FI121073B - Menetelmä solujen suojaamiseksi - Google Patents
Menetelmä solujen suojaamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI121073B FI121073B FI20085973A FI20085973A FI121073B FI 121073 B FI121073 B FI 121073B FI 20085973 A FI20085973 A FI 20085973A FI 20085973 A FI20085973 A FI 20085973A FI 121073 B FI121073 B FI 121073B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- cells
- complement
- factor
- stem cells
- cell
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
- A61L27/3834—Cells able to produce different cell types, e.g. hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, marrow stromal cells, embryonic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/50—Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
- A61K9/0024—Solid, semi-solid or solidifying implants, which are implanted or injected in body tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/505—Stabilizers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Zoology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Botany (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Menetelmä solujen suojelemiseksi
Keksinnön ala
Esillä oleva keksintö liittyy menetelmään kliinisessä siirrännäisessä olevien kantasolujen suojelemiseksi komplementtijärjestelmän aikaansaamalta 5 tuhoutumiselta lisäämällä siirrännäiseen ainakin yksi komplementtia estävä tekijä.
Esillä oleva keksintö liittyy myös komplementtia estävän tekijän käyttämiseen kliinisessä siirrännäisessä olevien kantasolujen suojelemiseksi komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta. Lisäksi esillä oleva 10 keksintö liittyy koostumukseen tai seokseen, joka käsittää kantasoluja ja ainakin yhden komplementtia estävän tekijän.
Keksinnön tausta
Hematopoieettisten kantasolujen (HSC:iden) siirtoa käytetään eräitten hematologisten ja ei-hematologisten pahanlaatuisten ja ei-pahanlaatuisten 15 sairauksien hoitamisessa. Luuydintä ja napanuoraverta on tutkittu, ja myös käytetty ihmisten hoitamisessa, kantasolun lähteinä. Valitettavasti HSC-siirron hyödyntämiselle ja onnistumiselle on useita esteitä, esimerkiksi käänteishylki-minen ja siirrännäisen hylkiminen.
Rajoittava tekijä erityisesti napanuoraveren siirrossa on siirrännäi-20 sessä olevien tumallisten solujen määrä. Siirrännäisessä olevien tumallisten solujen määrän erilaisia lisäämistapoja on tutkittu, mukaan lukien solujen ex vivo -ekspansiota. Moniyksikkösiirtoa ja napanuoraveren siirtoa yhdessä me-senkymaalisten kantasolujen infuusion kanssa on tutkittu siirron lopputuloksen parantamiseksi (Grewal, S. S. et ai., Blood, 1.6.2003, Voi. 101, nro 11, sivut 25 4233-4244). Lisäksi on tunnettua, että napanuoraveren solut, esimerkiksi CD34-negatiiviset solut, jotka eivät ole kantasoluja, ovat olennaisia onnistuneelle solujen itämiselle.
Lisäksi selviytyäkseen ihmisen kehossa solujen on vastustettava synnynnäistä ja suuressa määrin myös adaptiivista immuunivastetta. Soluilla 30 on oltava mekanismit käsitellä komplementtijärjestelmää, synnynnäistä puolustusmekanismia, joka kykenee opsonisoimaan kohdesoluja fagosytoosia varten tai tappamaan ne suoraan membraaneja tuhoavalla kompleksilla (MAC:llä). Komplementtijärjestelmä voidaan aktivoida esimerkiksi vasta-aine-antigeeni-komplekseilla tai tietyillä vierailla rakenteilla. Esimerkiksi ei-humaani sialihap-35 po, N-glykolyylineuramiinihappo (Neu5Gc), ilmentyessään kantasolussa johtaa 2 immuunivasteeseen, jota välittävät useimmissa ihmisissä läsnä olevat vasta-aineet Neu5Gc-rakennetta kohtaan.
Sialihapot ovat happamien sakkaridien perhe, jota esiintyy kaikkien solutyyppien pinnoilla ja useissa eritetyissä proteiineissa. N-asetyylineuramiini-5 happo (Neu5Ac) ja N-glykolyylineuramiinihappo (Neu5Gc) ovat kaksi yleisintä nisäkkään sialihappoa. Ihmiset eivät kykene tuottamaan Neu5Gc:tä NeuAc:stä, joka on sen metabolinen prekursori. Ihmissolut kykenevät kuitenkin ottamaan Neu5Gc:tä elatusaineista, jotka sisältävät eläimistä saatavaa materiaalia, ja siten myös Neu5Gc:tä. Useimmilla terveillä ihmisillä on Neu5Gc:lle spesifisiä 10 vasta-aineita.
