4 7·7 6.1 15 maltotetraoosi 6.2 6.1 6.1 maltopentaoosi 5*2 5*5 5*8 maltoheksaoosi 4.3 4.6 4.6 maltoheptaoosi 3*1 2.9 2.8 alfa-CD 0.0 0.0 0.0 20 beta-CD 5.2 8.0 10.7 gamma-CD 0.6 0.9 1.2 CD:jä sisältävät tärkkelys- ja maltoosisiirappiliuokset voidaan 25 konsentroida tai kuivata käyttäen tunnettuja menetelmiä. Saatua siirappia tai jauhetta voidaan käyttää erilaisissa elintarvike-, makeis-ja juomateollisuuden tuotteissa.ETHANOL {t-%) SUGAR _ 10 (g / l) 5 10 15 glucose 4.2 4.6 4.8 maltose 6.2 6.3 6.3 maltotriose 6.4 7 · 7 6.1 15 maltotetraose 6.2 6.1 6.1 maltopentaose 5 * 2 5 * 5 5 * 8 maltohexaose 4.3 4.6 4.6 maltoheptaose 3 * 1 2.9 2.8 alpha-CD 0.0 0.0 0.0 20 beta-CD 5.2 8.0 10.7 gamma-CD 0.6 0.9 1.2 Starch and maltose syrup solutions containing CDs can be concentrated or dried using known methods. The resulting syrup or powder can be used in various products of the food, confectionery and beverage industries.
Esimerkki 1.Example 1.
30 Bacillus circulans var. alkalophilus -kanta (ATCC 21783) siirrostettiin Horikoshi II-alustaan (Horikoshi K. (1971). Agric. Biol. Chem., 25· 1783~1791) ja kasvatettiin 37°C, ravistelussa ja ilmastuksen alaisena 3 vrk. Kasvuliuos sentrifugoitiin ja supernatantin aktiivisuudeksi mitattiin 28 U/ml maltotrioosi-metyylioranssi il 81116 menetelmällä (Mäkelä M.J. ja Korpela T.K. (1988), J. Biochem. Biophys. Methods., I5, 307-318).30 Bacillus circulans var. alkalophilus strain (ATCC 21783) was inoculated into Horikoshi II medium (Horikoshi K. (1971). Agric. Biol. Chem., 25 · 1783 ~ 1791) and grown at 37 ° C, with shaking and aeration for 3 days. The growth solution was centrifuged and the activity of the supernatant was measured to be 28 U / ml maltotriose-methyl orange by 81116 (Mäkelä M.J. and Korpela T.K. (1988), J. Biochem. Biophys. Methods., I5, 307-318).
CGTaasi puhdistettiin affiniteettikromatografisesti (unkarilainen patenttijulkaisu no. 175. 584) ja entsyymiliuos konsentroitiin Amicon-5 laitteistolla (membraanikalvo PM 10). CGTaasi-konsentraatin aktiivisuudeksi mitattiin 19400 U/ml spesifisen aktiivisuuden ollessa 1205 U/mg.The CGTase was purified by affinity chromatography (Hungarian Patent Publication No. 175,584) and the enzyme solution was concentrated on an Amicon-5 apparatus (membrane membrane PM 10). The activity of the CGTase concentrate was measured to be 19,400 U / ml with a specific activity of 1205 U / mg.
Esimerkki 2.Example 2.
10 4 g CNBr-aktivoitua Sepharose 4B (Pharmacia Fine Chemicals,10 4 g of CNBr-activated Sepharose 4B (Pharmacia Fine Chemicals,
Upsala, Ruotsi) geeliä pestiin 10'3 M HCl:lla (1000 ml). Pesty kantaja-aine sekoitettiin 0.1 M NaHC03-puskuriin (18 ml) pH 8.3. joka sisälsi 0.5 M NaCl. Suspensioon lisättiin 2 ml esimerkin 1 mukaisesti valmistettua CGTaasi-konsentraattia (32.2 mg etnsyymiä). Reaktion 15 annettiin edetä 2 tuntia huoneenlämmössä seosta samalla ravistellen.Uppsala, Sweden) the gel was washed with 10'3 M HCl (1000 ml). The washed vehicle was mixed with 0.1 M NaHCO 3 buffer (18 mL) pH 8.3. containing 0.5 M NaCl. To the suspension was added 2 ml of CGTase concentrate prepared according to Example 1 (32.2 mg of ethnzyme). Reaction 15 was allowed to proceed for 2 hours at room temperature while shaking the mixture.
