FI78465B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt verkande -oxo- -karbamoylpyrrolpropionitriler. - Google Patents

Description

73465

Menetelmä terapeuttisesti vaikuttavien β-okso-ot-karbamoyyli-pyrrolipropionitriilien valmistamiseksi - Förfarande för framställning av terapeutiskt verkande β-οχο-α-karbamoyl-pyrrolpropionitriler

Suomalaisessa patentissa 71129 on kuvattu β-okso-a-fenyyli-karbamoyyli-pyrrolipropionitriilejä, jotka ovat pyrroliren-kaan 1-asemassa substituoituja alempialkyylillä tai fenyyli-alempialkyylillä ja joilla on anti-inflammatorisia, antiart-riittisia ja immunopotentioivia ominaisuuksia.

Tämä keksintö perustuu tehtävään sellaisten uusien yhdisteiden valmistamiseksi, joita voidaan käyttää tulehdussairauksien, kuten nivelreuman ja erityisesti osteoartroosin hoidossa, ja joilla on myös analgeettinen vaikutus.

Tehtävä on ratkaistu keksinnön mukaisesti siten, että valmistetaan uusia analgeettisia, anti-inflammatorisia, anti-art-riittisia ja immunopotentioivasti vaikuttavia, pyrrolitäh-teen 1-asemassa substituoimattomia β-okso-a-karbamoyyli-pyr-rolipropionitriiliyhdisteitä.

Keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti vaikuttavien -(mahdollisesti substituoitu fenyylikarbamoyyli)-pyrrolipro-pionitriilien, jotka ovat pyrrolirenkaan 1-asemassa substituoimattomia ja joilla on kaava I

,__ /\

it” R2 ii -+-R

1 » 'J—C0-CH-C0NH->x *· 3 (i) PV ''p I LN K4

H

tai niiden tautomeeristen muotojen valmistamiseksi, jossa kaavassa kumpikin symboleista Rj^ ja R2 on vety, C^-C^-alkyy-li tai C^-C^-karbalkoksi, kumpikin symboleista R3 ja R4 on vety, C^-C^-alkyyli, C^-C^-alkoksi, hydroksi, halogeeni tai 2 78465 trifluorimetyyli, niiden suolojen, niiden alempialkyyli-eno-lieettereiden tai alempialkanoyyli-enoliestereiden valmistamiseksi.

Erittäin edullisia ovat kaavan II

>+ mi Y -

H

mukaiset yhdisteet ja niiden tautomeeriset muodot, joissa kumpikin symboleista R^ ja R2 merkitsee vetyä tai (^-04-31-kyyliä, ja kumikin symboleista R3 ja R4 merkitsee vetyä, C1-C4-alkyyliä, C1-C4-alkoksia, hydroksia, halogeenia tai trifluorimetyyliä, ja niiden suolat, etenkin niiden terapeuttisesti käyttökelpoiset suolat.

Muita edullisia yhdisteitä ovat ne kaavan II mukaiset yhdisteet, joissa kumpikin symboleista Rj^ ja R2 merkitsee vetyä, kumpikin symboleista R3 ja R4 merkitsee vetyä, korkeintaan 4 hiiliatomia sisältävää alkyyliä, fluoria, klooria tai trifluorimetyyliä, tai niiden suolat, etenkin niiden terapeuttisesti käyttökelpoiset suolat.

Hyvin edullisia ovat kaavan II mukaiset yhdisteet, joissa kumpikin symboleista R2 ja R2 merkitsee vetyä ja kumpikin symboleista R3ja R4 merkitsee vetyä, metyyliä, metoksia, fluoria, klooria tai trifluorimetyyliä, tai niiden suolat, etenkin terapeuttisesti käyttökelpoiset suolat, mieluimmin niiden natrium-, kalium-, kalsium-, trietyyliammonium- tai tris-(hydroksietyyli)ammoniumsuolat.

Parhaimpina pidetään etenkin kaavan II mukaisia yhdisteitä, joissa vähintään toinen symboleista R3 ja R4 on muu kuin vety ja se on fenyylirenkaan para-asemassa, ja niiden suolat, etenkin niiden terapeuttisesti käyttökelpoiset suolat, mie- 3 78465 luimmin niiden natrium-, kalium-, kalsium-, trietyyliammo-nium- tai tris(hydroksietyyli)ammoniumsuolat.

Tässä käytetyillä yleisillä määritelmillä on esillä olevan keksinnön puitteissa seuraavat merkitykset.

Cj-C^-alkyyliryhmä sisältää edullisesti 1-4 hiiliatomia ja se merkitsee esimerkiksi etyyliä, propyyliä, butyyliä tai mieluimmin metyyliä.

C1-C4-alkoksiryhmä merkitsee esimerkiksi etoksia, propoksia, isopropoksia tai mieluimmin metoksia.

Halogeeni on edullisesti kloori tai fluori, mutta se voi olla myös bromi tai jodi.

Karbalkoksiryhmä merkitsee edullisesti karboetoksia tai kar-bometoksia.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden tautomeeriset muodot voidaan esittää vastaavalla kaavan la

Rrl ih- mukaisella enolirakenteella, jossa symboleilla Rj_, R2, R3 ja R4 on edellä kaavan I mukaisille yhdisteille esitetyt merkitykset, ja ne ovat näiden yhdisteiden kanssa tasapainossa.

Kaavan I mukaisilla yhdisteillä, jotka ovat tasapainossa tautomeeristen muotojensa kanssa, on happoluonne. Ne muodostavat kaavan Ia mukaisen enolisen tautomeerisen rakenteen johdannaisina alempialkyyli-enolieettereitä, alempi-alkanoyyli-enoliestereitä ja suoloja. Suolat, jotka muodos- 4 73465 tetaan terapeuttisesti käyttökelpoisten emästen kanssa, on johdettu esim. alkalimetallista, maa-alkalimetallista, kupari- tai sinkkihydroksidista, ammoniakista, mono-, di-tai tri-(alempialkyyli tai hydroksi-alempialkyyli)-5 amiineista, monosyklisistä amiineista tai alkyleenidiamii-neista. Tällaiset suolat ovat esim. natrium-, kalium-, magnesium-, ammonium-, mono-, di- tai tri-(metyyli, etyyli tai hydroksietyyli)-ammonium-, pyrrolidinium-, etyleenidi-ammonium- tai morfoliniumsuoloja tai niiden erilaisia 10 hydraatteja.