Yleensä solukalvojen säätelymolekyylit suojelevat ihmissoluja komplementtijärjestelmän hyökkäyksiltä. Niitä ovat esimerkiksi C3b-reseptori (CR1; CD35), hajoamista nopeuttava tekijä (DAF; CD55), membraanin kofaktoriprote-iini (MCP; CD64) ja protektiini (CD59). Lisäksi plasmassa on liukenevia prote-15 iineja, jotka estävät liiallisen komplementtiaktivaation nestefaasissa. Näitä ovat esimerkiksi C1-inhibiittori (C1INH), tekijä H (FH), C4b:tä sitova proteiini (C4bp), vitronektiini (S-proteiini) ja klusteriini (SP40,40; apo J) [Springer Semin Immu-nopathol 15: 369-396 (1994)].
Nyt on havaittu, että ainakin yhden komplementtia estävän tekijän 20 käyttö suojelee kantasoluja ja/tai napanuoraverestä saatavia soluja komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta.
Lisäksi nyt on havaittu, että ainakin yhden komplementtia estävän tekijän lisääminen siirrännäiseen suojelee kliinisessä siirrännäisessä olevia kantasoluja vastaanottajan komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhou-25 tumiselta.
Keksinnön lyhyt kuvaus
Esillä oleva keksintö liittyy menetelmään solujen suojelemiseksi komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta käyttämällä ainakin yhtä komplementtia estävää tekijää. Erityisesti esillä oleva keksintö liittyy me-30 netelmään kantasolujen ja napanuoraverestä saatavien solujen suojelemiseksi komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta käyttämällä ainakin yhtä komplementtia estävää tekijää.
Esillä olevan keksinnön tavoitteena on siten saada aikaan menetelmä kantasolujen ja napanuoraverestä saatavien solujen suojelemiseksi komp-35 lementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta käyttämällä ainakin yhtä komplementtia estävää tekijää. Esillä olevan keksinnön eräänä toisena tavoit- 3 teenä on saada aikaan menetelmä kliinisessä siirrännäisessä olevien kan-tasolujen suojelemiseksi vastaanottajan komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta lisäämällä siirrännäiseen ainakin yksi komplementtia estävä tekijä. Vielä eräs esillä olevan keksinnön tavoite liittyy komplementtia es-5 tävän tekijän käyttämiseen suojelemaan kliinisessä siirrännäisessä olevia kan-tasoluja komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta. Vielä eräs esillä olevan keksinnön tavoite liittyy koostumukseen tai seokseen, joka käsittää kantasoluja ja ainakin yhden komplementtia estävän tekijän. Vielä eräs esillä olevan keksinnön tavoite on saada aikaan menetelmä kantasolujen suo-10 jelemiseksi komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta, kun komplementtijärjestelmä aktivoituu solunpinnalla olevalla ei-humaanilla Neu5Gc-rakenteella, käyttämällä ainakin yhtä komplementtia estävää tekijää.
Keksinnön tavoitteet saavutetaan menetelmällä, käytöllä ja koostumuksella, joiden ominaisuudet on kuvattu itsenäisissä patenttivaatimuksissa. 15 Keksinnön edulliset sovellusmuodot on esitetty epäitsenäisissä patenttivaatimuksissa.
Piirustusten lyhyt kuvaus
Kuvio 1 esittää esimerkin 1 tulokset.
Kuvio 2 esittää esimerkin 2 tulokset.
20 Kuvio 3 esittää esimerkin 3 tulokset.
Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus
Hematopoieettisten kantasolujen (HSC:n) siirto on käyttökelpoinen hoito erityisesti hematologisissa pahanlaatuisissa sairauksissa, kuten leukemioissa. Sitä käytetään myös joidenkin hematologisten ei-pahanlaatuisten ja ei-25 hematologisten pahanlaatuisten ja ei-pahanlaatuisten sairauksien hoidossa. Siirron onnistuminen riippuu useasta tekijästä, joista yksi on solujen määrä siirrännäisessä.
Istukasta ja/tai napanuorasta saatava veri (jota kutsutaan esillä olevassa keksinnössä napanuoravereksi) sisältää runsaasti hematopoieettisia 30 kantasoluja. Rajoittava tekijä napanuoraveren siirrossa on siirrännäisen pieni koko ja/tai tilavuus, toisin sanoen tumallisten solujen pieni määrä siirrännäisessä. Tästä esteestä johtuen napanuoraveren siirtoa on käytetty lähinnä lasten, erityisesti pienten lasten, hoidossa.