Näin saatu immobilisoitu entsyymi suodatettiin ja pestiin perättäin kolmasti riittävällä määrällä 0.1 M asetaattipuskuria pH 4.0, joka sisälsi vastaavasti 0.5 M NaCl sekä 0.1 M tris-HCl-puskuria pH 8.0, joka sisälsi vastaavasti 0.5 M NaCl. Lopuksi immobilisoitu CGTaasi 20 huuhdottiin puhtaaksi vedellä.The immobilized enzyme thus obtained was filtered and washed three times in succession with a sufficient amount of 0.1 M acetate buffer pH 4.0 containing 0.5 M NaCl and 0.1 M Tris-HCl buffer pH 8.0, respectively, containing 0.5 M NaCl, respectively. Finally, the immobilized CGTase 20 was rinsed clean with water.
Määrittämällä suodoksen ja pesuvesien proteiinipitoisuudet saatiin agaroosiin sitoutuneen CGTaasin määräksi 31-8 mg, joten sitoutumisaste oli 99 %.By determining the protein contents of the filtrate and washings, the amount of CGTase bound to agarose was 31-8 mg, so that the degree of binding was 99%.
25 Esimerkki 3.25 Example 3.
5 g Serdolit AW-14 anioninvaihdinta (Serva, Heidelberg, Saksan Liittotasavalta; raekoko 0.05-0.1 mm) pestiin vuorotellen 1 M HClrlla ja 1 M NH40H:lla kolme kertaa. Regeneroitu ioninvaihdin huuhdottiin 200 mM tris-asetaatti -puskurilla pH 8.3 ja tasapainotettiin lopuksi 30 10 mM tris-asetaatti -puskurilla pH 8.3* 5 ml tasapainotettua adsorbenttia ja 4?.5 ml 10 mM tris-asetaatti -puskuria pH 8.3 sekoitettiin keskenään ja suspensioon lisättiin 2.5 ml esimerkin 1 mukaisesti valmistettua CGTaasi-konsentraattia (40.2 mg entsyymiä). Reaktioseos siirrettiin ravistelijaan, huoneenlämpöön 12 81116 vuorokaudeksi. Reaktion jälkeen immobilisoitu entsyymi suodatettiin ja pestiin riittävällä määrällä vettä.5 g of Serdolit AW-14 anion exchanger (Serva, Heidelberg, Germany; grain size 0.05-0.1 mm) were washed alternately with 1 M HCl and 1 M NH 4 OH three times. The regenerated ion exchanger was rinsed with 200 mM Tris-acetate buffer pH 8.3 and finally equilibrated with 10 mM Tris-acetate buffer pH 8.3 * 5 ml of equilibrated adsorbent and 4.5 ml of 10 mM Tris-acetate buffer pH 8.3 were mixed and added to the suspension. 2.5 ml of CGTase concentrate prepared according to Example 1 (40.2 mg of enzyme). The reaction mixture was transferred to a shaker, room temperature for 12,81116 days. After the reaction, the immobilized enzyme was filtered and washed with sufficient water.
Mittaamalla suodoksen ja pesuliuoksen proteiinipitoisuudet saatiin immobilisoidun CGTaasin määräksi 24.7 mg, joten entsyymin sitoutumisaste 5 oli 61 %.By measuring the protein contents of the filtrate and the washing solution, the amount of immobilized CGTase was 24.7 mg, so that the degree of binding of the enzyme was 61%.
Esimerkki 4.Example 4.
Esimerkin 2 mukaisesti valmistettu immobilisoitu CGTaasi pakattiin pylvääseen, jonka halkaisijan suhde korkeuteen oli 1:6.5· 10 Maltodekstriini (DE 20; Suomen Sokeri, Jokioisten tehtaat) liuotettiin veteen (100 g/1) ja liuosta (substraattiliuos) eluoitiin huoneenlämmössä pylvään läpi virtausnopeudella 60 ml/h.The immobilized CGTase prepared according to Example 2 was packed in a column with a height to height ratio of 1: 6.5 · 10 Maltodextrin (DE 20; Suomen Sokeri, Jokioinenealaat) was dissolved in water (100 g / l) and the solution (substrate solution) was eluted at room temperature through the column at 60 ml. /B.