Keksinnön mukaisilla yhdisteillä on arvokkaita farmakologisia ominaisuuksia, ensisijassa anti-inflammatorisia, anal-geettisiä (antinosiseptiivisiä), antireumaattisia, immuno-potentioivia ja antiartriittisia vaikutuksia. Nämä voidaan 15 osoittaa in-vitro- ja in-vivo-kokeissa. Viimeksi mainituissa käytetään testikohteina mieluummin nisäkkäitä, esim. rottia, marsuja tai koiria. Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan antaa niille enteraalisesti, mieluummin oraalisesti, paren-teraalisesti, esim. subkutaanisesti tai intravenöösisesti, 20 tai tooppisesti, esim. vedessä tai öljyssä olevien liuosten muodossa, tai tärkkelystä sisältävien suspensioiden muodossa. Käytetty annos voi olla noin 0,1 - 100 mg/kg/päivä, mieluummin noin 1 - 50 mg/kg/päivä. Mainituille vaikutuksille valitut testit ovat joko klassisia koemenetelmiä, 25 esim. rotan karrageenin-käpäläödeema- tai adjuvantti- artriitti-testi, koiran Synovitis-koe tai testi jossa tulkitaan ultravioletilla valolla tuotettu eryteema, tai uudenaikaisia testimenetelmiä. Tällaisia ovat neutraali proteaasiesto (esitetty julkaisussa Arthritis Rheum. V7, 47 30 (1947)) tai leukosyyttien kemotaksis-esto (Ann. N.Y.Acad.

Sei., 256, 177 (1975)). Muita menetelmiä ovat neutro-fiilisen adherenssin väheneminen (Amer. J. Med. £1^, 597 (1976)) tai prostaglandiini-syntetaasin esto, jota on esitetty julkaisussa Biochem. _H), 2372 (1971); tai fenyyli-35 kinoni-writhing-testi.

5 7846S

Immunopotentioivat vaikutukset todetaan BCG-immunisoi-duissa eläimissä in vitro tai in vivo.

Solujen välittämän immuniteetin paraneminen määritetään in vitro mittaamalla monosyyttien suurentunut kemotaksia.

5 Koiraspuoliset, 250 - 300 g painavat Charles River-rotat immunisoidaan antamalla niille intradermaalisena injektiona 0,1 ml Bacillus Calmette Guerin-rokotetta (BCG). Viikon kuluttua koe-eläimille annetaan makrofagien kasaantumisen laukaisemiseksi intraperitoneaalisesti injektiolla 10 ml 10 steriiliä 2%:sta riisi-tärkkelys-liuosta. 11. päivänä immunisoinnin jälkeen eläimet tapetaan ja kerätään peri-toneaaliset makrofagit 20 ml:11a Gey'n puskuroitua suolaliuosta, joka sisältää hepariinia (25 yksikköä/ml). Soluja sentrifugoidaan 10 minuuttia 1000 kierroksessa/min., pes-15 tään 50 ml:11a Gey'in liuosta samassa nopeudessa ja ajassa ja sitten suspendoidaan Gey'in liuokseen, joka sisältää 0,1% ihmisen seerumialbumiinia, jotta saadaan konsen-traatioksi 2 x 106 solua/ml.

_2

Testiaineilla valmistetaan 1 x 10 molaarisia liuoksia 20 dimetyyliasetamidissa. Seuraavat laimennukset tehdään Gey'in liuoksella ja nämä lisätään lopuksi yllä mainittuun solu- -4 -5 -6 -7 suspensioon sopivien 10 ,10 ,10 ja 10 molaaristen loppukonsentraatioiden saavuttamiseksi. Suspensiot sijoitetaan muunnettujen Boyden-kemotaksis-kammioiden yläosaan, 25 jolloin mainitut testiaineet pysyvät yhdessä solujen kanssa. Kemotaktisena aineena käytetään rottaseerumia, joka on aktivoitu Escherichia coli-bakteerin lipopolysakkaridilla (Difco) (1/10 laimennus pH:ssa 7,1). Tämä seerumi täytetään mainittujen kammioiden alaosaan. Kammion solut sisältävä 30 osa erotetaan kemotaktisesta liuoksesta selluloosasuodatus-kalvolla, jonka huokoset ovat 8 mikronia.

6 73465

Valmistetaan kolme rinnakkaista kammiota ja niitä inkuboi-daan 5 tuntia 37°C:ssa. Solujen kulun kontrollina käytetään solususpensioita, jotka eivät sisällä testiyhdistettä. Inku-boinnin jälkeen suodattimet poistetaan, kiinnitetään ja 5 värjätään rautahematoksiliinillä Weigertin mukaisesti.

Suodattimen alapinnan neljä kenttää tutkitaan mikroskooppisesta 320-kertaisessa suurennuksessa. Kemotaktisen aktiivisuuden indeksinä käytetään näissä neljässä kentässä laskettujen neutrofiilien lukumäärän keskiarvoa.

10 Solujen välittämän immuniteetin paraneminen mitataan in vivo BCG-immunisoiduissa artriittisissä rotissa mittaamalla yliherkkyysreaktion hidastuminen olennaisesti julkaisun Current Therapeutic Research 3j), s. 34 (1981 ) mukaisesti.

Koiraspuoliset, 325 - 300 g painavat Charles River-rotat 15 herkistetään siten, että jokaiselle koe-eläimelle injisoi-daan oikean takakäpälän pohjaan 250 yg Mycobacterium tuberculosis (Difco), joka on suspendoitu Freund’in adjuvanttiin (Freund's incomplete adjuvant). Eläimet immunisoidaan 18. päivänä adjuvantti-injektion jälkeen 0,1 ml:11a BCG-roko-20 tetta intradermaalisesti. Vaikuttava aine annetaan peroraa-lisesti maissitärkkelys-suspensiossa. Kontrollieläimet käsitellään yksinomaan maissitärkkelyksellä. Kaikki eläimet testataan 29. päivänä iholla antamalla intradermaalisesti 10 yg PPD:tä (purified protein derivative) ihoreaktioiden 25 aiheuttamiseksi. Punoittuman läpimitta ja kovettumisreaktio mitataan 24 tunnin kuluttua antigeenikäsittelyn jälkeen. Punoittuman läpimitan pieneneminen viittaa parantuneeseen soluimmuniteettiin.

Karrageenin-käpäläödeematesti suoritetaan rotalla anti-30 inflammatorisen vaikutuksen suhteen seuraavasti:

Tunnin kuluttua vaikuttavan aineen oraalisen antamisen jälkeen injisoidaan takakäpälän pohjaan 0,1 ml karrageeniniä 7 78465 (18%:sta). Määrättyinä aikoina mitataan sitten käsitellyn ja vahingoittumattoman käpälän välisen turvotuksen erotus elohopeasiirtvmällä.

Anti-artriittisen aktiivisuuden tavanomainen adjuvantti-5 artriittitesti suoritetaan olennaisesti julkaisussa Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 137, 506 (1971) esitetyllä tavalla.

Fenyyli-p-bentsokinoni - indusoitu analgeettisen (antinosi-septiivisen) vaikutuksen Writhing-testi suoritetaan julkaisun J. Pharmacol Exp. Therap. 125, 237 (1959) mukaisesti 10 hiirellä.

Keksinnön esimerkkeinä mainittakoon esimerkin 1 mukainen β-okso-a- (fenyylikarbamoyyli)-β- (2-pyrrolyyli-propionitriili ja esimerkin 2 mukainen β-okso-a-(4-kloori-fenyyli)-β-pyrrolyyli)-propionitriili, jotka takaavat 46 tai vast.

