FI119745B - Menetelmä aineen fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien ennustamiseksi - Google Patents

Menetelmä aineen fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien ennustamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI119745B
FI119745B FI20065774A FI20065774A FI119745B FI 119745 B FI119745 B FI 119745B FI 20065774 A FI20065774 A FI 20065774A FI 20065774 A FI20065774 A FI 20065774A FI 119745 B FI119745 B FI 119745B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
surfactant
cmc
agent
substance
phospholipidosis
Prior art date
Application number
FI20065774A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI20065774A (fi
FI20065774A0 (sv
Inventor
Paavo Kinnunen
Juha-Matti Alakoskela
Original Assignee
Paavo Kinnunen
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Paavo Kinnunen filed Critical Paavo Kinnunen
Publication of FI20065774A0 publication Critical patent/FI20065774A0/fi
Priority to FI20065774A priority Critical patent/FI119745B/fi
Priority to EP07848189A priority patent/EP2095118B1/en
Priority to PCT/FI2007/050657 priority patent/WO2008068383A1/en
Priority to DK07848189.2T priority patent/DK2095118T3/da
Priority to ES07848189T priority patent/ES2362379T3/es
Priority to CNA2007800509429A priority patent/CN101600964A/zh
Priority to DE602007012934T priority patent/DE602007012934D1/de
Priority to AT07848189T priority patent/ATE500504T1/de
Priority to JP2009539773A priority patent/JP5148625B2/ja
Priority to US12/517,880 priority patent/US8093058B2/en
Priority to PL07848189T priority patent/PL2095118T3/pl
Publication of FI20065774A publication Critical patent/FI20065774A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI119745B publication Critical patent/FI119745B/fi

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/15—Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