Pylvään läpi menneen liuoksen koostumus määritettiin nestekromatografisesti (Zsadon B., Otta K.H., Tudos F. ja Szejtli J. 15 (1979). J· Chromatogr., 172. 490-492) ja CD:ien kokonaismääräksi eluutioliuoksessa mitattiin 4.6 g/1 (alfa-CD: 0.8 g/1, beta-CD: 3·! g/1 ja gamma-CD: 0.7 g/1)· Käyttämällä substraattiliuosta, jossa maltodekstriini (DE 20; 100 g/1) lisättiin 15 v/v % etanoli- vesiliuokseen, mitattiin samoissa reaktio-olosuhteissa eluutioliuoksessa 20 olevien CD:ien kokonaismääräksi 10.7 g/1 (alfa-CD: 0.2 g/1, beta-CD: 9*5 g/1 ja gamma-CD: 1.0 g/1).The composition of the solution passed through the column was determined by liquid chromatography (Zsadon B., Otta KH, Tudos F. and Szejtli J. 15 (1979). J · Chromatogr., 172. 490-492) and the total amount of CDs in the elution solution was measured at 4.6 g / l ( alpha-CD: 0.8 g / l, beta-CD: 3 [mu] g / l and gamma CD: 0.7 g / l) · Using a substrate solution in which maltodextrin (DE 20; 100 g / l) was added 15% v / v aqueous ethanol solution, the total amount of CDs in the elution solution 20 under the same reaction conditions was measured to be 10.7 g / l (alpha-CD: 0.2 g / l, beta-CD: 9 * 5 g / l and gamma-CD: 1.0 g / l) .
Esimerkki 5·Example 5 ·
Esimerkin 2 mukaisesti valmistettu immobilisoitu CGTaasi pakattiin 25 pylvääseen, jonka halkaisijan suhde korkeuteen oli 1:6.5. Pylvään läpi eluoitiin huoneenlämmössä tärkkelyssiirapin (100 g/1; DE 30; Suomen Sokeri, Jokioisten tehtaat) vesiliuosta virtausnopeudella 60 ml/h.The immobilized CGTase prepared according to Example 2 was packed into 25 columns with a diameter to height ratio of 1: 6.5. An aqueous solution of starch syrup (100 g / l; DE 30; Suomen Sokeri, Jokioinen factory) was eluted through the column at a flow rate of 60 ml / h.
Eluutioliuoksen koostumus määritettiin kuten esimerkissä 4 ja CD:ien kokonaismääräksi mitattiin 2.4 g/1 (alfa-CD: 0.4 g/1, beta-CD» 30 1.7 g/1 ja gamma-CD: 0.3 g/1). Käyttämällä substraattiliuosta, jossa tärkkelyssiirappi (DE 30; 100 g/1) lisättiin 15 v/v % etanoli- vesiliuokseen, mitattiin samoissa reaktio-olosuhteissa eluutioliuoksessa olevien CD:ien kokonaismääräksi 5.3 g/1 (alfa-CD: 0.1 g/1, beta-CD: 4.9 g/1 ja gamma-CD: 0-3 g/1)· 13 81116The composition of the elution solution was determined as in Example 4 and the total amount of CDs was measured to be 2.4 g / l (alpha-CD: 0.4 g / l, beta-CD »1.7 g / l and gamma CD: 0.3 g / l). Using a substrate solution in which starch syrup (DE 30; 100 g / l) was added to a 15% v / v aqueous ethanol solution, the total amount of CDs in the elution solution under the same reaction conditions was measured to be 5.3 g / l (alpha-CD: 0.1 g / l, beta -CD: 4.9 g / l and gamma-CD: 0-3 g / l) · 13 81116
Esimerkki 6.Example 6.
1 ml esimerkin 1 mukaisesti valmistettua CGTaasi-konsentraattia (16.1 mg entsyymiä) immobilisoitiin 3*2 g CNBr-aktivoitua Sepharose 4B geeliä vastaavasti kuin esimerkissä 2. Entsyymin sitoutumisasteeksi 5 mitattiin 99*5 %·1 ml of the CGTase concentrate prepared according to Example 1 (16.1 mg of enzyme) was immobilized on 3 * 2 g of CNBr-activated Sepharose 4B gel as in Example 2. The degree of enzyme binding 5 was measured to be 99 * 5% ·
Immobilisoitu CGTaasi pakattiin pylvääseen, jonka halkaisijan suhde korkeuteen oli 1:13· Pylvään läpi eluoitiin substraattiliuosta, joka koostui maltodekstriinistä (200 g/1; DE 20; Suomen Sokeri, Jokioisten tehtaat) liuotettuna etanolin 10 v/v % vesiliuokseen, virtausnopeudella 10 10 ml/h, lämpötilassa 40°C.The immobilized CGTase was packed in a column with a height to height ratio of 1:13. A substrate solution consisting of maltodextrin (200 g / l; DE 20; Suomen Sugeri, Jokioinen mills) dissolved in a 10% v / v aqueous solution of ethanol at a flow rate of 10 ml was eluted through the column. / h, at 40 ° C.