15 63%:sen suojan 100 mg/kg:n peroraalisena annoksena rotassa karrageeninillä aiheutettua ödeemaa vastaan 3 tuntia antamisen jälkeen. Vastaavasti tuottaa esimerkin 3 mukainen β-okso-a-(2/4-difluorifenyylikarbamoyyli)-3-(2-pyrrolyyli)-propionitriili 33%:sen suojan 25 mg/kg/p.o.-annoksena.

20 Edelleen keksinnön mukaiset yhdisteet, esim. edellä mainitut esimerkkien 1, 2 ja 3 mukaiset yhdisteet ovat aktiivisia tavanomaisessa adjuvantti-artriitti-testissä rotalla 25 mg/kg/p.o.-annoksena ja ne takaavat 47, 58 tai vast.

55%:sen suojan.

25 Keksinnön mukaisten yhdisteiden immunopotentioivaan vaikutukseen viittaa se seikka, että esim. edellä mainitulla esimerkkien 1 ja 2 mukaisilla yhdisteillä on merkittävä vaikutus ihotestissä BCG-immunisoiduissa adjuvantti-artriitti-rotissa 25 mg/kg/p.o.annoksena.

8 78465

Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat myös aktiivisia ruston synoviaalikudoksen ko-viljelyjärjestelmässä, ruston marron hajoamisen tutkimusmallissa. Tästä voidaan johtaa puolestaan niiden vaikutus osteoartroosiin. Malli on muodos-5 tettu seuraavasti:

Naudan nenän väliseinän ruston proteoglykaani-marrossa merkitään in vitro glykosaminoglykaani 35:11a. Tätä varten inkuboidaan rustolevyjä sulfaattivapaassa väliaineessa 35 S-natriumsulfaatin kanssa. Tämän jälkeen ko-viljellään 35 10 S-merkityt rustolevyt normaalin synoviaalikudoksen kudos-viljelmien kanssa 4 päivää "Multi-Well"-kudosviljelyle-vyillä. Tämän inkubointiajän lopussa mitataan radioaktiivisuus 100 yl:ssa väliainetta. Tämän jälkeen rustolevyt hydrolysoidaan ja niissä oleva radioaktiivisuus määritetään. 15 Tästä voidaan laskea, mikä osa ^S-merkityistä glykosamino-glykaaneista siirtyy ko-viljelyn aikana väliaineeseen; vertailemalla käsiteltyjä ja käsittelemättömiä (= kontrolli) viljelyltä voidaan laskea marron hajoamisen prosentuaalinen esto.

20 Keksinnön mukaisina esimerkkeinä mainittakoon esimerkin 1 mukainen β-okso-a-(fenyylikarbamoyyli)-β-(2-pyrrolyyli)-propionitriili, esimerkin 2 mukainen β-okso-a-(4-kloori-fenyylikarbamoyyli)-3-(2-pyrrolyyli)-propionitriili ja esimerkin 3 mukainen β-okso-a-(2,4-difluorifenyylikarbamoyyli)-25 β-(2-pyrrolyyli)-propionitriili, jotka estävät rustomarron hajoamisen noin 10~^M - 10~^M:n konsentraatioalueella.

Edellä mainittujen edullisten ominaisuuksien ansiosta voidaan keksinnön mukaisia yhdisteitä käyttää analgeettisinä, anti-inflammatorisina, antiartriittisinä ja immunopoten-tioivina aineina ja niitä voidaan käyttää esim. erilaisten 30 särkytilojen ja tulehdussairauksien, esim. nivelreuman ja osteoartroosin hoitamiseksi nisäkkäissä, mukaanlukien ihmisissä.

9 7346S

Vertaileva koeselostus A. Verratut yhdisteet: A.1. Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet __ y*\ 5 ·—COCH—CONH-·^ ^“Rj Ϊ h '

Yhdiste r3

I (esimerkki 1) H

II (esimerkki 5) p-F

A. 2. viitejulkaisun FI 71129 mukaiset yhdisteet ♦ *—COCH—CON'H- ΐ.

X

tn 3

Yhdiste r3

III (esimerkki 1) H

IV (esimerkki 5) p-F

B. Analqeettinen (antinosiseptiivinen vaikutus)

Analgeettinen (antinosiseptiivinen) vaikutus testataan fe-nyyli-p-bentsokinonilla indusoitujen writhing-oireiden suhteen [Hendershot ja Forsaith: J. Pharmacol. Exp. Therap. 125, 237 (1959)]. Tätä menetelmää muunnetaan seuraavasti:

Hiirille, (MAG, 18-25 g), jotka ovat ensin paastonneet yön yli, annostetaan vaikuttavaa ainetta, liuotettuna 0,75%:i-seen metyyliselluloosaan, 55 minuutin kuluttua writhing-oireiden indusoimisesta. Writhing-oireet indusoidaan injektoimalla i.g. 0,25 ml fenyyli-p-bentsokinonin (0,02-0,03 %) suspensiota tragantissa (0,4 %). Viiden minuutin kuluttua aloitetaan writhing-indusoitujen ärsytysliikkeiden laskeminen tarkkailemalla 10 minuutin ajan. 0,02 %:isella fenyyli-p-bentsokinonilla indusoitujen ärsytysliikkeiden frekvenssin ίο 7 8 4 6 5 väheneminen verrattuna kontrolliin on esitetty taulukoissa l ja 2.

Tulokset:

Taulukko l

Yhdiste Annos Hiirien Writhing-indusoitujen mg/kg lkm ärsytysliikkeiden p.o. väheneminen %:eina I (FI 841215) 2 8 -26 6 8 _701 20 8 _971 III (FI 71129) 68 +9 20 8 -52* 60 8 -891 * merkitsevä ero kontrolliin nähden p < 0,05 ** merkitsevä ero kontrolliin nähden p < 0,01

Taulukko 2

Yhdiste Annos Hiirien Writhing-indusoitujen mg/kg lkm ärsytysliikkeiden p.o. väheneminen %:eina I (FI 841215) 28 - 8 6 8 -701 20 8 _921 III (FI 71129) 68 - 2 20 8 +34 60 8 -831 merkitsevä ero kontrolliin nähden p < 0,01 n 78465 0. 03.:isella fenyyli-p-bentsokinonilla indusoitujen ärsytys-liikkeiden frekvenssin väheneminen verrattuna kontrolliin on esitetty taulukossa 3.

Taulukko 3

Yhdiste Annos Hiirien Writhing-indusoitujen mg/kg lkm ärsytysliikkeiden p.o. väheneminen % teinä I (FI 841215) 1 16 - 33 5 24 - 78 50 8 -100 III (FI 71129) 5 24 - 28 50 24 - 80 C. Johtopäätökset 1. Taulukon 1 tulokset osoittavat, että keksinnön mukaisella yhdisteellä I annoksella 6 mg/kg p.o. on olennaisesti parempi vaikutus (-70 %) kuin tunnetulla yhdisteellä III annoksella 20 mg/kg p.o. (-52 %) ja yhdisteellä III ei samalla 6 mg/kgtn annoksella ole lainkaan vaikutusta.