MENETELMÄ AINEEN FOSFOLIPIDOOSIA AIHEUTTAVIEN OMINAISUUKSIEN ENNUSTAMISEKSI
KEKSINNÖN ALA
5
Keksintö liittyy aineiden, kuten farmaseuttisten yhdisteiden, eli lääkkeiden, tai lääkkeiden tai ruoan lisäaineiden, joihin kaikkiin jäljempänä selityksessä silloin tällöin viitataan kollektiivisesti mutta näihin rajoittumatta lääkkeinä, ADME-toks -ominaisuuksien määritykseen. Keksinnön kohteena on erityisesti menetelmä lääkkei-10 den fosfolipidogeenisten eli fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien (fosfolipidien kertyminen soluihin), so. lääkkeiden aiheuttaman fosfolipidoosin, ennustamiseksi.
Fosfolipidoosia todennäköisimmin aiheuttavat yhdisteet ovat kationisia ja amfifiilisiä ja niitä kutsutaan usein CAD:eiksi (kationiset amfifiiliset lääkkeet, cationic amphiphi-15 lie drugs). Tämänhetkinen näkemys fosfolipidoosin mekanismista on, että nämä lääkkeet muodostavat komplekseja fosfolipidien kanssa inhiboiden siten fosfolipidejä hajottavien entsyymien toimintaa, mikä johtaa fosfolipidien kertymiseen lysosomeihin sekä alentuneesta hajoamisesta että lisääntyneestä synteesistä johtuen. Tästä syystä on tarve menetelmälle, jolla arvioidaan potentiaalisesti hyödyllisten yhdisteiden lipidien 2 0 sitominen. Keksintö pyrkii arvioimaan aineiden, tyypillisesti lääkkeiden, vuorovaiku tuksia anionisten pinta-aktiivisten aineiden, edullisesti fosfolipidien, kanssa arvioimalla lisätyn aineen vaikutusta pinta-aktiivisen aineen pinta-aktiivisuusominaisuuksiin, erityisesti kriittiseen misellikonsentraatioon (critical micellar concentration, CMC).
25 KEKSINNÖN TAUSTA
On olemassa useita tekniikoita CMC:n määrittämiseksi, esim. fluoresenssimääritykset, valon sironta, ultraääniabsorptio, sähkönjohtavuuden, kontaktikulman ja pintajännityksen eli pintapaineen mittaukset. Yhdisteiden hydrofobisuus määritetään tavallisesti 3 0 mittaamalla niiden jakaantumiskerroin (log P) kaksifaasisessa oktanoli/vesi - 2 järjestelmässä. Amfifiilisyys- ja pesuaineominaisuudet on perinteisesti määritetty mittaamalla aineen vaikutus veden pintajännitykseen.
Fosfolipidoosi (PLD, phospholipidosis) on tunnettu joidenkin farmaseuttisten kompo-5 nenttien ja lääkeaineiden aiheuttama sivuvaikutus. Fosfolipidit kertyvät soluihin, esim.
keuhkoihin, munuaisiin ja maksaan. Kudokseen kertyvät suuret määrät vaarantavat sen normaalin fysiologisen toiminnan. Ongelma korostuu erityisesti, kun lääkeainetta otetaan pitkän aikaa, koska suurempia määriä fosfolipidejä voi kerääntyä soluihin. Tämä puolestaan voi johtaa krooniseen, palautumattomaan fosfolipidoosiin ja elinten häiri-10 öön. Lääketeollisuudelle tämä on vakava ja kallis ongelma, erityisesti jos se ilmenee lääkeaineen markkinoille tuonnin jälkeen, jolloin lääke on vedettävä pois markkinoilta.
Nykyään on kaksi yleistä tapaa testata, aiheuttaako lääkeaine PLD:tä. Toinen on käyttää soluviljelmiä ja menetelmää lääkeaineen soluissa aiheuttamien muutosten havait-15 semiseksi. Paitsi että tämä menetelmä on työläs, sen haittana on, että näissä määrityksissä toistettavuus on yleensä huono, erityisesti laboratorioiden välillä. Lisäksi soluviljelmät vaativat jatkuvaa huolenpitoa, ovat alttiita infektioille, kasvuolosuhteiden vaihteluille ja solulinjojen epästabiilisuuksille johtuen pidennetyssä viljelyssä tapahtuvasta geneettisestä valinnasta.
20
Toinen vaihtoehto on käyttää eläinkokeita. Molemmat edellä kuvatut menetelmät ovat kalliita, ja sen vuoksi niitä voidaan käyttää vain lääkeaineen kehitysprosessin myöhäisessä vaiheessa eikä kumpikaan sovellu laajamittaiseen uusien lääkeaineyhdisteiden seulontaan, kuten tehdään esimerkiksi johtoyhdisteiden optimoinnissa. Niinpä tarvi- 2 5 taan testi, joka osoittaa mahdolliset PLD:tä aiheuttavat ominaisuudet kehitysprosessin varhaisessa vaiheessa, koska uuden lääkeaineen kehityskustannukset nousevat eksponentiaalisesti lähestyttäessä tuotekehitysketjun loppupäätä. Tällainen testi säästäisi lääkekehityksessä sekä rahaa että aikaa, koska se mahdollistaisi potentiaalisten PLD:tä aiheuttavien yhdisteiden tunnistamisen ja mahdollisen poissulkemisen. Lisäksi tätä 3 0 tietoa voidaan käyttää myös yhdisteen kemian parantamiseen, kuten vähentämään yh- 3 disteen PLD:tä aiheuttavaa potentiaalia säätämällä sen fysikokemiallisia ominaisuuksia oikein.
KEKSINNÖN YHTEENVETO
5
Keksintö koskee menetelmää aineen fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien riskin ennustamiseksi, joka menetelmä käsittää mainitun aineen lisäämisen anioniseen pinta-aktiiviseen aineeseen, jolloin saadaan aineen ja pinta-aktiivisen aineen seos, ja mainitun aineen anionisen pinta-aktiivisen aineen kriittiseen misellikonsentraatioon 10 (CMC) aiheuttaman vaikutuksen määrittämisen määrittämällä seoksen CMC, missä seoksen CMC:n aleneminen verrattuna pinta-aktiivisen aineen CMC:hen ennen aineen lisäystä osoittaa mainitun aineen fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien riskiä.
Keksinnön mukaisesti menetelmään sisältyy toisaalta mahdollisuus verrata aineen ja 15 pinta-aktiivisen aineen muodostaman seoksen CMC:tä puhtaan pinta-aktiivisen aineen CMC:hen, jolloin CMC:n lasku verrattuna puhtaaseen pinta-aktiiviseen aineeseen osoittaa riskiä, että mainitulla aineella on fosfolipidoosia aiheuttavia ominaisuuksia. Erään suoritusmuodon mukaisesti keksintöön kuuluu myös mahdollisuus verrata aineen ja pinta-aktiivisen aineen mainitun seoksen CMC:tä toisen, aineen ja pinta- 2 0 aktiivisen aineen muodostaman seoksen, jossa on eri konsentraatio ainetta pinta- aktiivisessa aineessa, CMC:hen, jolloin aineen ja pinta-aktiivisen aineen seoksen CMC:n lasku seurauksena aineen konsentraation kasvusta seoksessa osoittaa riskiä, että mainitulla aineella on fosfolipidoosia aiheuttavia ominaisuuksia. Niinpä jos aineen konsentraatio toisessa seoksessa on vähemmän kuin mainitussa seoksessa, mainitun 25 seoksen CMC:n lasku verrattuna toisen seoksen CMC:hen osoittaa mainitun aineen omaavan fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien riskin.
