ES2915603A1 - Method for the detection of saliva viruses (Machine-translation by Google Translate, not legally binding) - Google Patents
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Abstract
Description
DESCRIPCIÓNDESCRIPTION
Método para la detección de virus en salivaMethod for the detection of viruses in saliva
Campo de la técnicatechnique field
La presente invención concierne un método para la detección de virus en una muestra de saliva.The present invention concerns a method for the detection of viruses in a saliva sample.
Estado de la técnica anteriorState of the prior art
En el estado de la técnica se conocen métodos distintos para detectar virus en muestras de saliva.Different methods for detecting viruses in saliva samples are known in the state of the art.
Por ejemplo, la solicitud de patente BR102018010863 describe un método para preparar nanopartículas de plata que se utilizan para detectar el virus de Zika. Estas nanopartículas están funcionalizadas con un oligonucleótido específico que permite detectar el ARN del virus Zika en cuestión.For example, patent application BR102018010863 describes a method for preparing silver nanoparticles that are used to detect the Zika virus. These nanoparticles are functionalized with a specific oligonucleotide that makes it possible to detect the RNA of the Zika virus in question.
En la solicitud de patente WO2004111602 se describe un método y un kit para detectar la ausencia o presencia de secuencias de ácidos nucleicos en una muestra, utilizando nanopartículas metálicas, opcionalmente de plata, funcionalizadas con ácidos nucleicos. La presencia o ausencia de los ácidos nucleicos se detecta mediante medidas de fluorescencia o absorbancia.Patent application WO2004111602 describes a method and a kit for detecting the absence or presence of nucleic acid sequences in a sample, using metallic nanoparticles, optionally silver, functionalized with nucleic acids. The presence or absence of the nucleic acids is detected by fluorescence or absorbance measurements.
La solicitud de patente WO2019162465 describe un método para la obtención de nanopartículas para detección con alta sensibilidad de ácidos nucleicos virales en muestras biológicas utilizando un test colorimétrico y de bajo coste.Patent application WO2019162465 describes a method for obtaining nanoparticles for highly sensitive detection of viral nucleic acids in biological samples using a low-cost colorimetric test.
Sin embargo, existe en la actualidad, por ejemplo a raíz de la crisis sanitaria originada por el Covid-19, la necesidad de métodos rápidos, efectivos y de bajo coste para detectar virus en muestras biológicas.However, there is currently, for example as a result of the health crisis caused by Covid-19, the need for fast, effective and low-cost methods to detect viruses in biological samples.
Breve descripción de la invenciónBrief description of the invention
Para dar respuesta a los problemas anteriormente expuestos, la presente invención describe, en un primer aspecto, un método para la detección de virus en una muestra de saliva, que comprende las siguientes etapas: depositar una muestra de saliva en una placa metálica hecha de plata; introducir dicha placa metálica en una primera solución acuosa que comprende hígado de azufre y nanopartículas de plata; introducir dicha placa metálica en una segunda solución acuosa que comprende ácido cítrico y nanopartículas de plata; y determinar, mediante el cambio a un primer color, una presencia de virus en la muestra de saliva comprendida en la placa metálica, o determinar, mediante el cambio a un segundo color diferente del primer color, una ausencia de virus en la muestra de saliva comprendida en la placa metálica.In order to respond to the aforementioned problems, the present invention describes, in a first aspect, a method for detecting viruses in a saliva sample, comprising the following steps: depositing a saliva sample on a metallic plate made of silver ; introducing said metal plate into a first aqueous solution comprising liver of sulfur and silver nanoparticles; introducing said metal plate into a second aqueous solution comprising citric acid and silver nanoparticles; and determining, by changing to a first color, a presence of virus in the sample of saliva contained in the metal plate, or determining, by changing to a second color different from the first color, an absence of virus in the saliva sample contained in the metal plate.
El método según la presente invención describe, en otra realización, una etapa de secado de la placa metálica hecha de plata, posterior a la introducción de dicha placa metálica en la segunda solución acuosa.The method according to the present invention describes, in another embodiment, a stage of drying the metallic plate made of silver, subsequent to the introduction of said metallic plate in the second aqueous solution.