2. Taulukon 2 tulokset osoittavat keksinnön mukaisen yhdisteen II aivan selvän ylivoimaisuuden, joka yhdiste jo annoksella 6 mg/kg p.o. vähentää 70 % tiliä ärsytysliikkeitä, kun taas tunnetulla yhdisteellä IV ei samalla annoksella ole lainkaan vaikutusta.

3. Taulukon 3 tulokset osoittavat, että keksinnön mukaisella yhdisteellä II on sama vaikutus annoksella 5 mg/kg p.o. kuin tunnetulla yhdisteellä IV annoksella 50 mg/kg p.o.

Keksinnön mukaiset yhdisteet valmistetaan sinänsä tunnetulla tavalla, esim. siten, että 78465 12

a) kondensoidaan kaavan III ja IV

*-* ^3\ ·-· R1 H H R2 (HI) ja 't ^-S-C-0 (IV) *w\ „ Y coch2-cn R4 mukaiset yhdisteet, joissa kaavoissa R-^ R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä, tai b) kaavan VI mukainen yhdiste RHf f— R2 (VI) • ·

^ XC0^H-C00H

tai sen reaktiokykyinen funktionaalinen johdannainen kondensoidaan kaavan VII mukaisen amiinin kanssa /-V*3 H-N-H-.( (VII) R4 jolloin Rx, R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä, tai c) kaavan IX mukainen yhdiste RHf f- R2 <IX> • · ^ ncooh

tai sen reaktiokykyinen funktionaalinen johdannainen kondensoidaan kaavan X

13 78465 /-/3 9h2-co—nh—·( *· (x) iN *=* \ mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin , R2> R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä, ja saatu kaavan I mukainen yhdiste muutetaan haluttaessa toiseksi keksinnön mukaiseksi yhdisteeksi, ja/tai saatu enoli muutetaan haluttaessa enoli-alempialkyylieetteriksi tai enoli-alempialkanoyyliesteriksi, ja/tai saatu enoli muutetaan haluttaessa emäksellä suolaksi tai saatu enolisuola vapaaksi enoliksi tai emäksellä toiseksi suolaksi, ja/tai saatu isomeeriseos erotetaan haluttaessa yksittäisiksi isomeereiksi .

Menetelmän a) mukainen kondensaatio, jossa kaavan IV mukainen isosyanaatti saatetaan reagoimaan kaavan III mukaisen pyrroloyyliasetonitriilin kanssa, voidaan suorittaa US-pa-tenttijulkaisun 4,256,759 mukaisesti. Tällöin työskennellään epäorgaanisen tai organisen emäksen, esim. natriumhydridin tai trietyyliamiinin läsnäollessa tai ilman tätä tai polaarisen liuottimen, kuten eetterin, esim. dietyylieetterin, eteeniglykoli-dimetyylieetterin (glyme) tai tetrahydrofuraa-nin ja/tai amidin tai sulfoksidin, esim. dimetyyliformamidin tai dimetyylisulfoksidin läsnäollessa tai ilman tätä, mieluimmin 25-100°C:n lämpötila-alueella, etenkin korotetuissa lämpötiloissa, esim. n. 150°C:ssa, kun ei käytetä emästä.

Yllä mainittu menetelmä a) suoritetaan keksinnön mukaisesti seuraavasti:

Mainittu nitriili käsitellään vedettömän trialempialkyyli-amiinin, mieluimmin trietyyliamiinin pienellä molaarisella ylimäärällä, ja sitten siihen lisätään mooliekvivalentti sopivaa enyyli-isosyanaattia (Ph-N=C-0) tai sen jossakin mainitussa polaarisessa liuottimessa, esim. dimetyylisulfoksidis- 14 73465 sa tai glymessä olevaa liuosta. Reaktioseosta sekoitetaan noin 2-12 tuntia huoneen lämpötilassa ja sen tilavuutta vähennetään lämmittämällä ei liian korkeissa lämpötiloissa. Jäännös käsitellään laimennetun hapon, esim. 0,1-0,3 normaalisen kloorivetyhapon ylimäärällä. Saatu raakatuote uutetan tai erotetaan, pestään vedellä, kuivataan, trituroidaan ja/ tai kiteytetään uudelleen sopivista liuottimista. Tällaisia liuottimia ovat alempialkanolit, alempialkanonit, dialempi-alkyylieetteri ja/tai alempialkyyli-alempialkanoaatit, esim. metanoli, asetoni, dietyylieetteri ja/tai etikkahappoetyy-liesteri.

Kaavojen III ja IV mukaiset lähtöaineet ovat tunnettuja tai ne voidaan valmistaa sinänsä tunnettujen menetelmien mukaisesti. Näin voidaan saada esim. kaavan III mukaisia yhdisteitä julkaisuissa Ber. 113, 3675 (1980),Chem. Abstracts 29, 2164 ja Ber. 55, 2390 (1922) esitettyjen menetelmien mukaisesti.

Menetelmässä b) on pyrrolirenkaan typpiatomissa oleva suoja-ryhmä esim. mahdollisesti substituoitu bentsyyli, mahdollisesti substituoitu karbobentsyylioksi, alempialkanoyyli (esim. asetyyli), trifluoriasetyyli, di-alempialkyyliamino (esim. dimetyyliamino), tetrahydropyranyyli, alempialkoksi-metyyli (esim. metoksimetyyli), tai alempialkoksikarbonyyli (esim. tert.-butyylioksikarbonyyli).

Menetelmän b) mukainen kondensointi suoritetaan US-patentin 4,256,759 mukaisesti, mieluimmin huoneen lämpötilan ja 150°C:n välisessä lämpötilassa, joka ekvivalenttisilla reagenssimää-rillä (kun käytetään reaktiokykyistä esteriä) tai muodostuneen hapon neutraloimiseksi amiini-ylimäärällä tai toisen emäksen, esim. tert.-amiinin, kuten tri-alempialkyyliamiinin tai pyridiinin läsnäollessa (kun käytetään halogenidia tai anhydridiä). Mainittujen estereiden kanssa suoritettavassa reaktiossa muodostunut alempialkanoli tislataan mieluimmin „ 784« pois yhdessä laimennusaineen kanssa. Tällaisia aineita ovat esim. aromaattiset hiilivedyt, esim. bentseeni, tolueeni tai ksyleeni. Jos käytetään vapaata karboksyylihappoa kondensaa-tiossa, niin tämä suoritetaan mieluimmin kondensointiaineen, esim. disubstituoidun karbodi-imidin, kuten disykloheksyyli-karbodi-imidin, 1,1'-karbonyylidi-imidatsolin tai dietyyli-fosforosyanidaatin (dietyyli-fosforyyli-syanidin) läsnäollessa.