Tämä jälkimmäinen mahdollisuus tarkoittaa luonnollisesti myös, että aineen ja pinta-aktiivisen aineen muodostaman seoksen CMC:n kasvu seurauksena aineen konsentraa- 3 0 tion vähentymisestä seoksessa osoittaa, että mainitulla aineella on fosfolipidoosia ai heuttavien ominaisuuksien riski.
4
Keksintö käsittää siten yleisesti vaiheen, jossa aineen konsentraatiota anionisessa pin-ta-aktiivisessa aineessa nostetaan ja määritetään mainitun aineen vaikutus anionisen pinta-aktiivisen aineen kriittiseen misellikonsentraatioon (CMC) määrittämällä aineen 5 ja pinta-aktiivisen aineen muodostaman seoksen CMC, jolloin seoksen CMC:n lasku verrattuna pinta-aktiivisen aineen CMC:hen ennen mainitun aineen konsentraation nostoa mainitussa pinta-aktiivisessa aineessa osoittaa, että mainitulla aineella on fosfo-lipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien riski.
10 Aineen konsentraation nosto käsittää aineen lisäämisen puhtaaseen pinta-aktiiviseen aineeseen, so. sellaiseen jossa ei ole ainetta, sekä aineen lisäämisen aineen ja pinta-aktiivisen aineen seokseen aineen konsentraation nostamiseksi pinta-aktiivisessa aineessa.
15 PIIRUSTUSTEN LYHYT KUVAUS
Kuva 1 esittää kaksi esimerkkiä mitatun pintapaineen π käyristä vs. konsentraation yksikötön (jaettu mol/l:lla) luonnollinen logaritmi In (c/M): puhdas DC8PS (1,2 diok-tanoyyli-sTr-glysero-3-[fosfo-L-seriini]) (□) ja gentamisiini:DC8PS=l:10 (·). Piste-2 0 viiva -suorat ja nuolet näyttävät kaavamaisesti CMC:n määrityksen periaatteen.
Kuva 2 kuvaa esimerkkejä CMC vs. lääke:lipidi -suhde - käyristä. Yhdysviivat ovat pelkästään silmän ohjaamiseksi. Symbolit ovat seuraavat: klotsapiini (), haloperidoli (o), 1-fenyylipiperatsiini (▼), kloropromatsiini (), promatsiini (o), propranololi (▼), 2 5 amiodaroni (a), gentamisiini (o), ja perheksiliini (V).
Kuva 3 esittää lääkeaine:lipidi -suhdetta, jolla saadaan puolet maksimaalisesta CMC:hen kohdistuvasta vaikutuksesta, Ri/2, vs. lääkeainedipidi -suhteella enintään 1:2 saatu minimi-CMC. Symbolit osoittavat luokittelun yhteen neljästä ryhmästä: ryhmä 1 3 0 (a) ei fosfolipidoosipotentiaalia, ryhmä 2 (®) aiheuttaa fosfolipidoosia viljellyissä so luissa mutta alhainen potentiaali fosfolipidoosin aikaansaamiseen elämissä, ryhmä 3 5 (A) tiedetään aiheuttavan fosfolipidoosia eläimissä, ja ryhmä 4 (T), aineet, jotka ovat aiheuttaneet fosfolipidoosia ihmisissä (Ploeman, J.-P. H. T. M., J. Kelder, T. Haf-mans, H. van de Sandt, J. A. van Burgsteden, P. J. M. Salemink, ja E. van Esch (2004) Use of physicochemical calculation of pKa and CLogP to predict phospholipidosis-5 inducing potential. A case study with structurally related piperazines. Eur. Toxic. Pathol.; Morelli, J. K., M. Buehrle, F. Pognan, L. R. Barone, W. Fieles, ja P. J. Ciac-cio (2006) Validation of an in vitro screen for phospholipidosis using a high-content biology platform. Cell Biol. Toxicol.) Lyhenteet ovat seuraavat: ama = amantadiini, amio = amiodaroni, amit = amitriptyliini, bus = buspironi, clomi = klomipramiini, cloz 10 = klotsapiini, clq = klorokiini, cpz = klorpromatsiini, desi = desipramiini, doxo = dok- sorubisiini, gmcn = gentamisiini, hp = haloperidoli, hyz = hydroksitsiini, imi = imipramiini, kcz = ketokonatsoli, map = maprotiliini, mia = mianseriini, nort = nor-triptyliini, 1-php = 1-fenyylipiperatsiini, phx = perheksiliini, prom = promatsiini, prop = propranololi, tcyc = tetrasykliini, ja thio = tioridatsiini.
15
KEKSINNÖN YKSITYISKOHTAINEN KUVAUS
Kun pinta-aktiivisen aineen eli surfaktantin konsentraatio liuoksessa kasvaa, sen kemiallinen potentiaali kasvaa. Yhdisteen tai aineen kemiallinen potentiaali liuoksessa (At- 2 0 kins, P. W., Physical Chemistry, 5. painos, Oxford University Press, 1997) voidaan nähdä kertoimena systeemin vapaan energian lisäykselle lisättäessä pieni määrä yhdistettä liuokseen. Jossakin konsentraatiossa systeemi saavuttaa pisteen, jossa kemiallinen potentiaali on riittävä pinta-aktiivisen aineen aggregaattien, tyypillisesti misellien, muodostumiselle, ja monomeerit, joita on ylimäärin tähän konsentraatioon nähden, 25 muodostavat aggregaatteja, tai misellejä, kun taas tämän konsentraation alapuolella aggregaatteja ei havaita. Tästä nimitys kriittinen misellikonsentraatio. Tämän pisteen jälkeen konsentraation lisänousu ei enää merkittävästi lisää monomeerien konsentraa-tiota liuoksessa vaan johtaa ainoastaan misellien lukumäärän kasvuun. Pinta-aktiivisen aineen ja toisen yhdisteen, joka voi myös olla pinta-aktiivinen aine, seoksissa seoksen 3 0 kriittinen misellikonsentraatio riippuu näiden kahden yhdisteen välisten vuorovaiku tusten vapaasta energiasta. Jos pinta-aktiivisen aineen ja toisen yhdisteen väliset vuo- 6 rovaikutukset ovat suotuisat, seoksella on alempi kriittinen misellikonsentraatio verrattuna pelkkään pinta-aktiiviseen aineeseen tai seokseen, jossa yhdisteen konsentraatio on alempi.