Descripción detallada de la invenciónDetailed description of the invention
La presente invención describe un método para la detección de virus en una muestra de saliva, que comprende las siguientes etapas: depositar una muestra de saliva en una placa metálica hecha de plata; introducir dicha placa metálica en una primera solución acuosa que comprende hígado de azufre y nanopartículas de plata; introducir dicha placa metálica en una segunda solución acuosa que comprende ácido cítrico y nanopartículas de plata; y determinar, mediante el cambio a un primer color, una presencia de virus en la muestra de saliva comprendida en la placa metálica, o determinar, mediante el cambio a un segundo color diferente del primer color, una ausencia de virus en la muestra de saliva comprendida en la placa metálica.The present invention describes a method for the detection of viruses in a saliva sample, comprising the following steps: depositing a saliva sample on a metallic plate made of silver; introducing said metal plate into a first aqueous solution comprising liver of sulfur and silver nanoparticles; introducing said metal plate into a second aqueous solution comprising citric acid and silver nanoparticles; and determining, by changing to a first color, a presence of virus in the saliva sample contained in the metal plate, or determining, by changing to a second color different from the first color, an absence of virus in the saliva sample included in the metal plate.
La placa metálica se introduce en la primera solución acuosa por un primer intervalo de tiempo; la placa metálica se introduce en la segunda solución acuosa durante un segundo intervalo de tiempo.The metal plate is introduced into the first aqueous solution for a first time interval; the metal plate is introduced into the second aqueous solution for a second time interval.
Se entiende que el virus que detecta la presente invención es cualquier tipo de virus, como por ejemplo el virus de la gripe o el SARS-CoV-2.It is understood that the virus that the present invention detects is any type of virus, such as the influenza virus or SARS-CoV-2.
La placa metálica está hecha de plata como componente principal del metal. Además, la placa metálica en donde se deposita el virus se grava mediante un procedimiento concido en el sector de la joyería, como puede ser el ataque de nitrato férrico para incidir en dicho metal. Gravar la plata ayuda a la deposición correcta de la saliva en la placa metálica hecha de plata y, por lo tanto, proporciona un soporte eficaz para la detección de virus en una muestra de saliva.The metal plate is made of silver as the main component of the metal. In addition, the metal plate where the virus is deposited is recorded by a procedure known in the jewelry sector, such as the attack of ferric nitrate to affect said metal. Etching silver helps the correct deposition of saliva on the metallic plate made of silver and thus provides an effective support for the detection of viruses in a saliva sample.
La saliva se puede obtener de la boca de un paciente mediante el uso de un bastoncillo. Dicho bastoncillo se introduce en la boca durante un tiempo breve (varios segundos), y la saliva captada se deposita después encima de la placa metálica. Alternativamente, la placa metálica se puede disponer en la punta de un bastoncillo e introducir la placa directamente en la boca de un paciente para recoger la saliva. Saliva can be obtained from a patient's mouth by use of a cotton swab. Said swab is inserted into the mouth for a short time (several seconds), and the collected saliva is then deposited on top of the metal plate. Alternatively, the metal plate can be placed on the tip of a cotton swab and the plate inserted directly into a patient's mouth to collect saliva.
Por hígado de azufre se entiende un material conocido en el sector de la joyería, que es una mezcla de distintos compuestos inorgánicos basados en azufre, como son el sulfuro de potasio, el sulfuro de sodio, y otros compuestos inorgánicos, como son el selenito de sodio. En una realización particular, el hígado de azufre comprende una proporción de sulfuro de potasio: sulfuro de sodio:selenito de selenio de 2:1:1.Liver of sulfur refers to a material known in the jewelry sector, which is a mixture of different inorganic compounds based on sulfur, such as potassium sulfide, sodium sulfide, and other inorganic compounds, such as selenite. sodium. In a particular embodiment, the liver of sulfur comprises a ratio of potassium sulfide: sodium sulfide: selenium selenite of 2:1:1.
Por ácido de Br0nsted se entende un ácido con capacidad de dar protones, a diferencia de un ácido de Lewis. Ácidos de Br0nsted según la presente invención son ácidos inorgánicos como por ejemplo el ácido clorhídrico, el ácido sulfúrico o el ácido fosfórico y también son ácidos orgánicos como por ejemplo el ácido acético, el ácido fórmico o el ácido cítrico. Preferiblemente, el ácido de Br0nsted según la presente invención es ácido cítrico, al ser un ácido poco nocivo en su preparación y manipulación.By Br0nsted acid is meant an acid with the ability to donate protons, as opposed to a Lewis acid. Br0nsted acids according to the present invention are inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid or phosphoric acid and are also organic acids such as acetic acid, formic acid or citric acid. Preferably, the Br0nsted acid according to the present invention is citric acid, as it is an acid that is not very harmful in its preparation and handling.