Kaavan VI mukaiset lähtöaineet voidaan valmistaa esim. saattamalla kaavan III mukainen yhdiste reagoimaan hiilihappo-johdannaisen, esim. kloorimuurahaishappo-etyyliesterin kanssa. Saadaan kaavaa VI vastaava etyyliesteri, joka voidaan muuntaa kaavan VI mukaiseksi yhditeeksi tai joksikin toiseksi sen johdannaiseksi sinänsä tunnettujen menetelmien mukaisesti .

Menetelmän c) mukainen kondensaatio, kun lähtöaine on kaavan IX mukaisen yhdisteen reaktiokykyinen funktionaalinen johdannainen, suoritetaan mieluimmin metalloivan aineen, esim. al-kalimetallin, -metallialkoksidin tai -hydridin, kuten nat-riumhydridin, kalium-tert.-butoksidin, tallium-I-etoksidin läsnäollessa tai faasinsiirto-olosuhteissa, polaarisissa liuottimissa, esim. 1,2-dimetoksietaanissa, dimetyyliform-amidissa tai dimetyylisulfoksidissa, noin 0-100*C:n, mieluimmin 25-50eC:n lämpötiloissa.

Kaavojen VI, IX ja XII mukaisten karboksyylihappojen reaktio-kyky iset funktionaaliset johdannaiset ovat esim. anhyridejä, etenkin seka-anhydridejä, happohalogenideja, happoatsideja, alempialkyyliestereitä tai aktivoituja esteritä. Seka-anhyd-ridit ovat mieluimmin povaliinihapon tai hiilihapon alempi-alkyyli (etyyli, isobutyyli)-hemiesterin anhydridejä. Happo-halogenideja ovat esim. kloridit tai bromidit. Aktivoituja estereitä ovat esim. sukkiini-imido-, ftaali-imido- tai 4-nitrofenyyli-esteri. Alempialkyyliestereitä ovat esim. metyyli- tai etyyliesteri.

78465 16

Kaavojen VI, IX ja XII mukaisen yhdisteen kanssa, yllä olevien menetelmien mukaisesti, voidaan suorittaa kondensointi-aineen, esim. dietyyli-fosforosyanidaatin läsnäollessa, emäksen, esim. trietyyliamiinin läsnäollesa, polaarisessa liuot-timessa, esim. dimetyyliformamidissa tai metyleenikloridis-sa.

Saadut kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan muuntaa sinänsä tunnetulla tavalla toisikseen. Näin esim. saadut enolit voidaan eetteröidä edullisesti diatsoalkaaneilla tai esteröidä esim. alempialkaanihappoanhydrideillä. Mainittujen enolien terapeuttisesti käyttökelpoiset suolat voidaan valmistaa esim. vesipitoisilla alkalimetallihydroksideilla, mieluimmin liuottimena käytetyn eetterin tai alkoholin, esim. alempial-kanolin läsnäollessa. Alkoholisista liuoksista voidaan saos-taa suolat mainituilla eettereillä, esim. dietyylieetterillä tai tetrahydrofuraanilla. Työskennellään kohtuullisissa lämpötiloissa, esim. alle 100°C:ssa. Saadut suolat voidaan muuntaa, kuten yllä on mainittu, käsittelemällä hapoilla tai emäksillä vapaiksi yhdisteiksi. Näitä tai muita suoloja voidaan käyttää myös saatujen yhdisteiden puhdistukseen. Johtuen uusien vapaassa muodossa esiintyvien ja suolojensa muodössa esiintyvien yhdisteiden välisestä läheisestä suhteesta tarkoitetaan edellä ja seuraavassa vapailla yhdisteillä ja suoloilla merkityksen ja tarkoituksenmukaisesti mahdollisesti myös vastaavia suoloja tai vast, vapaita yhdisteitä.

Lähtöaineet ovat tunnettuja tai jos ne ovat uusia, ne voidaan valmistaa sinänsä tunnetuilla menetelmillä, esim. kuten viitatussa kirjallisuudessa tai esimerkeissä on esitetty.

17 78465

Yllä mainitut reaktiot suoritetaan sinänsä tunnettujen menetelmien mukaisesti, laimentimien läsnäollessa tai ilman niitä, mieluummin sellaisissa, jotka ovat reagoivien aineiden suhteen inerttejä ja liuottavat nämä, katalysaattoreiden, 5 kondensointiaineiden tai neutralointiaineiden läsnäollessa ja/tai inertissä atmosfäärissä, jäähdyttäen, huoneenlämpö-tilassa tai korotetuissa lämpötiloissa, normaalissa tai korotetussa paineessa.

Keksinnön kohteena ovat samoin esillä olevan menetelmän 10 muunnelmat, joiden mukaisesti käytetään menetelmän jollakin asteella saatava välituote lähtömateriaalina ja suoritetaan jäljellä olevat menetelmän vaiheet, tai menetelmä katkais-taaan jollakin asteella, tai joiden mukaisesti lähtömateriaali muodostetaan reaktio-olosuhteissa, tai joissa lähtö-15 aine käytetään mainittujen enolien, suolan tai reaktio- kyky isen johdannaisen, mieluummin alkalimetalli- tai tri-alkyyliammoniumsuolan muodossa. Esillä olevan keksinnön mukaisessa menetelmässä käytetään mieluummin sellaisia lähtöaineita, jotka johtavat alussa erittäin arvokkaiksi 20 kuvattuihin yhdisteisiin.

Keksinnön kohteena ovat myös uudet välituotteet ja menetelmät niiden valmistamiseksi.

Riippuen lähtöaineiden ja menetelmien valinnasta saadaan uudet yhdisteet isomeerien, tautomeerien tai niiden seok-25 sien muodossa edellyttäen, että ne ovat mahdollisia.

Yhdisteet ja niiden suolat voidaan saada myös niiden hyd-raattien muodossa tai ne voivat sisältää muita, kiteytykseen käytettyjä liuottimia.