4
Jotta toimenpide onnistuisi tai olisi optimaalinen, HSC-siirron siirrännäisen on sisällettävä riittävä määrä soluja vastaanottajan kokoon nähden. Tällä hetkellä suositellaan määrää, joka on 1 x 106 tumallisia soluja vastaanottajan painokiloa kohti.
5 Immuunijärjestelmällä on keskeinen asema siirron onnistumisessa, erityisesti silloin, kun HLA-identtisiä sisarusluovuttajia ei ole. Vastaanottajan immuunijärjestelmä voi tunnistaa siirretyt solut vieraiksi, jolloin on seurauksena hoitosolujen hylkiminen. Se, että siirrännäisessä olevat immuunisolut tunnistavat vastaanottajan solut immunologisesti vieraiksi on keskeinen este kan-10 tasolusiirrossa. Tästä on seurauksena käänteishylkiminen. Siirrettyjen solujen tuhoutumisen ajatellaan yleensä johtuvan soluvälitteisestä immuniteetistä. Mutta kuten esillä oleva keksintö osoittaa, myös komplementtijärjestelmä voi tuhota siirrännäisessä olevat solut. Esimerkiksi hematopoieettisissa kantasoluissa on pintarakenteita, joiden katsotaan altistavan ne immuunijärjestelmän hyök-15 käykselle tunnistuksen ja komplementtijärjestelmän suoran aktivaation kautta.
Eräässä sovellusmuodossa keksintö kohdistuu menetelmään, jolla estetään komplementtivälitteinen solun tappaminen, joka johtuu vastaanottajan vasta-aineista, jotka tunnistavat siirrännäisessä olevien kantasolujen Neu5Gc-glykorakenteen ja sitoutuvat siihen. Lähdeaineistosta tiedetään, että ihmisen 20 kantasolut ottavat selektiivisesti ei-humaanin Neu5Gc:n rakenteen esimerkiksi soluviljelmästä tai syödystä ruoasta. Tiedetään myös, että monet ihmiset ovat kehittäneet vasta-aineita rakenteelle. Tästä syystä kantasolusiirrossa nämä vasta-aineet voivat sitoutua siirrännäisessä olevien kantasolujen Neu5Gc-rakenteisiin ja, kuten muut kohteisiinsa sitoutuneet vasta-aineet, ne voivat akti-25 voida komplementtijärjestelmän. Näin ollen immuunijärjestelmä tuhoaa suuren osan siirrännäisen soluista ennen kuin solut siirtyvät niille tarkoitettuun paikkaan kehossa ja alkavat kasvaa.
Hematopoieettisia kantasoluja (HSC:itä), joilla on kyky muodostaa useita solutyyppejä ja uusiutua, käytetään nykyisin joidenkin hematologisten ja 30 ei-hematologisten tautien hoitamisessa. HSC:itä voidaan saada esimerkiksi luuytimestä ja napanuoraverestä. Mesenkymaalisilla kantasoluilla (MSC:illä) on mahdollisuus erilaistua eri solulinjoihin, ja niitä voidaan kasvattaa viljelyolosuhteissa ilman, että ne menettävät monikykyisyytensä. Tästä syystä ne tarjoavat arvokkaan lähteen soluhoidon ja kudostekniikan käyttötarkoituksiin. MSC:itä 35 voidaan saada esimerkiksi luuytimestä.
5
Nyt on havaittu, että mesenkymaaliset kantasolut ja napanuorave-restä saadut mononukleaariset solut, mukaan lukien CD34-positiiviset hema-topoieettiset kantasolut ja CD34-negatiiviset kehittyneemmät solut, ovat alttiita komplementtivälitteiselle tuholle. Tämä komplementtiherkkyys voi johtua moni-5 en tärkeiden komplementti-inhibiittoreiden, esimerkiksi sellaisten kuin tekijä H (FH), komplementtireseptori 1 (CR1, CD35), membraanin kofaktoriproteiini (MCP, CD46) ja hajoamista nopeuttava tekijä (DAF), vähyydestä näiden solujen pinnalla. Nyt on havaittu, että komplementtivälitteistä tuhoa voidaan merkittävästi vähentää komplementti-inhibiittoreilla, kuten FH:llä, CR1:llä, MCP:llä ja 10 DAF:lla.