5 Siten lääkeaineiden vaikutus pinta-aktiivisten aineiden CMC-arvoihin heijastaa lääkeaineen ja pinta-aktiivisen aineen vuorovaikutuksen vapaata energiaa. Tämä on kiinnostavaa, koska lääkeaineiden pyrkimyksen muodostaa kiinteitä komplekseja pinta-aktiivisten aineiden, kuten fosfolipidien, kanssa on arveltu aiheuttavan fosfolipidoosia. Lääkeaineen ja pinta-aktiivisen aineen vuorovaikutuksen vapaa energia kuvaa myös 10 tätä pyrkimystä kompleksin muodostukseen. Edellä kuvatut testit osoittavat, että lääkeaineen pinta-aktiivisen aineen CMC:hen aiheuttamien vaikutusten mittaus tarjoaa hyvän menetelmän lääkeaineiden fosfolipidoosia aiheuttavan vaikutuksen ennustamiseksi. Biologisissa kalvoissa ja soluissa normaalisti esiintyvillä fosfolipideillä on kuitenkin tyypillisesti ketjuissaan pitkiä, so. useita hiiliatomeja, tyypillisesti >14, sisältä- 15 viä alkyyli- tai asyyliketjuja. Tällaisten pitkäketjuisten fosfolipidien CMC:t ovat tyypillisesti nanomolaarisella alueella tai sen alleja siten liian pieniä mihinkään tässä käytettyihin käytännön mittauksiin, puhumattakaan suuren mittakaavan seulontatutkimuksista. Esillä olevassa keksinnössä on siten kaksi näkökohtaa: lääkeaineen pinta-aktiivisten aineiden CMC:hen aiheuttaman vaikutuksen käyttö ilmaisemaan lääkeai- 2 0 neen taipumusta muodostaa komplekseja pinta-aktiivisten aineiden (elävissä soluissa fosfolipidien) kanssa ja aiheuttaa fosfolipidoosia, ja pinta-aktiivisten aineiden, edullisesti lyhytketjuisten fosfolipidien, käyttö näiden mittausten kokeelliseen mahdollistamiseen.
25 Keksinnön erään suoritusmuodon mukaan menetelmä aineen fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien riskin arvioimiseksi käsittää myös vaiheet, joissa mitataan mainitun aineen pinta-aktiivisessa aineessa muodostaman liuoksen pintajännitys ilma-vesi -rajapinnassa, määritetään kriittinen misellikonsentraatio (CMC) pintajännityksen vs. pinta-aktiivisen aineen konsentraation funktiona, kuten sen luonnollisena logaritmina, 3 0 vähintään kahdella mainitun aineen konsentraatiolla pinta-aktiivisessa aineessa tai vä- 7 hintään yhdellä aineen konsentraatiolla pinta-aktiivisessa aineessa ja puhtaalla pinta-aktiivisella aineella.
Keksinnön mukainen menetelmä käsittää myös sen aine:surfaktantti -suhteen Ri/2 arvi-5 oinnin, jossa CMC on laskenut 50 % suurimmasta muutoksesta, joka saatiin kasvavalla ainersurfaktantti -suhteella, ja saadun aine:surfaktantti -suhteen Ri/2 vertailun ennalta määritettyihin Ri/2 raja-arvoihin; ja/tai aineen pienimmän CMC-arvon arvioinnin pinta-aktiivisessa aineessa ja sen vertaamisen ennalta määrättyihin pienimmän CMC:n raja-arvoihin ja aineen luokittelun vertailuihin perustuen yhteen ainakin kahdesta riskiryh-10 mästä, missä kyseiset ryhmät osoittavat tai luokittelevat mainitun aineen fosfolipi-doosia aiheuttavan riskin.
Keksinnön mukaisesti CMC:hen kohdistuvan vaikutuksen määrittämiseksi käytetty aine/surfaktantti -moolisuhde on alueella 0,0 - 2,0, edullisesti 0,0 - 1,0 tai 0,0 - 0,5, 15 nimittäin lähtien puhtaasta pinta-aktiivisesta aineesta (ei ainetta) aina kahteen mooliin ainetta, tyypillisesti enintään 0,5 moolia ainetta per mooli pinta-aktiivista ainetta.
Edullisessa keksinnön suoritusmuodossa CMC:n määritykseen käytetyn näytteen tilavuus voi olla enintään 50μ1 ja pinta-aktiivisten aineiden konsentraatio enintään 5mM.
20
Keksinnön edullisen suoritusmuodon mukaan aineen vaikutus CMC-arvoon määritetään määrittämällä puhtaan pinta-aktiivisen aineen sekä vastaavasti mainittua ainetta sisältävän pinta-aktiivisen aineen CMC ainakin yhdellä aineen ja pinta-aktiivisen aineen välisellä suhdearvolla.
25
Keksinnön mukaisesti riski, että aineella on fosfolipidoosia aiheuttavia ominaisuuksia, on korkeampi aineella, jolla on voimakkaampi CMC:tä alentava vaikutus verrattuna aineeseen, jolla on heikompi CMC:tä alentava vaikutus samassa konsentraatiossa, ja/tai myös aineella, jota riittää pienempi määrä aiheuttamaan ennalta määritetyn 3 0 aleneman CMC:ssä verrattuna aineeseen, jota tarvitaan suurempi konsentraatio aiheuttamaan sama alenema.
8
Keksinnön edullisen suoritusmuodon mukaan anioninen pinta-aktiivinen aine on enintään 28 hiiliatomia, edullisesti 10 - 28 hiiliatomia kaikissa ketjuissa yhteensä, usein 4 - 12 hiiliatomia hiiliketjussa sisältävä fosfolipidi. Tyypillisiä tässä keksinnössä käytet-5 täviä fosfolipidejä ovat fosfatidyyliseriinit, fosfatidyyliglyserolit, fosfatidihapot, fosfa-tidyyli-inositoli ja fosfatidyyli-inositolifosfaatit, ja edellä mainittuja vastaavat lysolipi-di-, peroksilipidi-, oksilipidi-, plasmalogeeni-ja dialkyylilipidimuunnokset, sekä anioniset fosfolipidianalogit ja anioniset pinta-aktiiviset aineet, kuten alkyyli- ja asyyli-fosfaatit tai -monometyylifosfaatit tai vastaavat, joilla on riittävän lyhyet hydrofobiset 10 ketjut, jotta niiden CMC-arvot ovat korkeammat kuin noin 1 μΜ.
Keksinnön mukaisesti on myös mahdollista käyttää pinta-aktiivisten aineiden seosta.
Pintajännitys eli pintapaine (joka on puhtaan pinnan pintajännitys - pinnan pintajänni-15 tys aineen läsnäollessa) mitataan edullisesti käyttäen aineen ja pinta-aktiivisen aineen seoksia, joissa lääkeaineen moolisuhde pinta-aktiiviseen aineeseen on 0 - 1. Tyypillisesti Ri/2:n luotettavaan arviointiin tarvitaan vähintään neljästä viiteen pistettä.
Keksinnön mukaisesti lääkeaine voidaan liuottaa sopivaan liuottimeen, kuten 2 0 DMSO:hon tai alkoholiin.
Pinta-aktiivisuuden (jännitys tai paine) mittaukset voidaan tehdä helposti ja tehokkaasti esimerkiksi käyttäen kuoppalevyjä, joilla on esimerkiksi eri lääkeaineita ja eri lää-keainekonsentraatioita kuoppalevyn eri riveillä ja sarakkeilla. Eräs käyttökelpoinen 2 5 laite tällaisiin pinta-aktiivisuusmittauksiin on Kibron Inc.:n valmistama MultiPi-laite.
Kuva 1 esittää esimerkkiä CMC-määrityksestä pintapaineen mittausta käyttäen. Kun bulkkikonsentraatio saavuttaa CMC:n, pintapaine ei enää merkittävästi kasva jos kon-sentraatio edelleen kasvaa, koska tämä konsentraation lisäys ei enää lisää monomeeri- 3 0 konsentraatiota ja kemiallista potentiaalia huikissa. Arvioituihin CMC-arvoihin perus tuen CMC vs. lääkerlipidi -suhdekäyrät voidaan esittää kuten kuvassa 2.
9