Esillä olevan keksinnön mukaisia farmakologisesti käyttö-30 kelpoisia yhdisteitä käytetään farmaseuttisten valmisteiden valmistamiseksi, jotka sisältävät vaikuttavan määrän 18 78465 aktiiviainetta yhdessä tai sekoitettuna kantoaineisiin, jotka soveltuvat enteraaliseen, parenteraaliseen tai tooppi-seen käyttöön. Mieluummin käytetään tabletteja tai gela-tiinikapseleita, jotka sisältävät vaikuttavan aineen yhdessä 5 laimennusaineiden, esim. laktoosin, dekstroosin, ruokosokerin, mannitolin, sorbitolin, selluloosan ja/tai glysii-nin, ja voiteluaineiden, esim. piimään, talkin, steariini-hapon tai sen suolojen, esim. magnesium- tai kalsiumstea-raatin ja/tai polyeteeniglykolin kanssa; tabletit sisältä-10 vät samoin sideaineita, esim. magnesiumaluminiumsilikaattia, tärkkelystahnaa, gelatiinia, traganttia, metyyliselluloosaa, natriumkarboksimetyyliselluloosaa ja/tai polyvinyyli-pyrrolidonia ja haluttaessa hajotusaineita, esim. tärkkelyksiä, agaria, algiinihappoa tai sen suolaa ja/tai kuohu-15 seoksia, tai adsorptioaineita, väriaineita, makuaineita ja makeuttimia. Injisoitavat valmisteet ovat mieluummin isotonisia vesipitoisia liuoksia tai suspensioita ja supposi-toriot tai tooppiset nestemäiset voiteet ensisijassa rasva-emulsioita tai -suspensioita. Farmakologiset valmisteet 20 voivat olla steriloituja ja/tai ne voivat sisältää apuaineita, esim. säilöntä-, stabilointi-, kostutus- ja/tai emul-gointiaineita, liuokseksi tekeviä aineita, suoloja osmoottisen paineen säätämiseksi ja/tai puskuriaineita. Esillä olevat farmaseuttiset valmisteet jotka sisältävät haluttaessa 25 muita farmakologisesti arvokkaita aineita, valmistetaan sinänsä tunnetulla tavalla, esim. tavanomaisten sekoitus-, granulointi- ja rakeistusmenetelmien mukaisesti ja ne sisältävät n. 1 - n. 75%, etenkin n. 1 - n. 50% aktiivista ainetta. Noin 50 - 70 kg painavien nisäkkäiden yksittäis-30 annokset voivat sisältää noin 10 - 200 mg aktiivista aineosaa .

Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksintöä eivätkä ne ole tarkoitettu keksintöä rajoittaviksi. Lämpötilat esitetään Celsius-asteina ja osat ovat paino-osia. Mikäli toisin 19 78465 ei ole määritelty, suoritetaan liuottimien haihduttaminen alennetussa paineessa, mieluummin noin 15 - 100 mm Hg:ssä.

Esimerkki 1:

Liuos, jossa on 3,1 g pyrroloyyliasetonitriiliä 25 ml:ssa 5 Glymeä (eteeniglykoli-dimetyylieetteriä) ja 2,7 g vedetöntä trietyyliamiinia, käsitellään 3,0 g:11a fenyyli-isosyanaat-tia. Kohtuullisesti eksotermisen reaktion jälkeen reaktio-seoksen annetaan seistä yön yli. Suurin osa liuottimesta haihdutetaan pois ja jäännös käsitellään vedellä ja 10 12 ml:lla 10%:sta natriumhydroksidiliuosta. Vesipitoinen, alkalinen liuos pestään etikkahappoetyyliesterillä ja tehdään happameksi 6-normaalisella kloorivetyhapolla. Tuote erotetaan, pestään vedellä, kuivataan ja kiteytetään uudelleen etanolista. Saadaan g-okso-α-(fenyylikarbamoyyli)-B-15 (2-pyrrolyyli)-propionitriili, joka sulaa 207-209°C:ssa.

Tämä on kaavan II mukainen yhdiste, jossa merkit sevät vetyä.

Lähtöaine valmistetaan seuraavasti:

Kuivaa kloorivetyä johdetaan 20 minuutin ajan jäällä 20 jäähdytettyyn liuokseen, jossa on 30 g pyrrolia ja 30 g malonihapponitriiliä 800 ml:ssa kuivaa eetteriä. Reaktio-seoksen annetaan seistä muutaman tunnin ja liuos suodatetaan. Saadaan 65 g oranssinruskeaa, vesiliukoista kiinteää materiaalia. Liuos, jossa on 50 g tätä välituotetta (enamii-25 ni-nitriilihydrokloridi) 600 mljssa vettä, päällystetään 400 ml:11a etikkahappoetyyliesteriä ja sekoitetaan 2,5 tuntia huoneenlämpötilassa. Orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan magnesiumsulfaatin päällä ja haihdutetaan. Saadaan kiteitä, jotka sulavat 77-79°:ssa. Toinen määrä tätä 30 tuotetta saadaan kuumentamalla vesipitoista kerrosta höyry-hauteen päällä 30 minuuttia ja uuttamalla etikkahappoetyyliesterillä. Uudelleenkiteytys vedestä tuottaa 20 78465 2-pyrroloyylipropionitriilin, Sp. 79-81°.

Esimerkki 2;

Liuokseen, jossa on 6,7 g 2-pyrroloyyliasetonitriiliä 25 ml:ssa Glymeä ja 5,5 g trietyyliamiinia, lisätään liuos, 5 jossa on 8,6 g 4-kloorifenyyli-isosyanaattia 25 ml:ssa Glymeä. Eksotermisen reaktion jälkeen seoksen annetaan seistä yön yli. Osa liuottimesta haihdutetaan pois ja jäähtynyt jäännös kaadetaan liuokseen, jossa on 10 ml 6-normaa-lista kloorivetyhappoa 250 ml:ssa vettä. Lisätään hieman 10 metanolia seokseen ja erotetaan raaka materiaali pois. Se liuotetaan laimennettuun natriumhydroksidilluokseen, liuos käsitellään aktiivihiilellä, suodatetaan ja tehdään happa-meksi 6-normaalisella kloorivetyhapolla. Jälleen saostunut tuote erotetaan, pestään vedellä ja trituroidaan metanolilla. 15 Sp. 219-221°. Uudelleenkiteyttämällä metanolista saadaan β-okso-a-(4-kloorifenyylikarbamoyyli)-β-(2-pyrrolyyli)-propionitriili, Sp. 223-225°.

Esimerkki 3;

Saattamalla 2,4 g 2-pyrroloyyliasetonitriiliä reagoimaan 20 3,1 g:n kanssa 2,4-difluorifenyyli-isosyanaattia trietyyli- amiinin (2,0 g) läsnäollessa 25 ml:ssa Glymeä ja eristämällä yllä olevien esimerkkien mukaisesti, trituroimalla sitten etanolin kanssa ja kiteyttämällä uudelleen etanolista saadaan β-okso-a-(2,4-difluorifenyylikarbamoyyli)-β-25 (2-pyrrolyyli)-propionitriili, Sp. 169-171°.

Esimerkki 4;

Saattamalla 2,0 g 2-pyrroloyyliasetonitriiliä reagoimaan 3,0 g:n kanssa 3-(trifluorimetyyli)-fenyyli-isosyanaattia trietyyliamiinin (1,8 g) läsnäollessa 25 ml:ssa Glymeä 30 edellä olevien esimerkkien mukaisesti ja kiteyttämällä 21 73465 raakatuote uudelleen metanolista saadaan β-okso-a-(3-tri-fluorimetyyli-fenyylikarbamoyyli)-β-(2-pyrrolyyli)-pro-pionitriili, Sp. 210-212°.