Siten eräässä esillä olevan keksinnön sovellusmuodossa toteutetaan menetelmä kantasolun ja/tai napanuoraverestä saadun solun suojelemiseksi komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta käyttämällä ainakin yhtä komplementtia estävää tekijää. Eräässä toisessa esillä olevan kek-15 sinnön sovellusmuodossa toteutetaan menetelmä kantasolun ja/tai napanuora-verestä saadun solun suojelemiseksi komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta, kun komplementtijärjestelmä aktivoituu solun pinnalla olevalla ei-humaanilla Neu5Gc-rakenteella, käyttämällä ainakin yhtä komplementtia estävää tekijää.
20 Vielä eräässä esillä olevan keksinnön sovellusmuodossa toteute taan menetelmä kliinisessä siirrännäisessä olevien kantasolujen suojelemiseksi komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta lisäämällä siirrännäiseen ainakin yksi komplementtia estävä tekijä. Vielä eräässä esillä olevan keksinnön sovellusmuodossa toteutetaan menetelmä kliinisessä siirrännäises-25 sä olevien kantasolujen suojelemiseksi komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta, jolloin komplementtijärjestelmä aktivoituu solun pinnalla olevalla ei-humaanilla Neu5Gc-rakenteella, lisäämällä siirrännäiseen ainakin yksi komplementtia estävä tekijä.
Komplementti-inhibiittorin tehollinen määrä tai annos riippuu inhibiit-30 torista itsestään ja esimerkiksi kyseessä olevista soluista. Eräässä keksinnön sovellusmuodossa inhibiittoria käytetään pitoisuusmääränä 50-1000 pg/ml, erityisesti 100-750 pg/ml. Eräässä toisessa keksinnön sovellusmuodossa käytetään tekijää Fl pitoisuusmääränä 50-1000 pg/ml, erityisesti 100-750 pg/ml. Toinen tapa esittää komplementti-inhibiittorin tehollinen määrä tai annos on 35 määrittää inhibiittorin määrä siirrännäisessä olevien solujen määrää kohti.
6
Esillä oleva keksintö tarjoaa siten uuden tavan suojella kantasoluja, erityisesti mesenkymaalisia ja hematopoieettisia kantasoluja ja napanuorave-restä saatuja mononukleaarisia soluja komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta. Esillä oleva keksintö kuvaa myös tavan parantaa kan-5 tasolusiirron tulosta, erityisesti tavan lisätä solujen itämistä. Lisäksi se tarjoaa tavan käyttää pienempää solumäärää tai siirrännäistä siirrossa.
Esillä olevaa keksintöä voidaan hyödyntää mahdollistamaan na-panuoraveren siirto aikuisille potilaille ja/tai potilaille, joiden paino ylittää sen, mitä tällä hetkellä hyväksytty tumallisten solujen kriittinen määrä siirrännäises-10 sä per vastaanottajan paino sallii.
Lisäksi esillä olevaa keksintöä voidaan hyödyntää mahdollistamaan pienempien siirrännäisten käyttö, jolloin siirrännäiset sisältävät vähemmän mahdollisesti haitallisia T-lymfosyyttejä, jotka aiheuttavat käänteishylkimistä ja/tai ovat vastuussa siitä, kuin siirrännäiset, joiden tilavuus on laskettu sen 15 mukaan, mikä on siirrännäisessä olevien tumallisten solujen määrä per vastaanottajan paino.
Alan ammattilaiselle on ilmeistä, että tekniikan kehittyessä keksinnöllinen ajatus voidaan toteuttaa eri tavoin. Keksintöä ja sen sovellusmuotoja ei ole rajoitettu edellä kuvattuihin esimerkkeihin vaan ne voivat vaihdella pa-20 tenttivaatimusten puitteissa.
Seuraavat esimerkit havainnollistavat esillä olevaa keksintöä. Esimerkkien ei pidä katsoa rajoittavan patenttivaatimuksia millään tavalla.
ESIMERKKI 1 Materiaalit ja menetelmät 25 Solut: Ficoll-Hypaquen tiheysgradienttia käytettiin eristämään mo- nonukleaariset solut perifeerisestä verestä ja napanuoraverestä. Luuytimestä saatuja mesenkymaalisia kantasoluja kasvatettiin MEAM:ssä (Minimum Essential Alpha-Mediumissa), seokseen lisättiin 20 mM HEPES:iä, 10 % FCS:ää, 1 x penisilliini-streptomysiiniä ja 2mM L-glutamiinia, ja sitä kasvatettiin petrimaljas-30 sa tiheydessä 2000-3000/cm2. Soluja jatkoviljeltiin kunnes ne olivat täysin kon-fluentteja.