Eluutioliuoksen koostumus määritettiin kuten esimerkissä 4 ja CD:ien kokonaismääräksi mitattiin 6.6 g/1 (alfa-CD: 0.4 g/1, beta-CD: 5.0 g/1 ja gamma-CD: 1.2 g/1).The composition of the elution solution was determined as in Example 4 and the total amount of CDs was measured to be 6.6 g / l (alpha-CD: 0.4 g / l, beta-CD: 5.0 g / l and gamma-CD: 1.2 g / l).
15 Esimerkki 7.15 Example 7.
Esimerkin 3 mukaisesti valmistettu immobilisoitu CGTaasi pakattiin pylvääseen, jonka halkaisijan suhde korkeuteen oli 1:6.5· Pylvään läpi eluoitiin huoneenlämmössä maltodekstriinin (100 g/1; DE 20; Suomen Sokeri, Jokioisten tehtaat) vesiliuosta virtausnopeudella 10 ml/h.The immobilized CGTase prepared according to Example 3 was packed in a column with a height to height ratio of 1: 6.5. · An aqueous solution of maltodextrin (100 g / l; DE 20; Suomen Sokeri, Jokioinen mills) was eluted through the column at a flow rate of 10 ml / h.
20 Eluutioliuoksen koostumus määritettiin kuten esimerkissä 4 ja CD:ien kokonaismääräksi mitattiin 2.5 g/1 (alfa-CD: 0.2 g/1, beta-CD: 1.7 g/1 ja gamma-CD: 0.6 g/1). Käyttämällä substraattiliuosta, jossa maltodekstriini (DE 20; 100 g/1) liuotettiin 15 v/v % etanoli- vesiliuokseen mitattiin vastaavissa reaktio-olosuhteissa CD:ien 25 kokonaismääräksi 3*7 g/1 (alfa-CD: 0 g/1, beta-CD: 3*3 g/1 ja gamma-CD: 0.4 g/1).The composition of the elution solution was determined as in Example 4 and the total amount of CDs was measured to be 2.5 g / l (alpha-CD: 0.2 g / l, beta-CD: 1.7 g / l and gamma-CD: 0.6 g / l). Using a substrate solution in which maltodextrin (DE 20; 100 g / l) was dissolved in a 15% v / v aqueous ethanol solution, the total amount of CDs was measured to be 3 * 7 g / l (alpha-CD: 0 g / l, beta) under corresponding reaction conditions. -CD: 3 * 3 g / l and gamma CD: 0.4 g / l).
Vaihtamalla substraattiliuokseksi tärkkelyssiirapin (100 g/1; DE 30; Suomen Sokeri, Jokioisten tehtaat) vesiliuos mitattiin vastaavissa reaktio-olosuhteissa CD:ien kokonaismääräksi eluutioliuoksessa 2.2 g/1 30 (alfa-CD: 0.2 g/1, beta-CD: 1.6 g/1 ja gamma-CD: 0.4 g/1). Liuottamalla tärkkelyssiirappi (DE 30; 100 g/1) etanolin 15 v/v % vesiliuokseen ja käyttämällä saatua liuosta substraattiliuoksena, mitattiin vastaavissa reaktio-olosuhteissa CD:ien kokonaismääräksi eluutioliuoksessa 2.4 g/1 (alfa-CD: 0 g/1, beta-CD: 2.2 g/1 ja gamma-CD: 0.2 g/1).By exchanging the aqueous solution of starch syrup (100 g / l; DE 30; Suomen Sokeri, Jokioinenealaat) for the substrate solution, the total amount of CDs in the elution solution was measured to be 2.2 g / l (alpha-CD: 0.2 g / l, beta-CD: 1.6 g) under the corresponding reaction conditions. / 1 and gamma CD: 0.4 g / l). By dissolving the starch syrup (DE 30; 100 g / l) in a 15% v / v aqueous solution of ethanol and using the resulting solution as a substrate solution, the total amount of CDs in the elution solution was measured to be 2.4 g / l (alpha-CD: 0 g / l, beta CD: 2.2 g / l and gamma CD: 0.2 g / l).