Esimerkki 5: 5 Saattamalla reagoimaan 2,4 g 2-pyrroloyyliasetonitriiliä 2,5 g:n kanssa 4-fluorifenyyli-isosyanaattia trietyyli-amiinin (2,2 g) läsnäollessa 25 ml:ssa Glymeä yllä olevien esimerkkien mukaisesti, saostamalla vielä kerran laimennetusta natriumhydroksidiliuoksesta kloorivetyhapolla ja 10 kiteyttämällä uudelleen metanolista saadaan β-okso-a- (4 — fluorifenyylikarbamoyyli)-β-(2-pyrrolyyli)-propionitriili, Sp. 233-234°.

Esimerkki 6:

Saattamalla reagoimaan 2,7 g 2-pyrroloyylipropionitriiliä 15 3,8 g:n kanssa 3-kloori-4-fluorifenyyli-isosyanaattia tri- etyyliamiinin (2,4 g) läsnäollessa 25 ml:ssa Glymeä ja viimeistelemällä edellä olevien esimerkkien mukaisesti ja kiteyttämällä uudelleen etikkahappoetyyliesteristä saadaan β-okso-a-(3-kloori-4-fluorifenyylikarbamoyyli)-8-(2-pyrro-20 lyyli)-propionitriili, joka sulaa hajaantuen 257-258°:ssa.

Esimerkki 7:

Liuos, jossa on 2,1 g 2-pyrroloyyliasetonitriiliä 15 ml:ssa Glymeä ja 1,8 g trietyyliamiinia, käsitellään yllä olevien esimerkkien mukaisesti liuoksella, jossa on 3 g 2,4-di-25 kloorifenyyli-isosyanaattia 15 ml:ssa Glymeä. Heikosti eksotermisen reaktion jälkeen saadaan paksu kidesuspensio.

Sen annetaan seistä yön yli, laimennetaan kuivalla eetterillä ja suodatetaan. Saadaan enolirakenteen muodossa oleva β-okso-a-(2,4-dikloorifenyylikarbamoyyli)-β-(2-pyrrolyyli)-30 propionitriilin trietyyliammoniumsuola, Sp. 180-182° 78465 (hajaantuen).

Yllä olevan trietyyliammoniumsuolan metanolissa oleva liuos lisätään liuokseen, jossa on 4 ml 6-normaalista kloorivety-happoa 250 ml:ssa vettä. Vapaa enolinen tuote erotetaan, 5 pestään vedellä ja trituroidaan metanolilla, Sp. 219-221°. Uudelleenkiteytys etikkahappo-etyyliesteristä tuottaa β-okso-α-(2,4-dikloorifenyylikarbamoyyli)-β-(2-pyrrolyyli)-propionitriilin, Sp. 222-223°.

Esimerkki 8: 10 Seosta, jossa on 1,1 g β-okso-α-etoksikarbonyyli-β-(2-pyrrolyyli)-propionitriiliä, 1,5 g 4-fluorianiliiniä ja 60 ml ksyleeniä, keitetään 4,5 tuntia palautusjäähdyttäen. Seoksen annetaan seistä ja jäähtyä yön yli, se suodatetaan, liuos haihdutetaan ja tuote puhdistetaan. Saadaan esimerkin 15 5 mukainen β-okso-a-(4-fluorifenyylikarbamoyyli)-β-(2- pyrrolyyli)-propionitriili.

Lähtöaine valmistetaan seuraavasti: a) Liuosta, jossa on 2,22 g 2-pyrrolikarboksyylihappoa, 8,4 ml vedetöntä trietyyliamiinia ja 2,1 ml syaanietikka-20 happo-etyyliesteriä riittävässä määrässä dimetyyliforma- midia, sekoitetaan, käsitellään huoneenlämpötilassa 2,9 g:11a dietyyli-fosforosyanidaattia ja annetaan seistä 1,3 tuntia. Liuos jäähdytetään jäähauteessa, käsitellään 50 ml:11a vettä, suodatetaan ja tehdään happameksi 6-normaa-25 lisella kloorivetyhapolla. Saatu sakka erotetaan, pestään vedellä, kuivataan ja kiteytetään uudelleen eetteristä. Saadaan 8-okso-a-etoksikarbonyyli-3-(2-pyrrolyyli)-propionitriili, Sp. 138-139°.

23 73465 b) 2-pyrroloyyliasetonitriili käsitellään trietyyliamiinin läsnäollessa eteeniglykoli-dimetyylieetterissä kloorimuura-haishappoetyyliesterillä 50°C:ssa yön yli ja tuote puhdistetaan. Saadaan 8-okso-a-etoksikarbonyyli-B-(2-pyrrolyyli)-propionitriili.

Esimerkki 9:

Edellä olevissa esimerkeissä esitettyjen menetelmien mukaisesti voidaan valmistaa myös seuraavat kaavan I mukaiset yhdisteet: N:Ο Εχ, 1*2 1*3/ R4 9/1 H 4-metoksi 9/3 H 4-hydroksi 9/5 3,5-dimetyyli 2,4-difluori 9/6 3,5-dimetyyli-4-karboetoksi 4-kloori 9/7 H 4-triluorimetyyli 9/8_H_4-metyyli_

Esimerkkien 9/5 ja 9/6 pyrroli-lähtöaineet on esitetty julkaisuissa Ber. 113 (1980), Chem. Abstr. 29, 2164 tai vast. Ber. 55, 2390 (1922).

Esimerkki 10: Käsittelemällä B-okso-a-(2-fenyylikarbamoyyli)-8-(2-pyrro- 24 78465 lyyli)-propionitriili ekvivalenttisella määrällä konsentroitua vesipitoista tai alkoholista natrium-, kalium- tai kalsium-hydroksidin tai -etoksidin liuosta ja haihduttamalla kuivaksi saadaan kaavan Ia tautomeerisen muodon vastaava 5 yhdisteen natrium-, kalium- tai kalsiumsuola, jossa kaavassa Py merkitsee 2-pyrrolyyliä, Ph on fenyyli ja R merkitsee vetyä.

Vastaavalla tavalla valmistetaan ekvivalenttisilla määrillä trietyyliamiinia tai tri-(hydroksietyyli)-amiinia trietyyli-10 ammonium- ja tris-(hydroksietyyli)-ammoniumsuola.

Esimerkki 11: 500 ml:aan eetteristä diatsometaania (joka on valmistettu lähtemällä 10,3 g:sta N-nitroso-N-metyylivirtsa-ainetta 35 ml:n kanssa 45%:sta vesipitoista kaliumhydroksidiliuosta 15 ja kuivattu kaliumhydroksidi-tablettien päällä) lisätään 3,9 g 3-okso-a-(fenyylikarbamoyyli)-3-(2-pyrrolyyli)-pro-pionitriiliä. Typen kehityksen loputtua liuos suodatetaan ja haihdutetaan. Puhdistuksen jälkeen saadaan vastaava metyyli-enolieetteri, s.o. β-metoksi-a-(fenyylikarbamoyyli)-20 3“(2-pyrrolyyli)-akryylinitriili.