Lyysimääritys: Solut leimattiin sekoittamalla 2 x 106 soluja ja 100 pCi 51Cr:a 1 ml:ssa RPMhtä kahden tunnin ajan 37 °C:ssa. Tämän jälkeen solut pestiin kahdesti RPMLIlä, inkuboitiin vielä 30 minuutin ajan löyhästi sitoutu-35 neen 51Cr:n poistamiseksi ja pestiin kahdesti. 51Cr-leimattujen solujen kaksois- 7 alikvootit (105 soluja / 50 μΙ) käsiteltiin CD59:n (YTH53.1:n) monoklonaalisella vasta-aineella 20 minuutin ajan 22 °C:ssa ja normaalin ihmisseerumin (NHS:n) kanssa 30 minuutin ajan 37 °C:ssa kokonaismäärässä 200 μΙ. NHS laimennettiin 1:4 ja YTH53.1:tä käytettiin pitoisuudessa 6-200 pg/ml. Linkouksen (525 x 5 g 5 minuutin ajan) jälkeen 50 % supernatantista poistettiin huolellisesti ja laskettiin gammalaskimessa. Solun lyysi määritettiin 51Cr:n vapautumisen prosenttimääränä.
Tulokset
Luuytimestä saadut mesenkymaaliset kantasolut ja napanuorave-10 restä saadut mononukleaariset solut (mukaan lukien CD34-positiiviset hema-topoieettiset kantasolut) olivat herkkiä komplementtivälitteiselle tuhoutumiselle niin, että keskimääräinen lyysiprosenttiluku oli yli 50 % ja vastaavasti 25%. Perifeerisestä verestä saadut mononukleaariset solut, jotka toimivat kontrol-lisolustona, olivat resistenssejä komplementtivälitteiselle lyysille niin, että kes-15 kimääräinen lyysiprosenttiluku oli 2 %. Tulokset on esitetty kuviossa 1.
ESIMERKKI 2 Materiaalit ja menetelmät
Virtaussytometrinen analyysi: Solut valmistettiin kuten esimerkissä 1. Virtaussytometrisessä analyysissä solut pestiin kahdesti ja suspendoitiin 20 PBS:ään lisättynä 1 %:lla BSA:ta. Kutakin värjäystä kohti 5 χ 105 solua inkuboi-tiin +22 °C:ssa 20 minuutin ajan käyttämällä 5 pg/ml sopivaa primääristä mo-noklonaalista vasta-ainetta komplementti-inhibiittoreiden tekijä H (FH), komp-lementtireseptori 1 (CR1)ja membraanin kofaktoriproteiini (MCP) vastaan. Kun solut oli pesty kolme kertaa, niitä inkuboitiin vielä 30 minuutin ajan jäässä 25 ALEXA488-konjugoidun vuohen anti-hiiri-F(ab’)2:n kanssa. Tämän jälkeen solut pestiin jälleen kolme kertaa, kiinnitettiin 1-prosenttiseen paraformaldehydiin ja analysoitiin Becton Dickinsonin FACScan 440 -virtaussytometrissä. Tiedot analysoitiin käyttämällä ProCOUNT™-ohjelmistoa tai Windowsin usean asiakirjan käyttöliittymää virtaussytometriaa varten (WinMDI, versio 2.8).
30 Tulokset
Komplementti-inhibiittorin tekijä FI (FH) taso oli huomattavasti alentunut luuytimestä saaduissa mesenkymaalisissa kantasoluissa ja napanuora-verestä saaduissa mononukleaarisissa soluissa (mukaan lukien CD34-posi-tiiviset hematopoieettiset kantasolut). Komplementti-inhibiittorin komplementti- 8 reseptori 1 (CR1) ekspressio oli erittäin alhaista luuytimestä saaduissa mesen-kymaalisissa kantasoluissa. Komplementti-inhibiittorin membraanin kofaktori-proteiini (MCP) taso oli alhaisempi luuytimestä saaduissa mononukleaarisissa soluissa kuin perifeerisestä verestä saaduissa mononukleaarisissa soluissa, 5 jotka toimivat kontrollisolustona. Tulokset on esitetty kuviossa 2.