Las nanopartículas según la presente invención, tanto las comprendidas en la primera como en la segunda solución, se obtienen mediante electrólisis en agua de electrodos de plata, ánodo y cátodo, mediante un rectificador. Dicho proceso de electrólisis permite obtener una suspensión acuosa de nanopartículas de plata que será la base para la primera y segunda solución del método según la presente invención. En una realización particular, la concentración de nanopartículas de plata en suspensión en la primera y/o segunda solución es de 2 a 100 mg/L, preferiblemente de 5 a 75 mg/L, preferiblemente, de 10 a 50 mg/L, más preferiblemente de 25 mg/L.The nanoparticles according to the present invention, both those included in the first and in the second solution, are obtained by electrolysis in water of silver electrodes, anode and cathode, by means of a rectifier. Said electrolysis process allows obtaining an aqueous suspension of silver nanoparticles that will be the basis for the first and second solutions of the method according to the present invention. In a particular embodiment, the concentration of silver nanoparticles in suspension in the first and/or second solution is from 2 to 100 mg/L, preferably from 5 to 75 mg/L, preferably from 10 to 50 mg/L, more preferably 25 mg/L.
En una realización preferida, el método para la detección de virus en una muestra de saliva además comprende una etapa de secado durante un tercer intervalo de tiempo de la placa metálica hecha de plata, posterior a la introducción de dicha placa metálica en la segunda solución acuosa.In a preferred embodiment, the method for detecting viruses in a saliva sample also comprises a drying step for a third time interval of the metallic plate made of silver, after the introduction of said metallic plate in the second aqueous solution. .
En otra realización particular, el secado de la placa metálica se realiza depositando dicha placa encima de una gasa.In another particular embodiment, the drying of the metal plate is carried out by depositing said plate on top of a gauze.
Dicha gasa absorbe el líquido que se haya podido quedar retenido en la placa metálica. Said gauze absorbs the liquid that may have been retained in the metal plate.
En una alternativa de realización, el primer intervalo de tiempo y el segundo consisten en un tiempo igual. Preferiblemente, el primer y el segundo intervalo de tiempo son de 10 a 15 segundos. Preferiblemente, el primer y el segundo Intervalo de tiempo son 10 o 15 segundos.In an alternative embodiment, the first time interval and the second consist of an equal time. Preferably, the first and second time intervals are from 10 to 15 seconds. Preferably, the first and second Time Intervals are 10 or 15 seconds.
En otra realización, el primer intervalo de tiempo y el segundo intervalo de tiempo son de entre 5 y 20 segundos. In another embodiment, the first time interval and the second time interval are between 5 and 20 seconds.
En otra realización preferida, el tercer intervalo de tiempo es de entre 10 segundos y 1 hora. Preferiblemente, el tercer intervalo de tiempo es de 30 segundos a 5 minutos. Dicho tercer intervalo de tiempo es preferiblemente más largo al primer y segundo intervalo de tiempo puesto que el tiempo de secado de la placa es más largo que el tiempo de interacción de la placa con la primera y segunda solución.In another preferred embodiment, the third time interval is between 10 seconds and 1 hour. Preferably, the third time interval is from 30 seconds to 5 minutes. Said third time interval is preferably longer than the first and second time intervals since the drying time of the plate is longer than the interaction time of the plate with the first and second solutions.
En una realización particular, el primer color es un color distinto de la escala de grises o negro. Preferiblemente, el primer color tiene un tono naranja.In a particular embodiment, the first color is a color other than grayscale or black. Preferably the first color has an orange hue.
Por un color distinto de la escala de grises o negros se entenderá un color con una frecuencia de onda en el espectro del visible, de 380 nm (violeta) a 750 nm (rojo).A color other than gray or black scale shall mean a color with a wave frequency in the visible spectrum, from 380nm (violet) to 750nm (red).
En otra realización particular, el segundo color es un color de la escala de grises o negro. In another particular embodiment, the second color is a grayscale color or black.
En otra realización según la presente invención, la placa metálica hecha de plata comprende una aleación de plata y cobre. Preferiblemente, la proporción entre plata y cobre en peso está en un rango de 99:1 a 99,999:0,001. Más preferiblemente, la proporción entre plata y cobre en peso es de 99,9:0,1.In another embodiment according to the present invention, the metallic plate made of silver comprises an alloy of silver and copper. Preferably, the silver to copper ratio by weight is in a range of 99:1 to 99.999:0.001. More preferably, the ratio of silver to copper by weight is 99.9:0.1.
En otra realización, el método según la presente invención define una concentración de hígado de azufre del 10 al 60% en peso con respecto al volumen total de la primera solución, preferiblemente del 20 al 50%, más preferiblemente del 40%.In another embodiment, the method according to the present invention defines a liver sulfur concentration of 10 to 60% by weight with respect to the total volume of the first solution, preferably 20 to 50%, more preferably 40%.