Esimerkki 12:

Liuokseen, jossa on 1,6 g syaaniasetanilidia 10 ml:ssa dimetyyliformamidia, lisätään 3,4 g kalium-tert.-butoksidia. Sekoitettu ja jäähdytetty suspensio käsitellään 1,1 g:llä 25 pyrroli-2-karboksyylihappoa 6 ml:ssa dimetyyliformamidia ja 1,4 ml:ssa dietyyli-fosforosyanidaattia (DEPC). Syvän-punaista liuosta pidetään suljetussa astiassa puoli tuntia. Sitten reaktioseos käsitellään 80 ml:11a jääkylmää vettä, suodatetaan reagoimattoman syaaniasetanilidin poistamiseksi 30 ja tehdään happameksi 6-normaalisella kloorivetyhapolla.

25 78 465

Saatu sakka erotetaan, pestään vedellä ja kuivataan. Raaka tuote liuotetaan etikkahappoetyyliesteriin, liuos suodatetaan ja haihdutetaan kuivaksi. Saatu tuote kiteytetään uudelleen etanoli-eetteristä. Saadaan 6-okso-a-(fenyylikarbamoyy-li)-6-(2-pyrrolyyli)-propionitriili. Tuote on identtinen esimerkin 1 mukaisen tuotteen kanssa.

Esimerkki 13:

Suoja tavanomaisessa adjuvantti-artriitti-testissä, joka suoritetaan olennaisesti julkaisun Proc.Soc.Exp.Biol.Med. 137, 506 (1971) mukaisesti, on seuraava:

Esimerkki_% - muutos verrattuna kontrolliin 1 - 47 2 - 58 3 - 55 4 - 59 5 - 59 7_- 42_

Esimerkki 14;

Analgeettinen (antinosiseptiivinen) vaikutus testataan fe-nyyli-p-bentsokinonilla indisoidussa Writhing-syndroomassa (Hendershot ja Forsaith: J.Pharmacol.Exp.Therap. 125, 237 (1959)). Tätä menetelmää muunnettiin seuraavasti:

Hiirille, jotka olivat paastoneet yön yli, annetaan vaikuttavaa ainetta, joka on liuotettu 0,75%:seen metyyliselluloo-saan, 1-50 mg/kg:n annoksina p.o. 55 minuuttia Writhing-synd-rooman induktion jälkeen. Writhing-syndrooma indusoidaan i.g. injektiolla, joka sisältää 0,25 ml fenyyli—p-bentsokinonin (0,03%) tragantissa (0,4%) olevaa suspensiota.

5 minuuttia tämän jälkeen alkaa Writhing-indusoitujen ärsy-tysliikkeiden laskeminen tarkkailussa 10 minuutin jaksossa.

Claims (4)

1. 26 78465 Testatun yhdisteen antinosiseptiivinen EDgg-arvo on annos, joka vähentää indusoitujen ärsytysliikkeiden tiheyttä 50%:iin verrattuna kontrolliin. Menetelmä terapeuttisesti vaikuttavien, kaavan I mukaisten Y i. A, H β-okso-a-karbamoyylipyrrolipropionitriilien tai niiden tau-tomeeristen muotojen valmistamiseksi, jossa kaavassa kumpikin symboleista R1 ja R2 on vety, C1-C4-alkyyli tai Cj-C^-karbalkoksi, kumpikin symboleista R3 ja R4 on vety, <^-04-alkyyli, C1-C4-alkoksi, hydroksi, halogeeni tai trifluorime-tyyli, niiden suolojen, niiden alempialkyyli-enolieetterei-den tai alempialkanoyyli-enoliestereiden valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) kondensoidaan kaavan III ja IV » * R Rl-| jj R2 (III) ja y-\-N=c.O (IV) Y\ / ·*· C0CH2“CN R4 mukaiset yhdisteet, joissa kaavoissa R1# R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä, tai 27 78465 b) kaavan VI mukainen yhdiste “Hf f— R2 (VI) ^ nco^h-cooh tai sen reaktiokykyinen funktionaalinen johdannainen konden-soidaan kaavan vil mukaisen amiinin kanssa /''s/*3 H-N-H-·' *· (VII) *4 jolloin R^, R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä, tai c) kaavan IX mukainen yhdiste “Hl II· R2 <“> • · ^ ncooh tai sen reaktiokykyinen funktionaalinen johdannainen konden-soidaan kaavan X /-y*3 CH2—CO—NH~·^ *· (X) 6N *= R/ 4 mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin R1# R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä, ja saatu kaavan I mukainen yhdiste muutetaan haluttaessa toiseksi keksinnön mukaiseksi yhdisteeksi, ja/tai saatu enoli muutetaan haluttaessa enoli-alempialkyylieetteriksi tai enoli-alempialkanoyyliesteriksi, ja/tai saatu enoli muutetaan haluttaessa emäksellä suolaksi tai saatu enolisuola vapaaksi enoliksi tai emäksellä toiseksi suolaksi, ja/tai saa- 28 78465 tu isomeeriseos erotetaan haluttaessa yksittäisiksi isomeereiksi.
2. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan B-okso-a-(fenyylikarbamoyyli)-$-(2-pyrrolyyli)-propionitriili tai sen suola.
3. 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan S-okso-«-(4-kloorifenyyli-karbamoyyli)-B-(2-pyrrolyyli)-propionitriili tai sen suola.
4. 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan 0-okso-a-(4-fluorifenyyli-karbamoyyli)-B-(2-pyrrolyyli)-propionitriili tai sen suola. Förfarande för framställning av terapeutiskt verkande B-oxo-α-karbamoylpyrrolproplonitriler med formeln I Rlt tXo-CH-COHH-'i (I) Y i, H eller deras tautomeriska former, i vilken formel vardera av symbolerna E1 och R2 är väte, C1-C4-alkyl eller Cj^-^-karb-alkoxi, vardera av symbolerna R3 och R4 är väte, ¢^-04-81-kyl, C1-C4-alkoxi, hydroxi, halogen eller trifluormetyl, deras salter, deras lägalkyl-enoletrar eller lägalkanoyl-enol-estrar, kännetecknat därav, att 29 7346 5 a) föreningarna med formlerna III och IV •-· R- RlHi I R2 (III) och -¾ WC-o (IV) \/*\ x ·*· Y COCH2-CN r4 i vilka formler R1# R2, R3 och R4 betecknar detsamma som ovan, kondenseras, eller b) en förening med formeln VI ri—if IK (vi> • ♦ ^ CO^H-COOH eller ett reaktionsdugligt funktionellt derivat därav kondenseras med en amin med formeln VII H-N-H-·' *· (VII) \ varvld R-l, R2, R3 och R4 betecknar detsamma som ovan, eller c) en förening med formeln IX •-· R1—If f“ R2 (IX) • · Y XCOOH eller ett reaktionsdugligt funktionellt derivat därav kondenseras med en förening med formeln X