Keksinnön erään suoritusmuodon mukaan Ri/2:n laskemiseksi voidaan käyttää kolmannen asteen interpolointifunktiota, mikä antaa lääkeaine:pinta-aktiivinen aine -suhteen, missä CMC olisi alentunut 50 %, toisin sanoen: 5 CMC=1/2(p+m), missä p on puhtaassa pinta-aktiivisessa aineessa saatu CMC, ja m on pienin lääkeaineelle määritetty CMC pinta-aktiivisessa aineessa.
Kuvaan 3 viitaten, keksinnön erään suoritusmuodon mukaan lääkeaineen lääkedipidi -10 suhdetta Ri/2 verrataan neljästä ennalta määrätystä, lääkeaineen fosfolipidoosin aiheuttamisen eri riskejä määrittelevistä ryhmistä ennakolta määritettyihin eri Ri/2:n raja-arvoihin. Myös lääkeaineen pienin CMC voidaan määrittää ja verrata vastaaviin pienimmän CMC:n raja-arvoihin. Mainitut neljä riskiryhmää voidaan määritellä seuraavasti: ryhmä 1 ei fosfolipidoosivaikutusta, ryhmä 2 alhainen fosfolipidoosia aiheuttava 15 vaikutus, ryhmä 3 tiedetään aiheuttavan fosfolipidoosia eläimissä ja ryhmä 4 tiedetään aiheuttaneen fosfolipidoosia ihmisissä. Raja-arvot perustuvat tavanomaisilla menetelmillä tehtyihin testeihin siitä, aiheuttaako aine fosfolipidoosia.
Menetelmä määritystuloksen arvioimiseksi vaatii jonkin verran vertailudataa tunnetun 2 0 yhdisteryhmän fosfolipidogeenisesta vaikutuksesta. Tällaista dataa voitaisiin saada esimerkiksi solu- tai eläinkokeista. Tällaisen vertailukoedatan arvojen käyttö tekee mahdolliseksi määrittää maksimaalisen CMC:n laskun ja Ri/2:n testiparametrien eri arvoihin liittyvät fosfolipidoosin eri riskitasot (katso kuva 3). Nämä tunnetun fosfoli-pidogeenivaikutuksen omaavien yhdisteiden perusteella määritetyt riskitasot mahdol-25 listavat tuntemattomien yhdisteiden fosfolipidogeenisen vaikutuksen arvioinnin.
Keksinnön mukaisesti jos lääkeaine osoittaa korkeaa Ri/2-arvoa mahdollisesti yhdessä korkean minimi-CMC-arvon kanssa, lääkeaine voidaan luokitella lääkkeeksi, jolla on alhainen riski aiheuttaa fosfolipidoosia. Toisaalta alhainen R</2-arvo ja/tai alhainen mi- 3 0 nimi-CMC osoittaa lääkeaineella olevan korkea riski aiheuttaa fosfolipidoosia, kuten on ilmeistä esim. kuvasta 3.
10
Kokeet ovat osoittaneet, että suora mittaus yhdisteiden taipumuksesta muodostaa komplekseja lyhytketjuisten fosfolipidien kanssa korreloi hyvin näiden yhdisteiden fosfolipidoosia aiheuttavan taipumuksen kanssa, ja on siten mahdollisesti käyttökel-5 poinen tuntemattomien yhdisteiden fosfolipidoosia aiheuttavan vaikutuksen arvioinnissa.
ESIMERKKI
10 Esimerkissä sopivat määrät lääkejauheita punnittiin ja liuotettiin, jotta saatiin 62,5 mM varastoliuos, josta tehtiin 12,5 mM ja 2,5 mM laimennokset. Liuokset valmistettiin DMSO:hon, paitsi gentamisiini, joka oli liukoinen veteen mutta ei DMSOrhon, ja tamoksifeeni, joka ei liuennut DMSO:hon eikä veteen vaan täytyi liuottaa etanoliin. Fosfolipidi l,2-dioktanoyyli-sn-glysero-3-[fosfo-L-seriini] (DC8PS) liuotettiin kloro-15 formiin, ja konsentraatio määritettiin gravimetrisesti käyttäen korkean tarkkuuden mik- rovaakaa.
Ensin fosfolipidiliuoksen valmistamiseksi sopiva määrä DCgPS:ää kloroformiin liuotettuna siirrettiin uuteen koeputkeen ja haihdutettiin kuiviin kevyessä typpivirrassa.
2 0 Tämän jälkeen kuivaan lipidiin lisättiin 20 mM HEPES-puskuria (pH 7.4), jossa oli 0,1 mM EDTA:a, jolloin saatiin 5 mM DCgPS-konsentraatio, ja näytettä sekoitettiin voimakkaasti, inkuboitiin 30 minuuttia 60°C:ssa, sekoitettiin voimakkaasti ja inkuboi-tiin toinen 30 minuutin jakso 60°C:ssa.
25 Liuokset pipetoitiin sitten 96-kuoppaiselle levylle. Ensin 175 μΐ 5 mM DCxPS-liuosta lisättiin 96-kuoppaisen levyn (jossa on 8 riviä ja 12 saraketta) ensimmäisen sarakkeen (sarake 1) kuhunkin kuoppaan. Kaikkiin muihin kuoppiin lisättiin 105 μΐ HEPES-puskuria. Tämän jälkeen ensimmäisen sarakkeen kuoppaan lisättiin 7 μΐ lääkeaineen stokkiliuosta. Lääkeaineen eri liuokset 62,5 mM, 12,5 mM, ja 2,5 mM antoivat lääke-30 ainerfosfolipidi moolisuhteet 1:2, 1:10, ja vastaavasti 1:50. Joissakin tapauksissa mitattiin myös moolisuhde 1:1, ja tämä vaati lisäämään 14 μΐ lääkeaineliuosta ensimmäi- 11 seen sarakkeeseen. Jokainen mitattu levy sisälsi myös yhden rivin, johon lisättiin lääkeaineen sijasta vain 7 μΐ DMSO:ta. Siten jokainen levy sisälsi yhden rivin, jossa oli vain fosfolipidiä, ja seitsemän riviä, joilla oli eri lääkeaineita ja/tai eri lääkeai-ne:fosfolipidi -suhteita.
5
Ensimmäisen sarakkeen kuoppien sisällön sekoittamiseen käytettiin automaattista mo-nikanavapipettiä, ja sitten 70 μΐ ensimmäisten sarakkeiden liuoksia siirrettiin 105 μΐ^η puskuria, joka oli toisessa sarakkeessa. Tämän jälkeen toisen sarakkeen kuoppien sisältö sekoitettiin ja 70 μΐ liuoksia siirrettiin 105 μΐ^η puskuria, jota oli kolman-10 nen sarakkeen kuopissa, ja tätä jatkettiin sarake sarakkeelta kunnes päästiin yhdenteentoista sarakkeeseen. Näin saadaan peräkkäisten sarakkeiden välille laimennostekijä noin 0,4. Saadaan suunnilleen konsentraatiot (sarake suluissa) 5,0 mM (1), 2,0 mM
(2), 0,80 mM (3), 0,32 mM (4), 0,128 mM (5), 51 μΜ (6), 20 μΜ (7), 8,2 μΜ (8), 3,3 μΜ (9), 1,3 μΜ (10), 0,52 μΜ (11), ja 0 (12) fosfolipidiä eri sarakkeissa. Eri riveillä 15 on sitten esimerkiksi vain fosfolipidiä rivillä A, lääke l:fosfolipidi=l:50 rivillä B, lääke 1 :fosfolipidi=l: 10 rivillä C, lääke l:fosfolipidi=l:2 rivillä D, lääke 2:fosfolipidi=l:50 rivillä E, lääke 2:fosfolipidi=l:10 rivillä F, lääke 2:fosfolipidi=l:2 rivillä G, ja lääke 3:fosfolipidi=l:50 rivillä H. 1 0 50 μΐ liuosta jokaisesta pipetoidun 96-kuoppaisen levyn kuopasta siirettiin vastaavaan
Kibron-mittauslevyn kuoppaan ja jakautumisen annettiin sitten stabiloitua 10-15 minuuttia. Tämän jälkeen kunkin kuopan pintajännitys mitattiin käyttäen Kibron Delta-8 monikanavatensiometriä, ja kriittiset misellikonsentraatiot saatiin käyttämällä tähän käyttöön omistettua tietokoneohjelmaa arvioimaan pitoisuus, jossa pintajännityksen 25 minimi (pintapaineen maksimi) saavutettiin.