ESIMERKKI 3 Materiaalit ja menetelmät
Solut: Ficoll-Hypaquen tiheysgradienttia käytettiin eristämään mo-nonukleaariset solut napanuoraverestä. Napanuoraverestä saadut CD-34-10 positiiviset solut lajiteltiin mononukleaaristen solujen fraktiosta anti-CD34-mikrohelmien kanssa magneettisen affiniteetin solulajittelun avulla, ja kehittyneitä leukosyyttejä edustavat CD34-negatiiviset solut kerättiin kontrollia varten.
Virtaussytometrinen analyysi: Virtaussytometrisessä analyysissä solut pestiin ja suspendoitiin PBS:ään lisättynä 1 %:lla BSA:ta. Kutakin värjäystä 15 kohti 105 solua inkuboitiin 15 minuutin ajan huoneenlämpötilassa käyttämällä 5 pg/ml komplementti-inhibiittoreiden membraanin kofaktoriproteiini (MCP, CD46), hajoamista nopeuttava tekijä (DAFm CD55) ja tekijä H (FH) sopivaa primääristä monoklonaalista vasta-ainetta. Anti-FH-vasta-aine konjugoitiin suoraan ALEXA488-fluorokromilla. Anti-MCP-ja anti-DAF-vasta-aineet biotinyloitiin, 20 ja niitä käytettiin yhdessä ALEXA488-avidinin sekundaarisen vasta-aineen kanssa lisäinkubaatiossa, joka tapahtui huoneenlämpötilassa 15 minuutin ajan. Tämän jälkeen solut pestiin ja analysoitiin Becton Dickinson FACScan -virtaus-sytometrissä. Tiedot analysoitiin käyttämällä CelIQuest Pro™ -ohjelmistoa.
Tulokset 25 Napanuoraverestä saaduissa CD34-positiivisissa ja CD-34-negatii- visissa soluissa komplementti-inhibittoreiden membraanin kofaktoriproteiini (MCP) ja tekijä H (FH) tasot olivat merkittävästi alentuneet. Lisäksi komplementti-inhibiittorin hajoamista nopeuttava tekijä (DAF) ekspressio oli selvästi alhaisempi napanuoraverestä saaduissa CD34-positiivisissa soluissa kuin peri-30 feerisestä verestä saaduissa mononukleaarisissa soluissa tai napanuoraverestä saaduissa CD34-negatiivisissa soluissa.
9 ESIMERKKI 4 Materiaalit ja menetelmät
Lyysimääritys: Solut valmistettiin kuten esimerkissä 1. Solujen leimaus tehtiin kuten esimerkissä 1. Tekijä H:n vaikutusta komplementtivälittei-5 seen solujen lyysiin tutkittiin käsittelemällä soluja komplementtia aktivoivalla ja CD59:ää neutraloivalla vasta-aineella (YTH53.1 :llä) yksin tai tekijä H:n läsnä ollessa (125-500 pg/ml). Linkouksen (525 x g 5 minuutin ajan) jälkeen 50% supernatantista poistettiin huolellisesti ja laskettiin gammalaskimessa. Solun lyysi määritettiin 51Cr:n ominaisvapautumisen prosenttimääränä.
10 Tulokset
Luuytimestä saatujen mesenkymaalisten kantasolujen komplement-tivälitteinen lyysi väheni kun komplementti-inhibiittori tekijä H lisättiin. Tulokset on esitetty taulukossa 1.
Taulukko 1 15 Luuytimestä saatujen mesenkymaalisten kantasolujen lyysiherkkyys ilman tekijä H:ta tai sen kanssa
Tekijä H (μπ/ιτιΙ) Lyysi% ilman FH:ta Lyysi% FH:n kanssa Muutos lyysiherkkyydessä 125__84%__80%__-5%_ 250__70%__52%__-26 %_ 500 70%_ 60%__-14 %_ ESIMERKKI 5 Materiaalit ja menetelmät 20 Lyysimääritys: Solut valmistettiin kuten esimerkissä 3. Solujen lei maus tehtiin kuten esimerkissä 1. Tekijä H:n vaikutusta solujen komplementti-välitteiseen lyysiin tutkittiin käsittelemällä soluja komplementtia aktivoivalla ja CD59:ää neutraloivalla vasta-aineella (YTH53.1 :llä) yksin tai tekijä H:n läsnä ollessa (500 pg/ml). Linkouksen (525 x g 5 minuutin ajan) jälkeen 50 % super-25 natantista poistettiin huolellisesti ja laskettiin gammalaskimessa. Solun lyysi määritettiin 51Cr:n vapautumisen prosenttimääränä.