Claims (3)
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FI884287A FI81116C (en) | 1988-09-19 | 1988-09-19 | METHOD FOER TILLVERKNING AV CYKLODEXTRINER INNEHAOLLANDE MALTODEXTRINER, STAERKELSE- OCH MALTOSSIRAPER. |
PCT/FI1990/000006 WO1991009963A1 (en) | 1988-09-19 | 1990-01-04 | Procedure for producing maltodextrins and starch and maltose syrups containing cyclodextrins |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FI884287A FI81116C (en) | 1988-09-19 | 1988-09-19 | METHOD FOER TILLVERKNING AV CYKLODEXTRINER INNEHAOLLANDE MALTODEXTRINER, STAERKELSE- OCH MALTOSSIRAPER. |
FI884287 | 1988-09-19 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI884287A0 FI884287A0 (en) | 1988-09-19 |
FI884287A FI884287A (en) | 1990-03-20 |
FI81116B FI81116B (en) | 1990-05-31 |
FI81116C true FI81116C (en) | 1990-09-10 |
Family
ID=8527055
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI884287A FI81116C (en) | 1988-09-19 | 1988-09-19 | METHOD FOER TILLVERKNING AV CYKLODEXTRINER INNEHAOLLANDE MALTODEXTRINER, STAERKELSE- OCH MALTOSSIRAPER. |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
FI (1) | FI81116C (en) |
WO (1) | WO1991009963A1 (en) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5296472A (en) * | 1991-12-05 | 1994-03-22 | Vyrex Corporation | Methods for delipidation of skin and cerumen removal |
US5905067A (en) * | 1997-02-10 | 1999-05-18 | Procter & Gamble Company | System for delivering hydrophobic liquid bleach activators |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3425910A (en) * | 1966-10-24 | 1969-02-04 | Corn Products Co | Production of cyclodextrin |
FR2253831B1 (en) * | 1973-12-06 | 1977-11-10 | Rikagaku Kenkyusho | |
JPS5953038B2 (en) * | 1979-04-07 | 1984-12-22 | メルシャン株式会社 | Manufacturing method of cyclodextrin |
EP0045464B1 (en) * | 1980-07-24 | 1985-07-24 | Rikagaku Kenkyusho | Process for producing cyclodextrins |
EP0342280A1 (en) * | 1988-05-18 | 1989-11-23 | Uop Inc. | Hydrolysis of starch to cyclodextrins |
-
1988
- 1988-09-19 FI FI884287A patent/FI81116C/en not_active IP Right Cessation
-
1990
- 1990-01-04 WO PCT/FI1990/000006 patent/WO1991009963A1/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO1991009963A1 (en) | 1991-07-11 |
FI81116B (en) | 1990-05-31 |
FI884287A0 (en) | 1988-09-19 |
FI884287A (en) | 1990-03-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0710674A2 (en) | Glucan having cyclic structure and method for producing the same | |
GB2053923A (en) | Process for recovering cyclodextrins | |
DE3010790C2 (en) | Process for the production of immobilized, starch degrading enzyme and its use | |
US6248566B1 (en) | Glucan having cyclic structure and method for producing the same | |
JP2012016309A (en) | Maltotriose-forming amylase, production method and use thereof | |
US4254227A (en) | Processes for producing syrups of syrup solids containing fructose-terminated oligosaccharides | |
EP0307534B1 (en) | A heterogeneous multiple-branched cyclodextrin and method for the preparation thereof | |
FI81116C (en) | METHOD FOER TILLVERKNING AV CYKLODEXTRINER INNEHAOLLANDE MALTODEXTRINER, STAERKELSE- OCH MALTOSSIRAPER. | |
US5686132A (en) | Glucans having a cycle structure, and processes for preparing the same | |
EP0607264B1 (en) | Increased cyclodextrin production | |
US5366879A (en) | Method of preparing branched cyclodextrin | |
JPH0759559A (en) | Production of oligosaccharide | |
US5827697A (en) | Process for preparing glucans having a cyclic structure | |
US5364794A (en) | Process for producing saccharides | |
EP0045464B1 (en) | Process for producing cyclodextrins | |
JPH01285195A (en) | Production of difructose-cyanhydride | |
JPH0292296A (en) | Production of high-purity maltose and reduced material thereof | |
EP0599652B1 (en) | Methods and uses of poly-L-lysine as enzyme preservative | |
Okada et al. | Intermolecular transglycosylating reaction of cyclodextrin glucanotransferase immobilized on capillary membrane | |
WO2004078959A1 (en) | Pullulan breakdown enzyme, method for production thereof and use thereof | |
JP2700423B2 (en) | Glucosyl-cyclodextrin production method | |
Sato et al. | Selective degradation of β-and γ-cyclodextrin by co-digestion using a CGTase from Bacillus ohbensis and α-glucosidase for efficient α-cyclodextrin recovery | |
JP3682931B2 (en) | Method for producing galactosyl-maltooligosaccharide derivative | |
JPH0451899A (en) | Production of maltose transglucosylated sugar mixture | |
JPH09289A (en) | Production of glucan having cyclic structure |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM | Patent lapsed | ||
MM | Patent lapsed |
Owner name: OY ALKO AB |