Claims (14)

1. Menetelmä aineen fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien riskin ennustamiseksi, joka menetelmä käsittää mainitun aineen lisäämisen anioniseen pin- 5 ta-aktiiviseen aineeseen aineen ja pinta-aktiivisen aineen seoksen saamiseksi, ja mainitun aineen anionisen pinta-aktiivisen aineen kriittiseen misellikonsentraa-tioon (CMC) aiheuttaman vaikutuksen määrityksen määrittämällä seoksen CMC, missä CMC:n lasku verrattuna pinta-aktiivisen aineen CMC:hen ennen aineen lisäystä osoittaa riskin, että mainitulla aineella on fosfolipidoosia aiheut- 10 tavia ominaisuuksia.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, joka käsittää aineen ja pinta-aktiivisen aineen mainitun seoksen CMC:n vertaamisen puhtaan pinta-aktiivisen aineen CMC:hen, jolloin CMC:n lasku verrattuna puhtaaseen pinta- 15 aktiiviseen aineeseen osoittaa mainitun aineen omaavan fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien riskin, tai mainitun seoksen CMC:n vertaamisen toisen, aineen ja pinta-aktiivisen aineen seoksen, jossa on eri määrä ainetta, CMC:hen, jolloin aineen pitoisuuden kasvusta pinta-aktiivisessa aineessa johtuva CMC:n lasku osoittaa mainitun aineen omaavan fosfolipidoosia aiheuttavien ominai- 2. suuksien riskin. 1 Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, joka edelleen käsittää vaiheet, joissa: mitataan mainitun aineen pinta-aktiivisessa aineessa muodostaman liuoksen 25 pintajännitys ilma-vesi -rajapinnassa; määritetään kriittinen misellikonsentraatio (CMC) pintajännityksen vs. pinta-aktiivisen aineen konsentraation funktiona ainakin kahdessa mainitun aineen eri konsentraatiossa pinta-aktiivisessa aineessa, tai ainakin yhdessä aineen kon-sentraatiossa pinta-aktiivisessa aineessa ja puhtaassa pinta-aktiivisessa ainees- 3. sa.
4. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen menetelmä, joka käsittää seuraavat vaiheet: määritetään ainerpinta-aktiivinen aine -suhde Ri/2, missä CMC on alentunut 50 % suurimmasta muutoksesta, joka saatiin kasvavalla aine:pinta-aktiivinen aine 5 -suhteella; verrataan saatua aine:pinta-aktiivinen aine -suhdetta Ri/2 edeltä määriteltyihin Ri/2;:n raja-arvoihin ja/tai määritetään minimi-CMC aineelle pinta-aktiivisessa aineessa ja verrataan sitä minimi-CMC:n ennalta määritettyihin raja-arvoihin; ja 10 vertailuihin perustuen luokitellaan lääkeaine yhteen ainakin kahdesta riskiryh mästä, kuten ryhmiin jotka osoittavat tai luokittelevat mainitun aineen fosfoli-pidoosia aiheuttavien ominaisuuksien riskin.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, jossa R i/2 vastaa aine/pinta- 15 aktiivine aine -suhdetta, kun CMC:llä on arvo: CMC=1/2(p+m), missä p on puhtaassa lipidissä saatu CMC ja m on aineelle määritetty minimi-CMC pinta-aktiivisessa aineessa. 2 0 6. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, jossa funktio on käyrädiagrammi.
7. Jonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, jossa pinta-aktiivinen aine on fosfolipidi.
8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, jossa fosfolipidi on fosfatidyy- liseriini, fosfatidyyliglyseroli, fosfatidihappo, fosfatidyyli-inositoli tai fosfati-dyyli-inositolifosfaatti, tai lysolipidi, peroksilipidi, hapetettu plasmalogeeni, tai edellisten dieetterilipidi (dialkyylilipidi) -johdannainen, fosfolipidianalogi, tai fosfolipidin kaltainen anioninen pinta-aktiivinen aine, ja jossa fosfolipidissä on 3. kaikkiaan alle 28 hiiliatomia kaikissa ketjuissa yhteensä. 9. .Tonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, jossa aine on liuotettu vesiliukoiseen liuottimeen, kuten DMSO:hon.
10. Jonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, jossa aine on am- 5 fitiilinen ja/tai kationinen aine. 11. .Tonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, jossa aine on farmaseuttinen yhdiste.
12. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, jossa käytetään neljää riskiryh mää osoittamaan aineen fosfolipidoosia aiheuttava riski.
13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, jossa neljä ryhmää määritellään seuraavasti: ryhmä 1 ei fosfolipidoosivaikutusta, ryhmä 2 alhainen fosfolipi- 15 doosia aiheuttava vaikutus, ryhmä 3 tiedetään aiheuttavan fosfolipidoosia eläi missä ja ryhmä 4 tiedetään aiheuttaneen fosfolipidoosia ihmisissä.
14. Jonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, joka käsittää CMC:n määrittämisen aine/pinta-aktiivinen aine -moolisuhteella, joka on enin- 2. tään 2,0, mieluiten enintään 1,0.
15. Jonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, jossa CMC:n määrittämiseen käytetyn näytteen tilavuus on enintään 50pl ja pinta-aktiivisen aineen konsentraatio on enintään 5 mM. 25
16. Jonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, joka käsittää puhtaan pinta-aktiivisen aineen ja mainitun pinta-aktiivisen aineen, joka sisältää mainittua ainetta, CMC:n määrittämisen ainakin yhdellä aineen/pinta-aktiivisen aineen -suhdearvolla.
FI20065774A 2006-12-05 2006-12-05 Menetelmä aineen fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien ennustamiseksi FI119745B (fi)