10
Tulokset
Napanuoraverestä saatujen hematopoieettisten kantasolujen, CD34-positiivisten solujen, komplementtivälitteinen lyysi vähentyi merkittävästi kun komplementti-inhibiittori tekijä H lisättiin. Lisäksi tekijä H suojeli myös 5 CD34-negatiivisia soluja tuhoutumiselta. Tulokset on esitetty taulukossa 2.
Taulukko 2
Napanuoraverestä saatujen CD34+- ja CD34-solujen lyysiherkkyys ilman tekijä H:ta tai sen kanssa
Napanuora- Näyte Lyysi% ilman Lyysi% FH:n Muutos lyysiherkkyydessä veriyksikkö___FH:ta__kanssa__ _1__CD34+__12%__0%__-100 %_ 1 __CD34-__31%__8%__-74 %_ 2 __CD34+__T7%__6%__-65 %_ 2 CD34- 64 % 23 % _-64 %_
Claims (6)
1. Menetelmä mesenkymaalisten tai hematopoieettisten kantasolu-jen tai napanuoraverestä saadun solun suojelemiseksi komplementtijärjestel- 5 män aikaansaamalta tuhoutumiselta käyttämällä ainakin yhtä komplementtia estävää tekijää, joka on valittu seuraavista: tekijä H, CR1, MCP ja DAF.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä tunnettu siitä, että kantasolut ovat kliinisessä siirrännäisessä, johon ainakin yksi komplementtia estävä tekijä lisätään.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että komplementtijärjestelmä aktivoituu solun pinnalla olevalla ei-humaanilla Neu5Gc-rakenteella.
4. Komplementtia estävän tekijän, joka on valittu seuraavista: tekijä H, CR1, MCP ja DAF, käyttö kliinisessä siirrännäisessä olevien mesenkymaa- 15 listen ja/tai hematopoieettisten kantasolujen suojelemiseksi komplementtijärjestelmän aikaansaamalta tuhoutumiselta.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että komplementtijärjestelmä aktivoituu solun pinnalla olevalla ei-humaanilla Neu5Gc-rakenteella.
6. Koostumus tai seos, joka käsittää mesenkymaalisia ja/tai hema- topoieettisia kantasoluja ja ainakin yhden komplementtia estävän tekijän, joka on valittu seuraavista: tekijä H, CR1, MCP ja DAF.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI20085973A FI121073B (fi) | 2008-10-15 | 2008-10-15 | Menetelmä solujen suojaamiseksi |
| AU2009305331A AU2009305331B2 (en) | 2008-10-15 | 2009-10-15 | Method of protecting cells |
| US13/123,818 US20110217724A1 (en) | 2008-10-15 | 2009-10-15 | Method of protecting cells |
| PCT/FI2009/050833 WO2010043772A2 (en) | 2008-10-15 | 2009-10-15 | Method of protecting cells |
| EP09759743A EP2358354A2 (en) | 2008-10-15 | 2009-10-15 | Method of protecting cells |
| CA2740762A CA2740762A1 (en) | 2008-10-15 | 2009-10-15 | Method of protecting cells |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI20085973 | 2008-10-15 | ||
| FI20085973A FI121073B (fi) | 2008-10-15 | 2008-10-15 | Menetelmä solujen suojaamiseksi |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI20085973A0 FI20085973A0 (fi) | 2008-10-15 |
| FI20085973A FI20085973A (fi) | 2010-04-16 |
| FI121073B true FI121073B (fi) | 2010-06-30 |
Family
ID=39924616
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI20085973A FI121073B (fi) | 2008-10-15 | 2008-10-15 | Menetelmä solujen suojaamiseksi |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20110217724A1 (fi) |
| EP (1) | EP2358354A2 (fi) |
| CA (1) | CA2740762A1 (fi) |
| FI (1) | FI121073B (fi) |
| WO (1) | WO2010043772A2 (fi) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014206414A1 (en) * | 2013-06-28 | 2014-12-31 | Region Syddanmark | Complement factor h for use in the treatment of bone diseases |
| US20200325449A1 (en) * | 2016-06-02 | 2020-10-15 | The Cleveland Clinic Foundation | Complement inhibition for improving cell viability |
| US20210353685A1 (en) * | 2020-05-14 | 2021-11-18 | Brain Cancer Research Institute | Augmentation of Cell Therapy Efficacy by Inhibition of Complement Activation Pathways |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5679345A (en) * | 1994-06-02 | 1997-10-21 | The Johns Hopkins University | Method for preventing complement-dependent rejection of organ or tissue transplants |
| JP2006525248A (ja) * | 2003-04-16 | 2006-11-09 | ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト | 移植片拒絶におけるｖａｖ阻害 |