En otra realización, el método según la presente invención define una concentración de ácido cítrico del 10 al 50% en peso con respecto al volumen total de la segunda solución, preferiblemente del 20 al 40%, más preferiblemente del 30%.In another embodiment, the method according to the present invention defines a citric acid concentration of 10 to 50% by weight with respect to the total volume of the second solution, preferably 20 to 40%, more preferably 30%.
Se ha comprobado que el método para la detección de virus según la presente invención Ejemplos It has been found that the method for the detection of viruses according to the present invention Examples
Ejemplo 1: Obtención de la placa metálicaExample 1: Obtaining the metal plate
Una placa metálica hecha de plata y cobre en unas proporciones de 99,6:0,4 se obtuvo mediante fundición en un horno de cámara inerte, laminada a un espesor de 0,4 mm, se corta, y se incidió con una solución de nitrato férrico.A metallic plate made of silver and copper in proportions of 99.6:0.4 was obtained by casting in an inert chamber furnace, rolled to a thickness of 0.4 mm, cut, and incised with a solution of iron nitrate.
Ejemplo 2: Obtención de la solución de nanopartículas de plataExample 2: Obtaining the solution of silver nanoparticles
Para la obtención de una solución de nanopartículas de plata, se utilizó una cuba de las que se suelen encontrar en el sector de la joyería. Se utilizaron electrodos de plata de 20 cm de largo por 4 cm de ancho, agua, y se aplicó, mediante un rectificador, un potencial de 5V y una intensidad de corriente eléctrica de 20 A durante 16 minutos. To obtain a solution of silver nanoparticles, a tank of those usually found in the jewelry sector was used. Silver electrodes 20 cm long by 4 cm wide, water were used, and a 5V potential and an electric current intensity of 20 A were applied for 16 minutes by means of a rectifier.
Ejemplo 3: Detección de virus en una muestra de salivaExample 3: Detection of viruses in a saliva sample
Con la ayuda de un bastoncillo, se extrajo saliva de la boca de un paciente susceptible de tener una enfermedad vírica. La saliva del bastoncillo se depositó en la placa metálica hecha de plata durante 10 segundos. A continuación, la placa metálica se introdujo durante 10 segundos en un frasco que contenía 6 mL de la primera solución, con una concentración en peso respecto al volumen total del 40% de hígado de azufre, estando los componentes sulfuro de potasio, sulfuro de sodio y selenito de sodio en una proporción de 2:1:1, y una concentración de 25 mg/L de nanopartículas de plata. A continuación, la placa metálica se introdujo durante 10 segundos en un frasco que contenía 6 mL de segunda solución, comprendiendo ésta una concentración del 30% de ácido cítrico y de 25 mg/L de nanopartículas de plata. A continuación, la placa metálica se secó mediante una gasa durante 1 minuto y se observó el cambio de color. Al aparecer un color rojizo, se determinó que la muestra de saliva contenía virus. With the help of a cotton swab, saliva was extracted from the mouth of a patient susceptible to having a viral disease. The saliva from the swab was deposited on the metallic plate made of silver for 10 seconds. Next, the metal plate was introduced for 10 seconds into a flask containing 6 mL of the first solution, with a concentration by weight of 40% of the total volume of liver sulfur, with the components being potassium sulfide, sodium sulfide and sodium selenite in a ratio of 2:1:1, and a concentration of 25 mg/L of silver nanoparticles. Next, the metal plate was introduced for 10 seconds into a bottle containing 6 mL of the second solution, this comprising a concentration of 30% citric acid and 25 mg/L of silver nanoparticles. Then, the metal plate was dried by gauze for 1 minute, and the color change was observed. When a reddish color appeared, the saliva sample was determined to contain virus.
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| ES (1) | ES2915603A1 (en) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013116513A2 (en) * | 2012-01-31 | 2013-08-08 | American University Of Cairo (Auc) | Direct detection of disease biomarkers in clinical specimens using cationic nanoparticle-based assays & versatile and green methods forsynthesis of anisotropic silver nanostructures |
-
2020
- 2020-12-22 ES ES202031288A patent/ES2915603A1/en not_active Withdrawn
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO2013116513A2 (en) * | 2012-01-31 | 2013-08-08 | American University Of Cairo (Auc) | Direct detection of disease biomarkers in clinical specimens using cationic nanoparticle-based assays & versatile and green methods forsynthesis of anisotropic silver nanostructures |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BA2A | Patent application published |
Ref document number: 2915603 Country of ref document: ES Kind code of ref document: A1 Effective date: 20220623 |
|
| FA2A | Application withdrawn |
Effective date: 20221018 |