Priority Applications (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI20065774A FI119745B (fi) 2006-12-05 2006-12-05 Menetelmä aineen fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien ennustamiseksi
DE602007012934T DE602007012934D1 (de) 2006-12-05 2007-12-04 Verfahren zur vorhersage von phospholipidose induzierenden eigenschaften einer substanz
PCT/FI2007/050657 WO2008068383A1 (en) 2006-12-05 2007-12-04 Method of predicting phospholipidosis inducing properties of a substance
DK07848189.2T DK2095118T3 (da) 2006-12-05 2007-12-04 Fremgangsmåde til forudsigelse af et stofs phospholipidosefremkaldende egenskaber
ES07848189T ES2362379T3 (es) 2006-12-05 2007-12-04 Método para predecir las propiedades de inducción de fosfolipidosis de una sustancia.
CNA2007800509429A CN101600964A (zh) 2006-12-05 2007-12-04 预测物质的磷脂沉积症诱导特性的方法
EP07848189A EP2095118B1 (en) 2006-12-05 2007-12-04 Method of predicting phospholipidosis inducing properties of a substance
AT07848189T ATE500504T1 (de) 2006-12-05 2007-12-04 Verfahren zur vorhersage von phospholipidose induzierenden eigenschaften einer substanz
JP2009539773A JP5148625B2 (ja) 2006-12-05 2007-12-04 物質のリン脂質症誘導特性を予測する方法
US12/517,880 US8093058B2 (en) 2006-12-05 2007-12-04 Method of predicting phospolipidosis inducing properties of a substance
PL07848189T PL2095118T3 (pl) 2006-12-05 2007-12-04 Sposób przewidywania fosfolipidozy wywołanej właściwościami substancji