| WO2007016099A2 (en) * | 2005-07-29 | 2007-02-08 | Musc Foundation For Research Development | Protection of transplanted stem cells with hmg-coa reductase inhibitors |
-
2008
- 2008-10-15 FI FI20085973A patent/FI121073B/fi not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-10-15 US US13/123,818 patent/US20110217724A1/en not_active Abandoned
- 2009-10-15 CA CA2740762A patent/CA2740762A1/en not_active Abandoned
- 2009-10-15 WO PCT/FI2009/050833 patent/WO2010043772A2/en active Application Filing
- 2009-10-15 EP EP09759743A patent/EP2358354A2/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2010043772A3 (en) | 2011-02-24 |
| US20110217724A1 (en) | 2011-09-08 |
| WO2010043772A2 (en) | 2010-04-22 |
| FI20085973A0 (fi) | 2008-10-15 |
| AU2009305331A1 (en) | 2010-04-22 |
| CA2740762A1 (en) | 2010-04-22 |
| FI20085973A (fi) | 2010-04-16 |
| EP2358354A2 (en) | 2011-08-24 |
| WO2010043772A8 (en) | 2010-06-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hellström et al. | Colony inhibition of fibroblasts from chimeric dogs mediated by the dogs' own lymphocytes and specifically abrogated by their serum | |
| Lemoli et al. | Concomitant mobilization of plasma cells and hematopoietic progenitors into peripheral blood of multiple myeloma patients: positive selection and transplantation of enriched CD34+ cells to remove circulating tumor cells | |
| Böhmig et al. | Strategies to overcome the ABO barrier in kidney transplantation | |
| Bacigalupo et al. | Immune suppression of hematopoiesis in aplastic anemia: activity of T-gamma lymphocytes. | |
| Dennert et al. | Phagocytic cells as effectors in a cell-mediated immunity system | |
| Körbling et al. | 4‐Hydroperoxyclophosphamide: a model for eliminating residual human tumour cells and T‐lymphocytes from the bone marrow graft | |
| Ide et al. | Antibody‐and complement‐independent phagocytotic and cytolytic activities of human macrophages toward porcine cells | |
| JPWO2009020201A1 (ja) | 単離された細胞集団 | |
| FI121073B (fi) | Menetelmä solujen suojaamiseksi | |
| Mitsuzawa et al. | Induced pluripotent stem cell‐derived mesenchymal stem cells prolong hind limb survival in a rat vascularized composite allotransplantation model | |
| Guo et al. | Efficacy and mechanisms underlying the effects of allogeneic umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation on acute radiation injury in tree shrews | |
| JP2000001436A (ja) | Ｎｋ細胞媒介性免疫応答の誘導方法 | |
| Rafiee et al. | A concise review on factors influencing the hematopoietic stem cell transplantation main outcomes | |
| Li et al. | Abnormalities of myeloid progenitor cells after | |
| DK2717887T3 (en) | Methods for treating or preventing graft-versus-host disease | |
| Li et al. | Blocking L‐selectin and α4‐integrin changes donor cell homing pattern and ameliorates murine acute graft versus host disease | |
| Yang et al. | CD150highTreg cells may attenuate graft versus host disease and intestinal cell apoptosis after hematopoietic stem cell transplantation | |
| US20030149011A1 (en) | Methods and reagents for extracorporeal immunomodulatory therapy | |
| Filip et al. | The peripheral chimerism of bone marrow–derived stem cells after transplantation: regeneration of gastrointestinal tissues in lethally irradiated mice | |
| Yunis et al. | Involution of the thymus dependent lymphoid system | |
| Roy et al. | Comparative activities of rabbit complements of different ages using an in-vitro marrow purging model | |
| Xu et al. | Marrow graft rejection by repeated transfusions of allogeneic donor spleen cells | |
| AU2009305331B2 (en) | Method of protecting cells | |
| EP3811952A1 (en) | Antibody capable of inducing immune tolerance produced using cell mixture having complexed state, and induced lymphocyte or cell therapeutic agent and cell therapy method each using induced lymphocyte | |
| Preti et al. | Tumor cell depletion of peripheral blood progenitor cells using positive and positive/negative selection in metastatic breast cancer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Ref document number: 121073 Country of ref document: FI |
|
| MM | Patent lapsed |