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI20065774 2006-12-05
FI20065774A FI119745B (fi) 2006-12-05 2006-12-05 Menetelmä aineen fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien ennustamiseksi

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI20065774A0 FI20065774A0 (sv) 2006-12-05
FI20065774A FI20065774A (fi) 2008-06-06
FI119745B true FI119745B (fi) 2009-02-27

Family

ID=37623790

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI20065774A FI119745B (fi) 2006-12-05 2006-12-05 Menetelmä aineen fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien ennustamiseksi

Country Status (11)

Country Link
US (1) US8093058B2 (fi)
EP (1) EP2095118B1 (fi)
JP (1) JP5148625B2 (fi)
CN (1) CN101600964A (fi)
AT (1) ATE500504T1 (fi)
DE (1) DE602007012934D1 (fi)
DK (1) DK2095118T3 (fi)
ES (1) ES2362379T3 (fi)
FI (1) FI119745B (fi)
PL (1) PL2095118T3 (fi)
WO (1) WO2008068383A1 (fi)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112652364A (zh) * 2020-11-26 2021-04-13 深圳晶泰科技有限公司 基于从头算模型预测表面活性剂临界胶束浓度的方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3316657B2 (ja) * 1994-02-25 2002-08-19 株式会社リコー 非イオン界面活性剤の濃度測定方法
EP1410020B1 (en) * 2001-07-23 2011-11-09 Phares Pharmaceutical Research N.V. Test system and method suitable for selecting test materials and formulations
WO2005052154A1 (ja) * 2003-11-27 2005-06-09 Takeda Pharmaceutical Company Limited 薬物の毒性予測方法
US7399638B2 (en) * 2003-12-26 2008-07-15 Takeda Pharmaceutical Company Limited Prediction method for lipidosis
US20100129790A1 (en) * 2005-02-17 2010-05-27 Takeda Pharmaceutical Limited Method for Determining Phospholipidosis
GB2434445A (en) * 2006-01-13 2007-07-25 Cytokinetics Inc Assay for phospholipidosis
US9250249B2 (en) * 2008-09-08 2016-02-02 Enzo Biochem, Inc. Autophagy and phospholipidosis pathway assays
US8313949B2 (en) * 2009-04-16 2012-11-20 Nextcea Inc. Detecting phospholipidosis and diagnosing lysosomal storage disorders

Also Published As

Publication number Publication date
CN101600964A (zh) 2009-12-09
FI20065774A (fi) 2008-06-06
FI20065774A0 (sv) 2006-12-05
ES2362379T3 (es) 2011-07-04
EP2095118A4 (en) 2010-03-31
DK2095118T3 (da) 2011-06-27
DE602007012934D1 (de) 2011-04-14
ATE500504T1 (de) 2011-03-15
WO2008068383A1 (en) 2008-06-12
US20100323451A1 (en) 2010-12-23
JP5148625B2 (ja) 2013-02-20
JP2010511881A (ja) 2010-04-15
PL2095118T3 (pl) 2011-08-31
US8093058B2 (en) 2012-01-10
EP2095118B1 (en) 2011-03-02
EP2095118A1 (en) 2009-09-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Avdeef The rise of PAMPA
Sugano et al. Coexistence of passive and carrier-mediated processes in drug transport
Avdeef et al. PAMPA—A drug absorption in vitro model: 13. Chemical selectivity due to membrane hydrogen bonding: In combo comparisons of HDM-, DOPC-, and DS-PAMPA models
Sugano et al. Optimized conditions of bio-mimetic artificial membrane permeation assay
Edwards et al. Analysis of liposomes
Mensch et al. Evaluation of various PAMPA models to identify the most discriminating method for the prediction of BBB permeability
Plowman et al. Electrostatic interactions positively regulate K-Ras nanocluster formation and function
Kraayenhof et al. Fluorescence spectroscopy, imaging and probes: new tools in chemical, physical and life sciences
Schmitt et al. Quantitation of lysosomal trapping of basic lipophilic compounds using in vitro assays and in silico predictions based on the determination of the full pH profile of the endo-/lysosomal system in rat hepatocytes
AU2005309649A1 (en) Harnessing network biology to improve drug discovery
Melchior et al. Determining P-glycoprotein–drug interactions: evaluation of reconstituted P-glycoprotein in a liposomal system and LLC-MDR1 polarized cell monolayers
Vitovic et al. Assessment of drug− lipid complex formation by a high-throughput langmuir-balance and correlation to phospholipidosis
Li et al. Development of in vitro pharmacokinetic screens using Caco-2, human hepatocyte, and Caco-2/human hepatocyte hybrid systems for the prediction of oral bioavailability in humans
Schuhmacher et al. High-throughput determination of the free fraction of drugs strongly bound to plasma proteins
Doktorova et al. Cell membranes sustain phospholipid imbalance via cholesterol asymmetry
Yi et al. Simple and sensitive method for determination of protein kinase activity based on surface charge change of peptide-modified gold nanoparticles as substrates
FI119745B (fi) Menetelmä aineen fosfolipidoosia aiheuttavien ominaisuuksien ennustamiseksi
CN104132936B (zh) 一种稳定、新型的过氧化物酶测定用显色液
Godin et al. Dye lipophilicity and retention in lipid membranes: implications for single-molecule spectroscopy
Christensen et al. Single vesicle biochips for ultra-miniaturized nanoscale fluidics and single molecule bioscience
Wang et al. Liposome electrokinetic chromatography based in vitro model for early screening of the drug-induced phospholipidosis risk
WO2009156976A1 (en) Method of toxicological assessment
Le et al. Metabolic mapping with plasmonic nanoparticle assemblies
Bottcher et al. Liposome triggered content release through molecular recognition of inositol trisphosphate
Easwaranathan et al. Quantification of intracellular accumulation and retention of lysosomotropic macrocyclic compounds by high-throughput imaging of lysosomal changes

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Ref document number: 119745

Country of ref document: FI

MM Patent lapsed